NO781296L - Reagens for bestemmelse av glukosekonsentrasjoner med glukosedehydrogenase - Google Patents
Reagens for bestemmelse av glukosekonsentrasjoner med glukosedehydrogenaseInfo
- Publication number
- NO781296L NO781296L NO781296A NO781296A NO781296L NO 781296 L NO781296 L NO 781296L NO 781296 A NO781296 A NO 781296A NO 781296 A NO781296 A NO 781296A NO 781296 L NO781296 L NO 781296L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- approx
- glucose
- kinetic
- buffer
- reagent
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 52
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 title claims description 50
- 239000008103 glucose Substances 0.000 title claims description 50
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 108010050375 Glucose 1-Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 19
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 claims description 15
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 claims description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 3
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 3
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- CXONXVMMINSQBV-NNYOXOHSSA-N (2r,3r,4s,5r)-5-[[[[(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-2-(3-carbamothioylpyridin-1-ium-1-yl)-4-hydroxyoxolan-3-olate Chemical compound NC(=S)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)[O-])=C1 CXONXVMMINSQBV-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- BDDLHHRCDSJVKV-UHFFFAOYSA-N 7028-40-2 Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O BDDLHHRCDSJVKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CNPRPOBKEGWPEX-UHFFFAOYSA-N 7h-purine;pyridine-3-carboxamide Chemical compound C1=NC=C2NC=NC2=N1.NC(=O)C1=CC=CN=C1 CNPRPOBKEGWPEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PHOQVHQSTUBQQK-SQOUGZDYSA-N D-glucono-1,5-lactone Chemical compound OC[C@H]1OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O PHOQVHQSTUBQQK-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O NADP(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007357 dehydrogenase reaction Methods 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000012209 glucono delta-lactone Nutrition 0.000 description 1
- 229960003681 gluconolactone Drugs 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229940101270 nicotinamide adenine dinucleotide (nad) Drugs 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- -1 thio-NADP Chemical compound 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Description
Reagens for bestemmelse av glukosekonsentrasjoner med glukose-dehydrogenas e.
Foreliggende oppfinnelse vedrfdrer reagenser for anvendelse i den kinetiske fremgangsmåte for "bestemmelse av glukose med glukosedehydrogenase.
Kinetiske fremgangsmåter for bestemmelse av glukosekonsentrasjoner i prover, f.eks. kroppsvæske med glukosedehydrogenase er kjent. D. Banauch, ¥. Brummer, ¥. Ebeling,
H. Metz, H. Rindfrey, H. Lang, K. Leybold og ¥. Rick, Z. Klin. Chem. Klin. Biochem., 13, 101 (1975) gjenga en kinetisk fremgangsmåte for å bestemme glukose under anvendelse av glukosedehydrogenase. Reagensen disse forfattere anvendte omfattet 160 mmol/1 tris-buffer, pH 7,8, 0,6 U/ml glukosedehydrogenase og 2,1 mmol/1 NAD. Denne reagensen anga man ga en kalibreringskurve som var lineær opp til 1000 mg/dl når den ble anvendt i'den kinetiske metode (forholdet mellom prove og reagens var ikke angitt).
Lutz et al., Clinical Chemistry, 21 (10): 1372 (1975)'' " beskrev også en kinetisk fremgangsmåte for bestemmelse av glukose under anvendelse av glukosedehydrogenasereaksjonen. Den glukosedehydrogenasereagens som ble anvendt av Lutz et al omfattet 86,5 mg NAD og 6 mg glukosedehydrogenase i 50 ml tris-buffer (pH 7,8). Lutz et al rapporterte et avvik fra lineariteten i deres ukorrigerte glukosedehydrogenasemetode på 4% ved 300 mg%, 8% ved 500 mg% og 19% ved 1000 mg% under anvendelse av et forhold mellom prove og reagens på 1:41. Basert på deres arbeide, konkluderte Lutz et al med at "det sunes derfor umulig å nå den linearitet som andre (Banauch et al. se ovenfor) har angitt."
