NO861555L - Merkede og merkbare reagenser for fluorometriske analyser. - Google Patents
Merkede og merkbare reagenser for fluorometriske analyser.Info
- Publication number
- NO861555L NO861555L NO861555A NO861555A NO861555L NO 861555 L NO861555 L NO 861555L NO 861555 A NO861555 A NO 861555A NO 861555 A NO861555 A NO 861555A NO 861555 L NO861555 L NO 861555L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- condensation product
- substance
- antibody
- antigen
- metal ion
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 28
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 52
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 claims description 45
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 38
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims description 31
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 31
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 26
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 26
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 26
- 229910052747 lanthanoid Inorganic materials 0.000 claims description 25
- 150000002602 lanthanoids Chemical class 0.000 claims description 24
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical group O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 10
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 9
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 claims description 7
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 claims description 6
- 239000013522 chelant Substances 0.000 claims description 6
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 6
- 125000005594 diketone group Chemical group 0.000 claims description 6
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 5
- 229910052771 Terbium Inorganic materials 0.000 claims 2
- LNBHUCHAFZUEGJ-UHFFFAOYSA-N europium(3+) Chemical compound [Eu+3] LNBHUCHAFZUEGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 2
- GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N terbium atom Chemical compound [Tb] GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M Sodium salicylate Chemical compound [Na+].OC1=CC=CC=C1C([O-])=O ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 229930189603 alysine Natural products 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 12
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- SHXHPUAKLCCLDV-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trifluoropentane-2,4-dione Chemical compound CC(=O)CC(=O)C(F)(F)F SHXHPUAKLCCLDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 4
- -1 alkyl aldehydes Chemical class 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- QAEDZJGFFMLHHQ-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic anhydride Chemical compound FC(F)(F)C(=O)OC(=O)C(F)(F)F QAEDZJGFFMLHHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 2
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000007421 fluorometric assay Methods 0.000 description 2
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- ZMBHCYHQLYEYDV-UHFFFAOYSA-N trioctylphosphine oxide Chemical compound CCCCCCCCP(=O)(CCCCCCCC)CCCCCCCC ZMBHCYHQLYEYDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QLCMAPLSHSKAKP-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trifluoro-3-(thiophene-2-carbonyl)pentane-2,4-dione Chemical compound FC(F)(F)C(=O)C(C(=O)C)C(=O)C1=CC=CS1 QLCMAPLSHSKAKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002941 2-furyl group Chemical group O1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYQMAGRFYJIJOQ-UHFFFAOYSA-N 4,4,4-trifluoro-1-naphthalen-1-ylbutane-1,3-dione Chemical compound C1=CC=C2C(C(=O)CC(=O)C(F)(F)F)=CC=CC2=C1 UYQMAGRFYJIJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical class OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- ZBKFYXZXZJPWNQ-UHFFFAOYSA-N isothiocyanate group Chemical group [N-]=C=S ZBKFYXZXZJPWNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000009206 nuclear medicine Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- TXBBUSUXYMIVOS-UHFFFAOYSA-N thenoyltrifluoroacetone Chemical compound FC(F)(F)C(=O)CC(=O)C1=CC=CS1 TXBBUSUXYMIVOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/805—Optical property
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
- Y10S436/808—Automated or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/802—Chromogenic or luminescent peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår analysering av organiske stoffer som finnes i human- og animalkroppsvæsker og lignende. Mer spesielt angår oppfinnelsen en fluorometrisk immunoanalyse og stoffer for bruk som merkede reagenser i en slik analyse.
Det foreligger et antall anvendelser der det er nødvendig å merke antistoffer (eller andre organiske stoffer, f.eks. makromolekyler slik som proteiner og haptener) med metallioner, enten radioaktive metallioner for bruk i radioimmunoanalyse og andre nukleære medisinske studier eller lantanidmetallioner for fluorometrisk immunoanalyse og andre studier som involverer fluorescens. For dette formål blir de organiske stoffer hensiktsmessig merket med metallioner ved påvirkning av chelater. Hittil har chelatene vært modifisert med brobyggingsreagenser som omdanner dem til bifunksjonelle reagenser slik at de bibeholder sin chelaterings-funksjon mens de allikevel er lett festbare ved kovalent binding til molekylet som skal merkes.
