Opis patentowy opublikowano: 20.09.1979 102557 c: (Elnia l U:.^ Int. Cl.2 C12D 9/00 //C07H 15/04 Twórca wynalazku — Uprawniony z patentu: American Cyanamid Company, Wayne (Stany Zjednoczone Ameryki) Sposób wytwarzania nowych alkilowanyeh pochodnych antybiotyku BM 123 y PnzedimiKteim wynalazku jest sposób wytwarzania nowych alkilowanyeh pochodnych antybiotyku BM 123 y o ogólnym wzorze 1, w którym R2 oznacza niz¬ sza grupe alkilowa, nizsza grupe chlorowcoalkilo- wa lub nizsza grupe fenydoailklilowa, R8 oznacza nizsza grupe alkilowa, nizsza gruipe chlorowicoal- kilowa, nizsza grupe alkenyllowa, .nizsza grupe cy- kloaHkiiloiwa, grupe fenylowa, jedinopodsttawiona grupe fenylowa* nizsza grupe fenyloalkilówa lub jefltaopodfetawiona nizsza grupe fenyloallkilowa, lub R2 i R, nazem oznaozaja gruipe rateromeitylenowa, pieaiomeltylenoiwa lub szesciometylenowa a R ozna¬ cza gruipe o wzorze 2 lub 3.. Odpowiednimi nizszymi grupami alkilowymi lub chlorowcoalkilowymi sa grupy o nie wiecej niz 6 15 a-tomalch wegla, w których nazwie przedrostek chlorowce- oznacza chloro-, bromo- i jodo-, takie , jak grupa metyllowa, etylowa, izopropylowa, II- -^rzed.buitylowa, n-amylowa, dwuchlorometylowa, 2-toromoetylowa, 2,3Klwujodopropylo,wa, Y_chloro- 20 propylowa i temu podobne.Odpowiiednijmi nizszymi grupami alkenylowymi sa grupy o niie wiecej niz 4 atomach weigla, takie jak grupa winylowa, alkilowa, propanylowa, izo- propanylowa, 1-bu/teinylowa, 2-butenylowa, 34ute- nylowa, izobutenylowia i temu podobne.Odpowiednimi nizszymi grupami cykloalkilowy- mi sa takie grupy jak grupa cyklopentylowa, cyklo- hekisyQowa i cyMoheplylowa.Odipowiedniimd jednopodstawionymi grupami fe- 2 nyloiwymi sa takie grupy jak grupa p-acetoamido- fenylowa, n^nitrofanylowa, m^merfkaptotfanylowa, o- -anizylowa, o^tolilowa, p-tolilowa i temu podobne, w których grupe nizsza fenyloalkilówa stanowi gru¬ pa benzydowa, anfenyloeltylowa i p^fanyloetylowa.Odpowiednimi jedjnopodstaiwionymi nizszymi gru- pami fanylolalkiiowymi sa takie grupy jak grupa o- -ichloroibeinzylowa, mnchlorobenzylowa lub pnchloiro- benzylowa, a^p-aminofenylo/etylowa, p-i/lm-nitirofe- nylo/atylowa i temu podolbne.Odipoiwiedinimii grupami metylOH2^fuxylO(wymi, me- tylo^-2-tienylowymi i metyflo-i2ipiiry]©wyimi, sa takie grupy jak grupa. 