Lutz, Clinical Chemistry, 22 (6):929 (1976) beskrev et forsok på å forbedre lineariteten i den kinetiske metode for "bestemmelse av glukose ved å tilsette konkurrerende in-hibitorer for GHD til den enzymatiske reagens for å oke lineariteten i reaksjonen. Ved å bruke en ligning for å korrigere for ikke-linearitet, var Lutz istand til å forbedre området med linearitet til ca. 500 mg/dl under anvendelse av et forhold mellom prove og reagens på 1:41.
H. Rindfrey, R. Helger og H. Lang, Kinetic Glucose Determination with Glucose Dehydrogenase, Z. Anal. Chem., 279:196 (1976) bekreftet deretter Lutz et al's påstand om at påstanden i Banauch et al's artikkel med hensyn til området for linearitet var feil. Rindfrey et al påviste at kinetisk glukosebestemmelse med glukosedehydrogenase var lineær opp til 300 mg/dl og at ved 500 mg/dl var feilen -10%. (Forholdet mellom prove og reagens som ble anvendt var 1:50).
Foreliggende oppfinnelse omfatter en kinetisk glukosereagens av den typen som omfatter en buffer, et pyridinkoenzym og glukosedehydrogenasekarakterisert vedat den nevnte buffer har en pH på fra ca. 7,9 til ca. 9,0. Ved å anvende denne forbedrede kinetiske glukosereagens i en kinetisk glukosebestemmelse, utvides området for linearitet fra den tidligere grense på fra 300 - 500 mg/dl til ca. 1200 mg/dl , (ved et forhold mellom prove og reagens på 1:41).
Fig. 1 er en kurve som gjengir A A/min. glukosesub-stratkonsentrasjon man får ved å benytte den forbedrede reagens ifolge oppfinnelsen.
Den forbedrede kinetiske glukosereagens ifolge oppfinnelsen anvendes i en kinetisk prove for å måle glukose-innholdet i f.eks. en biologisk væske, såsom blodserum og urin. Den kinetiske prove er basert på fblgende reaksjon! I:
Glukose-
glukose + pyridinkoenzym<dehydrogenase>y
glukonolakton + redusert pyridinkoenzym Konsentrasjonen av glukose i proven bestemmes ved å måle hastigheten for okningen av absorbering som er knyttet til produksjonen av redusert pyridinkoenzym som er et mål på konsentrasjonen av glukose.
Ifolge den foreliggende oppfinnelse er det vesentlig at mengden glukose som skal proves er hastighetsbegrensende. Således må mengden av de forskjellige bestanddeler i den kinetiske glukosereagens ifolge oppfinnelsen være tilstede i passende mengder for å sikre at den observerte reaksjonshastig-het for reaksjon I som står ovenfor, erkarakterisertmed og bestemt av konsentrasjonen av glukose i proven.
Reagensen ifolge den foreliggende oppfinnelse omfatter en buffer med en pH på ca. 7,9 - 9,0, et pyridinkoenzym og glukosedehydrogenase. Bufferen har fortrinnsvis en pH fra ca. 8,0 til ca. 8,5 og mer foretrukket er en pH på
ca. 8,2. En hvilken som helst buffer som er forenlig med de andre bestanddeler i reagensen og som har en pH innenfor det onskede område kan anvendes. Eksempler på buffere omfatter trietanolamin, natrium 5:5-dietylbarbiturat, tri-(hydrok-■ symetyi^aMnolnetan, dietanolamin og fosfatbuffere. Fosfatbuffere er de foretrukne buffere ifolge oppfinnelsen. Eksempler på fosfatbuffere omfatter kaliumfosfat og natriumfosfat-buff ere. Selv om den nbyaktige mengde buffer som anvendes ikke er kritisk, er det foretrukket at den nevnte buffer er tilstede i en mengde på 0,1 - 1 mol, og fortrinnsvis fra 0,5 mol pr. liter reagens.
