NO885594L - Polysakkarider og makromolekylaere konjugater av slike. - Google Patents
Polysakkarider og makromolekylaere konjugater av slike.Info
- Publication number
- NO885594L NO885594L NO88885594A NO885594A NO885594L NO 885594 L NO885594 L NO 885594L NO 88885594 A NO88885594 A NO 88885594A NO 885594 A NO885594 A NO 885594A NO 885594 L NO885594 L NO 885594L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- ribitol
- formula
- integer
- phenylmethyl
- compound
- Prior art date
Links
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 85
- -1 tetanus toxoid Proteins 0.000 claims description 76
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 30
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 28
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N ribitol Chemical group OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 claims description 28
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 27
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 22
- JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N Ribitol Natural products OCC(C)C(O)C(O)CO JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 17
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical group NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 claims description 15
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 claims description 15
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 claims description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 15
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 15
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 12
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 claims description 12
- 229940045808 haemophilus influenzae type b Drugs 0.000 claims description 10
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 8
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 8
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 5
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 claims description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical group ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000004170 methylsulfonyl group Chemical group [H]C([H])([H])S(*)(=O)=O 0.000 claims description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000005147 toluenesulfonyl group Chemical group C=1(C(=CC=CC1)S(=O)(=O)*)C 0.000 claims description 4
- 125000001889 triflyl group Chemical group FC(F)(F)S(*)(=O)=O 0.000 claims description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 3
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 3
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 claims description 2
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 claims description 2
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 2
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 claims description 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims 6
- PZSNLKGFIPUIHX-KUFNSSOESA-N (2R,3R,4R)-1-[(3R,4S,5R)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]pentane-1,2,3,4,5-pentol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C(O)C1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O PZSNLKGFIPUIHX-KUFNSSOESA-N 0.000 claims 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- SAHZYZPQCAOAGE-UHFFFAOYSA-N Cl.NP(O)O Chemical compound Cl.NP(O)O SAHZYZPQCAOAGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 96
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 89
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 62
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 56
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 51
- 239000000047 product Substances 0.000 description 48
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 41
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 36
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 35
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 35
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 32
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 27
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 125000004172 4-methoxyphenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(OC([H])([H])[H])=C([H])C([H])=C1* 0.000 description 21
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 19
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 19
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 19
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 19
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N tert-butyl(dimethyl)silicon Chemical group C[Si](C)C(C)(C)C ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 125000005982 diphenylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 15
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 14
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 14
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 13
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 13
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 12
- FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium fluoride Chemical compound [F-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 11
- 125000005524 levulinyl group Chemical group 0.000 description 11
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 10
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 9
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 9
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 9
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 9
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 9
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- JOOXCMJARBKPKM-UHFFFAOYSA-N 4-oxopentanoic acid Chemical compound CC(=O)CCC(O)=O JOOXCMJARBKPKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 8
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 8
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 8
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 8
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 7
- 150000003536 tetrazoles Chemical class 0.000 description 7
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 6
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 6
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 6
- 150000004252 dithioacetals Chemical group 0.000 description 6
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 6
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- UKWHYYKOEPRTIC-UHFFFAOYSA-N mercury(ii) oxide Chemical compound [Hg]=O UKWHYYKOEPRTIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 6
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 6
- YBRBMKDOPFTVDT-UHFFFAOYSA-N tert-butylamine Chemical compound CC(C)(C)N YBRBMKDOPFTVDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BCNZYOJHNLTNEZ-UHFFFAOYSA-N tert-butyldimethylsilyl chloride Chemical compound CC(C)(C)[Si](C)(C)Cl BCNZYOJHNLTNEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VWCUMTCXBIRRSG-UHFFFAOYSA-N 1-[chloro(diphenyl)methyl]-2-methoxybenzene Chemical compound COC1=CC=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VWCUMTCXBIRRSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N Dimethoxyethane Chemical compound COCCOC XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N benzyl bromide Chemical compound BrCC1=CC=CC=C1 AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 5
- KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N disiloxane Chemical compound [SiH3]O[SiH3] KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 5
- 229910000069 nitrogen hydride Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 5
- DPKBAXPHAYBPRL-UHFFFAOYSA-M tetrabutylazanium;iodide Chemical compound [I-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DPKBAXPHAYBPRL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RBWNDBNSJFCLBZ-UHFFFAOYSA-N 7-methyl-5,6,7,8-tetrahydro-3h-[1]benzothiolo[2,3-d]pyrimidine-4-thione Chemical compound N1=CNC(=S)C2=C1SC1=C2CCC(C)C1 RBWNDBNSJFCLBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019502 Orange oil Nutrition 0.000 description 4
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 4
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 4
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 4
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 4
- 229940040102 levulinic acid Drugs 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000010502 orange oil Substances 0.000 description 4
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 4
- NWVVVBRKAWDGAB-UHFFFAOYSA-N p-methoxyphenol Chemical compound COC1=CC=C(O)C=C1 NWVVVBRKAWDGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 4
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 4
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XWNMPPZQHGDQSN-GWOFURMSSA-N [(2r,3r,4r,5s)-3,4-diacetyloxy-5-chlorooxolan-2-yl]methyl acetate Chemical compound CC(=O)OC[C@H]1O[C@@H](Cl)[C@H](OC(C)=O)[C@@H]1OC(C)=O XWNMPPZQHGDQSN-GWOFURMSSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N allyl bromide Chemical compound BrCC=C BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- 238000009903 catalytic hydrogenation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 3
- 238000005858 glycosidation reaction Methods 0.000 description 3
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 description 3
- 229940101209 mercuric oxide Drugs 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 3
- LYGJENNIWJXYER-UHFFFAOYSA-N nitromethane Chemical compound C[N+]([O-])=O LYGJENNIWJXYER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004533 oil dispersion Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KLRLNIPYRLEQAG-FXQIFTODSA-N (2R,3R,4S)-5-ethyl-3,4,5-trihydroxy-2-sulfanylheptanethial Chemical compound C(C)C([C@H]([C@H]([C@H](C=S)S)O)O)(O)CC KLRLNIPYRLEQAG-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- OBOHMJWDFPBPKD-UHFFFAOYSA-N 1-[chloro(diphenyl)methyl]-4-methoxybenzene Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OBOHMJWDFPBPKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FQQDGGYUKLDMTC-UHFFFAOYSA-N 1-[diazo-(4-nitrophenyl)methyl]-4-nitrobenzene Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1C(=[N+]=[N-])C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 FQQDGGYUKLDMTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVSFQJZRHXAUGT-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropanoyl chloride Chemical compound CC(C)(C)C(Cl)=O JVSFQJZRHXAUGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001731 2-cyanoethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C([H])([H])C#N 0.000 description 2
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZMGYPLQYOPHEL-UHFFFAOYSA-N Boron trifluoride etherate Chemical compound FB(F)F.CCOCC KZMGYPLQYOPHEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 125000000824 D-ribofuranosyl group Chemical group [H]OC([H])([H])[C@@]1([H])OC([H])(*)[C@]([H])(O[H])[C@]1([H])O[H] 0.000 description 2
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 2
- 206010027241 Meningitis haemophilus Diseases 0.000 description 2
- JRNVZBWKYDBUCA-UHFFFAOYSA-N N-chlorosuccinimide Chemical compound ClN1C(=O)CCC1=O JRNVZBWKYDBUCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N Trichloroethylene Chemical compound ClC=C(Cl)Cl XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- XXFXTBNFFMQVKJ-UHFFFAOYSA-N [diphenyl(trityloxy)methyl]benzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)OC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 XXFXTBNFFMQVKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N acetylacetone Chemical compound CC(=O)CC(C)=O YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000538 analytical sample Substances 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 2
- 229910000011 cadmium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- GKDXQAKPHKQZSC-UHFFFAOYSA-L cadmium(2+);carbonate Chemical compound [Cd+2].[O-]C([O-])=O GKDXQAKPHKQZSC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- DDYAZDRFUVZBMM-UHFFFAOYSA-N chloro-[chloro-di(propan-2-yl)silyl]oxy-di(propan-2-yl)silane Chemical compound CC(C)[Si](Cl)(C(C)C)O[Si](Cl)(C(C)C)C(C)C DDYAZDRFUVZBMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N chlorotrimethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)Cl IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 2
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethanethiol Chemical compound CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 208000010523 haemophilus meningitis Diseases 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- 150000002905 orthoesters Chemical class 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- BSCHIACBONPEOB-UHFFFAOYSA-N oxolane;hydrate Chemical compound O.C1CCOC1 BSCHIACBONPEOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 2
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 125000003808 silyl group Chemical group [H][Si]([H])([H])[*] 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 2
- MHYGQXWCZAYSLJ-UHFFFAOYSA-N tert-butyl-chloro-diphenylsilane Chemical compound C=1C=CC=CC=1[Si](Cl)(C(C)(C)C)C1=CC=CC=C1 MHYGQXWCZAYSLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N triphenylmethyl chloride Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(Cl)C1=CC=CC=C1 JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GVNDCFXYBFBYEX-DSPMFFIESA-N (2S,3S,4R)-5-(4-methoxyphenoxy)-2,3,4-tris(phenylmethoxy)pentan-1-ol Chemical compound COC1=CC=C(C=C1)OC[C@H]([C@H]([C@H](CO)OCC1=CC=CC=C1)OCC1=CC=CC=C1)OCC1=CC=CC=C1 GVNDCFXYBFBYEX-DSPMFFIESA-N 0.000 description 1
- CPEUJVWBIKONDY-BKXXXTAHSA-N (2S,3S,4R)-5-[(4-methoxyphenyl)-diphenylmethoxy]-2,3,4-tris(phenylmethoxy)pentan-1-ol Chemical compound COC1=CC=C(C=C1)C(OC[C@H]([C@H]([C@H](CO)OCC1=CC=CC=C1)OCC1=CC=CC=C1)OCC1=CC=CC=C1)(C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1 CPEUJVWBIKONDY-BKXXXTAHSA-N 0.000 description 1
- XPTMFTIQZJYCNX-MPFGFTFXSA-N (2r,3r,4r)-5,5-bis(ethylsulfanyl)-2,3,4-tris(phenylmethoxy)pentan-1-ol Chemical compound O([C@@H](C(SCC)SCC)[C@H](OCC=1C=CC=CC=1)[C@@H](CO)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 XPTMFTIQZJYCNX-MPFGFTFXSA-N 0.000 description 1
- XTTOGKBTINVRCC-DSPMFFIESA-N (2s,3s,4r)-2,3,4,5-tetrakis(phenylmethoxy)pentan-1-ol Chemical compound O([C@@H](CO)[C@H](OCC=1C=CC=CC=1)[C@@H](COCC=1C=CC=CC=1)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 XTTOGKBTINVRCC-DSPMFFIESA-N 0.000 description 1
- PBGRBWYIGUUVHW-NHKHRBQYSA-N (2s,3s,4r)-2,3,4-tris(phenylmethoxy)-5-prop-2-enoxypentan-1-ol Chemical compound O([C@@H](CO)[C@H](OCC=1C=CC=CC=1)[C@@H](COCC=C)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 PBGRBWYIGUUVHW-NHKHRBQYSA-N 0.000 description 1
- ZKHGIPARYPCVPA-SOOFDHNKSA-N (3r,4s,5r)-2-chloro-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@H]1OC(Cl)[C@H](O)[C@@H]1O ZKHGIPARYPCVPA-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- PEEUZZIDVDDXIA-NXCDMZCRSA-N (4S,5R)-4-acetyl-5-[(1R)-1,2-dihydroxy-3-phenylpropyl]-4,5-dihydroxyheptane-2,3,6-trione Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)C([C@H]([C@]([C@](C(=O)C(C)=O)(O)C(C)=O)(O)C(C)=O)O)O PEEUZZIDVDDXIA-NXCDMZCRSA-N 0.000 description 1
- MOHYOXXOKFQHDC-UHFFFAOYSA-N 1-(chloromethyl)-4-methoxybenzene Chemical compound COC1=CC=C(CCl)C=C1 MOHYOXXOKFQHDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XXJGBENTLXFVFI-UHFFFAOYSA-N 1-amino-methylene Chemical compound N[CH2] XXJGBENTLXFVFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFDXQGNDWIPXQL-UHFFFAOYSA-N 1-cyclooctyldiazocane Chemical compound C1CCCCCCC1N1NCCCCCC1 NFDXQGNDWIPXQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VNJOEUSYAMPBAK-UHFFFAOYSA-N 2-methylbenzenesulfonic acid;hydrate Chemical compound O.CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O VNJOEUSYAMPBAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWTBDIBOOIAZEF-UHFFFAOYSA-N 3-[chloro-[di(propan-2-yl)amino]phosphanyl]oxypropanenitrile Chemical compound CC(C)N(C(C)C)P(Cl)OCCC#N QWTBDIBOOIAZEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004217 4-methoxybenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1OC([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 6-(4-aminophenyl)sulfonylpyridin-3-amine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=N1 XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical class N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UFNMLBCQVLFKHZ-UHFFFAOYSA-N C(C)(C)N(P(=O)(Cl)[ClH]CCC#N)C(C)C Chemical compound C(C)(C)N(P(=O)(Cl)[ClH]CCC#N)C(C)C UFNMLBCQVLFKHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DPJKHFICSGCNIR-HRENORGGSA-N CDP-ribitol Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CO)O1 DPJKHFICSGCNIR-HRENORGGSA-N 0.000 description 1
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 description 1
- VJDOAZKNBQCAGE-LMVFSUKVSA-N D-ribitol 5-phosphate Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)COP(O)(O)=O VJDOAZKNBQCAGE-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 150000000845 D-ribose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 208000036626 Mental retardation Diseases 0.000 description 1
- ZSXGLVDWWRXATF-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide dimethyl acetal Chemical compound COC(OC)N(C)C ZSXGLVDWWRXATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013381 Porins Proteins 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N Vinyl ether Chemical compound C=COC=C QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FSUOCTJLUNMOIC-NHKHRBQYSA-N [(2r,3s,4s)-5-hydroxy-2,3,4-tris(phenylmethoxy)pentyl] 2,2-dimethylpropanoate Chemical compound O([C@H](COC(=O)C(C)(C)C)[C@@H](OCC=1C=CC=CC=1)[C@H](CO)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 FSUOCTJLUNMOIC-NHKHRBQYSA-N 0.000 description 1
- YVBSAPDHRXHFHV-QMMMGPOBSA-N [(r)-chloro(methoxy)methyl]benzene Chemical compound CO[C@H](Cl)C1=CC=CC=C1 YVBSAPDHRXHFHV-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GLYOPNLBKCBTMI-UHFFFAOYSA-N [2-chloro-2-(1-chloro-2-phenylethoxy)ethyl]benzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1CC(Cl)OC(Cl)CC1=CC=CC=C1 GLYOPNLBKCBTMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJVHJTQSGGRHGP-UHFFFAOYSA-K [Li].[Al+3].[Cl-].[Cl-].[Cl-] Chemical compound [Li].[Al+3].[Cl-].[Cl-].[Cl-] NJVHJTQSGGRHGP-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N adipic acid dihydrazide Chemical compound NNC(=O)CCCCC(=O)NN IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N benzyl chloroformate Chemical compound ClC(=O)OCC1=CC=CC=C1 HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005574 benzylation reaction Methods 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-TXICZTDVSA-N beta-D-ribose Chemical group OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-TXICZTDVSA-N 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- LADPCMZCENPFGV-UHFFFAOYSA-N chloromethoxymethylbenzene Chemical compound ClCOCC1=CC=CC=C1 LADPCMZCENPFGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KOPOQZFJUQMUML-UHFFFAOYSA-N chlorosilane Chemical compound Cl[SiH3] KOPOQZFJUQMUML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001944 continuous distillation Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000895 deafness Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012973 diazabicyclooctane Substances 0.000 description 1
- FAMRKDQNMBBFBR-BQYQJAHWSA-N diethyl azodicarboxylate Substances CCOC(=O)\N=N\C(=O)OCC FAMRKDQNMBBFBR-BQYQJAHWSA-N 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006266 etherification reaction Methods 0.000 description 1
- FAMRKDQNMBBFBR-UHFFFAOYSA-N ethyl n-ethoxycarbonyliminocarbamate Chemical compound CCOC(=O)N=NC(=O)OCC FAMRKDQNMBBFBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000016354 hearing loss disease Diseases 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002429 hydrazines Chemical class 0.000 description 1
- 208000003906 hydrocephalus Diseases 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 1
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical group 0.000 description 1
- 239000012280 lithium aluminium hydride Substances 0.000 description 1
- LYUARYSAVQUGLK-UHFFFAOYSA-N lithium;triethylborane Chemical compound [Li].CCB(CC)CC LYUARYSAVQUGLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- NGYIMTKLQULBOO-UHFFFAOYSA-L mercury dibromide Chemical compound Br[Hg]Br NGYIMTKLQULBOO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGUOJYYIMVSCNC-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;2-methylpropanoic acid Chemical compound CN(C)C=O.CC(C)C(O)=O RGUOJYYIMVSCNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 150000003014 phosphoric acid esters Chemical class 0.000 description 1
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003017 phosphorus Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 102000007739 porin activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 150000003138 primary alcohols Chemical class 0.000 description 1
- GAPYKZAARZMMGP-UHFFFAOYSA-N pyridin-1-ium;acetate Chemical compound CC(O)=O.C1=CC=NC=C1 GAPYKZAARZMMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 229910052703 rhodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010948 rhodium Substances 0.000 description 1
- MHOVAHRLVXNVSD-UHFFFAOYSA-N rhodium atom Chemical compound [Rh] MHOVAHRLVXNVSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBERHIJABFXGRZ-UHFFFAOYSA-M rhodium;triphenylphosphane;chloride Chemical compound [Cl-].[Rh].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 QBERHIJABFXGRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000008223 ribosides Chemical class 0.000 description 1
- 102220114365 rs141538225 Human genes 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- DUIOPKIIICUYRZ-UHFFFAOYSA-N semicarbazide Chemical class NNC(N)=O DUIOPKIIICUYRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002333 serotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006884 silylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M sodium bisulfate Chemical compound [Na+].OS([O-])(=O)=O WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000342 sodium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- HYHCSLBZRBJJCH-UHFFFAOYSA-M sodium hydrosulfide Chemical compound [Na+].[SH-] HYHCSLBZRBJJCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- FKHIFSZMMVMEQY-UHFFFAOYSA-N talc Chemical compound [Mg+2].[O-][Si]([O-])=O FKHIFSZMMVMEQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003555 thioacetals Chemical class 0.000 description 1
- 125000004055 thiomethyl group Chemical group [H]SC([H])([H])* 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- ILJSQTXMGCGYMG-UHFFFAOYSA-N triacetic acid Chemical compound CC(=O)CC(=O)CC(O)=O ILJSQTXMGCGYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N triethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CC ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Denne oppfinnelse beskriver syntese av oligomere underenheter av det kapsulære poly-(ribosyl-ribitol-fosfat) polysakkarid funnet på Haemophilus influenzae type b bakterie. Denne oppfinnelse beskriver den kovalente binding av disse forbindelser til immunogene proteiner uten nødvendighet for anvendelse av av-standselementer. Videre beskriver oppfinnelsen anvendelsen av disse komplekser som vaksiner for å forhindre Haemophilus bakterieinfeksjoner i pattedyr.
