NO881239L - Analyse for detektering av hepatitt-antigener og aids-antistoffer. - Google Patents
Analyse for detektering av hepatitt-antigener og aids-antistoffer.Info
- Publication number
- NO881239L NO881239L NO881239A NO881239A NO881239L NO 881239 L NO881239 L NO 881239L NO 881239 A NO881239 A NO 881239A NO 881239 A NO881239 A NO 881239A NO 881239 L NO881239 L NO 881239L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- peptides
- analysis system
- hiv
- hbsag
- formula
- Prior art date
Links
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims description 48
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title description 17
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title description 17
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title description 17
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 title description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 133
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 79
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 28
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 15
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 13
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 claims description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 5
- 125000002707 L-tryptophyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(C([C@](N([H])[H])(C(=O)[*])[H])([H])[H])=C([H])N([H])C2=C1[H] 0.000 claims description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 4
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 claims description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 2
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 50
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 34
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 34
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 23
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 17
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 16
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 10
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 5
- -1 carbonium ions Chemical class 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 4
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N (2s)-3-hydroxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 3
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 3
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 3
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N (2s,3s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-Glutamic acid Natural products OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-Tyrosine Natural products OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 125000003338 L-glutaminyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical group C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 230000000652 homosexual effect Effects 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- POECFFCNUXZPJT-UHFFFAOYSA-M sodium;carbonic acid;hydrogen carbonate Chemical compound [Na+].OC(O)=O.OC([O-])=O POECFFCNUXZPJT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N (n-propan-2-yloxycarbonylanilino) acetate Chemical compound CC(C)OC(=O)N(OC(C)=O)C1=CC=CC=C1 ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004217 4-methoxybenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1OC([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011891 EIA kit Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-Lysine Natural products NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 125000002059 L-arginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(=N[H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000001176 L-lysyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003798 L-tyrosyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical group CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710169105 Minor spike protein Proteins 0.000 description 1
- 101710081079 Minor spike protein H Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940047135 glycate Drugs 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 238000012332 laboratory investigation Methods 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical group 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000013077 target material Substances 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en test for samtidig deteksjon av markører for hepatitt B-viruset og det humane immunosviktviruset (HIV) i en kroppsvæske og spesielt i en blodprøve. Oppfinnelsen angår spesielt en test hvor en enkelt blodprøve, i en enkelt test, kan analyseres for tilstedeværelsen av markører for det ene eller det andre viruset.
Det humane immunosviktviruset (HIV) er det etiologiske middel for det ervervede immunosviktsyndromet (AIDS). Dette retroviruset ødelegger valgte klasser av T-lymfocytter og resulterer i progressiv, alvorlig immunsvikt. Populasjoner som representerer høy risiko for AIDS representerer også risiko for hepatitt B (se Rustgi V.K., et al. "Hepatitis B virus Infection in the Acquired Immunodeficiency Syndrome" Annals of Internal Medicine 1984; 101:795-97). Enzym-tilknyttede immunosorberende analyser (ELISA'er) til over-flateantigenet til hepatitt B (HBsAG) og antistoff til HIV benyttes rutinemessig for å overvåke donert blod og blodprodukter for å hindre overføring av disse alvorlige in-feksjonene gjennom blodproduktene (se Saxinger W.C., Gallo R.C., "Applications of the Indirect Enzyme-Linked Immuno-sorbent Assay Microtiter to the Detection and Surveillance of Human T-cell Leukemia-Lymphoma Virus (HTLV)" Laboratory Investigation 1983; 49:371-77 og Wei R., et al., "Solid Phase Enzyme Immunoassay for Hepatitis B Surface Antigen", Clin. Chem. 1977; 23:813-15).
Analysene for antistoff til HIV (samt til en gruppe av nær beslektede retroviruser normalt kjent som Lymphoadenopath Virus, LAV; eller AIDS-relaterte viruser, ARV) har for deteksjon av antistoffene generelt basert seg på bruken av viralproteiner oppnådd fra dyrkede infiserte T-lymfocytter. Viruset oppnådd fra de dyrkede cellene spaltes (f.eks.- med detergent) og et fluid, viralt glysat, oppnås. Dette lysatet, som inneholder en rekke forskjellige fragmenter av viralprotein, blir deretter typisk benyttet som fastfase-komponenten i en immunoanalyse.
De for tiden benyttede kommersielle immunoanalyser er av det konvensjonelle sandwich-ELISA-formatet, hvor fastfase-komponenten, som har det virale lysatet avsatt derpå, bringes i kontakt med blod eller serum som mistenkes for å inneholde HIV-antistoffene. Dersom antistoffene er tilstede vil de binde seg til det virale lysatet og, etter at ubundet materiale er vasket bort, blir de bundne antistoffene deretter brakt i kontakt med enzymmerket anti-human immuno-globulin. De merkede antistoffene vil bindes til hvilke som helst humane antistoffer som er festet til den faste fasen og dermed indikerer tilstedeværelsen av de bundne HIV-mål-antistoffene. Denne type av kommersiell HIV-antistofftest blir for tiden benyttet for å analysere vesentlig alle blodprodukter og har i betydelig grad minsket overføringen av HIV-virus via anvendelse av slike produkter.
Likeledes blir blodprodukter rutinemessig testet for HBsAG ved bruk av ELISA-analyser hvorved monoklonale antistoffer som er spesifikke overfor HBsAG (a-HBsAG) festet til en fast overflate og deretter brakt i kontakt med det fluid som mistenkes for å inneholde målantigenene. Ubundet materiale vaskes bort og tilstedeværelsen av bundet antigen detekteres ved å bringe den faste overflaten i kontakt med en merket cx-HBsAG-reagens. Etter vasking og utvikling vil merkingen indikere tilstedeværelsen av målantigenet.
Mens, som tilfellet er for analysene for detektering av HIV-antistoffer, slike HBsAG-analyser har blitt funnet å være effektive ved analyse av blodprodukter, har nødvendigheten av å foreta to separate tester vært både tidskrevende og uhensiktsmessige. Uansett så antas det at det hittil .ikke er tilgjengelig noen effektiv enkelt test som kan kombinere deteksjonen av HBsAG- og HIV-antistoffer i en enkel analyse. Ifølge foreliggende oppfinnelse er det tilveiebrakt en analyse hvorved tilstedeværelsen av enten HBsAG- eller HIV-antistoffer kan detekteres ved kombinasjon av en mistenkt fluidprøve med en enkelt reagens, Inkubering av denne, vasking, og deretter detektering av målet med en merket reagens.
