PL155894B1 - Test for assessing gluten-dependent enteropathies - Google Patents

Abstract

Sposób rozpoznawania glutenozaleznej enteropatii, zwlaszcza w celiakii i dermatitis herpe- tiformis, znamienny tym, ze na skrawki tkanek z przewodu pokarmowego zdrowego zwierzecia, korzystnie malpy, nakrapla sie surowice chorego oraz surowice kontrolne, po czym inkubuje sie je i plucze w zbuforowanym roztworze soli fizjologicznej, a nastepnie na tak przygotowane skrawki tkanek nakrapla sie rozcienczony zbuforowanym roztworem soli fizjologicznej koniu- gat immunologiczny stanowiacy przeciwciala skierowane przeciwko immunoglobulinie klasy A, który to koniugat znakowany jest peroksydaza, dalej wycinki tkanek poddaje sie ponownie inkubacji i plukaniu oraz wywoluje sie reakcje barwna poprzez nakraplanie czterochlorku 3,3'diaminobenzydyny rozcienczonego w zbuforowanym Tris-HCl, a w dalszej kolejnosci wycinki tkanek inkubuje sie, plucze i zamyka w zbuforowanej glicerynie, tak przygotowane skrawki tkanek poddaje sie ocenie pod mikroskopem swietlnym. PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób pozwalajęcy na szybkie i bezinwazyjne rozpoznawanie glutenozaleznej mteropaaii, zwłaszcza w celiakii i dermmdtis herpetiformis .

Zalecony przez Europejskie Towarzystwo Gastroenorologi i i Żywienia Ozieci sposób rozpoznawania glutenozaleznej enteropaaii polega oa wielokrotnych biopsjach jelitwwych, Pobiera się skrawki jeliz cienkiego i obserwuje mikroskopowo pobrane tkanki. PecceM, a najczęściej jest to małe dziecko przechodzące z pokarmu naturalnego jakż jest mleko na pożywienie sztuczne, musi poddać się co najmniej ti^^y^^ooiemiu zabiegowi pobrania skrawka jeliaa cienkiego. Biopsję takę stosuje się w rozpoznawaniu wstępnym przed zlecentom diety bezglutenowej , jako kontrolę w trakcie diety oraz po prowokacci glumeem w celu ostatecznego potwierdzenia rozpoznania. Inwazyjne rozpoznawanie glutenozaleznej enΐeropatϋ w celiakii jest czasochłonne, gdyż trwa kilka lat zanim rozpoznanie to zostanie potwierdzone lub wylęczone. Ponadto zabieg biopsji jest zabiegeem uciąziiwm™ dla pacjenta oraz wymaga zaangażowania specjalsstyconego personelu medycznego. Przygotowanie preparatów z pobranych skrawków jeliaa cienkiego jest pracochłonne i czasochłonne.

Odkrycie markera lmmunnoogicznego glutenozależoej enteropaaίι stworzyło możliwość zastępiem^ biopsji jelitiwych teseem immunologicznym i skrócentom czasu rozpoznawania celiakii z kilku lat do kilku miesięcy. Markerem tym sę przeciwciała klasy IgA saieoowanr przeciwko rndoaysiua mięśni gładkich IgA-EmA. Występuję ooe w surowicy chorych we wszystkich przypadkach celiakii w fazie ostrej i zanikają po eliminacji glutenu z diety bezglutenowej . Przeciwciała te pojawiają się ponownie w okresie od 2 tygodni do 3 miesięcy od rozpoczęcia prowokaacjŁ glueenem.

Sposób rozpoznawania glutenozalecnrj rntΓOpaCii według wynalazku polega na tym, że oa skrawki tkanek z przewodu pokarmowego zdrowego zwierzęcia, korzystnie małpy, nakrapla się surowicę chorego oraz surowice kontrolne, po czym inkubuje się je i płucze w zbufoowwanym roztworze soli fizocOogiczneJ. Na tak przygotowanr skrawki tkanek oakrapla się znakowany arroktydazę koniugat iaaunoOogiycny stanowiący przeciwciała skierowane przeciwko immunoolobulines· klasy A. Następnie skrawki tkanek inkubuje się i płucze, po czym wywołuje się reakcję barwną poprzez nakrapłaoie oa nie czterochlorku 3,3* diaminobeozydyny rozcieńczonego w cbufooiwanya TRis-HCl. Po tym oakroplmiu skrawki tkanek inkubuje się, płucze i zamyka w zbuforowanej glicerynie, a następnie poddaje się ocenie pod mikroskopem świrinnya.

Sposób według wynalazku jest łatwy w wykonaniu i stosunkowo szybki, gdyż pozwala na oznaczenia przeciwciał IgA-Ema w ciągu 2 do 3 godzin. Uzyskane preparaty sę trwałe, a wyniki

155 894 barwienia ocenia się w zwykłym mikroskopie świetlnym stanowiącym wyposażenie każdego laboratorium.