Pyridinkoenzymet eller koenzymene som inneholdes i den kinetiske reagens ifolge oppfinnelsen er fortrinnsvis nikotinamid adenindinukleotid (NAD) eller nikotinamidadenin-dinukleotidfosfat (NADP), og spesielt NAD. Andre passende pyridinkoenzymer er f.eks. tio-NAD, tio-NADP, nikotinamid-purindinukleotid, nikotinamid-(6-metyl-purin)-dinukleotid eller nikotinamid-(2-klor-6-metyl-purin)-dinukleotid.. Den nbyaktige konsentrasjon av pyridinkoenzymet er ikke kritisk, så lenge glukosen i proven som skal måles er hastighetsbegrensende. Det er imidlertid foretrukket at det nevnte koen-zym er tilstede i mengder på fra 0,001 til ca. 0,025 mol og, mer foretrukket, ca. 0,0027 mol pr. liter reagens.
Den glukosedehydrogenase som anvendes i oppfinnelsen kan fremstilles fra mikroorganismer. Fortrinnsvis fremstilles glukosedehydrogenasen fra en Bacillus Megaterium eller en Bacillus Cereus mikrobiologisk kilde. Den nbyaktige mengde glukosedehydrogenase man anvender i den kinetiske glukosereagens ifolge oppfinnelsen er ikke kritisk så lenge det er glukosen i proven som skal måles er hastighetsbegrensende. Det er imidlertid foretrukket at glukosedehydrogenase er tilstede i en mengde på fra 100 til ca. 3000 internasjonale enheter (IU) pr. liter (1) reagens. Den mer foretrukne mengde glukosedehydrogenase vil variere avhengig av forholdet mellom<A>prove og reagens, men vanligvis falle i området på fra ca. 300 til ca. 2000 IU/1. Ca. 1600 IU/l glukosedehydrogenase er optimalt.
Selv om ionestyrken i reagensen ikke er kritisk, er det foretrukket at reagensen ifolge oppfinnelsen, for å oke den termiske stabilitet av glukosedehydrogenase, har en ione-styrke på fra ca. 0,5 til ca. 7 M og helst fra ca. 2 til ca. 4 M. Et hvilket som helst salt som er forenlig med de andre bestanddeler i reagensen kan anvendes for å justere ione
styrken i reagensen. Eksempler på salter omfatter alkaliklorid-salter som f. eks. li tium^'» natrium- og kalkliumklorid; kaliumfosfat; natriumfosfat; ammoniumfosfat og blandinger av disse. Kaliumklorid er et foretrukket salt.
Det er også foretrukket at den kinetiske glukosereagens ifolge oppfinnelsen inneholder (etylendinitril)tetra-eddiksyre (EDTA). Den noyaktige mengde EDTA som tilstede er ikke kritisk, men den ligger fortrinnsvis på fra 0 til ca. 0,02 mol, og fortrinnsvis på ca. 0,005 mol pr. li/trer reagens.
Reagenssystemet ifolge oppfinnelsen kan lagres i form av en vandig opplosning eller opplosningen kan fryse-torres ved kjente fremgangsmåter og rekonstitueres med vann når den skal anvendes. Reagenssystemet kan altså fremstilles under anvendelse av bestanddelene i pulverisert form som opp-lbses i vann når de skal brukes.
Målingen av hastigheten av den reduserte pyridin-enzymproduksjon og omdanningen av en slik hastighet til konsentrasjon av glukose kan finne sted ved hjelp av kjente fremgangsmåter. En slik fremgangsmåte anvender spektrofotometriske innretninger for å måle forandringen i absorbsjon av lys pga. produksjonen av redusert pyridinkoenzym ved bølgelengder på fra ca. 300 til ca. 370 nm ved en temperatur på .15 - ca. 50°C. En bblgelengde på ca. 340 nm ved en temperatur på 25°C til ca. 37°C er foretrukket.