Bakteriell meningitt på grunn av Haemophilus influenzae forblir en av de få alvorlige og livstruende sykdommer i barn-dommen som ennå ikke er blitt bragt under effektiv kontroll. Anvendelse av antibiotika har redusert sykdommens dødelighetsgrad fra mere enn 90% til mellom 5 og 10%. Imidlertid lider 30-50% av de overlevende av permanente neurologiske skader, slik som blindhet, døvhet, mental tilbakeståendhet og hydrocephalus. For øyeblikket er Haemophilus influenzae type b (HI-b) hovedårsaken til endemisk meningitt i USA, som hovedsakelig forekommer blant barn mellom 3 måneder og 4 års alder. [M. Solotorovsky, M. Lynn, CRC Crit. Rev. Microbiol. 6, 1 (1978)].
Organismen, en Gram-negativ coccobacillus, ble først isolert av Pfeiffer fra nasopharynx i personer diagnostisert til å ha influensa under epidemien i 1889-1892.
Pittman [M.J. Exp. Med. 58, 471 (1931); ibid 58, 683 (1933) la merke til at stammer av Haemophilus influenzae fra cerebro-spinalvæske, dyrket på et transparent medium, produserte to typer kolonier beskrevet som glatte (S) og ujevne (R) ved sitt ut-seende. S- og R-stammene hadde forskjellige patogene og antigene egenskaper. For å forklare det postulerte Pittmann tilstedeværelse av en kapsel på S-organismer som forsterket virulensen av disse organismer. Seks antigene typer av kapsler ble så demonstrert og betegnet med bokstavene a-f.
De kapsulære materialer fra typer a, b, c, d og f er blitt identifisert som polysakkarider, hvor alle unntatt type d inneholder fosfor [CF. MacPherson, et al., J. Immunol. 52, 207
(1946)]. Den kapsulære substans fra type b, den vanligst påtrufne type fra haemo<p>hilus meningitis, inneholdt ribose. I 1953 postulerte Zamenhof et al. [J. Biol. Chem. 203, 695 (1953)] at det typespesifikke stoff i HI-b var sammensatt av polyribosefos-fatkjeder med 3:5-fosfatdiesterbindinger mellom ribosedelene. To av disse kjeder var bundet sammen med 1:1-glykosidbindinger. Videre publikasjoner [E. Rosenberg, S. Zamenhof, J. Biol. Chem. 236. 2845 (1961); ibid 237, 1040(1961)] stadfestet den dobbelte riboseenhet som P-D-ribf-3-D-ribf og fremsatte strukturen I.
Basert på senere funn av ribitol som et nedbrytningsprodukt fra HI-b, ble strukturen I fremsatt av Zamenhof et al. mistenke-lig. For å løse denne saken ble det foretatt en undersøkelse på ny av strukturen av Crisel et. al. [J. Biol. Chem. 250, (1975)], som bekreftet tilstedeværelse av ribitol i HI-b, og fant ekvimo-lekylære deler av ribose, ribitol og fosfat. Periodatoksydasjons-studier, papirkromatografering av sure og alkaliske hydrolysater og<13>C NMR spektrale data indikerte at strukturen av HI-b var en polyribofuranosylribitolfosfat (PRP) polymer II.
-3)-Ribf-(l-l)-Ribitol-(5-OP020-
Videre strukturelle studier av Branefors-Helander et.al.
[Acta Chem. Scand. B, 30, 276 (1976)] demonstrerte at ribitoldelen har D-konfigurasjon. Fosfat, bundet til den andre primære posisjon i ribitoldelen, er følgelig bundet til 0-5 i D-ribitol. Dette er i samsvar med den postulerte biosyntetiske vei [J. Baddiley, Acc. Chem. Res. 3, 98 (1979)], hvor ribitolfosfat mest sannsynlig er dannet fra cytidindifosfatribitol, hvor D-ribitol er fosforylert ved 0-5. Basert på disse funn ble en komplett stereokjemisk struktur av HI-b fremsatt som III.
- 3)- 6- D- Ribf- f1- 1)- D- Ribitol-( 5- OP020-
Beskyttelse mot haemophilus-meningitt er forbundet med immunitet hos mennesket. Antistoff-mediat-immunitets rolle ble stadfestet ved passiv beskyttelse av eksperimentelle dyr og vellykket seroterapi i mennesker. Siden de fleste alvorlige sykdommer forårsaket av Haemophilus influenzae er forbundet med type b organismer, var det type-spesifikke kapsulære materialet et logisk valg for anvendelse som et antigen istand til å indusere en beskyttende immunrespons. Et PRP anvendt som vaksine ble fremstilt ved alkoholpresipitering fra vandige ekstrakter fra agar-dyrkede organismer. Dette materialet hadde en molekylvekt på omtrent 200.000 dalton som bestemt ved gelfiltrering. [L. Rodrigues, et. al., J. Immunol. 107, 1071 (1971)]. Immunisering av voksne mennesker med doser av PRP som varierte fra 0,1-50 pg, induserte en økning i titere av anti-PRP-antistoffer [G. Peters, et al., "Haemophilus Influenzae", S.H.W. Sill, D.T. Karzon eds., Vanderbilt University, Press, Nashville, 281 (1972)]. I kontrast til voksne minket titere indusert ved injeksjon av 10 eller 50
jjg PRP i barn etter to måneder. Antistof f respons på PRP ble funnet å være aldersavhengig blant barn.
Selv om PRP er effektiv til å øke antistofftitere i voksne med foruteksisterende antistoffnivåer, er anvendbarheten av PRP som effektiv vaksine avhengig av responsen i sykdomsmottakelige unge barn. Det er nå kjent at barn under to års alder ikke utvikler noen signifikant immunrespons [D.H. Smith, Hosp. Pract. 11, 71 (1976)]. Siden 70% av tilfellene med haemophilus meningitt forekommer i denne aldersgruppe, viser PRP seg ikke å være et effektivt immunogen. Det er blitt funnet at anti-PRP-antistoffer bare kan frembringes i dyr når den innkapslede organisme, heller enn PRP i seg selv, blir injisert. Således kan PRP være et hapten, hvilket krever deltakelse av en bærer.
En alternativ tilnærming mot å lage en mere effektiv vaksine har vært å lage PRP, et svakt immunogen, til et bedre immunogen [P. Anderson, et al., J. Infect. Dis. 152. 634 (1985); D.M. Granoff, K.L. Cates, J. Pediatr., 107, 330 (1985)]. Dette er blitt oppnådd delvis ved å konjugere renset PRP på dens syrehydrolysefragmenter til proteiner, slik som difteritoksoid [L. Gordon, Eur. Pat. Appln #98.581 (1984); J. Eskola, et al., Lancet 1985, I. Nr. 8439, 1184] eller CRM197[P. Anderson, Infect. Immunity 39, 233 (1983); ibid. J. Clin. Invest. 76, 52
(1985); ibid. J. Pediatr., 107. 346 (1985)]. Disse vaksiner har frembragt beskyttende antistoffresponser mot Haemo<p>hilus influenzae i barn så unge som seks måneders alder. Tekniske problemer begrenser anvendelsen av hver av vaksinetypene. Siden naturlig PRP må isoleres fra et patogen, må man se på resultater som reproduserbarhet, variabel potens og spesielt trygghet,
både når det gjelder klinisk anvendelse av PRP såvel som under dens fremstilling.
Hele PRP-molekylet er ikke nødvendig for å frembringe en beskyttende respons. Mindre syrehydrolysefragmenter, når kovalent bundet til immunogene proteiner, er like effektive som det naturlige materialet i dyrestuder [P. Anderson, Infect. Immunity 39, 233 (1983)]. Muligheten eksisterer for at bare noen få PRP oligomere enheter, tilgjengelige gjennom kjemisk syntese, ville være tilstrekkelig. To grupper har publisert sine forsøk på å fremstille det minimale PRP antigen. Garegg et al., har syntetisert 1-O-e-D-ribofuranosyl-D-ribitol [Carbohyd. Res. 58, 219
(1977)] og dens tilsvarende 5-fosfatester [Carbohyd. Res. 86, 293
(1980)]. Den sistnevnte, som inneholder alle de tre strukturelle enheter i monomer PRP var ikke immunologisk aktiv. En fosfodi-esterisoster som inneholder funksjonaliteten for konjugering til en proteinbærer, 4-aminofenyl-P-p-ribofuranosid-3-(D-ribit-5-ylfosfat), er også blitt syntetisert [P.J. Garegg et al., Carbohyd. Res. 150. 285 (1986)].
Mere nylig rapporterte Hoogerhout et al. [Tet. Lett. 28, 1553 (1987)] sin fremstilling av dimere og trimere PRP-derivater (IV, n = 2 eller 3) som inneholdt en N-(3-okso-l-propyl)glycin- amidavstandsgiver for binding av materialene til proteiner. Trimeren er rapportert å være like god som, eller bedre enn, naturlig PRP i å frembringe en immunogenrespons når konjugert til tetanustoksoid. Imidlertid lider den sistnevnte av den ulempe at det er nødvendig å innkorporere en avstandsgiver mellom det syntetiske PRP og bærerproteinet. Enhver antistoffrespons mot avstandsgiveren kan føre til en unødvendig og til og med toksisk immunologisk sidereaksjon.
Store antigener, slik som naturlig PRP i seg selv, krever ikke alltid konjugering til immunogene proteiner, hvilket mindre antigener gjør. En rekke fremgangsmåter er tilgjengelige for å utføre dette. Den mest vanlige fremgangsmåte involverer Schiffs basedannelse mellom et amin og én konjugasjonspartner og et aldehyd (slik som den reduserende ende av et karbohydrat) på den andre, fulgt av reduksjon.
En annen tilnærming [R. Schneerson et al., J. Exp. Med. 152. 361 (1980)] involverer binding av proteinet til én ende av et bifunksjonelt molekyl, slik som adipinsyredihydrazid. Dette utføres med karbodiimid og danner sannsynligvis et diasylert hydrazin med de tilhørende glutamin- eller asparaginkarboksyl-grupper. Dette produkt blir så reagert med et cyanogenbromid-aktivert polysakkarid, hvilket sannsynligvis danner et O-alkyl-4-asylert isosemikarbazid. Det er blitt foreslått at begrepet "monogenerisk avstandsgiver"-konjugat kan anvendes for å beskrive denne type produkt.
En tredje tilnærming [S. Marburg, et al., J. Am. Chem. Soc. 108, 5282 (1986)] , som resulterer i et "bigenerisk avstandsgiver "-produkt, involverer funksjonalisering av hver reaksjons-partner med et bifunksjonelt "avstandsgiver"-molekyl. Hver velges slik at den gjenværende valens kan reagere med valensen i dens motsatte partner for å danne en stabil kovalent binding. Anvendelse av en syntetisk utgave av PRP heller enn renset naturlig PRP i seg selv til fremstilling av proteinkonjugater byr på flere fordeler. Syntetisk materiale kan være spesifikt radioaktivt merket, hvilket forenkler rensing av konjugater såvel som at det muliggjør måling av bindingseffektivitet og karbohydrat-over-protein-forhold. En god syntetisk strategi unngår også de kompliserte multitrinnsprosedyrer involvert i anvendelse av mono-eller bigeneriske avstandsgivere, siden selve avstandsgiveren kan bygges inn i det syntetiske materialet og varieres om nødvendig for maksimal konjugeringseffektivitet. I tillegg, mens naturlig PRP hovedsakelig blir kryssbundet til en proteinbærer ved tilfeldige punkter langs dens hovedkjede, kan syntetisk PRP konjugeres gjennom et enkelt punkt.
Enhver konjugeringsprosedyre som krever anvendelse av en avstandsenhet mellom bærerproteinet og antigenet, fører med seg risikoen for å frembringe en immunrespons i en vert mot avstandsgiveren. Denne mulighet, siden den kan føre til unødvendige immunologiske bivirkninger, argumenterer mot anvendelse av noen slags avstandsgiver i det hele tatt. Derfor ble det følt at en ideell avstandsgiver ville være en som var dannet fra en repre-sentativ del av selve polysakkaridmolekylet.
Sammendrag av oppfinnelsen
Denne oppfinnelse er nye polysakkarider og nye makromolekylære konjugater av polysakkaridene.
Denne oppfinnelse beskriver syntesen av molekyler som
inneholder de gjentatte enheter ribitol-fosfo-ribose som fragmen-ter av Haemophilus influenzae type b kapsulært polysakkarid. Mere spesielt vedrører den syntesen av nye polysakkarider med formel I.
hvor n er et helt tall på fra og med 2 til og med 30, og R er et spacer-fragment definert ved formel II.
hvor m er et helt tall på fra 0 til og med 3, og R' er en funksjonell gruppe slik som CHO, COY, CH2X, CH2NH2, eller CH2SH, hvor Y er en karboksylaktiverende funksjonalitet, slik som halogen, N-hydroksysuccinimid, hydrazin, og lignende, og X er en amino-reaktiv gruppe, slik som halogen, metansulfonyl, trifluormetansulfonyl, toluensulfonyl, og lignende.
Denne oppfinnelse beskriver også fremstilling av makromolekylære konjugater av forbindelsene med formel I, hvor R, n og m er som definert foran og R' er
makromolekyl -S-S-CH2-
makromolekyl -NHCO-
makromolekyl -NHCH2-
makromolekyl -N=CH-
makromolekyl -CONHCH2-
makromolekyl -CH2NHNHCO-
makromolekyl -CH=NNHC0-
makromolekyl -CH2NHNHCO-
hvor makromolekylet er definert som et hvilket som helst av en rekke immunogene bærere, slik som proteiner som tetanus toksin eller toksoid, difteritoksin eller toksoid, KLH, ytre membran porinprotein, og lignende, som er istand til å indusere en T-celleavhengig respons mot det syntetiske polysakkarid.
Oppfinnelsen vedrører videre en fremgangsmåte for å indusere en T-celleavhengig immunrespons mot Haemo<p>hilus influenzae type b ved å vaksinere pattedyr med en effektiv mengde av de ovenfor nevnte makromolekylære konjugater, alene eller i kombinasjoner med andre vaksineforeskrivelser.
Denne oppfinnelse vedrører i tillegg anvendelse av forbindelsene med formel I som diagnostiske reagenser for påvisning av foruteksistens av nøytraliserende antistoffer mot Haemo<p>hilus influenzae i sera fra pattedyr.
Denne oppfinnelse vedrører videre en farmasøytisk sammen-setning som omfatter en effektiv mengde av forbindelsene nevnt ovenfor, i forbindelse med farmasøytisk aktive bærere og adjuvan-ser.
Det er beskrevet at en fastfasesyntese av polysakkaridene ved denne oppfinnelse vil frembringe lagoligomere enheter.
Til slutt vedrører denne oppfinnelse en fremgangsmåte for fremstilling av forbindelser og immunologiske konjugater som nevnt ovenfor.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen
Forbindelsene ved denne oppfinnelse kan fremstilles i henhold til følgende reaksjonsskjema.
