NO880409L

NO880409L - Fremgangsmaate for fremstilling av 14,15-substituerte lanosteroler.

Info

Publication number: NO880409L
Application number: NO880409A
Authority: NO
Inventors: James Leroy Gaylor; Robert Paul Johnson; Soo Sung Ko; Ronald Louis Magolda; Simon Hendrik Stam; James Michael Trzaskos
Original assignee: Du Pont
Priority date: 1987-01-30
Filing date: 1988-01-29
Publication date: 1988-08-01
Also published as: PT86665A; NZ223344A; PT86665B; ZA88655B; AU611882B2; NO880409D0; FI880417A7; HUT49145A; AU1117188A; ES2046217T3; CA1328449C; FI880417A0; EP0276823A3; DE3874763D1; DK47788D0; DK47788A; EP0276823A2; GR3006422T3; IL85254A0; KR880009037A

Description

Foreliggende oppfinnelse angår 14,15-substituerte lanosteroler, farmasøytiske preparater.inneholdende slike forbindelser, og anvendelse av disse forbindelser for å inhibere aktiviteten av lanosta-8 , 24-dien-3(3-ol-14a-methyl-demethylase og undertrykke aktiviteten av 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzym A reductase (HMGR), to enzymer som er viktige i cholesterolbiosyntesen. Den totale effekt av disse 14,15-substituerte lanosteroler er å nedsette cholesteroldannelsen som derved resulterer i lavere serum-cholesterolnivå i pattedyr.

Forhøyede konsentrasjoner av serum-cholesterol er

blitt demonstrert ved et utall av kliniske studier å være en dominerende bidragende faktor ved utviklingen og forløpet av atherosclerosis, en sykdomkarakterisert veddannelsen av cholesterol-holdig plakk i aorta og mindre arterier. Plakket er tilbøyelig til å gjentette den arterielle passasje, hvilket gjør det vanskelig, om ikke umulig, for blodet å strømme fra hjertet til forskjellige vev i kroppen. Denne pathobiologiske tilstand kan til slutt føre til coronar hjertesykdom (CDH).

Se eksempelvis Kannel et al. Ann. Intern. Med., 90:85-91 (1979); Final Report of the Pooling Project, J. Chron. Dis., 31:201-

306 (1978). Ved å opprettholde lave cholesterolnivåer i blodet kan arteriell plakkdannelse og CHD muligens unngås. Se eksempelvis Brensike et al., Circulation, 69:313-324 (1984) og Levy et al. Circulation, 69:325-337 (1984).

I pattedyr avledes serumcholesterol fra eksogene næringskilder såvel som gjennom endogen de novo syntese.

Endogen syntese av cholesterol innbefatter et komplekst sett

av enzym-katalyserte reaksjoner og regulerende mekanismer som hittil bare delvis er forstått. Som Rodwell et al., Adv.

Lipid Res., B4:l~74 (1376),indikerer er 3-hydroxy-methylglutaryl coenzyme A reductase (HMGR) generelt akseptert som det hastig-hets-begrensende enzym som kontrollerer cholesterol-biosyntesen fra acetyl-CoA i alle organismer. Brown et al., J. Lipid Res., 21:505-517 (1980) har vist at reguleringen av HMGR er en kompleks prosess som foregår under en motkoblingskontrollmekanisme innbefattende både steroide såvel som ikke-steroide isoprenoid-metabolitter. Forfatterne hevdet at under normale tilstander er cholesterolens evne til å regulere dens egen biosyntese når når den er assosiert med lipoproteinpartikler en side ved denne "feedback-kontrollmekanismen". I tillegg er det blitt vist at når forskjellige oxygenerte steroler anvendes i meget høyrenset tilstand, er disse enda mer effektive enn cholesterol til å svekke graden av HMGR-aktivitet, se Breslow et al., Biochem. Biophys. Acta, 398:10-17 (1975), Kandutsch et al.,

J. Biol. Chem., 252:409-415 (1977), og Chen et al., J. Biol. Chem., 254:715-720 (1979) som fører til den hypotese at oxystero-ler også kan være endogene mediatorer som regulerer HMGR-aktiviteten og cholesterolsyntesen in situ. Se Kandutsch et al., Science. 201:498-501 (1978).

Dette forslag stimulerte en betydelig forsknings-aktivitet. Se eksempelvis Chen et al., J. Biol. Chem., 254: 715-720 (1979); Havel et al., J. Biol. Chem., 254:9573-9582

(1979); Chang et al., J. Biol. Chem., 255:7787-7795 (1980), Chorvat, US-patent 4 230 626 (1980), Gibbons et al., J. Biol. Chem., 255:395-400 (1980); Kandutsch et al., J. Biol. Chem., 255:10814-10821 (1980); Cavenee et al., J. Biol. Chem., 256: 2675-2681 (1981); Tanaka et al., J. Biol. Chem., 258:13331-13339 (1983); og Trzaskos et al., Fed. Proe, 44: 656 (1985). Som et resultat av dette er et utall av inhibitorer av HMGR-aktivitet blitt funnet.

Gibbons et al., J. Biol. Chem., 255:395-400 (1980)

har eksempelvis vist at visse syntetiske oxygenerte lanosterolderivater er aktive inhibitorer av HMGR-aktivitet. Trzaskos et al., Fed. Proe, 44:656 (1985) har vist at in situ-utvikling av Gibbons-forbindelser fører til svekket HMGR-aktivitet og nedsatt cholesterolbiosyntese.

I tillegg har Schroepfer et al., US-patent 4 202 891 og Schroepfer et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA, 81:6861-6865

(1984) vist at andre oxygenerte lanosterolderivater med hell

kan anvendes for å nedsette serum-cholesterolnivåer i dyr.

Ytterligere forbindelser som påvirker HMGR og/eller andre enzymer som er kritiske for serum-cholesterol-biosyntesen trenges. Foreliggende oppfinnelse er rettet mot dette formål.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer nye 14,15-substituerte lanosterolforbindelser av formelen:

hvori

Rx er =0, 0VI1 eller OCOV^;

R2 er H, c^-Cg-alkyl, C2-C6-alkenyl, C2-C6-alkynyl eller aryl-C1-C6-alkyl;

R3 er H, C1-Cg-alkyl, C2-Cg—alkenyl, C2-Cg-alkyny1, aryl-C1-C6-alkyl, CHO, CH2OR4, CH2CH2OR4, CHN0R4, CH2SR4, CH2CH2SR4, CHOR4W2, CHOR5W2, CN, CHZ2, CE^., CHS, CHR4N(R4)2, CH2<CH>2N(R4)2, CH2CH2Z, N(R4)2, SR4, 0R4, CH=NNHR4, poly-(0R4, 0R5, epoxy) C^Cg-alkyl, N(R5>2, NR^, SR5, 0R5, CH=NNHR5, CH2OR5, CH2CH2OR5, CHN0R5, CH2SR5, CH2CH2SR5, CHR4N(R5)2, CHR4NR4R5, CH2CH2N(R$)2, CH2CH2NR4R5, CH2CH2NR4OR4, CHR4NR4OR5, C0W4, CSW4, C(NR4)W4, C(NR4)SR4, C(S)SR4, CHR4NR4N(R4)2, CHR4NR5N(R4)2, CHR4NR4NR4R5, CHR4NR5NR4R5, CHR4NR4N(R^)2, CHR4NR<-N(R^)2, CH2CH2NR4OR5, CHR4NR4OR4, CHR4NR5OR5, CHR4NR5OR4, CH2CH2NR5OR5, CH2CH2NR5OR4, CR4=CR4R5, C=CR5, CR4<=>CR4C(R4)2Z, C<=>C-C(R4)2<Z,>CR4=CR4C(R4)2OR5, C=C-C(R4)2OR5, CR4=CR4C(R4)2OR4, C=C-C(R4)2OR4, C(0)NR4OR4, C(0)NR4OR5, C(S)NR4OR4, C(S)NR4OR5, C(R4)2OR4, C(R4)2OR5, CHR4NR4S02W4, CH2CHR4NR4S02W4, C(R4)2CR4NOR4, C(R4)2CR4NOR5, C(R4>2W5, CR4W5OR4, eller CR4W5SR4;

R4 er H, C^-Cg-alkyl, C2-Cg-alkenyl, aryl, ary l-Cj-Cg-alkyl eller C~-C,-alkynyl;

R5 er C0W3, CSW3 eller C(NR4)W3;

X og Y er uavhengig H, C^-Cg-alkyl, Z, 0R4, 0R5, SR4 , SR5, N(R4)2, N(R5)2, NR4R5, NR4OR4, NR4OR5, NR4N(R4)2, NR^R^, NR4N(R5)2, NR5N(R4)2, NR^NR4R^ eller NR5N(R5)2;

eller X og Y er sammen NR4, NR5,NOR4, NOR5, S, C(R4)2, C(R5)2, CR5R4, NN(R4)2, NNR4R5, NN(R5)2, eller 0;

Z er halogn;

W, er H, C1-C20-alkyl, C2-C2Q-alkenyl, aryl, aryl-C^-C^-alkyl eller C2-C2Q-alkynyl,

W2er H, C^-Cg-alkyl, C2-C6-alkenyl, aryl, aryl-C^-Cg-alkyl eller C2-C6-alkynyl;

W3er H, C1-Cg-alkyl, C2-C6-alkenyl, aryl, aryl-C^-Cg-alkyl,C2-Cg-alkynyl, 0R4eller n(R4)2;

W4er Cj^-Cg-alkyl, C^-Cg-alkenyl, aryl, aryl-C^-Cg-alkyl, C2-Cg-alkynyl, 0R4eller N(R4)2; og

W5er en 5- eller 6-leddet aromatisk'heterocyklisk/ ring inneholdende 1 eller 2 nitrogenatomer som en del av ringen,

.hvilken ring eventuelt er substituert med substituenter valgt fra gruppen bestående av C^-Cg-alkyl og C2-Cg-alkenyl, og deres fysiologisk akseptable salter, forutsatt at

a) når R^ er CHO og X og Y begge er H, og carbon 7-8 og 8-9 er umettet, er R^ forskjellig fra

OH eller 0C0CH3, og R2 er forskjellig fra CU^ ;

b) når R3 er CH3 og carbon 7-8 og 8-9 er umettet, er R1 forskjellig fra OH eller 0C0CH3, R2 er

forskjellig fra CH3eller H, og X og Y er forskjellig fra OH,, OCOH, eller H;

c) når R^ er =0 eller er OW^hvor W, er H eller C,-C,-alkyl, eller er OCOW, hvor W, er C,-C„ -

± b 1x1ZU alkyl eller fenyl, og X er 0R4hvor R4er H eller 0R5 er 0C0W3 hvorW3er<C>1<->C20-alkyl eller fenyl, og Y er H eller OH, er R3 forskjellig fra H eller a C^-Cg-alkyl;

d) når R3 er CH20H eller CH2OCOCH3og R2er H eller CH3, og carboner 6-7, 7-8 eller 8-9 er

umettet, er R^forskjellig fra =0 eller OH eller 0C0CH3, og X er forskjellig fra H eller OH; e) når X og Y begge er H er R3 forskjellig fra H eller CH3;

f) når X og Y begge er H er R 3 forskjellig fra

OH og R2er forskjellig fra H;

g) når R2er H og R3 er a OH, og X er 3 OH, og

Y er a H, og carboner 6-7, 7-8 og 8-9 er mettet,

er R^forskjellig fra OH; h) når X er OH, 0R5, N(R4>2, N(R5>2, NR^R^, SR5, NR40R4eller NR4OR5, er Y forskjellig fra Z,

OH, 0R5, SR5, NR4OR4, NR4OR5, N(R4>2eller<N>(<R>5)2<;>

i) når R_. er H, OH, eller C,-C,-alkyl, er X og Y

j lb

sammen forskjellig fra 0;

j) når R^ er a OH, X er a OH og Y er H, og carboner

8-9 er umettet, er R1forskjellig fra 0C0CH3;

k) når R3er CN eller CHNOH og carboner 7-8 er umettet, er R1forskjellig fra 0C0CH3, R2er forskjellig fra H eller CH3, og X og Y er forskjellig fra H; og 1) når R3er C0NH0H eller C0NH0C0CH3og X og Y begge er H, og R2er CH3og carbon 7-8 er umettet, er R-j^ forskjellig fra OH eller 0C0CH3.

De ovenfor angitte forbindelser, såvel som visse andre forbindelser, er effektive inhibitorer av lanosta-8,24-dien-3|3-ol-14a-methyl-demethylase-aktivitet og midler som 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzym< A reductase (HMGR)-aktivitet. Ved interferering med disse enzymer, som begge er essensielle ved cholesterolbiosynteseveien, nedsettes cholesteroldannelsen og serumcholesterolnivåer reduseres.

Foreliggende oppfinnelse innbefatter således tera-peutiske farmasøytiske preparater for inhibering av lanosta-8, 24-dien-3[3-ol-14a-methyl-demethylase-aktivitet, og for undertrykkelse av HMGR-aktivitet, som nedsetter cholesteroldannelsen og senker serumcholesterolnivåer i pattedyr. De farmasøytiske preparater omfatter (i) en effektiv mengde av en forbindelse av formelen:

hvori

R1er -0, 0W17eller OCOW.^

R2er H, C^-Cg-alkyl, C^-Cg-alkenyl eller aryl-C1-Cg-alkyl;

R3er H, Cj-Cj-alkyl, C2-<C>6-<a>lkenyl, C2-C6 alkynyl, aryl-C1 -C,-alkyl, CHO, CH2OR4, C<H>2C<H>2OR4, CHN0R4 , CH2 SR4 , CH2 CH2 SR4 , CH0HW2, CH0R4WJfCHOR5W2, CN, CHZ2 , CH2Z, CHS, CHR4N(R4)2, CH2CH2N(R4 )2 f CH2CH2Z, N(R„)2, S<R>4,0<R>4, CH-NNHR4, poly-(OR4, 0R5, epoxy) C1-C6 alkyl, N(R5)2, NR4<R>5, SR5 , 0R5 , CH-NNHR& , CH2OR5, CH2CH2OR5, CHNOR5, CH2 SR5 , C<H>2C<H>2SR5, CHR4N(R5)2, CHR4 NR4 R5 ,

CH2 CH2N(R5 )2 , CH2CH2NR4R5, CH2 CH2 NR4 0R4 ,

CHR4NR4OR5, COW4, CSW4, C(NR4)W4, C(NR4)SR4,

C(S)SR4, CHR4NR4N(R4)2, CHR4NR,-N(R4)2,

CHR4NR4NR4R5, CHR4NR5NR4R5, CHR4NR4N(R^)2, CHR4NR5N(R5)2, CH2CH2NR4OR5, CHR4NR4OR4, CHR4NR5OR5, CHR4NR5OR4, CH2CH2NR5OR5, CH2CH2NR5OR4, CR4=CR4R5, C=CR5, CR4=CR4C(R4)2Z, C<=>C-C(R4)2Z, CR4=CR4C(R4)2OR5, C=C-C(R4)2UR5, CR4=CR4C(R4)2OR4, C<=>C-C(R4)2OR4, C(0)NR4OR4, C(0)NR4OR5, C(S)NR4OR4, C(S)NR4OR5, C(R4)2OR4, CfR^OR^CHRjiNR4S02W4, CH2CHR4NR4S02W4, C (R4 ) 2CR4NOR4 , C(R4)2CR4NOR5, C(R4)2CR4NOR4, C(R4)2CR4NOR5,

C(R4)2W5, CR4W5OR4, eller CR4W5SR4;

R4 er H, C^-Cg-alkyl, C^-Cg-alkenyl,

aryl, aryl-C-^-Cg-alkyl eller C^-Cg-alkynyl;

R5 er COW3, CSW3 eller C(NR4)W3;

X og Y er uavhengig av H, C-^-Cg-alkyl,

Z, 0R4, 0R5, SR4, SR5, N(R4)2, N(R5>2

NR4R5, NR4OR4, NR4OR5, NR4N(R4)2, NR^R^, N<R>4<N>(<R>5)2, NR5N(R4)2, NR,-NR4R,-, eller NR5N(R5)2; eller X og Y er sammen NR4, NR5, NOR4, NOR5, S, C(R4)2, C(R5)2, CR5R4, NN(R4)2, NNR4R,-, NN(R5)2eller 0;

Z er halogen;

VI ^ er H, C1-C20-alkyl, C2-C2Q-alkenyl,

aryl, aryl-C^-C^-alkyl eller C2-C2Q-alkynyl,

W2 er H, C^-Cg-alkyl, C^-Cg-alkenyl, aryl, aryl-C^-Cg-alkyl, eller C^-Cg-alkynyl;

W3 er H, C^-Cg-alkyl, C2-C6~alkenyl, aryl, aryl-C^^-Cg-alkyl, C2~C6-alkynyl, 0R4 eller<N>(<R>4)2;

W4 er C-j^-Cg-alkyl, C2-C6-alkeny1, aryl, aryl-C1-C6-alkyl, C2-C6~alkynyl, 0R4 eller N(R4)2; og

W5 er en 5- eller 6-.mettet aromatisk heterocyklisk ring inneholdende 1 eller 2 nitrogenatomer som en del av ringen, hvilken ring eventuelt er substituert med substituenter valgt fra gruppen bestående av C^-Cg-alkyl og C^-Cg-alkenyl;

og deres fysiologisk akseptable salter;

forutsatt at

a) når R3 er CHO og X og Y begge er H, og carbon 7-8 og 8-9 er umettet, er R1 forskjellig fra OH eller 0C0CH3, og R2 er

forskjellige fra CH3; b) når R3 er CH3 og carbon 7-8 og 8-9 er umettet, er R1 forskjellig fra OH eller 0C0CH3,

R2 er forskjellig fra CH3 eller H, og X og

Y er forskjellig fra OH; 0C0CH3 eller H;

c) når R, er =0, eller er 0W^ hvor W, er „H

eller C,-C,-alkyl, eller er OCOW, hvor

lo 1

W-^er C^-C^-alkyl eller fenyl, og X er

0R4hvor R4er H og 05er 0C0W3hvori W^ er C-^-C^-alkyl eller fenyl, og Y er

H eller OH, er R3forskjellig fra H

eller a C^-Cg-alkyl;

d) når R3er CH20H eller CH2OCOCH3 og R2

er H eller CH3, og carbon 6-7, 7-8

eller 8-9 er umettet, er R1forskjellig fra =0 eller OH eller 0C0CHv og X er forskjellig fra H eller OH; e) når X og Y begge er H, er R3forskjellig fra H eller CH3; f) når X og Y begge er H, er R3 forskjellig fra OH, og R2er forskjellig fra H;

g) nårR2er H, og R3er a OH, og X er 3 OH,

og Y er a H, og carbon 6-7, 7-8 og 8-9

er mettet, er R^forskjellig fra OH;

h) når X er OH, 0R5, N(R4)2# N(R5)2, NR4R,-,

SR5, NR4OR4, eller NR4OR5, er Y forskjel-

lig fra Z, OH, 0R5, SR5, NR4OR4, NR4OR5,

N(R4)2eller N(R5)2; og

i) når R3er H, OH eller C^-Cg-alkyl, er X

og Y sammen forskjellig fra 0;

og (ii) en farmasøtysik bærer eller fortynningsmiddel.

I tillegg omfatter foreliggende oppfinnelse metoder for inhibering av lanosta-8 , 24-dien-3|3-ol-14oc-methyl-demethy-lase-aktivitet, undertrykkelse av HMGR-aktivitet, nedsettelse av cholesteroldannelse og senkning av serumcholesterolnivåer, omfattende administrering til et pattedyr av en effektiv mengde av en forbindelse av formelen:

hvori

R1er =0, OW-j^, eller OCOV^;

R2er H, C^-Cg-alkyl, C2-C6-alkenyl, eller aryl-C1-Cg-alkyl;

R3er H, C^-Cg-alkyl, C^Cg-alkenyl, C2-C6-alkynyl, aryl-C^-Cg-alkyl, CHO, CH2OR4, CH2CH2OR4, CHN0R4, CH2SR4, CH2CH2SR4, CH0HW2, CHOR4W2, CHOR5W2, CN, CHZ2, CH2Z, CHS, CHR4N(R4)2, CH2CH2N(R4)2, CH2CH2Z, N(R4)2#SR4, 0R4, CH=NNHR4, poly-(0R4, 0R5, epoxy) C1-C6-alkyl, N(R5)2#NR4R^-' SR5'0R5'CH=NNHRC, CH„0Rc, CH„CH„0Rc, CHN0Rc, CH0SRC,

5 25 225 5 25

CH0CH„SRC, CHR.N(RC)0, CHR.NR.Rc,

Z Z d4 DZ445 CH2CH2N(R5)2, CH2CH2NR4R5, CH2CH2NR4OR4, CHR4NR4OR5, C0W4, CSW4, C(NR4)W4, C(NR4)SR4, C(S)SR4, CHR4NR4N(R4)2, CHR4NRj-N(R4)2, CHR4NR4NR4R5, CHR4NR^NR4R^, CHR4NR4N(R,.) 2 , CHR4NR5N(R5)2, CH2CH2NR4OR5, CHR4NR4OR4, CHR.NRc0Rc, CHR.NRc0R. , CH„CHnNRc0Rc ,

455 454' 2255 CH2CH2NR5OR4, CR4=CR4R5, C=CR5, CR4=CR4C(R4)2Z, C=C-C(R4)2Z, CR4=CR4C(R4)2OR5, C=C-C(R4)2OR5, CR4=CR4C(R4)2OR4, C=C-C(R4)2OR4, C(0)NR4OR4, C(0)NR4OR5, C(S)NR4OR4, C(S)NR4OR5, C(R4)2OR4, C(R4)2OR5, CHR4NR4S02W4, CH2CHR4NR4S02W4, C(R4)2CR4NOR4,

C(R4)2CR4NOR5, C(R4)2W5, CR4W5OR4, eller CR4W5SR4;

R4er H, C1-Cg-alkyl, C^-Cg-alkeny1,

aryl, aryl-C^-Cg-alkyl, eller C^-Cg-alkynyl;

R5er COW3, CSW2, eller C(NR4)W3;

X og Y er uavhengig H, C-^-Cg-alkyl, Z, 0R4, 0R5, SR4, SR5, N(R4)2, N(R5)2, NR4R5, NR4OR4, NR4OR5, NR4N(R4)2, NR^R^,NR4N(R2)2, NR5N(R4)2, NR^NR4Rj-, eller NR5N(R5)2; eller X og Y er sammen NR4, NR5, NOR4, NOR5, S, C(R4)2, C(R5)2, CR5R4, NN(<R>4)2, NNR^, NNfR^, eller 0;

Z er halogen;

W, er H, C1-C2Q-alkyl, C2-C2Q-alkenyl, aryl, aryl-C1~C20-alkyl, eller C2-C2Q-alkynyl, W2er H, C1-Cg-alkyl, C2-Cg-alkenyl, aryl, aryl-C-^-Cg-alkyl, eller C2-Cg-alkynyl;

W3er H, C1-Cg-alkyl, C2-C6-alkenyl, aryl, aryl-C^-Cg-alkyl, C2-C6-alkynyl, 0R4, eller<N>(<R>4)2;

W4er C-j^-Cg-alkyl, C^-Cg-alkenyl, aryl, aryl-C^-Cg-alkyl, C^-Cg-alkynyl, 0R4, eller N(R4)2; og Wr er en 5- eller 6-leddet aromatisk heterocyklisk ring inneholdende 1 eller 2 nitrogenatomer som en del av ringen, hvilken ring eventuelt er substituert med substituenter valgt fra gruppen bestående av C-^-Cg-alkyl og C2~ C6~

alkenyl;

og deres fysiologisk akseptable salter; forutsatt at

a) når R3er CHO, når X og Y begge er H, og carbon 7-8 og 8-9 er umettet, er R^

forskjellig fra OH eller 0C0CH3, og R2er forskjellig fra CH3;

b) når R3 er CH3 og carbon 7-8 og 8-9 er umettet, er R, forskjellig fra OH eller

0C0CH3, R2 er forskjellig fra CH3eller H, og X og Y er forskjellig fra OH, 0C0CH3eller H;

c) når R1 er =0, eller er 0W1hvor W1er H

eller C-^Cg-alkyl, eller er OCOW1hvor W1

er C^-C^Q-alkyl eller fenyl, X er OR^hvor R. er H eller 0RC er 0C0Wo hvor W0 er

4 O J J C^-C2Q-alkyl eller fenyl, og Y er H eller

OH, er R3forskjellig fra H eller aC^-Cg-alkyl;

d) når R3 er CH20H eller C^OCOCH^ R2er H

eller CH3, og carbon 6-7, 7-8 eller 8-9

er umettet, er R^forskjellig fra =0

eller OH eller 0C0CH3, og X er forskjellig fra H eller OH;

e) når X og Y begge er H, er R3forskjellig fra H eller CH3; f) når X og Y begge er H, er R3forskjellig fra OH og R2 er forskjellig fra H; g) når R2 er H, R3 er aOH, X er 30H, og Y er otH, og carbon 6-7, 7-8 og 8-9 er mettet,

er forskjellig fra OH; og

h) når X er OH, 0R5, N(R4)2, N(R5)2, NR^R^,

SR5, NR4OR4, NR40R5 er Y forskjellig fra

Z, eller OH, 0R5, SR5, NR4OR4, NR4OR5,

N (R4)2, N(R5)2; og

i) når R3er H, OH, eller C^-Cg-alkyl, er

X og Y sammen forskjellig fra 0.

