NO800497L - Farvestabil glucosetest. - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse angår generelt diagnostiske tester, og nærmere bestemt de tester som er anvendbare ved kvalitativ og kvantitativ bestemmelse av glucose, i hvilke tester glucose omdannes til et peroxyd.

Glucoseoxydase omdanner enzymatisk glucose til glucon-syre og hydrogenperoxyd. Det således dannede hydrogenperoxyd kan reduseres til E^O av en peroxydativt aktiv substans i nærvær av et indikatorsystem som oxyderes under dannelse av en respons, slik som en farveforandring. Den kromogene indikator o-tolidin har vært anvendt en viss tid i glucosetestsystemer, men gir resultater som underkastes reduksjon av den oxyderte indikator av. interfererende substanser slik som ascorbinsyre. Videre er der reist spørsmål om o-tolidins sikkerhet.

Britiske patentskrifter 1.464.359 og 1.464.360 beskriver bruken av 3,3',5,5'-tetramethylbenzidin og lignende forbindelser og deres bruk ved påvisning og bestemmelse av hydrogenperoxyd eller av bestanddeler som reagerer under dannelse av per-oxyder. Konsentrasjoner av benzidinderivatene beskrevet deri er ulogiske og er generelt ikke mer enn 6 mg/ml av den an-vendte impregneringsoppløsning.

Bruken av benzidinderivatene i de konsentrasjoner som

er beskrevet i de britiske patentskrifter fører til relativt langsom dannelse av en farve eller dannelse av en farve som ikke forblir stabil over et lengere tidsrom. I det sistnevnte tilfelle er den utviklede farve tilbøyelig til å svekkes ved henstand, hvilket gjør avlesninger ømfintlige overfor feil og lår seg vanskelig avlese av utrenet personell.

Det er derfor et mål med oppfinnelsen å tilveiebringe

en forbedret test for påvisning av glucose.

Et annet mål med oppfinnelsen er å tilveiebringe en forbedret test for glucose under anvendelse av materialer som er erkjent sikre.

Et ytterligere mål med oppfinnelsen er å tilveiebringe en forbedret test for påvisning av glucose som danner en farve som forblir stabil med tiden.

Et ytterligere mål er å tilveiebringe en forbedret test for påvisning av glucose i en prøve hvori de ovenfor angitte fordeler oppnåes gjennom nye testmidler omfattende glucose oxydase, en peroxydativt aktiv substans og en 3 , 3 ' , 5 , 5'-tetraalkylbenzidin indikator hvor den sistnevnte er tilstede i en mengde som er tilstrekkelig for hurtig å gi ved kontakt av testmidlene med en på forhånd bestemt mengde av en glucose-holdig prøve et stabilt, farvet reaksjonsprodukt.

Andre mål og en nærmere forståelse av oppfinnelsen vil fremgå av den etterfølgende beskrivelse og krav rettet på foretrukne utførelsesformer, tatt i forbindelse med de medføl-gende tegninger, hvori: Fig. 1 er en grafisk presentasjon- av de data som er angitt i tabell I under anvendelse av glucosetestanordninger fremstilt ved bruk av impregnerende oppløsning av formel I i eksempel I, hvor en slik presentasjon er erholdt ved å ned-tegne K/S, definert senere, mot glucosekonsentrasjon; Fig. 2 er en grafisk presentasjon av de data som er angitt i tabell I under anvendelse av glucosetestanordninger fremstilt ved bruk av impregneringsoppløsning av formel II i eksempel I, idet en slik presentasjon ér erholdt ved å ned-tegne K/S mot glucosekonsentrasjon; Fig. 3 er en grafisk presentasjon av de data som er angitt i tabell I under anvendelse av glucosetestanordninger fremstilt ved bruk av impregneringsoppløsning av formel III i eksempel I, idet en slik presentasjon er erholdt ved nedteg-ning av K/S mot glucosekonsentrasjon; Fig. 4 er en grafisk presentasjon av de data som er angitt i tabell I under anvendelse av glucosetestanordninger fremstilt ved bruk av impregneringsoppløsning av formel IV i eksempel I, idet en slik presentasjon er erholdt ved nedteg-ning av K/S mot glucosekonsentrasjon; og Fig. 5 er en grafisk presentasjon av prosent observert farveforandring, definert som (-^K/S)/ K/S x 100, for testanordningene anvendt for å oppnå de data som er illustrert i

Fig. 1-4.