I henhold til reaksjonsskjemaet ovenfor kan syntese av en vaksine basert på strukturen av Haemophilus influenzae type b kapsulært polysakkarid beskrives i følgende syv strinn: (1) Konstruksjon av en ribitol med formel II, hvor R<1->gruppen kan fjernes for binding med et aktivert fosfor, mens R<2->gruppene bevares opp til punktet med endelig deblokkering. (2) Binding av ribitolen med formel II med et D-ribosederi-vat, idet spesiell betraktning er gitt for å sikre at bare p-anomeren dannes. (3) Beskyttelse av de tre hydroksylgrupper i riboseenheten, slik at den beskyttende gruppen i 0-3 (r<4>i formel V) kan fjernes i nærvær av alle andre beskyttende grupper. (4) Innføring av en fosfatester mellom 0-1 i én monomer enhet og 0-3' i en annen enhet, og forsikring om at det gjenværende oksygen i fosfatet er beskyttet med funksjonalitet som kan overleve varigheten av syntesen (R<6>i formel VI).
(5) Oligomerisering til strukturen med formel VII.
(6) Innføring av en passende romgivende enhet ved R<4>i formel VII for tilhefting til en immunogen bærer og fjerning av alle beskyttende grupper. (7) Konjugerihg av produktet til en immunogen bærer.
Konstruksjon av ribitolenheten: Aldehydfunksjonen av D-ribose blir først maskert ved dannelse av et dietylditioacetal (formel I, R<1>ogR<2>=H). 5-hydroksylgruppen i I blir selektivt beskyttet ved å anvende slike reagenser som t-butyldifenylsilylklorid, tritylklorid eller deres derivater (formel I, R<2>=H, R<1>==trityl, 4-metoksytrityl, eller t-butyldifenylsilyl) . I praksis viste monometoksytritylgruppen, innført ved å behandle dietyldi-tioribose (formel I,R<1>ogR<2>=H) med monometoksytritylklorid i nærvær av sølvnitrat eller trietylamin i tetrahydrofuran, sterkt foretrukket for oppskaleringer. Videre benzylering ved å anvende natriumhydrid og benzylbromid i dimetylformamid gir den fullt beskyttede D-ribose i formel I (R^monometoksytrityl,R<2>=benzyl).
Når 2, 3 og 4-hydroksygruppene i formel I er blitt beskyttet, kan monometoksytritylgruppen fjernes, om ønsket, ved mild syrehydrolyse og erstattes med beskyttende grupper som i tillegg er anvendbare til konstruksjon av oligomere enheter. Således kan esterifisering av I (R<1>=H, R<2>=benzyl) med trimetylacetylklorid, eterifisering med bis(4-nitrofenyl)diazometan, r-metoksybenzyl-klorid eller allylbromid, eller reaksjon med 4-metoksyfenol under Mitsunobu-betingelser danne forbindelsene tatt opp i tabell I. Betingelser for fjerning av disse beskyttende grupper er også selektivt satt opp.
Hydrolyse av ditioacetalfunksjonen og reduksjon av det resulterende aldehyd i de beskyttede riboser kan oppnås ved å anvende kvikksølv(II)klorid og kadmiumkarbonat i acetonvann ved romtemperatur. De resulterende råaldehyder reduseres ved å anvende natriumcyanoborhydrid i dimetoksyetan eler natriumborhydrid i metanol for å gi forbindelsene med formel II,R<2>=bensyl,R<1>=bensyl, monometoksytrityl, trimetylacetyl, 4-metoksyfenyl, 4,4'-dinitrobenshydryl, 4-metoksybensyl og allyl.
Stereokontrollert glykosidering: Selv om tallrike fremgangsmåter er tilgjengelige for stereospesifikk glykosidering av karbohydrater for å gi ekslusiv P-anomerene, er to slike fremgangsmåter spesielt anvendbare for denne oppfinnelsens formål. Den første involverer omdannelse av ribose til en diacetylorto-ester [formel III, R<3>ogR<4>=acetyl, S. Hanessian, J. Banoub, Carbohydrate Res. 44., C14 (1975)], hydrolyse av acetatene med natriummetoksyd (formel III, R<3>og R<4>=H), fulgt av rebeskyttelse med t-butyldifenylsilylklorid (formel III, R<3>og R<4>=t-butyldi-fenylsilyl). Denne forbindelse, når den reageres med ribitoler med formel II i nærvær av kvikksølvklorid som katalysator, gir forbindelser med formel V (eg. R^monometoksytrityl, R<2>=bensyl,R<3>ogR<4>=t-butyldimetylsilyl, R<5>=acetyl), som byr på den fordel at den gir differensiell beskyttelse på de to sekundære hydroksylgrupper i riboseresten.
En mere foretrukket vei for fremstilling av de monomere P-ribosylribitoler med formel V er å omdanne ribose til p<->metyl-2,3-isopropylidinribose ved å anvende fremgangsmåten til N.J. Leonard og K.L. Carraway, J. Het. Chem. 3., 485 (1966) , omdanne dette intermediat til dets 5-bensylmotpart i nærvær av bensylbromid og base, så danne 5-bensyl-triacetylribose i en totrinns-prosedyre hvor metyl- og bensylidingruppene fjernes under sure betingelser, fulgt av behandling av intermediatet med eddiksyre-anhydrid for å gi en forbindelse med formel IV (R<3>=bensyl, R<4>og R<5>=acetyl, X=0-acetyl). Denne forbindelse, når først behandlet med hydrogenbromid, så N,N-dimetylformamiddimetylacetat, gir forbindelsen med formel III (R<3>=bensyl, R<4>=acetyl). Erstatning av 3-0-acetylgruppen med en allylgruppe (formel III, R<3>=bensyl, R<4>=allyl) gir et nøkkelintermediat for stereospesifikk glykosyle-ring. Dette oppnås ved først å behandle ribosidet med trimetylsilylklorid, fulgt av sølvperklorat i acetonitril. Tilsetning av ribitol med formel II (R<2>=bensyl, R<1>=allyl) danner P-ribosylribi-tol med formel V (R<2>ogR<3>=bensyl,R<1>ogR<4>=allyl, og R<5>=acetyl) i høyt utbytte og god anomerisk renhet. På samme måte kan en overveldende overvekt av en p<->anomer binding dannes ved å anvende en modifisering av den klassiske Koenigs-Knoss glykosiderings-reaksjon. Når forbindelser med formel IV (R<3>,R<4>ogR<5>=acetyl, X=C1 eller Br) reageres med forbindelser med formel II (R<2>=ben-syl, R^bensyl eller trimetylacetyl) i nærvær av sølvperklorat og 4A-molekylære sikter i acetonitril ved 0<*->60'C, blir disakkarider med formel V (R<3>, R<4>og R<5>=acetyl,R<2>=bensyl,R<1>=bensyleller trimetylacetyl) frembragt. Disakkaridene blir viderekarakterisert vedbasehydrolyse, fulgt av hydrogenering for å gi det deprotekterte disakkarid med formel V (R<1>,R<2>,R<3>,R<4>og R<5>=H), som viser fysiske karakteristika samsvarende med det samme disakkarid som isoleres fra nedbrytning av naturlig
PRP.
Ribofuranosebeskyttende gruppemodifisering: For å konst-ruere oligomerer fra disakkarider med formel V, er evnen til selektivt og uavhengig å fjerne beskyttende grupper R<1>ellerR<4>i nærvær av alle andre beskyttende grupper vesentlig. Den direkte tilnærming, hvor reaktiviteten av det primære hydroksyl av ribofuranose med formel V anvendes til å tilføre en beskyttende gruppe R<3>, fulgt av selektiv funksjonalisering av R<4>ellerR<5>i formel V, er ikke så foretrukket som en indirekte tilnærming hvor flere utskiftingen av beskyttende grupper resulterer i dannelse av de ønskede intermediater. Aminolyse av forbindelsen med formel V (R<1>=trimetylacetyl, R<2>=bensyl,R<3>,R<4>ogR<5>=acetyl), fulgt av behandling av intermediatet (R<1>og R<2>som definert,R<3>,R<4>ogR<5>=H) med 1,3-diklor-l,1,3,3-tetraisopropyldisiloksan i pyridin eller dimetylformamid/imidazol gir en forbindelse med formel V (R<1>=trimetylacetyl, R<2>=bensyl, R<3>og R<4>sammen = tetraisopropyl-disiloksan-1,3-diyl, R<5>=H). Selektiv beskyttelse av 2'-hydroksylgruppen kan oppnås ved reaksjon av den foregående forbindelse med f.eks. bensyloksymétylklorid i nærvær av tetra-n-butylammoniumjodid og diisopropyletylamin i tetrahydrofuran i 4-6 dager ved romtemperatur, eller ved reaksjon med t-butyldimetylsilylklorid (R<5>= henholdsvis bensyloksymetyl eller t-butyldimetylsilyl). Fjerning av 3', 5'-disilyleteren fra forbindelsen med formel V (R<1>=trimetylacetyl, R<2>=bensyl, R<3>og R<4>sammen = tetraisopropyl-disiloksan-1,3-diyl, R<5>=bensyloksymetyl) med tetrabutylammoniumfluorid, fulgt av reaksjon med tritylklorid eller "hindred" silylklorid, slik som t-butyldimetylsilylklorid i tetrahydrofuran i nærvær av sølvnitrat og 4-(dimetylamino)pyridin gir en forbindelse med formel V (R<1>=trimetylacetyl, R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldi-metylsilyl, R4=H, og R<5>=bensyloksymetyl), som har riktig oriente-ring av beskyttende grupper for oligomerisering. En videre justering av beskyttende grupper kan oppnås ved å behandle den foregående forbindelse med litiumtrietylboran i tetrahydrofuran for å fjerne trimetylacetylgruppen (R<1>), fulgt av reaksjon med 4-metoksytritylklorid for å gi en forbindelse med formel V (R<1>
= moriometoksytrityl, R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldimetylsilyl,R<4>=HogR<5>=bensyloksymetyl).
Den andre byggestenen for konstruksjon av oligomerer krever at 5-hydroksyfunksjonen i ribitolenheten er ubeskyttet (formel
V, r<!>=H). Et slikt intermediat, fremstilt fra forbindelsen med formel V (R<4>=t-butyldimetylsilyl, og R<5>=bensyloksymetyl) med litiumaluminiumklorid i tetrahydrofuran, resulterer i fjerning av R<1>selektivt. En alternativ metode for fremstilling av denne type intermediat er å reagere forbindelsen med formel V (R<1>=mono-metoksytrityl, R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldimetylsilyl, R<4>=H, og R<5>=bensyloksymetyl) med levulinsyre i nærvær av dicykloheksylkarbodiimid som gir en forbindelse med formel V (R<1>=monometoksytrityl, R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldimetylsilyl, R<4>=levulinyl, ogR<5>=bensyloksymetyl), som ved behandling med fortynnet syre danner en forbindelse uten en beskyttende gruppe ved 0-5 (formel V, R'=H). Ennå en annen fremgangsmåte for selektiv funksjonalisering av 0-5 og 0-3' posisjonene er tilgjengelig når de beskyttende grupper i disse to posisjoner i utgangspunktet er de samme, som f.eks. i forbindelse med formel V (R<2>,R<3>ogR<5>=bensyl,R<1>og R<4>=allyl). Begge allylgrupper fjernes først ved isomerisering av allylbindingen til bindingen i en vinyleter ved å anvende tris(trifenylfosfin)rodium(II)klorid, fulgt av spalting i nærvær av kvikksølvklorid og kvikksølvoksyd for å gi en forbindelse med formel V (R2,R<3>ogR<5>=bensyl,R<1>og R<4>=H). Behandling av den sistnevnte forbindelse med monometoksytritylklorid i pyridin i nærvær av dimetylaminopyridin beskytter selektivt 0-5 hydroksylgruppen (formel V,R1=monometoksytrityl,R<2>,R<3>, R<5>=bensyl, R<4>=H). Videre reaksjon av denne forbindelse med levulinsyre i nærvær av 4-(N,N-dimetylamino)pyridin og dicykloheksylkarbodiimid, fulgt av behandling med trikloreddiksyre gir en forbindelse med en fri hydroksylgruppe ved 0-5 i ribitol (formel V,R<2>,R<3>ogR<5>=bensyl, R<4>=levulinyl, R^-=H) .
Innføring av fosfatfunksjonalitet: Tallrike fremgangsmåter for innføring av fosfatfunksjonalitet mellom karbohydratresterer tilgjengelige, spesielt som anvendt til syntese av DNA- og RNA-fragmenter, så fremgangsmåten presentert i denne søknad bør ikke betraktes som begrensende. I tillegg, selv om den første fosfor-oksygenbindingsdannelse som beskrevet er til 0-3' i riboseenheten, og den andre fosfor-oksygenbindingsdannelse oppnås til 0-5 i ribitol, bør en reversering av denne orden betraktes som innen rekkevidden av denne oppfinnelse.
Således, i henhold til reaksjonsskjemaet, blir en forbindelse med formel V (R-^trimetylacetyl, R<2>=bensyl, R<3>=monometoksy-trityl, R<4>=H, og R<5>=bensyloksymetyl) reagert med diisopropylmetylfosforamidklorid for å gi fosforamiditt med formel V (R<1>=trimetylacetyl, R<2>=bensyl,R<3>=monometoksytrityl,R<4>=diiso-propylmetylfosforamidyl og R<5>=bensyloksymetyl). Syntese av den fullt ut beskyttede dimer oppnås ved å reagere fosforamiditt med alkoholen med formel V (R<1>=H, R<2>=bensyl, R<3>=monometoksytrityl, R<4>=t-butyldimetylsilyl, og R<5>=bensyloksymetyl) i vandig acetonitril i nærvær av tetrazol, fulgt av oksydering av jod, som danner fosfotriesteren med formel VI (R<1>=trimetylacetyl, R<2>=ben-syl, R<3>=monometoksytrityl, R<4>=t-butyldimetylsilyl, R<5>=bensyloksy-metyl, og R<6>=metyl). På samme måte danner reaksjon mellom alkohol med formel V (R^monometoksytrityl, R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldimetyl-silyl,R<4>=H, og R<5>=bensyloksymetyl) og diisopropylmetylfosforamidklorid, fulgt av reaksjon med den primære alkohol av forbindelsen med formel V (R<1>=H, R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldimetylsilyl, R<4>=levulinyl, ogR<5>=bensyloksymetyl) og oksydering av interme-diatfosfittet med jod, dimeren med formel VI (R<1>=monometoksytrityl,R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldimetylsilyl,R<4>=levulinyl,R<5>=besy-loksymetyl og R<6>=metyl). Dannelse av fosfor-oksygenbindinger er ikke begrenset til anvendelse av diisopropylmetylfosforamidklorid som bindingsreagens. F.eks. gir forbindelse med formel V (R^-=monometoksytrityl,R<2>,R<3>og R<5>=bensylog R<4>=H), når den reageres med 2-cyanoetyl-N,N-diisopropylfosforamidisk klorid på samme måte et intermediat anvendbart til oligomerisering (formel V, R<1>=mono-metoksytrityl,R<2>, R<3>ogR<5>=bensyl,R<4>=2-cyanoetyldiisopropylfos-foramidyl). Intermediatet, når det reageres med en forbindelse som inneholder en fri hydroksylgruppe i C-5 i ribitol (formel V, R1==H,R<2>,R<3>ogR<5>=bensyl, R<4>=levulinyl) i acetonitril i nærvær av tetrazol, fulgt av oksydering med jod som beskrevet foran, fører til dannelse av dimeren med formel VI (R^monometoksytrityl,R2,R<3>ogR<5>=bensyl,R<4>=levulinyl, og R<6>=2-cyanoetyl). Monometoksytrityl- og levulinyl-gruppene av dimerene med formel VI kan fjernes uavhengig og selektivt ved å behandle forbindelsene med fortynnet syre eller hydrazin i en blanding av henholdsvis eddiksyre og pyridin. Videre kan de gjenværende beskyttende grupper fjernes som følger: t-butylamin ved forhøyet temperatur fjerner metylgruppen, og ammoniakk fjerner den 2-cyanoetylbeskyt-tende gruppen (R<6>), tetrabutylammoniumfluorid fjerner t-butyl-dimetylsilylgruppene (R<3>) og katalytisk hydrogenering, med f.eks. palladium-on-karbon som katalysator fjerner bensyl- og bensylok-symetylgruppene for å danne den fullt deprotekterte dimer med formel VI (R<1>,R2,R3,R<4>ogR<5>=H,R<6>=mot-ion, dvs. Na<+>).