5-meitylo^2^fury0o(wa, 3,4ndwume- tylo-S^furylowa, 4Hmetylo-Mienylowa, 3y5Hdiwiume- tyaon2^tienylofwa, 5Hmetylo^2Mpiirylowai, i,3,4^tró;jme- tylo-2ipiryloiwa i temu podobne.Wedlug wynalazlku sposób wytwarzania nowego alkilowainego BM 1<23 y ° ogólnym wzo«rze 1 w któ¬ rym wszystkie * podstawniki maja wyzej podane znaczenie polega na tym, ze amine o ogólnym iwzorze 4, w którym R ma wyzej lpodaine znaczenie alkiluje sie przy uzyciu ketonu o wzorze 5, w któ¬ rym R2 i Rs maja .wyzej podane znaczenie w obec¬ nosci cyjainoibcHrowodoirku sodu jako czynnika re¬ dukujacego, w obojetnym srodowiiskiu pirzy pH za¬ wartym w granicach 6,0—6,0 przy czym keton i czynnik redukujacy stosuje sie w nadmiarze.Mieszanine reakcyjna pozostawia sie w ciagu 1—24 godzin w temperaturze oftolczendia to jest 10— °C, po czym odparowuje do sucha- pod zminiei- 102557s 102557 4 szonyim tisnieniem, a otrzymana pozostalosc roz¬ ciera sie z metanolem, a nastepnie saczy. Otrzyma¬ ny przesacz rozciencza sde acetonem i wytracony osad odsacza sie r s"uszy pod zmniejszonym cisnie¬ niem.Wytworzone zwiazki wyodrebnia sie z miesza¬ niny poreakcyjnej ? znanymi metodamd, takijmd jak wytirajcamie, zatezanie, ekstrakcja rozpuszczalnika¬ mi lulb pray pomocy konibinaoji tych metod. Po wyodrejbmenliu otrzymane, awiajztoi poddaje sie oczyszczeniu, które mozna przeprowadzic kazda ogólnie znana metoda oczyszczania, taka jak kry¬ stalizacja z rozmadtych rozpuszczalników i mie¬ szanin rozpuszczaOnikóiw, chromatografia i rozdzie¬ lanie . przeoiiwpradowe. Metody te sa awyfcle sto¬ sowane w tym celu.Nowe antybiotyki wytwarzane sposobem wedlug wynalazku sa to zasady organiczne. Dzieki temu moga one tworzyc kwasne sole addycyjne z róz¬ nymi zwiazkami organicznymi i nieorganicznymi dajjacyml sole. Kwasne sole addycyjne wytwarza sie przy pomocy zimleszania antybiotyku w po¬ staci wodnej zasady, korzystnie w srodowisku, obo¬ jetnego rozpuszczalnika, z nie wiecej niz trzema równowaznikami kwasu, takiego jak kwas siar¬ kowy,) fosforowy, solny, bromowodorowy, amido suJLfomowy, cytrynowy, maleinowy, fumarowy, wi¬ nowy, octowy, benzoesowy, gldlkonowy, askorbino¬ wy i kwasy pokrewne. Nowe antybiotyki wytwa¬ rzane sposobem wedlug wynalazku w postaci kwasnych soli addycyjnych, sa to na ogól substan¬ cje stale, wzglednie rozpuszczalne w wodzie, me¬ tanolu i etanolu, ale prawie nierozpuszczalne w organicznych rozpuszczalnikach niepolarnych, ta¬ kich jak eter diwuetylowy, benzen, tohien i temu podobne. Pod wzgledem wlasciwosci antybakteryj- nych, nowe antybiotyki wytwarzane sposobem we¬ dlug wynalazku w postaci wolnych zasad sa rów¬ nowazne ze zwiazkami wytwarzanymi w postaci odpowiednich nietoksycznych kwasnych soli addy- cyjnych* (Antybiotyki oznaczone symbolaiml BMl^ft, BM 1230*, HM)1i23yi i BMli23y2 wyitwairza sie w czasie hodowli nowego szczepu z rodzaju Nocardia, o nieustalonej przynaleznosci gatunkowej, prowa¬ dzonej w warunkach konitrolowanych. Ten nowy szczep produfcujajcy antybiotyki zostal wyizolowa¬ ny z próbki ziemi ogrodowej pobranej w Oceola