I de ovenfor angitte formler kan ringstrukturen være fullt ut mettet, eller kan være umettet mellom én av carbon-posisjonene 6-7, 7-8 eller 8-9, eller mellom både carbon-posisjonene 6-7 og 8-9. Av hensiktsmessige grunner betegnes forbindelsene her som "d"-forbindelsen når den er fullt ut mettet, "a"-forbindelsen når den er mettet i 8-9-posisjonen, "b"-forbindelsen når den er mettet i 7-8-posisjonen, "c"-forbindelsen når den er umettet i 6-7-posisjonen, og "a/c"-forbindelsen når den er umettet i både posisjon 6-7 og 8-9.

Som anvendt her skal substituenten betegnet som "poly-(0R4, ORj-, expoxy) c^-cg~ alkyl" forståes å bety en til Cg alkylkjede substituert med én eller flere av en hvilken som

helst kombinasjon av OR^, OR,, og epoxy.

Som anvendt her betegner uttrykket "alkyl", anvendt enten alene eller i kombinasjon med andre uttrykk slik som "poly-(OR4, 0R5, expoxy) C^-Cg alkyl" eller "arylalkyl", rettkjedet eller forgrenet alkyl, for eksempel methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl og de forskjellige butyl-, pentyl- eller hexyl-isomerer.

Som anvendt her angir uttrykket "alkenyl", anvendt enten alene eller i kombinasjon med andre uttrykk, rettkjedet eller forgrenet mono- eller poly-umettet alkyl, f.eks. vinyl, propenyl (allyl), crotyl, isopentenyl, og forskjellige butenyl, pentenyl, hexadienyl og hexenylisomerer.

Som anvendt her angir uttrykket "alkynyl", anvendt enten alene eller i kombinasjon med andre uttrykk, rettkjedet eller forgrenet mono- eller poly-umettet alkyl, f.eks. ethynyl, propynyl (propargyl), 2-butynyl og andre butynylisomerer, og de forskjellige pentynyl, hexadiynyl og hexynylisomerer.

Som anvendt her angir uttrykket "acyl", anvendt enten alene .eller i kombinasjon med andre uttrykk, en carbonylgruppe bundet til en alkyl, alkenyl, alkynyl, arylalkyl eller aryl-gruppe, eksempelvis acetat, butyrat, benzoat, og forskjellige alkyl, alkenyl, alkynyl eller arylisomerer.

Som anvendt her angir uttrykket "halogen" fluor, klor, brom og jod.

Med hensyn til de ovenfor angitte forbindelser, preparater og metoder for anvendelse av disse, er de foretrukne kategorier av forbindelser:

1. Forbindelser hvori

R» er H, C,-C,-alkyl, eller aryl-C,-C,-alkyl;

z 1 b lb

R3er H, C^-Cg-alkyl, C^-Cg-alkenyl, C2~Cg-

alk<y>nyl, aryl-C^-Cg-alkyl, CHO, CH2OR4,

CH2CH2OR4, CHNOR4, CH2SR4, CH2CH2SR4, CHOR^, CHOR5W2, CN, CHZ2, CH2Z, CHS, CHR4N(R4)2, CH2CH2N(R4)2, CH2CH2Z, N(R4)2#SR4, 0R4,

CH=NNHR4, poly-(OR4, 0R5, epoxy) C-j-Cg-

alkyl, N(R5)2, NR4R5, SR5, 0R5, CH=NNHR,-,

CH2OR5, CH2CH2OR5, CHNOR5, CH2SR5, CH2CH2SR5,

CHR4N(R5)2, CHR4NR4R5, CH2CH2N(Rg)2, CH2CH2NR4R5, CH2CH2NR4OR4, eller CHR4NR4OR5; og X og Y er uavhengig H, C^-Cg-alkyl, Z, 0R4, 0R5,SR4, SR5, N(R4)2, N(R5)2, NR4R^-, NR4OR4, eller NR4OR5;

eller X og Y er sammen NR4, NR^, NOR4, NOR5, S,<C>(<R>4)2, C(R5)2, eller CR^.

2. Forbindelser hvori

R2 er C2-Cg-alkenyl, eller C^-Cg-alkynyl.

3. Forbindelser hvori

R3 er COW4, CSW4, C(NR4)W4, C(NR4)SR4, C(S)SR4, CHR4NR4N(R4) 2, CHR4NR5N(R4)2, CHR4NR4NR4R[-, CHR4NR5NR4R5, CHR4NR4N(R,-) 2 , CHR4NR^N(R^)2, CH2CH2NR4OR5, CHR4NR4OR4, CHR4NR5OR5, CHR4NR5OR4, CH2CH2NR5OR5, CH2CH2NR5OR5, CR4=CR4R5, C=CR5, CR4-CR4C(R4)2Z, C=C(R4)2Z, CR4=C<R>4C(R4)2OR5, C-C-C(R4)2OR5, CR4=CR4C(R4)2OR4, C=C-C(R4)2OR4'C(0)NR4OR4, C(0)NR4OR5, C(S)NR4OR4, C(S)NR4OR5, C(R4)2OR4, C(R4)2OR5, CHR4NR4S02W4, CH2CHR4NR4S02W4, C(R4)2CR4NOR4, C(R4)2CR4NOR5, CR4W5OR4, eller CR4W5SR4,

4. Forbindelser hvori

R3 er COW4, CSW4, C(NR4)W4, C(NR4)SR4, C(S)SR4, CHR4NR4N(R4)2, CHR4NR5(R4)2, CHR4NR4NR4R^, CHR4NR5NR4R5, CHR4NR4N(R,-) 2 , CHR4NR,-N (R^)2/ CH2CH2NR4OR5, CHR4NR4OR4, CHR4NR5OR5, CHR4NR5OR4, CH2CH2NR5OR5, CH2CH2NR5OR4, CR4=CR4R5, C-CR5, CR4=CR4C(R4)2Z, C=C-C(R4)2Z, CR4=CR4C(R4)2OR5, C=C-C(R4)2OR5, CR4<=CR>4C(R4)2OR4, C=C-C(R4)2OR4, C(S)NR4OR4, C(S)NR4OR5, C(R4)2OR4, C(R4)2OR5, CHR4NR4S02W4, CH2CHR4NR4S02W4, C(R4)2CR4NOR4, C(R4)2CR4NOR5, CR4W5OR4, eller CR4W5SR4.

5. Forbindelser hvori

X og Y uavhengig er NR4N(R4)2, NR4NR4Rj-, NR4N(R5)2, NR5N(R4)2, NR^NR4R^, eller NR5N(R5)2;

eller X og Y sammen er NN(R4>2, NNR4R<-, NN(R5>2, eller 0.

6. Forbindelser hvori

R3er H, C1-Cg-alkyl, C2-C6~alkenyl, aryl-C1-C6-alkyl, C^-Cg-alkynyl, CHO, CH2OR4, CH2CH2OR4, CHNOR4, CH2SR4, CH2CH2SR4, CHOR4W2, CHOR5W2, CN, CHZ2, CH2Z, CHS, CHR4N(R4)2, CH2<CH>2N(R4)2, CH2CH2Z, N(R4)2, SR4, CH=NNHR4, poly-(OR4, 0R5, epoxy) C-^Cg-alkyl, N(R5)2, NR4R5, SR5, 0R5, CH=NNHR5, CH2OR5, CH2CH2OR5, CHNOR5, CH2SR5, CH2CH2SR5, CHR4N(R5)2, CHR4NR4R5, CH2CH2N(R5)2, CH2CH2NR4R5, CH2CH2NR4OR4, eller CHR4NR4OR5.

7. Forbindelser hvori

R3er H, C-^Cg-alkyl, C2-Cg-alkenyl, aryl-Cl~C6~alky1, CHOR4W2'CHOR5W2, C1-C6-alkynyl, CHO, CH2OR4, CH2CH2OR4, CHNOR4, CH2SR4, CH2CH2SR4, CHOHOW2, CHZ2, CHZp, CHS, CHR4N(R4)2, CH2CH2N(R4)2, CH2CH2Z, N(R4)2, SR4, CH=NNHR4, poly-(OR4, 0R5, epoxy) C1-C6-alkyl, N(R5>2, NR4R5#SR5, 0R5, CH=NNHR5, CH2OR5, CH2CH2OR5, CHNOR5, CH2SR5, CH2CH2SR5, CHR4N(R5)2, CHR4NR4R^, CH2CH2N(R5)2;

CH2CH2NR4R5, CH2CH2NR4OR4, eller CH2R4NR4OR5.

8. Forbindelser hvori

X og Y uavhengig av H, C-^Cg-alkyl, 0R4, 0R5, SR5, SR4, N(R4)2, N(R5)2, NR4R5, NR4OR4, eller NR4OR5;

eller X og Y sammen er NR4, NR,., NOR4, NOR5, S,<C>(<R>4)2, C(R5)2, eller CR^.

9. Forbindelser hvori

X og Y uavhengig er H, C-^-Cg-alkyl, Z, 0R4, 0R5, SR5, S<R>4,N(R4)2, NR4OR4, NR4OR5, N(R5)2eller NR4R5; og

eller hvor X og Y sammen er NR4, NR,-, NOR5, S,<C>(<R>4)2, C(R5)2eller CR^.

10. Forbindelser hvori

R1er OH;

R2er H eller CH3;

R3er CHF2, CH0HCHCH2, CHNOH, CN, CH3, CH2CH=CH2, eller OH; og

X og Y uavhengig er H, F eller OH;

eller hvor X og Y sammen er NOH.

11. Forbindelser hvori

R^er OH;

R2er H eller CH3;

R3er CHF2, CHOHCHCH2, CHNOH, eller CH2CH=CH2; og X og Y er uavhengig H eller OH.

12. Forbindelser hvori

R1er OH, eller OCOW1, hvor W1er fenyl eller CH3;

R2er H eller CH3;

R3er H, CHO, CH2OR4 hvori R4er H eller C^-Cg-alkyl, CHNOH, CH3, CN, OH, eller CHR4N(R4)2, hvori R4er H eller CH3; og X og Y uavhengig er H, F eller OH;

eller hvor X og Y sammen er NOH.

13. Forbindelser hvori

R1er OH;

R2er CH3;

R3er CH3, CN eller OH; og

X og Y uavhengig er H, F eller OH;

eller hvor X og Y sammen er NOH.

14. Forbindelser hvori

X og Y uavhengig er C^-Cg-alkyl, OR,-, SR4, S<R>5,N(R4)2, N(R5)2, NR4R5, NR4OR4, NR4OR5, NR4N(R4)2, NR4NR4R5, NR^fR^, NR^fR^, NR5NR4R5, NR5N(R5)2, eller 0R4, hvor R4er C^-Cg-alkyl, C^-Cg-alkenyl, aryl, aryl-Cj^-Cg-alkyl, eller C^-Cg-alkynyl,

eller hvor X og Y sammen er NR4, NR,., NOR4, NOR5, S, C(R4)2, C(R5)2, CR5R4, NN(R4>2, NNR4R5, eller NN(R5>2.

Mange av de ovenfor angitte forbindelser er foretrukne på grunn av enkel syntese og/eller større effektivitet.

Spesielt foretrukne på grunn av enkel syntese og/eller sterk effektivitet er: 32 , 32-dif luor-lanost-8-en-3(3-ol ; 32 , 32-dif luor-lanost-7-en-3(3-ol ; 4,4-dimethyl-14a-(11-hydroxy-21 - propenyl) -5a-cholest-8-en-3(3-ol; • 14a-allyl-4,4-dimethyl-5a-cholest- 8-en-3|3-ol-15-oxim; A lanost-8-en-32-aldoxim-3|B-ol; • lanost-7-en-32-aldoxim-3|3-ol; • 14a-cyano-4,4-dimethyl-5a-cholest-8-en-3|3-ol; • 15a-fluor-lanost-7-en-3p-ol; • 15a-fluor-14a-methyl-5a-cholest-7-en-3|3-ol; • 3p-hydroxy-lanost-8-en-15-oxim; a 3p-hydroxy-lanost-7-en-15-oxim; 4,4-dimethyl-5a-cholest-8-en-3(B , 14a, 15a-triol; • 5a-cholest-8-en-3p,14a,15a-triol; • 3|3-hydroxy-lanost-8-en-32-ohydroxaminsyre ; • 3p,15a-dihydroxy-lanost-8-en-32-al; • 3|B-hydroxy-lanost-8-en-3 2-aldoxim-15-oxim; • 3|3-acetoxy-lanost-8-en-32-aldoxmin; • 3[3-acetoxy-lanost-7-en-15-oxim;

lanost-6-en-32-aldoxim-3|3-ol;

O 15a-amino-lanost-8-en-3|3-ol;

14a-amino-4,4-dimethyl-5a-cholest-

8-en-3(3-ol;

®4,4-dimethyl-14a-(N-formyl-amino)-5a-cholest-8-en-3|3-ol;

4,4-dimethyl-14a-(N-ethoxycarbonylamino)-5a-cholest-8-en-3(3-ol; og

3 2-ethynyl-lanost-8-en-3|3 , 3 2-diol.

Forbindelsene av de ovenfor angitte formler kan anvendes for å inhibere lanosta-8,24-dien-3(3-ol-14a-methyl-demethylase-aktivitet, undertrykke HMGR-aktivitet, nedsette cholesteroldannelse og senke serumcholesterolnivåer i pattedyr. Disse forbindelser kan illustreres alene eller i kombinasjon med farmasøytisk akseptable bærere eller fortynningsmidler egnet for den angitte administreringsmåte. Administreringen kan være oral, sublingual, buccal, topisk og parenteral slik som intra-venøs, subcutan eller intramuskulær. Akseptable bærere og fortynningsmidler er velkjente i det farmasøytiske fag, og er beskrevet for eksempel i Remington's Pharmaceutical Sciences, Gennaro, A. R., ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1985).

Den anvendbare dose som skal administreres og administrerings-måten vil variére avhengig av alder, vekt og arten av det pattedyr som behandles.

Kort angitt er mekanismen ved hvilken de aktive 14,15-substituerte lanosterolforbindelser ifølge oppfinnelsen er antatt å virke, som følger.

Den observerte nedsettelse i HMGR-aktivitet er antatt å oppstå som et resultat av en nedsatt syntese av HMGR-protein og/eller en forøket grad av HMGR-nedbrytning (kollektivt angitt her som 11 suppres jon") . Den observerte nedsettelse av lanosta-8 , 24-dien-3(3-ol-14a-methyl-demethylase-aktivitet er antatt å oppstå som et resultat av en direkte virkning av forbindelsene på demethylaseenzymet (heretter angitt som "inhibering"). Inhiberingen av lanosta-8 , 24-dien-3|3-ol-14a-methyl-demethylase-aktiviteten er også antatt å føre til produksjon av molekyler som i sin tur virker som undertrykkende midler på den ovenfor beskrevne HMGR-aktivitet. Disse virkninger er i sin tur kollektivt antatt å føre til en nedsettelse av cholesterolsyntesen og en reduksjon i serumcholesterolnivåer.

Generell prosedyre for fremstilling av umettede 14, 15-substituerte lanosteroler

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen oppfyller de nød-vendige krav for lanosta-8,24-dien-3p-ol-14a-methyl-demethylase-inhibering og undertrykkelse av HMGR-aktivitet. For å fremstille disse forbindelser ble et tre-grens syntetisk system anvendt, dvs. monosubstitusjon ved 14- eller 15-stilling og disubstitusjon ved 14- og 15-stillingene.

14- monosubstitusjon (Reaksjonsskjerna I-V)

Innføring av den egnede substituent ved 14a-posi-s jonen krevet bearbeidelse av lanosta-8 , 2 4-dien-3(3-ol (Reaksjonsskjerna I, Forbindelse 1) til den beskyttede 3|i-hydroxy-14a-hydroxymethyl-dihydrolanosterol (Forbindelse 6).

Omdannelsen av den kommersielt tilgjengelige lanosta-8,24-dien-3p-ol til diolen (Forbindelse 2) ble oppnådd under anvendelse av prosedyren beskrevet i Parish et al., J. Lipid Res., 22: 859-868 (1981). For å anvende dette mellomprodukt i foreliggende studier ble en ny syntesevei som muliggjorde selektiv beskyttelse av 3p-hydroxygruppen mens 14a-hydroxymethylgruppen var fri for bearbeidelse, anvendt. Det å trekke for-del av den sterisk hindrede sekundære alkohol ved 7a-stilling, ble diolen (Forbindelse 2) behandlet med friskt destillert benzoyl-klorid i tørr pyridin ved 40° i 25 minutter. Reaksjonen førte etter silicagelkromatografi, til gjenvinning av 32-benzoat (Forbindelse 3) i 48 % utbytte. Under anvendelse av den ret-tende effekt av 7a-hydroxylgruppen ble den resulterende forbindelse 3 oxydert i tilbakekokende benzen under en nitrogenatmosfære ved hjelp av omkrystallisering (fra eddiksyre)-bly-tetraacetatbehandling. Etter 17 timer tilbakeløpskokning etterfulgt av silicagelkromatografi ble det ønskede furan, Forbindelse 4, erholdt i et utbytte på 70 %. Furanring-splitting av Forbindelse 4 ble oppnådd ved at 4 ble utsatt for overskudd av pyridinhydroklorid i tilbakeløpskokende eddiksyreanhydrid i 18 timer under en nitrogenatmosfære. Tre olefin-isomerer av det dannede acetat av Forbindelse 5 (Forbindelser 5a, 5b og 5c) ble erholdt i et totalt utbytte på 60 %.

Separering av isomerene ved silicagelkromatografi (MPLC) ga 5c (16 % utbytte), og separering ved høytrykksvæske-kromatografi (HPLC) ga 5a (19 % utbytte) og 5b (27 % utbytte). Med alle tre olefiniske isomerer separert ble den sluttelige selektive hydrolyse oppnådd ved behandling av 5a med ethanolisk kaliumhydroxyd i 2 timer ved 0°, for å dannelse Forbindelse 6a i 68 % utbytte. På samme måte ble både Forbindelse 6b (73 % utbytte) og 6c (62 % utbytte) også erholdt, som tilveiebragte en inngang til de dobbeltbunnisomerer av de 14oc-substituerte serier.

Etter fremstilling av den kritiske monobeskyttede

diol, Forbindelse 6, var det neste mål en bearbeidelse av denne forbindelse til de ønskede 14oc-substituerte dihydrolanosteroler. Dette er vist i Reaksjonsskjema II.

Oxydasjon av 14a-hydroxymethylgruppen til 14a-carboxaldehyd Forbindelse 7a ble oppnådd i et utbytte på 93 % ved behandling av Forbindelse 6a med Jones reagens (fremstilt som beskrevet i Meinwald et al., Org. Syn., 45:77-79 (1965)

ved -10° i 15 minutter. Forbindelse 7a ble deretter gjenvunnet under anvendelse av silicagelkromatografi under middels trykk (MPLC). På samme måte ble Forbindelse 7b fremstilt i 85 %

utbytte. 14a-carboxaldehyd Forbindelse 7c ble fremstilt i 60 % utbytte ved behandling ved romtemperatur av en diklormethanløs-ning av Forbindelse 6c med pyridiniumdichromat og pulverformede 4A-molekylsiler, etterfulgt av silicagel-rensing på MPLC.