I motsetning til kjente materialer er de foreliggende

hovedsakelig fri for problemet med farvesvekkelse. Denne u-ventede egenskap observeres vedøkning av konsentrasjonen av 3 , 3 ' , 5 , 5'-tetraalkylbenzidin indikatoren. Oppfinnelsen avvi-ker derfor fra den kjente lære ved at den hurtig gir en farve

som forblir stabil efter dens dannelse. Man behøver ikke å vente på at indikatorfarven skal stabilisere seg, og heller ikke bry seg med en kontinuerlig forandring i farve med tiden efter farveforandringens begynnelse. Ifølge oppfinnelsen er nu et materiale og en anordning tilgjengelig som gjør bruk av et 3,3',5,5'-tetraalkylbenzidin' for hurtig å fremkalle en stabil farve ved kontakt med en prøve inneholdende glucose i området fra en liten, men påvisbar mengde opp til 400 mg/dl.

Ifølge oppfinnelsen er der tilveiebragt testmidler, slik som en sammensetning, en testanordning, metode for fremstilling av testanordningen og fremgangsmåte for påvisning av glucose i en prøve. Nærmere bestemt omfatter testanordningene glucoseoxydase, en peroxydativt aktiv substans slik som peroxydase, og en 3,3',5,5<1->tetraalkylbenzidin indikator i en mengde tilstrekkelig til hurtig å gi, ved kontakt av testmidlene med en på forhånd bestemt mengde av en glucose-holdig prøve, et stabilt farvet reaksjonsprodukt som er antatt å om-fatte reduserte og oxyderte former av indika toren i stabil likevekt. Det stabile farvede reaksjonsprodukt dannes innen kort tid, ikke mer enn 60 sekunder, og spesifikt mellom 30 og 60 sekunder efter kontakt av testmidlene med kroppsvæskeprø-ven som skal testes.

Konsentrasjonen av 3,3',5,5'-tetraalkylbenzidin i forhold til mengden av glucoseoxydaseaktivitet tilstede i testmidlene ifølge oppfinnelsen er kritisk. Ifølge oppfinnelsen er 3,3',5,5'-tetraalkylbenzidin tilstede i testmidlene i en konsentrasjon på minst 2,5 mmol (mM) pr. tusen internasjonale enhéter (I.U.) glucoseoxydaseaktivitet.

3,3',5,5'-tetraalkylbenzidin-forbindelsene er særlig, fordelaktige eftersom de er blitt erkjent å ha ikke-carcino-gene egenskaper.

Ennvidere er der tilveiebragt en testanordning for bestemmelse av glucose, hvilken anordning omfatter en bærer eller matrise inkorporert med testmidlene ifølge oppfinnelsen. En testanordning kan anta formen av en tablett, eller fortrinnsvis en anordning av testremseform.. Langstrakte ark av bærermateriale som er blitt inkorporert med testmidlene iføl-ge oppfinnelsen taes i betraktning som anordninger anvendt her.

Ved fremstilling og distribusjon kan disse langstrakte ark ta form av store ruller, slik som av filtrerpapirmateri-ale. Anordningen fremstilles f.eks. ved impregnering av en bærer med en oppløsning av testmidlene ifølge oppfinnelsen, hvoretter den impregnerte bærer tørkes. En fremgangsmåte for bestemmelse av glucose i en væskeprøve omfatter kontakt av prøven med testmidlene eller anordningen ifølge oppfinnelsen og observasjon av enhver resulterende farveforandring.

