PL172385B1 - Sposób przemyslowego wytwarzania pochodnych kwasu (6S) foliowego przez rozdzielanie chromatograficzne PL PL PL PL PL - Google Patents
Sposób przemyslowego wytwarzania pochodnych kwasu (6S) foliowego przez rozdzielanie chromatograficzne PL PL PL PL PLInfo
- Publication number
- PL172385B1 PL172385B1 PL29934193A PL29934193A PL172385B1 PL 172385 B1 PL172385 B1 PL 172385B1 PL 29934193 A PL29934193 A PL 29934193A PL 29934193 A PL29934193 A PL 29934193A PL 172385 B1 PL172385 B1 PL 172385B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- solution
- buffered
- column
- mixture
- albumin
- Prior art date
Links
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 title claims abstract description 4
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 title description 6
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 title description 4
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 3
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 title description 3
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 title description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 claims abstract description 18
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 13
- JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 2-methyltetrahydrofuran Chemical compound CC1CCCO1 JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 150000002224 folic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 4
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 12
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 8
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 2
- 101000693916 Gallus gallus Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 13
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 3
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 2
- KVUAALJSMIVURS-QNTKWALQSA-L calcium;(2s)-2-[[4-[[(6s)-2-amino-5-formyl-4-oxo-1,6,7,8-tetrahydropteridin-6-yl]methylamino]benzoyl]amino]pentanedioate Chemical compound [Ca+2].C([C@@H]1N(C=O)C=2C(=O)N=C(NC=2NC1)N)NC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C([O-])=O)C=C1 KVUAALJSMIVURS-QNTKWALQSA-L 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 2
- 238000001640 fractional crystallisation Methods 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- ILDKNUVZPGXTSO-LBPRGKRZSA-N (2S)-2-[[4-(2-amino-4-oxospiro[3,5,7,8-tetrahydropteridine-6,3'-azetidine]-1'-yl)benzoyl]amino]pentanedioic acid Chemical compound C1C2(CN1C1=CC=C(C(N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)=O)C=C1)CNC=1N=C(N)NC(=O)C=1N2 ILDKNUVZPGXTSO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- ZNOVTXRBGFNYRX-STQMWFEESA-N (6S)-5-methyltetrahydrofolic acid Chemical compound C([C@@H]1N(C=2C(=O)N=C(N)NC=2NC1)C)NC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 ZNOVTXRBGFNYRX-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSTNYGQPCMXVAQ-KIYNQFGBSA-N 5,6,7,8-tetrahydrofolic acid Chemical class N1C=2C(=O)NC(N)=NC=2NCC1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 MSTNYGQPCMXVAQ-KIYNQFGBSA-N 0.000 description 1
- OZRNSSUDZOLUSN-UHFFFAOYSA-N 7,8-Dihydrofolic acid Natural products C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OZRNSSUDZOLUSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010021036 Hyponatraemia Diseases 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- AYMFRLHKDQBNEO-QNTKWALQSA-N [Ca].COC(CC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)C1=CC=C(NC[C@H]2CNC=3N=C(N)NC(=O)C3N2)C=C1)=O Chemical compound [Ca].COC(CC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)C1=CC=C(NC[C@H]2CNC=3N=C(N)NC(=O)C3N2)C=C1)=O AYMFRLHKDQBNEO-QNTKWALQSA-N 0.000 description 1