Foreliggende kombinerte analyse drar fordel av det nylig oppdagede alternativ til viral lysatreagens i analyse av HIV-antistof fer. Disse nye reagensene er beskrevet i US patant-søknad serial nr. 843 437, inngitt 24. mars 1986 av J. Rosen, et al. angående "Synthetic HTLV-III Peptides" og i en "continuation-in-part" av nevnte søknad, US patentsøknad serial nr. 025 108 inngitt 20. mars 1987. Som beskrevet i disse patentsøknadene kan en rekke peptider hvert tatt alene eller tatt i kombinasjon, benyttes i en ELISA-analyse for å erstatte det uønskede virallysatet som nå er i kommersiell bruk. Det angis i disse søknadene at benyttelsen av de kjemiske syntetiserte peptidene istedenfor virallysatet er fordelaktig ved at lysatet er produsert fra levende virus-infiserte celler og således representerer fremstillingen og bruken av slike, fare for at overlevende levende virus skal infisere alle som kommer i kontakt dermed. Videre, siden virallysatet er et naturprodukt er det variabelt og disse variasjonene kan reslutere i uforutsigbare analyser fremstilt dermed. Slik variasjon eksisterer ikke i tilfellet for kjemisk syntetiserte peptider. Sluttelig angis det at bruken av virallysat i ELISA-analyser resulterte i et vesentlig antall falske positive resultater, mens bruken av de syntetiske peptidene derimot praktisk talt har eliminert disse.
Det har nå blitt oppdaget at ytterligere en annen stor fordel oppstår ved bruken av slike syntetiske peptider. Spesielt har det blitt oppdaget at slike peptider kan benyttes i kombinasjon med de HBsAG-detekterende reagenser I en enkelt ELISA-analyse for samtidig å detektere både HBsAG og HIV-antistof fet .
Spesielt tilveiebringes en analyse for detektering ora enten HBsAG eller HIV-antistoffet er tilstede i et mistenkt fluid som omfatter en første reagens. Den første reagensen innbefatter: (a) en fast overflate hvortil det er bundet et peptid som har et epitop som er i stand til å bindes til en paratop av et HIV-antlstoff, og (b) en fast overflate hvortil det er bundet et antistoff som er spesifikt for HBsAG. Analysen innbefatter videre en annen reagens som innbefatter: (c) et merket peptid som har en epitop som er i stand til å bindes til en paratop av et HIV-antistof f, og (d) merket antistoff spesifikt for HBsAG.
Ved bruk kan det mistenkte fluid bringes i kontakt med den første reagensen i en tilstrekkelig tid til å tillate at en Immunologisk reaksjon kan foregå. Deretter kan det ubundne materialet vaskes fra de faste overflatene og deretter kan den faste overflaten bringes i kontakt med den andre reagensen. Etter vasking vil tilstedeværelsen eller fraværet av merket annen reagens på den faste overflaten indikere tilstedeværelsen eller fraværet av målmaterialet (HBsAG eller HIV-antistoff) i det mistenkte fluidet.
I en foretrukket utførelse velges peptidet som et eller flere av peptidene beskrevet i de ovennevnte patentsøknader til Rosen, et al. I en utvalgt utførelse velges peptidene som en blanding av to peptider betegnet og beskrevet heri som E32 og E34.
I en foretrukket utførelse av foreliggende oppfinnelse er de faste overflatene til både (a) og (b) nevnte ovenfor, simpelthen den samme overflaten til en brønn i en mikrotiterplate.
Oppfinnelsen omfatter festing av peptider som er spesifikke for HIV-antistoff, og antistoffer som er spesifikke. ovenfor HBsAG, til faste overflater som en første reagens.
De valgte peptidene er kjemisk syntetiserte oligopeptider som har aminosyrerest-sekvenser i de kritiske regionene til kappeglykoprotein GP 41 i HIV. Sekvensene og syntesene er godt beskrevet i de ovennevnte patentsøknader til Rosen et al. Spesielt kan egnede peptider velges fra gruppen som har de følgende aminosyrerestsekvensene:
Strukturen til de angjeldende peptider er gitt i de konvensjonelle enkeltbokstav-kodene for aminosyrer. For hensikts-messighetens skyld skal det nevnes at enkelbokstav-kodene for aminosyrene som inneholdes i de angjeldende peptider er: I = L-isoleucin; W = L-tryptofan; G = glysin; C = L-cystein; S = L-serin; K = L-lysin; L = L-leucin; T = L-treonin; A = L-alanin; V = L-valin; P = L-prolin; D = L-aspartinsyre; N = L-asparagin; E = L-glutaminsyre; R = L-arginin; Y = L-tyrosin; Q = L-glutamin; F = L-fenylalanin; M = L-metionin.
Som beskrevet i de ovennevnte søknader blir gjenkjennelsen av antistoffer til HIV betydelig forbedret dersom de ovennenvte peptider anvendes i kombinasjon, i overensstemmelse med en spesifikk seleksjonsforeskrivelse. Spesielt blir forbedret gjenkjennelse oppnådd ved valg eller seleksjon av to eller flere av de ovenfor beskrevne peptider hvor et første av nevnte peptider inneholder gp 41-proteinsekvensen:
Dette første peptidet inneholder fortrinnsvis idet minste disse syv aminosyrerestene og enda mer foretrukket minst en tolv-aminosyrerestsekvens fra gp 41-proteinet og inkludert sekvensen med formel (I).
Kombinasjonen av peptider bør også innbefatte minst et annet peptid hvor nevnte peptid innbefatter idet minste aminosyre-restsekvensen
Hvor X er valgt fra gruppen bestående av I, L, M eller F. Det skal påpekes at X tilsvarer 602-stillingen i pg 41-proteinet og når X er I, så tilsvarer formel (XVI)-sekvensen 599 til 603-stillingen i gp 41-proteinet. På den annen side antas det at basert på et studium av sekvenssammenligningen av HIV-isolater i den kritiske regionen i gp 41- proteinet, så er erstatning av I i denne posisjon, 602, med L, M eller F antigenetisk ekvivalent. Dette andre peptidet bør i tillegg til å inkludere sekvensen med (XVI), også innbefatte et totale på minst femten aminosyrerester i en sekvens som finnes i gp 41-proteinet. Med andre ord omfatter det andre peptidet sekvensen
hvor X er valgt fra gruppen bestående av~ I, L, M eller F;
hvor Z er valgt fra amlnosyrerestsekvensen i HTLV-III virus gp 41 proteinet umiddelbart tilstøtende aminosiden i L-leucinresten i 599-stillingen i gp 41 proteinet;
hvor Z' er valgt fra amlnosyrerestsekvensen i HTLV-III virus gp 41 proteinet umiddelbart tilstøtende karboksysiden i L-tryptofanresten i 603-stillingen i gp 41 proteinet; og
hvor en av Z eller Z' kan ha en lengde på 0 rester og hvor Z og Z' sammen omfatter minst 10 rester.
Kombinasjonen av peptider (IV) eller (XII) med peptider (III), (XIII), eller (X) er spesielt foretrukket. Kombinasjonen av (III) og (IV) eller (XIII) og (IV) er de ønskede kombinasjoner.