Selvom spesifikke angivelser anvendes i den efterfølgen-de beskrivelse for klarhets skyld, er disse angivelser bereg-net på å henvise bare til den spesielle utførelsesform av oppfinnelsen valgt av illustrative grunner, og.er ikke bereg-net på å definere eller begrense oppfinnelsens ramme.

Testanordningene ifølge oppfinnelsen kan anta mange fy-sikalske former og innbefatte mange spesifikke 3,3',5,5'-tetraalkylbenzidiner uten hensyn til den antatte form. Disse, sammen med kjente additiver slik som stabiliseringsmidler, som i tillegg kan anvendes om ønsket, er beskrevet i det et-terfølgende. Testmidlet anvendes for å påvise glucose. ved at dette bringes i kontakt med en prøve slik som urin, blod, serum, cerebrospinalvæske, vevkulturvæske eller lignende.

De forskjellige benzidin indikatorer som kan anvendes

innbefatter 3,3',5,5 -tetraalkylbenzidiner, hvori alkyl er et C1~C4a-*-kylf og 3 , 3 ' , 5 , 5 '-tetramethylbenzidin er spesielt fo-retrukket. Andre som.også kan anvendes, innbefatter.3-methyl, 3'-methyl, 5-ethyl, 5<1->ethylbenzidin og 3,3<1>,5,5<1->tetra-ethylbenzidin. Som det sees av disse eksempler kan de fire alkylgrupper være lik eller forskjellig. ;Glucoseenzymer som kan anvendes er de som vil reagere med en glucose-holdig væske som testes, under dannelse av et på forhånd bestemt reaksjonsprodukt, slik som hydrogenperoxyd. Eksempelvis kan glucoseoxydase erholdt fra muggsopper anvendes. Disse er vanligvis angitt som flavoproteintypen da de inneholder som en prostetisk gruppe eller et coenzym et fla-vin eller isoalloxazin. ;Fortrinnsvis er et dobbelt enzymsystem tilstede: ett enzym omdanner glucose til dannelse av hydrogenperoxyd, mens det annet enzym har peroxydativ aktivitet. Substanser med peroxydativ aktivitet som er nyttige i foreliggende oppfinnelse kan velges fra forskjellige organiske og uorganiske kilder. Planteperoxydaser slik som pepperotperoxydase eller potetper-oxydase kan anvendes. Uorganiske forbindelser med peroxydaseaktivitet omfatter jodider, slik som natrium og ammoniumjodi-der, og molybdater, slik som kalium og ammoniummolybdater. I tillegg kan urohemin og et antall andre, porf yrinsubstanser med peroxydaseaktivitet anvendes. Andre substanser som ikke er enzymer, men som har peroxydativ aktivitet,.innbefatter slike forbindelser som jernsulfocyanat, jerritannat, jernferrocyanid, kaliumkromsulfat og lignende. ;Da materialene anvendt til å måle glucose i blod f.eks. bør opprettholdes ved en.pH verdi i området fra pH 4 til pH 7.5, er et buffersystem omfattende tris(hydroxymethyl)amino-methan, malonsyre og dinatriummaionat særlig nyttige for dette formål. ;En interpolymer av methylvinylether og maleinsyreanhydrid er også nyttig ved formulering av glucoseindikatorer ifølge oppfinnelsen. En slik interpolymer markedsføres som "Gantrez AN-139" av GAF Corporation. Når denne interpolymer oppløses i en alkohol, danner den et partielt esterderivat, ;og når interpolymeren oppløses i vann, danner den et syrederivat. Da testmidler fremstilt ifølge oppfinnelsen typisk fremstilles av vandige alkoholiske oppløsninger, vil testma-terialer i sluttproduktet inneholde enten et syrederivat eller et partielt esterderivat eller en blanding av de nevnte derivater. Nærværet av de ovenfor beskrevne interpolymerderi-vater sammen med polyvinylpyrrolidon (PVP) med f.eks. en mid-lere molekylvekt.på 40.000, øker sterkt den dannede