En klasse chelateringsreagenser som har vært benyttet for dette formål er klassen p-diketoner slik som trifluoracetylaceton og benzoyl og a- og3-naftoyltrifluoraceton, og chelater av lantanide metallioner med slike reagenser har vært koblet til antistoffer ved bruk EDTA-analoger (se europeisk søknad nr. 0.064.484). Det er også i GB-PS 1.560.402 foreslått å modifisere en p-diketonligand slik som tenoyl-trifluoracetylaceton ved festing av en aminometylsubstituent og å benytte et molekyl av den modifiserte ligand og to molekyler ikke modifisert ligand for å danne et lantanidemetallionekompleks som lett kobler til et antistoff etter omdanning av aminogruppen til en isotiocyanatgruppe.
Imidlertid er bifunksjonelle chelateringsmidler vanskelige å syntetisere og mange av reaksjonene med hvilke kovalent binding av ligand-metallione-kompleket til molekylet som skal merkes, oppnås har kun et lavt utbytte av det ønskede merkede produkt og kan også gi uønskede egenskaper på det merkede molekyl.
Foreliggende oppfinnelse søker å tilveiebringe en alternativ metode for å oppnå tilfredsstillende festing av et metallionekompleks til et organisk molekyl og derved å gi spesialisert funksjonalitet til det merkede molekyl.
Ifølge oppfinnelsen omfatter en fremgangsmåte for potensiering av et NF^-bærende makromolekyl for merking med et metallion å omsette det NF^-bærende makromolekyl med et p-diketon i nærvær av et aldehyd for å danne et cyklisk kondensasjonsprodukt.
Oppfinnelsen tilveiebringer også en metode for potensiering av et organisk makromolekyl for merking med et metallion omfattende omsetning av en NH2-bærende forbindelse med en aktiv gruppe i stand til å reagere med det organiske makromolekyl med et p-diketon i nærvær av et aldehyd for å danne et cyklisk kondensasjonsprodukt og å binde det resulterende produkt til det organiske makromolekyl via den aktive gruppe.
Videre tilveiebringer oppfinnelsen et stoff i stand til å kunne merkes med et metallion for bruk i en fluorometrisk analyseteknikk omfattende et cyklisk kondensasjonsprodukt av et NF^-bærende makromolekyl, et p-diketon og et aldehyd.
Oppfinnelsen tilveiebringer også en merket reagens for bruk i den fluorometriske analyse omfattende et cyklisk kondensasjonsprodukt av et aldehyd, et p-diketon og et organisk stoff med en NH2-gruppe, idet kondensasjonsproduktet er chelatert til et lantanidemetallion for å danne et kompleks i stand til å kunne bedømmes fluorometrisk, samt en fremgangsmåte for den fluorometriske analyse av et organisk stoff hvori en slik merket reagens benyttes.
Oppfinnelsen illustreres av de ledsagende tegninger som er diagrammer i forbindelse med analyser av alfacaeto-protein (valgt som typisk NH2-holdig antistoff) som beskrevet i eksemplene nedenfor. Fig. 1 er en kalibreringskurve som benyttet kanin anti-alfa-faeto-protein, AFP, direkte merket med trifluoracetylaceton. Fig. 2 er en kalibreringskurve hvori anti-AFP er merket ved bruk av merket polylysin, og fig. 3 er kalibreringskurven som vist i fig. 2 når Eu(III)fluorescens helt var forbedret.
Omsetningen mellom den Nr^-bærende substand eller makromolekylet (R<*->NH2), P-diketonet (R<3>COCH2COR<3>) og aldehydet (R<2->CHO) for å danne det cykliske kondensasjonsprodukt kan representeres ved ligningen:
Symbolene Ri, R<2>og R<3>er vilkårlige symboler avhengig av arten av utgangsstoffene.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen krever ikke den foregående modifi-sering av p-diketonet og, fordi den kun avhenger av den prinsipielle struktur av p-diketonen og ikke av arten av substituentene, kan den benyttes med et vidt spektrum forskjellige p-diketoner. Det er derfor mulig å velge det optimale p<->diketon på basis av andre kriterier, f.eks. dannelse av oppløselige komplekser med tilfredsstillende absorpsjons-spektra og dannelseskonstanter med et metallion som innføres for merkingsformål uten tap av immunoreaktivitet eller for å unngå toksiske virkninger, p-diketoner som med hell har vært benyttet inkluderer både aromatiske og ikke-aromatiske arter og det er foretrukket å benytte et fluorsubstituert materiale når man danner et kompleks for merking med et lantanidemetall for fluorometriske formål. Eksempler på egnede p-diketoner er trifluoracetylaceton, tenoyltrifluoraceton, 4,4,4-trifluor-l,(2-furyl)l,3-butandion og a- og p-naftoyltrifluoraceton. Andre egnede3-diketoner er de som er beskrevet i en artikkel av Hemmila et al i "Analytical Biochemistry", 137, 335-343 (1984) eller i GB-PS 1560402 eller europeisk søknad 0.064.484 eller EP-PS 0.002.963.