Oligomerisering av disakkaridenheter: Oligomerisering kan oppnås ved et hvilket som helst antall fremgangsmåter eller kombinasjoner av strategier for å fremstille produkter med formel VII, så lenge som de beskyttende grupper R<1>og R<4>kan fjernes selektivt og uavhengig. Selv om fremstilling av en tetramer er beskrevet nedenfor, kan den samme fremgangsmåte anvendes til syntese av en trimer fra passende manipulasjoner mellom forbindelser med formel V og VI, en heksamer kan fremstilles ved passende modifikasjoner av to tetramerer, tre dimerer, seks monomerer eller hvilke som helst kombinasjoner av disse, en oktomer kan fremstilles ved å kombinere to tetramerer, fire dimerer, åtte monomerer eller hvilke som helst kombinasjoner av disse, osv. Hydrolyse av levulinylgruppen fra forbindelsen med formel VI (R^monometoksytrityl, R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldimetylsilyl, R<4>=levulinyl, R<5>=bensyloksymetylog R<6>=metyl) under betingelsene beskrevet tidligere, og reaksjon med produktet med diisopropylmetylfosforamidklorid danner forbindelsen med formel VI (R<1>=monometoksytrityl,R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldimetylsilyl, R<4>=diisopropylmetylfosforamidyl, R<5>=bensyloksymetyl og R<6>=metyl). Denne forbindelse blir videre reagert med en annen dimer med formel VI (R^-=H, R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldimetylsilyl, R4=levulinyl , R<5>=bensyloksymetyl) i tørr acetonitril i nærvær av tetrazol, fulgt av oksydering med jod, for å gi den fullt beskyttede tetramer med formel VII (R<1>=monometoksytrityl, R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldimetylsilyl, R<4>=levulinyl, R<5>=bensyloksymetyl, R<6>=metylog n=2). Igjen kan R<1>eller R<4>fjernes selektivt og uavhengig fra den sistnevnte forbindelse for tilleggsoligomerisering, eller om ønsket kan alle beskyttende grupper fjernes for å gi en forbindelse med formel VII (R<1>,R<2>,R3,R4 ogR<5>=H,R<6>=motion, dvs. Na<+>, og n=2) ved å anvende betingelsene beskrevet foran for deprotektering av dimeren.
Innføring av avstandsenhet: Ett av de mange adskillende trekk ved denne oppfinnelse er at den ikke bare beskriver fremstilling av oligomere enheter av PRP, men også gir innføring av en avstandsenhet for konjugering til immunogene proteiner. Videre kan avstandsenheten dannes fra strukturen av PRP i seg selv og gir som sådan anledning til å anvende en avstandsgiver som i seg selv ikke overfører noen uønsket immunologisk virkning. Selv om konstruksjonen av et ribitolbasert fragment er beskrevet, er andre avstandsgivere med homologe eller forskjellige struktu-rer betraktet innen rekkevidden av denne oppfinnelse.
For syntese av en slik avstandsgiver blir en suspensjon av D-ribose, bensaldehyd, bensylalkohol og en katalytisk mengde av svovelsyre kraftig rystet for å gi bensyl-2,3-bensylidinribo-furanosid. Denne forbindelse blir reagert med diisopropylmetylfosforamidklorid for å gi bensyl-2,3-bensylidin-5-(diisopropyl-metyl)fosforamidylribofuranose. Avstandsgiveren blir så reagert med forbindelsen med formel VII (R^monometoksytrityl, R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldimetylsilyl,R<4>=H,R<5>=bensyloksymetyl, R<6>=metylog n=2), fulgt av oksidering med jod, for å gi forbindelsen med formel VII (R<1>=monometoksytrityl, R<2>=bensyl, R<3>=t-butyldimetyl-silyl, R<4>=bensyl-2,3-bensylidinribofuranos-5-yl-metoksyfosfonyl, R<5>=bensyloksymetyl, R<6>=metyl og n=2), hvor spaceren er blitt innkorporert i R4 med formel VII og inneholder et maskert aldehyd for konjugering til immunogene proteiner.
Fjerning av beskyttende grupper og konjugering til immunogene bærere: Selv om fjerning av de beskyttende grupper kan gjøres i forskjellig rekkefølge, er det fordelaktig av grunner som gjelder stabilitet og utbytte å holde fast ved følgende sekvens: fjerning av R<6>ved å anvende t-butylamin ved forhøyet temperatur, fjerning av silylgrupper, dvs. R<3>, ved å anvende tetrabutylammoniumfluorid i et løsningsmiddel, slik som tetrahydrofuran, og fjerning av bensyl og benzyloksymetylgrupper ved katalytisk hydrogenering i et løsningsmiddelsystem, slik som metanol-vann. Innføring av det passende fosfat-motion (dvs. R<6>=Na<+>) kan oppnås ved å anvende en ionebytterharpiks. Sekvensen ovenfor danner en forbindelse med formel VII (R<1>,R<2>,R<3>,R<5>=H, R<4>=ribos-5-ylfosfo, R<6>=motion, dvs. Na<+>og n=2), egnet til konjugering til et immunogent protein. Dette utføres på den mest egnete måte med referanse til sistnevnte forbindelse, ved å reagere forbindelsen med et amino-inneholdende immunogent makromolekyl. I dette tilfellet forekommer en reaksjon mellom aldehydet i avstandsgiveren og amingruppen(e) i makromolekylet så det dannes iminer, som kan reduseres til alifatiske aminbin-dinger, om nødvendig, ved tilsetning av et reduserende middel, slik som natriumcyanoborhydrid. Andre fremgangsmåter for konjugering av forbindelsene til immunogene makromolekyler er likeledes betraktet i denne oppfinnelse. Mild oksydering av aldehydet i avstandsgiveren beskrevet ovenfor gir en karboksylsyre, som kan konjugeres til et amin-inneholdende makromolekyl gjennom anvendelse av f.eks. karbodiimider, eller ved først å omdanne karbok-sylgruppen til dens tilsvarende hydroksysuccinimidester. Hydrok-sysuccinimidesteren kan videre omdannes til f.eks. et acylhydra-zin, som kan konjugeres til immunologiske bærere som er blitt modifisert til å inneholde aldehyd eller ketonfunksjonalitet. Hvis det imidlertid innføres en avstandsgivende gruppe (formel VII, R<4>) som inneholder en terminalsulfhydrylfunksjonalitet, kan konjugering til et sulfhydryl-inneholdende immunogent makromolekyl oppnås under oksydative betingelser, eller ved først å derivatisere makromolekylet med en Michael-akseptor, slik som f.eks. en m-maleimidbensoylgruppe. Hvis den avstandsgivende gruppe innføres slik at den inneholder en primær aminogruppe ved sin terminus, kan konjugering utføres ved å aktivere karboksyl-gruppene i den immunologiske bærer mot nukleofil forskyvning.
Eksempel 1
Dietylditio-D-ribose
En blanding av 275 g ribose og 275 ml konsentrert saltsyre ble avkjølt i et isvannbad, og til dette ble det tilsatt 275 ml etantiol. Reaksjonsblandingen ble lagret i kjøleskap over natten, fortynnet med etylacetat og vann og nøytralisert ved forsiktig tilsetning av en vandig natriumkarbonatløsning. Det organiske lag ble vasket med saltvann, tørket og krystallisert, hvorved den ønskete forbindelse krystalliserte, sm.p^Sl-SS^.
Eksempel 2
5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-D-ribosedietylditioacetal
Til en rørt løsning av 238 g ribosedietylditioacetal og 143ml .trietylamin i 2 1 tetrahydrofuran ble det tilsatt 316 g 4-metoksytritylklorid i porsjoner over en periode på omtrent 45 minutter. Etter røring over natten ved romtemperatur ble reaksjonen filtrert for å fjerne presipitert trietylaminhydroklorid og avdampet til 612 g av en oransje olje. Oljen ble gjenoppløst i 1,5 1 eter og vasket med 400 ml hver av 5% natriumbikarbonat, vann og saltvann. Det organiske lag ble tørket og avdampet til 514 g av en oransje olje, som ble anvendt uten videre rensing. For fremstilling av en analytisk prøve ble en porsjon av produktet kromatografert på silisiumdioksydgel, idet man først eluerte med 20% etylacetat i heksan, så 30% etylacetat i heksan, hvilket ga den ønskete forbindelse som en lys, gul olje, [a]D<26>=4" ± 1 (c=l,19, kloroform).
Eksempel 3
5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-0-(fenylmetyl)-D-ribosedietylditioacetal
En 2 66 g porsjon av produktet fra eksempel 2 ble løst i én liter dimetoksyetan og tilsatt dråpevis til 121 g rørt heksan-vasket 60% natriumhydrid suspendert i 500 ml dimetoksyetan. Under tilsetning ble kolben avkjølt i et isvannbad og argon boblet inn i reaksjonen. Etter at alt startmaterialet var blitt tilsatt og hydrogenutvikling hadde opphørt, ble 284 g bensylbromid tilsatt dråpevis over en periode på omtrent 1 time. Etter røring i omtrent 18 timer ved romtemperatur ble restnatriumhydrid nedbrutt ved dråpevis tilsetning av 200 ml etanol. Reaksjonen ble filtrert gjennom en pute av celitt, puten ble vasket grundig med eter og løsningsmidlene ble avdampet. Råproduktet ble løst ill eter og vasket med tre porsjoner vann og én gang med 500 ml saltvann. Det organiske lag ble tørket og avdampet for å gi 397 g råprodukt som en oransje olje som ble anvendt uten videre rensing. For fremstilling av en analytisk prøve ble 5 g av produktet preadsorbert på 8 g silisiumdioksydgel og kromatografert på 350 g silisium dioksydgel, idet man eluerte med 5% etylacetat i heksan. Dette ga en svakt gul olje, [oc]D26=ll° ± 3 (c=0,375, kloroform).
Eksempel 4
2,3,4-Tris-O-(fenylmetyl)-D-ribose-1,1-dietylditioacetal
Til 392 g av råproduktet fra eksempel 3 i 1 1 eter/metanol (1:1) ble det tilsatt 15 g toluensulfonsyremonohydrat, og man lot løsningen stå under røring ved romtemperatur over natten. Natriumbikarbonat (10 g) ble tilsatt i porsjoner til den rørte løsning, presipitatet ble filtrert av, og løsningsmidlene ble avdampet for å gi en oransje olje. Råproduktet ble renset i delmengder på silisiumdioksydgel ved å anvende en gradient av 5-15% etylacetat i heksan for å gi en lys gul olje [a]D<26>=35° ± 1 (c=l,l, kloroform).
Eksempel 5
2,3,4-Tris-O-(fenylmetyl)-5-0-(trimetylacetyl)-D-ribosedietylditioacetal
Til en løsning av 800 mg av produktet fra eksempel 4, 361 mg pyridin og 28 mg 4-dimetylaminopyridin i 8 ml metylenklorid ved 0"C, ble det tilsatt 275 mg trimetylacetylklorid. Den resulterende blanding ble rørt ved 0°C i 30 minutter og ved romtemperatur i 2,5 timer. Vandig 10% natriumbikarbonat ble tilsatt. Blandingen ble konsentrert ved redusert trykk, resten ble fortynnet med metylenklorid og vasket med fortynnet hydrogen-kloridløsning og saltvann. Den organiske fase ble tørket med vannfri natriumsulfat. Etter fjerning av løsningsmiddel under minsket trykk ble resten renset på en kort kolonne av silisiumdioksydgel for å gi den ønskete ester;<1>H NMR (300 MHZ) 1,18 (t, 3H, SCH2CH3), 1,19 (t, 3H, SCH2CH3), 1,25 [s, 9H, C(CH3)3], 2,51-2,69 (m, 4H, SCH2CH3), 3,93 (dd, 1H, C2-H), 4,05 (m, 1H, C4-H), 4,17 (d, 1H, C^-H), 4,19-4,24 (m, 1H, C3-H; 1H, C5-H), 4,46 (dd, 1H, C5-H), 4,63-5,12 (m, 6H, 0CH2Ph), 7,21-7,40 (m, 15H, Ar-H).
Eksempel 6
5-0-bis[(4-nitrofenyl)metyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribosedietylditioacetal
Til en septumforseglet kolbe som inneholdt 65 g av alkoholen fra eksempel 4 og 106 mg bis(4-nitrofenyl)diazometan i 7 ml diklormetan under argon ved -40'C, ble det tilsatt 0,032 ml ferskt destillert borontrifluorideterat dråpevis. Den resulterende røde løsning ble rørt ved -40°C i 18 timer. Vandig natriumbikarbonat ble tilsatt, fulgt av diklormetan. Den organiske fase ble vasket igjen med vandig natriumbikarbonat og vann og tørket over vannfri natriumsulfat. Løsningsmiddelet ble avdampet under vakuum. Flash-kromatografering av resten på silisiumdioksydgel ga det ønskete produkt som en fargeløs olje.<1>H NMR (200 MHz) 1,15 og 1,17 (2 t, 6H, SCH2CH3), 2,63 og 2,65 (2 q, 4H, SCH2CH3), 3,62 (d, 2H, C5-H), 3,96 (dd, 1H, C2-H), 4,15 (m, 2H,<C>3,4"H)'4»21 (d'1H»C1_H) ' 4,54-4,95 (m, 6H, CH2Ph) , 5,87 [s, 1H, CH(PhN02)2],<7,>22-7,40 (m, 19H, Ar-H), 8,07 (m, 4H, C3/f5/-
H på PhN02).
Eksempel 7
5-0-[(4-metoksyfenyl)metyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribosedietylditioacetal
Til en løsning på 350 mg av alkoholen fra eksempel 4 i dimetylformamid ved 0°C ble det tilsatt 31 mg natriumhydrid. Løsningen ble rørt under nitrogen i 30 minutter ved romtemperatur og så avkjølt til 0'C. 4-metoksybensylklorid (156 mg) i 2 ml dimetylformamid ble tilsatt dråpevis. Den resulterende blanding ble tillatt å varmes til romtemperatur og røring ble fortsatt i 4 timer. Iskaldt vann ble forsiktig tilsatt til reaksjonsblandingen, og løsningen ble konsentrert ved redusert trykk. Resten ble fortynnet med vann og ekstrahert med dietyleter. De kombinert ekstrakter ble tørket, avdampet, og resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel for å gi den ønskete forbindelse som en fargeløs olje.<1>H NMR (200 MHz): 1,19 og 1,22 (2t, 6H, SCH2CH3), 2,63 (q, 4H, SCH2CH3), 3,71 (m, 2H, C5-H9, 3,79 (s, 3H, OCH3), 3,98 (dd, 1H, J2,i<=3,>2 Hz, C2-H), 4,11 (m, 4H, C3f4-<H>), 4,24 (d, 1H, Ji,2=3,2 Hz, Cx-H), 4,40 (s, 2H, CH2OPh), 4,57-4,95 (m, 6H, CH2OPh), 6,84 (d, 2H, J=8,2 Hz, C3/,5/-H på PhOCH3), 7,19-7,40 (m, 17H, Ar-H).
Eksempel 8
5-0-[(4-metoksy)fenyl]2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribosedietylditioacetal
Til en løsning av 210 mg av alkoholen fra eksempel 4, 136 mg trifenylfosfin og 149 mg 4-metoksyfenol i 1,5 ml tetrahydrofuran ble det tilsatt 90,4 mg dietylazodikarboksylat i 1 ml tetrahydrofuran, dråpevis. Den resulterende blanding ble tatt under tilbakeløp i 3 timer. Løsningsmiddelet ble avdampet, og resten ble kromatografert for å gi den ønskete tioacetal som en olje. Høy-oppløsningsmassespektrum: (CI, NH3, m/z) for C33H3706(M + H<+>), beregnet 529.2590, funnet 529.2590.
Eksempel 9
2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-5-0-(prop-2-enyl)-D-ribose-1,1-dietylditioacetal
En 2,51 g prøve av natriumhydrid som en 60& oljedispersjon ble tilsatt til en løsning av 22 g av alkoholen fra eksempel 4 og 1,545 g tetra-n-butylammoniumjod i 200 ml tetrahydrofuran. Etter at blandingen var blitt rørt ved romtemperatur i 30 minutter, ble 16 ml allylbromid tilsatt, og røring ble fortsatt i en tilleggstid på 16 timer. Vann ble forsiktig tilsatt, og løsningsmidlene ble avdampet. Den resulterende olje ble løst i eter, og denne ble vasket med saltvann. Eterlaget ble tørket og avdampet for å gi det ønskete råprodukt.
Eksempel 10
5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-0-(fenylmetyl)-D-ribitol
En blanding av 3,112 g av ditioacetalen fra eksempel 3, 2,118 g kvikksølv(II)klorid og 2,112 g gul kvikksølvoksyd i 55 ml 6% vandig aceton ble rørt ved romtemperatur i 2 timer. Heksan ble tilsatt, og blandingen ble filtrert gjennom celitt. Filtratet ble konsentrert og igjen filtrert gjennom celitt. Den organiske fase ble vasket med 5% vandig kaliumjodid og vann. Etter tørking ble løsningsmiddelet avdampet for å gi det rå aldehyd som en olje. Til dette aldehyd i 50 ml metanol ble det tilsatt 4,426 g natriumborhydrid og 232 mg natriummetoksyd. Etter 2 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med kloroform og filtrert gjennom celitt. De kombinerte filtrater ble vasket med vann, tørket og avdampet for å gi råproduktet som ble renset ved flash-kromatografering for å gi den ønskete alkohol [a]<20>D=-18,4° (c=10,9, kloroform).