farve når de farvedannende indikatorer oxyderes ved hydrogenperoxyd i nærvær av peroxydase. Denne økning av farve bidrar til skar-pere å bestemme forskjellige farvesjatteringer for forskjellige konsentrasjoner av glucoseinnhold i en gitt væskeprøve. Dette er særlig viktig for legen i hans diagnose av nærvær av en gryende diabetisk tilstand. ;Også tilveiebragt er testanordninger innbefattende testmidlene ifølge oppfinnelsen og en fremgangsmåte for fremstilling av slike testanordninger som omfatter inkorporering av en bærer med testmidlene. I tillegg til impregnering kan inkorporering av bæreren med testmidlene utføres ved andre egne-de teknikker slik som ved trykking eller sprøytning av testmaterialet på bæreren. ;Fortrinnsvis fremstilles testanordningen ved en fremgangsmåte hvorved bæreren impregneres først med en oppløsning med fra 4 x IO<4>til 8 x 10^ internasjonale enheter av glucoseoxydaseaktivitet og ca. 22 x 10 5 internasjonale enheter av peroxydaseaktivitet pr. liter, og, efter tørking av bæreren, med en andre oppløsning med minst 6 g 3,3',5,5'-tetraalkylbenzidin pr. liter for hver 1 x 10 4internasjonale enheter av glucoseoxydaseaktivitet pr. liter i førstnevnte oppløsning. Den impregnerte bærer tørkes påny efter den annen impregnering. ;Uttrykket bærer angir matriser som er uoppløselige i - og som opprettholder sin strukturelle integritet når de utsettes for fysiologiske eller andre væsker som skai testes. Eg-nede matriser som kan anvendes, omfatter papir, cellulose, tre, syntetisk harpiksull, glassfiber, uvevet og vevet tekstil, gelatin, forskjellige organiske polymerer slik som polypropy-len, og andre organiske materialer vel kjent som f ilmda.nnere for fagmannen. Alternativt kan bæreren ta form av en presset eller støpt tablett inneholdende konvensjonelle bærermatéria-ler. Hensiktsmessig kan bæreren festes til en uoppløselig bærer eller et håndtak som kan være fremstilt av polystyren. ;Når testmaterialet skal anvendes for påvisning av glucose i blodet, dekkes fordelaktig overflaten av den impregnerte bærermatrise med et semipermeabelt transparent belegg eller film av ethylcellulose eller annet egnet materiale. Dette kan utføres ved påføring av et lag av ethylcellulose oppløst i benzen, f.eks. på den impregnerte bærermatrises overflate, hvorefter oppløsningsmidlet fjernes ved fordamp-ningstørking. Alternativt, kan ethylcellulosen være en del av den annen impregneringsoppløsning som i eksemplet. ;Glucosetestanordninger i form av behandlede bærermatri-ser lagres ofte en betydelig tid før bruk, og det er derfor ønskelig at de valgte reagenser ikke er lett auto-oxyderbare i luft. Fortrinnsvis bør testanordningene beskyttes for lys, og i noen tilfeller er det ønskelig å holde dem forseglet i en fuktighetsavstøtende pakke som bare åpnes for- å fjerne én eller flere testanordninger kort før bruk. ;Om ønsket kan bærermatrisen behandles med et bakgrunns-farvestoff av en spesiell farve,, slik som gul, slik at den dannede farve ved reaksjon med glucose blandes med bakgrunns-farven for å gi varierende farvetoner svarende til konsentrasjonen av den tilstedeværende glucose i væsken som testes. ;Det kan være spesieltønskelig å farve matrisen gul når farve-reaksjonsproduktet er blått. ;Testanordningen anvendes fordelaktig ved umiddelbar dyp-ping i en tes.tprøve, eller på annen måte ved innføring av testprøven i bærermatrisen, hvorved