NO773071L - Fremgangsmaate for identifisering av mikroorganismer, samt hjelpemiddel for fremgangsmaatens utfoerelse - Google Patents

Abstract

"Fremgangsmåte for identifisering av mikroorganismer samt hjelpemiddel for fremgangsmåtens utførelse".

Description

Foreliggende oppfinnelse gjelder oppsamling og identifisering, av mikroorganismer og, samtidig som oppfinnelsen mest hensiktsmessig beskrives i slik sammenheng, skal det være klart at dens apparatur kan anvendes for andre formål uten å fravike fra oppfinnelsens idé.

Bakteriesykdommer diagnostiseres og behandles ved hjelp av isolasjon og identifisering av de mikroorganismer som forår-saker sykdommen. Vanligvis skal medisinsk terapi startes først etter den etio.logisk virkende kraft er bestemt. • Denne bestemmelse baseres primært på.klinisk informasjon, men bekreftende labora-toriedata skal alltid tilveiebringes som hjelp til å oppnå riktig

behandling av infeksjonssykdommen. Kliniske tester for bakteriell identifisering avhenger av sammenligning av en rekke fysiologiske, morfologiske pg positive og/eller negative biokjemiske reaksjoner for den etiologiske årsak og sammenligning av disse med reaksjoner hos kjente arter. For å gjennomføre dette er det nødvendig å få tatt prøvekulturer av organismen fra slike kilder som spytt, blod, urin osv., og behandle disse prøver med identifiseringsfrem-gangsmåter.

Denne identifiseringsmetode er omfattende og tidkrevende og samtidig årsak til mulige feil og mis-tolkninger. Enn videre øker den tidkrevende natur av de mange tester som må foretas kostnadene ved laboratoriedriften og krever for mye arbeid av trenet personale i for lang tid.

Forskjellige metoder og apparater er anvendt i forsøk

på å forenkle identifiseringen av mikroorganismene. Disse rettes primært på å gjøre de omstendelige fremgangsmåtene•raskere.og gjøre identifiseringen mere positiv. En. slik innretning er be-skrevet i US-patent 3 784 448, som beskriver et rør som er opp-delt i kammere inneholdende forhånds-préparerte kultur-media for

differensiell identifisering av mikroorganismer, spesielt av familien Enterobacteriaceae. Ved bruk av denne innretning trek-kes en fast, stavlignende gjenstand inneholdende en kultur av organismen gjennom røret hvorved hvert av kamrene inokuleres.

Denne kjente innretning er begrenset av det antall tester som er tilgjengelige for bruk i enheten og av dens pris- såvel som lagrings- og stabilitets-problemer.

Til dato•omfatter det mest vellykkede fremskritt på dette område av klinisk laboratorietesting bruken av porøst papir eller annet absorberende substrat impregnert med reagenser som registrerer nærvær av spesifikke enzymer eller.metaboliske sluttprodukter som er karakteristisk for visse mikroorganismer. Disse reagenser omfatter et substrat som kan påvirkes av et

spesielt bakterielt enzym og et registrerings-system som reagerer med det metaboliske sluttproduktet slik at det oppnås en

lett identifiserbar fargeforandring. US-patenter 3 122 480,

3 341 427, 3 359 180, 3 378 346, 3 597 321, 3 616 258, 3 645 853 og 3 649 461 som det her refereres til, og modifikasjoner derav beskriver fremstilling og sammensetning av de forskjellige substrat- og identifiseringsreagensene såvel som.deres anvendelse ved identifisering av visse organismer.

En typisk anvendelse av disse teknikker omfatter føl-gende materialer og fremgangsmåtetrinn: 1. Papirstrimler inneholdende egnede substrat- og identifiseringsreagenser fremstilles for en rekke spesifikke biokjemiske tester, f.eks. Voges-Proskauer, nitrat-reduksjon, fenylalanin-deaminase, urease, indol, lysin-dekarboksylase, osv. 2. Reagensrør i tilsvarende antall og rekkefølge som

de tester som skal utføres, plasseres i et stativ.

3. Bakteriekolonier som er dyrket i eller på et egnet næringsmedium, f.eks. et agarmedium, overføres til og suspenderes i et rør inneholdende 0,3 ml saltløsning for hver test som skal utføres. Den resulterende suspensjon skal ha en turbiditet som er omtrent lik en Kirby Baver Standard. 4. Omtrent 0,3 ml av suspensjonen pipetteres over i

hvert av reagensrørene.