Det kan være fordelaktig å benytte p-diketonet i form av et metallisk p-diketonat med det angjeldende metall eller med et annet metall (f.eks. med kobber) for å fremme chelateringsegenskapene for sluttproduktet. Hvis det opprinnelige metall ikke er metallet av interesse, kan det erstattes med metallet av interesse, f.eks. et lantanidemetall, for å danne det merkede produkt.
Aldehydet som benyttes er fortrinnsvis formaldehyd når en spesialisert funksjonalitet, f.eks. chelatering, ikke er nødvendig i aldehydet, men andre aldehyder kan brukes hvis ønskelig, f.eks. Ci~C4-alkylaldehyder som eventuelt har inerte substituenter, og dette gir et ytterligere middel til å kunne variere egenskapene for det resulterende cykliske kondensasjonsprodukt. Aldehydet selv kan ha chelaterende egenskaper tilsiktet innebygget i sin kjemiske struktur og disse vil så understøtte chelater-ingen av metallet i det merkede produkt.
Oppfinnelsen kan benyttes for å tilveiebringe merkede reagenser og forløpere for disse fra organiske stoffer uansett om de til å begynne med inneholder tilstrekkelige NH2-grupper for dannelse av det cykliske kondensasjonsprodukt eller ikke. Der det organiske stoff inneholder ingen eller utilstrekkelig NH2-grupper til å begynne med, kan et cyklisk kondensasjonsprodukt dannes ved intitialreaksjon av p-diketonet og aldehydet ved bruk av et amin eller en aminosyre eller en annen NH2-holdig forbindelse, f.eks. en NH2-holdig polymer (slik som et polylysin) med en aktiv gruppe i stand til å reagere med makromolekylet. Det resulterende cykliske kondensasjonsprodukt omsettes så med det organiske som skal merkes ved en mild reaksjon gjennom den aktive gruppen for festing til det organiske stoff. Et eksempel på en slik reaksjon er karbodiimidreaksjonen. Alternativt kan det fremstilles en aktiv ester, f.eks. den hydroksysuksinimidaktive ester av poly-L-lysin. I stedet for polylysinet er det mulig å benytte et lysinholdig chelat som så gir ytterligere understøttelse ved chelatering av metallet i det ferdige produkt. Et eksempel på et slikt chelat er siderofilin (transferrin).
Oppfinnelsen kan således benyttes til å potensiere for merking med metallioner et vidt spektrum av organiske stoffer som naturlig opptrer i human- og animalkroppsvæsker eller dyrkes eller dannes kunstig, f.eks. antigener, antistoffer, hormoner (f.eks. T4), enzymer og andre proteiner og haptener, og alle slike stoffer er ment å omfattes innen uttrykket makromolekyl slik dette uttrykk her benyttes. De angjeldende stoffer vil generelt ha molekylvekter utover 300 for å kvalifiseres som makromolekyler, men stoffer med lavere molekylvekt er ikke utelukket. Makromolekylet vil generelt inneholde bundne underenheter slik som amono-syrerester, men dette er ikke et krav.
Reaksjonen for å danne det cykliske kondensasjonprodukt gjennomføres fortrinnsvis ved en mildt sur pH-verdi, f.eks. 5,5 til 6,5, selv om alkaliske pH-verdier ikke er utelukket. Fortrinnsvis gjennomføres den ved en mildt forhøyet temperatur, f.eks. 30 til 50 °c. Bruken av høye temperaturer som kan skade det NH2-bærende makromolekyl bør unngås når man danner kondensasjonsproduktet for bruk ved etterfølgende analyser. Bruken av lavere temperaturer reduserer reaksjonshastigheten og kan kreve en forlenget inkuberingsperiode.
Cykliske kondensasjonsprodukter ifølge oppfinnelsen er stabile og sterke chelatmetallioner slik som lantanidemetallioner. Således kan de omsettes å for å danne et kompleks av Eu(III) eller andre lantanidemetaller slik som Tb(III), i stand til å gi fluorescerende komplekser og det resulterende kompleks vil generelt være fluorescent i oppløsning uten behov for å tilsette et eksogent p-diketon. Reaksjonen kan gjennomføres på en hvilken som helst kjent eller konvensjonell måte, f.eks. ved dialyse mot en buffer inneholdende ioner av metallet som skal innarbeides.