Når den azeotropisk (benzen) tørkede aldehydforbin-delse 7a ble utsatt for rent DAST (diethylaminosvoveltrifluorid) under argonatmosfære i 4,5 timer ved 80° ble 14a-difluormethyl-dihydrolanosterol, Forbindelse 8a, erholdt i et 76 % utbytte. På samme måte ble Forbindelse 8b fremstilt fra Forbindelse 7b i 48 % utbytte. En vannfri (destillert over benzofenon og natrium) diethyletherløsning av Forbindelse 8a ble utsatt for lithiumaluminiumhydrid ved romtemperatur i 2 0 minutter, resulterende i den ønskede 3p-hydroxy-14a-difluor-methyldihydrolanosterol, Forbindelse 9a, i 86 % utbytte. Di-fluoridet, Forbindelse 9a, sammen med en annen olefinisomer, Forbindelse 9b, fremstilt på lignende måte i 86 % utbytte, utgjorde to eksempler på 14a-substituerte lanosteroler innen oppfinnelsens ramme.

Ytterligere bearbeidelse av 14a-stillingen (Reaksjonsskjema III) ble oppnådd ved behandling av hydroxyaldehyd-Forbindelse 10 (fremstilt som beskrevet av Shafieo et al.,

J. Lipid Res., 27:1-10 (1986) med et utall av alkyl og alkenyl-anioner (Grignard-reagenser, lithium-reagenser).

Når en vannfri tetrahydrofuranløsning av Forbindelse 10a ble utsatt for et overskudd av en vinylmagnesiumbromid-tetrahydrofuranløsning ved romtemperatur, ble det dannet dia-stereomere dioler, Forbindelse lia og Forbindelse 12a i et kombinert utbytte på 87 %. Diastereomerene ble separert ved MPLC under dannelse av Forbindelse lia i 66 % utbytte og Forbindelse 12a i 21 % utbytte. Forbindelser lia og 12a er to ytterligere eksempler på 14cx-substituerte lanosteroler ifølge oppfinnelsen. På samme måte kan Forbindelser 11b, lic, 12b og 12c fremstilles.

Forbindelse 13, hvilke forbindelser hører inn under oppfinnelsens ramme, kan fremstilles på en lignende måte ved tilsetning av CH^eller et hvilket som helst alkyl, alkenyl, aryl, arylalkyl eller alkynylanion til Forbindelse 10.

Nitrogen ble innført i steroidforbindelsen (Reaksjonsskjema IV) ved behandling av aldehydforbindelsen 7b med hydroxylaminhydroklorid i pyridin i 16 timer.

Det resulterende oxim, Forbindelse 14b, ble erholdt i et utbytte på over 95 %. På lignende måte ble Forbindelse 14a (96 % utbytte) og 14c (70 % utbytte ved 80°) fremstilt fra Forbindelser 7a og 7c.

Benzoatet ble fjernet fra Forbindelse 14b med ethanolisk kaliumhydroxydløsning resulterende i hydroxyoximet 15b i 94 % utbytte. På samme måte ble oximene 15a og 15c fremstilt fra Forbindelser 14a og 14c. Forbindelser 15a, 15b og 15c er alle innen oppfinnelsens ramme.

Fremstilling av 14oc-carbonitrilet ble oppnådd (Reaksjonsskjema IV) ved dehydrogenering av oximforbindelsen 14a direkte med fenylisocyanat og friskt destillert triethylamin, som etter silicagelkromatografi ga carbonitrilet, Forbindelse 16a, i 85 % utbytte.

På lignende måte ble Forbindelse 16b og 16c fremstil fra Forbindelse 14b og 14c. Når Forbindelse 16a ble utsatt fo ethanolisk kaliumhydroxyd førte dette til en fjerning av benzoatet og en dannelse, etter silicagelkromatografi, av det ønskede nitril, Forbindelse 17a (en forbindelse ifølge oppfinnelsen) i 90 % utbytte. På samme måte kan nitrilforbindelsene 17b og 17c, også innen oppfinnelsens ramme, fremstilles.

For å fremstille et utall av 14a-substituerte lanosteroler ble enonene, Forbindelse 18 og 19 (Reaksjonsskjema V) fremstilt under anvendelse av de prosedyrer som tidligere er rapportert i Woodward et al., J. Biol. Chem., 241:1502-1510

(1966) .

Forbindelse 18 ble alkylert med friskt destillert allylbromid i nærvær av kalium-tertiær butoxyd i tertiær butanol, som etter silicagelkromatografi ga 14a-allyl-3p-benzoyloxy-4,4-dimethyl-5a-cholest-7-en (Forbindelse 20b) i 20 % utbytte (Reaksjonsskjema V). 15-ketonet ble redusert ved behandling av Forbindelse 20b med overskudd av hydrazin i varm (180 - 220° C) diethylenglycol med overskudd av natrium under dannelse av den avbeskyttede 14oc-substituerte dihydrolanosterol-Forbindelse 21b, en forbindelse av formel I, som en blanding av 14a- og 7a-substituerte lanosteroler. 14a- og 7a-forbindelsene kan deretter separeres ved kjemiske kromatografiske metoder slik som argenisk kromatografi vel kjent innen faget. På samme måte kan Forbindelse 21a også fremstilles.

Under anvendelse av den ovenfor angitte metode og modifikasjoner derav, hvilket ville være selvsagte for fagman-men, kan andre eksempler på lanosterolseriene innen oppfinnelsens ramme fremstilles.

15- substitusjon (Reaksjonsskjema VI - VHA)

Innføring av substituenter ved 15-stilling krever fremstilling av Forbindelse 22b, 3f3-benzoyloxy-15a-hydroxy-lanost-7-en og Forbindelse 23b, 3p-benzoyloxy-15a-hydroxy-14a-methyl-5a-cholest-7-en, under anvendelse av metodene beskrevet i Woodward et al., J. Chem. Soc., 1131 - 1143 (1957) og Knight et al., J. Biol. Chem., 241:1502-1510 (1966)). Omdannelsen (Reaksjonsskjema VI) av 15a-hydroxysubstituenten av Forbindelse 22b til 15a-fluorsteroidet, Forbindelse 24b, ble oppnådd med tilsetning av DAST (diethylaminosvoveltrifluorid) ved -78° C. Denne retensjon av stereokjemi ble bekreftet ved en serie av NMR-studier (Nuclear Overhauser Effeet).

Reduktiv fjerning av 15a-fluorbenzoatet, Forbindelse 24b, til alkoholen, Forbindelse 26b, ble utført ved tilsetning av lithiumaluminiumhydrid til en kald (0° C) etherisk løsning (diethylether:tetrahydrofuran i et forhold på 4:1) av Forbindelse 24b. Ved å følge den ovenfor angitte prosedyre i 4,4-desmethylserien, ble fluoridet, Forbindelse 27b, fremstilt fra Forbindelse 23b. Både forbindelser 26b og 27b er forbindelser ifølge oppfinnelsen.

Ved å starte fra Forbindelser 22a og 23a, som fremstilles på samme måte som Forbindelser 22b og 23b, kan de til svarende 15a-fluorider, Forbindelser 26a og 27a på lignende måte fremstilles.

Ketonene, Forbindelser 28b, 29b og 30b, tidligere beskrevet av Woodward et al., J. Chem. Soc, 1131 - 1143 (1957); Knight, et al., J. Biol. Chem., 241:1502 - 1510, (1966), kan bearbeides til oximer og andre heteroatomforbindelser substituert ved 15-stilling (Formel Ib) innen oppfinnelsens ramme (Reaksjonsskjema VII).

Når for eksempel 3[3-hydroxy-lanost-7-en-15-on (Forbindelse 28b) ble utsatt for hydroxylamin-hydroklorid i varm pyridin (80° C) i 18 timer ble det etter silicagelkromatografi erholdt 15-oximet, Forbindelse 31b i et utbytte på 85 %. På samme måte ble Forbindelse 31a fremstilt i 85 % utbytte. Oximforbindelsen 31b representerer et annet eksempel på en forbindelse ifølge oppfinnelsen, og tilveiebringer i tillegg sammen med Forbindelser 29b og 30b en synteseutgang under anvendelse av konvensjonelle teknikker til andre forbindelser innen oppfinnelsens ramme.

Ketonene (Reaksjonsskjema VHA) , Forbindelser 29a, 30a og 42a, ble fremstilt ved bearbeidelse av Forbindelser 38a eller 39a.

Fremstilling av epoxydet 38a ble utført under anven-dels av en prosess som er analog med den som er beskrevet for fremstilling av 39a i Anastasia et al., J. Org. Chem. 46: 3265-3267 (1981). Når epoxydet 38a blir utsatt for overskudd av bortrifluoridetherat ved 0° C i 1 time ga dette i 75 % utbytte det nye keton 40a med 14(3-hydrogensubstitusjon. Alky-lering av ketonet 40a med methyljodid i kalium-tertiær butoxyd i tertiær butanol ga Forbindelse 29a i 75 % utbytte etter omkrystallisering. Hydrolyse av benzoatet i Forbindelse 29a under anvendelse av 5 % kaliumhydroxyd i ethanol ved 80° C i 18 timer ga hydroxyketonet, Forbindelse 28a. Når Forbindelse 28a ble utsatt for hydroxylaminhydroklorid i varm pyridin (85° C) i 18 timer ga dette 15 oxim Forbindelse 31a i 85 % utbytte etter omkrystallisering. På denne måte kan Forbindelse 38a og 39a omdannes til Forbindelse 30a og 42a som innbefattes innen oppfinnelsens ramme. Bearbeidelse av Forbindelse 29a, 30a og 42a på lignende måte som Forbindelse 24b, 21b, gir inngang til andre forbindelser ifølge oppfinnelsen. I tillegg muliggjør denne fremgangsmåte 14 - 15 difunksjonell modifise-ring av Forbindelse 42a under dannelse av ytterligere forbindelser innen oppfinnelsens ramme.

14, 15- disubstitusjon (Reaksjonsskjema VIII og VIIB)

Innføring av 14,15-heteroatomer ble oppnådd ved at dienet, Forbindelse 32a, fremstilt som beskrevet i Woodward et al.,

J. Chem. Soc, 1131-1143 (1957) og Knight et al., J. Biol. Chem., 241, 1502-1510 (1966) ble utsatt for osmiumtetroxyd i pyridin og benzen.

Denne reaksjon resulterte etter silicagelkromatografi i dannelse av vicinaldiolen, Forbindelse 34a, i 81 % utbytte. Denne 14,15-heteroatomsubstitusjon er blitt inkorporert i desmethylseriene, Forbindelse 33a, for å fremstille triolen, Forbindelse 35a. Forbindelse 33a og 35a er to ytterligere eksempler på forbindelser ifølge oppfinnelsen. Ved å starte med 7,14-dienene (Forbindelse 32b og 33b) kan de tilsvarende forbindelser, Forbindelse 34b og 35b, fremstilles på denne måte.

Et eksempel på 14,15-difunksjonell bearbeidelse er illustrert i Reaksjonsskjema VIIB.

Forbindelse 47a, fremstilt som beskrevet i Reaksjonsskjema VHA, ble behandlet med lithiumaluminiumhydrid for å danne diolen, Forbindelse 48a i 64 % utbytte. Denne diol ble ytterligere behandlet med 10 % palladium på aktivert carbon i tetrahydrofuran, ethanol og eddiksyre (25:25:1) under dannelse av triol-Forbindelse 49a i 61 % utbytte. Ved dette punkt er oxyderbar funksjonalitet blitt innført ved både 15- og 32-stillingen av lanosterolen. Selektiv oxydasjon av 32-alkoholen ble oppnådd ved behandling med pyridiumdichromat i diklormethan som etter kromatografi bare ga Forbindelse 50a i 63 % utbytte. På denne måte tilveiebringer denne reaksjonsgang en selektiv metode for fremstilling av oxydert funksjonalitet ved 32-stilling av lanosterolen mens 15-stillingen holdes i en funk-sjonalisert form. Det tilveiebringes således en metode for fremstilling av et utall av 14,15-disubstituerte lanosteroler. Ketonfjerning i Forbindelse 47a som tidligere angitt utgjør et alternativt trekk for å fremstille 14-substituerte lanosteroler.

Generelle prosedyrer for fremstilling av mettede 14, 15-substituerte lanosteroler

For å fremstille det mettede steroid-ringsystem (Reaksjonsskjema IX) ble 33-benzoyloxy-lanostan-7-on (Forbindelse 36) beskrevet i Parish et al., J. Lipid Res., 22: 859-868

(1981) utsatt for Wolf-Kishner-betingelser (se Knight et al.

J. Am. Chem. Soc. 88(4): 790-798).

Til en løsning av natrium oppløst i diethylenglykol ble tilsatt Forbindelse 36 etterfulgt av overskudd av vannfri hydrazin. Etter oppvarming (180° C) i 48 timer ble overskudd av hydrazin destillert fra i løpet av 48 timer ved 220° C, resulterende i lanostan-3|3-ol (Forbindelse 37) i 50 % utbytte.

Forbindelse 5c er også et hensiktsmessig utgangsmate riale for det mettede lanostan-ringsystem. Behandling av Forbindelse 5c med 10 % palladium på carbon i ethanol ved 80° C i 24 timer under 200 atmosfærers hydrogentrykk ga etter HPLC-rensing 32-acetoxy-3p-benzoyloxy-lanostan (Forbindelse 5d) i 76 % utbytte. Forbindelse 5d kan bearbeides på samme måte som Forbindelse 5a-5c for å gi den tilsvarende alkohol, Forbindelse 6d. Forbindelser 6 og 37 gir synteseinngang til de mettede forbindelser ifølge oppfinnelsen under anvendelse av de generelle prosedyrer beskrevet for fremstilling av de tilsvarende umettede forbindelser.

Fremstilling av salter

Fysiologisk akseptable salter av forbindelsene er også innen oppfinnelsens ramme, og kan fremstilles på et utall måter som er velkjent for fagmannen.

Eksempelvis kan metallsalter fremstilles ved å bringe forbindelsene i kontakt med en løsning av et alkali eller jord-alkalimetallsalt ved et tilstrekkelig basisk anion (f.eks. hydroxyd, alkoxyd eller carbonat). Kvartære aminsalter kan fremstilles ved lignende teknikker.

Salter kan også fremstilles ved utbytning av et kation med et annet. Kationutbytting kan bevirkes ved direkte kontakt av en vandig løsning av et salt av en forbindelse ifølge oppfinnelsen (eksempelvis alkali eller kvartært aminsalt) med en løsning inneholdende kationet som skal utbyttes. Denne metode er mest effektiv når det ønskede salt inneholdende utbytningskationet er uløselig i vann og kan separeres ved filtrering .

Utbytting kan også utføres ved å føre en vandig løs-ning av et salt av en forbindelse (f.eks. et alkalimetall eller kvartært aminsalt) gjennom en kolonne pakket med en kation-bytterharpiks inneholdende det kation som skal utbyttes med det av det opprinnelige salt, og det ønskede produkt elueres deretter fra kolonnen. Denne metode er særlig anvendbar når det ønskede salt er vannløselig, eksempelvis et kalium, natrium eller calsiumsalt.

Anvendbare syreaddisjonssalter kan erholdes ved om-setning av en forbindelse ifølge oppfinnelsen med en egnet syre, eksempelvis p-toluensulfonsyre, eddiksyre eller lignende.

Fremstillingen av forbindelsene innen oppfinnelsens ramme illustreres nærmere i de etterfølgende spesifikke eksempler.

Synteseeksempler

De etterfølgende eksempler beskriver synteseprosedyr< anvendt ved fremstilling av spesifikke forbindelser innen oppfinnelsens ramme. Medmindre annet er angitt er alle deler og prosenter i de etterfølgende eksempler og i de generelle prosedyrer på vektbasis, og alle temperaturer i grader Celsius (° C). Alle prosenter for kromatografiløsningsmidler ble bestemt på volumbasis. Alle proton-NMR-spektra refererer til tetramethylsilan (TMS) ved 0,00 ppm, mens alle fluor-NMR-spektra refereres til freon-11 (F-ll) ved 0,00 ppm.

De følgende forkortelser ble anvendt i eksemplene:

NMR: kjermemagnetisk resonansspektroskopi

IR: infrarød spektroskopi

MS: massespektrometri

HRMS: massespektrometri med høy oppløsning

EI: elektronsammenstøt

CI: kjemisk ionisering

EA: elementæranalyse

[oc]^<:>optisk rotasjon ved 25° C ved natrium D-linj s.mp.: smeltepunkt

MPLC: væskekromatografi ved middels trykk

HPLC: væskekromatografi ved høyt trykk

Rf: retensjonsfaktor på silicagel-tynnsj iktskromatografi

GC: gasskromatografi

Bestemte mellomprodukter er identifisert med henvis-ning til de nummererte forbindelser i de ovenfor beskrevne generelle synteseprosedyrer. Fysikalske data for forskjellige forbindelser fremstilt ved prosedyrene hovedsakelig svarende til beskrivelsen inneholdt i hvert eksempel, er angitt etter det individuelle eksempel.

Eksempel 1 ( A- V) : Fremstilling av 14, 15- substituerte lanosteroler A. Fremstilling av 3p-benzoyloxy-lanost-7a-ol

(Forbindelse 3)

4,6 g (10,3 mmol) lanostan-3(3, 7a-diol ble oppløst i 100 ml vannfri pyridin ved 40° C. 6,0 ml (51,7 mmol) benzoyl-klorid ble tilsatt, og blandingen ble omrørt ved 40° C i 25 minutter. Den avkjølte reaksjonsblanding (0° C) ble fortynnet med 200 ml iskald ether og ble surgjort med IN HC1 til pH 6,5. Den organiske fraksjon ble vasket med 2 x 100 ml 10 % vandig kobbersulfat, 1 x 50 ml vann, ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og fordampet under redusert trykk under dannelse av det urene residuum. Residuet ble underkastet væskekromatografi (7,0 kg/cm 2, 100 cm x 2,7 cm) under anvendelse av 4 liter 0,5 % ethylacetat i toluen og deretter 2 % ethylacetat i toluen (fraksjoner: 27 ml). Innholdet av fraksjoner 113 - 202 ble oppsamlet og fordampet under redusert trykk, under dannelse av 2,72 g (48 %, korrigert 64 %) av ren Forbindelse 3.

Fysikalske data (Forbindelse 3):

[a]<25>= +25,8° + /- 3,1° (c = 0,64, CHC13);

Sm.p. = 190 - 190,5° C (hvite flak, aceton);

Rf = 0,55 (10 % ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz/CDCl3): 8,06 (d, J = 7,5 Hz, 2H, fenyl), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 4,79 (dd, J = 11,4 Hz, 4,5 Hz,

1H, 3-CHOR), 4,11 (s, 1H, 7-CHOH), 2,0-0,85 (m, 27H),

1,11 (s, 3H, CH3); 1,06 (s, 3H, CH3), 1,01 (s, 3H, CH3>,

0,93 (s, 3H, CH3), 0,88 (d, J = 6,6Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,88 (d, J = 6,5 Hz, 3H, 21-CH3>, 0,76 (s, 3H, 18-CH3);

IR (CHC13, løsning, cm<-1>): 3520 (bw, OH), 2950 (s, CH sat), 2870 (s, CH sat), 1710 (s, C=0), 1600(w), 1580(w), 1465(m), 1450(m), 1275(vs), 1115(s);

MS (EI): 550 (3 %, M+), 517 (21 %, M -H20,"CH3), 395

(96 %, M -H?0), -CH3, -C6H5COOH);

HRMS for C3?H5803 (M+): beregnet 550,4386, funnet 550,4354.

B. Fremstilling av 33-benzoyloxy-7a,32-epoxylanostan

(Forbindelse 4)

2,72 g (4,95 mmol) 33~benzoyloxy-lanost-7a-ol (Forbindelse 3) ble oppløst i 1,1 liter benzen. Ca. 150 ml av løsningsmidlet ble destillert fra for å fjerne hvert spor av vann. 12,8 g (28,9 mmol) blytetraacetat (omkrystallisert fra eddiksyre) ble tilsatt, og den resulterende blanding ble kokt under tilbakeløpskjøling under en nitrogenatmosfære i 17 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble reaksjonsblandingen behandlet med 200 ml av en 20 %<1>ig vandig kaliumjodid-løsning, hvorpå en mettet løsning av natriumthiosulfat ble tilsatt (inntil det gule bunnfall var blitt oppløst), og den resulterende blanding ble ekstrahert med 4 x 150 ml diethylether. De kombinerte organiske ekstrakter ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og fordampet under redusert trykk. Det resulterende residuum ble underkastet MPLC (2,46 kg/cm 2; 50 cm x 2,5 cm) under anvendelse av 5 % diethylether i toluen som det eluerende løsningsmiddel (fraksjonsstørrelse: 28 ml). Innholdet av fraksjoner 17 - 29 ble oppsamlet og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk under dannelse av 1,90 g av Forbindelse 4 (70 % utbytte).

Fysikalske data (Forbindelse 4):

[a]<25>= +41,0° +/- 0,8° (c = 1,01, CHC13);

sm.p. = 225 - 227° C (fine nåler, aceton);

Rf = 0,60 (10 % ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 8,05 (d, J = 7,2 Hz, 2H, fenyl), 7,64-7,39 (m, 3H, fenyl), 4,75 (dd, J = 11,5 Hz, 4,6 Hz,

1H, 3-CHOR), 4,22 (m, 1H, 7-CHOR), 4,02 (d, J = 7,5 Hz,

1H, 32-CH2OR), 3,38 (d, J = 7,5 Hz, 1H, 32-CH2OR),

2,1-0,8 (m, 26H), 1,03 (s, 3H, 31-CH3), 0,92-0,87 (m,

18H, CH-s);

-1

IR (CHCl3-løsning, cm ): 2955 (s, CH sat), 2870 (s, CH sat) 1710 (s, 0=0), 1278(vs), 1116(s), 1025(m), 962(m).

HRMS for C36H53<0>2 (M<->CH2OH): beregnet 517,4045,

funnet 517,3994;

MS (EI): 517 (38%, M -CH2OH), 403 (64%, M -CH2OH-C8H18),

395 (100%, M -CHo0H-C,HcC00H).