De ønskede petidene er en blanding av
IWGCSGKLICTTAVPWNAS, idet følgende betegnet "E32", og AVERYLKDQQLLGIWGCSGKLI, idet følgende betegnet "E34".
Disse peptidene kan syntetiseres ved følgende metoder:
Syntese av E32 og E34
Syntese av peptidene E32 og E34 ble oppnådd ved bruk av klassisk Merrifield-teknikk (2). Peptidsekvensene ble syntetisert på et automatisert Vega 250C peptid-syntese-apparat ved bruk av et dobbelt koblingsprogram.
For petid E32 ble boc-serinharpiks med substitusjon av 0,92 mmol/gram benyttet. For peptid E34 ble boc-Isoleucinharpiks med substitusjon av 0,8 mmol/gram benyttet. Syntese av boc-serin- og boc-isoleucinharpiksene ble oppnådd ved gisin-metoden som beskrevet av Stewart & Young (1).
For peptid E32 ble peptidsekvensen 'IWGCSGKLICTTAVPWNAS' syntetisert ved bruk av boc-serinhårpiksen sekvensielt dobbeltkoblet med følgende mol-L-aminosyrer i 12 meq overskudd :
For peptid E34 ble peptidsekvensen 'AVERYLKDQQLLGIWGCSGKLI' syntetisert ved bruk av følgende boc-aminosyrer i 12 meq overskudd:
(1) Stewart & Young, Solid Phase Peptide Synthesis, andre utgave (1984), Pierce Chemical Co. (2) Merrifield, R.B. (1963), J. Amer. Chem. Soc. 85, pp. 2149-2154. (3) Alle boc-aminosyrer oppnådd fra Bachem Inc., Torrance, Calif.
(4) Analytiske HPLC betingelser:
Buffer A: 0,1* TFA/destillert deionisert vann Buffer B: 0,1* TFA/HPLC kvalitet acetonitrilgradient betingelser: 10* 'B' til 50* 'B' over 20 minutter. Bølgelengde: 214 nm
Strøm: 1,0 ml/min
Kolonne: Vydac 214TP54 C-4 proteinkolonne, 250 x 4,5 mm
(5) Aminosyreanalyse foretatt på et LKB 4150 alfaaminosyre-analyseapparat. (6) Peptidsekvens-bestemmelse foretatt på et Applied Biosystems 470A proteinsekvensapparat. (7) Peptldinnhold bestemt fra utvinning ved aminosyreanalyse av kjent mengde peptid. (8) Boe er en kjemisk forkortelse for tert-butyloksy-karbonyl-alfaaminobeskyttende gruppe. Den funksjonelle gruppen fjernes ved hydrolyse i 50* trifluoreddiksyre (TFA)/50* diklormetan (CH2C12) etter at aminosyren har blitt koblet til den voksende peptidkjeden. Denne handling eksponerer kjedens aminoterminus slik at den neste aminosyren gis anledning til å bli effektivt koblet.
I tillegg til den boc-beskyttende gruppen på hver aminosyre, blir sidekjedene til noen aminosyrer videre beskyttet overfor angrep ved den kjemi som er innbefattet i peptidsyntese. Disse beskyttelsesgruppene, angitt i parentes på oversikt-listen, er alle stabile overfor betingelsene ved peptidsyntese, men er likevel lette å fjerne fra aminosyren under spalting i hydrofluorsyre. Anisol (metylfenyleter) virker som et nukleofilt rensemiddel under HF-spaltingstrinnet for hindring av alkylering av peptidet av de frigjorte karbonium-ionene fra beskyttende grupper. De beskyttende gruppene for de angitte aminosyrene er definert nedenfor: 0-benzyl: benzyl-ester; festet til hydroksylsidekjeden i både serin og treonin for å hindre acylering eller forgrening av peptidkjeden.
MeObzl: 4-metoksybenzyl; festet til sulfydrylgruppen i cystein for å hindre dets oksydasjon under peptidsyntese.
Cl-Z: 2-klorbenzyloksykarbonyl; festet til alfa-amino-gruppen i lysin for å hindre dannelsen av sidekjedevekst fra dets sete på peptidet.
Hobt: 1-hydroksybenzotriazol; benyttet i ekvimolare mengder til glutamin og asparagin under kobling for å hindre de-hydratisering til nitrilformene.
Tosyl: p-toluensulfonyl; benyttet for å acylere guanidin-gruppen i sidekjeden til arginin.
Bzl: beta-benzylester; blokkerer karboksylgruppene i sidekjeden til aspartinsyre og glutaminsyre.
Brz: 2-brombenzyloksykarbonyl; blokkerer hydroksylgruppen i sidekjeden til tyrosin.
Peptider ble spaltet fra harpiksen, filtrert, ekstrahert
med eddiksyre og ført gjennom en fraktogel-avsaltningskolonne som i eksempel I. For peptid E34 , ble fraktogel-fraksjoner analysert ved analytisk HPLC og fraksjoner inneholdende minst 30* av den totale absorbsjon ved 214 nm som hovedtopp som migrerte ved ca. 14 minutter retensjonstid ble oppsamlet. De oppsamlede fraksjonene ble kromatografert på karboksymetyl-cellulose, likevektsinnstilt med 0,01 M ammoniumacetat, pH 4,4. Kolonnen ble eluert med en trinngradient av ammoniumacetat og fraksjonen som eluerte ved 0,2 M ammoniumacetat ble oppsamlet, lyofilisert og analysert ved analytisk HPLC. Hovedtoppen som migrerte ved 14 minutters retensjonstid omfattet mellom 30 og 40* av den totale absorbsjon ved 214 nm og materiale hadde et akseptabelt amminosyreinnhold.. Dette materialet ble oppløseliggjort på ny og benyttet i ELISA.
For peptid E34 , ble fraktogel-fraksjoner likeledes analysert ved analytisk HPLC. Fraksjoner inneholdende minst 70% av den totale absorbsjon ved 214 nm som hovedtopp som migrerte ved omkring 12,99 minutters retensjonstid, ble kombinert, lyofilisert og analysert ved HPLC og med henblikk på amino-syreinnhold. Dette materialet ble oppløseliggjort på nytt og benyttet i ELISA.