Eksempel 11
2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-5-0-(trimetylacetyl)-D-ribitol
En blanding av 860 mg av ditioacetalen fra eksempel 5, 956 mg kvikksølv(II)klorid og 608 mg kadmiumkarbonat i 30 ml 5:1
(v/v) aceton-vann ble tatt under tilbakeløp i 2 timer. Løsnings-middelet ble avdampet, resten ble fortynnet med metylenklorid og filtrert gjennom celitt. Det kombinerte filtrat og vaskinger ble vasket med vandig kaliumjodid og saltvann og tørket. Fjerning av løsningsmiddel ved redusert trykk ga det ønskete aldehyd.
Aldehydet (680 mg) ble løst i 50 ml 1,2-dimetoksyetan, og 170 mg natriumcyanoborhydrid ble tilsatt. Den resulterende blanding ble rørt ved romtemperatur i 5-6 timer. Løsningen ble filtrert gjennom celitt og avdampet. Kromatografering av resten på silisiumdioksydgel ga den ønskete alkohol. [a]<26>D= +4,39°
(c=ll,75, kloroform).
Eksempel 12
5-0-[(4-metoksy)fenyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Ditioacetalen fra eksempel 8 hydrolysert og redusert som beskrevet i eksempel 10 ga tittelforbindelsen som en olje. Massespektrum: (CI, NH3, %) 546 (M + NH4+, 100), 529 (M + H+, 62 ,2) .
Eksempel 13
5-0-bis[(4-nitrofenyl)metyl]-2,3, 4-tris-O-fenylmetyl)-D-ribitol
Ditioacetalen fra eksempel 6 ble behandlet ved fremgangsmåten i eksempel 11 for å gi tittelalkoholen som en blek gul olje. Massespektrum: (CI, NH3, %) 679 (M + H+, 12,2), 422 [MH<+>- CH(PhN02)2 , 100].
Eksempel 14
5-Q-[(4-metoksyfenyl)metyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Ditioacetalen fra eksempel 7 ble behandlet ved fremgangsmåten i eksempel 11, hvilket ga tittelforbindelsen som en olje,<1>H NMR (200 MHz), 2,29 (br s, 1H, OH), 3,64-3,73 (br m, 5H, C1,2,5"H)'3«78 (s-3H'0CH3), 3,86 (br q, 1H, C4-H), 3,95 (br q, 1H, C3-H), 4,42 (s, 2H, 0CH2Ph), 4,56 (s, 2H, OCH2Ph), 4,63-4,68 (m, 4H, OCH2Ph), 6,84 (d, 2H, J=8,6 Hz, C3/,5/,-Hpå PhOCH3), 7,20-7,33 (m, 17H, Ar-H).
Eksempel 15
2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-5-0-(prop-2-enyl)-D-ribitol
En løsning av 20 g av råproduktet fra eksempel 9 i 50 ml acetonitril ble tilsatt til en rørt løsning av 11,8 g N-klor-succinimid og 15 g sølvnitrat i 300 ml 70% vandig acetonitril ved -15°C. Etter 10 minutter ble 100 ml mettet ammoniumacetat tilsatt. Løsningen ble filtrert og avdampet for å gi en olje. Denne ble løst i eter, vasket med saltvann, tørket og igjen avdampet. Resten ble løst i 200 ml metanol, og 2,67 g natriumborhydrid ble langsomt tilsatt. Etter 30 minutter ble reaksjonen stanset ved tilsetning av aceton, det ble så arbeidet videre som beskrevet i eksempel 11 for å gi den ønskete forbindelse. Høyresolusjonsmassespektrum (CI, NH3) for C29H3505(M<+><H+>) beregnet: 463.24836; funnet: 463.24845.
Eksempel 16
1,2-0-metoksyetylidin-a-D-ribose
En løsning av 1,54 g av ortoesteren 1,2-0-metoksyetylidin-3,5-di-O-acetyl-cx-D-ribose [fremstilt i henhold til fremgangsmåten beskrevet av S. Hanessian, J. Banoub, Carbohydrate res. 44, C14(1975)] i metanol ble behandlet med 10,6 ml 0.05M natriummetoksyd i metanol ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonen ble nøytralisert, vann ble så tilsatt, og blandingen ble filtrert. Filtratet ble avdampet sammen med bensen tre ganger for å gi en oljeaktig rest, som ble anvendt som sådan uten videre rensing.
Eksempel 17
1,2-0-(metoksyetylidin)-3,5-di-0-[(1,1-dimetyletyl)-dimetylsilyl ] -cx-D-ribose
Silylering av diolen fra eksempel 16 med t-butyldimetylsilylklorid ble gjort ved å anvende fremgangsmåten beskrevet av E.J. Corey, A. Venkateswarlu, J. Am. Chem. Soc. 94. 6190 (1972). Råproduktet ble renset ved kromatografering. Den ønskete forbindelse ble oppnådd som hvite krystaller, sm.p.=37-38<*>C.
Eksempel 18
2'-0-acetyl-3',5'-di-0-[1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-1'-e-D-ribofuranosyl-5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Ortoesteren fra eksempel 17 (481 mg) og 720 mg av ribitolen fra eksempel 10 ble løst i 6 ml nitrometan. Metanol ble fjernet ved kontinuerlig destillering ved kontant volum med kontinuerlig tilsetning av nitrometan i 2 timer. Kvikksølv(II)bromid (56,5 mg) ble tilsatt, og løsningsmiddelet ble destillert av ved konstant volum med kontinuerlig tilsetning av nitrometan i 3 timer. Blandingen ble filtrert og konsentrert, og produktet ble isolert ved kromatografering for å gi det ønskete glykosid som en olje. Massespektrum: (FAB, glyserol, %) 403 [M<+>- 693 (ribitolkjede), 29,7].
Eksempel 19
Metyl-2,3-di-O-(metyletylidin)-5-0-(fenylmetyl)-P-D-ribofuranosid
Til en løsning av 50 g metyl-2,3-di-O-(metyletylidin)-P-D-ribofuranosid [fremstilt i henhold til fremgangsmåten til N.J. Leonard, K.L. Carraway, J. Heterocvclic Chem. 3., 485 (1966)] og tetra-n-butylammoniumjodid i 500 ml tetrahydrofuran ble det tilsatt 10,2 g natriumhydrid som en 60% oljedispersjon. Etter 3 0 minutter ble 22 ml bensylbromid langsomt tilsatt. Etter 18 timer ble 20 g Florisil tilsatt, og tetrahydrofuranet ble inndampet. Resten ble vasket grundig med pentan, og oljen som resulterte fra avdampning av pentanet ble destillert, kp=130-135°C (0,1 mm)
for å gi den ønskete forbindelse som en fargeløs olje.
Eksempel 20
1,2,3-tri-0-acetyl-5-0-(fenylmetyl)-D-ribofuranosid
En løsning av 20 g av produktet fra eksempel 19 i 300 ml 70% eddiksyre ble oppvarmet ved 80°C i 6 timer. Løsningsmidlene ble avdampet for å gi en olje. Denne ble løst i 3 00 ml metylenklorid som inneholdt 44 ml pyridin og 0,830 g 4-(N,N-dimetylamino)pyridin, og 25 ml eddiksyre ble langsomt tilsatt. Etter røring i 30 minutter ble 200 ml mettet vandig natriumbikarbonatløsning tilsatt, fulgt av fast kaliumkarbonat inntil løsningen var basisk. Løsningen ble vasket med IN saltsyre til surhet, tørket og inndampet til en blekgul olje. NMR viste at dette produktet eksisterte i et a over P forhold på 25 over 75.
Eksempel 21
3-0-acetyl-l,2-0-(metoksyetylidin)-5-0-(fenylmetyl)-a-D-ribofuranosid
Tørr hydrogenbromidgass ble boblet inn i en løsning av 13,5 g av produktet fra eksempel 20 i 200 ml metylenklorid ved romtemperatur i 3 minutter. Løsningsmiddelet ble avdampet, og resten ble tatt opp tre ganger i 150 ml toluen, idet man avdampet hver gang. Den resulterende oljen ble løst 200 ml metylenklorid, og 52 ml dimetylformamiddimetylacetal ble tilsatt. Etter røring i 3 timer ble løsningen filtrert gjennom en pute av silisiumdiok sydgel, vasking med etylacetat. Avdampning ga den ønskete forbindelse som en brun olje. Massespektrum (CI, NH3, %): 356
(M + NH4<+>, 36,7); 307 (M<+->MeO, 100).
Eksempel 22
1,2-0-(metoksyetylidin)-5-0-(fenylmetyl)-3-0-(prop-2-enyl)-cx-D-ribofuranosid
Til en løsning av 11 g av produktet fra eksempel 21 i 200 ml metanol ved romtemperatur ble det tilsatt 192 mg natriummetoksyd. Etter 3 timer ble løsningsmiddelet avdampet, resten ble løst i 250 ml bensen, og 2,84 g natriumhydrid ble tilsatt som en 60% oljedispersjon, fulgt av 24 ml allylbromid. Etter 18 timer ble saltvann langsomt tilsatt til blandingen, og denne ble ekstrahert med eter. De kombinerte organiske ekstrakter ble vasket med saltvann, tørket og inndampet. Kromatografering av resten på silisiumdioksydgel ga den ønskete forbindelse som en blekgul olje. Høy-oppløsningsmassespektrum: (CI, NH3) for C18H2506(M<+>H<+>): beregnet 337.16524; funnet 337.16511.
Eksempel 23
2,3,5-tris-O-acetyl-a-D-ribofuranosylbromid og klorid
Vannfri hydrogenbromid ble boblet hurtig gjennom en løsning av tetra-O-acetyl-e-D-ribofuranose i tørr metylenklorid ved romtemperatur i 3 minutter. Løsningen ble etterlatt ved romtemperatur i en tilleggstid på 3 minutter og hurtig avdampet til en sirup. Sirypen ble koavdampet med tørr bensen og metylenklorid tre ganger. Det blekgule sirupbromid i den 3-anomere form eksklusivt, ble anvendt umiddelbart til neste trinn.
Tittelkloridet ble fremstilt på lignende måte, med unntak av at etter metning med hydrogenklorid ble reaksjonsløsningen holdt i kjøleskap over natten.
Eksempel 24
2'-O-acetyl-5'-O-(fenylmetyl)-3'-O-(prop-2-enyl)-1'-p<->
D-ribofuranosyl-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-5-0-(prop-2-enyl)-D-ribitol Fersk destillert trimetylsilylklorid (7,65 ml) ble tilsatt til en løsning av 6,75 g av produktet fra eksempel 22 i tørr metylenklorid. Etter 1 time ble løsningsmiddelet avdampet, den resulterende olje ble løst i 10 ml tørr acetonitril, og denne ble tilsatt til en suspensjon av 4,574 g sølvperklorat og 9 g 4A molekylære sikter i pulverform i 20 ml tørr acetonitril ved -40°C. Etter at reaksjonsløsningen var blitt rørt i 1 time, ble 4,641 g av produktet fra eksempel 15 i 10 ml acetonitril langsomt tilsatt. Etter 4 timer ble reaksjonen filtrert, avdampet, og det ønskete produktet ble renset ved kromatografering på silisiumdioksydgel .
^■H NMR (200 MHz): 2,14 (s, -C0CH3) , 3,56-3,678 (m, 5H) , 3,71-4,21 (m, 10H), 4,50-4,73 (m, 8H, CH2Ph), 5,14-5,33 (m, 5H, -CH=CH2), 5,64-5,94 (m, 2H, -CH=), 7,25-7,38 (m, 20H, -Ph). Eksempel 25 2', 3',5'-tris-O-acetyl-l^-P-D-ribofuranosyl-S-O-(trimetylacetyl) -2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol En blanding av 3,185 g tørr sølvperklorat og 3,7 g 4A molekylære sikter i 35 ml acetonitril ble rørt ved romtemperatur i omtrent 10 minutter, så avkjølt til -4 0'C. En løsning av 4,3 04 g av ribofuranosylkloridet fra eksempel 23 i 25 ml acetonitril ble tilsatt dråpevis. Etter 40 minutter ble en løsning av 3,7 g av ribitolen fra eksempel 11 i 30 ml acetonitril tilsatt dråpevis , og den resulterende gule løsning ble rørt i 2 timer ved -40"C. Natriumbikarbonatpulver (3,0 g) ble tilsatt, og blandingen ble tillatt å varmes opp til romtemperatur. Reaksjonen ble filtrert gjennom celitt, vasket med metylenklorid, og det kombinerte filtratet og vaskinger ble avdampet til en sirup.
Flash-kromatografering av resten ga det ønskete produkt som en olje, [a]<22>D=-12,79° (c 16,5, kloroform).
Eksempel 26
2',3',5'-tris-O-acetyl-1'-e-D-ribofuranosyl-2,3,4,5-tetrakis-0-(fenylmetyl)-D-ribitol
Tittelforbindelsen, fremstilt ved hjelp av fremgangsmåten
i eksempel 25 fra 2,3,5-tris-O-acetyl-P-D-ribofuranosylklorid (eksempel 23) og 2,3,4,5-tetra-0-bensylribitol [fremstilt i henhold til fremgangsmåten til Garegg et al., Acta Chem. Scand. 27, 1595 (1973)] ble isolert som en olje.<1>H NMR (300 MHz) 1,98, 2,06 og 2,09 (3 s, 9H, 3 COCH3), 3,68 (m, 4H), 3,86 (m, 4H), 4,09 (m, 1H), 4,26 (m, 2H), 4,49-4,77 (m, 8H, CH2Ph), 4,94 (s, 1H, C^-H) , 5,27 (d, 1H, C2-H) , 5,32 (t, 1H, C3/-H), 7,30 (m, 20H, Ar-H).
Eksempel 27
3'-O-(prop-2-eny1)-2'.5'-di-O-(fenylmetyl)-1'-O-e-D-ribofuranosyl-5-O-(prop-2-enyl)-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Til en 3 g prøve av produktet fra eksempel 24 løst i 25 ml metanol ble det tilsatt 21 mg natriummetoksyd. Etter 2 timer ble metanolen avdampet, og 0,251 g natriumhydrid som en 60% disper-sjon og 0,72 3 g tetra-n-butylammoniumjodid ble tilsatt til resten løst i 50 ml tetrahydrofuran. Etter 1 time ble 0,64 ml bensylbromid tilsatt, og røring ble fortsatt over natten. Etter en fremgangsmåte som beskrevet i eksempel 9 ble det ønskete produktet isolert. ^-H NMR (200 MHz): 3,54-3,70 (m, 5H) , 3,95-3,98 (m, 10H), 4,28-4,32 (m, 1H, H-4), 4,491-4,68 (m, 10H, CH2Ph), 5,04 (s, 1H, H-l), 5,13-5,31 (m, 4H, =CH2), 5,81-5,97 (m, 2H -CH=), 7 ,24-7,37 (m, 25H, Ph).
Eksempel 28
2',5'-bis-O-(fenylmetyl)-1'-O-P-D-ribofuranosyl-2,3,4-tris-0- (fenylmetyl)-D-ribitol
En løsning av 5,921 g av produktet fra eksempel 27, 0,673
g tris(trifenylfosfin)rodium(I)klorid og 0,244 g
diazabicyklooktan i 75 ml 10% vandig etanol og 25 ml toluen ble tatt under tilbakeløp i 6 timer. Løsningsmidlene ble avdampet og erstattet med 10% vandig aceton, så ble 5,925 g kvikksølv-klorid og 4,727 g kvikksølvoksyd tilsatt. Etter røring ved romtemperatur i 1 time ble løsningen filtrert, og løsningsmidlene ble avdampet for å produsere en olje. Resten ble løst i metylenklorid, vasket med 5% vandig kaliumjodid, saltvann, tørket og igjen avdampet. Silisiumdioksydgelkromatografering ga den ønskete forbindelse som en olje. ^-H NMR (200 MHz): 2,29 (br t, 1H, C-5'0H), 2,60 (d, 1H, C-3-0H, J=8,5Hz), 3,50-4,17 (m, 12H), 4,48-4,69 (m, 10H, CH2Ph), 5,01 (s, 1H, H-l=, 7,28-7,32
(m, 25H, Ph).
Eksempel 29
2',5'-bis-O-(fenylmetyl)-1'-O-P-D-ribofuranosyl-5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Til en løsning av 3,609 g av produktet fra eksempel 28 i 80 ml tørr metylenklorid som inneholdt 1,20 ml pyridin og 0,302
g 4-(N,N-dimetylamido)pyridin ved romtemperatur ble det tilsatt 1,985 g monometoksytritylklorid. Etter 15 timer ble løsningen vasket med mettet vandig natriumbikarbonat og saltvann, tørket, og løsningsmidlene ble avdampet. Kromatografering av resten på silisiumdioksydgel ga det ønskete produkt som et hvitt skum.
1- H NMR (200 MHz): 2,57 (d, 1H, C-3 OH, J=8,7Hz); 3,41-4,10 (m, 12H); 3,75 (s, 3H, OMe), 4,47-4,82 (m, 10H, CH2Ph); 4,98 (s, 1H, H-l), 6,75 (d, 2H, H-3 & H-5 på Ph-OCH3); 7,21-7,493 (m, 37H, Ph) .