Kondensasjonsproduktene som fremstilles med de chelater ende aldehyder tilfedsstiller koordineringskapasiteten for lantanidemtallene mer totalt enn produktene fra andre aldehyder. Slike produkter chelaterer derfor metaller bedre og er mer fluorescente når de foreligger i form av lantanidechelater.
Absorpsjonsmaksimumbølgelengdene for kondensasjonsproduktene skiftes vanligvis noe hver vei, avhengig av utgangs-p<->diketonet, i forhold til p-diketonet. Dette skift i bølelengde og således eksitasjonsmaksimum kan benyttes som indeks for dannelse av kondensasjonsproduktet.
Det cykliske kondensasjonsprodukt som er merket med et lantanidemetallion kan benyttes som merket reagens i den fluorometriske analyse av et vidt spektrum stoffer, men er primært ment for bedømmelse av organiske makromolekyler og haptener som opptrer i kroppsvæsker enten naturlig eller som et resultat av sykdom eller mangler eller behandling av sykdom eller mangel, f.eks. antistoffer, antigener og andre proteiner, hormoner, enzymer, medikamenter og viralpartikler. Det fluorometriske analyse kan gjennomføres ved bruk av kjente standard teknikker. Eksempler på egnede teknikker er nevnt i patentbeskrivelser og søknader som angitt ovenfor og i de deri nevnte referanser. Det skal også henvises til Dakubu S., Ekins R.P. et al, "High-sensitivity, pulsed-light time-resolved fluoroimmunoassay" i Practical Immunoassay, W. Butt (utgiver), Marcel Dekker Inc., sidene 71-101. Analysen kan være en kvalitativ analyse som benyttes kun for detektering av et mulig antistoff eller et annet stoff, eller en kvantitativ analyse, benyttet for å bedømme konsentrasjonen av stoffet som skal analyseres.
En foretrukket analyseprosedyre er en to-sete (smørbrød) prosedyre hvori substansen som skal analyseres (f.eks. et antistoff eller antigen) omsettes til å begynne med med sitt komplement (f.eks. et antigen derfor eller et antistoff derfor), hensiktsmessig mens det sistnevnte er bundet til et fast substrat, og produktet som ble omsatt med en merket reagens i stand til gjensidig påvirkning med bindingssubstansen som analyseres (f.eks. merket antigen eller merket antistoff).
En alternativ fluorometrisk analyse involverer en metodologi i henhold til en standard radioimmunoanalyse hvori stoffet som skal analyseres (f.eks. et antigen eller et antistoff) og en merket reagens konkurrerer om reaktive seter på et komplement (f.eks. et antistoff eller antigen) som hensiktsmessig er bundet til et fast substrat.
Når det cykliske kondensasjonsprodukt benyttes i en fluorometrisk immunoanalyse, er det mulig å gjennomføre målingene av fluorescensen for påvisning av lantanidemetallionet (f.eks. Eu(III)) enten i oppløsning, eller når det merkede molekylet er bundet til en fast bærer. Når målingen gjennomføres i oppløsning, kan lantanidemetallionet ekstraheres fra det merkede kompleks, f.eks. ved omsetning med tilsatt3-diketon (som ikke behøver å være det samme som p-diketonet som benyttes for å danne komplekset). Det tilsatte p-diketon kompleksdannes med metallionet og fortrenger derved kondensasjonsproduktet og det resulterende kompleks kan separeres fra kondensasjonsproduktet. Det er imidlertid en fordel ifølge oppfinnelsen at det ikke er nødvendig å benytte en slik for-bedringsoppløsning for måling av fluorescensen, men at komplekset av kondensasjonsproduktet med lantanidemetallionet inherent er fluorescerende slik at fluorescensen kan måles direkte mens fremdeles er bundet til reaksjonsproduktet.
For bestemmelse av mengden fluorescens i fast form eller i oppløsning, kan bedrede resultater oppnås ved tilsetning av trioktylfosfinoksyd (TOPO), som nevnt i EP-søknad 0.064.484. Dette muliggjør at det merkede makromolekyl kan bestemmes fluorometrisk til en konsentrasjon bedre enn 10-<10>M.
Det cykliske kondensasjonsprodukt, hensiktsmessig i oppløsning i en buffer, kan således utgjøre en del av et sett for å gjennomføre fluorometriske analyser, hvorved det organiske stoff som deltar i kondensasjonsproduktet (enten direkte eller ved etterfølgende reaksjon med en aktiv gruppe i det Nf^-bærende stoff og som virkelig deltar) velges hensiktsmessig avhengig av stoffet som skal analyseres slik at det er i stand til gjensidig påvirkning enten med stoffet som skal analyseres eller ved dette komplement, f.eks. et egnet antistoff eller antigen. Settet inkluderer hensiktsmessig det lett chelaterte kompleks av et lantanidemetallion slik som Eu(III) eller Tb(III) med kondensasjonsproduktet. Settet kan også som separat komponent inneholde et komplement for stoffet som skal analyseres, idet komplementet er bundet til en fast bærer.