En hensiktsmessig fremgangsmåte for måling av glu-koseinnholdet i en prove med enzymreagens ifolge oppfinnelsen er fblgende:
SYSTEM MED PARAMETERE
FREMGANGSMÅTE
1. Man anvender glukose standardopplbsning på
50 mg/dl, 150 mg/dl, 300 mg/dl og 600 mg/dl for å fremstille en standardkurve på fblgende måte:
a. I hver merket kuvette pipetteres 1,0.ml
reagens ifolge oppfinnelsen og man når likevekt ved 30 - 37°C.
b. På et nbyaktig tidspunkt tilsettes 25/ul av
den fbrste standard til den tilhbrende kuvette, det hele dekkes med en parafilm og blandes ved omsnuing. |Nbyaktig 30 sekunder etter tilsatsen av standard, avleses og registreres absorberingen ved 340 nm i et nullstilt spektrofotometer.
Dette er A^q. Reaksjonen får gå ved den valgte temperatur i ytterligere 60 sekunder. Absorbsjonen ved 340 nm nbyaktig 90 sekunder etter tilsatsen av standarden avleses og registreres. Dette er A^q. Forandringen i absorbsjon bestemmes for reaksjoneperioden på 60 sekunder:
ÅA/ 60 sekunder = AgQ- A^Q
c. På samme måte proves alle standardopplbsningene og man bestemmer Ak/ 60 sekunder for hver standard.
d. Man fremstiller en standardkurve ved å tegne
opp verdiene for -4A/60 sekunder mot de kjente glukosekonsentrasjoner av de standardopplbsningene som ble anvendt. 2. Alle prover som skal testes undersbkes på samme måte som med standardopplbsningene og man bestemmer. Z^A/60 sekunder for hver prove.
BEREGNING
Glukosenivåene beregnes på fblgende måte:
ÅA/ 60 fra trinn 2 anvendes for å avlese glukose-konsentrasjonen i mg/dl direkte fra standardkurven.
Folgende eksempler tilveiebringes for ytterligere illustrasjon av oppfinnelsen og er ingen begrensninger av denne.
Eksempel 1
I det etterfølgende er sammensetningen i foretrukket reagens ifolge: oppfinnelsen angitt:
pH justeres fortrinnsvis til ca. 8,0 til 8,5 og mist foretrukket er 8,2.
Eksempel 2
.Én 5000 mg% glukosestandard ble fremstilt og fikk stå over natten ved værelsetemperatur. Ved å fortynne denne standarden fikk man en serie prover som har kjente konsentra-sjoner.
I en kuvette pipettertes 1,0 ml av den .optimale reagens i eksempel 1. Kuvetten ble deretter plasert i vann-bad og fikk nå.likevekt ved 37°C. I kuvetten innfortes deretter 25^ul av en prove som ikkeholdt en kjent mengde glukose. Reaksjonen ble kjort på en "Beckman Model 25" spektrofotometer. Hellingsvinkelen ble kontinuerlig tatt mellom 30 og
90 sekunder med en registreringsinnretning og avlesningen av hellingsvinkelen ga AA/min. Denne fremgangsmåten ble anvendt for å undersbke hver av provene som inneholdt kjent konsentrasjon av glukose og data for denne undersbkelsen er gjengitt i tabell I og tegnet inn på fig. I. En undersøkelse av fig. I viser at ved å kjbre en glukoseundersbkelse under anvendelse av en reagens som inneholder glukosedehydrogenase er man istand til å få linearitet opptil ca. 1200 mg% ved en for-tynnelse (forhold mellom prove og reagens) på 1:41.
Tabell III sammenligner lineariteten ved den forbedrede fremgangsmåte ifolge oppfinnelsen med lineariteten i tidligere kjente fremgangsmåter.
Det fremgår fra tebell II, at den foreliggende oppfinnelse vesentlig oker området for linearitet ved glukose-påvisning under anvendelse av en reagens som inneholder glukosehydrogenase. Kolonnen i tabell II som har fått beteg-nelsen "Endelig konsentrasjon" viser klart at man ved å anvende fremgangsmåten og reagensen ifolge oppfinnelsen.er istand til noyaktig å måle mengden glukose som er tilstede i en prove som har en glukosekonsentrasjon som er over dobbelt så stor enn prover som man kunne foreta noyaktig undersøkelser på med tidligere kjente fremgangsmåter og reagenser.