Z DD

C. Fremstilling av 32-acetoxy-3p-benzoyloxy-lanost-8-en (Forbindelse 5a) , 32-acetoxy-3[3-benzoyloxy-lanost-7-en (Forbindelse 5b) og 32-acetoxy-3p-benzoyloxy-lanost-6-en

(Forbindelse 5c)

1,90 g (3,47 mmol) 3|3-benzoyloxy-7a-32-epoxy-lanostan (Forbindelse 4) ble kokt under tilbakeløpskjøling i 18 timer i 380 ml eddiksyreanhydrid med 3,8 g (32,9 mmol) pyridinhydroklorid under nitrogen. Etter avkjøling (25°) ble blandingen helt over i 400 ml is-vann og ble omrørt i 2 timer. Denne vandige blanding ble deretter ekstrahert med 4 x 150 ml diethylether, og de kombinerte etherekstrakter ble vasket suksessivt med 300 ml (0°) vandig 5 %-ig saltsyre, 8 x 200 ml mettet vandig natriumbicarbonat, 2 x 100 ml vann og 100 ml saltvann. Ekstrak-tet ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og fordampning ble utført under redusert trykk. Det urene produkt ble underkastet MPLC (7,03 kg/cm 2, 100 cm x 2,5 cm) under anvendelse av 4 liter toluen og deretter 0,5 % ethylacetat i toluen som det eluerende løsningsmiddel (fraksjonsstørrelse: 27 ml). Innholdet av følgende fraksjoner ble oppsamlet og fordampet til tørrhet: (1) fraksjoner 274-311 (Forbindelse 5c), 329 mg

(16 %); (2) fraksjoner 312-327 (Forbindelse 5a), 249 mg; (3) fraksjoner 366-402 (Forbindelse 5b), 245 mg og (4) fraksjoner 328-365 (Forbindelse 5a og 5b i en 32:68-blanding),

461 mg. Blandingen av Forbindelse 5a og 5b ble oppløst ved gjentagelse av HPLC (2 8,12 kg/cm 2, 50 cm x 2,5 cm) under anvendelse av 0,25 % ethylacetat i toluen som det eluerende løsningsmiddel. Totale utbytter for Forbindelse 5a = 19 %, Forbindelse 5b = 27 % og Forbindelse 5c = 16 %.

Fysikalske data (Forbindelse 5a):

[a]<25>= +61° +/- 2° (c = 1,00, CHC13);

sm.p. = 109,5 - 110° (ethanol - 5 % vann, nåler);

Rf = 0,64 (10 % ethylacetat i toluen)

NMR (300 MHz, CDC13): 8,06 (d, J = 7,2 Hz, 2H, fenyl),

7,60 - 7,40 (m, 3H, fenyl), 4,75 (dd, J = 11,4 Hz, 4,2 Hz,

1H, 3-CHOR), 4,08 (d, J = 10,5 Hz, 1H, 32-CH2OR),

3,97 (d, J = 10,5 Hz, 1H, 32-CH2OR), 2,2-0,85 (m, 26H),

2,06 (s, 3H, acetat), 1,08 (s, 3H, CHg) , 1,06 (s, 3H, CHg),

0,97 (s, 3H, 30-CH3), 0,90 (d, J = 6,3 Hz, 3H, 21-CH3),

0,88 (d, J = 6,6 Hz, 26-CH3og 27-CH3), 0,73 (s, 3H, 18-CH3); IR (CHCl3-løsning, cm<-1>): 2950 (s, CH sat), 2860 (s, CH sat), 1710 (s, C=0), 1600 (m), 1465(s), 1450(s), 1275(vs), 1115(s), 1025(s), 980(s), 970(s);

MS (EI): 530 (2 %, M -CH3C03H), 517 (22 %, M -CH2OCOCH3),

395 (100 %, M -CH^OCOCH-,, -C,HcCO~H);

Z O O D Z

HRMS for C37H54<0>2 (M<->CH3C02H): beregnet 530,4142,

funnet 530,4116.

Fysikalske data (Forbindelse 5b) :

[a]<25>= +50° + /- 2° (c = 1,03, CHC13);

sm.p. = 154-155° (ethanol - 5 % vann, nåler);

Rf = 0,63 (10 % ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 8,06 (d, J = 7,2 Hz, 2H, fenyl),

7,60 - 7,40 (m, 3H, fenyl), 5,25 (d, J = 4,8 Hz, 1H,

7-CH) , 4,79 (dd, J = 10,8 Hz, 4,2 Hz, 1H, 3-CHOR) , 4,59

(d, J = 10,8 Hz, 1H, 32-CH2OR), 3,73 (d, J = 10,8 Hz,

1H, 32-CH2OR), 2,15 - 0,85 (ra, 25H), 1,99 (s, 3H,

acetat), 1,13 (s, 3H, 31-CH3), 0,95 (s, 3H, CH3), 0,94

(s, 3H, CH3), 0,90 (d, J = 6,0 Hz, 3H, 21-CH3), 0,88

(d, J = 7,2 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,73 (s, 3H, 18-CH3); IR (CHCl3-løsning, cm<-1>): 2950 (s, CH sat), 2860 (s, CH sat), 1710 (s, C=0), 1600 (m), 1465 (s), 1450(s), 1380(s), 1365(s), 1275(vs), 1115(s), 1025(s), 965(s),

MS (EI): 517 (25%, M -CH2CC>2CH3), 395 (100 %, M -CH2CH2CH3); HRMS for C36H5()02(M -CH2C02CH3) : beregnet 517, 4045,

funnet 517,3999.

Fysikalske data (Forbindelse 5c):

[a]<25>= -36,6° +/- 2° (c = 1,01, CHC13);

sm.p. = 141-141,5° (ethanol - 10 % vann, meget fine nåler); Rf = 0,66 (10 % ethylacetat i etoluen);

NMR (300 MHz, CDC13>: 8,06 (d, J = 7,2 Hz, 2H, fenyl),

7,60 - 7,40 (m, 3H, fenyl), 5,61 (d, J = 10,2Hz, 1H, olefinisk H), 5,52 (d, J = 10,2 Hz, 1H, olefinisk H), 4,77 (dd, J = 11,4 Hz, 4,8 Hz, 1H, 3-CHOR), 4,56 (d, J = 11,5

Hz, 1H, 32-CH2OR), 3,96 (d, J = 11,5 Hz, 1H, 32-CH2OR),

2,42 - 0,85 (m, 24H), 1,99 (s, 3H, acetat), 1,03 (s, 3H, 31- CH3), 0,97 (s, 3H, CH3), 0,91 - 0,87 (m, 15H, CH3s);

IR (CHCl3-løsning, cm"<1>): 2950 (s, CH sat), 2860 (s, CH

sat), 1720 (s, C=0), 1600(m), 1470(s), 1450(s), 1385(s), 1370(s), 1315(s), 1275(vs), 1115(s), 1025(s), 970(s).

MS (EI): 517 (9%, M -CH2OCOCH3>, 453 (32%, M -CH3C02H,

-CgH5), 408 (30%, M -CH3C02H, -C6H5C02H), 395 (100%, M -CHtOCOCH., , -C,HcCO„H) ;

Z J OD Z

HRMS for C36H53<0>2<<>M<->CH2OCOCH3): beregnet 517,4045,

funnet 517,4042.

D. Fremstilling av 3p-benzoyloxy-lanost-8-en-32-ol

(Forbindelse 6a)

330 mg (559 pmol) 32-acetoxy-3|3-benzoyloxy-lanost-8-en (Forbindelse 5a) ble oppløst i 100 ml ethanol og ble behandlet med 8,3 g (87 %) kaliumhydroxyd i 23 ml ethanol og 7 ml vann ved 5° C. Blandingen ble omrørt ved 10° C i 2 timer og ble tilsatt 40 ml isvann. Blandingen ble deretter ekstrahert med 3 x 100 ml diklormethan, de kombinerte organiske fraksjoner ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og fordampet under redusert trykk. Residuet ble underkastet MPLC (3,8 kg/cm 2, 50 cm x 1,8 cm) under anvendelse av 2 % ethylacetat i toluen som det eluerende løsningsmiddel (fraksjoner: 18 ml). Innholdet av fraksjoner 13 - 18 ble oppsamlet, og etter fordampning under redusert trykk ble det erholdt 209 mg (68 %) av forbindelse 6a.

Fysikalske data (Forbindelse 6a):

[a]<25>= +79° (+/- 2<2>(c = 1,02, CHC13); sm.p. =

167-168,5° (ethanol -5% vann);

Rf = 0,50 (10% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 8,06 (d, J = 7,2 Hz, 2H, fenyl), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 4,75 (dd, J = 11,7 Hz, 4,2 Hz,

1H, 3-CHOR), 3,66 (dd, J = 10,8 Hz, 9,3 Hz, 1H,

32- CH2OH), 3,25 (dd, J = 10,8 Hz, 3,8 Hz, 1H, C-32-H), 2,15-0,85 (m, 26H), 1,13 (s, 3H, CH3), 1,08 (s, 3H, CH3>,

0,98 (s, 3H, 30-CH3), 0,90 (d, J = 6,5 Hz, 3H, 21-CH3>,

0,88 (d, J = 6,6 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,72 (s, 3H, 18-CH3).

IR (CHCl3-løsning, cm<-1>): 3480 (bw, OH), 2950 (s, CH sat), 2860 (s, CH sat), 1710 (s, C=0), 1460 (s), 1445(s), 1305(s), 1275 (vs) , 1115(s) .

MS (EI): 530 (8%, M -H20), 518 (42%, M -CH20)f395 (68%,

M -CH2OH), -C6H5C02H), 105 (100%, CgH5C0+).

HRMS for C37H54°2 (M ~H2°):bere9net 530,4124,

funnet 530,4162.

Fysikalske data (Forbindelse 6b; 73 % utbytte fra Forbindelse 5b) : [a]<25>= +51,5° +/- 2,0° (c = 1,01, CHC13);

sm.p. = 209,5 - 211° (aceton, nåler);

Rf = 0,50 (10% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 8,06 (d, J = 7,5 Hz, 2H, fenyl), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 5,39 (m, 1H, 7-CH), 4,75 (dd,

J = 4,7 Hz, 11,3 Hz, 1H, 3-CHOR), 3,66 (d, J = 10,2 Hz,

1H, 32-CH2OH), 3,26 (t, J = 10,2 Hz, 1H, 32-CH2OH), 2,15-0,85 (m, 26H), 0,96 (s, 3H, CH3), 0,89 (d, J = 6,5

Hz, 3H, 21-CH3), 0,87 (d, J = 6,8 Hz, 6H, 26-CH3og

27-CH3), 0,74 (s, 3H, 18-CH3);

IR (CHCl3-løsning, cm"<1>): 3500 (bw, OH), 2940 (s, CH sat), 2860 (s, CH sat), 1705 (s, C=0), 1600(m), 1465(s), 1315(s), 1275(vs), 1115(s), 1020(s), 970(s);

MS (EI): 518 (22%, M -CH20), 395 (37%, M -CH2OH,

-C6H5C02H) , 381 (19%, M -CH20, -CgHgCC^H, -CH3), 105

(100%, C6H5CO+);

HRMS for C36H5402(M -CH20): beregnet 518,4124,

funnet 518,4161.

Fysikalske data (forbindelse 6c; 62% utbytte fra Forbindelse 5c) : [a]<25>= -0,9° +/- 2,0° (c = 1,02, CHC13);

sm.p. = 222-223° (ethanol, nåler);

Rf = 0,55 (10% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 8,05 (d, J = 7,5 Hz, 2H, fenyl), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 5,85 (d, J = 10,2 Hz, 1H, olefinisk H) , 5,69 (d, J = 10,2 Hz, 1H, olefinisk H) , 4,78 (dd, J = 11,6 Hz, 4,7 Hz, 1H, 3-CHOR), 4,20 (d, J = 11,5

Hz, 1H, 32-CH2OH), 3,46 (t, J = 11,5 Hz, 1H, 32-CH2OH),

2,40 (m, 1H), 2,12-0,85 (m, 24H), 1,04 (s, 3H, CH3>,

0,98 (s, 3H, CH3), 0,93 (s, 3H, CH3), 0,90-0,84 (m, 12H, CH s) ;

J -1

IR (CHCl3-løsning, cm ): 3690 (w, OH), 3540 (bw, OH)

2960 (s, CH sat), 2870 (s, CH sat), 1710 (s, C=0),

1600(w), 1580(w), 1470 (m), 1450 (m), 1315 (m), 1280

(vs), 1120 (s);

MS (EI): 530 (5%, M -H20), 517 (17%, M -CH2OH), 408

(15%, M -H20, -CgH5COOH), 403 (8%, M -CH2OH, -CgH^),

395 (100%, M -CH2OH, -C^COOH) ;

HRMS for C37H54°2<<>M ~H2°^: beregnet 530,4124,

funnet 530,4093.

El, Fremstilling av 3p-benzoyloxy-lanost-8-en-32-al

(Forbindelse 7a)

200 mg (365 urnol) 3p-benzoyloxy-lanost-8-en-32-ol ble oppløst i 100 ml aceton og ble behandlet med 2,3 ml Jones reagens ved -10°. Blandingen ble omrørt i 15 minutter ved -10° C. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 100 ml vann og ble raskt ekstrahert med 3 x 50 ml toluen. De kombinerte toluenfraksjoner ble vasket med 2 x 50 ml vann, ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og fjernet ved fordampning under redusert trykk. Det resulterende residuum ble underkastet MPLC (3,5 kg/cm 2, 50 cm x 1,08 cm) og ble eluert med toluen. Prosedyren resulterte i 185 mg (93 %) av Forbindelse 7a.

Fysikalske data (Forbindelse 7a):

[a]<25>= -243° +/- 4° (c = 1,00, CHC13);

sm.p. = 206-207° (aceton, fine nåler);

Rf = 0,60 (toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 9,47 (s, 1H, 32-CHO), 8,05 (d, J =

7,5 Hz, 2H, fenyl), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 4,73

(dd, J = 11,6 Hz, 5,1 Hz, 1H, 3-CHOR), 2,4-0,85 (m, 26H),

1,14 (s, 3H, CH3) , 1,07 (s, 3H, CH-j), 0,94 (s, 3H, CH3),

0,90 (d, J = 6,3 Hz, 3H, 21-CHg), 0,87 (d, J = 6,6 Hz,

6H, 26-CH3 og 27-CH3), 0,77 (s, 3H, 18-CH3).

IR (CHCl3-løsning, cm"<1>): 2940 (s, CH sat), 2860 (sy

CH sat), 1710 (m, C=0), 1690 (s, C=0), 1465(s), 1450(s), 1275 (vs), 1115 (s);

MS (EI): 517 (37%, M -CHO), 395 (100%, M -CHO; -C6H5C02H);

HRMS for C35H53°2<<>M -CH°) > beregnet 517,4046,

funnet 517,407 6.

Fysikalske data (Forbindelse 7b, 85% utbytte fra Forbindelse 6b; reaksjonstid = 1,5 timer ved 0° C): [a]<25>= +46,5° +/- 2° (c = 0,99, CHC13);

sm.p. 193,5-195,5° (aceton, fine nåler);

Rf = 0,6 (toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 9,66 (s, 1H, 32-CHO), 8,05 (d, J =

7,5 Hz, 2H, fenyl), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 5,45 (m, 1H, 7-CH), 4,76 (dd, J = 11,1 Hz, 4,2 Hz, 1H, 3-CHOR),

2,2-0,85 (m, 25H), 1,14 (s, 3H, CH3), 0,98 (s, 3H, CH3),

0,95 (s, 3H, CH3), 0,93 (d, J = 6,5 Hz, 3H, 21-CH3),

0,87 (d, J = 6,6 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,75 (s, 3H, 18-CH-);

-1

IR (CHCl3-løsning, cm ): 2950 (s, CH sat), 2860 (s, CH

sat), 1705 (s, C=0), 1600(<*>), 1275(vs), 1115(s), 970(s);

MS (EI): 518 (5%, M -CO), 517 (13%, M -CHO), 395 (68%,

M -CHO, -CgH5C02H) , 105 (100%, CgH^Ot) ;

HRMS for C36H54<0>2 (M<->CO): beregnet 518,4124,

funnet 518,4115.

E2. Fremstilling av 3|B-benzoyloxy-lanost-6-en-32-al

(Forbindelse 7c)

73 mg (133 pmol) 3p-benzoyloxy-lanost-6-en-32-ol ble oppløst i 5 ml diklormethan (destillert fra fosforpentoxyd), og ble behandlet med 7 4 mg (19 3lamol) pyridiumdichromat

(98 %) og 72 mg pulverformet molekylsil nr. 4 ved romtemperatur under tørr nitrogenatmosfære. Etter omrøring i 2 timer ble

40 ml diethylether tilsatt, og blandingen ble filtrert gjennom Elorisil og Celite. Fordampning av løsningsmidlene under redusert trykk ga et residuum som ble underksatet MPLC

2

(4,9 kg/cm , 50 cm x 1,2 cm) under anvendelse av toluen som

elueringsmidlet, under dannelse av 42,9 mg (60 %) av Forbindelse 7c.

Fysikalske data (Forbindelse 7c) :

[a]<25>= -26, 8° + /- 2,0° (c = 1,01, CHCl-j);

sm.p. = 175-177° (aceton/: meget fine nåler);

Rf = 0,8 (5% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 9,97 (s, 1H, 32-CHO), 8,05 (d, J =

7.5 Hz, 2H, fenyl), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 5,69 (d,

J = 10,7 Hz, 1H, olefinisk H), 5,64 (d, J = 10,7 Hz, 1H, olefinisk H), 4,74 (dd, J = 11,7 Hz, 4,8 Hz, 1H, 3-CHOR),

2,46 (m, 1H), 2,23-0,85 (m, 23H), 1,03 (s, 3H, CH3),

0,97 (s, 3H, CH3), 0,95-0,90 (m, 12H, CH3s), 0,87 (d, J =

6.6 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3);

IR (KBr oblat, cm"<1>): 2950 (s, CH sat), 2870 (s, CH

sat), 1718 (s, C=0), 1710 (s, C=0), 1600(w), 1580(w),

1465(m), 1450(m), 1275(vs), 1115(s);

MS (EI): 546 (1%, M+), 518 (29%, M -CO), 396 (44%, M -CO, -C6H5COOH) , 381 (100%, M -CO, -CgHgCOOH, -CH-j);

HRMS for C37H5403 (M+): beregnet 546,4073,

funnet 546,4099.

F. Fremstilling av 3(3-benzoyloxy-32 , 32-dif luor-lanost-p-en

(Forbindelse 8a)

180 mg (330 umol) azeotropisk tørket (benzen) 3|3-benzoyloxy-lanost-8-en-32-al (Forbindelse 7a) ble omrørt ved 80° i ren DAST (diethylaminosvoveltrifluorid) (5 ml) under en argonatmosfære i 4,5 timer. Etter avkjøling (0°) ble reaksjonsblandingen forsiktig dråpevis tilsatt til 100 ml kald (0°) mettet vandig natriumbicarbonat og 100 ml diklormethan. Etter separering ble den vandige fase reekstrahert med 2 x 100 ml diklormethan, og de kombinerte diklormethanlag ble vasket med 1 x 100 ml vann, ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og filtrert. Diklormethanet ble deretter fjernet ved fordampning under redusert trykk. Residuet ble oppløst i diklormethan, ble filtrert gjennom silicagel og løsningsmidlet ble igjen fjernet ved fordampning, denne gang i vakuum. Residuet ble underkastet

2

MPLC (2,5 kg/cm , 50 cm x 1,8 cm) under anvendelse av 25 %

toluen i hexan som det eluerende løsningsmiddel (fraksjoner:

9 ml) under dannelse av 141 mg (75 %) av Forbindelse 8a med

91 % renhet bestemt ved; kapillar GC (DB-1, 320°, H2).

Fysikalske data (Forbindelse 8a); renset på nytt ved HPLC til 98,8 % renhet): [a]<25>= +74,3° +/- 2,0° (c = 0,99, CHC13);

sm.p. = 188-190° (nåler, aceton);

Rf = 0,80 (toluen);

NMR (300 MHz, CDCl3): 8,05 (d, J = 7,2 Hz, 2H, fenyl, 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 5,72 (dd, J = 57,5 Hz, 56,0 Hz,

1H, 32-CHF2), 4,76 (dd, J = 11,1 Hz, 7,5 Hz, 1H,

3-CHOR), 2,2-0,85 (m, 26H), 1,09 (s, 3H, CH3>, 1,06 (s, 3H, CH3), 0,97 (s, 3H, 30-CH3), 0,90 (d, J = 6,3 Hz, 3H,

21-CH3), 0,87 (d, J = 6,8 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3),

0,74 (s, 3H, 18-CH3);

19F-NMR (188,2 MHz, CDC13): -115,97 (dd, J = 277,1 Hz,

57,5 Hz, 1F 32-CHF2), -122,35 (dd, J = 277,1 Hz, 56,0

Hz, 1F, 32-CHF2);

IR (KBr oblat, cm"<1>): 2950 (s, CH sat), 2860 (s, CH

sat), 1710 (s, C=0), 1600(w), 1280(vs), 1115(s), 1020(s); MS(EI): 568 (1%, M+) , 528 (4%, M -2HF), 517 (20%, M -CHF2), 395 (47%,"CHF2, C^CO^) , 105 (100%, C6H5CO+) ;

HRMS for C37H54°2F2 <M+) : beregnet 568,4092,

funnet 568,4079.

Fysikalske data (Forbindelse 8b; 48% utbytte fra Forbindelse 7b) re-renset ved HPLC, 97% rent): [a]<25>= +47,5° + /- 2,0° (c = 1,02, CHC13);

sm.p. = 207,5-209,5° (aceton);

Rf = 0,80 (toluen);

NMR (300 MHz, CDCl3); 8,05 (d, J = 7,8 Hz, 2H, fenyl), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 5,98 (t, J = 56,3 Hz, 1H,

32-CHF2), 5,39 (m, 1H, 7-CH), 4,77 (dd, J = 11,0 Hz,

3,8 Hz, 1H, 3-CHOR), 2,15-0,85 (m, 25H), 1,14 (s, 3H,

31-CH3), 0,97 (s, 3H, CH3>, 0,96 (s, 3H, CH3), 0,93

(d, J = 6,3 Hz, 3H, 21-CH3), 0,88 (d, J = 6,6 Hz, 6H,

26-CH3og 27-CH3) , 0,75 (s, 3H, 18-CH3> ;

19F-NMR (188,2 MHz, CDC13>: -118,15 (dd, J = 277 Hz, 56 Hz, 1F, 32-CHF2), -123,26 (dd, J = 277 Hz, 56 Hz, 1F, 32-CHF2);

IR (KBr oblat, cm<-1>): 2940 (s, CH sat), 2880 (s), 2860

(s, CH sat), 1708 (vs, C=0), 1600(w), 1280(vs), 1115(s), 1045 (s) ;

MS (EI): 517 (5%, M -CHF.J , 395 (20%, M -CHF„, -C,HcC0oH);

z z b O z

HMR for C36H53°2 (<1>M"CHF2): beregnet 517,4045,

funnet 517,4024.