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- UOSVKQDEUWYYOT-NVGTXZLJSA-L calcium;(4s)-4-[[4-[[(6r)-2-amino-5-formyl-4-oxo-1,6,7,8-tetrahydropteridin-6-yl]methylamino]benzoyl]amino]-5-hydroxy-5-oxopentanoate Chemical compound [Ca+2].C([C@@H]1CNC=2N=C(NC(=O)C=2N1C=O)N)NC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C(O)=O)C=C1.C([C@@H]1CNC=2N=C(NC(=O)C=2N1C=O)N)NC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C(O)=O)C=C1 UOSVKQDEUWYYOT-NVGTXZLJSA-L 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- -1 cation salt Chemical class 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- OZRNSSUDZOLUSN-LBPRGKRZSA-N dihydrofolic acid Chemical compound N=1C=2C(=O)NC(N)=NC=2NCC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OZRNSSUDZOLUSN-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000001473 noxious effect Effects 0.000 description 1
- 150000003891 oxalate salts Chemical class 0.000 description 1
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
1. Sposób przemyslowego wytwarzania pochod- nych kwasu (6S) foliowego przez rozdzielanie chromatograficzne na kolumnie mieszaniny diastere- oizomerów (6R,S) pochodnych kwasu foliowego o wzorze ogólnym przedstawionym na rysunku, w którym X oznacza CH3 lub CHO a R 1 i R2 , takie same lub rózne, oznaczaja H, NH4 + , atom metalu al- kalicznego lub metalu ziem alkalicznych, w któr ym kolumne chromatograficzna zaladowuje sie wodnym roztworem albuminy, nastepnie prowadzi sie wymy- wanie pierwszym buforowanym roztworem, zalado- wuje sie kolumne wodnym roztworem diastereoizo- nierycznej mieszaniny pochodnej o wzorze przed- stawionym na rysunku, po czym prowadzi sie wy- mywanie drugim buforowanym roztworem, otrzymu- jac jako pierwszy, eluat diastereoizomeru (6S) FTHF, a jako drugi, eluat diastereoizomeru (6S) MTHF, znamienny tym, ze stosuje sie roztwór al- buminy o stezeniu 0,1 do 10% wagowych i roztwór pochodnych stezeniu 0,1 do 10% wagowych oraz pH buforowanych roztworów od 4,8 do 5,8. W z ó r PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania na skalę przemysłową pochodnych kwasu (6S) foliowego przez rozdzielanie chromatograficzne mieszaniny jego diastereoizomerów na kolumnie, a zwłaszcza sposób wytwarzania na skalę przemysłową kwasu 5-(metylo)-(6S)-tetrahydrofoliowego i 5-(formylo)-(6S)-tetrahydrofoliowego, oznaczanych tu jako MThF i FTHF. MTHF i FTHF są cząsteczkami fizjologicznymi, które wraz z mniej trwałym kwasem 6,10-metylenotetrahydrofoliowym i kwasami tetrahydrofoliowymi stanowią in vivo aktywne postacie kwasu foliowego, zwane zwykle kofaktorami kwasu foliowego.
Z terapeutycznego punktu widzenia, zarówno MTHF jak i FTHF znajdują zastosowanie we wszystkich postaciach niedoboru soli kwasu foliowego, jak też do ogólnego ochraniania wątroby, a ostatnio, w terapii przeciwnowotworowej.
172 385
MTHF i FTHF i ich zwykłe stosowane terapeutycznie dopuszczalne pochodne mają wzór ogólny przedstawiony na rysunku, w którym X oznacza CIH lub CHO a R1 i R2, takie same lub rożne, oznaczają H, NFH4, atom metalu alkalicznego lub metali ziem alkalicznych.
Związki o wzorze przedstawionym na rysunku zawierają dwa asymetryczne atomy węgla i dlatego istnieją w czterech postaciach diastereoizomerycznych.
Zwykle wiadomo, że gdy istnieją stereoizomeryczne postacie farmaceutyczne, tylko jedna z nich jest aktywna, podczas gdy inne są nieaktywne lub nawet szkodliwe. W tym przypadku wiadomo, że aktywną postać stanowią postacie (6S).
Prowadzono pewne badania nad wytwarzaniem i/lub wyodrębnieniem tych dwóch diastereoizomerów na skalę przemysiowąjak również nad bezpośrednią syntezą postaci (6S).
Stereospecyfiezna synteza postaci (6S) zarówno MTHF jak i FTHF, a także rozdzielanie dwóch diastereoizomerów (6RS) okazało się trudne ze względu na nietrwałość strukturalną końcowych produktów·'.
Syntezę stereospecyficznych mieszanin MTHF i FTHF opisano w brytyjskim opisie patentowym nr GB-A-1572138 i w szwajcarskim opisie patentowym nr CH-A-496012.