Eksempel 30
3</->o-(i,4-dioksopentyl)-2',5'-bis-O-(fenylmetyl)-l'-0-e-D-ribofuranosyl-5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-
0-(fenylmetyl)-D-ribitol
Til en løsning av 535 mg av produktet fra eksempel 29 i 2 5 ml tetrahydrofuran som inneholdt 98 mg 4-(N,N-dimetylaminopyridin) ble det tilsatt 0,08 ml levulinsyre, fulgt av 220 mg dicykloheksylkarbodiimid løst i 2 ml tetrahydrofuran. Etter at løsningen var blitt rørt i 24 timer, ble reaksjonen filtrert, og løsningsmidlene ble avdampet. Kromatografering av resten på silisiumdioksydgel frembragte den ønskete forbindelse som et hvitt skum. ^-H NMR (200 MHz): 2,13 (s, 3H, CH3C0-) , 2,58-2,66 (m, 4H, -COCH2CH2-), 3,47 (m, 2H), 3,48 (d, 2H, H-5', J=4,9Hz), 3,50 (m, 1H), 3,75 (s, 3H, OCH3), 3,87 (m, 4H), 4,07 (dd, 1H, H-2, J1>2=l,8Hz, J2>3=4,9Hz), 4,31 (dd, 1H, H-4, J3)4<=1>0,9Hz, J4>5=5,4Hz), 4,44-4,68 (m, 10H, CH2Ph) , 4,98 (d, 1H, H-l, J=l,9Hz), 5,13 (dd, 1H, H-3, J2>3=5,27Hz, J3f4<=>10,6Hz), 6,74 (d, 2H, m-Ar-H på PhOCH3), 7,20-7,48 (m, 37H, Ph).
Eksempel 31
3'-0-(1,4-dioksopentyl)-2',5'-bis-O-(fenylmetyl)-1'-O-P-D-ribofuranosyl-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
En løsning av 482 mg av produktet fra eksempel 30 i 10 ml3% trikloreddiksyre i metylenklorid ble rørt i 15 minutter ved romtemperatur. Den resulterende oransje løsning ble bråavkjølt med 10% vandig natriumbikarbonat. Blandingen ble fortynnet med metylenklorid, vasket med saltvann, tørket og avdampet. Kromatografering av resten på silisiumdioksydgel ga det ønskete produkt som et hvitt skum. ^-H NMR (200 MHz): 2,14 (s, 3H, CH3CO-) , 2,27 (br t, 1H, -0H), 2,62-2,68 (m, 4H, -CH2CH2CO-), 3,53 (d, 2H, H-5,5', J=5,0Hz), 3,73-4,07 (m, 7H, ribitol), 4,10 (dd, 1H, H-2, J1(2=2,2<Hz,><J>2t3=5,lHz), 4,33 (dd, 1H, H-4, J3>4<=1>0,5Hz, J4>5=5,lHz), 4,44-4,68 (m, 10H, CH2Ph), 5,02 (d, 1H, H-l,J=2,lHz), 5,17 (dd, 1H, H-3, J2f3<=>5,3Hz, J3f4=10,6Hz), 7,27-7,30 (m, 25H, Ph).
Eksempel 32
l'-0-3-D-ribofuranosyl-5-0-(trimetylacetyl)-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
En løsning av 1,27 g av triacetatet fra eksempel 25 i 100 ml ammoniakkmettet metanol ble rørt ved 0' C i 1 dag. Løsnings-middelet ble avdampet, og resten ble fortynnet med etylacetat. Løsningen ble behandlet med ionebytterharpiks og filtrert. Avdampning av løsningsmiddelet og kromatografering på silisiumdioksydgel ga den ønskete triol.<1>H NMR (200 MHz) 1,11 ([s, 9H, C(CH3)3], 3,15 (br s, 3H, 3 OH), 3,56-3,64 (m, 2H), 3,73-4,20 (br m, 9H), 4,33 (br t, 1H), 4,61-4,65 (m, 6H, CH2OPh), 4,85 (s, 1H, C^-H) , 7,24-7,35 (m, 15H, Ar-H) .
Eksempel 33
3' ,5'-0-tetrakis-[(1-metyletyl)disiloksan]-1,3-diyl-l'-0-e-D-ribofuranosyl-5-O-(trimetylacetyl)-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Til en løsning av 2,22 g av triolen fra eksempel 32 i 20 ml tørr pyridin ved 0°C ble det tilsatt 1,21 ml 1,3-diklor-1,1,3,3-tetraisopropyldisiloksan langsomt. Den resulterende blanding ble rørt ved 0"C i 3 timer og så ved romtemperatur i 1 time. Vann ble tilsatt, og løsningen ble konsentrert ved redusert trykk. Metylenklorid ble så tilsatt, og løsningen ble vasket med vann, 5% CuS04og saltvann og tørket med vannfri natriumsulfat. Etter avdampning ble produktet renset ved å anvende silisiumdioksydgelkromatografering for å gi den ønskete alkohol som et krystallinsk faststoff. ^-H NMR (200 MHz): 1,00-1,10 ([m, 21H, CH(CH3)2].<1,>18 [s, 9H, C(CH3)3], 2,97 (d, 1H, OH), 3,61-4,19 (br m, 12H), 4,52-4,75 (m, 6H, CH20Ph), 4,88 (s, 1H, C-L/-H) , 7,30 (m, 15H, Ar-H).
Eksempel 34
3'-5'-O-tetrakis-[(1-metyletyl)disiloksan]-1,3-diyl-2'-0-[(fenylmetoksy)metyl]-l'-0-e-p-ribofuranosyl-5-0-(trimetylacetyl)-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Til en løsning av 1,068 g av alkoholen fra eksempel 33, 1,163 ml diisopropyletylamin og 448 mg tetra-n-butylammoniumjodid i 20 ml tetrahydrofuran under argon ved romtemperatur, ble det tilsatt 0,844 ml bensylklormetyleter, fulgt av 74 mg 4-(N,N-dimetylamino)pyridin. Den resulterende gule suspensjon ble rørt
i 4 dager, så ble 10% vandig natriumbikarbonatløsning tilsatt, og blandingen ble avdampet. Resten ble løst i metylenklorid og vasket med 10% vandig natriumbikarbonatløsning og vann. Etter tørking ble løsningsmiddelet avdampet, og resten ble renset ved kromatografering.
<1>H NMR (200 MHz) 1,02 [br d, 21H, CH(CH3)2], 1,20 [s, 9H, C(CH3)3], 3,66 (m, 1H) , 3,77-3,92 (br m, 4H) , 3,97-4,08 (m, 2H) , 4,11-4,22 (m, 2H), 4,50 (dd, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,52-4,75 (m, 6H, CH20Ph) , 4,83 (s, 1H, C^-H) , 4,34 og 4,44 (2 d, 2H, 0CH20Bn) , 7,23-7,37 (m, 20H, Ar-H).
Eksempel 35
3',5'-O-tetrakis-[(1-metyletyl)disiloksan]-1,3-diyl-2'-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-1'-O-P-D-ribofuranosyl -5-0-(trimetylacetyl)-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol Produktet fra eksempel 3 3 (150 mg) ble behandlet med 60 mg t-butyldimetylsilylklorid og 53 mg imidazol i 3 ml dimetylformamid. Etter 1 time ble reaksjonsblandingen bearbeidet på vanlig måte for å gi den ønskete silyleter.<1>H NMR (300 MHz): 0,05 og 0,07 (2 s, 6H, 2 SiCH3), 0,88 [s, 9H, OC(CH3)3], 3,70 (brd, 2H), 3,83-4,07 (br m, 7H), 4,16 (dd, 1H), 4,40 (dd, 1H), 4,52 (dd, 1H) , 4,59-4,73 (m, 6H, CH2Ph) , 4,77 (s, 1H, C-^-H), 7,28 (m, 15H, Ar-H).
Eksempel 36
2'-0-[(fenylmetoksy)metyl]-1'-0-3-p<->ribofuranosy1-5-0-(trimetylacetyl)-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Til en løsning av 1,18 g av produktet fra eksempel 34 i 20 ml tetrahydrofuran ble det tilsatt 842 mg tetra-n-butylammonium-fluoridtrihydrat. Reaksjonsblandingen ble rørt i 1 time, og vann ble tilsatt. Blandingen ble konsentrert, og resten ble ekstrahert med kloroform. De kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann og tørket med vannfri natriumsulfat. Etter avdampning av løs-ningsmiddelet ga kromatografering av resten den ønskete diol som en olje.<1>H NMR (200 MHz) 1,14 [s, 9H, C(CH3)3], 2,37 (dd, 1H, 5'-0H), 2,60 (d, 1H, 3'-0H), 3,50-4,15 (brm, 11H), 4,36 (m, 1H), 4,41-4,70 (m, 8H, CH20Ph), 4,84 (s, 2H, 0CH20Bn), 4,95 (s, 1H, C^-H) , 7,19-7,34 (m, 20H, Ar-H).
Eksempel 37
5'-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2'-0-[(fenylmetoksy)metyl]-1'-0-3-D-ribofuranosyl-5-p<->
(trimetylacetyl)-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Til en løsning av 765 mg av produktet fra eksempel 36 i 30 ml tetrahydrofuran ble det tilsatt 223 mg sølvnitrat, 399 mg pyridin og 405 mg monometoksytritylklorid suksessivt. Den resulterende blanding ble rørt ved romtemperatur i 4 timer og filtrert gjennom celitt, vasking med metylenklorid. Filtratet ble konsentrert, og 10% natriumbikarbonat ble tilsatt. Dette ble ekstrahert med metylenklorid og tørket. Etter avdampning og rensing ved kromatografering ble det ønskete produktet oppnådd som en olje. Massespektrum: (FAB, DEA, m/e, %) 526 (MH<+>- OR, R=ribitolkjede, 0,5), 631 (526 + DEA, 0,14).
Eksempel 38
3</_>o-[(i,l-dimetyletyl)dimetylsilyl]-5'-O-[(4-metoksyfenyl)-di fenylmetyl]-2'-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl-2,3,4-tris-0-(fenylmetyl)-5-0-(trimetylacetyl)-D-ribitol
Produktet fra eksempel 37 ble reagert med t-butyldimetylsilylklorid som beskrevet i eksempel 35 for å gi den ønskete forbindelse som en olje.<1>H NMR (300 MHz) 0,01 og 0,03 (2 s, 6H, 2 SiCH3), 0,77 [s, 9H, SiC(CH3)3], 1,19 [s, 9H, OC(CH3)3], 3,13 (dd, 1H), 3,32 (dd, 1H), 3,71 (s, 3H, 0CH3), 3,87 (m, 4H), 3,99 (d, 1H, C2-H), 4,03 (m, 1H), 4,18 (m, 2H), 4,29 (dd, 1H, C3/-H), 4,50 (m, 1H), 4,45-4,71 (m, 8H, CH2Ph), 4,84 og 4,89 (2 d, 2H, 0CH20Bn) , 5,11 (s, 1H, C^-H) , 6,77 (d, 2H, C3>5-H på PhOCH3), 7,13-7,50 (br m, 32H, Ar-H).
Eksempel 39
3</_>o-[(i,l-dimetyletyl)dimetylsilyl]-5'-0-[(4-metoksyfenyl)di-fenylmetyl]-2'-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl-2,3,4-tris-p<->(fenylmetyl)-D-ribitol
Til en løsning av produktet fra eksempel 38 (250 mg) i 20 ml tetrahydrofuran ved romtemperatur ble det tilsatt 9,1 mg litiumaluminiumhydrid. Etter 30 minutter ble 10% natriumbikarbo-natløsning tilsatt, og blandingen ble filtrert gjennom celitt. Etter avdampning ble resten kromatografert på silisiumdioksydgel for å gi den ønskete alkohol som en olje.<1>H NMR (300 MHz) -0,03 og -0,16 (2 s, 6H, 2 SiCH3), 0,81 [s, 9H, SiC(CH3)3], 2,25 (t, 1H, OH), 3,13 (dd, 1H), 3,34 (dd, 1H), 3,71 (s, 3H, 0CH3), 3,72 (m, 3H), 3,87 (m, 3H), 4,00 (d, 1H, C2/-H), 4,03 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,31 (dd, 1H, C3-H), 4,42-4,72 (br m, 8H, 0CH2Ph), 4,82 og 4,87 (2 d, 2H, OCH2OBn) , 5,13 (s, 1H, C^-H), 6,97 (d, 2H, C3>5-H på PhOCH3), 7,13-7,50 (m, 32H, Ar-H).
Eksempel 40
5'-o-[ (1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-2'-0-[(fenylmetoksy)metyl]-
P-D-ribofuranosyl-2,3,4-tris-p-(fenylmetyl)-5-0-(trimetylacetyl) -D-ribitol
Blandingen av diolen fra eksempel 36 (9,860 g), 3,646 g sølvnitrat og 1,589 g dimetylaminopyridin i 150 ml tetrahydrofuran ble rørt ved romtemperatur i 10 minutter. Til denne suspensjon ble det tilsatt 3,137 g t-butyldimetylsilylklorid i én porsjon. Den resulterende blanding ble rørt ved romtemperatur i 8 timer, og 10% vandig natriumbikarbonat ble tilsatt. Etter 5 minutter ble blandingen filtrert gjennom celitt og vasket med metylenklorid. Filtratet ble vasket med vann og saltvann og tørket. Fjerning av løsningsmiddelet og flash-kromatografering av resten på silisiumdioksydgel ga den ønskete silyleter som en olje.<I>h NMR (200 MHz) 0,04 og 0,06 (2 s, SiCH3), 0,89 [s, 9H, SiC(CH3)3],1,18 [s, 9H, C(C<H>3)3], 2,60(d, 1H, 3'-0H), 3,69-4,05 (br m, 9H), 4,16 (m, 2H), 4,53 (m, 1H), 4,55-4,75 (m, 8H, CH20Ph) , 4,85 (s, 2H, 0CH20Bh) , 5,03 (s, 1H, C1t- U), 7,31 (m, 20H, Ar-H).
Eksempel 41
5'-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-2'-0-[(fenylmetoksy)metyl]-
e-p-ribofuranosyl-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Til en løsning av 11,7 g av esteren fra eksempel 40 i 60 ml eter under nitrogen ved romtemperatur ble det tilsatt 3 0 ml litiumtrietylborhydrid (1,0 M i tetrahydrofuran) over 5 minutter. Etter røring i 3 timer ble„ reaksjonsblandingen avkjølt til 0°C, og 10% vandig natriumbikarbonatløsning ble forsiktig tilsatt dråpevis. Blandingen ble så filtrert gjennom celitt og avdampet. Resten ble løst i metylenklorid, vasket med vann og saltvann og tørket. Etter fjerning av løsningsmiddelet og kromatografering av resten ble den ønskete diol oppnådd som en sirup.<1>H NMR (200 MHZ) 0,01 og 0,03 (2 s, SiCH3), 0,89 [s, 9H, SiC(CH3)3], 2,23 (t, 1H, 5-OH), 2,55 (d, 1H, 3'-0H), 3,64-4,21 (br m, 12H), 4,50-4,71 (m, 8H, CH2OPh) , 4,85 (s, 2H, OCH2OBn) , 5,01 (s, 1H, (^/-H) , 7,22 (m, 20H, Ar-H).
Eksempel 42
5'-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-2'-O-[(fenylmetoksy)metyl]-
e-p-ribofuranosyl-5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-
0-(fenylmetyl)-D-ribitol
Til en løsning av 6,69 g av diolen fra eksempel 41, 2,06 ml pyridin og 519 mg dimetylaminopyridin i 100 ml metylenklorid under nitrogen ved romtemperatur ble det tilsatt 3,408 g monometoksytritylklorid i 2 porsjoner i løpet av 30 minutter. Den resulterende blanding ble rørt ved romtemperatur i 24 timer, så ble metanol tilsatt, fulgt etter 5 minutter av 10% vandig natriumbikarbonatløsning. Reaksjonsblandingen ble så fortynnet med metylenklorid, og den organiske fase ble vasket med 10% vandig natriumbikarbonat, 5% koppersulfatløsning og saltvann. Løsningen ble tørket, avdampet, og resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel for å gi den ønskete trityleter som et gul olje. ^-H NMR (300 MHz) 0,01 og 0,03 (2 s, 6H, SiCH3) , 0,88 [s, 9H, C(CH3)3], 2,56 (d, 1H, OH), 3,56 (m, 2H), 3,68 (m, 3H), 3,76 (s, 3H, OCH3) , 3,82-3,87 (br i, 5H) , 4,02 (brd, 1H, C2/-H), 4,14 (br q, 1H, C3/-H), 4,44-4,77 (br m, 8H, CH20Ph), 4,82 (s, 2H, OCH2OBn) , 4,99 (s, 1H, C-^-H), 6,74 (d, 2H, m-Ar-H på PhOCH3), 7,09-7,56 (m, 32H, Ar-H).