G. Fremstilling av 32 , 32-dif luor-lanost-8-en-3(3-ol

(Forbindelse 9a)

28 mg (738 umol) lithiumaluminiumhydrid ble tilsatt ved romtemperatur til 141 mg (248 umol) 3p-benzoyloxy-32,32-difluor-lanost-8-en (Forbindelse 8a) som var blitt oppløst i 20 ml vannfri diethylether (destillert fra natrium og benzofenon). Den resulterende blanding ble omrørt i 20 minutter. Den avkjølte (0°) reaksjonsblanding ble forsiktig tilsatt isvann og deretter en mettet løsning av ammoniumklorid. Etter separering ble det vandige lag ekstrahert med 2 x 100 ml diklormethan, og de kombinerte organiske ekstrakter ble oppsamlet, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og løsningsmidlet ble fjernet ved fordampning under redusert trykk. Den resulterende blanding av residuer ble underkastet MPLC (3,2 kg/cm 2, 50 cm x 1,08 cm) og ble eluert med 4% ethylacetat i toluen, og ble oppsamlet under dannelse av en prøve for sluttelig rensing ved HPLC (4,2 kg/cm2, 60 cm x 2,5 cm). For HPLC var det eluerende løsningsmiddel hexan:toluen:ethylacetat (74:21:5). HPLC ga 99 mg av Forbindelse 9a i 86 % utbytte.

Fysikalske data (Forbindelse 9a):

[a]<25>= +68° + /- 2° (c = 1,00, CHC13);

sm.p. 119,5-120,5° (pulver);

Rf = 0,3 (10% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 5,70 (dd, J = 55,8 Hz, 57,5 Hz,

1H, 32-CHF2), 3,26 (m, 1H, 3-CHOH), 2,15-0,85 (m, 26H),

1,02 (s, 3H, CH3), 1,01 (s, 3H, CH3), 0,90 (d, J = 6,6 Hz,

3H, 21-CH3), 0,87 (d, J = 7,2 Hz, 6H, 26-CH3og

27-CH3), 0,83 (s, 3H, 30-CH3), 0,73 (s, 3H, 18-CH3)

19F-NMR (188,2 MHz, CDC13): -116,06 (dd, J = 276,7 Hz,

57,5 Hz, 1F, 32-CHF2), -122,26 (dd, J = 276,7 Hz, 55,8

Hz, 1F, 32-CHF-) ;

1-i

IR (CHCl3-løsning, cm ): 3600 (m, OH), 3460 (wb, OH),

2950 (s, CH sat), 2860 (s, CH sat), 1470(s), 1375(s),

1105(s), 1090(s), 1015(s), 910(s);

MS (EI): 464 (10%, M+) , 447 (4%, M -OH), 431 (12%,

M -CH3, -H20), 413 (100%, M -CHF2>, 395 (46%, M -H20), -CHF2);

HRMS for C3o<H>50OF2(M+): bere9net 464,3830,

funnet 464,3794;

EA for C3()H50OF2: beregnet: C 77 , 54%, H 10,85%, F 8,18%,

funnet: C 77,38%, H 10,86%, F 7,87%.

Fysikalske data (Forbindelse 9b, 86% utbytte fra Forbindelse 8b): [a]<25>= +17,7° +/- 3,2° (c = 0,62, CHC13);

sm. p. = 138-139 (pulver);

Rf = 0,30 (10% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13); 5,96 (t, J = 56,4 Hz, 1H, 32-

CHF2), 5,38 (m, 1H, 7-CH), 3,26 (dd, J = 10,2 Hz, 5,1

Hz, 1H, 3-CHOH), 2,2-0,85 (m, 26H), 1,00 (s, 3H),

31- CH3), 0,92 (d, J = 6,5 Hz, 3H, 21-CH3), 0,90 (s, 3H,

CH3), 0,89 (d, J = 6,5 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,86

(s, 3H, CH3), 0,73 (s, 3H, 18-CH3);

19F-NMR (188,2 MHz, CDC13): -118,02 (dd, J = 277 Hz, 56

Hz, 1F, 32-CHF2), -123,23 (dd, J = 277 Hz, 56 Hz, 1F, 32- CHF2);

IR (CHCl3~løsning, cm"<1>): 3620 (m, OH), 3450 (bw, OH),

2960 (s, CH sat), 2940 (s, CH sat), 2870 (s, CH sat),

1470(m), 1380(m), 1365(m), 1095(m, 1050(s), 665(m);

HRMS for C30H5QOF2(M+): beregnet 464,3830,

funnet 464,3792

MS (EI): 464 (5%, M+), 431 (10%, M -H20,"CH3), 413

(100%, M -CHF2), 395 (60%, M -^ 2°"~CHF3);

EA for C30H5QOF2: beregnet: C 77,54%, H 10,85%, F 8,18%

funnet : C 77,19%, H 10,70%, F 8,13%

H. Fremstilling av begge diastereomerer av 4,4-dimethyl-14a-(1 *-hydroxy-21-propenyl)-5a-cholest-8-en-3p-ol

(Forbindelser lia pg 12a)

1,0 ml (1,60 mmol) av en 1,6M løsning av vinylmagne-siumbromid i tetrahydrofuran ble tilsatt til en løsning av 74,5 mg (168 umol) lanost-8-en-32-al-3|3-ol (fremstilt som beskrevet av Shafiee et al., J. Lipid Res., 27:1-10 (1986)

(Forbindelse 10a) i 5 ml tørr tetrahydrofuran (destillert fra natrium og benzofenon) ved romtemperatur. Etter omrøring i 120 minutter ved romtemperatur ble 10 ml mettet ammoniumkloridløs-ning tilsatt, og den resulterende reaksjonsblanding ble ekstrahert med 2 x 50 ml diethylether. De kombinerte organiske fraksjoner ble vasket med 1 x 50 ml vann, ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk. Residuet ble underkastet MPLC (5,6 kg/cm 2, 50 cm x 1,2 cm) og ble eluert med 5 % ethylacetat i toluen, under dannelse av 52,1 mg av Forbindelse lia (66 % utbytte) og 16,4 mg av Forbindelse 12a (21 % utbytte).

Fysikalske data (Forbindelse lia):

[a]<25>= +54,7° + /- 2,0° (c = 1,05, CHC13);

sm.p. = 155-157° (aceton, prismer);

Rf = 0,6 (50% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDCl3): 6,04-5,92 (m, 1H, olefinisk CH), 5,22-5,05 (m, 2H, olefinisk CH2), 4,11 (m, 1H, 32-CHOH);

3,22 (m, 1H, 3-CHOH), 2,2-0,85 (m, 28H), 1,01 (s, 3H, CH3), I, 00 (s, 3H, CH3), 0,90 (d, J = 6,5 Hz, 3H, 21-CH3),

0,87 (d, J = 6,8 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,82

(s, 3H, 30-CH3), 0,71 (s, 3H, 18-CH3);

IR (CHCl3-løsning, cm"<1>): 3600 (m, OH), 3470 (bw, OH),

2950 (s, CH sat), 2870 (s, CH sat), 1465 (m), 1375(m),

1115(m), 990(m), 920(m);

MS (EI): 452 (1%, M -H20), 437 (1%, M -H20,"CH3), 413

(100%, M -C3H4OH) , 395 (45%, M -C^OH, -CgH^OOH) ;

HRMS for C32H52<0>(M -H20):beregnet 452,4018,

funnet 452,3999;

EA for C32<H>54°2<:>bere,?net: c 81,64%, H 11,56 %,

funnet : C 81,63%, H 11,46%

Fysikalske data (Forbindelse 12a):

[a]<25>= +49,2° +/- 4,8° (c = 0,42, CHC13);

sm.p. = 133-135° (pulver);

Rf = 0,5 (50 % ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 5,93-5,78 (m, 1H, olefinisk CH), 5,16-5,01 (m, 2H, olefinisk CH2)#4,10 (m, 1H, 32-CHOH),

3,25 (dd, J = 11,3 Hz, 4,7 Hz, 1H, 3-CHOH), 2,32 (m, 1H), 2,18-0,85 (m, 27H) , 1,07 (s, 3H, CH-j), 1,02 (s, 3H, CH3),

0. 92 (d, J = 6,3 Hz, 3H, 21-CH3)f0,88 (d, J = 6,6 Hz,

6H, 26-CH3 og 27-CH3), 0,84 (s, 3H, 31-CH3), 0,74

(s, 3H, 18-CH3);

IR (KBr oblat, cm"<1>): 3470 (bred, OH), 2950 (s, CH sat),

2930 (s, CH sat), 2865 (s, CH sat), 2855 (s, CH sat),

1470(m), 1375(m), 920(m);

MS (EI): 408 (30%, M -2H20, -CH3), 395 (100%, M -C^OH, -H20);

hRMS for C3QH47 (M<->2H20, -CH3): beregnet 408,3756,

funnet 408,3715;

EAfor C32<H>54°2<:><b>ere9net: c 81,64%, H 11,56%

funnet : C 81,73%, H 11,60%

1. Fremstilling av 3(3-benzoyloxy-lanost-7-en-32-aldoxim

(Forbindelse 14b)

250 mg (3,60 mmol) hydroxylaminhydroklorid ble tilsatt til 98 mg (179 umol) 3(3-benzoyloxy-lanost-7-en-32-al (Forbindelse 7b) i 10 ml vannfri pyridin. Blandingen ble omrørt i 16 timer, ble fortynnet med 30 ml diethylether og ble vasket med 2 x 50 ml IN vandig saltsyre. Det vandige lag ble reekstrahert med 30 ml diethylether, og de kombinerte organiske lag ble vasket med 3 x 30 ml 10% kobbersulfat, 30 ml vann og 30 ml saltvann, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og fordampet under redusert trykk, under dannelse av 105 mg av Forbindelse 14b.

Fysikalske data (Forbindelse 14b):

[a]<25>= +30,4° +/- 2° (c = 1,02, CHCl3);

sm.p. = 200-202° (aceton, nåler);

Rf = 0,5 (toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 8,05 (d, J = 7,8 Hz, 2H, fenyl),

7,78 (s, 1H, 32-CH=NOH), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 7,18

(bs, 1H, 32-CH=NOH), 5,42 (m, 1H, 7-CH), 4,77 (dd, J =

11,0 Hz, 4,1 Hz, 1H, 3-CHOR), 2,2-0,85 (m, 25H), 1,14

(s, 3H, 31-CH3), 0,97 (s, 3H, CH3), 0,95 (s, 3H, CH3),

0,90 (d, J = 6,6 Hz, 3H, 21-CH3), 0,88 (d, J = 6,6 Hz,

6H, 26-CH3og 27-CH3>, 0,74 (s, 3H, 18-CH3);

IR (CHCl3-løsning, cm<-1>): 3570 (m, OH), 3280 (bm, OH),

2950 (s, CH sat), 2860 (s, CH sat), 1710(s, C=0), 1600(m), 1580(m), 1470(s), 1450(s), 1315(s), 1280(vs), 1115(s),

970 (s) ;

HRMSfor C36H52°2 (M "H20,"HCN): beregnet 516,3967,

funnet 516,3932;

MS (EI): 516 (10%, M"H20; -HCN), 403 (14%, M -H20,

-HCN, -CgH17), 379 (20%, M"H20, -HCN, -C6H5COOH,"CH3),

105 (100%, CgH5CO+).

Fysikalske data (Forbindelse 14a; 96 % utbytte fra Forbindelse 7a): [a]<25>= -56,6° +/- 2,0° (c = 1,06, CHCH3);

sm.p. = 193-196° (ethanol, flak);

Rf = 0,5 (toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 8,05 (d, J = 7,8 Hz, 2H, fenyl), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 7,33 (s, 1H, 32-CHNOH), 7,05

(bs, 1H, 32-CHNOH), 4,75 (dd, J = 11,6 Hz, 4,2 Hz, 1H, 3-CHOR), 2,22-0,85 (m , 26H), 1,10 (s, 3H, CH3), 1,06

(s, 3H, CH3), 0,95 (s, 3H, CH3), 0,89 (d, J = 6,6 Hz, 3H, 21-CH3), 0,87 (d, J = 6,6 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,77 (s, 3H, 18-CH3);

IR (KBr oblat, cm<-1>): 3280 (bm, OH), 2950 (s, CH sat),

2870 (s, CH sat), 1718 (s, C=0), 1600 (w), 1580(w),

1465(m), 1450(m), 1310(m), 1270(vs), 1110(s);

HRMS for Co-,Hc.N0o (M -OH) : beregnet, 544.4155,

funnet, 544.4252;

MS (EI): 544 (100%, M -OH), 406 (70%, M -H20, -CH3,

-C6H5COOH) , 380 (25%, M-H20, -CN, -CH3, -C^COOH) ,

379 (75%, M -H20, -HCN,~CH3, -C^COOH) 105 (71%, -C^CO*) .

Fysikalske data (Forbindelse 14c; 70 % utbytte fra Forbindelse 7c; reaksjonstid = 16 timer ved 80° C): [a]<25>= -77,9° +/-2,0° (c = 1,00, CHC13);

sm.p. = 204-205° (aceton, nåler);

Rf = 0,5 (toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 8,05 (d, J = 7,5 Hz, 2H, fenyl),

7,78 (s, 1H, 32-CHNOH), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 5,68

(d, J = 10,2 Hz, 1H, olefinisk H), 5,57 (d, J = 10,2 Hz,

1H, olefinisk H), 4,75 (dd, J = 11,5 Hz, 4,8 Hz, 1H,

3-CHOR), 2,43 (m, 1H), 2,18 (m, 1H), 1,95-0,85 (m, 22H),

1,03 (s, 3H, CH3), 0,97 (s, 3H, CH3), 0,92-0,88 (m, 12H,

CH3s), 0,86 (s, 3H, 18-CH3);

IR (KBr oblat, cm<-1>): 3280 (bm, OH), 2959 (s, CH sat),

2930 (s, CH sat), 2860 (s, CH sat), 1718 (s, C=0),

1600(w), 1580(w), 1465(m), 1450(m), 1310(m), 1275(vs), 1110(s);HRMS for C37H55N03 (M+): beregnet 561,4182,

funnet 561,4135;

MR (EI): 561 (6%, M+) , 544 (15%, M -OH), 421 (20%, M -HjO,

-C,HcCOOH), 406 (33%, M -H„0, -C,HcCOOH, -CH.J.

DD /OD J

J. Fremstilling av lanost-7-en-32-aldoxim-3|3-ol

(Forbindelse 15b)

6,5 g kaliumhydroxyd i 48 ml ethanol og 3 ml vann ble-tilsatt til en løsning av 218 mg (389 umol) 3p-benzoyloxy-lanost-7-en-32-aldoxim i 50 ml ethanol som var blitt oppvarmet til 50°. Blandingen ble omrørt ved 50° i 2 timer, ble deretter avkjølt og ble tilsatt 200 ml vann. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert med 3 x 100 ml diklormethan, og de kombinerte organiske ekstrakter ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat,

ble filtrert og underkastet fordampning under redusert trykk. Det resulterende residuum ble underkastet MPLC (3,5 kg/cm 2, 50 cm x 1,8 cm), og eluert med 10% ethylacetat i toluen, under dannelse av 168 mg (94 %) av Forbindelse 15b.

Fysikalske data (Forbindelse 15b):

[a]<25>= -2,0° +/- 2,0° (c = 1,00, CHCl3);

sm.p. = 212,5-214,5 (ethanol-vann);

Rf = 0,55 (50% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDCl3): 7,77 (s, 1H, 32-CH=NOH), 7,40 Jbs, 1H, 32-CN=NOH), 5,41 (m, 1H; 7-CH), 3,26 (dd, J = 10,7 Hz, 5,0 Hz, 1H, 3-CHOH), 2,10-0,85 (m, 26H), 0,99 (s, 3H, CH3), 0,90-0,86 (m, 15H, rest av CH3), 0,72 (s, 3H, 18-CH3);

IR (CHCl3-løsning, cm"<1>): 3560 (m, OH), 3300 (bm, OH), 2950 (s, CH sat), 2860 (s, CH sat), 1470(s), 1380(s);

HRMS for C3QH50NO (M -OH): beregnet 440,3892,

funnet 440,3877;

MS (EI): 440 (100%, M -OH), 412 (52%, M -H20, -HCN), 406 (33%, M -2H20, -CH3), 397 (49%, M -H20, -HCN, -CH3), 379 (34%, M -2H20, -HCN,~CH3);

EA for C,nHc,NOn: beregnet: C 78,72%, H 11,23%, N 3,06%

JU Di Z

funnet: C 78,50%, H 11,29%, N 2,95%.

Fysikalske data (Forbindelse 15a; utbytte >95% fra Forbindelse 14a): [u]<25>= -87,2° +/- 2,0° (c = 1,09, CHC13);

sm.p. = 226-229° (aceton, nåler);

Rf = 0,55 (50% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 7,30 (s, 1H, 32-CH=NOH), 7,18 (bs, 1H, 32-CH=NOH), 3,25 (dd, J = 11,1 Hz, 4,3 Hz, 1H, 3-CHOH), 2,20-0,85 (m, 27H), 1,02 (s, 3H, CH3), 0,99

(s, 3H, CH3), 0,88 (d, J = 6,6 Hz, 3H, 21-CH3>, 0,87 (d,

J = 6,6 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3>, 0,82 (s, 3H, CH3), 0,76 (s, 3H, 18-CH3);

IR (CHCl3-løsning, cm<-1>): 3580 (m, OH), 3340 (bw, OH), 2950 (s, CH sat), 2930 (s, CH sat), 2870 (s, CH sat), 1465(m), 1455(m), 1375(m);

HRMS for C-,AHcftNO (M -OH): beregnet 440,3892,

3 U DU

funnet 440,3885;

MS (EI): 440 (65%, M -OH), 412 (28%, M -H20, -HCN), 397 (22%, M"H20, -HCN, -CH3>, 394 (31%, M -2H20, -HCN), 380 (29% M -2H20, -CN, -CH3), 379 (94%, M -2H20, -HCN, -CH3);EAfor C30H51<N>O2: beregnet: C 78,72%, H 11,23%, N 3,06%

funnet : C 78,90%, H 11,32%, N 2,87%.

Fysikalske data (Forbindelse 15c; utbytte 89% fra Forbindelse 14c): [a]<25>= -109,1° + /- 2,0° (c = 0,92, CHC13);

sm.p. = 198 - 200° (pulver);

Rf = 0,55 (50% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 7,76 (s, 1H, 32-CH=NOH), 5,67 (d,

J = 10,1 Hz, 1H, olefinisk H), 5,54 (d, J = 10,1 Hz, 1H, olefinisk H), 3,25 (dd, J = 11,3 Hz, 4,8 Hz, 1H, 3-CHOH),

2,39 (m, 1H), 2,17 (m, 1H), 1,96-0,85 (m, 23H), 1,02 (s,

3H, CH3), 0,91 (s, 3H, CH3), 0,89-0,85 (m, 12H, CH3s),

0,79 (s, 3H, 18-CH3);

IR (CHCl3-løsning, cm<-1>): 3580 (m, OH), 3360 (bw, OH),

2950 (s, CH sat), 2930 (s, CH sat), 2865 (s, CH sat),

1465(m), 1380(m), 1365(m);

HRMSfor C30H5()NO (M -OH) : beregnet 440, 3892 ,

funnet 4 40,3895;

MS (EI): 440 (6 %, M -OH) , 406 (7%, M -2H20, -CH-j), 379

(6%, M -2H20, -HCN, -CH3);

EA for C3()H51N02: beregnet: C 78,72%, H 11,23%, N 3,06%

funnet : C 78,69%, H 10,88%, N 2,82%.

K. Fremstilling av 3|3-benzoyloxy-4 , 4-dimethyl-5a, 14f5-cholest-8-en-15-on (Forbindelse 40a)

Til en løsning av 5,0 g (10,2 mmol) 3|3-benzoyloxy-4, 4-dimethyl-5a-cholest-8,14-dien i 300 ml diethylether-løsning og 300 ml 0,5M vandig natriumbicarbonat ble tilsatt 2,44 g (11,3 mmol) meta-klor-perbenzoesyre. Etter 30 minutter ble ether-fraksjonen fraskilt fra natriumbicarbonatlaget og den vandige fraksjon ble ekstrahert med 5 x 500 ml diethylether. De organiske fraksjoner ble kombinert, vasket med 1 x 100 ml saltvann, ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum til ca. 150 ml. Denne etherløsning av 38a ble med én gang avkjølt (0°) og ble behandlet dråpevis med 26 ml (22,6 mmol) bortrifluoridetherat. Etter 30 minutter ble reaksjonen stanset med 200 ml isvann, og den vandige fase ble reekstrahert med 3 x 100 ml ether. De kombinerte etherfraksjoner ble ekstrahert med 1 x 200 ml mettet natriumbicarbonatløsning, ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum. Residuet ble krystallisert fra 75 ml isopropanol under dannelse av 4,10 g 3|3-benzoyloxy-4 , 4-dimethyl-5a, 14(3-cholest-8-en-15-on (Forbindelse 40a) i 75% utbytte.

Fysikalske data (Forbindelse 40a):

[a]<25>= -21,0° +/- 5,0° (C = 0,40, CHC13);

sm.p. = 154-155 (isopropanol)

Rf = 0,75 (5% ethylacetat i hexaner)

NMR (300 MHz, CDC13); 8,05 (d, J = 7,2 Hz, 2H, fenyl), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 4,80 (dd, J = 11,1 Hz, 4,5 Hz,

1H, 3-CHOR), 2,60-0,85 (m, 25H), 1,08 (s, 3H, 31-CH3)#

1,07 (s, 3H, 19-CH3), 1,02 (d, J = 6,3 Hz, 3H, 21-CH.j),

1,00 (s, 3H, 30-CH3), 0,97 (s, 3H, 18-CH3), 0,89

(d, J = 6,6 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3).

HRMS for C36H52<0>3 (<M+>)<:>beregnet 532,3917,

funnet 532,3923.