en påviselig farveforandring resulterer når glucose er tilstede. Bærerens volumetri-ske kapasitet tjener til å begrense prøvemengden absor-bert derved, og overfor hvilken testmidlene inkorporert der-med utsettes. Ethvert overskudd av prøve kan fjernes ved vask eller krysting av bæreren for derved å begrense prøvemengden til volumet derav som virkelig er gått inn i bærermatrisen. Testanordningen kan anvendes på samme måte når prøver av pias- . rna, serum eller andre kroppsvæsker testes. ;Reflektansavlesninger av farve dannet ved omsetning med tilstedeværende glucose i prøven kan erholdes fra kommersielt tilgjengelige spektrofotometere slik som Beckman DK-2 Spectro-photometer, Beckman Instruments, Inc., Fullerton, California eller Spectrocolorimeter SCF-1, Israel Electro-Optical Industry Ltd. ;For meget nøyaktige bestemmelser av glucosekonsentrasjon, kan fotoelektriske-, kolorimetriske- eller spektrofoto-metriske metoder anvendes for å bestemme farveindikasjon. EYETONE (^ r)reflektanskolorimeter (Ames Company, Division of. Miles Laboratories, Inc.) er et transportabelt instrument be-regnet på kvantitativ måling, av total blodglucose når det an-Cr) ;vendes i forbindelse med DEXTROSTIX w reagensremser (Ames Company, Division of Miles Laboratories, INC.). EYETONE reflektanskolorimeter måler lyset reflektert fra overflaten av den omsatte testånordningsmatrise og omdanner denne måling ved hjelp av elektroniske kretser til en avlesning på en nøy- ;aktig kalibrert måleskala på instrumentet som er istand til å indikere blodglucose innen området på 10 til 400 mg/100 ml. Jo høyere blodglucosekonsentrasjon, desto mørkere er remsen og desto mindre lys reflekteres. Omvendt, jo lavere blodglu-cosekonsentras jonen er, desto lysere vil remsen være og mer lys vil bli reflektert. De farvedannende testmidler eller anordning beskrevet her er .blitt funnet å være spesielt anvend-bar ved at den tilveiebringer en særpreget farverespons som kan bestemmes med EYETONE ® reflektanskolorimeter på en måte lik den med DEXTROSTIX v( r- )reagensremser. Alternativt kan semi-kvantitative resultater erholdes under anvendelse av glucose-indikatoren ifølge oppfinnelsen ved å sammenligne den dannede farve med et panel av standardfarver erholdt med kjente konsentrasjoner av glucose under anvendelse av samme glucoseindi-kator. ;Forholdet mellom K (absorpsjonskoeffisienten av prøven) og konsentrasjonen av den absorberende prøve (dvs. glucose) gitt ved Kubelka-Monk ligningen er beskrevet, sammen med en detaljert diskusjon av reflektansspektrofotometri i Kortumi, G. , "Reflectance Spectroscopy" , Springer-Verlag, Inc.,. New York, 1969. ;Uttrykket K/S, anvendt i eksemplet, er et forhold som;er definert ved formelen (1-R) /2R, hvori R er reflektans og S er spredningskoeffisienten for den bestemte bærer. Derfor er K/S proporsjonalt med mengden av dannet kromogen ved reak-sjonen. Avlesninger i eksemplet ble tatt ved de angitte bøl-gelengder. ;Pepperotperoxydase og glucoseoxydase anvendt i eksemplet ble erholdt fra The Research Products Division, Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Indiana.. En copolymer av methylvinylether og maleinsyreanhydrid (Gantrez AN-139) og polyvin-ylpyrrolidin (PVP) ble erholdt fra GAF Corp., Chemical Products, N.Y., N.Y.). Oppløsningsmidlet anvendt ved fremstilling av oppløsningene kan være vann, fysiologiske oppløs-ninger, organiske