Basert på denne oppdagelsen vil mange andre modi-fikasjoner og utvidelser naturlig fremgå for de som kjenner de foreliggende teknikker. Disse forutsettes å ligge innenfor rammen av den foreliggende oppfinnelse.
Claims (11)
1. En kinetisk glukosereagens av den type som omfatter en buffer, et pyridinkoenzym og glukosehydrogenase, karakterisert ved at den nevnte buffer har en pH på fra ca. 7,9 til ca. 9,0.
2. Kinetisk glukosereagens ifolge krav 1, karakterisert ved at den nevnte buffer har en pH på fra ca. 8,0 til ca. 8,5.
3. Kinetisk glukosereagens ifolge krav 2, karakterisert ved at den nevnte buffer har.en pH på ca. 8,2.
4. Kinetisk glukosereagens ifolge kravene 1-3, karakterisert ved at den nevnte buffer er valgt fra gruppen som består av trietanolamin-natrium-5:5-dietylbarbiturat-HCl, tris(hydroksymetyl)aminometan, dietanolamin og fosfatbuffere.
5. Kinetisk glukosereagens ifolge krav 1-4, karakterisert ved at den nevnte buffer er en fos-fatbuffer valgt fra gruppen som består av kaliumfosfat og natriumfosfat.
6. Kinetisk glukosereagens ifolge kravene 1 - 5, karakterisert ved at den nevnte buffer er valgt fra gruppen som består av trietanolamin-natrium-5:5-dietylbarbi turat-HCl, tris(hydroksymetyl-aminometan, dietanolamin, og fosfatbuffere.
7. Kinetisk glukosereagens ifolge kravene 1-6, karakterisert ved at den pr. liter reagens omfatter:
(a) fra 0,1 til ca. 1 mol av nevnte buffer;
(b) fra ca. 0,1 til ca. 1 mol av et alkaliklorid;
(c) fra ca. 0 til ca. 0,02 mol EDTA;
(d) fra ca. 0,001 til ca. 0,0'25 mol av det nevnte pyridinkoenzym og
(e) fra ca. 100 til ca. 3000 internasjonale enheter glukosedehydrogenase.
8. Kinetisk glukosereagens fiolge kravene 1-7, karakterisert ved at den pr. liter reagens omfatter:
(a) ca. 0,5 mol av den nevnte buffer;
(b) ca. 0,5 mol av det nevnte alkaliklorid;
(c) ca. 0,005 mol EDTA;
(d) ca. 0,0027 mol av det nevnte pyridinkoenzym og
(e) ca. 1600 internasjonale enheter glukosedehydrogenase.
9. Fremgangsmåte for kinetisk bestemmelse av glukose av den type som omfatter at man anvender en kinetisk glukosereagens som omfatter en buffer, et pyridinkoenzym og glukosehydrogenase, karakterisert ved at påvisningen finner sted ved en pH fra ca. 7,9 til ca. 9,0.