w stanie Iowa. Jest on przechowywany w kolekcji szczepów Lederle Laboratories Division, Ameri¬ can Cyanarodd Company, Peairl Riiver, Nerw York, pod numerem OUlture No. BM|L23. Zywa hodowle nowego drobnoustroju zdeponowano w OuHture CoUeotion Laboratory, Northern Ultilization Re¬ search and Deyeilopiment Division, Uniited States Department of Aigricultuira, Peoria, Illinois, gdzie jest prowadzony razetm z innymi szczepami na¬ lezacymi do tej kolekcji. Szczep ten jest tam zarejestrowany pod numerem NRRL 5646 i jesit ogólnie dostepny. W niniejszym opisie symboJ BM 123 p odnosi sie do dowolnej mieszaniny an¬ tybiotyków o symibolach BM 103 0X i BM 123 B* a symbol BM 123 y odnosi sie do dowolnej mie¬ szaniny antybiotyków BM 103 yi i BM 123 yt.Ponizej podano opis ogólny drobnoustroju No¬ cardia sp. NRiRL 5646, w oparciu o zaobserwowa¬ ne cechy diagnostyczne. Prowadzono obserwacje djrobnoustoojai pod wzgledem wlasciwosci hodo¬ wlanych, fiizjologiiaznych i morfologicznych, we- 8 dlug metodyki opisanej przez Shirlinga i GottiMeba w Internat. Journ. of Syst. Bacteriol., 16, 213—240, 1966. Sklad chemiczny hodowli badano metodami podanymi przez Lechevaliera i wsp. w Advan.Aippi, MiiorobioL, 14, 47—7(2, 1971. Okreslenia barw odcieni podkreslone zaczerpnieto z pracy Jacob¬ sona i wsp. w Color Harmony Mamiual, wyd. III. 1948, Contaiiner Corp. of America, Chicago, Illinois.Szczególowe opisy zamieszczono w ponizszych ta¬ blicach I—V. m Intensywnosc wzrostu. Wzrost umiarkowany w warunkach hodowli na podlozu agarowym zawiera¬ jacym ekstrakt drozdzowy, podlozu agarowym as- paragijnowo-glukozowym, podlozu agatowym Bene- dicfa, podlozu agarowym Bennetfa, podlozu aga- rowym ziemniaczano-glukozowym i podlozu aga¬ rowym WekBsteinla. Wzrost slaby w warunkach hodowli na .podlozu agarowym Hickeyfa i Tresne^a, podlozu agarowym zawierajacym paste pomidoro¬ wa, podlozu agarowym z maka owsiana i podlozu agarowym zawierajacym odzywke Pablum. Wzrost sladowy na podlozu agarowym zawierajacym skro¬ bie i sole nieorganiczne, podlozu agarowym Ru- ster'a z platkami owsianymi, podlozu agarowym zawierajacym roztwór Czapka i podlozu agarowo- ^ryzowym.Grzybnia powietrzna. Jezeli wystepuje, jest bia¬ lawa. Wytwarzana wylacznie w warunkach hodo¬ wli na podlozu agarowym zawierajacym ekstrakt drozdzowy, podlozu agairowym aspajraginowoHglu- kozowym, podlozu agarowym Benedicfa, podlozu agarowym BenneWa i podlozu agarowym ziiemnia- czanoHglukozowym.Barwniki rozpuszczalne. Drobnoustrój nie wy¬ twarza barwników rozpuszczalnych. 