Eksempel 43
5'-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3'-0-(1,4-dioksopentyl)-2'-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-D-ribitol
Til en septumforseglet kolbe som inneholdt 2,19 g av alkoholen fra eksempel 42, 360 mg levulinsyre og 379 mg dimetylaminopyridin i 25 ml eter under argon ved romtemperatur ble det tilsatt en løsning av 835 mg dicykloheksylkarbodiimid i 20 ml eter. Den resulterende blanding ble rørt ved romtemperatur i 24 timer og så filtrert gjennom celitt. Filtratet ble konsentrert, og resten ble kromatografert for å gi den ønskete ester som en gul sirup. ^-H NMR (300 MHz) 0,00 og 0,02 (2 s, 6H, SiCH3), 0,86 [s, 9H, C(C<H>3)3], 2,15 (s, 3H, CH3COCH2CH2), 2,61 og 2,70 (2 br t, 4H, CH3COCH2CH2), 3,54 (m, 2H), 3,63 (dd, 1H), 3,70 (m, 1H), 3,75 (s, 3H, 0CH3), 3,80-3,96 (br i, 3H), 4,14 (m, 1H, C4/-H), 4,29 (dd, 1H, C2/-H), 4,44-4,72 (m, 8H, CH2OPh), 4,75 (d, 2H, OCH2OBn) , 5,00 (d, 1H, C-^-H) , 5,15 (t, 1H, C3/-H), 6,73 (d, 2H, m-Ar-H på PhOCH3), 7,09-7,45 (m, 32H, Ar-H).
Eksempel 44
5'-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3'-0-(1,4-dioksopentyl)-2'-O-t(fenylmetoksy)metyl]-e-p-ribofuranosyl-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Til en løsning av 2,40 g av trityleteren fra eksempel 43
i 10 ml metylenklorid ved romtemperatur ble det tilsatt 75 ml av en 3% trikloreddiksyre i metylenkloridløsning, dråpevis. Den resulterende røde løsning ble rørt i 15 minutter og behandlet med 10% vandig natriumbikarbonat. Blandingen ble så delt mellom vann og metylenklorid. Den organiske fase ble vasket med saltvann og tørket over vannfri natriumsulfat. Etter fjerning av løsnings-middelet og kromatografering av resten ble den ønskete alkohol oppnådd som en olje. ■'■H NMR (3 00 MHz) 0,03 og 0,05 (2 s, 6H, SiCH3), 0,89 [s, 9H, C(CH3)3],2,17 (s, 3H, CH3COCH2CH2), 2,25 (t, 1H, OH), 2,63 og 2,72 (2 br t, 4H, CH3COCH2CH2), 3,63-3,78 (m, 6H), 3,82 (d d, 1H), 3,89 (t, 1H), 3,95 (d d, 1H), 4,19 (d d, 1H, C4/-H), 4,32 (d d, 1H, C2/-H), 4,52-4,70 (m, 8H, CH20Ph), 4,72 og 4,80 (2 d, 0CH20Bn) , 5,07 (d, 1H, C^-H) , 5,17 (t, 1H, C3-H), 7,33 (m, 20H, Ar-H).
Eksempel 45
3'-0-[[bis(1-metyletyl)amino]-2-cyanoetylfosfino]-2'-5'-bis-0- (fenylmetyl)-1'-O-P-D-ribofuranosyl-5-0-[(4-metoksyfenyl)di-fenylmetyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
En løsning av 440 mg av produktet fra eksempel 29 i 5 ml tetrahydrofuran ble tilsatt til en løsning av 0,19 ml 2-cyano-etyl-N,N-diisopropylklorfosforamiditt og 0,31 ml diisopropyletylamin i 10 ml tetrahydrofuran. Etter at løsningen var blitt rørt ved romtemperatur i 18 timer, ble den heilt i en 50:50-blanding etylacetat og saltvann. Lagene ble separert, det vandige lag ble vasket med tilleggsetylacetat, og de organiske lag ble kombinert. Tørking, avdamping og kromatografering av resten på silisiumdioksydgel produserte den ønskete forbindelse som en fargeløs olje. 1- H NMR (200 MHz; karakteristiske signaler): 1,11 (d, 6H, NC(CH3)2), 1,12 (d, 6H, NC(CH3)2).
Eksempel 4 6
5'-p<->[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3'-p<->[[bis(1-metyletyl)-amino]metoksyfosfino]-2'-0-[(fenylmetoksy)metyl]-3-D-ribofuranosyl-5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-
D-ribitol
Til en septumforseglet kolbe som inneholdt 0,80 g N,N-diisopropylmetylfosfonamidklorid og 1,28 ml diisopropyletylamin i 15 ml tetrahydrofuran under argon ved romtemperatur ble det tilsatt en løsning av 1,90 g av alkoholen fra eksempel 42 i 40 ml tetrahydrofuran. Den resulterende uklare løsning ble rørt ved romtemperatur over natten og så fortynnet med etylacetat. Blandingen ble vasket med 15% vandig bikarbonat og saltvann. Etter tørking ble løsningsmiddelet fjernet ved redusert trykk. Resten ble renset på en kort kolonne av silisiumdioksydgel for
å gi fosforamiditt som en fargeløs sirup<31>P NMR (121,42MHz) 151,70, 152.00.
Eksempel 47
3'-0-[[bis(1-metyletyl)amino]metoksyfosfino] -5'-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2'-0-[(fenylmetoksy)metyl-P-D-ribofuranosyl-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-5-0-(trimetylacetyl)-D-ribitol
En 150 mg porsjon av alkoholen fra eksempel 37 i 0,85 ml tetrahydrofuran ble reagert med 0,07 ml N,N-diisopropylmetylfosforamidklorid som beskrevet i eksempel 46 for å produsere den ønskete forbindelse som en sirup.<31>P NMR (121,42 MHz); 149,98 og 150,37.
Eksempel 48
l-p<->[3-0-[(2-cyanoetoksy)hydroksyfosfinyl]-2,5-bis-0-(fenylmetyl)-P-D-ribofuranosyl]-5-0-[(4-metoksyfenyl)difenyl-metyl ]-2 ,3 ,4-tris-0-(fenylmetyl) -D-ribitol, P -* 5-ester med l-p<->[3-0-(l,4-dioksopentyl)-2,5-bis-0-(fenylmetyl)-P-D-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
En løsning av 237 mg av produktet fra eksempel 31 i 5 ml tørr acetonitril ble tilsatt til en løsning av 378 mg av produktet fra eksempel 45 og 132 mg ferskt sublimert tetrazol i 1 ml acetonitril ved romtemperatur. Etter røring i 24 timer ble løsningen behandlet med 0,1 M jod i 2:1 (v/v) tetrahydrofuran-vann. Løsningsmidlene ble avdampet, og resten ble ekstrahert med metylenklorid. Denne løsning ble vasket med 5% vandig natrium-bisulfitt og saltvann, tørket og konsentrert til den ønskete forbindelse.
Eksempel 49
l-0-[5-p<->[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(hydroksymetoksy-fosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol, P -+ 5-ester med 1-0-[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetyl-silyl ]-3-0-(1,4-dioksopentyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-2,3 ,4-tris-0-(fenylmetyl)-D-ribitol
Til en septumforseglet kolbe som inneholdt 2,15 g av fosforamiditten fra eksempel 46 og 494 g tetrazol under argon ved romtemperatur ble det tilsatt en løsning av 1,19 g av alkoholen fra eksempel 44 i 3 0 ml acetonitril. Den resulterende blanding ble rørt ved romtemperatur i omtrent 24 timer, og så ble 1,6 ml pyridin tilsatt til kolben. Reaksjonsblandingen ble så behandlet med jod i tetrahydrofuran-vann inntil den røde farge vedvarte. Etter 10 minutter ble den røde løsning heilt i kloroform, og denne ble vasket med 5% vandig natriumbisulfidd og saltvann. Den vandige fase ble tilbakeekstrahert med kloroform. Den kombinerte organiske fase ble tørket, og løsningsmiddelet ble fjernet ved redusert trykk. Råproduktet ble renset på silisiumdioksydgel for å gi den ønskete dimer som to diastereomerer.
<31>P NMR (121,4 MHz): 1,849 og 2,108 ppm.
Eksempel 50
l-p<->[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(hydroksymetoksy-fosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol, P -» 5-ester med l-p<->[3-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetyl-silyl]-5-p<->[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2-p<->[(fenylmetoksy)-metyl]-P-D-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-
0-(fenylmetyl)-D-ribitol
En løsning av 93 mg av produktet fra eksempel 39, 125 mg av fosforamiditten fra eksempel 47 og 37 mg tetrazol i 2 ml acetonitril ble reagert og oksydert som beskrevet i eksempel 49 for å gi den ønskete dimer som en olje.<31>P NMR (121,42 MHz): 0,166 og 0,257.
Eksempel 51
l-p-[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(hydroksymetoksy-fosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-2 ,3 ,4-tris-0-(fenylmetyl) -D-ribitol, P -+ 5-ester med 1-0-[5-0-[1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(1,4-dioksopentyl)-2-0- [(fenylmetoksy)metyl]-p-D-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl) -D-ribitol
En 162 mg's del av dimeren fra eksempel 49 ble løst i 4 ml 3% trikloreddiksyre i metylenklorid ved romtemperatur. Løsningen ble rørt i 10 minutter, og reaksjonen ble stanset med 10% vandig natriumbikarbonat. Blandingen ble fortynnet med metylenklorid og så vasket med 10% vandig natriumbikarbonat og vann. Den organiske fase ble tørket, avdampet og kromatografert på silisiumdioksydgel for å gi en ønskete alkohol som en fargeløs olje.<31>P NMR (121,4 MHz): 1,85 og 2,13.
Eksempel 52
1- p-[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-p-(hydroksymetoksy-fosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-p-ribofuranosyl]-5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol, P -» 5-ester med l-p<->[5-p<->[l,1-dimetyletyl)dimetyl-silyl ]-2-0-[(fenoksymetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Dimeren fra eksempel 49 (800 mg) ble løst i 3 ml metylenklorid, og 5 ml 0,5 M hydrazin i eddiksyre-pyridin (1:4 v/v) ble så tilsatt. Den resulterende gule løsning ble rørt ved romtemperatur i 15 minutter, så ble reaksjonen stanset med 0,2 ml acetylaceton. Løsningen ble helt i kloroform og vasket med 10% vandig natriumbikarbonat, vann, 5% koppersulfatløsning og saltvann. Den kombinerte vandige fase ble tilbakeekstrahert med kloroform. Etter tørking ble den organiske fase avdampet og renset ved kromatografering på silisiumdioksydgel for å gi den ønskete alkohol som en gul olje.<31>P NMR (121,4 MHz): 1,85,2,09.
Eksempel 53
l-p<->[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(hydroksymetoksy-fosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-5-p-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol, P -► 5-ester med l-p<->[5-0-[1,1-dimetyletyl)dimetyl-silyl] -3-0-[[bis(1-metyletyl)amino]metoksyfosfino]-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-p<->p<->ribofuranosyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl) -D-ribitol
Forbindelsen ble fremstilt fra alkoholen fra eksempel 52 ved å anvende betingelsene beskrevet detaljert i eksempel 4 6
for å gi en sirup.<31>P NMR (121,42 MHz): 0,013, 0,305, 149,97 og 150,23.
Eksempel 54
l-p<->[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(hydroksymetoksy-fosfinyl)-2-p-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol, P -+ 5-ester med l-p<->[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetyl-silyl ]-3-0-(hydroksymetoksyfosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-
e-p-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol, P -» 5-ester med 1-0-[5-0-[1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(hydroksy-metoksyf osf inyl )-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-2 ,3 ,4-tris-O- (fenylmetyl) -D-ribitol, P -» 5-ester med 1-0-[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(1,4-dioksopentyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl) -D-ribitol
En 95 mg's del av fosforamiditten fra eksempel 53, 65,2 mg av alkoholen fra eksempel 51 og 13,1 mg tetrazol i l ml tetrahydrofuran ble reagert og oksydert som beskrevet i eksempel 49 for å gi den ønskete forbindelse som en blanding av enantiomerer, epimere ved fosfatestrene. Én av enantiomerene ble isolert ved kromatografering på silisiumdioksydgel.<31>P NMR (121,42 MHz): 0,089, 0,334, 0,404.
Eksempel 55
l-p<->[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(hydroksymetoksy-fosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-p<->(fenylmetyl)-D-ribitol, P -► 5-ester med 1-0-(5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-
3-p-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
En del av produktet fra eksempel 51 ble behandlet med hydrazin som beskrevet for fremstillingen av produktet fra eksempel 52 for å gi den ønskete diol som en fargeløs olje.<31>P NMR (121,42 MHz): 0,221 og 0,473.
Eksempel 56
l-p<->[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(dihydroksy-fosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-2 , 3 ,4-tris-p- (fenylmetyl) -D-ribitol, P -» 5-ester med 1-0-[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-
P-D-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol, (1,1-dimetyletyl)ammoniumsalt
En 60 mg's prøve av produktet fra eksempel 55 ble løst i 10 ml t-butylamin, og løsningen ble oppvarmet ved tilbakeløp i
24 timer, t-butylaminet ble fjernet ved å blåse en strøm av nitrogen over reaksjon. Resten ble påført til en kolonne av silisiumdioksydgel, urenheter ble vasket bort, og den ønskete forbindelse ble oppnådd ved å vaske silisiumdioksydgelen grundig med etylacetat og metanol. De kombinerte eluenter ble avdampet for å gi forbindelsen som en olje.<31>P NMR (121,42 MHz): -0,654 ppm.
Eksempel 57
1-0-[3-0-(dihydroksyfosfinyl)-P-D-ribofuranosyl]-D-ribitol,
P -» 5-ester med 1-0-(P-D-ribofuranosyl)-D-ribitol, natriumsalt
Produktet fra eksempel 56 ble løst i 1,1 ml 0,1 M tetra-n-butylammoniumfluorid og rørt i 7 timer ved romtemperatur. Løsningsmiddelet ble avdampet, og resten ble gjenoppløst i vandig metanol. Katalysatoren, 10% palladium-på-karbon, ble tilsatt, og blandingen ble hydrogenert ved 15 psi i 5 timer ved romtemperatur. Reaksjonsløsningen ble filtrert, avdampet, fortynnet med vann og ekstrahert med eter og heksan. Den vandige fase ble rørt med Dowex 50W-X8 (Na<+>form)-ionebytterharpiks, så filtrert gjennom en kolonne fylt med den samme harpiks, eluering med vann. Vannet ble avdampet, og resten ble renset ved kromatografering på silisiumdioksydgel for å gi den ønskete forbindelse.<31>P NMR (121,42 MHz, D20): 1,136 ppm.
Eksempel 58
1'-3-D-ribofuranosyl-l-p-ribitol
Anvendelse av de-proteksjonsprosedyren beskrevet i eksempel 57 på produktet i eksempel 41 ga den ønskete forbindelse. [cx]23D= -35° (c 4,0, H20) , ^-H NMR (300 MHZ , D20) 3,58-3,72 (m, 4H) , 3,74-3,84 (m, 4H), 3,89 (m, 1H), 4,00 (m, 1H, C4/-H), 4,07 (d, 1H, C2/-H), 4,22 (dd, 1H, C3/-H), 4,99 (s, 1H, C^-H);<13>C NMR (75,43 MHZ, D20): 65,10, 65,19, 71,33, 72,95, 73,30, 74,67, 74,89, 77,06, 85,44, 109,59; MS (CI, glyserol, m/e, %) 377 (M+gly+H<+>, 1,1), 285 (M+H<+>, 3,8); HRMS (CI, glyserol, m/z) for C10<H>21<O>9(M+H<+>), beregnet 285.1186, funnet 285.1187.
Eksempel 59
l-p<->[5-0-[(1,l-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(hydroksymetoksy-fosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-5-0-[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-p-(fenylmetyl)-D
ribitol, P -♦ 5-ester med 1-0-[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetyl-silyl ]-3-0-(hydroksymetoksyfosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-
e-D-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-p<->(fenylmetyl)-D-ribitol,
P -+ 5-ester med l-p<->[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(hydroksymetoksyfosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-p-ribofuranosyl-2,3,4-tris-p<->(fenylmetyl)-D-ribitol, P -» 5-ester med l-p<->[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-2-0-[(fenylmetoksy)-metyl]-3-D-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol
Produktet fra eksempel 54 ble behandlet med hydrazin som beskrevet i eksempel 52 for å gi den ønskete forbindelse.
Eksempel 60
Bensyl-2,3-p-bensylidin-P-p-ribofuranosid
En kolbe som inneholdt 1 g ribose, 1,415 g bensaldehyd og 2,884 g bensylalkohol ble kraftig rystet mens 0,2 ml konsentrert svovelsyre ble tilsatt dråpevis. Den resulterende gule løsning ble rørt ved romtemperatur i 18 timer og varmet ved 80"C i 1 time. Den ble fortynnet med eter, og eterfasen ble vasket med 10% natriumbikarbonatløsning, konsentrert natriumhydrogensulfatløs-ning, og så vann. Den organiske fase ble tørket, løsningsmiddelet ble avdampet og resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel for å gi blandingen av endo- og eksoribofuranosider som fargeløse krystaller. Sm.p. 46-50°C.