10. Fremgangsmåte ifolge krav 9, karakterisert ved at pH er fra 8,0 til ca. 8,5.
11. Fremgangsmåte ifolge krav 10, karakterisert ved at pH er på ca. 8,2.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/791,825 US4120755A (en) | 1977-04-28 | 1977-04-28 | Kinetic method for determination of glucose concentrations with glucose dehydrogenase |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO781296L true NO781296L (no) | 1978-10-31 |
Family
ID=25154903
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO781296A NO781296L (no) | 1977-04-28 | 1978-04-13 | Reagens for bestemmelse av glukosekonsentrasjoner med glukosedehydrogenase |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4120755A (no) |
| JP (1) | JPS5814200B2 (no) |
| DE (1) | DE2818603A1 (no) |
| DK (1) | DK186978A (no) |
| FR (1) | FR2389133A1 (no) |
| GB (1) | GB1601771A (no) |
| IT (1) | IT1094968B (no) |
| NL (1) | NL7803613A (no) |
| NO (1) | NO781296L (no) |
| SE (1) | SE7804882L (no) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1187388A (en) * | 1978-09-20 | 1985-05-21 | American Monitor Corporation | Stabilization of working reagent solutions containing nadh, nadph, and/or enzymes, and the use of such stabilized reagents in enzymes or substrate assays |
| DE3019450A1 (de) * | 1980-05-21 | 1981-11-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur gewinnung von glucosedehydrogenase und hierfuer geeigneter mikroorganismus |
| DE3211167A1 (de) * | 1982-03-26 | 1983-09-29 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Testsystem und verfahren zur bestimmung von substanzen in fluessigkeiten |
| EP0094161A1 (en) * | 1982-05-07 | 1983-11-16 | Imperial Chemical Industries Plc | Method for determining glucose content of fluid |
| US4394444A (en) * | 1982-06-21 | 1983-07-19 | Miles Laboratories, Inc. | Cofactor indicator compositions |
| US4728608A (en) * | 1985-04-08 | 1988-03-01 | Cambridge Bioscience Corporation | Bacterial screening system with enhanced shelf life |
| GB8600679D0 (en) * | 1986-01-13 | 1986-02-19 | Imp Group Plc | Chemical analysis of tobacco/smoking-related products |
| US5250415A (en) * | 1987-04-08 | 1993-10-05 | Merck Patent Gesellschaft Mit Beschrankter Haftung | Process for the preparation of glucose dehydrogenase from Bacillus megaterium |
| DE3711881A1 (de) * | 1987-04-08 | 1988-10-27 | Merck Patent Gmbh | Verfahren zur herstellung von glucosedehydrogenase aus bacillus megaterium |
| US5037738A (en) * | 1987-06-03 | 1991-08-06 | Abbott Laboratories | Simultaneous assay for glucose and urea |
| JPH0286779A (ja) * | 1988-09-22 | 1990-03-27 | Amano Pharmaceut Co Ltd | 改良型組換えｄｎａ、それを含む形質転換体及びそれを用いた耐熱性グルコースデヒドロゲナーゼの製造法 |
| SE466158B (sv) * | 1989-04-25 | 1992-01-07 | Migrata Uk Ltd | Analysmetod foer glukosbestaemning i helblod |
| SE466157B (sv) | 1989-04-25 | 1992-01-07 | Migrata Uk Ltd | Saett att bestaemma glukoshalten hos helblod samt engaangskuvett foer detta |
| ATE177153T1 (de) * | 1990-09-18 | 1999-03-15 | Asahi Chemical Ind | Myo-inositoldehydrogenase |
| US5633143A (en) * | 1991-12-12 | 1997-05-27 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Method for the quantitative determination of D-3-hydroxybutyric acid and acetoacetic acid, and analytical reagent therefor |
| US5487384A (en) * | 1993-02-25 | 1996-01-30 | Blue Marble Research, Inc. | Kinematic assay of plasma glucose concentration without blood sampling |
| US5567581A (en) * | 1995-03-06 | 1996-10-22 | Diagnostic Reagents, Inc. | Method and kit for enzymatically determining the pH of a specimen |
| TW200718785A (en) * | 2005-11-10 | 2007-05-16 | Toyo Boseki | A process for improving the thermal stability of a composition containing a soluble coenzyme conjugated glucose dehydrogenase (GDH) |