40 Zabarwienie kolonii ogladanych od dolu. Bez¬ barwne do odcieni zóltawych.Wlasciwosci fizjologiczne. Drobnoustrój nie uplyn¬ nia zelatyny. Azotany redukuje do azotynów w ciagu 7 dni. W warunkach hodowli .na .podlozu agarowo- « npeptonowym zawierajacym zelazo nie wytwarza barwników melanoidowych. Nie peptonizuje mle¬ ka z purpura i nie wytwarza w nim skrzepu. To¬ lerancja na NaOl w warunkach hodowli na po¬ dlozu agarowym zawierajacym ekstrakt drozdzowy: 50 ^4*/§, ale ^7V§. Optymalna temperatura wzrostu wynosi 3i2°C. Wykorzystanie zródel wegla, we¬ dlug metody Bnidham'a i Gotfatilieb'a, opisanej w J. Bacteriol, 56, 107^114, 1948: dobre wykorzysta¬ mie glicerolu, salicyny, D-trehalozy i glukozy, dosc 55 dobre wykorzystanie i-inozytu, slabe wykorzysta¬ nie, az do braku wykorzystania, D-lfirufldtozy, mal¬ tozy, adonitu, L-aratoinozy, laktozy, D-mannitu, D-meldibiozy, D-irallinozy, L-ramnozy, sacharozy i D-ksylozy. w Sklad chemiczny. Drobnoustrój nalezy do grupy drobnoustrojów posiadajacych sciane komórkowa typu IVV to znaczy zawiera kwas mezo-2,6-dwu- aminopimelinowy. Pod wzgledem modelu skladu cukrowego calej komórki nalezy do drobnoustrojów 65 grupy A, to znaczy zawiera arabinoze i gafaktoze.102557 Pod wzgledem modelu zawartosci kwasów tlusz¬ czowych roetylowane ekstrakty z calych komórek sa podobne do ekstraktów z Nocardia asteroides ATOC 3308.Morfologia, mikroskopowa, Grzybnia powietrzna powstaje z grzybni podstawowej w postaci .slabo rozgalezionych i srednio dlugich powyginanych na¬ ci, które zazwyczaj koncza sie farma wydluzona, pirzypomtinajaca slabo wyksztalcona spirale. Powy¬ ginane nici sa podzielone w sposób niereguflairny na krótkie segmenty o ksztalcie eliptycznym prze¬ chodzacym w cylindryczny (zarodniki?), które latwo rozdzielaja sie. Sipiraline zakonczenia pocMelone sa na segmenty w sposób mniej widoczny. Segmenty zazwyczaj osiagaja wymiary 0,8—1,7 mikrona X X 0,3—0,5 milkrona, srednio 1,2 X 0,4 mikrona.Ustalenie priynaleimsci taksonomicznej. Wlas¬ ciwosci morfologiczne szczepu Culture No. BM 123 sa trudne do obserwowania i interpretacji, ponde- waz szczep ten na wiekszosci podlozy wytwarza grzybnie powietrzna w nieznacznym stopniu. To¬ tez, niezaleznie od koniecznosci, przywiazuje sie duze znaczenie do analizy chemicznej przy ustala¬ niu proynaleznosci rodzajowej. Przyjmujac jako kryterium system klasyfikacyjny zaproponowany przez Lechevafli«er'a i wsp., stwierdzono, ze szczep Oulture No. BM 123 zawiera w scianie komórM kwas mezOH2,6^6Wuaiminopiirnellinowy.Badanie skladu cukrowego wykazalo obecnosc aimbinozy i galaiktozy. Na tej podstawie Uznano, ze szczep ten nalezy do grupy drobnoustrojów po¬ siadajacych sciane komórkowa typu IV. Porówna* nie wyników badania przy pomocy chromatograf gazowej ekstraktów komórkowych szcaapu OuBfanre