Eksempel 61
Bensyl-5-0- [[bis(1-metyletyl) amino ] metoksy f osf ino ] -
2,3-0-(fenylmetylidin)-P-D-ribofuranosid
Produktet fra eksempel 60 (800 mg), 1,7 ml diisopropyletylamin og 1,16 ml N,N-diisopropylmetylfosforamidklorid i 6 ml tetrahydrofuran ble reagert og renset som beskrevet i eksempel 46 for å gi den ønskete fosforamiditt som en olje.<31>P NMR (121,42 MHz): 149,32 og 149,44 ppm.
Eksempel 62
1-dioksy-l-[[(fenylmetoksy)karbonyl]amino-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl) -D-ribitol
Til en løsning av aldehyden fra eksempel 10 (før natrium-borhydridreduksjon) i 50 ml absolutt etanol ble det tilsatt 2,159 g natriumacetat og 177 mg natriumcyanoborhydrid. Etter 3 0 minutters røring ved romtemperatur ble etanolen avdampet, og resten ble løst i kloroform. Denne løsning ble vasket med saltvann, tørket og avdampet for å gi det rå intermediatamin. Hele mengden av amin ble løst i 50 ml metylenklorid, og til den rørte løsning ble det tilsatt 1,2 ml trietylamin, fulgt av 0,64 ml bensylkloroformat. Etter 30 minutter ble 3,5 g trikloreddiksyre tilsatt, og røring ble fortsatt i 15 minutter. Den organiske løsning ble vasket med vandig natriumbikarbonat, tørket og avdampet. Kromatografering på silisiumdioksydgel ga den ønskete forbindelse som en olje. MS (CI, NH3) 556 (M<+>+l).
Eksempel 63
l-p<->[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(hydroksymetoksy-fosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl-5-p<->
[(4-metoksyfenyl)difenylmetyl]-2,3,4-tris-p<->(fenylmetyl)-D-ribitol, P - > 5-ester med 1-0-[5-0-[ (1,1-dimetyletyl) dimetyl-silyl ]-3-0-(hydroksymetylfosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol,
P -+ 5-ester med 1-0-[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(hydroksymetoksyfosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-p<->D-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-p<->(fenylmetyl)-D-ribitol, P -» 5-ester med l-p<->[5-0-[(1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl]-3-0-(hydroksymetoksy-fosfinyl)-2-0-[(fenylmetoksy)metyl]-P-D-ribofuranosyl]-2,3,4-tris-O-(fenylmetyl)-D-ribitol, P -» 5-ester med fenylmetyl-
2,3-0-(fenylmetylen)-P-D-ribofuranosid
Produktet fra eksempel 59 ble reagert med fosforamiditten beskrevet i eksempel 61 og oksydert til den ønskete forbindelse som beskrevet i eksempel 49.
Eksempel 64
l-p-[3-0-(dihydroksyfosfinyl)-P-D-ribofuranosyl]-D-ribitol,
P -» 5-ester med 1-0-[3-0-(dihydroksyf osf inyl)-P-D-ribof urano-syl]-D-ribitol, P -♦ 5-ester med 1-0-[ 3-0-hydroksymetoksyfos-f inyl) -P-D-ribofuranosyl]-D-ribitol, P 5-ester med 1-0-[3-0-(hydroksymetoksyfosfinyl)-p<->D-ribofuranosyl]-D-ribitol,
P -+ 5-ester med ribose
Produktet fra eksempel 63 ble fullt deprotektert ved å anvende følgende sekvens: metylgruppen ble fjernet fra fosfat-esteren ved å ta forbindelsen under tilbakeløp i t-butylamin som beskrevet i eksempel 55. De silylbeskyttende grupper ble fjernet ved å anvende tetra-n-butylammoniumfluorid, og bensyl, bensyli- din og monometoksytritylgruppene ble spaltet ved katalytisk hydrogenering i nærvær av 10% palladium-på-trekull som beskrevet i eksempel57. Filtratet fra den sistnevnte prosedyre ble ekstrahert med eter og heksan, og den vandige fase ble rørt med Dowex 50W-XB ionebytterharpiks (Na<+->form). Filtratet ble avdampet for å gi den ønskete forbindelse.
Makromolekylære konjugater av de nye polysakkarider, slik som polysakkarid i eksempel 62, fremstilles ved kovalent å reagere polysakkaridet med makromolekylet.
Claims (11)
1. Forbindelse med formel
hvor n er et helt tall på fra 2-30, og R er et avstandselement definert ved
hvor m er et helt tall på fra 0-30; og R' er CHO, COY, CH2 X, CH2 NH2 eller CH2 SH; Y er halogen, N-hydroksysuccinimid eller hydrazin; og X er halogen, metansulfonyl, trifluormetansulfonyl, eller toluensulfonyl.
2. Forbindelse i henhold til krav 1, karakterisert ved at n er 4,m er 3, og R' er CHO.
3. Forbindelse i henhold til krav 1, karakterisert ved at n er 3, m er 3 og R' er CH2 NH2 .
4. Forbindelse i henhold til krav 1, karakterisert ved at n er 3,m er 3 og R' er CH2 SH.
5. Makromolekylært konjugat med formel:
hvor n er et helt tall på fra 2-30, m er et helt tall 0-3 og R' er:P-S-S-CH2 -
P-NHCO-
P-NHCH2 -
P-N=CH-
P-CONHCH2 -
P-CH2 NHNHCO-
P-CH=NNHC0-
P-CH2 -NHNHCO-
og P er et makromolekyl.
6. Forbindelse i henhold til krav 5, karakterisert ved at makromolekylet er et protein i stand til å indusere en immunrespons.
7. Forbindelse i henhold til krav 6, karakterisert ved at proteinet er tetanustoksin, tetanustoksoid, difteritoksin eller difteritoksoid.
8. Fremgangsmåte for å gi poly(ribosyl-ribitolfosfat) antistof f dannelse og indusere immunisering i varmblodige dyr mot infeksjon forårsaket av den patogene Haemo <p> hilus influenzae type b som omfatter administrering til dyret av en farmasøytisk effektiv mengde av et makromolekylært konjugat av en forbindelse med formel:
hvor n er et helt tall på fra 2-60, m er et helt tall 0-3 og R' er:P-S-S-CH2-
. P-NHCO-
P-NHCH2 -
P-N=CH-
P-CONHCH2 -
P-CH2 NHNHCO-
P-CH=NNHCO-
P-CH2 -NHNHCO-
og P er et makromolekyl.
9. Vaksine mot den patogene Haemophilus influenzae type b som omfatter et makromolekylkonjugat med formel:
hvor n er et helt tall på fra 1- 30, m er et helt tall 0-3 og R' er:P-S-S-CH2 -
P-NHCO-
P-NHCH2 -
P-N=CH-
P-CONHCH2 -
P-CH2 NHNHCO-P-CH=NNHCO-
P-CH2 -NHNHCO-P er et makromolekyl, i en egnet bærer.
10. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse med formel:
hvor n er et helt tall på fra 2-30, og R er et avstandsfragment definert ved
hvor m er et helt tall på fra 0-3; og R' er CHO, COY, CH2 X, CH2 NH2 . eller CH2 SH; Y er halogen, N-hydroksysuccinimid, eller hydrazin; og X er halogen, metansulfonyl, trifluormetansulfonyl, eller toluensulfonyl, som omfatter:
a) oppstilling av en ribitolenhet fra ribose, slik at de beskyttende grupper på de C^ og C5- primære hydroksylgrupper kan fjernes selektivt og uavhengig uten samtidig å fjerne de beskyttende grupper på de sekundære hydroksylgrupper i ribitolen eller noen beskyttende grupper fra riboseenheten;
b) oppstilling av en riboseenhet som inneholder aktive-rende funksjonalitet ved dens anomere karbon og beskyttende funksjonalitet på sine gjenværende hydroksylgrupper, slik at den beskyttende gruppe ved C3 kan fjernes uavhengig av de beskyttende grupper på hydroksylene ved C2 og C5 i riboseenheten eller noen av de beskyttende gruppene i ribitolenheten;
c) reaksjon av en passende beskyttet ribitolenhet med en passende beskyttet og aktivert riboseenhet for å danne en ribosyl-ribitolmonomer bundet gjennom C- ± i ribose og C± i ribitol for å frembringe i det vesentlige P-konfigurasjonen ved forbindelsen mellom de to enheter;
d) fjerning av den beskyttende gruppe ved C3 i den terminale riboseenhet, mens man lar alle de andre beskyttende grupper være intakte;
e) reagering av C3 hydroksylgrupper med et passende fosforamidklorid for å danne et fosforamidittintermediat;
f) selektiv fjerning av den beskyttende gruppe fra den primære hydroksyl i den terminale ribose fra trinn c) og reaksjon mellom denne og fosforamidittintermediatet fra trinn e), fulgt av oksydering til en fosfortriester;
g) gjentakelse av trinn d) til f) inntil det ønskete antall av gjentatte enheter n er blitt oppstilt;
h) gjentakelse av trinn b) og e) for innføring av et fosforamiditt ved C3 i den terminale ribose, så innføring av 56
avstandsdelen R, som inneholder den ønskete funksjonelle gruppe R', gjennom fosforamiditten i C3 i den terminale ribose, fulgt av oksydering til en fosfotriester;
i) fjerning av alle beskyttende grupper og innføring av natrium som mot-ioner i fosfatgruppene.
11. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse med formel:
hvor n er et helt tall på fra 2-30, m er et helt tall 0-3 og R' er:P-S-S-CH2 -
P-NHCO-P-NHCH2 -P-N=CH-P-CONHCH2 -P-CH2 NHNHCO-P-CH=NNHC0-
P-CH2 -NHNHCO-og P er et makromolekyl som omfatter at man reagerer en forbindelse med formel:
hvor n er et helt tall på fra 2-30, og R er et avstandsfragment definert ved
hvor m er et helt tall på fra 0-3; og R' er CHO, COY, CH2 X, CH2 NH2 , eller CH2 SH; Y er halogen, N-hydroksysuccinimid, eller hydrazin; og X er halogen, metansulfonyl, trifluormetansulfonyl, eller toluensulfonyl med et immunogent makromolekyl.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US13466487A | 1987-12-18 | 1987-12-18 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO885594D0 NO885594D0 (no) | 1988-12-16 |
NO885594L true NO885594L (no) | 1989-06-19 |
Family
ID=22464384
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO88885594A NO885594L (no) | 1987-12-18 | 1988-12-16 | Polysakkarider og makromolekylaere konjugater av slike. |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0320942A3 (no) |
JP (1) | JPH01238594A (no) |
KR (1) | KR890009963A (no) |
DK (1) | DK703888A (no) |
FI (1) | FI885813A (no) |
NO (1) | NO885594L (no) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE69130955T2 (de) * | 1990-12-21 | 1999-07-01 | Antex Biolog Inc | Adhesin-oligosaccharid-impfstoffkonjugate für -i(haemophilus influenza) |
US5843463A (en) * | 1990-12-21 | 1998-12-01 | Antexbiologics, Inc. | Adhesin-oligosaccharide conjugate vaccine for Haemophilus influenzae |
DE69126522T2 (de) * | 1991-05-20 | 1997-11-06 | Kao Corp | Neue Phosphobetain und die enthaltende Detergenz und Cosmetica |
GB9202219D0 (en) * | 1992-02-03 | 1992-03-18 | Connaught Lab | A synthetic heamophilus influenzae conjugate vaccine |
DK0647140T3 (da) * | 1992-06-25 | 2008-02-04 | Univ Georgetown | Papillomavirusvacciner |
FR2734484B1 (fr) * | 1995-05-24 | 1997-06-27 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Composition vaccinale liquide et procede de fabrication |
DE19524515A1 (de) * | 1995-07-05 | 1997-01-09 | Deutsches Krebsforsch | Saccharid-Konjugate |
BR9815388A (pt) | 1997-10-03 | 2001-08-21 | Galenica Pharmaceuticals Inc | Polissacarìdeos formadores de iminas, sua preparação e seu uso como adjuvantes e imunoestimulantes |
AU760669B2 (en) | 1998-04-28 | 2003-05-22 | Galenica Pharmaceuticals, Inc. | Polysaccharide-antigen conjugates |
CU22904A1 (es) * | 1999-08-30 | 2004-01-23 | Univ De Ottawa | Oligosacáridos derivados de ribosa- ribitol-fosfato, métodos para prepararlos, inmunógenos que los comprenden y vacunas que comprenden dichos inmunógenos |
SG11201811350QA (en) | 2016-07-28 | 2019-01-30 | Max Planck Gesellschaft | Stable hydrolysis-resistant synthetic polyribosylribitolphosphate derivatives as vaccines against haemophilus influenzae type b |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4573574A (en) * | 1984-06-25 | 1986-03-04 | Connery Colin A | Axial lead component package with wax retaining mechanism |
NZ223009A (en) * | 1986-12-31 | 1990-06-26 | Nl Rivm Of Thoven | Oligosaccharides containing d-ribose d-ribitol and phosphate units mimicing haemophilus influenzae type b antigens |
-
1988
- 1988-12-15 EP EP88121017A patent/EP0320942A3/en not_active Withdrawn
- 1988-12-16 DK DK703888A patent/DK703888A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-12-16 FI FI885813A patent/FI885813A/fi not_active Application Discontinuation
- 1988-12-16 NO NO88885594A patent/NO885594L/no unknown
- 1988-12-16 JP JP63316556A patent/JPH01238594A/ja active Pending
- 1988-12-18 KR KR1019880016906A patent/KR890009963A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI885813A (fi) | 1989-06-19 |
KR890009963A (ko) | 1989-08-05 |
EP0320942A3 (en) | 1989-10-04 |
DK703888A (da) | 1989-06-19 |
DK703888D0 (da) | 1988-12-16 |
NO885594D0 (no) | 1988-12-16 |
FI885813A0 (fi) | 1988-12-16 |
EP0320942A2 (en) | 1989-06-21 |
JPH01238594A (ja) | 1989-09-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2606890C (en) | Immunogens for meningitidis-a vaccines | |
JP7208995B2 (ja) | ヘリコバクタ‐・ピロリリポ多糖の外部コアの八炭糖の調製方法 | |
FI89172B (fi) | Nya oligosackarider och deras anvaendning foer framstaellning av immunogener | |
WO2009035528A2 (en) | Synthetic lipid a derivative | |
KR20160055154A (ko) | 스트렙토코커스 뉴모니에 3형에 대한 무-단백질 및 무-펩티드의 합성 백신 | |
NO885594L (no) | Polysakkarider og makromolekylaere konjugater av slike. | |
US20210309683A1 (en) | Method for Synthesizing O-Antigen Saccharide Chain of Helicobacter pylori serotype O:6 | |
JP2021512069A (ja) | プレシオモナス・シゲロイデスo51血清型o−抗原オリゴ糖の化学合成方法 | |
CA2843908C (en) | Oligosaccharides and oligosaccharide-protein conjugates derived from clostridium difficile polysaccaride ps-i, methods of synthesis and uses thereof, in particular as vaccines anddiagnostic tools | |
CN107709343A (zh) | 针对肺炎链球菌血清型5的疫苗 | |
US20040040554A1 (en) | Sugar chain-containing carbosilane dendrimer compounds, process for producing the same verotoxin neutralizers and antiviral agents | |
Mulard et al. | Synthesis of the methyl glycosides of a di-and two trisaccharide fragments specific for the Shigella flexneri serotype 2a O-antigen | |
US8815239B2 (en) | Glycoconjugates and use thereof as vaccine against Shigella flexneri serotype 3a and X | |
JP6526692B2 (ja) | 髄膜炎菌(Neisseria meningitidis)血清型Xの新規の合成オリゴマー及びその調製方法 | |
US20240024489A1 (en) | Protected disaccharides, their process of preparation and their use in the synthesis of zwitterionic oligosaccharides, and conjugates thereof | |
Morelli et al. | Synthesis of Neisseria meningitidis X capsular polysaccharide fragments. | |
CN106432371A (zh) | β‑1,2‑D‑寡聚甘露糖蛋白缀合物及其制备方法和应用 | |
US10669353B2 (en) | Preparation method of outer core octasaccharide of Helicobacter pylori lipopolysaccharide | |
EP2911698B1 (en) | Glycoconjugates and their use as potential vaccines against infection by shigella flexneri | |
EP2386563A1 (en) | Novel O-acetylated decasaccharides | |
US12018306B2 (en) | Method for chemically synthesizing Helicobacter pylori core lipopolysaccharide oligosaccharide antigen carbohydrate chain | |
US20240068001A1 (en) | Method for Chemically Synthesizing Helicobacter pylori Core Lipopolysaccharide Oligosaccharide Antigen Carbohydrate Chain | |
Keith | Total Synthesis of the Morganella Morganii Zwitterionic Polysaccharide Repeating Unit | |
Chan Chun Kong | Syntheses of oligomers of the capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae type b bacteria | |
Qin | Synthetic studies of the repeating unit of the C-polysaccharide of Streptococcus pneumoniae and studies of alkylation of carbohydrates using dialkylstannylene acetals. |