Anti-HBsAG (fortrinnsvis monoklonalt) for benyttelse med det syntetiske proteinet i den kombinerte analysen ifølge oppfinnelsen, kan være et hvilket som helst slikt monoklonalt antistoff som er vist å være spesifikt for HBsAG-materialet og som er anvendbart i en ELISA-analyse. Spesielt benyttet ble en anti-HBsAG musemonoklonal oppnådd fra Ortho Diagnostic Systems, Inc., Raritan, New Jersey, identisk med det benyttet i antistoffet til hepatitt B overflateantigen (anti-HBa)
(murin-monoklonal) orto antistoff til HBsAG ELISA-testsystem. Andre kilder for anti-HBsAG monoklonale antistoffer er kjent slik som fra Accurate Chemical & Scientific Corp (Westbury, NY) (f.eks. produktnummer MAS 103, MAS 104, MAS 105, MAS 106 eller MAS 107). Alternativ kan velkjente hybridomteknikker benyttes for å bringe, selektere og rense et egnet monoklonalt antistoff til HBsAG. Slike metoder vil f.eks. innbefatte isolering og rensing av hepatittrelaterte antigener, inkludert de virale overflateantigenene. Likeledes er produksjonen av hybridomer ifølge metodene, først fremsatt av Kohler og Milstein [Nature 256, 495-497 (1975)], velkjent og behøves ikke gjentas her. Mens monoklonale antistoffer generelt er foretrukket på grunn av deres store spesifisitet, kan polyklonale antistoffer også med fordel benyttes. Fremgangsmåter for fremstilling av polyklonale antistoffer er likeledes velkjent eller de kan oppnås kommersielt lik som fra Cambridge Research Laboratories, Massachusetts (f.eks. prod. 597015 hepatitt B overflateantigen geit polyklonalt antistoff).
Ifølge foreliggende oppfinnelse blir den første reagensen fremstilt ved å feste både peptidene og anti-HBsAG og det anti-HBsAG monoklonale antistoffet til faste overflater. Slike faste overflater kan være partikler av forskjellige materialer slik som f.eks. polysakkarider, kiselholdige materialer eller plaster eller lignende. I ELISA-analyser er de faste overflatene, fortrinnsvis brønnene, i en mikrotiter-platebrønn og både det monoklonale antistoffet og peptidene festes til overflaten i hver brønn.
Den andre reagensen omfatter en blanding av merkede peptider og antistoffer. Mens det innen teknikker er kjent at mange like "merkinger" kobles til immunogene aktive materialer i ELISA-analyser, er den merking som foretrekkes for peptidene biotin-streptavidin-biotin-HRPO (pepperrotperoksidase) kompleks. Den merking som foretrekkes for antistoffene er
HRPO.
Grunntrekk ved foretrukket analyse
Grunntrekkene ved en foretrukket analyse ifølge oppfinnelsen er som følger: 1) Den første reagensen, som omfatter både E32- og E34-peptider og a-HBsAG monoklonal belagt på overflaten til en brønn i en mikrotiterplate, inkuberes med den mistenkte fluid, f.eks. pasientplasma, 1 tilstrekkelig tid til å immunoreagere f.eks. i en time ved 37°C og vasking foretas; . 2) Den andre reagensen, som omfatter E32 og E34 koblet med biotin og i blanding med anti-HBsAG koblet til HRPO, til-settes og inkuberes i tilstrekkelig tid til å immunoreagere f.eks. en time ved 37°C, og deretter foretas vasking; 3) Merkingen utvikles ved tilsetning av et fremstilt streptavidin-biotin-HRPO-kompleks og inkubering foretas til bundet peptid-biotinkompleks, f.eks i 30 minutter ved 37°C; 4) Sluttelig utvikles merkingen med OPD-substrat i 30 minutter ved romtemperatur og den optiske densitet avleses ved 492 nm.
Materiale og metoder
Studiesub. jekter og kontrollgrupper
En gruppe av 30 serumprøver ble oppnådd fra pasienter med AIDS eller AIDS-relatert kompleks (ARC) fra San Diego. 48 prøver ble oppnådd i februar og mars 1980 som del av et epidemiologisk studium av hepatitt B i homoseksuelle menn. Serum ble lagret ved -20°C. Disse sera ble innledningsvis analysert for HBV-overflateantigen og for antistoff til dette ved bruk av AusRIA-utstyr (Abbott Laboratories, North Chicago, 111). Et totale av 32 serumprøver fra lavrisiko-pasienter i en gastroenterologisk klinikk ble analysert som ukjente i anti-HIV env/HBsAG-analysen. I tillegg ble 26 sera fra pasienter med sykdommer på grunn av reumatoid artritt, systemisk lupus erytematosus og traumer urelatert til HIV-infeksjon, analysert.
E32/ E34 env peptider og ELISA som bruker dem som antigener E32 og E34 er syntetiske oligopeptider fra regioner i kappeglykoprotein gp 41 i HIV. Deres sekvens, deres syntese og ELISA som bruker dem som antigen, har tidligere blitt beskrevet.
Biotlnylerlng av env peptider
HIV env peptidene E32 og E34 benyttet i dette studium ble syntetisert ved hjelp av fast fasemetoden ifølge Merrifield
[6]. Peptidsekvensene blekarakterisert vedaminosyreanalyse (LKB 4150 aminosyre-analyseapparat) og aminosyresekvens (Applied Biosystems 470 H protein-sekvensapparat). Analytisk HPLC av de oppsamlede og kombinerte proteinene viste at peptidet var mer enn 70* rent. Peptidet ble lyofilisert for å fjerne eddiksyre. En mengde på 1,0 mg av E32- og E34-peptider ble oppløselig-gjort separat 1 250 pm 0,1 M natriumkarbonat-bikarbonat-buffer, pH 9,6 på is.
I separate reagensrør ble 0,5 mg biotin-x-NHS (biotinyl-e-aminokaproinsyre n-hydroksy-succinimidester, Calbiochem, San Diego, CA) for E32, og 0,1 mg bidtin-x-NHS for E34, oppløst i 1,0 ml av 0,1 M natriumfosfat (0,1 M NaH2P04, 0,1 M Na2HP04, pH 6,5) på is. Til hvert reagensrør ble det tilsatt 1,0 mg EDC (l-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl) karbodiimid-Hcl, Pierce Chemical Co., Rockford, 111.) og oppløsningen ble inkubert i 15 minutter på is. Et volum på 750 pl av 0,1 M natriumfosfat ble tilsatt til peptidoppløsningene som deretter ble tilsatt separat til den passende EDC-biotin-x-NHS-oppløsing til et totalvolum på 2 ml. Reagensrørene ble anbrakt i et ende-over-ende-rotasjonsapparat og inkubert i 30 minutter ved 4°C, og deretter i 4 timer ved romtemperatur.
De biotinylerte peptidoppløsningene ble kromatografert på en Sephadex G-10 (Pharmacia Fine Chemicals, Piscataway, NJ) 1,0 x 20 cm kolonne (Biorad Laboratories, Richmond, CA), med et sjiktvolum på 10,0 ml. Peptidene ble eluert med PBS pH 7,2 med en strømningsgrad på 1,0 ml/min.
Absorbansen ble målt ved 235 nm med PBS som referanse-blindprøve. Absorbans-hovedtoppen ved 235 nm ble oppsamlet, kombinert og frosset ved -20°C med 10* glyserol tilsatt for å stabilisere peptidene.
Effektiviteten til biotinyleringen ble overvåket ved prøving av forskjellige fortynninger av de biotinylerte peptidene i anti-HIV env peptid/HBsAG-analysen for å bestemme hvilken fortynning som resulterte i det mest skarpe signalforhold mellom positive og negative prøver.