Przykład. Zestaw testowy do rozpoznawania glutenozaleznej enteropatii zawiera koniigat immuinlociczny, stanowiący przeciwciała skierowane przeciwko ludzkiej imrnuinglobbiinie klasy A znakowane peroksydazą oraz czterochlorek 3,3* - diaminobenzydyny, stanowiący sibstancją wywo^jącą zmianą zabarwienia tkanek w miejscach związania się koniigati. Ponadto zestaw testowy zawiera jako środek rozcieńczający sibstancję wywolującę zmianą zabarwienia zbuforowany Tris-HCl, zaś jako środek zamykający gliceryną.

W celi rozpoznania glutenlzaleznej enteropptii, z wykorzystaniem sposobi wedłig wynalazki, na uBlesziZlne na szkiełkach podstawowych skrawki, tkanek z przewiodi pokarmowego małpy nakrapla się rozcieńczoną sirowicą chorego oraz sirowice kontrolne dodatnie i ijemne. Skrawki tkanek z sirowicami poddaje się inkibacci w wilgotnej 'komorze w temperatorze pokojowej przez okres 30 mnut. Nastąpcie poddaje się je dwukrotnemu płikaniu w zbifcnw'«3r^i^a roztworze soli fooDijce^nej przez okres 10 mnit i isiwa nadmiar płyni. Na tak przygotowane skrawki tkanek nakrapla się rozcieńczony zbifolw'r^ί^'/a roztwoeem soli f izo dog ćcznej koniigat peroksydazowy. Nastąpnie wycinki tkanek poddaje się kolejno mk^acj i płikaniu z usuniąciem nadmiari płynu w sposób analogiczny jak podano wyżej. Na skrawki tkanek nakrapla się nastąpnie czterochlorek 3,3* diaminobenzydyny rozcieńczony w zbifdowanym Tris-HCl o pH zasadowej 7,6 z dodatkeern nadtlenki w^t^ori o stążeniu nieprzekraczajccym 0,03%, bądący sibstancją w^woł^ącą zmianą zabarwienia tkanek w miejscach związania się koniigati pirlksydazowigo. Po tym nak rplemi, skrawki tkanek poddaje się w wilgotnej komorze w temperatorze pokojowej przez okres minut, dwukrotneni płikanii w wodzie destylowanej przez okres 10 minut, isuniJcίu nadmiari płyni i zamkknęcii w zbiforowanej glicerynie. Tak przygotowane skrawki tkanek poddaje się ocenie pod mikroskopem świetney!.!. W przypadki istnienia w sitowicy chorego przeciwciał skiero wanych przeciwko indlyysiul miąśni gładkich IgA-EmA wysypuje charakterystyczne brązowe zabarwienie ^domysium miąśni gładkich. Na skrawkach tkanek z sitowiGami kontrolnymi ijeyncyi brak tego charakterystycznego zabarwienia endlyysiiy.

Przy pomocy sposobi wedłig wynalazki można wykonywać testy Jakościowe i i!^^ciowe.

W teście jakośctowym wstąpnie sprawdza sią, czy w badanych sitowicach wystąpiją przeciwciała skielowani przeciwko endlyysluy miąśni gładkich IgA-EmA. W teście iloCciowym określa się poziom przeciwciał IgA-EmA w sitowicy·

15Ε 634

Zakład Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz.

Cena 5000 zł.

Claims (1)

1. Zastrzeżenie patentowe

   Sposób rozpoznania glutenotaleznej enteropptii, zwłaszcza w celiakii i dermatitis herpetloformis, znamienny tym, ze na skrawki tkanek z przewodu pokarmowego zdrowego zwierzęcia, korzystnie małpy, nakrapla się surowicę chorego oraz surowice kontrolne, po czym inkubuje się je i płucze w zbufoowwanya roztworze soli fizo°oogccznej, a następnie na tak przygotowane skrawki tkanek nakrapla się rozcieńczony zbuf^oow^^r^^m roztworem soli f izo ooggccznej koniugat immuuooogiczny stanowięcy przeciwciała skieowwane przeciwko globulinie klasy A, który to koniugat znakowany jest peroksydazę, dalej wycinki tkanek poddaja się ponownie inkubacji i płukaniu oraz wywoouje się reakcję barwnę poprzez nakraplaoie czterochlorku 3,3* diaminobenzydyny rozcieńczonego w zbufoowwanym Tns-HCl, a w dalszej kolejności wycinki tkanek inkubuje się, płucze i zamyka w zbuforowanej glicerynie f tak przypozwane skrawki tkanek poddaje się ocenie pod i.kr^oj<^^^m świetOnym.