De følgende reagenser ble benyttet i de følgende eksempler som kun skal være illustrerende. 1) En kommersielt tilgjengelig kanin anti-AFP-oppløsning inneholdende ca. 1 mg/ml. 2) En 1:10 fortynning av en formaldehydoppløsning, opprinnelig på 37-40% vekt/volum i formaldehyd, således nå med en konsentrasjon på ca. 1,4 x IO-<3>mol/liter. 3) En lageroppløsning av kopper II trifluoracetylaceton (CuTFAA) i metanol ved en konsentrasjon på 160 mM.
Eksempel 1
400 ul anti-AFP-oppløsning (dvs. 2,7 x 10"^ mol anti-AFP) ble inkubert ved 37 °C i 1 time med 200 ul av den fortynnede formaldehydoppløsning (dvs. 2,7 x 10~<7>mol formaldehyd) og 4 ul Cu TFAA-oppløsning (dvs. 5,4 x IO-<7>mol Cu TFAA) i en acetatbuffer (0,2 M) ved en pH-verdi på 5,7. Reaksjonsproduktet ble dialysert til å begynne med mot acetatbufferen for å fjerne ikke-omsatt små molekyler og så mot acetatbufferen inneholdende Eu(III)-ioner med konsentrasjon IO-<7>M for å danne chelatproduktet (merket antistoff), og til slutt mot acetatbufferen for å fjerne overskytende Eu(III). Det merkede antistoff ble oppløst i en tris(hydroksymetyl)aminometan/saltoppløsning/azid-buffer (0,02 M) ved en pH-verdi på 7,6 (50 mM i NaCl) for analyseformål. Hvis ønskelig kunne rensingen gå videre ved hjelp av kromatografi.
Eksempel 2
Den ovenfor angitte prosedyre ble gjentatt ved i stedet for kanin anti-AFP å benytte et polylysin med molekylvekt 80 000. Det resulterende merkede polylysin ble koblet til antistoff ved bruk av l-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimidhydroklorid.
De merkede produkter som oppnås i eksempel 1 og 2 ble benyttet i analyser rettet mot AFP ved en standard to-sete ("sandwich")-analyseprosedyre.
Claims (20)
1.
Stoff i stand til å kunne merkes med et metallion for bruk i en fluorometrisk analyseteknikk, karakterisert ved at det omfatter et cyklisk kondensasjonsprodukt av et NF^-bærende makromolekyl, et p-diketon og et aldehyd.
2.
Stoff ifølge krav 1, karakterisert ved at det Ny-bærende makromolekyl er et antistoff eller antigen.
3.
Stoff ifølge krav 1, karakterisert ved at det Ny-bærende makromolekyl er en Ny-holdig forbindelse som via en aktiv gruppe er forbundet med et antistoff eller antigen.
4.
Stoff ifølge krav 3, karakterisert ved at det Ny-bærende makromolekyl er et polylysin eller alysinholdig chelat med en aktiv gruppe gjennom hvilken det kan forbindes til et antistoff eller antigen.
5.
Stoff ifølge krav 1, karakterisert ved at p-diketonet er en fluorsubstituert forbindelse.
6.
Stoff ifølge krav 1, karakterisert ved at aldehydet er formaldehyd.
7.
Stoff ifølge krav 1, karakterisert ved at enten p-diketonet eller aldehydet har chelateringsegenskaper.
8.
Fremgangsmåte for å potensiere et Ny-bærende makromolekyl for merking med et metallion, karakterisert ved at den omfatter å omsette det NJ^ -bærende makromolekyl med et p <-> diketon i nærvær av et aldehyd for å danne et cyklisk kondensasjonsprodukt.
9.
Fremgangsmåte ifølge krav 8, karakterisert ved at makromolekylet er et antistoff eller antigen.
10.
Fremgangsmåte for potensiering av et organisk makromolekyl for merking med et metallion, karakterisert ved at den omfatter å omsette en NIFj-bærende forbindelse med en aktiv gruppe i stand til reaksjon med det organiske makromolekyl med et p-diketon i nærvær av et aldehyd for å danne et cyklisk kondensasjonsprodukt og å forbinde det resulterende produkt til det organiske makromolekyl via den aktive gruppe.
11.
Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved at makromolekylet er et antistoff eller antigen.
12.