No. BM 123 i szczepu Nocardia asteroides ATCC 3308 wykazalo, ze sa one nadzwyczaj podobne do siebie. Do innych cech charakterystycznych szczepu Cudture No. BM li23f które sa zgodne z tym, co sie wiaze z pojeciem Nocardia, naleza fragmentujaca grzybnia powietrzna, powstajaca w warunkach ho¬ dowli na niektóryich podlozach, oraz calkowity jej brak w przypadku wiekszosci podlozy.Ze wzgledu na brak wystarczajacych kryteriów oceny drobnoustrojów z rodzaju Nocardia na po¬ ziomie gatunku, nie próbotwano dokonac takiego ustalenia. Totez, az do czasu, kiedy oznaczenie przynaleznosci gatunkowej stanie sie wykonalne, drobnoustrój Cufllture No. BM 123 uwazac sie bedzie za nalezacy do nieokreslonego gatunku ro¬ dzaju Nocardia.Tablica I Wlasciwosci hodowlane szczepu Nocardia sp. NRRL 5646 Czas trwania inkubacji 314 dnd; Temperatura : 32°C Podloze 1 Agarowe zawieraja¬ ce ekstrakt droz¬ dzowy Agarowe Hiickey'a i Tresnera Agarowe asparagino- 'WO-jgUukozowe Agarowe Benedicfa Agarowe Bennetfa Agarowe zawierajace staobie i sode nieor¬ ganiczne Agarowe Kuster'a z platkami owsianymi Agarowe zawierajace roztwór Czapka Intensywnosc wzrostu 2 Uimdaffko- wany Slalby Umiarko¬ wany Umiarko¬ wany t Ulmiarko- wany Sladowy Sladowy Sladowy Grzybnia . powietrzna i/lub zarodniki 3 Grzybnia po¬ wietrzna bia¬ lawa, nie¬ wielka Grzybnia po¬ wietrzna nie wystepuje Siady biala¬ wej grzybni powietrznej Grzyfbnda po¬ wietrzna bia¬ lawa, nie- wtieilka Siady biala¬ wej grzybni powietrznej Grzybnia po¬ wietrzna nie wystepuje | Grzybnia po- 1 .wietrzna nie wystepuje Grzybnia po- wietrzna nie 'wystepuje • | Barwnik rozpusz¬ czalny 4 Brak Brak Brak Brak Brak Brak Brak Brak Zabarwienie hodawM ogladanej od dolu : Musztardowa (3 ie) Bezbarwna do zoltawo- Hzielonej BuiMtynawa (3 lc) Cielist*- brazowa (4 gc) Wielbladzia (3 ie) Beabarwna Bezbarwna Bezbarwna Uwagi ' 6 . .W grzybni podstawo¬ wej ciemne pola.Na powierzchni grzybni tworza sie ciala owocujace.Obrzeza kolonii staja sie odiwkowo-zielone Powierzchnia lekko 1 pomarszczona.Na powierzchni 1 grzybni tworza sie obficie ciala owocu¬ jace.Powierzchnia lekko pomarszczona102557 Tablica I Cjd. 1 1 Agarowe ziemniacza- nongluikozoiwe 1 Agarowe zawierajace paste pomidorowa i majke owsiana 1 Agarowe zawierajace odzywke Pablum 1 Agarowo-ryzowe 1 Agarowe Weinstein'a 2 Uimliarko- wainy Slaby Slaby Sladowy Uimiarko¬ wany 3 Grzybnia po¬ wietrzna bia-~ lawa, nie¬ wielka Grzybnia po¬ wietrzna nie wystepuje Grzybnia po¬ wietrzna nie wystepuje Grzybnia po¬ wietrzna nie wystepuje Grzybnia po¬ wietrzna nie wystepuje 4 Brafk Braik Brak Brak Brak | 6 Wielbladzia (3 ie) Bezbarwna Bezbarwna Bezbarwna Bezbarwna do zóltawej Tablica III (ad.) Tablica II Morfologia mikroskopowa szczepu Nocardia sp.NRRL 5646 Podloze | 1 Agarowe zawie¬ rajace ekstrakt drozdzowy Grzybnia powietrzna i/lub struktury zarodnikonosne 2 Grzybnia powietrzna powsta¬ je z grzybni podstawowej w postaci slabo rozgalezionych, powyginanych nici, które zazwyczaj koncza sie forma wydluzona, przypominajaca slabo wyksztalcona spirale.Powyginane nici sa podzie¬ lone w sposób nieregularny na krótkie segmenty (zarod¬ niki?), które latwo rozdzie¬ laja sie. Spiralne zakoncze¬ nia, podzielone sa na seg¬ menty w sposób mniej wi¬ doczny. Segmenty zazwyczaj osiagaja wymiary 0,8—1,7 mikrona X 0&—®& mikrona, srednio ly2X0-4 mikrona. 40 50 1 Bulion za¬ wierajacy azotan zwiaz¬ ku organicz¬ nego 1 BultiOn za¬ wierajacy azotan zwiaz¬ ku organicz¬ nego 1 Agarowo*- ^peptonowe zawierajace zelazo 1 Mleko z pur¬ pura 1 Agarowe za¬ wierajace ekstrakt i drozdzowy + 4, 7, 10 i 13»/o NaCl 2 7 dni / 14 dni 24—48 godzin * 7 dni 7 dni 3 Dobry Dobry Dobry Dobry Umiar¬ kowa¬ ny 4 | Redukuje azotany do azotynów Redukuje 1 azotany do azotynów Nie wytwa- 1 rza barwni¬ ków meia- noidowytóh Nie peptoni- 1 zuje i nie wytwarza skrzepu Tolerancja 1 na NaCl 4%, ale 7% Tablica III Wlasciwosci fizjologiczne sizozepu Nocairdia sp.NRRL 5646 Podloze 1 1 Zelatynowe Zelatynowe Czas tirwania inku¬ bacji 2 7 dni 14 dni Inten¬ sywnosc wzrostu 3 Slaby Dobry Wlasci¬ wosci fizjolo¬ giczne 4 | Nie uplynnia Nie uplynnia 55 80 65 Tablica IV Model wykorzystania ZTÓdel wegla przez szczep Nocairdia sp. NRRiL 5646 Czas inkubacji: 10 dni Temperatura: 32°C Zródlo wegla 1 Adoinit L — araibinoza Glicerol D — fruktoza i — inozyt Wy/korzystanie 2 0 0 3 1 2fOZ557 7 . ..... : .^ " l Laktoza D — mannit Salicyna D — melibioza D — rafiiincza Raimnoza Maltoza Sacharoza D — trehaloza D — ksyloiza Glukoza Tablica IV c.d. 2 0 0 2 0 0 0 1 0 3 0 3 r W powyzszej tablicy IV uzyto nastepujace ozna¬ czenia.,. 3 dcibre wykorzystanie 2 dosc dobre wykoirz^ystante 1 slabe wykorzystanie 0 brak wykorzystania.Tablica V ,..,..Sklad chemiiczny szczepu Nocardia sp.NRRL 5646 Typ sciany komórkowej Typ IV Wazniejsze | skladniki 1 Kwas mezo-i2,6 amino|piimeTiinowy, arafoinoza, galaklOza. | Antybiotyki BM 1230 i BM 123y produkowane sa nie tylko praez ten szczególny drobnousitirój, wzglednie drobnoustroje przejawiajace wlasciwosci hodo'wlane i mikroskopowe calkowioiie zgodne z ce¬ chami wyzej opasanymi, które podano jedyrnre w celu objasnienia. Zastosowac mozna takze mutainity tego drobnoustroju, otrzymane róznymi metodami:, takimi -jak dzialanie ' promieniowania (rentge¬ nowskiego, promieniowania ultra;flkrtertoweigO', ipe¬ rytu, aktynofaigów i ternu podobnych. Zywa ho¬ dowle