-----v X X ·/
W celu oddzielenia z tak otrzymanych mieszanin diastereoizomerów (6S), można przekształcić mieszaninę stereoizomeryczną w odpowiednią pochodnią 5-metyloksykarbonylową lub w inną pochodną zawierającą centra chiralności: w ten sposób, wykorzystując różną rozpuszczalność w odpowiednich rozpuszczalnikach, można oddzielić dwa diastereoizomery (6R) i (6S) (JCS, CHEM COMM 470,1987; europejski opis patentowy nr 0266042).
Sposoby te sąjednak nieco skomplikowane, a uzyskiwane wydajności bardzo małe, inne sposoby rozdzielania polegają na wielokrotnej krystalizacji albo mieszanin (6R,S) (europejski opis patentowy nr 0367902; międzynarodowa publikacja W088/08844), albo związków pośrednich (europejski opis patentowy nr 348841), zawsze jednak wydajność jest zła.
Ostatnio osiągnięto rozdzielenie stereoizomerycznych mieszanin zarówno MTHF jak i FTHF (opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5006655) przez frakcjonowaną krystalizację i ewentualnie hydrolizę lub redukcję 5,10-metyleno-(6RS)-tetrahydrofoliowego związku pośredniego, którym jednak trudno operować i który wyodrębnia się ze szkodliwego i toksycznego rozpuszczalnika, takiego jak kwas mrówkowy.
Sposób oddzielania postaci (6S) ujawniono w opisie zgłoszenia PCT/EP88/00341 (międzynarodowa publikacja nr W088/08844). Polega on na traktowaniu wapniowej lub magnezowej soli mieszaniny stereoizomerycznej aminą, wytrąceniu soli kationu w postaci szczawianu i otrzymaniu pożądanego produktu przez krystalizację frakcyjną oraz ponowne przekształcenie w sól wapniową lub magnezową.
Podane wydajności są małe a sposób ten wymaga szeregu operacji przekształcania w sól i krystalizacji.
W kolejnym sposobie rozdzielania, do racemicznej mieszaniny w postaci soli wapniowej (europejski opis patentowy nr 367902) dodaje się szereg soli organicznych i nieorganicznych, zwłaszcza jodku sodowego, otrzymując produkt o dobrym stopniu czystości, ale ze złą wydajnością, co jest nie bez znaczenia z przemysłowego punktu widzenia.
Jeszcze inny sposób rozdzielania izomerów FTHF opisano w publikacji Choi et a].; Analitycal Biochem. Vol. 168, str. 398-404 (1968), zgodnie z którym do rozdzielania mieszaniny pochodnych zawierającej 0,5 mg/ml każdej z nich (50%), stosuje się kolumnę z żelu krzemionkowego związanego z albuminą surowicy krwi bydlęcej (BSA) o stężeniu 110 mg/g (11%). Do eluowania stosuje się bufory fosforanowe o pH od 6,4 do 8,4, korzystnie 7,4. Eluat uzyskany według metody Choi i innych, zawiera izomer (6S) w bardzo małej ilości, stosowany jedynie do celów analitycznych.
Sposób Choi i innych, stosowany w warunkach przemysłowych, dawałby długi czas przebywania roztworu w kolumnie, a w rezultacie złe rozdzielenie: wydajność w skali przemysłowej byłaby nieodpowiednia, gdyż konieczne byłoby stosowanie bardzo długiej kolumny w celu uzyskania dającego się zaakceptować rozdzielenia, lub alternatywnie, roztwór trzeba by poddawać kilku cyklom na tej samej kolumnie, co zwiększałoby możliwość degradacji mieszaniny i powodowało bardzo duże zużycie reagentów.
172 385
Nieoczekiwanie stwierdzono, że według wynalazku, postępując według ujawnienia Choi i innych, lecz stosując do eluowania mieszanin (6R,S) buforowany roztwór w bardzo wąskim zakresie pH (pomiędzy 4,8 a 5,δ) uzyskuje się rozdzielenie izomeru (6S) z wydajnością przemysłową, tanio i w prosty sposób. Rzeczywiście, gdy do rozdzielania mieszaniny (óRS) metodą Choi i innych stosuje się dwie kolumny przemysłowe, przy czym jedną z nich z żelem krzemionkowym związanym z albuminą i postępując zgodnie z wynalazkiem osiąga się odpowiednio wydajność izomeru (6S) w pierwszej kolumnie niższą niż 5% i w drugiej kolumnie nie niższą niż 20%.