Anti- HIV env peptld/ HBsAG ELISA
E32- og E34-peptidene ble oppløseliggjort ved oppløsning av peptidene i 0,1M natriumkarbonat-bikarbonat-buffer, pH 9,6 til en konsentrasjon på 200 pg/ml. ELISA-analysen ble foretatt 12-brønners "removawell"-mlkrotiterstrimler (Nunc, Irvine Scientific, Irvine, CA. eller Dynatech Immulon II, Chantilly, Va.). Hver brønn ble belagt med en oppløsning av 200 pl av 2,5 pg/ml E32 og 0,5 pg/ml peptid E34. Hver brønn ble også belagt med 10 pg/ml av anti-HBsAG muse-monoklonal, (Ortho Diagnostics Systems, Inc., Raritan, NJ) i samme buffer. Mikrotiterplaten ble dekket med parafilm og inkubert i et minimum av 12 timer ved 4°C. Nevnte env peptid-anti HBsAG-oppløsning ble deretter kassert og overskudd bindings-seter behandlet med 300 pl/brønn av 10* normal hesteserum i PBS (0,15 M NaCl. 0,5 M NaH2P04. 0,05 M Na2HP04, pH 7,3) hvor til 2,5* føtalkalveserum, 0,2* bovinserumalbumin (BSA) og 0,05* tween-20 hadde blitt tilsatt. Denne oppløsningen hadde blitt inkubert i 15 minutter i et 37°C fuktiggjort kammer. Brønnene ble tømt ved endevending og 200 pl/brønn rent plasma eller serum ble tilsatt til hver testbrønn. Mikrotiterplaten ble dekket med parafilm, inkubert i 1 time ved 37"C, deretter vasket 5 ganger med 400 pl/brønn av 0,05* tween-20 i PBS.
Et volum på 200 pl ble deretter tilsatt til hver brønn med en oppløsning i PBS inneholdende 1:50 muse-monoklonal til HBsAG konjugert til HRPO og en 1:350 fortynning av hvert biotinylert peptid. Etter en times inkubasjon ved 37°C, ble brønnene vasket 5 ganger med 400 pl av 0,05* tween-20 i PBS.
En oppløsning av 200 pl/brønn streptavidin-biotin-pepperrotperoksidase-kompleks, på forhånd inkubert i 30 minutter ved 37°C (Zymed Laboratories, San Francisco, CA) ble tilsatt til hver brønn og inkubert i 30 minutter ved 37"C. Brønnene ble vasket 5 ganger med 0,05* tween-20 i PBS og inkubert med 200 pl/brønn med o-fenylendiaminoppløsning (en 10 mg OPD.tablett i 15 ml destillert vann og 6,25 pl 30* H202; Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) i 30 minutter ved romtemperatur. Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av 50 pl/brønn av 4N H2SO4. Absorbans ved 490 nm ble bestemt i en mikroelisa-avlesningsanordning nullstilt på en tom mikrotiterbrønn.
Bedømmelse av antl- HIV env peptld/ HBsAG ELISA
Intra- og inter-analysereproduserbarhet av anti-HIV env/HBsAG analysen ble bestemt ved måling av tre fortynninger av to separate prøver (en HIV positiv og en HBsAG positiv) i samme analysen eller i flere analyser utført flere ganger iløpet av en uke.
Utvinningen av forskjellige andeler av en HIV-positiv prøve tilsatt til en HIV-negativ prøve og andeler av en HBsAG-positiv kontroll tilsatt til et HBV-negativt serum ble bestemt. Disse supplerte og usupplerte prøvene ble analysert i nevnte anti-HIV env/HBsAG som ukjente.
Referanse HIV antistoff og HBsAG metoder
Antistoff til HIV i serum og plasma ble målt med to kommersielt tilgjengelige ELISA-utstyrspakker: Virgo HTLV-III ELISA, (Electro-Nucleonics, Inc., Columbia, MD), idet følgende betegnet HIV ELISA I; og Abbott HTLV III EIA (Abbott Laboratories, North Chicago, III), idet følgende betegnet HIV ELISA II. Hepatitt-overflateantigen ble målt ved hjelp av Auszym HBsAG EIA-utstyr (Abbott Laboratories, North Chicago, ILL), betegnet HBsAG I, og Ortho HBsAG ELISA-testsystemet (Ortho Diagnostic Systems, Inc., Raritan, NJ) betegnet HBsAG II. Disse analysemetodene ble foretatt ifølge produsentens Instruksjoner.
Standarder
For HBsAG-sensitivitetssammenligning ble Abbott Laboratories HBsAG standard (Lot #84464 HR) subtyper ad og ay, benyttet. Standardene ble lagret ved 4"C og analysert i duplikat.
Immunoblot- analyse for HIV
Utvalgte prøver ble analysert ved immunoblot-analyse som beskrevet av Symlngton [se Symington, J. et al., "Immunoauto-radiographic Detection of Proteins after Electrophoretic transfer from Gels to Dlazo-Paper. Analysis of Adenovirus Encoded Proteins", Proe. Nati. Acad. Sei. 1981;78:177-181] ved bruk av biorad-immunoblotanalysen (Bio-Rad Clinical Division, Richmond, CA). En prøve ble ansett for å være reaktiv ved immunoblot-teknikken ved tilstedeværelsen av antistoff rettet mot 24 KD qaq og 41 KD env glykoprotein-båndene. Denne bio-rad-analysemetoden ble foretatt ifølge produsentens instruksjoner.
Statistiske analyser
Middelverdier er uttrykt med deres standard avvik. Normale ytterverdier ble fjernet fra de normale områdestudiene ved bruk av den statistiske teori beskrevet av Barnett [se Barnet R.M., "Clinical Laboratory Statistics", 1979 2nd Ed. Boston. Little, Brown & Company 124].
Resultater
Normalområde- bestemmelser og kontrollgrupper
Serum eller plasma ble oppnådd fra 72 friske frivillige og analysert i duplikat i HIV env peptid/HBsAG-analysen. To prøver ble kassert som statistisk signifikante ytterligheter på grunn av optiske densitetsverdier (0,62 og 0,054) over det normale området bestemt ifølge Barnetts teori. Disse sera ble verifisert til å være negative for HBsAG, og HIV ved kommersiell ELISA og Western Blot. Det normale området for HIV env/HBsAG ELISA ble deretter beregnet fra analyse-resultatene fra testing av 70 prøver. Den midlere optiske densitetsverdien eller absorbansen var 0.008. Den midlere optiske densitetsverdien pluss seks standard avvik var 0,096. Anti-HIV env peptid/HBsAG ELISA-resultatene på ukjente sera over en optisk densitet på 0,100 ble ansett som positive. Den midlere optiske densitet eller absbrbans, når verdiene fra de to ytterlighetene ble addert til fordelingen, ble bestemt til å være 0,026. Dette middel pluss tre standard avvik var 0,097 og pluss seks standard avvik var det 0,168. De 32 prøvene fra den gastroenterologiske klinikk var negative i anti-HIV env/HBsAG-analysen og det var også 26 andre prøver fra forskjellige sykdommer.