5. Teststrimler som tilsvarer den spesielle testen tilsettes til hvert av reagnesrørene og inkuberes der i ca. 4 timer ved temperaturer fra 35-37°C. 6. ' Den- positive eller negative indikasjonen av testen avleses så fra fargen av substratsonen der.det passer, som f.eks. I lysindekarboksylasetesten, eller røret gis en helning slik at den inkuberte suspensjon fukter identifiseringssonen- hvor igjen fargeforandringen eller fraværet derav gir en positiv eller nega-tivt indikasjon som f.eks. i Indol-testen.

Denne testfremgangsmåte har vist seg meget vellykket og gir like nøyaktige resultater som standard laboratoriefrem-gangsmåter, men på meget kortere tid. Som hjelp ved bestemmelsen av nettopp den organisme som er aktuell, basert på de sannsyn-ligheter som bestemmes ved hver av de spesielle testene, beskriver US-patent 3 957 586 en type av identifiseringssystem som gir rask og nøyaktig.bestemmelse av den forårsakende organisme. Dette system omfatter en rekke punche-kodede test-datakort som, når de plasseres for registrering, gir én indikasjon på identiteten til den involverte organisme ifølge kjente prinsipper ifølge

Bool<1>sk logikk. En annen måte å gjøre det på er å bruke en datamaskin-programordbok basert på aktuelle nummersystemer for å oppnå sannsynlighet ved identifiseringen.

Foreliggende oppfinnelse er rettet mot ytterligere å forbedre og forenkle den foran nevnte testfremgangsmåte. Selv om den raske testidentifiseringsfremgangsmåten med impregnerte strimler har forkortet tiden for og øket nøyaktigheten ved organisme-identifisering, antas det at denne test kan forbedres ytterligere ved bruk av en innretning som unødiggjør bruk av en rekke reagensrør så vel som at den gjør den tid som tilsvarer dette-og den forsiktighet som kreves ved behandling, vasking og fremstilling av dem unødvendig. Oppfinnelsen skaffer en innretning som er laget for å forenkle identifiseringen, men på samme tid gjøre den rask og nøyaktig.

Det er derfor et formål med foreliggende oppfinnelse

å tilveiebringe en forbedret diagnoseinnretning for rask og nøy-aktig identifisering av mikroorganismer. Det er et annet formål med oppfinnelsen å tilveiebringe en enhetlig, lett disponibel innretning for utførelse av en serie biokjemiske tester. Det er ytterligere et formål med foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe en innretning som muliggjør en rask og lett inokulering med et testeksemplar og en visuell bestemmelse av testresultatene. -Ennå et formål med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe en testinnretning som inneholder substrat- og/eller påvisnings-reagenser for identifisering av mikroorganismer.

For å overvinne de.problemer som er forbundet med kjente innretninger og oppnå de angitte formål anvender foreliggende oppfinnelse en diagnoseinnretning som anvender et første kammer som inneholder en testsuspensjon. Det første kammeret forbindes ved

hjelp av en første passasje med et andre kammer for å bringe test-suspens jonen- i kontakt med et egnet substratreagens under inkuberingsperioden. Den første passasjen gir selektiv væskeforbindelse mellom det første og andre kemmeret. Et tredje kammer som skal bringe den omsatte testsuspensjon i kontakt med en egnet detektor forbindes med det andre kemmeret med en andre passasje som på. lignende måte selektivt skaffer væskeforbindelse mellom dem..

Oppfinnelsen anvender seg videre av en disponibel under-støttelses-struktur hvori kammere og forbindelsespassasjer er montert eller innebygget. Denne struktur har et første kammer i form av en oppad åpen brønn i hvilken det inokuleres en test-suspens jon av en bakteriekultur. Det andre kammeret som også

er en åpen brønn, forbindes med deri første brønnen ved hjelp av. en første passasje som omfatter en kanal. På bunnen av kanalen er idet utformet en rampestruktur hvis helning er der for å hindre at væske skal føres fra den første brønnen til den andre når tést-strukturen er anbragt i et normalt plan. I den andre brønnen kan det plasseres et substratreagéns som reagerer med kulturen under et inokuleringstrinn for .å fremstille typiske metabolske sluttprodukter for den angjeldende test. Etter inkubering av kulturen i den andre brønnen føres suspensjonen gjennom en andre passasje eller kanal til et tredje kammer eller åpen brønn hvor suspensjonen gir en spesifisert fargereaksjon hos. et påvisnings-reagens. Plasseringen av den tredje brønnen i forhold til den andre velges slik at det oppnås væskeforbindelse i den andre kanalen bare når innretningen inntar en spesiell romlig orientering. Den tredje brønnen kan forbindes med et fjerde kammer som kan oppta overskudd testsuspensjon, og en ventileringsanordning er innrettet for at luft kan unnslippe når inokulum over-føres fra den første til den andre brønnen.