| US9347958B2 (en) | 2014-06-27 | 2016-05-24 | Hemocue Ab | Device and method for determination of an analyte in blood |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CS164231B2 (no) * | 1972-09-28 | 1975-11-07 | ||
| DE2349819A1 (de) * | 1973-10-04 | 1975-04-17 | Eppendorf Geraetebau Netheler | Verfahren zur enzymkinetischen konzentrationsbestimmung eines substrats |
-
1977
- 1977-04-28 US US05/791,825 patent/US4120755A/en not_active Expired - Lifetime
-
1978
- 1978-03-22 GB GB11318/78A patent/GB1601771A/en not_active Expired
- 1978-04-05 NL NL7803613A patent/NL7803613A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-04-13 NO NO781296A patent/NO781296L/no unknown
- 1978-04-27 SE SE7804882A patent/SE7804882L/xx unknown
- 1978-04-27 FR FR7812550A patent/FR2389133A1/fr active Granted
- 1978-04-27 DE DE19782818603 patent/DE2818603A1/de not_active Withdrawn
- 1978-04-28 IT IT22831/78A patent/IT1094968B/it active
- 1978-04-28 DK DK186978A patent/DK186978A/da not_active Application Discontinuation
- 1978-04-28 JP JP53050206A patent/JPS5814200B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4120755A (en) | 1978-10-17 |
| DK186978A (da) | 1978-10-29 |
| FR2389133A1 (fr) | 1978-11-24 |
| IT7822831A0 (it) | 1978-04-28 |
| FR2389133B1 (no) | 1982-09-10 |
| IT1094968B (it) | 1985-08-10 |
| GB1601771A (en) | 1981-11-04 |
| DE2818603A1 (de) | 1978-11-09 |
| JPS5814200B2 (ja) | 1983-03-17 |
| JPS53137199A (en) | 1978-11-30 |
| SE7804882L (sv) | 1978-10-29 |
| NL7803613A (nl) | 1978-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO781296L (no) | Reagens for bestemmelse av glukosekonsentrasjoner med glukosedehydrogenase | |
| Werner et al. | Ultramicro determination of serum triglycerides by bioluminescent assay. | |
| NO169847B (no) | Herdbart belegningsmiddel og anvendelse derav ved belegning av et metallsubstrat | |
| US7368231B2 (en) | Detection assay for potassium ions using a potassium-dependent urea amidolyase enzyme | |
| CN107641642B (zh) | 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法 | |
| NO791493L (no) | Kinetisk maaling av glucosekonsentrasjon i kroppsvaesker og formuleringer for anvendelse ved denne | |
| Nazar et al. | An improved microfluorometric enzymatic assay for the determination of ammonia | |
| US4012286A (en) | Determination of creatine phosphokinase in body fluids | |
| CA2045704A1 (en) | Stable aqueous nadh reagent and kit | |
| JPH02104298A (ja) | １，５−アンヒドログルシトールの定量法 | |
| JPH0391494A (ja) | 分析対象濃度の酵素的測定方法 | |
| EP2460888A1 (en) | Method and kit for measurement of dehydrogenase or substrate for the dehydrogenase | |
| Dohnal et al. | Comparison of three methods for determination of glucose | |
| US5429930A (en) | Kinetic enzyme assay for determining the CO2 content of body fluids using PEP carboxylase with inhibitor | |
| AU630486B2 (en) | Kinetic enzyme assay for determining the co2 content of body fluids using pep carboxylase with inhibitor | |
| WO2009135035A1 (en) | Enzymatic determination of potassium ions using stable nad(p)h analogs. | |
| US4311791A (en) | Automated kinetic determination of lactate dehydrogenase isoenzymes in serum | |
| JP2994831B2 (ja) | コレステロールの定量法および定量用試薬 | |
| King | Colorimetric Assay | |
| IE47123B1 (en) | Analytical device | |
| US3838010A (en) | Photometric method for determining lactic acid dehydrogenase or glucose-6-phosphate dehydrogenase | |
| JP4182859B2 (ja) | クレアチンキナーゼ測定用液状試薬キットおよびその安定化方法 | |
| JPS63146800A (ja) | 無機リンの測定法 | |
| SU1449588A1 (ru) | Способ определени активности щелочной фосфатазы | |
| CN118006725A (zh) | 一种肌酐检测试剂盒及方法 |