For anti-HIV env/HBsAG-analysen ble intra-analysevariasjonskoeffisienten bestemt ved analyse av tre forskjellige plasmaprøver 8 ganger i en enkelt analyse og varierte fra 3,0 til 7,0. Inter-analysevariasjonskoeffisienten ble fastslått ved analyse av tre plasma-ansamlinger på tre etter hverandre følgende dager og varierte fra 3,0 til 11,0 (tabell I). For å bestemme nøyaktigheten av denne analysen ble det utført plasmasupplement- og utvinningsforsøk I hvilke fortynninger av en HIV-positiv og en HBsAG-positiv kontroll ble tilsatt separat til et normalt plasma, som deretter ble analysert i anti-HIV env/HBsAG-analysen. Resultatene for HIV-antistoff-utvinningsforsøket viser at anti-HIV env/HBsAG ELISA kunne detektere de forskjellige fortynningene (1:2-1:200) av en HIV-positiv prøve tilsatt til en HIV-negativ prøve. Kjente mengder av en HBsAG-positiv kontroll ble tilsatt til et normalt serum og analysert i anti-HIV env/HBsAG ELISA. Resultatene viste at anti-HIV env/HBsAG-analysen kan detektere forskjellige konsentrasjoner fra 6 nanogram til 0,75 nanogram av denne HBsAG-kontroll tilsatt til normalt serum.
Sammenligning av anti- HIV env/ HBsAG- analysen med HIV og HBsAG ELISA- utstvr
Prøver oppnådd fra 48 homoseksuelle menn oppnådd tildlig i 1980 ble analysert i duplikat i nevnte anti-HIV env/HBsAG ELISA og sammenlignet med HIV og HBsAG ELISA-metoder som beskrevet i "Materialer og metoder". Resultatene viste at nevnte anti-HIV env/HBsAG ELISA på nøyaktig måte detekterte antistoffer til HIV- og HBV-overflateantigen i prøver når en eller begge av analyttene var tilstede (tabell II). Det sterkeste signalet uttrykt som absorbans ble obervert med prøver som var HBsAG-positive analene. Et totale på 6 prøver var E32/E34 ELISA-testposltive og -negative i anti-HIV env/HBsAG-analysen. Som en ytterligere spesifisitetstest for nevnte anti-HIV env/HBsAG ELISA, ble 30 prøver fra pasienter med AIDS eller ARC som hadde blitt analysert med henblikk på tilstedeværelsen av HBsAG, analysert i anti-HIV env peptider/HBsAG- og HIV-utstyret. Resultatene (tabell III) viser fullstendig overenstemmelse mellom testresultater og HIV- og HBsAG-testutstyr. Anti-HIV env peptid/HBsAG-analysen detekterte alle prøver som positive som inneholdt HBsAG alene, antistoffer til HIV alene, eller begge deler.
Sensitivitet for HBsAG
Fortynninger av HBsAG-standarder inneholdende en kjent mengde HBsAG ble analysert i anti-HIV env peptid/HBsAG ELISA og sammenlignet med HBsAG ELISA-metoder nr. I og II. Resultatene fra dette studium (tabell IV) viser at nevnte anti-HIV env peptid/HBsAG ELISA var like sensitiv som referanse-metodene for detektering av kjente mengder av HBsAG fra standarder av subtyper ad og ay. HBsAG ELISA-metode nr. II var i stand til å detektere en fortynning til av ad- og ay-standarden eller mindre enn 1 nanogram av sensitivitet sammenlignet med HBsAG ELISA-metode nr. 1.
Diskusjon
Det fremgår at det som tilveiebringes ved foreliggende oppfinnelse er en ELISA som samtidig kan detektere prøver med enten antistoff til HIV- eller HBV-overflateantigen. Antistoffet til HIV ble detektert med syntetiske oligopeptider benyttet som antigen i steden for HIV-vlrale lysater. En sandwich-peptidanalyse ble etablert når det bivalente humane HIV-antistoffet på den faste fasen ble inkubert med biotinylert peptid env etter primærreaksjonen med sera. Det bundne biotinylerte peptidet ble deretter detektert ved hjelp av et streptavidin-biotin-HRPO-kompleks. Denne ELISA har sammenlignbar sensitivitet med kommersielle metoder for detektering av antistoff til HIV. Et komplemen-
Tabell IV
Sensitivitet for anti-HIV env/HBsAG analysen sammenlignet med HBsAG ELISA-metoder nr. I og II. Individuelle prøver av Abbott HBsAG-standarden ble analysert i de tre metodene. Grenseverdien for anti-HIV env/HBsAG-analysen var 0,100.
Claims (35)
1.
Analysesystem for detektering av om noen av HBsAG- og HIV-antistoff ene er tilstede eller ikke i en mistenkt fluid, karakterisert ved at det innbefatter:
en første reagens omfattende
(a) fast overflate hvortil det er bundet et eller flere peptider som har en epitop som kan bindes til en paratop av et HIV-antistoff; og
(b) en fast overflate hvortil det er bundet et antistoff som er spesifikt for HBsAG; og
en annen reagens omfattende
(c) et eller flere merkede peptider som har en epitop som kan bindes til en paratop av et HIV-antistoff; og
(d) merket antistoff som er spesifikt for HBsAG;
hvor nevnte mistenkte fluid kan bringes i kontakt med nevnte første reagens, ubundet materiale kan vaskes fra nevnte faste overflater, de faste overflatene kan bringes i kontakt med den andre reagensen og igjen vaskes, og nevnte merkinger kan benyttes for å detektere tilstedeværelsen eller fraværet av både HBsAG- eller HIV-antistoffer.
2.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte peptider innbefatter en sekvens valgt fra gruppen bestående av:
De antigeniske og immunologiske fragmenter og diagnostisk akseptable salter derav.
3.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
4.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
5.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
6.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
7.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
8.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
9.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
10.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
11.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
12.
Analysesystem Ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
13.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
14.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
15.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
16.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
17.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
18.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at en eller begge av nevnte reagenser omfatter en blanding av nevnte peptider idet blandingen omfatter to eller flere peptider inneholdende aminosyrerestsekvenser som er homologe til deler av HIV pg 41-proteinsekvensen, hvor i hver nevnte blanding:
et første av nevnte peptider omfatter delen av HIV gp 41-proteinsekvensen CSGKLIC; og
et annet av nevnte peptider omfatter sekvensen ZLLGXWZ <*> ;
hvor X er valgt fra gruppen bestående av I, L, M eller F; Z er valgt fra amlnosyrerestsekvensen i HIV gp 41-proteinet umiddelbart tilstøtende til aminosiden i L-leucinresten i stilling 599 i gp 41-proteinet; Z' er valgt fra amlnosyrerestsekvensen 1 HIV gp 41-proteinet umiddelbart tilstøtende til karboksylsiden i L-tryptofanresten i stillinger 603 i gp 41-proteinet; idet en av Z og Z' kan ha en lengde på null rester; og Idet Z og Z' sammen omfatter idet minste ti rester.