Merket reagens for bruk i fluorometrisk analyse, karakterisert ved at det omfatter et cyklisk kondensasjonsprodukt av et aldehyd, et p-diketon og et organisk stoff med en Ny-gruppe, idet kondensasjonsproduktet chelateres til et lantanidemetallion for å danne et kompleks i stand til å kunne bedømmes fluorometrisk.
13.
Merket reagens ifølge krav 12, karakterisert ved at NH2~ resten i det cykliske kondensasjonsproduktet bæres på eller et bundet til et organisk makromolekyl.
14.
Merket reagens ifølge krav 13, karakterisert ved at det organiske makromolekyl er et antistoff eller antigen.
15.
Merket reagens ifølge krav 12, karakterisert ved at lantanidemetallionet er europium (III) eller terbium (III).
16.
Fremgangsmåte for fluorometrisk analyse av et organisk stoff, karakterisert ved at man anvender et merket reagens ifølge krav 12.
17.
Fremgangsmåte ifølge krav 16, karakterisert ved at analysen gjennomføres ved bruk av en sandwich-teknikk hvori stoffet som skal analyseres til å begynne med omsettes med sitt komplement for binding til komplementet og deretter omsettes med en merket reagens ifølge krav 12, idet den merkede reagens inkluderer en organisk rest i stand til gjensidig påvirkning med stoffet som analyseres mens dette er bundet til komplementet.
18.
Fremgangsmåte ifølge krav 16, karakterisert ved at fluorescensen måles mens lantanidemetallionet fremdeles er tilstede i reaksjonsproduktet av det merkede reagens og stoffet som analyseres og/eller dets komplement.
19.
Fremgangsmåte ifølge krav 16, karakterisert ved at fluorescensen måles etter ekstrahering av lantanidemetallionet fra reaksjonsproduktet av det merkede reagens og stoffet som analyserer og/eller dettes komplement.
20.
Sett for bruk i fluorometrisk analyse av et antistoff eller antigen, karakterisert ved at det omfatter en oppløsning i en buffer av et cyklisk kondensasjonsprodukt av et p-diketon, et aldehyd og et organisk stoff i stand til gjensidig påvirkning enten med antistoffet eller antigenet som skal analyseres eller med dettes komplement, idet det organiske stoff deltar direkte i det cykliske kondensasjonsprodukt hvis det er Ny-bærende eller er forbundet til en NP^ -bærende forbindelse som deltar direkte i det cykliske kondensasjonsprodukt, hvorved kondensasjonsproduktet chelateres med et lantanidemetallion for å danne den merkede reagens.
Nye krav
1.
Stoff i stand til å kunne merkes med et metallion for bruk i en fluorometrisk analyseteknikk, karakterisert ved at det omfatter et cyklisk kondensasjonsprodukt av et Ny-bærende makromolekyl, et p-diketon og et aldehyd.
2.
Stoff ifølge krav 1, karakterisert ved at det Ny-bærende makromolekyl er et antistoff eller antigen eller en Ny-holdig forbindelse forbundet via en aktiv gruppe til et antistoff eller antigen.
3.
Stoff ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at p-diketonet er en fluorsubstituert forbindelse og/eller aldehydet er formaldehyd.
4.
Stoff ifølge et hvilket som helst av kravene 1-3, karakterisert ved at enten p-diketonet eller aldehydet har chelaterende egenskaper.
5.
Fremgangsmåte for potensiering av et Ny-bærende antistoff eller antigen for merking med et metallion, karakterisert ved at den omfatter omsetning av det Ny-bærende antistoff eller antigen med et p-diketon i nærvær av et aldehyd for å danne et cyklisk kondensasjonsprodukt.
6.
Fremgangsmåte for potensiering av et antistoff eller antigen for merking med et metallion, karakterisert ved at den omfatter å omsette en Ny-bærende forbindelse med en aktiv gruppe i stand til reaksjon med det antistoff eller antigen med et p <-> diketon i nærvær av et aldehyd for å danne et cyklisk kondensasjonsprodukt og å forbinde det resulterende produkt til det antistoff eller antigen via den aktive gruppe.
7.
Merket reagens for bruk i fluorometrisk analyse, karakterisert ved at det omfatter et cyklisk kondensasjonsprodukt av et aldehyd, et p <-> diketon og et organisk stoff med en Ny-gruppe, idet kondensasjonsproduktet chelateres til et lantanidemetallion for å danne et kompleks i stand til å kunne bedømmes fluorometrisk.
8.