L. Fremstilling av 3(3-benzoyloxy-lanost-8-en-15-on

(Forbindelse 29a)

Til 72 ml (37,6 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-tertiært butoxyd i tertiær butanol ble tilsatt 2,0 g (3,76 mmol) 3(3-benzoyloxy-4 , 4-dimethyl-5a, 14(3-cholest-8-en-15-on i 5,0 ml vannfri tetrahydrofuran, etterfulgt av tilsetning av 2,24 ml (35,8 mmol) methyljodid. Etter 15 minutter ble reaksjonsblandingen helt over i 50 ml iskaldt vann, ble ekstrahert med 4 x 200 ml toluen:ethylacetat (1:1), og de kombinerte organiske ekstrakter ble vasket med 100 ml mettet natriumklorid, ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum. Det resulterende residuum ble krystallisert fra 75 ml isopropanol under dannelse av 1,40 g urent 3|3-benzyloxy-lanost-8-en-15-on (Forbindelse 29a) i 68 % utbytte.

Fysikalske data (Forbindelse 29a):

sm.p. = 199-200° (ethylacetat-methanol)

Rf = 0,77 (5% ethylacetat i hexan);

NMR (300 MHz, CDC13): 8,05 (m, 2H, fenyl), 7,60-7,40

(m, 3H, fenyl), 4,75 (dd, J = 11,1 Hz, 4,5 Hz, 1H (3-CHOR), 2,80-0,85 (m, 24H), 1,12 (s, 3H, 32-CH3), 1,06 (s, 6H,

19-CH3og 31-CH3), 0,98 (d, J = 6,3 Hz, 3H, 21-CH3),

0,97 (s, 3H, 30-CH3), 0,87 (d, J = 6,6 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,78 (s, 3H, 18-CH3);

HRMS for C37H54°3 (M+) : beregnet 546,4074,

funnet 546,4137.

Li. Fremstilling av 3|3-benzoyloxy-32-benzyloxy-lanost-8-en-15-on (Forbindelse 47a).

Samme prosedyre som anvendt for fremstilling av Forbindelse 29a ble anvendt med følgende unntak: Forbindelse 40a ble tilsatt i benzen i stedet for tetrahydrofuran: benzylklormethylether fremstilt ved metoden ifølge Connor (D. S. Connor, G. W. Klein, G. N. Taylor, Org. Syn. 52: 16-19 (1972)) ble anvendt i stedet for methyljodid, og den resulterende reaksjonsblanding ble kromatografert (hexan:ethylacetat, 98:2) i stedet for å bli krystallisert direkte. Forbindelse 47a ble erholdt i 64 % utbytte.

Fysikalske data (Forbindelse 47a):

[a]<25>= +84,9+2,0° (c = 1,02, CHC13);

sm.p. = 49-50° (methanol);

Rf = 0,37 (5% ethylacetat i hexan);

NMR (300 MHz, CDC13): 8,05 (d, J = 7,2 Hz, 2H, fenyl), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 7,40-7,20 (m, 5H, fenyl),

4,76 (dd, J = 11,3 Hz, 4,4 Hz, 1H, 3-CHOR), 4,48 (d, J =

12,3 Hz, 1H, OCH2Ph), 4,40 (d, J = 12,3 Hz, 1H, OCH2Ph),

3,69 (d, J = 9,3 Hz, 1H, 32-CH2OR), 3,40 (d, J = 9,3 Hz, 1H, 32-CH2OR), 2,70-2,45 (m, 2H, 16-CH2), 2,15-0,85 (M, 22H),

1,05 (S, 6H, 19-CH3 og 31-CH3), 0,98 (S, 3H, 30-CH3),

0,96 (D, J = 6,3 Hz, 3H, 21-CH3), 0,84 (d, J =. 6,6 Hz,

6H, 26-CH3 og 27-CH3), 0,77 (s, 3H, 18-CH3);

IR (CHCl3-løsning, cm"<1>): 2950 (s, CH sat), 2883 (s, CH sat), 1739 (s, C=0), 1716 (s, C=0), 1452(s), 1274(s), 1113(s);

MS (EI): 652 (9%, M<+>), 409 (79%, M-PhCOOH, -CH2OCH2Ph),

105 (100%, C,HcCO<+>).

HRMS for C44<H>6Q<0>4 (M ): beregnet 652,4493,

funnet 652,4549.

M. Fremstilling av 3|3-benzoyloxy-14a-cyano-4 , 4-dimethyl-5a-cholest-8-en (Forbindelse 16a) 35 ul (322 umol) fenylisocyanat ble tilsatt til 72,5 mg (129 umol) 3(3-benzoyloxy-lanost-8-en-32-aldoxim (Forbindelse 14a) og 5 dråper triethylamin i 8 ml azeotropisk tørket benzen ved romtemperatur. Blandingen ble omrørt ved tilbakeløpstemperatur i 1,5 timer. Den avkjølte reaksjonsblanding (romtemperatur) ble tilsatt 40 ml vann og ble ekstrahert med 3 x 100 ml diklormethan. De kombinerte organiske ekstrakter ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat, ble filtrert og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk. Residuet ble underkastet MPLC (4,9 kg/cm 2, 50 cm x 1,8 cm) under anvendelse av toluen som det eluerende løsningsmiddel, under dannelse av 59,7 mg (85 %) av Forbindelse 16a.

Fysikalske data (Forbindelse 16a):

[a]<25>= +15,0° +/- 2,0° (c = 1,04, CHC13);

sm.p.= 211,5-213,5° (aceton, meget fine nåler);

Rf = 0,6 (toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 8,06 (d, J = 7,2 Hz, 2H, fenyl), 7,60-7,40 (m, 3H, fenyl), 4,76 (dd, J = 11,1 Hz, 4,5 Hz,

1H, 3-CHOR), 2,35-0,85 (m, 26H), 1,08 (s, 3H, CH3), 1,07

(s, 3H, CH3), 0,99 (s, 3H, CH3), 0,96 (d, J = 6,3 Hz, 3H, 21-CH3), 1,88 (d, J = 6,6 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,74

(s, 3H, 18-CH3);

IR (KBr oblat, cm"<1>): 2950 (s, CH sat), 2865 (s, CH sat), 2220 (w, CN), 1715 (s, C=0), 1465(m), 1450(m), 1275(vs), 1115(m);

HRMS (isobutan CI) for C37H53N02 (M+): beregnet 543.4076, funnet 543.4055;

MS (CI): 543 (3%, M+), 517 (20%, M -CN), 395 (33%, M -CN,

-C,HcCOOH).

O 0

N. Fremstilling av 14a-cyano-4,4-dimethyl-5a-cholest-8-en-3|3-ol (Forbindelse 17a)

45,3 mg (83,4 umol) 3|3-benzoyloxy-14cx-cyano-4,4-di-methyl-5a-cholest-8-en (Forbindelse 16a) ble oppløst i 30 ml IN ethanolisk kaliumhydroxyd inneholdende 5 % vann ved rom-

temperatur. Blandingen ble omrørt i 30 minutter ved^50°, ble helt over i 200 ml isvann og ekstrahert med 3 x 200 ml diklormethan. De kombinerte, ekstrakter ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og løsningsmidlet ble fjernet ved fordampning under redusert trykk. Residuet ble underkastet MPLC (5,6 kg/cm<2>, 50 cm x 1,2 cm) under anvendelse av 8 % ethylacetat i toluen som det eluerende løsningsmiddel, under dannelse av 33,0 mg (90 %) av Forbindelse 17a.

Fysikalske data (Forbindelse 17a):

[a]<25>= -9,5° +/- 2,0° (c = 1,08, CHC13);

sm.p. = 167,5-169 (pulver);

Rf = 0,6 (50% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 3,27 (dd, J = 11,3 Hz, 4,4 Hz, 1H, 3-CHOH), 2,3-0,85 (m, 26H), 1,02 (s, 3H, CH3), 1,01 (s, 3H, CH3), 0,95 (d, J = 6,3 Hz, 3H, 21-CH3), 0,88 (d, J = 6,6 Hz,

6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,83 (s, 3H, 30-CH3), 0,73 (s, 3H, 18-CH3);

IR (CHCl3-løsning, cm"<1>): 3610 (m, OH), 3840 (bw, OH),

2960 (s, CH sat), 2940 (s, CH sat), 2870 (s, CH sat),

2220 (w, CN), 1465(m), 1380(m);

MS (EI): 439 (14%, M+), 424 (14%, M -CH3), 406 (100%, M -CH3, -H20), 397 (44%, M -HCN, -CH3);

HRMS (EI) for C-^H^NO (M+) : beregnet 439, 3814,

funnet 439,3852;

EA for C3QH49<N>O: beregnet: C 81,94%, H 11,23%, N 3,19%,

funnet : C 82,15%, H 11,28%, N 3,15%.

Ni Fremstilling av 3(3-acetoxy-lanost-8-en-32-al

(Forbindelse 43a)

2 ml eddiksyreanhydrid ble tilsatt til en løsning av 208 mg (471Mmol) lanost-8-en-32-al-3|3-ol (fremstilt som beskrevet av Shafiee et al., J. Lipid Res., 27: 1-10 (1986))

(Forbindelse lOa) i 4 ml vannfri pyridin ved romtemperatur. Etter omrøring i 17 timer ved romtemperatur ble blandingen helt over i 25 ml vann og ble ekstrahert med 3 x 40 ml diethylether. De kombinerte organiske fraksjoner ble vasket med 50 ml IN saltsyre, 50 ml 10 % vandig kobbersulfat, 50 ml vann og 50 ml

saltvann, ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og fordampet under redusert trykk under dannelse av 226 mg (<95 %) av Forbindelse 43a.

Fysikalske data (Forbindelse 43a):

[a]<25>= -258,7+2,0° (c = 0,95, CHC13);

sm.p. = 144 - 146° (methanol/aceton 1:1);

Rf-0,75 (25% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDCl3): 9,44 (s, 1H, 32-CHO), 4,47 (dd,

J = 11,6, Hz, 4,4 Hz, 1H, 3-CHOR), 2,35-0,85 (m, 26H),

2,06 (s, 3H, acetat), 1,08 (s, 3H, CH3), 0,90 (s, 3H, CH3),

0.89 (d, J = 6,5 Hz, 3H, 21-CH3), 0,86 (s, 3H, CH3),

0,86 (d, H = 6,5 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,75 (s, 3H, 18-CH3);

IR (CHCl3-løsning, cm"1): 2955 (s, CH sat), 2865 (s, CH sat), 1725 (s, C=0), 1700 (s, C=0), 1465(m), 1365(m), 1255(s),

1025 (m);

MS (El): 455 (42%, M-CHO), 395 (100%, M-CHO, -CH3COOH)

HRMS for<C>31<H>51<0>2 (M<->CHO): beregnet 455,3890,

funnet 455,3900.

N2. Fremstilling av 33-acetoxy-lanost-8-en-32-aldoxim

(Forbindelse 44a)

300 mg (4,32 mmol) hydroxylamin-hydroklorid ble tilsatt til 205 mg (424 umol) 3oc-acetoxy-lanost-8-en-32-al (Forbindelse 43a) i 5 ml vannfri pyridin. Blandingen ble omrørt ved 40° i 16 timer, ble helt over i 50 ml vann og ekstrahert med 3 x 40 ml diethylether. De kombinerte organiske lag ble vasket med IN saltsyre, 10% vandig kobbersulfat, vann og saltvann (50 ml av hver), ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og fordampet under redusert trykk under dannelse av 210 mg

(95 %) av Forbindelse 2s.

Fysikalske data (Forbindelse 44a):

[a]<25>= -105,5+2,0° (c = 1,05, CHC13);

sm.p. = 185 - 186 (pulver fra fordampning av aceton);

Rf = 0,6 (25% ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 7,30 (s, 1H, 32-CH=NOH), 4,49^ (dd,

J = 11,6 Hz, 4,4 Hz, 1H, 3-CHOR), 2,20-0,85 (m, 27H), 2,06

(s, 3H, acetat), 1,04 (s, 3H, CH3), 0,89-0,85 (m, 15H,

CH3s), 0,75 (s, 3H, 18-CH3);

IR (CHCl3-løsning, cm<-1>): 3580 (v), 3300 (bw), 2950 (s,

CH sat), 2865 (s, CH sat), 1720 (s, C=0), 1465(m), 1375(m), 1260 (s) , 1030 (m) .

0. Fremstilling av 3|3-benzoyloxy-15a-fluor-lanost-7-en

(Forbindelse 24b)

5,75 ml (46 mmol) diethylaminosvoveltrifluorid (DAST) ble tilsatt til en løsning av 1,6 g (2,92 mmol) 33-benzoyloxy-lanost-7-en-15oc-ol (Forbindelse 22b) i 10Q ml tørr diklormethan (destillert fra fosforpentoxyd) under argon ved -78°. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved -78° i 1,5 timer, og ble deretter fortynnet med 100 ml diklormethan. Vandig natriumbicarbonat ble tilsatt inntil den vandige fase var nøy-tral, og blandingen ble ekstrahert med 3 x 100 ml toluen: ethylacetat 1:1. De kombinerte organiske løsninger ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat, ble filtrert og løsningsmid-lene ble fjernet i vakuum under dannelse av 1,7 g av en kompleks blanding.

Rensing ved kromatografi på silicagel (elueringsmiddel 5 % ethylacetat i hexan), etterfulgt av HPLC på silicagel (elueringsmiddel 25 % toluen i hexan) ga 294 mg (18 % utbytte) av 33~benzoyloxy-15a-fluor-lanost-7-en (Forbindelse 24b) .

Fysikalske data (Forbindelse 24b):

[a]<25>= +45,9° +/- 2,0° (c = 1,06, CHCl3);

sm.p. = 226-227° (pulver);

Rf = 0,50 (5% ethylacetat i hexan); 0,15 (25% toluen i hexan); NMR (300 MHz, CDC13): 8,06 (d, J = 7,4 Hz, 2H fenyl),

7,55 (m, 1H, fenyl), 7,45 (m, 2H, fenyl), 5,51 (m, 1H, 7-CH), 5,05 (ddd, J = 56,6, 9,2, 5,6 Hz, 1H, 15-CHF), 4,78

(dd, J = 9,4, 5,6 Hz, 1H, 3-CH), 2,18-1,27 (m, 23H),

1,15 (s, 3H, 31-CH3), 1,10 (d, J = 3,6 Hz, 3H, 32-CH3),

0,95 (s, 3H, CH3), 0,94 (s, 3H, CH3), 0,87 (uoppløst d, 9H,

21, 26, 27-CH3), 0,70 (s, 3H, 18-CH3);

IR (KBr, cm"1): 2960(m), 2930 (m, CH sat), 1705 (s, C=0), 1460(m), 1450(m), 1390(m), 1380(m), 1365(m), 1280 (s, C-O), 1120 (m, C-F), 1035(m), 1025(m);

MS (EI): 550 (20%, M+), 413 (100%, M -CoHn0o);

o y2.

HRMS for C37H55<G>2<F>(M+) : beregnet 550, 4186

funnet 550,4163.

Fysikalske data (Forbindelse 25b; 32% utbytte fra

Forbindelse 23b):

[a]<25>= +19,0° +/-2,0° (c = 1,02, CHC13);

sm.p. = 202-203 (pulver);

Rf = 0,42 (1:1, toluen:hexan)

NMR (300 MHz, CDC13): 8,05 (d, J = 7,4 Hz, 2H( fenyl),

7,55 (m, 1H, fenyl), 7,45 (m, 2H, fenyl), 5,45 (m, 1H,

7-CH), 5,05 (ddd, J = 56,8, 9,3, 5,5 Hz, 1H, 15-CHF),

4,95 (m, 1H), 2,1-1,0 (m, 25H), 1,15 (d, J = 3,5 Hz, 3H, 32-CH3), 0,90 (m, 12H, CH3>, 0,75 (s, 3H, 18-CH3);

19F NMR (188,2 MHz, CDC13): -193,2 (dd, 56,6, 27,8 Hz);

MS (EI): 522 (10%, M+) , 385 (95%, M -CoHQ0~);

o yå

HRMS for C35H51<0>2<F>(M+): beregnet 522,3873,

funnet 522,3873;

IR KBr, cm<-1>): 2960(m), 2930 (m, CH sat), 1710 (s, C=0), 1460(m), 1450(m), 1390(m), 1380(m), 1365(m), 1275 (s,C-0), 1120 (m, C-F), 1035(m), 1025(m).

P. Fremstilling av 15a-fluor-lanost-7-en-3[3-ol

(Forbindelse 26b)

290 mg (7,6 mmol) lithiumaluminiumhydrid ble langsomt tilsatt til en løsning av 294 mg (0,534 mmol) 3|3-benzoyloxy-15a-fluor-lanost-7-en (Forbindelse 24b) i 40 ml diethylether og 10 ml tetrahydrofuran ved 0° under nitrogen. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 10 minutter, og ble deretter tilsatt 1 g natriumsulfat-decahydrat. Blandingen ble fortynnet ved tilsetning av 50 ml diethylether. 20 ml ethylacetat ble deretter tilsatt, løsningen ble filtrert gjennom en sintret glasstrakt og løsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Det resulterende faste materiale ble krystallisert fra isopropanol under dannelse av

230 mg (96 % utbytte) 15a-fluor-lanost-7-en-3p-ol (Forbindelse 26b). Krystallene hadde et smeltepunkt på 159 - 160°, og NMR viste co-krystallisering med isopropanol (2:1, 26b:isopropanol). Krystallene ble deretter oppløst i benzen og løsningsmidlet ble fjernet under dannelse av et amorft fast materiale.

Fysikalske data (Forbindelse 26b):

[a]<25>= +24,6° +/- 4,0° (c = 0,5, CHC13);

sm.p. = 172,5-173° (pulver);

Rf = 0,18 (1:2:7, ethylacetat:toluen:hexan);

NMR (300 MHz, CDC13): 5,50 (m, 1H, 7-CH), 5,05 (ddd, J =

56,6, 9,2, 5,6 Hz, 1H, 15|3-CHF) , 3,27 (dd, J = 10,6, 4,9 Hz,

1H, 3-CH), 2,18-1,27 (m, 23H), 1,10 (d, J = 3,6 Hz, 32-CH3), 1,01 (s, 3H, CH3), 0,92-0,87 (m, 12H, CH3s), 0,71 (s, 3H,

18-CH3);

]9, NMR (188,2 MHz, CDC13): -192,9 (ddq, J = 56,6,

27,5, 3,6 15-CHF);

IR (CHC13, cm"<1>): 3620 (w, OH), 2960(s), 2935(s), 2870

(m, CH sat), 1467(m), 1448(m), 1384(m), 1367(m),

1090 (w, CF), 1028(m), 995(m), 670(m);

MS (EI): 446 (65%, M+) , 431 (40%, M -CH3), 413 (50%, M -CH3, -H20), 306 (100%, M -CgH160);

HRMS for C3C)H51<O>F (M+): beregnet 446, 3924 ,

funnet 446,3917;

EA for C3C)H51OF: beregnet: C 80, 66%, H 11,51%, F 4,25%

funnet : C 80,83%, H 11,29%, F 4,11%

Fysikalske data (Forbindelse 27b fra Forbindelse 25b; 93% utbytte): [a]<25>= +15,3° +/- 2,4° (c = 0,85 CHC13) ;

sm.p. = 68-69°

Rf = 0,11 (1:2:7; ethylacetat:toluen:hexan);

NMR (300 MHz, CDCl3): 5,45 (m, 1H, 7-CH), 5,05 (ddd, J =

56,8, 9,3, 5,5 Hz, 1H, 15-CHF), 3,62 (m, 1H, 3-CH),

2,1-1,0 (m, 25H), 1,15 (d, J = 3,5 Hz, 3H, 32-CH3), 0,88

(m, 9H, CH3s), 0,83 (s, 3H, CH3), 0,73 (s, 3H, 18-CH3);

19, NMR (188,2 MHz, CHC13): -193,2 (dd, 56,7, 27,8 Hz);

MS (EI): 418 (100%, M), 403 (90%, M -CH3);

HRMS for C2gH47<F:>beregnet 418,3611,

funnet 418,3592;

IR (CHC13, cm"<1>): 2960 (s), 2935 (s, CH sat), 1465 (m) ,

1445 (m) , 1385 (m) , 1365 (m) , 1115 (w) , 1035 (m) , 1025 (m) , 1000 (w).

Q. Fremstilling av 3p-hydroxy-lanost-7-en-15-oxim

(Forbindelse 31b)

120 mg (0,27 mmol) 3|3-hydroxy-lanost-7-en-15-on ble oppløst i 3 ml tørr pyridin (destillert fra kaliumhydroxyd) under argon. 200 mg (2,92 mmol) hydroxylamin-hydroklorid ble tilsatt. Løsningen ble oppvarmet til 80° i 18 timer. Etter at løsningen var blitt avkjølt til romtemperatur ble den fortynnet med ethylacetat og vasket i rekkefølge med 1 x 50 ml vann, 1 x 50 ml 10% saltsyre, 1 x 50 ml vann, 1 x 50 ml vandig natriumbicarbonat og 1 x 50 ml vandig natriumklorid. Det organiske lag ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat og filtrert. Løsningsmidlene ble fjernet i vakuum. Rensing av residuene ved hjelp av silicagel-kromatografi (elueringsmiddel, 15 % ethylacetat i hexaner) ga 106 mg (85 % utbytte) av 3f3-hydroxy-lanost-7-en-15-oxim (Forbindelse 31b).