19.
Analysesystem ifølge krav 18, karakterisert ved at nevnte første peptid er valgt fra gruppen bestående av:
idet nevnte andre peptid er valgt fra gruppen bestående av:
20.
Analysesystem ifølge krav 19, karakterisert ved at nevnte første peptid består av:
at nevnte andre peptid består av
21.
Analysesystem ifølge krav 20, karakterisert v e d at X er I.
22.
Analysesystem ifølge krav 19, karakterisert ved at nevnte første peptid består av:
at nevnte andre peptid består av
23.
Analysesystem ifølge krav 22, karakterisert ved at X er I.
24.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte faste overflate omfatter partikler av plast, kiselholdige partikler eller polysakkaridpartikler.
25... Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte overflater til (a) og (b) begge omfatter veggene i en enkelt brønn i en mikrotiterplate.
26.
Analysesystem Ifølge krav 25, karakterisert ved at det innbefatter en mikrotiterplate som har flere av nevnte enkeltbrønner.
27.
Fremgangsmåten for detektering av om noen av HBsAG- og HIV-antistoffene er tilstede eller ikke i en mistenkt fluid, karakterisert ved trinnene:
(a) tilveiebringelse av et første reagens omfattende en fast overflate hvortil det er bundet et eller flere peptider som har en epitop som kan bindes til en paratop i et HIV-antistoff og en fast overflate hvortil det er bundet et monoklonalt antistoff som er spesifikt for HBsAg;
(b) anbringelse av nevnte første reagens i kontakt med det mistenkte fluid i et tilstrekkelig tidsrom til å tillate at det oppstår en immunologisk reaksjon;
(c) detektering av tilstedeværelsen av HBsAG- eller HIV-antlstoffer bundet til nevnte faste overflater.
28.
Fremgangsmåten ifølge krav 27, karakterisert ved at den ytterligere omfatter:
Tilveiebringelse av en annen reagens omfattende merket peptid som har en epitop som kan bindes til en paratop i et HIV-antistoff og merket antistoff spesifikt for HBsAG; og
hvor trinnet (c) for detektering av tilstedeværelsen av HBsAG- eller HIV-antistoffer bundet til nevnte faste overflater foretas ved vasking av de faste overflatene frie for ubundet materiale etter trinn (b); anbringelse av de vaskede faste overflater i kontakt med nevnte andre reagens; vasking av nevnte faste overflater, som er brakt I kontakt med nevnte andre reagens, frie for ubundet materiale; og utvikling av merkingen som et tegn på tilstedeværelsen av HBsAG- eller HIV-antistoffene.
29.
Fremgangsmåten ifølge krav 27, karakterisert ved at nevnte et eller flere peptider omfatter:
30.
Fremgangsmåte Ifølge krav 27, karakterisert ved at nevnte et eller flere peptider omfatter en blanding av peptider; nevnte blanding omfatter to eller flere peptider inneholdende aminosyrerestsekvenser som er homologe til deler av HIV pg 41-proteinsekvensen, hvori i hver nevnte blanding:
et første av nevnte peptider omfatter delen av HIV gp 41-proteinsekvensen CSGKLIC; og
et annet av nevnte peptider omfatter sekvensen ZLLGXWZ';
hvor X er valgt fra gruppen bestående av I, L, M eller F; Z er valgt fra amlnosyrerestsekvensen 1 HIV gp 41-proteinet umiddelbart tilstøtende til aminosiden i L-leucinresten i stilling 599 i gp 41-proteinet; Z' er valgt fra amlnosyrerestsekvensen 1 HIV gp 41-proteinet umiddelbart tilstøtende til karboksylsiden i L-tryptofanresten i stillinger 603 i gp 41-proteinet; idet en av Z og Z' kan ha en lengde på null rester; og idet Z og Z' sammen omfatter minst ti rester.
31.
Fremgangsmåten ifølge krav 30, karakterisert ved at nevnte første peptid er valgt fra gruppen bestående av:
at nevnte andre peptid er valgt fra gruppen bestående av:
32.
Fremgangsmåten følge krav 31, karakterisert ved at nevnte første peptid består av:
at nevnte andre peptid består av
33.
Fremgangsmåten ifølge krav 32, karakterisert v e d at X er I.
34.
Fremgangsmåten ifølge krav 31, karakterisert ved at nevnte første peptid består av:
at nevnte andre peptid består av
35.
Fremgangsmåten ifølge krav 34, karakterisert ved at X er I.
Nve Patentkrav
1.
Analysesystem for detektering av om noen av HBsAG- og HIV-antistoffene er tilstede eller ikke i en mistenkt fluid, karakterisert ved at det innbefatter:
en første reagens omfattende
(a) fast overflate hvortil det er bundet et eller flere peptider som har en epitop som kan bindes til en paratop av et HIV-antistoff; og
(b) en fast overflate hvortil det er bundet et antistoff som er spesifikt for HBsAG; og
en annen reagens omfattende
(c) et eller flere merkede peptider som har en epitop som kan bindes til en paratop av et HIV-antistoff; og
(d) merket antistoff som er spesifikt for HBsAG;
hvor nevnte mistenkte fluid kan bringes i kontakt med nevnte første reagens, ubundet materiale kan vaskes fra nevnte faste overflater, de faste overflatene kan bringes i kontakt med den andre reagensen og igjen vaskes, og nevnte merkinger kan benyttes for å detektere tilstedeværelsen eller fraværet av både HBsAG- eller HIV-antistoffer.
2.
Analysesystem Ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte peptider innbefatter en sekvens valgt fra gruppen bestående av:
De antigeniske og immunologiske fragmenter og diagnostisk akseptable salter derav.
3.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
4.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
5.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
6.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
7.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
8.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
9.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
10.