Merket reagens ifølge krav 1, karakterisert ved at NF^ -resten i det cykliske kondensasjonsprodukt bæres på eller forbindes til et organisk makromolekyl og at lantanidemetallionet er europium (III) eller terbium (III).
9.
Fremgangsmåte for fluorometrisk analyse av et organisk stoff hvori et merket reagens ifølge krav 1 eller 8 benyttes, karakterisert ved at NF^ -resten i det cykliske kondensasjonsprodukt er båret på eller forbundet til et antistoff eller antigen, og at analysen eventuelt gjennomføres ved bruk av en sandwich-teknikk idet fluorescensen måles enten mens lantanidemetallionet fremdeles er tilstede i reaksjonsproduktet mellom det merkede reagens og stoffet som analyseres og/eller dettes komplement, eller etter ekstrahering av lantanidemetallionet fra reaksjonsproduktet mellom det merkede reagens og stoffet som analyseres og/eller dettes komplement.
10.
Sett for bruk i fluorometrisk analyse av et antistoff eller antigen, karakterisert ved at det omfatter en oppløsning i en buffer av et cyklisk kondensasjonsprodukt av et p <-> diketon, et aldehyd og et organisk stoff i stand til gjensidig påvirkning enten med antistoffet eller antigenet som skal analyseres eller med dettes komplement, idet det organiske stoff deltar direkte i det cykliske kondensasjonsprodukt hvis det er NF^ -bærende eller er forbundet til en NF^-bærende forbindelse som deltar direkte i det cykliske kondensasjonsprodukt, hvorved kondensa sjonsproduktet chelateres med et lantanidemetallion for å danne den merkede reagens.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB848421318A GB8421318D0 (en) | 1984-08-22 | 1984-08-22 | Potentiating antibodies/other macro-molecules |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO861555L true NO861555L (no) | 1986-04-18 |
Family
ID=10565671
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO861555A NO861555L (no) | 1984-08-22 | 1986-04-18 | Merkede og merkbare reagenser for fluorometriske analyser. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4857475A (no) |
| EP (1) | EP0222766B1 (no) |
| JP (1) | JPH0625765B2 (no) |
| AU (1) | AU4724185A (no) |
| DE (1) | DE3583507D1 (no) |
| DK (1) | DK184586A (no) |
| FI (1) | FI87022C (no) |
| GB (1) | GB8421318D0 (no) |
| NO (1) | NO861555L (no) |
| WO (1) | WO1986001604A1 (no) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4886744A (en) * | 1985-04-25 | 1989-12-12 | Polaroid Corporation | Fluorescent conjugates and biological diagnostic assay system |
| GB8602304D0 (en) * | 1986-01-30 | 1986-03-05 | Dakubu S | Dihydropyridine condensation products |
| GB8622855D0 (en) * | 1986-09-23 | 1986-10-29 | Ekins R P | Determining biological substance |
| EP0290269A3 (en) * | 1987-05-06 | 1989-08-09 | Cyberfluor Inc. | Immunoassay methods and reagents and methods for producing the latter |
| GB8803000D0 (en) * | 1988-02-10 | 1988-03-09 | Ekins Roger Philip | Determination of ambient concentrations of several analytes |
| SE8703682L (sv) * | 1987-09-24 | 1989-03-25 | Wallac Oy | Homogen bestaemningsmetod som utnyttjar affinitetsreaktioner |
| US5308754A (en) * | 1988-03-21 | 1994-05-03 | Kankare Jouko J | Electrogenerated luminescence in solution |
| SE8801702D0 (sv) * | 1988-05-05 | 1988-05-05 | Pharmacia Ab | Sett vid bestemning av enzymatisk aktivitet |
| US5240867A (en) * | 1989-02-09 | 1993-08-31 | Fujitsu Limited | Semiconductor integrated circuit having interconnection with improved design flexibility, and method of production |
| FI88654C (fi) * | 1991-03-15 | 1993-06-10 | Datacity Center Oy | Fluorescenshoejningsmetod |
| US5312922A (en) * | 1992-04-06 | 1994-05-17 | Nordion International Inc. | Europium and terbium chelators for time-resolved fluorometric assays |
| GB0210535D0 (en) * | 2002-05-08 | 2002-06-19 | Novartis Ag | Organic compounds |
| WO2007084141A2 (en) * | 2005-01-24 | 2007-07-26 | Sri International | Surface-enhanced lanthanide chelates |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3956341A (en) * | 1974-02-21 | 1976-05-11 | Smithkline Corporation | 1,3,5-Tricarbo-1,4-dihydropyridines |