Fysikalske data (Forbindelse 31b):

[a]<25>= +46,0° +/- 2,3° (c = 0,86, CHC13);

sm.p. = 185-186° (pulver);

Rf = 0,26 (20 % ethylacetat i toluen);

NMR (300 MHz, CDC13): 6,85 (m, 1H, 7-CH), 6,44 (s, 1H),

3,26 (dd, J = 12, 5 Hz, 1H, 3-CH), 2,76 (dd, J = 18, 9 Hz,

1H) , 2,28 (dd, J = 20, 9 Hz, 1H) 2,1-1,1 (m, 22H) ,

1,21 (s, 3H, 32-CH3), 0,99 (s, 3H, 31-CH3), 0,94 (d, J = 6 Hz, 3H, 21-CH3), 0,88 (bs, 9H, CH3s), 0,86 (s, 3H,

CH3), 0,70 (s, 3H, 18-CH3);

IR (KBr, cm<-1>): 3350 (bs, OH), 2990(s), 2840 (s, CH sat), 1670 (w, C=N) , 1470 (m), 1382 (s), 920 (m, NO);

MS (EI): 457 (5%, M+), 442 (25%, M+ - CH^), 440 (100%, M -OH) ; HRMS for C3QH51<0>2<N>(M+): beregnet 457,3920,

funnet 57,3917;

EA for C3QH51<0>2<N:>beregnet: C 78,72%, H 11,23%, N 3,06%

funnet : C 78,63%, H 10,98%, N 2,76%

R. Fremstilling av 14a-allyl-3|3-benzoyloxy-4 , 4-dimethyl-5oc-cholest-7-en-15-on (Forbindelse 20b)

1,13 g (2,13 mmol) 3|3-benzoyloxy-4,4-dimethyl-5oc-cholest-7-en-15-on (Forbindelse 18) ble tilsatt til 45 ml av en 0,5M løsning av kalium i tertiær butanol under argon ved 25°. 200 ul (2,30 mmol) friskt destillert allylbromid ble tilsatt og løsningen ble omrørt i 1 time. Reaksjonsblandingen ble tilsatt 100 ml vandig ammoniumklorid og ble ekstrahert med 3 x 100 ml toluen. De kombinerte organiske fraksjoner ble vasket med 1 x 100 ml vann og deretter 1 x 100 ml mettet vandig natriumklorid, ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat, filtrert og løsningsmidlene ble fjernet i vakuum. Residuet ble renset ved hjelp av silicagelkromatografi (elueringsmiddel, 3:20:77, ethylacetat :toluen:hexan) etterfulgt av HPLC (elueringsmiddel, 1,5:20:78,5, ethylacetat:toluen:hexan). To fraksjoner ble erholdt: 14a-allyl-3p-benzoyloxy-4,4-dimethyl-5oc-cholest-7-en-15-on (Forbindelse 20b), 240 mg (utbytte 19,7%), Rf = 0,39, og 7a-allyl-3(3-benzoyloxy-4 , 4-dimethyl-5a-cholest-8 (14)-en-15-on, 600 mg (utbytte 49,2 %), Rf = 0,37 (1:4:15; ethylacetat: toluen:hexan).

Fysikalske data (Forbindelse 20b):

NMR (300 MHz, CDC13): 8,06 (d, 7,4 Hz, 2H, fenyl), 7,55

(m, 1H, fenyl), 7,45 (m, 2H, fenyl), 6,51 (m, 1H, 7-CH),

5,61 (m, 1H, allyl, CH), 4,98 (m, 2H, allyl, CH2), 4,77

(dd, J = 9,4, 4,6 Hz, 1H, 3-CHOR), 2,7-1,1 (m, 23H),

1,15 (s, 3H, CH3), 0,99 (m, 9H, CH3s), 0,91 (s, 3H, CH3),

0,88 (s, 3H, CH3), 0,82 (s, 3H, 18-CH3.

HRMS for C39H56<0>3 (<M+>)<:>beregnet 572,4229,

funnet 572,4214.

Ri. Fremstilling av 14a-allyl-3|3~benzoyloxy-4 , 4-dimethyl-5a-cholest-8-en-5-on (Forbindelse 20a)

Den samme preparative prosedyre som anvendt for Forbindelse 20b ble anvendt med følgende unntak: Forbindelse 40a ble anvendt som utgangsmateriale i stedet for Forbindelse 18, og det urene produkt ble krystallisert fra ethylacetat under dannelse av rent 14a-allyl-3p-benzoyloxy-4,4-dimethyl-5a-cholest-8-en-5-on.

Fysikalske data (Forbindelse 20a):

sm.p. = 172-174° C (ethylacetat)

Rf = 0,42 (5% ethylacetat/hexaner)

NMR (300 MHz, CDC13): 8,06 (d, J = 7,2 Hz, 2H, fenyl), 7, 60-7, 40 (m, 3H, fenyl), 7,75 (m, 1H, olefinisk CH) ,

5,01 (m, 2H, olefinisk CH2) 4,75 (dd, J = 12, 5Hz, 1H,

3-CHOH), 2,61 (dd, J = 20, 9, 1H, 2,5-1,1 (m, 26H), 1,1

(s, 3H, CH3) 1,05 (s, 3H, CH-j), 1,00 (m, 6H) , 0,9 (d,

J = 7Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,80 (s, 3H, 18-CH3).

S. Fremstilling av 14a-allyl-4,4-dimethyl-5a-cholest-7-en-3|3-ol (Forbindelse 21b) 20 mg (0,87 mmol) natrium ble tilsatt til 3 ml tørr ethylenglycol under nitrogen (destillert fra calsiumhydrid). 54 mg (0, 094 mmol) 14a-allyl-3[3-benzoyloxy-4 , 4-dimethy l-5a-cholest-7-en-15-on ble deretter tilsatt, etterfulgt av 1 ml vannfri hydrazin. Løsningen ble oppvarmet under tilbakeløps-kjøling til 180° i 48 timer. Kjøleren ble fjernet og overskudd av hydrazin ble destillert fra ved 220°. Løsningen fikk av-kjøles til romtemperatur og ble deretter fortynnet med diklormethan og vann. Den vandige fase ble nøytralisert ved tilsetning av 10 % saltsyre. Blandingen ble ekstrahert med diklormethan, og de kombinerte organiske fraksjoner ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat, filtrert og løsningsmidlene ble fjernet i vakuum under dannelse av 25 mg av en kompleks blanding av 14a-allyl-4 , 4-dimethyl-5oc-cholest-7-en-3|3-ol (Forbindelse 21b), og 7a-allyl-4 , 4-dimethyl-5a-cholest-8 (14)-3|3-ol.

T. Fremstilling av 4 , 4-dimethyl-5a-cholest-8-en-3(3,14a, 15a-triol (Forbindelse 34a)

6,4 ml pyridin ble tilsatt til en løsning av 3,25 g (7,87 mmol) 4 , 4-dimethyl-5a-cholest-8 ,14-dien-3|3-ol (Forbindelse 32a) i 150 ml benzen, og blandingen ble avkjølt til 5°

på et isbad. En løsning av 2,1 g (8,26 mmol) osmiumtetroxyd i 42 ml diklormethan ble dråpevis tilsatt til blandingen i løpet av 1/2 time, og den resulterende mørkebrune løsning ble omrørt i 1 time ved romtemperatur. Hydrogensulfidgass ble deretter boblet gjennom løsningen i 15 minutter og det sorte bunnfall ble fjernet ved filtrering gjennom Celite.

Filterkaken ble vasket med diethylether tre ganger, og løsnings-midlene ble fjernet fra filtratet under dannelse av en mørke-brun olje. Residuet ble oppløst i ether og diklormethan (9:1)

og ført gjennom et sjikt av silicagel med eluering med diethylether. Fordampning av løsningsmidlene ga et hvitt krystallinsk fast materiale, og omkrystallisering fra benzen og hexan ga 2,85 g (81 % utbytte) av 4 , 4-dimethyl-5a-cholest-8-en-3|5, 14a, 15a-triol (Forbindelse 34a).

Fysikalske data (Forbindelse 34a):

sm.p. = 133-134° (spaltning);

Rf = 0,23 (2:3, ethylacetat:hexan);

NMR (300 MHz, CDC13~D20 (5%)): 4,11 (1H, dd, J = 5 Hz, 9 Hz), 3,22 (1H, dd, J = 5 Hz, 11 Hz), 2,33 (1H, m), 2,26 (1H, bm), 2,09 (2H, bm), 2,00-1,05 (20H, m), 1,01 (6H, d, J = 3 Hz),

0,87 (3H, s), 0,86 (3H, d, J = 8 Hz), 0,85 (3H, s), 0,82

(3H, s), 0,69 (3H, s);

IR (nett, cm"<1>): 3422 (bs, OH), 2950(s), 1652(s),

1465(m), 1036(m);

EA for C29H50°3: beregnet: C 77,97%, H 11,28%,

funnet : C 78,05%, H 11,19%.

Fysikalske data (Forbindelse 35a fra Forbindelse 33a) :

NMR (300 MHz, CDC13): 4,11 (m, 1H), 3,61 (m, 1H), 2,50

(d, J = 9,0 Hz, 1H), 2,45-0,8 (m, 26H), 1,63 (d, J = 6,0

Hz, 1H), 0,98 (s, 3H), 0,87 (s, 6H), 0,85 (s, 3H), 0,71

(s, 3H);

EA for C27H46°3: beregnet: C 77,46%, H 11,08%

funnet : C 76,27%, H 11,15%

U. Fremstilling av 3p-hydroxy-lanost-8-en-15-on

(Forbindelse 28a)

Til en løsning av 25 g (0,46 mmol) 3|3-benzoyloxy-lanost-8-en-15-on (Forbindelse 29a) i 2,5 ml toluen og 10 ml methanol ble tilsatt 0,7 g vannfritt kaliumcarbonat. Etter omrøring i 4 timer ble 2,5 ml toluen tilsatt etterfulgt 2 timer senere ved tilsetning av 5% kaliumhydroxyd i ethanol. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 80° i 18 timer og ble deretter fortynnet med 50 ml vann og ekstrahert med 4 x 100 ml toluenrether (1:1). De kombinerte organiske ekstrakter ble vasket med 1 x 100 ml mettet natriumklorid, ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum. Det resulterende residuum ble renset ved silicagelkromatografi (10 % ethylacetat i hexaner) under dannelse av 180 mg 3(3-hydroxy-lanost-8-en-15-on (Forbindelse 28a) i 89 % utbytte.

U±. Fremstilling av 14a-allyl-4 , 4-dimethyl-5oc-cholest-8-en-3|3-ol-15-on (Forbindelse 45a)

Den samme prosedyre som anvendt for Forbindelse 28a ble anvendt med følgende unntak: Forbindelse 2 0a ble anvendt som utgangsmateriale og løsningen ble omrørt ved 40° C i 4 timer i stedet for 80° C i 18 timer. Prosedyren ga Forbindelse 45a i 92 % utbytte.

Fysikalske data (Forbindelse 45a):

sm.p. = 139-140 (ethylacetat);

Rf = 0,26 (10% ethylacetat, 20% toluen, 70% hexaner);

NMR (300 MHz, CDCl3): 5,71 (m, 1H, olefinisk CH), 4,96

(m, 2H, olefinisk CH2), 3,24 (dd, J = 12,5 Hz, 1H, 3-CHOH),

2,57 (dd, J = 20, 9 Hz, 1H), 2,4-1,1 (m, 26H), 1,01 (s, 6H, CH3s), 0,97 (d, J = 6Hz, 3H, 21-CH3), 0,89 (d, J = 7Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3) , 0,82 (s, 3H, 4oc-CH3), 0,76 (s, 3H, 18-CH.j); MS (EI): 468 (10%, m) , 427 (100%, m-C^);

HRMSfor C32H52°2 *M+*: beregnet 468,3967,

funnet 468,4087.

V. Fremstilling av 3p-hydroxy-lanost-8-en-15-oxim

(Forbindelse 31a)

180 mg (0,41 mmol) 3p-hydroxy-lanost-8-en-15-on (Forbindelse 28a) ble oppløst i 3 ml vannfri pyridin og ble deretter behandlet med 300 mg hydroxylaminhydroklorid. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet (85°) i 18 timer, ved hvilket tidspunkt ytterligere 400 mg hydroxylaminhydroklorid ble inn-ført. Etter stansing av reaksjonen med 50 ml vann og ekstra-hering med 2 x 100 ml toluenrether (1:1) ble de kombinerte organiske ekstrakter vasket med 2 x 50 ml IN saltsyre, 50 ml vann, 50 ml 10 % kobbersulfatløsning, 50 ml vann, 50 ml mettet natriumbicarbonat og 50 ml mettet natriumklorid, og ble deretter tørket over vannfritt magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum. Residuet ble krystallisert fra ethylacetat i methanol (1:1) under dannelse av 160 mg rent 3p-hydroxy-lanost-8-en-15-oxim (Forbindelse 31a) i 85 % utbytte.

Fysikalske data (Forbindelse 31a):

[a]<25>= +88,7° +/- 2,0° (c=1,02, CHC13);

sm.p. = 187-188° (ethylacetat:methanol, 1:1);

Rf = 0,25 (10% ethylacetat i hexan);

NMR (300 MHz, CDCl3): 6,90 (bs, 1H, NOH), 3,27 (dd, J =

11,1 Hz, 4,5 Hz, 1H, 3-CHOR), 2,77 (m, 2H), 2,30 (m, 2H),

2,10 (m, 2H), 1,80-0,80 (m, 24H), 1,13 (s, 3H, 14-CH3),

1,03 (s, 3H, 19-CH3), 1,02 (s, 3H, 31-CH3), 0,96

(d, J = 6,3 Hz, 3H, 21-CH3), 0,87 (d, J = 6,6 Hz, 6H,

26-CH3og 27-CH3), 0,84 (s, 3H, 30-CH3), 0,73 (s, 3H,

18-CH3);

IR (CHC13, cm"<1>): 3600 (bw, OH), 3300 (vbm, OH), 2960

(vs, CH sat), 1470 (m), 1375(m), 1035(m), 940(m).

VI. Fremstilling av 14a-allyl-4,4-dimethyl-5a-cholest-8-en-3p-ol-15-oxim (Forbindelse 46a)

Den samme prosedyre som anvendt for Forbindelse 31a ble anvendt med følgende unntak: Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 60° C i 96 timer i stedet for 85° C i 18 timer, og Forbindelse 45a ble anvendt som utgangsmateriale i stedet for Forbindelse 28a. Forbindelse 46a ble erholdt i 40 % utbytte.

Fysikalske data (Forbindelse 45a):

sm.p. = 116-117° C (ethylacetat);

Rf = 0,20 (10% ethylacetat, 20% toluen, 70% hexaner);

NMR (300 MHz, CDC13): 8,2 (s, 1H, NOH) 5,82 (m, 1H, olefinisk CH), 4,96 (m, 2H, olefinisk CH2), 3,24 (dd,

J = 12, 5 Hz, 1H, 3-CHOH), 2,82 (dd, J = 20, 9 Hz, 1H), 2,5-1,1 (m, 26H), 1,02 (s, 6H, CH3s), 0,95 (d, J = 6 Hz, 3H, 21-CH3) 0,89 (d, J = 7 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3>, 0,83

(s, 3H, CH3), 0,72 (s, 3H, 18-CH3);

MS (EI): 465 (30%, M-H20) , 442 (90%, M-H20 -C^);

HRMS for C32H5]NO (M-H20): beregnet 465,3971,

funnet 465,3932.

W. Fremstilling av 32-benzyloxy-lanost-8-en-3(3 ,15a-diol

(Forbindelse 48a)

Til 10 ml av en kald (0° C) omrørt tetrahydrofuran-løsning av 1,0 g (1,52 mmol) 3|3-benzoyloxy-32-benzyloxy-lanost-8-en-15-on (forbindelse 47a) ble tilsatt 230 mg (6,0 mmol) lithiumaluminiumhydrid porsjonsvis. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0° C i 1 time og ble deretter fortynnet med 50 ml diethylether og reaksjonen ble stanset ved dråpevis tilsetning av ca. 1 ml vann. Etter at aluminiumesterhydrolysen var fullført, ble reaksjonsblandingen tørket over vannfritt magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert. Det resulterende residuum ble underkastet silicagelkromatografi (15% ethylacetat i hexan) under dannelse av 537 mg (64 %) av ren Forbindelse 48a.

Fysikalske data (Forbindelse 48a):

NMR (300 MHz, CDC13): 7,35 (m, 5H, fenyl), 4,62 (d, J =

13,8 Hz, 1H, CH2Ph), 4,43 (d, J = 13,8 Hz, 1H, CH2Ph),

4,38 (m, 1H, 15-CHOH), 3,90 (d, J = 8,0 Hz, 1H, 32-

CH2OR), 3,85 (d, J = 10,0 Hz, 1H, QH), 3,60 (d, J =

8,0 Hz, 1H, 32-CH2OR), 3,25 (dd, J = 11,0 Hz, 4,5 Hz, 1H, 3-CHOH), 2,40 (m, 2H), 2,00 (m, 3H), 1,80 - 0,85 (m, 24H), 1,08 (s, 3H, CH3) , 1,03 (s:, 3H, CH3), 0,92 (d, J = 7,0 Hz,

6H, 26-CH3 og 27-CH3), 0,90 (d, J = 7,0 Hz, 3H, 21-CH3),

0,88 (s, 3H, CH3), 0,75 (s, 3H, 18-CH3).

X. Fremstilling av lanost-8-en-3|3-15a, 32-triol

(Forbindelse 49a)

En kald (0° C) løsning (tetrahydrofuran:ethanol: eddiksyre; 25 ml:25 ml:l ml) av 330 mg (0,6 mmol) 32-benzyloxy-lanost-8-en-33,15a-diol (Forbindelse 48a) ble gasset med nitrogen, etterfulgt av tilsetning av 75 mg 10 % palladium på aktivt carbon. Ved dette tidspunkt ble nitrogenet erstattet med en hydrogengasskilde som muliggjorde bobling av hydrogen-gass gjennom reaksjonsblandingen i 1 time. Undersøkelse av reaksjonsblandingen ved tynnsjiktskromatografi viste fullsten-dig omdannelse til den ønskede Triolforbindelse 49a. Etter fjerning av hydrogenkilden ble reaksjonsblandingen fortynnet med 100 ml tetrahydrofuran og ble filtrert gjennom Celite for å fjerne palladium. Den filtrerte løsning ble konsentrert og ble deretter fortynnet med 300 ml diklormethan og vasket med 3 x 100 ml vann, 2 x 50 ml mettet natriumbicarbonatløsning,

100 ml mettet natriumklorid, og ble tørket over magnesiumsulfat og deretter filtrert og konsentrert. Residuet ble renset ved silicagelkromatografi (20 % ethylacetat i hexan) under dannelse av 170 mg (61 %) ren Forbindelse 49a.

Fysikalske data (Forbindelse 49a):

NMR (300 MHz, CDC13): 4,45 (dd, J = 7,0 Hz, 11,0 Hz, 1H, 15-CHOH), 4,10 (d, J = 12,0 Hz, 1H, 32-CH2OH), 3,60 (d, J = 12,0 Hz, 1H, 32-CH2OH), 3,23 (dd, J = 11,0 Hz, 4,5 Hz, 1H, 3-CHOH), 3,00 (bm, 3H, OH), 2,70 (m, 1H), 2,30 (m, 6H),

2,10 - 0,85 (m, 23 H), 1,03 (s, 6H, CH3), 0,97 (s, 3H, CH3), 0,95 (d, J = 7,0 Hz, 3H, 21-CH3), 0,93 (d, J = 7,0 Hz, 6H, 26-CH3og 27-CH3), 0,73 (s, 3H, 18-CH3).

Y. Fremstilling av 3(3,15a-dihydroxy-lanost-8-en-32-al

(Forbindelse 50a)

Til 1,5 ml av en kald (-50° C) diklormethanløsning

av 30 mg (70 umol) lanost-8-en-3(3,15a, 32-triol (Forbindelse 49a) ble tilsatt 25 mg (70 umol) omkrystallisert pyridiniumdichromat (vann og deretter tørket under vakuum og fosforpentoxyd). Reaksjonsblandingen fikk anta -30° C og reaksjonen ble fulgt ved tynnsjiktskromatografi inntil den var fullført (ca. 1 time)

ved hvilket tidspunkt reaksjonen ble stanset med 1 ml isopropanol, hvorpå blandingen ble fortynnet med 50 ml diethylether. Løsningen ble filtrert gjennom et sjikt av fluorsil og ble deretter konsentrert under dannelse av et residuum som ble renset ved silicagelkromatografi (15 % ethylacetat i hexan).

På denne måte ble ren Forbindelse 50a erholdt i 63 % utbytte (18 mg).

Fysikalske data (Forbindelse 50a):

NMR (300 MHz, CDCl3): 9,58 (s, 1H, CHO), 4,20 (m, 1H, 15-CHOH), 4,00 (d, J = 10,0 Hz, 1H, OH, utbyttbar med D20), 3,28 (m, 1H, 3-CHOH), 2,40-0,85 (m, 24H), 1,10 (s, 3H, CH3) , 1,03 (s, 3H, CH3) , 0,89 (d, J = 7,0 Hz, 3H, CH3),

0,86 (d, J = 7,0 Hz, 6Hz, 26-CH3og 27-CH3), 0,85 (s, 3H,

CH3), 0,78 (s, 3H, 18-CH3).

Eksempler 2- 13

Inhibering og undertrykkelse av cholesterogene enzymer i pattedyrceller

A. 3-hydroxy-3-methylglutaryl Coenzyme A Reductase

(HMGR) undertrykkelsesbestemmelse

Evnen av forbindelsene av formel I til å undertrykke aktiviteten av HMGR, det hastighetsbegrensende enzym av cholesterol-biosyntesen, ble testet som følger.

Kinesiske hamster ovarie (CHO)-celler ble delt to ganger i aken og ble opprettholdt i McCoy's 5A medium supplert med 1 % carbosil delipidert kvegfosterserum (FBS). Cellene ble høstet under den logaritmiske vekstfase og cellekulturer ble fremstilt ved tilsetning av 0,5 x 10^ celler til hver brønn i en 24 brønns samleskive under anvendelse av 1 ml av det ovenfor angitte medium pr. brønn. Cellekulturen ble inkubert i 48 timer ved 37° i et miljø med 5 % C02og 95 % luft. Testforbindelsene i en 2,5 % suspensjon av kvegserumalbubim (BSA)

(fettsyrefri) i ethanol ble deretter tilsatt til kulturene slik at de sluttelige ethanol- og BSA-konsentrasjoner i inkuberings-mediet var 0,5 % og 0,25 %. Behandlede celler ble inkubert med de angitte forbindelser i 6 timer ved 37° C i et 5 % C02, 95 %

luftmiljø. Kontrollceller ble behandlet på lignende måte som

de som mottok testforbindelsen, bortsett fra at de ble inkubert med bare BSA og ethanolsuspensjon.