Oprócz opisanych wyżej sposobów wydzielania izomerów (6S) z mieszanin (6R,S), usiłowano bezpośrednio zsyntetyzować izomery (6S).
Jak opisano w europejskim opisie patentowym nr EP-A-356984, syntezę izomeru (6S) można osiągnąć metodą opartą na stereospecyficznym uwodornianiu podwójnego wiązania
5-6 w kwasie 7,8-dihydrofoliowym.
Gdy uwodornianie to prowadzi się reduktazą dihydrofolanową w obecności NADP, uz^rclnMja ciję dobrą knnweroiP cnocńh ten iednpk iect niezwy/kle eVnmnliVnwanv i Turnełnie bezużyteczny z przemysłowego punktu widzenia.
Próbowano też innych sposobów stereospecyficznego uwodorniania z użyciem odpowiednich katalizarorów, ale zawsze ze złym wynikiem (Tetrahedron 42,117, 1986).
Tak więc, nie ma obecnie taniego sposobu, nadającego się do zastosowania na skalę przemysłową, uzyskiwania izomerów (6S) MTHF i FTHF. W praktyce terapeutycznej, (6S) MTHF i (6S) FTHF nie stosuje się jako takich, lecz w postaci soli, zwykle soli wapniowych.
Takie przekształcenie prowadzi się w znany sposób, np. jak opisano w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 2688018 i w publikacji Weast, Handbook of Chemistry and Physics (57 wyd.; str. B-100).
Mieszaninę (6S) MTHF i (6S) FTHF rozdziela się na odpowiednie izomery (6S) sposobem, w którym kolumnę chromatograficzną załadowuje się wodnym roztworem albuminy, następnie prowadzi się wymywanie pierwszym buforowanym roztworem, załadowuje się kolumnę wodnym, roztworem diastereoizomerycznej mieszaniny pochodnej o wzorze przedstawionym na rysunku, po czym prowadzi się wymywanie drugim buforowanym roztworem, otrzymując jako pierwszy, eluat diastereoizomeru (6S) FTHF, a jako drugi, eluat diastereoizomeru (6S) MTHF, charakteryzującym się tym, że stosuje się roztwór albuminy o stężeniu 0,1 do 10% wagowych i roztwór pochodnych o stężeniu 0,1 do 10% wagowych oraz pH buforowanych roztworów od 4,8 do 5,8.
Korzystnie, przed załadowaniem diastereoizomeryczną mieszaniną pochodnej o wzorze przedstawionym na rysunku, kolumnę przemywa się buforowanym roztworem o pH 7 i następnie ponownie buforowanym roztworem o pH 5. Korzystnie także wodne roztwory albuminy i diastereoizomerycznej mieszaniny buforuje się przy pH od 4,8 do 5,8.
Korzystnie także stosuje się żel krzemionkowy o uziarnieniu od 25 do 60 mikronów, zwłaszcza 35 do 45 mikronów.
Korzystnie jako buforowane roztwory stosuje się buforowane roztwory o stężeniu od 0,05 m do 0,15 m, przy czym stężenie albuminy w jej wodnym roztworze wynosi około 1% wagowych a stężenie diastereoizomerycznej mieszaniny w jej roztworze wynosi około 5% wagowych i stosuje się albuminę wybraną z grupy obejmującej albuminę świńską, bydlęcą, owczą, króliczą, z kurcząt i albuminę z jaj.
Oczywiście, buforowane roztwory stosowane w różnych fazach sposobu według wynalazku mogą być takie same lub różnić się pomiędzy sobą. Jako buforowane roztwory można stosować roztwory ftalanowe, fosforanowe, octanowe i podobne, korzystnie roztwory fosforanowe.