| SE428332B (sv) * | 1979-03-08 | 1983-06-20 | Wallac Oy | Forfarande for fluorescensspektroskopisk bestemning av biologiskt aktivt emne, sasom hapten, antikropp eller antigen |
| US4352751A (en) * | 1979-09-10 | 1982-10-05 | Analytical Radiation Corporation | Species-linked diamine triacetic acids and their chelates |
-
1984
- 1984-08-22 GB GB848421318A patent/GB8421318D0/en active Pending
-
1985
- 1985-08-22 DE DE8585904129T patent/DE3583507D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-08-22 WO PCT/GB1985/000377 patent/WO1986001604A1/en active IP Right Grant
- 1985-08-22 US US06/862,215 patent/US4857475A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-22 JP JP60503723A patent/JPH0625765B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-22 EP EP85904129A patent/EP0222766B1/en not_active Expired
- 1985-08-22 AU AU47241/85A patent/AU4724185A/en not_active Abandoned
-
1986
- 1986-04-18 NO NO861555A patent/NO861555L/no unknown
- 1986-04-22 DK DK184586A patent/DK184586A/da not_active Application Discontinuation
-
1987
- 1987-02-20 FI FI870716A patent/FI87022C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK184586D0 (da) | 1986-04-22 |
| DK184586A (da) | 1986-04-22 |
| JPH0625765B2 (ja) | 1994-04-06 |
| EP0222766B1 (en) | 1991-07-17 |
| GB8421318D0 (en) | 1984-09-26 |
| FI870716A (fi) | 1987-02-20 |
| WO1986001604A1 (en) | 1986-03-13 |
| DE3583507D1 (de) | 1991-08-22 |
| JPS62501442A (ja) | 1987-06-11 |
| FI87022B (fi) | 1992-07-31 |
| AU4724185A (en) | 1986-03-24 |
| US4857475A (en) | 1989-08-15 |
| FI87022C (fi) | 1992-11-10 |
| FI870716A0 (fi) | 1987-02-20 |
| EP0222766A1 (en) | 1987-05-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102333886B (zh) | 液相均相测定 | |
| Tagit et al. | Fluorescence sensing of circulating diagnostic biomarkers using molecular probes and nanoparticles | |
| JP3117459B2 (ja) | 螢光化合物からの発光信号増幅方法 | |
| EP0174744B1 (en) | Fluorescent energy transfer with phycobiliproteins | |
| FI93781B (fi) | Biospesifinen multiparametrinen määritysmenetelmä | |
| US5637509A (en) | Modulated homogeneous fluorescence biospecific affinity assay employing fluorescing lanthanide chelates as covalent labels | |
| Sun et al. | Advances in the study of luminescence probes for proteins | |
| Tang et al. | Hemin/G-quadruplex-based DNAzyme concatamers as electrocatalysts and biolabels for amplified electrochemical immunosensing of IgG1 | |
| US8124359B2 (en) | Use of additives for the reduction of non-specific binding in assays | |
| US20090263914A1 (en) | Bioanalytical assay | |
| NO861555L (no) | Merkede og merkbare reagenser for fluorometriske analyser. | |
| JPS5942454A (ja) | 液体中のハプテン又は抗原を分析するための均一系免疫分析方法及び試薬 | |
| CN103443626A (zh) | 链霉亲和素结合磁性粒子及其制造方法 | |
| Chen et al. | Gold nanoparticles-based fluorescence resonance energy transfer for competitive immunoassay of biomolecules | |
| Lu et al. | Fluorescence ELISA based on CAT-regulated fluorescence quenching of CdTe QDs for sensitive detection of FB 1 | |
| Xiong et al. | Ultrasensitive direct competitive FLISA using highly luminescent quantum dot beads for tuning affinity of competing antigens to antibodies | |
| Tang et al. | Magnetic bead-based fluorescence immunoassay for aflatoxin B 1 in food using biofunctionalized rhodamine B-doped silica nanoparticles | |
| EP3341726B1 (en) | Immunoassay with enhanced sensitivity | |
| Yang et al. | Time-resolved fluorescence immunoassay with measurement of a europium chelate in solution: dissociation conditions and application for determination of cortisol | |
| US11614445B2 (en) | Background blockers for binding assays | |
| JP3732090B2 (ja) | 全アナライトの測定方法 | |
| Zeng et al. | Rational design of nonlinear hybridization immunosensor chain reactions for simultaneous ultrasensitive detection of two tumor marker proteins | |
| Shi et al. | A multicolor nano-immunosensor for the detection of multiple targets | |
| Sun et al. | Solid substrate phosphorescent immunoassay based on bioconjugated nanoparticles | |
| JPH10282098A (ja) | 蛍光免疫測定法 |