tskdego typu zmutowanego szczepu zdepono¬ wano w Gulture Collection Laiboiratoiry, Norftheirn Ufoilizatioin Research and Deyeiopmemt ' Div:s:on, United States Department of AgricultuTe, Peof-a, Illinois," gdzie jest zalregesitirowany pod numerem NRRL 8050 i prowadzony razem z iininyiitli szcze¬ pami. Aczkolwiek wlasciwosci hodowlane, fizjouo- gi(czine i morfologiczne szczepu NRRL 8050 sa za¬ sadniczo takie same jak wlasciwosci szczepu NRRL 5646, to jednak szczep ten podczas fermentacji aarobowej wytwarza wieksza ilosc antyfouotyku BM 123y. Poza tym, szczep -NRRL 8050 rózni sie od szczepu macierzystego NRRL 5646 tymi, ze re- dukcja azoltanów do azotynów zachodzi w jego przypadku woliniej, oraz w warumkjach hodowli na podlozu agarowym Beinnotifa -i podlozu agarowym zawierajacym ekstrakt drozdzowy wytwarza barw¬ nik komórkowy o zabarwieniu Jpailisaindrowó-brazo- io wym.Nowe antybiotyki wytwarzane sposobem wedlug wynalazku sa to substancje krystaliczne o wzgled¬ nie ograniczonej rozpuiszczaOinosci w rozpuszczalni¬ kach niepodatnych, takich jak eter drwiueltylowy i heksan, ale o znacznie lepszej rozpinszczatnosci w rozpiuBzczalinikach takich jak woda i nizsze al- kairiole. Antybiotyki BiM 122yt;--d" BM 12872 sa lizo- merami strukturalnymi i mozna je przedstawic wzorami stiroikftuiralinymi 6 i 7.Redukcyjne alkilowanie antybiotyków BM 1&3 oraz BM l23yu lub BM 12372 przy pomocy keto¬ nów, zachodzi w bocznym lancuchu sparmadyno- wym, z ultwo/rzeniiem pochodnych o wzorze: 1, w którym B oznacza czesc czajsteKaziki o wzorze 2 lub 3, a R2 i R8 maja wyzej podaine znaczenie.Uzytecznosc aflkilowanych pochodnych anitybioity- ku BM laSy wyikazano poprzez ich zdolnosc zwal¬ czania smiertelnego zakazenia ogótoegó myszy. Te nowe antybiotyki wykazuja in vivo wysoka nie- aktywnosc antybaktaryjna u myszy wobec Esche- riichia coli US 311 po podskórnym podaniu poje¬ dynczej dawki myszom Carworth Fartms CtF — 1, o wadze okolo 20 g, zakazonym dootirzewinowo amertelna Pawika tych bakterii z 5-ciogodzJnnej ho- dowlli w podlozu TSP z krwia, zawiecag&jCym trzustkowy hydrolizat kazeiny i papainowy hydro¬ lizat sof, w rozcienczeniu 10^? podlozem TSP za¬ wierajacym trzustkowy hydrolizat kazeiny i papai¬ nowy hydrolizat soi. 40 W tablicy VI zamieszczono wyniki badan iin vivo na myszach, odnoszace sie do aktywnosci, wobec Bsicherichia coli US 311, wykazywanej przez ty¬ powe zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wyna¬ lazku z uzyciem wyzej wymienionych odczynników 45 kafrbonylowych. Aktywnosc te wyrazono jako ED50 czyli dawke w mg/kg wagi ciaia, niezbedna do ochrony 50tye uzytych myszy przeciwko . E. coli.Jak wykazano w tablicy VI, nieftodsitawiione an¬ tybiotyki BM 1237, maja duzo nizsza aktywnosc niz podstawione antybiotyki. Ponadito', zalkiflowane pochodne sa duzo bardziej bezpieczne ze wzgledu na ich mniejsza toksycznosc. 