HMGR-aktiviteten ble deretter målt i digitonin-permeabiliserte celler ved metoden utviklet av Leonard et al., J. Biol. Chem., 262: 7914-7919 (1987). Spesifikt ble mediet

i hver brønn suget bort og cellene ble skyllet med en 50 mM løsning av fosfatbuffret saltvann (PBS). 1 ml av 30 ug/ml digitonin i CSK-buffer (fremstilt under anvendelse av 10 mM Pipes [piperazin-N,N'-bis(2-ethansulfon)syre], 100 mM KC1,

2,5 mM MgCl2, 300 mM sucrose, 1 mM EGTA, pH 6,8) ble tilsatt til hver brønn og inkubert i 10 minutter ved 22° for å permeabilisere cellene. Bufferen ble forsiktig suget bort og cellene ble skyllet to ganger, hver gang med 1 ml PBS. HMGR-aktiviteten ble målt direkte ved tilsetning av 75 pl PIB-buffer (50 mM kaliumfosfat, 1 mM Na2EDTA, 10 mM dithiothreitol, pH 7,4) til hver brønn og cellene ble inkubert i 30 minutter ved 37° som ovenfor beskrevet. Enzymbestemmelsen ble startet ved tilsetning av 83 ul substrat/kofaktorblanding slik at den sluttelige prøve inneholdt følgende: 0,1 M kaliumfosfat, 5 mM dithiothreitol, 20 mM glucose-6-fosfat, 2,5 mM NADP, 0,175 enheter av glucose-6-fosfat-dehydroenase, 150 uM [<14>C] HMB-Coenzym A (15 DPM/pmol), pH 7,4. Prøveblandingen ble inkubert i 30 minutter ved 37° og ble avsluttet ved tilsetning av 70 ul av [ 3H]-mevalonsyre (35 000 DPM/bestemmelse), 0,15 mg/ml i 3N HC1. Reaksjonsblandingen fikk stå for å lactoniseres i ytterligere 30 minutter ved 37° eller over natten ved romtemperatur.

Reaksjonsproduktene ble separert ved tynnsjiktskromatografi på silicagel G, og utviklet i et umettet miljø med

aceton:benzen (3:2, v:v). Båndet svarende til mevalon-lacton ble identifisert ved eksponering for joddamp, og ble skrapet over i telleampuller. Graden av omdannelse av utgangs-substrat, HMG-CoA, til mevalonsyre ble bestemt ved væske-scintillasjonstelling i "Biofluor'1 Korreksjoner for gjenvinning og blindverdier ble foretatt for hver prøve. Proteinbestemmel-ser ble foretatt med "Bio-rad" farvebindingsbestemmelsene i hen-hold til fabrikantens instruksjoner under anvendelse av kveg-serum-albumin som standard. Cellulært protein ble oppløst fra kulturskivene ved tilsetning av 20 ul 16N KOH og ble bestemt

direkte med hensyn til proteinmengden. Undertrykkelsesverdier er uttrykt som den mengde av forbindelsen som er nødvendig for å undertrykke HMGR-aktiviteten ved 50 % i forhold til den av kontrollene.

B. Lanosta-8 ,-2 4-dien-3 p-o 1-14 a-methyl-deme thy lase -

inhiberingsbestemmeIse

Lanosta-8 /2 4-dien-3p-ol-14a-methyl-demethylase-aktivitet ble bestemt i hepatiske mikrosomale rottepreparater som beskrevet i Trzaskos et al., J. Biol. Chem., 261, 16937-16942 (1986). Spesifikt ble testforbindelsene tilsatt til prøveblandingene som detergent-suspensjoner med substrat under anvendelse av 5 mg "Triton" WR-1339, 100 uM lanost-8-en-3p-ol-substrat, og testf orbindelsene varierende fra 0 til 100 \ iM. Inhibitor/substrat/detergent-suspensjonen ble inkubert med 2 mg mikrosomalt protein i 5 minutter ved 37°, etterfulgt av en 10 minutters inkubering startet med tilsetning av cofaktorer som er nødvendig for reaksjonen. Inhiberingsverdiene ble beregnet ved å sammenligne den enzymatiske aktivitet i inhibitor-holdige prøver med de av kontrollprøvene som ikke mottok til-satte forbindelser. Inhiberingsverdier er uttrykt som den mengde av forbindelse som er nødvendig for å inhibere lanosta-8,24-dien-3p-ol-14a-methyl-demethylase-aktiviteten ved 50 % i forhold til den av kontrollene.

Resultatene av bestemmelse A og B er angitt i

Tabell I.

, Forbindelsenes evne til effektivt å undertrykke HMGR-aktivitet og inhibere lanosta-8 , 24-dien-3[3-ol-14a-methyl-demethylase-aktiviteten fremgår fra dataene i Tabell I. Som en sammenligning skal det bemerkes at cholesterol, lanosta-8,24-dien-33-ol (Forbindelse 1) og lanost-8-en-3|3-ol, testet under de samme betingelser, var uten effekt på målt HMGR-aktivitet.

I forhold til lanosta-8 , 24-dien-3|3-ol-14a-methyl-demethylase-aktiviteten ble cholesterol også funnet å være uten effekt, selv om lanosta-8,24-dien-3|3-ol og lanost-8-en-3(B-ol klart tjente som substrat for demethylaseenzymet.

Den doble inhiberingsmekanisme når det gjelder lanosta-8 , 24-dien-3|B-ol-14a-methyl-demethylering koblet med HMGR-undertrykkelse gjør disse forbindelser attraktive som hypocholesterolemiske midler.

Eksempler 14 - 21; Nedsettelse av cholesterolsyntesen i pattedyrceller

Forbindelsenes evne til å nedsette cholesterolsyntesen ble testet ved måling av inkorporeringen av radiomerket acetat i cholesterol syntetisert i CHO-celler. Forut for dette forsøk ble CHO-celler anbragt med 0,3 x 10 celler pr. 15 x 60 ml vevkulturskive i 5 ml McCoy's modifiserte medium inneholdende 1 % "Cab-O-Sil" delipidert FBS, og ble inkubert i 48 timer ved 37° i en 5 % C02, 95 % luftomgivelse. Testfor-bindelser i en 2,5 % suspensjon av BSA (fettsyrefri) i ethanol ble deretter tilsatt til kulturene slik at de sluttelige ethanol- og BSA-konsentrasjoner var 0,5 og 2,5 %. Kontroll-kulturer mottok ethanol og BSA alene. Kulturene inneholdende testforbindelsene ble deretter inkubert ved 27° C i et 5 % C0„, 95 % luftmiljø i 17 timer før tilsetning av r [1,2- 14C]-eddiksyre (57liCi/mmol) i en konsentrasjon på 10 uCi/ml i ytterligere 2 timer.

Cellene ble høstet ved vasking av cellene to ganger med 5 ml kald PBS og skraping av cellene over i 1 ml PBS. Den celleholdige løsning ble deretter overført til 15 ml's ekstrak-sjonsrør og ble behandlet med 1 ml 90 % methanol (inneholdende 15 % KOH, 100 ug/ml butylert hydroxytoluen). Alle prøver ble forsåpet i 1 time ved 80°, og de ikke-forsåpbare lipider ble deretter ekstrahert med petroleumether. Petroleumetherfrak-sjonene ble tørket under nitrogen, resuspendert i ethanol, tellet og analysert ved omvendt fase-HPLC ved 45° under anvendelse av en "Ultrasphere" octylkolonne med en mobil fase av acetonitril:methanol:vann (44:44:12). Resultatene er angitt i Tabell II. Graden av cholesterolsyntesen ble målt ved graden av radiomerket acetat inkorporert i cholesteroltoppen. Pro-senten av cholesterolsyntesen i den behandlede kultur ble beregnet basert på kontrollkulturen.

Forbindelsenes evne til å nedsette de novo cholesterolsyntesen vises ved dataene i Tabell II.

Eksempler 23 - 24:

Nedsettelse av blod- cholesterolnivåer i hamstere

Forbindelsene av formel l's evne til å nedsette blod-cholesterolnivåer er blitt demonstrert i hamstere under anvendelse av følgende prosedyre. Golden Syrian hann-hamstere (50 - 60 g) ble erholdt fra Charles River, Inc. Dyrene ble anbragt i individuelle suspensjonsbur og ble opprettholdt ved

> en lyssyklus bestående av 12 timers lys etterfølgt av 12 timers mørke. Dyrene fikk fri adgang til vann og mat inneholdende 1 % (w/w) maisolje i minimum 4 uker. Etter denne stabiliserings-periode ble en blodprøve oppsamlet ved orbital sinusblødning

under lett etherbedøvelse over i hepariniserte kapillarrør. Plasma ble separert ved sentrifugering (600 x g i 10 minutter) og plasmacholesteroler ble bestemt ved hjelp av en autoanaly-sator. Basert på målte plasmacholesterolverdier ble dyrene vilkårlig fordelt i to grupper slik at de midlere plasmacholesterolverdier var identiske for begge grupper.

Dyrene i de to grupper ble deretter gitt to dietter: (1) Diett A bestående av malt mat pluss 1 % (w/w) maisolje som ovenfor beskrevet, eller (2) diett B, bestående av A pluss 0,2 % (w/w) av en testforbindelse. Dyrene på diett B, de behandlede dyr, fikk fri adgang til mat og vann, mens dyrene på diett A ble par-tilpasset med B-dyrene og tjente som kontroller. Dyrene ble holdt på deres respektive dietter i 7 dager, ved hvilket tidspunkt de ble tappet for blod ved hjertepunktur under CC^-bedøvelse. Totale plasmacholesterolnivåer ble bestemt som ovenfor beskrevet. Resultatene er angitt i Tabell III. Dataene er angitt som middelverdier + SEM (standard feil fra middelverdi) i enheter på mg/dl. Verdien "N" representerer antall dyr i hver gruppe.

Som det fremgår fra Tabell III kan blodcholesterol-nivåer signifikant nedsettes ved administrering av forbindelsene av formel I.

Claims

1- Forbindelser.av formelen:

hvori R1 er =0, 0W1 , eller OCOW^ R2 er H, C^ Cg-alkyl, C2 -C6 -alkeny1, C2 -C6 -alkynyl eller aryl-C-j^ -Cg-alkyl; R3 er H, Cj - <C> g-alkyl, C2 - <C>6 - <a> lkenyl, C2 -C6 - alkynyl, aryl-C1 - <C>6 -alkyl, CHO, CH2 OR4 , CH2 CH2 OR4 , CHN0R4 , CH2 SR4 , CH2 CH2 SR4 , CHOR4W2, CH0R5W2 , CN, CHZ2 , CH2 Z, CHS, CHR4 N(R4 )2 , CH2CH2N(R4 )2 , CH2 CH2 Z, N(R4 ),, SR4 , 0R4 , CH-NNHR4 , poly-(OR4 , 0R5 , epoxy) ^-Cj -alkyl, N(R5 )2 , NR4 R5 , SR5 , 0R5 , CH-NNHR5 , CH2 OR5 , CH2 CH2 OR5 , CHNOR5 , CH2 SR5 , CH2 CH2 SR5 , CHR4 N(R5 )2 , CHR4 NR4 R5 , CH2 CH2 N( R5 )2 , CH2 CH2 NR4 R5 , CH2CH2NR4OR4 , CHR4 NR4 0R5 , COW4 , CSW4 , C(NR4 )W4 , C(NR4 )SR4 , C(S)SR4 , CHR4 NR4 N ( R4 ) 2 , CHR4 NR$ N ( R4 ) 2 , CHR4 NR4 NR4 R5 , CHR4 NR5 NR4 R5 , CHR4 NR4 N(R^ )2 , CHR4 NR^ N(R^ )2 , CH2 CH2 NR4 OR5 , CHR4 NR4 OR4 , CHR4 NR5 OR5 , CHR4 NR5 OR4 , CH2 CH2 NR5 OR5 , CH2 CH2 NR5 OR4 , CR4 =CR4<R>5 , C^ CR5 , CR4<=> CR4 C(R4 )2 Z, C=C-C(R4 )2Z , <CR>4<=> CR4 C(R4 )2 OR5 , C=C-C(R4 )2 OR5 , CR4 =C <R>4<C> ( <R>4 )2<OR>4 , C <=> C-C(R4 )2 OR4 , C(0)NR4 OR4 , C(0)NR4 OR5 , C(S)NR4 OR4 , C(S)NR4 OR5 , C(R4 )2OR4 , C(R4 )2 OR5 , CHR4 NR4 S02 W4 , CH^HR^R^O^ , C(R4 )2 CR4 NO <R>4, C( <R>4 )2 CR4 NOR5 , C(R4 )2 W5 , CR4 W5 OR4 , eller CR4 W5 SR4 ; R4 er H, Cj^ -Cg-alkyl, C2 -C6 -alkenyl, aryl, aryl-C^ -Cg-alkyl eller C2 -C6 -alkynyl; R5 er COW3 , CSW3 , eller C(NR4 )W3# - X og Y er uavhengig H, C^ -Cg-alkyl, Z, 0R4 , 0R5 , SR4 , SR5 , N(R4 )2, N(R5 )2/ NR4 R5 , NR4 OR4 , NR4 OR5 , NR4 N(R4 >2 , NR4NR4R<-, NR4 N(R5 )2 , NR5 N(R4 )2 , NR,-NR4R,-, eller NR5 N(R5 >2<;> eller hvor X og Y sammen er NR4 , NR,-, NOR4 , NOR5 , S, C(R4 )2 , C(R5 )2 , CR5 R4 , NN(R4 )2 , NNR. Rc , NN(RC )„, eller 0; 4 0 d z . 1 er halogen; er H, C1 -C2Q -alkyl, C2 -C2n -alkenyl, aryl, aryl-C-^-C2n-alkyl, eller C2 -C2n -alkynyl; W2 er H, C^-Cg-alkyl, C^Cg-alkenyl, aryl, aryl-C-^ -C^ -alkyl, eller C2-Cg-alkynyl ; W3 er H, C1 -Cg-alkyl, C2 -C6 -alkenyl, aryl, aryl-C-^ Cg-alkyl, C2 -C6 -alkynyl, 0R4 , eller <N> ( <R>4 )2<;> W4 er C^ -Cg-alkyl, C- p-C^ -alkenyl, aryl, aryl-C^-Cg-alkyl, C^ Cg-alkynyl, 0R4 eller N(R4 )2 ; og Wor er en 5- eller 6-leddet aromatisk heterocyklisk ring inneholdende 1 eller 2 nitrogenatomer som en del av ringen, hvilken ring eventuelt er substituert med substituenter valgt fra gruppen bestående av C^ -Cg-alkyl og C2 -C6 -alkenyl; og deres fysiologisk akseptable salter, forutsatt at a) når R3 er CHO og X og Y begge er H, og carboner 7-8 eller 8-9 er umettet, er R^ forskjellig fra OH eller 0C0CH3 , og R2 er forskjellig fra CH3 ; b) når R3 er CH3 og carbon 7-8 eller 8-9 er umettet, er R1 forskjellig fra OH eller 0C0CH3 , R2 er forskjellig fra CH3 eller H, og X og Y er forskjellig fra OH, 0C0CH3 eller H; c) når R1 er =0, eller er OV^ hvor VI1 er H eller C1 -C6 -alkyl, eller er OCOV^ hvor VI1 er C^ -C^n " alkyl eller fenyl, og X er 0R4 hvor R4 er H eller 0R5 er 0C0W3 hvori W3 er C-^ C^ -alkyl eller fenyl, og Y er H eller OH, er R3 forskjellig fra H eller aC^-Cg-alkyl; d) når R3 er CH2 0H eller CH2 OCOCH3 , og R2 er H eller CH3 , og carboner 6-7, 7-8 eller 8-9 er umettet, er R± forskjellig fra =0 eller OH eller 0C0CH3 , og X er forskjellig fra H eller OH; e) når X og Y begge er H, er R3 forskjellig fra H eller CH3 ; f) når X og Y begge er H, er R3 forskjellig fra OH, og R2 er forskjellig fra H; g) når R2 er H og R3 er a OH, og X er (3 OH, og Y er a H, og carboner 6-7, 7-8 og 8-9 er mettet, er R1 forskjellig fra OH; h) når X er OH, 0R5 , N(R4 )2 , <N> ( <R>5 )2, NR^ , SR5 , NR4 OR4 , eller NR4 OR5 , er Y forskjellig fra Z, OH, 0R5 , SR5 , NR4 OR4 , NR4 OR5 ,N (R4 )2 , eller N(R5 )2 ; i) når R3 er H, OH, eller C^ Cg-alkyl, er X og Y sammen forskjellig fra 0; j) når R3 er a OH, X er a OH og Y er H, og carboner 8-9 er umettet, er R± forskjellig fra 0C0CH3 ; k) når R3 er CN, eller CHNOH og carbon 7-8 er umettet, er R- L forskjellig fra 0C0CH3 , R2 er forskjellig fra H eller CH3 , og X og Y er forskjellig fra H; 1) når R3 er C0NH0H eller C0NH0C0CH3 , og X og Y begge er H, og R2 er CH3 og carbon 7-8 er umettet, er R± forskjellig fra OH eller 0C0CH3 ; og m) når R3 er C^ Cg-alkyl, er X og Y forskjellig fra OH eller halogen.

2. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1 hvori R3 er CHNOR4 , CN, CHR4 N(R4 )2 , CH=NNHR4 , CH=NNHR5 , CHNOR5 , CHR^ NfR^, CHR4 NR4 R^ , CHR4 NR4 OR5 , C(NR4 )W4 , C(NR4 )SR4 , CHR4 NR4 N(R4 )2 , CHR4 NR^ N(R4 )2 , CHR4NR4NR4Rj-, CHR4 NR5 NR4 R5 , CHR4 NR4 N(R5 ) , CHR4 NR^ N(R^ )2 , CHR4 NR4O R4 , CHR4 NR5 OR5 , CHR4 NR5 OR4 , C(0)NR4 OR4 , C(0)NR4 OR5 , C(S)NR4 OR4 , C(S)NR4 OR5 , eller CHR4 NR4 S02 W4 , karakterisert ved at en forbindelse ifølge krav 1 hvori R.- i , er Rdc , omsettes med et substituert eller usubstituert aminsalt i base, og om hensiktsmessig, med et dehydratiseringsmiddel.

3. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1 hvori R^ er C^ -Cg-alkyl, aryl-C-^-C^-alkyl, CHO, CH2 OR4 , CH2 SR4 , CHZ2 , CH2 Z, CHS, CH2 CH2 N(R4 )2 , CH2 CH2 Z, SR4 , SR5 , CH2OR5, CH2CH2OR5, CH2CH2OR4, CH2 SR5 , CH2 CH2 SR4 , CH2 CH2 SR5 , CH2CH2N (R5) 2 , CH^H^R^, CH2CH2NR4OR4 , COW4 , CSW4 , C(S)SR4 , CH2 CH2 NR4 OR5 , CH2 CH2 NR5 OR5 , CH2 CH2 NR5 OR4 , CH2 CHR4 NR4 S02 W4 , C(R4 )2 CR4 NOR4 , C(R4 )2<CR>4 NOR5 , eller <c> ( <R>4 )2 <w> 5, karakterisert ved at en forbindelse ifølge krav 1 hvori R^ er H eller er usubstituert, omsettes med et substituert eller usubstituert alkylerings- eller acyleringsmiddel, og om nødvendig, med et oxydasjonsmiddel.

4. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1 hvori R^ er C2 -Cg-alkeny1, C2 -Cg-alkynyl, CHOR4 W3 , CHOR5 W2 , poly-(OR4 , 0R5 , epoxy) C-^ Cg-alkyl, CR4=CR4R5' C=CR5, CR4 =CR4 C(R4 )2 Z, C=.C-C (R4 ) 2 Z , CR4 =C <R>4 C(R4 )2 OR5 , C^ C-C(R4 )2 OR5 , CR4 =CR4 C(R4 )2 OR4 , C=C-C(R4) 2OR4, C(R4 )2 OR4 , C(R4 >2 OR5 , CR^OR^ eller CR4 W5 SR4 , karakterisert ved at en forbindelse ifølge krav 1 hvori R3 er R^ , omsettes med et carbanion, og om nødvendig, med et dehydratiseringsmiddel.

5. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1 hvori R3 er N(R4 >2 , 0R4 , N(R5 )2 , NR4 Rj -, eller 0R5 , karakterisert ved at en forbindelse ifølge krav 1 hvori R3 er C0W4 , omsettes med et oxydasjonsmiddel.

6. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1 hvori R., er H, karakterisert ved at en forbindelse av formelen

hvori Rx er =0, 0W1 eller OCOV^ og R2 er H, C^-Cg-alkyl, C2 -Cg-alkenyl, C2 -Cg-alkynyl eller aryl-C^ -Cg-alkyl, omsettes med en Lewis-syre.

7. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1 hvori X og Y sammen er 0, karakterisert ved at forbindelse av formel

hvori Rx er =0, OW.^ eller 0C0W1 og R2 er H, C^-Cg-alkyl, C^ -Cg-alkenyl, C2 -Cg-alkynyl eller.aryl-C^ -Cg-alkyl, omsettes med en Lewis-syre, og om nødvendig, et substituert eller usubstituert alkyleringsmiddel.

8. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1 hvori X og Y sammen er NR4 , NR5 , NOR4 , NOR5 , NN(R. )„, NNR. Rc , eller NN(RC )„, 4 Z 4 _> D Z karakterisert ved at en forbindelse ifølge krav 1 hvori X og Y sammen er 0, omsettes med et substituert eller usubstituert aminsalt i base.

9. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1 hvori X og Y sammen er S, karakterisert ved at en forbindelse ifølge krav 1 hvori X og Y sammen er 0, omsettes med et thiolerende middel.

10. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1 hvori X og Y uavhengig er C^ -Cg-alkyl, eller hvor X og Y sammen er C(R4 )2 , C(R5 >2 , CR5 R4 , karakterisert ved at en forbindelse ifølge krav 1 hvori X og Y sammen er 0, omsettes med et carbanion, og om nødvendig et dehydratiseringsmiddel.

11. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1 hvori X og Y uavhengig er H, 0R4 , 0R5 , SR4 , SR^ , N(R4 )2 , N(R5 )2 , NR4 R5 , NR4 OR4 , NR4 OR5 , NR^fR^, NR^R^ , NR4 N(R5 )2 , NR5 N(R4 )2 , NRgNR^, eller NR^fR^, karakterisert ved at en forbindelse ifølge krav 1 hvori X og Y sammen er NR4 , NR5 , N0R4 , N0R5 , S, NN(R4 )2 , NNR4 Rj- , NN(R^ )2 , eller 0, omsettes med et reduksjonsmiddel.

12. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1 hvori X og Y uavhengig er Z, karakterisert ved at en forbindelse ifølge krav 1 hvori X og Y uavhengig er 0R4 eller ORj -, omsettes med et halogeneringsmiddel.