oppløsningsmidler slik som methanol eller blandinger derav. ;Eksempel 1;Anordninger ble fremstilt for å innarbeide materialer for kvantitativ bestemmelse av glucose. Materialene anvendt ved fremstilling av anordningene hadde hver en forskjellig konsentrasjon av indikatoren 3,3<1>,5,5'-tetramethylbenzidin (TMB). Virkningen av denne forskjell på stabiliteten over tiden for den dannede farve ble undersøkt. ;En første impregneringsoppløsning ble fremstilt til å inneholde følgende: ; En annen impregneringsoppløsning ble fremstilt for hver av TMB konsentrasjonene som skulle testes ved tilsetning av 10, 25, 50 og 75 g TMB til fire 1,0 liter oppløsninger av klo-roform inneholdende 17,5 g ethylcellulose hver. Sluttkonsen-trasjonen av TMB i disse impregneringsoppløsnin ger var 41.9, 104, 208 og 312 millimol (mM), og formuleringen for disse opp-løsninger er betegnet som I, II, III og IV. Forholdet mellom de millimolare mengder TMB i impregneringsoppløsninger I til IV og antall internasjonale enheter av glucose oxydase i den første impregneringsoppløsning er 0.52, 1.30, 2.60 og 3.90 mM pr. 1000 I.U. Tilsvarende er forholdet mellom vekten av TMB ;i impregneringsoppløsninger I til IV og antall internasjonale enheter av glucose oxydase i den første impregneringsoppløs- ;ning 0.215, 0,313, 0.625 og 0.93.8 g/1000 I.U.. Alle disse forhold er vist i tabell I for de respektive impregneringsoppløs-ninger I til IV. ;Fire ark av Eaton-^Dikeman 204 (E & D) filterpapir ble impregnert til metning med den første impregneringsoppløsning og tørket ved 80°C. Hvert av de således impregnerte ark ble derefter impregnert til metning i en separat av den annen im-pregneringsoppløsning og tørket ved 60°C. ;Det således fremstilte papir ble kuttet til 0,5 cm x;1,0 cm under dannelse av testanordninger. Testanordningene ble derefter forsynt med dobbeltklebende tape og festet til organoplastbærerstykker. Hver fremstilt anordning inneholdt ca. 1,7 I.E. glucoseoxydase, og 5,4 I.E. peroxydase. Slutt-mengdene av TMB i anordningene inneholdende formuleringer I - IV var ca. o.22, 0.55, 1.10 og 1.6 mg henholdsvis. ;Anordninger av hver formulering ble testet ved at disse ble bragt i kontakt med henholdsvis en enkelt av hver av fire vandige glucoseoppløsninger. Glucosekonsentrasjonene i disse oppløsninger var 93, 201.9, 302.4 og 372.2 mg/dl henholdsvis. Efter metning av bæreren i hver anordning med prøve fikk reak-sjonen forløpe 60 sekunder. Ethvert overskudd av prøve på anordningen ble derefter vasket av ved. umiddelbart å plasere anordningen i en strøm av rennende vann og bortsugning av overskudd væske ved anvendelse av vanlig ansiktsduk. Anordningen ble derefter plasert i et avlesende reflektansspektro.fotometer og farveforandringen ble avlest ved 550 nm 20 sekunder og igjen 60 sekunder efter vasking. De observerte reflektans-verdier ble omdannet til K/S verdier som tidligere beskrevet, og resultatene er vist i tabell I.. ; Fig. 1-4 representerer grafisk dataene angitt i tabell I for anordninger inneholdende formuleringene I - IV henholdsvis. De heltrukne linjer representerer K/S avlesningene tatt 20 sekunder efter vasking av anordningen, og de stiplede linjer representerer K/S avlesningene ved 60 sekunder. Fig. 5 ;representerer grafisk prosent observert farveforandring, definert som { A K/S)/K/S x 100) for anordninger inneholdende hver av formuleringene I *- IV.