W korzystnym sposobie, do eluowania kolumny chromatograficznej, załadowanej poprzednio solą wapniową kwasu (óIŁSj-metylotetrahydrofoliowego, stosuje się 0,05 m bufor fosforanowy (0,15 m bufor fosforanowy w przypadku stosowania soli wapniowej kwasu (6R, Sj-formylotetrahydrofoliowego).
172 385
Wreszcie, zgodnie z wynalazkiem, można prowadzić rozdzielanie na skalę przemysłową, osiągając bardzo krótki czas eluowania.
W poniższych przykładach zilustrowano korzystne postacie wynalazku, zrozumiałe jest jednak, że wynalazek nie jest do nich ograniczony. Wydajności w przykładach podano wagowo, co odpowiada podwójnej wydajności określonej na podstawie skręcalności optycznej.
Przykład 1. Kolumnę przemysłową o średnicy 0,90 m i wysokości 6,0 m załadowano żelem krzemionkowym (o średnicy cząstek 34/45 mikronów) zawieszonym w 0,15 m buforowanym wodnym roztworze o pH 5, zawierającym merkaptoetanol (0,1% wagowych) aż do całkowitego wypełnienia (wysokość 5,5 m, co odpowiada objętości około 3600 g żelu krzemionkowego).
Chiralne podłoże sporządzano następująco: roztwór albuminy surowicy jaja (1% w 0,15 m buforowanym roztworze, pH 5,0) załadowano na kolumnę po czym badano absorpcję eluowanej cieczy w UV przy 280 nm. Ilość albuminy absorbowanej na żelu krzemionkowym wynosiła 200/400 kg. Eluowanie prowadzono 10000 litrów 0,15 m buforu fosforanowego przy pH 5,0, a następnie 10000 litrów 0,15 m buforu fosforanowego przy pH 7 i wreszcie 10000 litrów 0,15 m buforu fosforanowego przy pH 5,0. Następnie podawano 5% roztwór
5-formylo-(6R,S)-tetrahydrofolianu wapnia w ilości odpowiadającej 5 kg z prędkością przepływu 200/400 litrów/godzinę, prowadząc eluowanie 0,15 m buforem fosforanowym przy pH 5,0. Zbierano frakcje po 500 litrów.
Frakcje zawierające izomer (6S) ulegały eluowaniu przed frakcjami zawierającymi izomer (6R). Eluowanie frakcji można kontrolować w sposób ciągły za pomocą polarymetru wyposażonego w kuwetę przepływową: następnie dokładnie dozować za pomocąHPLC. Frakcje dostatecznie czyste wyodrębnia się do żądanych celów. Czyste frakcje zbiera się i przeprowadza w znany sposób w sól. Wydajność: 1,9 kg (28%) (6S)-folinianu wapnia. Miano: HPLC > 98%. Czystość optyczna > 97%.
Przykład II. W przykładzie tym na skalę przemysłową powtórzono sposób Choi i innych.
Stosując zarówno ten sam rodzaj kolumny jak i ten sam sposób przygotowania fazy nieruchomej, postępowano jak w przykładzie I. Eluowanie prowadzono 10000 litrów 0,15 m buforu fosforanowego przy pH 7,0. Następnie na kolumnę podawano 5% roztwór (6R,S)-folianu wapnia w ilości odpowiadającej 5 kg z prędkością przepływu 200/400 litrów/godzinę, prowadząc eluowanie 0,15 m buforem fosforanowym przy pH 7,0. Zbierano frakcje po 500 litrów.
Rozdzielanie było niezadawalające, cykl oczyszczania powtórzono czterokrotnie, usiłując uzyskać częściowe rozdzielenie.
Próba zawiodła ze względu na brak rozdzielenia.
Przykład III. Stosowano ten sam rodzaj kolumny jak i ten sam sposób przygotowania fazy nieruchomej jak w przykładzie I, ale stosując albuminę surowicy krwi świńskiej (PSA). Wydajność: 1,5 kg (30%) (6S)-folinianu wapnia. Miano: HPLC > 98%. Czystość optyczna > 97%.