Analysesystem ifølge krav 1, karakterisert ved at et av nevnte peptider har formelen:
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US2929887A | 1987-03-23 | 1987-03-23 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO881239D0 NO881239D0 (no) | 1988-03-21 |
| NO881239L true NO881239L (no) | 1988-09-26 |
Family
ID=21848311
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO881239A NO881239L (no) | 1987-03-23 | 1988-03-21 | Analyse for detektering av hepatitt-antigener og aids-antistoffer. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0286264A3 (no) |
| JP (1) | JPS63277970A (no) |
| AU (1) | AU1334588A (no) |
| DK (1) | DK156788A (no) |
| FI (1) | FI881355A (no) |
| GR (1) | GR1000033B (no) |
| IL (1) | IL85811A0 (no) |
| NO (1) | NO881239L (no) |
| PT (1) | PT87036A (no) |
| ZA (1) | ZA882042B (no) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5017688A (en) * | 1986-06-12 | 1991-05-21 | Biogen, Inc. | Peptides involved in the pathogenesis of HIV infection |
| US4943627A (en) * | 1986-06-12 | 1990-07-24 | Biogen, Inc. | Peptides involved in the pathogenesis of HIV infection |
| NZ226026A (en) * | 1987-09-04 | 1991-03-26 | Wellcome Found | Immunoassay for an antibody using recombinant antigens expressed in two different genera |
| CA1335880C (en) * | 1988-07-14 | 1995-06-13 | Thomas P. O'connor | Detection of an antibody and antigen in an immunoassay |
| DE3919810A1 (de) * | 1989-06-16 | 1990-12-20 | Biochrom Beteiligungs Gmbh & C | Festphasenimmunoassay und testbesteck zur bestimmung von antigenen und antikoerpern |
| JPH05504400A (ja) * | 1990-01-16 | 1993-07-08 | プルテック・リサーチ・ディベロプメント・パートナーシップ Ii | 抗体または抗原の併用アッセイ |
| EP0473065A3 (en) * | 1990-08-29 | 1992-08-26 | Abbott Laboratories | Simultaneous assay for detecting two or more analytes |
| ES2129358B1 (es) * | 1997-04-09 | 2000-03-16 | Vamobi S A | Procedimiento de deteccion en una sola prueba de anticuerpos anti-virus de la hepatitis c, de la inmunodeficiencia humano y antigeno de superficie del virus de la hepatitis b". |
| KR20110101136A (ko) | 2008-11-26 | 2011-09-15 | 도레이 토넨 기노우마쿠 고도카이샤 | 미세다공막, 이러한 필름의 제조 방법 및 전지 세퍼레이터 필름으로서의 이러한 필름의 사용 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1148859A (en) * | 1979-06-14 | 1983-06-28 | Lacy R. Overby | Simultaneous assay of two hepatitis viruses using a solid phase |
| NZ211860A (en) * | 1984-04-23 | 1990-10-26 | Us Health | Method for detection of hiv; test kit |
| CA1261740A (en) * | 1984-07-16 | 1989-09-26 | Robin A. Gutierrez | Immunoassay for detection of common determinant antibody to hepatitis b |
| ZA855031B (en) * | 1984-08-31 | 1986-02-26 | New York Blood Center Inc | Assay for simultaneous detection of antigen and antibody in given serum |
| ATE138100T1 (de) * | 1984-12-24 | 1996-06-15 | Genentech Inc | Fusionen von aids-verwandten polypeptiden |
| JPS63502904A (ja) * | 1986-03-24 | 1988-10-27 | オ−ソ・フア−マシユ−チカル・コ−ポレ−シヨン | 合成ｈｔｌｖ−３ペプチド、その組成物及び用途 |
-
1988
- 1988-03-21 NO NO881239A patent/NO881239L/no unknown
- 1988-03-21 AU AU13345/88A patent/AU1334588A/en not_active Abandoned
- 1988-03-22 DK DK156788A patent/DK156788A/da not_active IP Right Cessation
- 1988-03-22 EP EP88302501A patent/EP0286264A3/en not_active Withdrawn
- 1988-03-22 FI FI881355A patent/FI881355A/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-03-22 PT PT87036A patent/PT87036A/pt not_active Application Discontinuation
- 1988-03-22 ZA ZA882042A patent/ZA882042B/xx unknown
- 1988-03-22 IL IL85811A patent/IL85811A0/xx unknown
- 1988-03-23 JP JP63067459A patent/JPS63277970A/ja active Pending
- 1988-03-23 GR GR880100180A patent/GR1000033B/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0286264A3 (en) | 1988-10-19 |
| JPS63277970A (ja) | 1988-11-15 |
| EP0286264A2 (en) | 1988-10-12 |
| FI881355A (fi) | 1988-09-24 |
| NO881239D0 (no) | 1988-03-21 |
| GR1000033B (el) | 1990-03-12 |
| ZA882042B (en) | 1989-11-29 |
| AU1334588A (en) | 1988-09-22 |
| DK156788D0 (da) | 1988-03-22 |
| PT87036A (pt) | 1989-03-30 |
| IL85811A0 (en) | 1988-09-30 |
| GR880100180A (en) | 1989-08-31 |
| FI881355A0 (fi) | 1988-03-22 |
| DK156788A (da) | 1988-09-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK175901B1 (da) | Syntetiske HTLV-III peptider, sammensætninger, anvendelser samt fremgangsmåde til fremstilling deraf | |
| US4629783A (en) | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease | |
| JP2786436B2 (ja) | Ｈｔｌｖ‐ｉｉｉ抗体の診断用ペプチド並びにそれらの製造法及び用途 | |
| JPH07121959B2 (ja) | Ｈｔｌｖ−▲ｉｉｉ▼エンベロ−プ蛋白質 | |
| NO881239L (no) | Analyse for detektering av hepatitt-antigener og aids-antistoffer. | |
| EP0247557A2 (en) | HTLV-III(LAV) Envelope peptides | |
| WO2000031130A1 (en) | Synthetic polypeptides corresponding to the hepatitis c virus (hcv) and applications | |
| JP2650217B2 (ja) | Ｈｔｌｖ―１感染の診断、治療及び予防接種のためのペプチド | |
| US5241047A (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| FI101797B (fi) | STLV-III-virukseen liittyvät polypeptidit, diagnostiset järjestelmät j a määritysmenetelmät | |
| US6322964B1 (en) | Synthetic HIV-2 gag and env oligopeptides reactive with HIV-2 specific antibodies | |
| CA1341436C (en) | Synthetic antigens for the detection of aids-related disease caused by lav-2 | |
| JPH08245693A (ja) | Ｈｉｖ抗体を検出するための合成ペプチド及びその混合物 | |
| CN108727478A (zh) | 一种ibv特异性多肽抗原、抗体、elisa检测试剂盒及其应用 | |
| EP1000177B1 (en) | Synthetic antigens for the detection of antibodies having immunoreactivity against hiv virus | |
| CN101035804B (zh) | 经修饰的hiv-1肽及其在检测抗-hiv抗体中的用途 | |
| AU623949B2 (en) | Synthetic peptide derivatives of gp41 glycoprotein of HIV | |
| JP2002511853A (ja) | Ｈｉｖ抗体の検出方法及びそれに使用する抗原 | |
| US6214537B1 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| US6210874B1 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| WO2005040799A1 (ja) | 相補性ペプチド人工抗体 | |
| US6218102B1 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| AU617201B2 (en) | Novel protein and coding sequence for detection and differentiation of siv and hiv-2 group of viruses | |
| CA2004287A1 (en) | Peptides | |
| Bugge et al. | Competition ELISA using a human monoclonal antibody for detection of antibodies against human immunodeficiency virus type 1 |