En stabil farve (blå) ble observert visuelt hovedsakelig umiddelbart efter fjerning av prøveoverskudd fra anordningene med formuleringer II og IV, mens nedbrytning av farve,

med resulterende feil i påvist glucosekonsentrasjon oppstod med anordningene med formuleringer I og II.Anordningene méd formuleringer III og IV med høyere TMB konsentrasjoner gir et hovedsakelig umiddelbart farveendepunkt som er stabilt derefter.

Fig. 1 og 2 viser at der er en betydelig forandring mellom avlesningene tatt ved 20 sekunder og ved 60 sekunder. Disse avlesninger er proporsjonale med mengden av dannet kromogen. Glucosemengden avlest med slike anordninger er derfor totalt upålitelige. I motsetning hertil viser de identiske avlesninger i fig. 3 og 4 den dannede farves stabilitet i henhold til oppfinnelsen. Fig. 5 viser prosent farveforandring fra 20 sekunders avlesning til 60 sekunders avlesning på over 30 % under anvendelse av formulering I, og mindre enn 3 % under anvendelse av formulering III. Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer derfor en mer enn tidobbel forbedring av den kjente teknikk.

Claims (10)

1. Testmidler for bestemmelse av glucose i en kroppsvæske, karakterisert ved at den omfatter glucoseoxydase, en peroxydativt aktiv substans og en 3,3',5,5 <1-> tetraalkylbenzidin-indikator i en mengde tilstrekkelig til hurtig å fremkalle, efter kontakt med testmidlene med en på forhånd bestemt mengde av en glucose-holdig prøve, et stabilt farvet reaksjonsprodukt.

2. Testmidler ifølge krav 1, karakterisert ved at reaksjonsproduktet omfatter reduserte og oxyderte former av nevnte indikator i stabil likevekt.

3. Testmidler ifølge krav 1, karakterisert ved at 3,3',5,5 <1-> tetraalk <y> lbenzidinet er tilstede i en konsentrasjon på minst 2,5 millimol pr. tusen internasjonale enheter av glucoseoxydaseaktivitet.

4. Testmidler ifølge hvilket som helst av kravene 1.-3, karakterisert ved at 3,3',5,5 <1-> tetraalkylbenz-idinet er 3,3',5,5'-tetramethylbenzidin.

5. Testmidler ifølge h/ ilket som helst av kravene 1-3, karakterisert ved at 3,3',5,5'-tetraalkylbenz-idinet er 3-methyl, 3'-methyl, 5-ethyl, 5 <1-> ethylbenzidin.

6. Testanordning for bestemmelse av glucose i en kroppsvæske, karakterisert ved at denne omfatter en bærer inkorporert med testmidlene ifølge hvilket som helst av kravene 1 - 3.

7. Testanordning for bestemmelse av glucose i en kroppsvæske, karakterisert ved at den omfatter en bærer^-matrise hvori hver 0,5 x 1,0 cm av bærermatrisen har inkorporert derved ca. 1,7 internasjonale enheter av glucoseoxydase, ca. 5,4 internasjonale enheter peroxydase og minst ca. 1,1 mg tetramethylbenzidin.

8. Fremgangsmåte for fremstilling av en anordning for bestemmelse av glucose i en kroppsvæske, karakterisert ved at en bærer inkorporeres med testmidlene ifølge hvilket som helst av kravene 1-3.

9, Fremgangsmåte for bestemmelse av glucose i en kroppsvæske, karakterisert ved at en på forhånd bestemt mengde av prøven bringes i kontakt med testmidlene ifølge hvilket som helst av kravene 1 - 3, og at enhver resulterende farveforandring observeres.

10. Fremgangsmåte for bestemmelse av glucose i en kroppsvæske, karakterisert ved at prøven bringes i kontakt med testanordningen ifølge krav 6, og at enhver resulterende farveforandring observeres.