50 TabHica VI Zastosowany odczynnik kair.bpnylowy 1 r.. - 1-idwmpropyloamiiinopropanoin-2 1-cMoropentanon-3 Cyklookitanon 4nmetylopeintanon-2 FenyLoaceton .¦;¦'--;.•";-¦ Pochodna ... - • • • 2 1Hmetylo-2-V!N^^wup(ropyloamiino/- etylo BM 123y l-etylo-3-chlOTO-$ropylo-BM 123y cyMoolktykHBM 1237 1,3-dwuimeltylobutylo-BM 123y l-metylo^^fenylo^etylo^BM 123y ED5o w mgi/kg wagi ciala 3 0,3 •0,12 - 0,18 0,12 0,18 Wartosc n.mx ¦ 4. 0,9 ¦1,2 • - i*.- . ¦ . ijo ..102557 11 12 Tablica VI cd. 1 ll TrainB^4Hfenyli()ibu'teaa-3^oinH2 lncyfldohelkByiloipffopajnoin-l 6Hmieityaoh€iptetti-6^oai-2 3nmettyiopewtaino(n^2 SnmeftylofoefasaBian-fi 3-eitylopenitain 3^-d(wamlie Oktenan-3 3—mneltyilch-etosaiiioin-fi 3-aJndodyfloacetoai Pentanoei-2 Butanoon2 2^cyklofpeontylo-l-acetoin Aceton Deikamon-3 U(ndekaTKn-3 onaiccftyioaJc^tKytioauiidyina 4-tmetyilO!peirUtein-3KWn2 Metokisyajcetoai CyMoftieJkisyikaceixn p4^p-hyidrO(kByifeinylot/4)ultainoai-2 | Dwium^yitor^klefo-^^ mam 4-imetylOHbeksain)0ffi-2 2,2,44-<^eroimierty4oHcyMi^^ 2,4,4^6jm€ltylocyMo-ipeinltainoffi 2Hcyklop€ 2^yMohe!kisenylo-a/Hcy(kaoih€iksa- inoffi 3^ni^^ed.^pentyilo^cyMo(pe!nrt»notn 2^cykaolleJksylocyiklo-lielklsajnofli 2-etylocyikloheklsanon 3,3Hd^um€ltylofbutialnoin-2 Uend^kanoai-S (^to^i^odorotiopirainoi^ 3,6^diwurmeftylocytolo(heksainoai T-etradcfcamon-2 1 l-meto(tey(bulten-l-on^3 4^ydrokBy^8Hroeltyllo(baitiaino(n-2 Mentajnon-3 Cylfclonoinainon lHmetylodeikalo«n-2 14,34r6jm€tylocyMohie(kBen^3^(ri-6 3Hmetylo-ddkaQon^2 1 lH/3,4^wtfmetotasyffeny(l^ non-2 1^diwuetyloaminobutainon-3 1 2 l-metylo-3-fenyilo-(piropenyilo^2-BM 123y lncyteloihelkisyaoproipylo-BM 123y l,5-drwuimetyiloh€lktsenyilo-4-BM 123y l^^*wumetytoboiityl<-BM 123y l,4-d/wumetyloipenlty(lio-BM 123y l-metyilOn2-ert;yloftultylOHBM 123y ly24^róó(metyiloliepitylOHBM 123y l-etyaolieksyllo-BiM 123y l^^wuirneltyaotpeintyao-BiM lB3y lHm€tylo^2-/pHiindodylo(/€ttyao^B(M ia3y l-metyIoibultyl lnmeitylooaropylo-BM 123y 1 Hn^ylo^Hcylkao(periitenylo-2-€ttyio- BM 1B3y izoprojpylo-BM 123y 1-etyfloofetyao-BM 123y 1-etylooanylo-BM 123y lnmeity11oH2-OH[!toiMilok^^ BM 123Y l,3^dwulmeltyloibutenylo^2-BM 123y lHmcityaoH2Hrneltoikisy-etylo-BM 123y lnmieitylo^^ylkLloihekByloeltylo-BiM 123y lHnMltylo^SHM-liydirolkisyfenyaio^ettylo- BM 123Y 1-i[]MiwumetOikisy(fostfijnyao/-iiQ(etyllO']- -helklsylo-BM 123y l,3Hdlwairietyaoipen!tylOHBIM 1I23y 2^,4,4nozt€dX)meltyaocy!Mapientylo-BM ll23Y 2,444ir6jmetyloicyiklopenlt€aiyto^BM 1I23y 2ncyklopeai/tyl PL PL