Przykład IV. Stosowano ten sam rodzaj kolumny jak w przykładzie I, ale stosując do przygotowania fazy nieruchomej i do absorpcji w następnych fazach i do eluowania odgazowaną wodę.
Do eluowania stosowano 10000 litrów buforu fosforanowego przy pH 5,2, następnie podawano na kolumnę 5% roztwór (6S)-metylotetrahydrofolianu wapnia w ilości odpowiadającej 10 kg z prędkością przepływu 200/400 litrów/godzinę, prowadząc ponownie eluowanie 0,05 m buforem fosforanowym przy pH 5,2. Zbierano frakcje po 500 litrów.
Frakcje zawierające izomer (6S) ulegały eluowaniu po frakcjach zawierających izomer (6R). Frakcje dostatecznie czyste wyodrębniano się do żądanych celów, zbierano i przerabiano ponownie w znany sposób. Wydajność: 3,9 kg (39%) (6S)-metylotetrahydrofolinianu wapnia. Miano: HPLC > 97%. Czystość optyczna > 97%.
172 385
OH X
H^ł
K|5 ruu-KIW-/F:\-PnNILI ł / · ’ i..........
r7
1» · + CH / \
ROOCUC-I4C C00 RWzór
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz.
Cena 2,00 zł
Claims (9)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób przemysłowego wytwarzania pochodnych kwasu (6S) foliowego przez rozdzielanie chromatograficzne na kolumnie mieszaniny diastereoizomerów (6R,S) pochodnych kwasu foliowego o wzorze ogólnym przedstawionym na rysunku, w którym X oznacza CH3 lub CHO a Rj i R?, takie same lub różne, oznaczają H, NH4, atom metalu alkalicznego lub metalu ziem alkalicznych, w którym kolumnę chromatograficzną załadowuje się wodnym roztworem albuminy, następnie prowadzi się wymywanie pierwszym buforowanym roztworem, załadowuje się kolumnę wodnym roztworem diastereoizomerycznej mieszaniny pochodnej o wzorze przedstawionym na rysunku, po czym prowadzi się wymywanie drugim buforowanym roztworem, otrzymując jako pierwszy, eluat diastereoizomeru (6S) FTHF, a jako drugi, eluat diastereoizomeru (6S) MTHF, znamienny tym, że stosuje się roztwór albuminy o stężeniu 0,1 do 10% wagowych i roztwór pochodnych stężeniu 0,1 do 10% wagowych oraz pH buforowanych roztworów od 4,8 do 5,8.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że przed załadowaniem diastereoizomeryczną mieszanina pochodnej o wzorze przedstawionym na rysunku, kolumnę przemywa się buforowanym roztworem o pH 7 i następnie ponownie buforowanym roztworem o pH 5.
- 3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że jako buforowane roztwory stosuje się bufory fosforanowe o stężeniu od 0,05 do 0,15 m.
- 4. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że stosuje się kolumnę z żelem krzemionkowym o uziarnieniu od 25 do 60 mikronów.
- 5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że stosuje się kolumnę z żelem krzemionkowym o uziarnieniu od 35 do 45 mikronów.
- 6. Sposób według zastrz. 1, albo 2, albo 5, znamienny tym, że stosuje się wodny roztwór albuminy o stężeniu około 1% wagowych a stężenie diastereoizomerycznej mieszaniny w jej roztworze wynosi około 5% wagowych.
- 7. Sposób według zastrz. 1, albo 2, albo 5, znamienny tym, że stosuje się albuminę wybraną z grupy obejmującej albuminę świńską, bydlęcą, owczą, króliczą, z kurcząt i albuminę z jaj.
- 8. Sposób według zastrz. 1, albo 2, albo 5, znamienny tym, że stosuje się buforowany wodny roztwór albuminy o pH od 4,8 do 5,8.
- 9. Sposób według zastrz. 1, albo 2, albo 5, znamienny tym, że stosuje się buforowany wodny roztwór mieszaniny diastereoizomerycznej o pH od 4,8 do 5,8.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL29934193A PL172385B1 (pl) | 1993-06-16 | 1993-06-16 | Sposób przemyslowego wytwarzania pochodnych kwasu (6S) foliowego przez rozdzielanie chromatograficzne PL PL PL PL PL |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL29934193A PL172385B1 (pl) | 1993-06-16 | 1993-06-16 | Sposób przemyslowego wytwarzania pochodnych kwasu (6S) foliowego przez rozdzielanie chromatograficzne PL PL PL PL PL |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL299341A1 PL299341A1 (en) | 1994-12-27 |
| PL172385B1 true PL172385B1 (pl) | 1997-09-30 |
Family
ID=20060293
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL29934193A PL172385B1 (pl) | 1993-06-16 | 1993-06-16 | Sposób przemyslowego wytwarzania pochodnych kwasu (6S) foliowego przez rozdzielanie chromatograficzne PL PL PL PL PL |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL172385B1 (pl) |
-
1993
- 1993-06-16 PL PL29934193A patent/PL172385B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL299341A1 (en) | 1994-12-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100207133B1 (ko) | (6s)- 및 (6r)-테트라히드로폴산의 제조방법 | |
| JP2525965B2 (ja) | Ｎ５ −メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のアンモニウム塩およびその製造方法 | |
| JPH0826022B2 (ja) | テトラヒドロ葉酸類の製造方法 | |
| JP7461369B2 (ja) | イソチアゾリジン１，１－ジオキシド及び１，４－ブタンスルトン含有ラパマイシン誘導体並びにその使用 | |
| KR920005744B1 (ko) | 폴린산의 분할방법 | |
| PL172385B1 (pl) | Sposób przemyslowego wytwarzania pochodnych kwasu (6S) foliowego przez rozdzielanie chromatograficzne PL PL PL PL PL | |
| Kanfer et al. | Purification of α-and β-galactosidases by affinity chromatography | |
| JP2588363B2 (ja) | （６ｓ）−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の製造方法 | |
| JPH06345765A (ja) | クロマトグラフィー分離による（６ｓ）−葉酸誘導体の産業的製造方法 | |
| RU2109015C1 (ru) | Способ получения (6s)-изомеров производных фолиевой кислоты | |
| JP3141029B2 (ja) | ペントスタチンの精製方法 | |
| NO301166B1 (no) | Fremgangsmåte ved fremstilling av folinsyrederivater | |
| NZ247824A (en) | Industrial preparation of (6s) folic acid derivatives by chromatographic separation | |
| US4360685A (en) | Dioxatricyclic prostacyclin analogs | |
| SU1217249A3 (ru) | Способ получени транс-4а-5,8,8а-татрагидронафталин-2 ( @ ),6 (7 @ )-дион-6-этиленкетал | |
| JPS61286390A (ja) | ２−ブロモ−α−エルゴクリプチンの製造方法 | |
| US4739113A (en) | Bis(cyclopropanecarboxamido)alkadienedioic acids as renal dipeptidase inhibitors | |
| US4420626A (en) | Dioxatricyclic prostacyclin analogs | |
| Matsuura et al. | HYDROGENATION OF BIOPTERIN AND ITS ANALOGUES; APPLICATION FOR TEE CONVENIENT PROCEDURE OF BIOPTERIN COFACTOR AND RELATED | |
| Bisagni et al. | New heterocyclic rearrangement: transformation of 1-substituted 4-(alkylamino)-1H-pyrrolo [3, 2-c] pyridines into 1-substituted 4-(alkylamino)-1H-pyrrolo [2, 3-b] pyridines (5-aza to 7-azaindoles) | |
| Marks | Reversed-phase high-performance liquid chromatographic separation of LY309887 (thienyl-5, 10-dideazatetrahydrofolate) stereoisomers using β-cyclodextrin as a mobile phase additive | |
| AT398766B (de) | Verfahren zur intramolekularen oxidation von zwei -sh gruppen in einer peptidverbindung zu einer disulfidbrücke | |
| Grandfils et al. | Synthesis of [γ-32P] thiamine triphosphate | |
| KR20230023750A (ko) | 염소화 화합물의 제조 방법 | |
| US5264593A (en) | Cholesterol lowering compounds |