I en spesiell utførelsesform ligger bunnen til brønnen og forbindelseskanalene i parallelle plan og aksen for brønnene er i hovedsak ortogonal på planet for den bærende strukturen. Både brønnene og kanalene er åpne for visuell inspeksjon idet åpningene er i samme plan som topp-overflaten til bærestrukturen. En klar, visuelt gjennomsiktig deksel brukes for å lukke den første kanalen og det andre, tredje<p>g fjerde kammeret såvel som forbindelseskanalene mellom dem og hindrer tap av innholdet. Den første brønnen eller det første kammeret holdes åpent for

å tillate inokulering med testsuspensjonen. Et hengslet deksel er montert på den ene kanten av bærestrukturen og resulterer i lukking av det åpne inokuleringskammeret når det bringes i utfyllende kontakt emd toppoverflaten til bærestrukturen. Den indre overflaten av dekslet kan utstyres med ét porøst eller absorberende materiale for å indre lekkasje av testsuspensjon i lukket tilstand. Flere diagnoseinnretningér kan plasseres på en bærestruktur for

å muliggjøre utførelse av flere spesifikke biokjemiske tester.

Et annet aspekt ved foreliggende oppfinnelse er rettet mot en fremgangsmåte for å bestemme identiteten til spesifikke mikroorganismer. I denne fremgangsmåte inokuleres en testsuspensjon av én bakteriekultur oppnådd fra visse kroppsvæsker eller -deler i et første kammer. Testkammeret bringes til å innta en spesiell romlig orientering hvilket fører til at væskesuspensjonen føres gjennom en kanal eller første, passasje til et andre kammer hvor den omsettes med et utvalgt substrat som er sammensatt slik at det gir en kjent reaksjon med den organisme det gjelder. Etter at suspensjonen er inkubert med reagenset i en på forhånd bestemt tid, plasseres det andre kammeret i en annen romlig orientering slik at væsken i dette kammer forbindes med et tredje kammer som inneholder påvisningsreagehset. Påvisningsreagensets fargereaksjon angir en positiv eller negativ test og gir derved informasjon om organismens identitet.

Formålene.og trekkene ved foreliggende oppfinnelse vil fremgå av den etterfølgende detaljerte beskrivelse sett i sammenheng med tegningene. Tegningene skal vise eksempler på oppfinnelsen og det anvendes standard tegnesymboler og overensstemmende nummerering i alle tegneeksempler for å létte forståelsen.

Fig. 1 viser en del av diagnoseinnretningen ifølge oppfinnelsen i perspektiv;

. Fig. 2 viser et tverrsnitt av en del av diagnoseinnretningen fra fig. 1 etter linjen '2-2; Fig. 3 viser.et tverrsnitt av en del av diagnoseinn-rétningen ifølge fig. 1 etter linjen 3-3; Fig. 4 viser skjematisk i perspektiv en del av diagnoseinnretningen fra fig. 1 i en spesiell orientering; .og Fig. 5 viser skjematisk i perspektiv en del av diagnoseinnretningen ifølge fig. 1 i en annen romlig orientering.

I fig. 1 vises en diagnoseinnretning 10 med flere i rekke på tvers anordnede, multiple, med hverandre forbundne kammere og brønner for bruk ved identifisering av mikroorganismer. Utformet i den øvre flaten av bærestrukturen 42 i innretningen 10 er det første kammer eller den første brønn 11 i hvilken det kan. pipetteres en.testsuspensjon inneholdende en bakteriekultur.

Den første brønnen 11 er forbundet med det andre kammeret eller den andre brønnen 13 ved hjelp av den første passasjen 12. Den andre brønnen er forbundet med det tredje kammeret eller den tredje brønnen 15 ved hjelp av den andre passasjen eller kanalen 14 og den tredje brønnen er forbundet med det fjerde kammeret 17 ved hjelp av den tredje passasjen eller kanalen 16. En ventil-orienteringskanal 18 står i forbindelse med'det fjerde kammeret 17 for ventilering under bruk av innretningen.

Av figurene 2 og 3 i tillegg til fig. 1 fremgår det

at brønnen 11 er et oppad åpent kammer som er nedsenket i overflaten 42.- Brønnen 11 er i det vesentlige utformet sylindrisk av sideveggen 21 og avsluttes av bunnen 23 som er parallell med overflaten 42. Skulderen 22 er anordnet, i ringform i nærheten av bunnen 23 i brønnen 11, hvilket resulterer i en sylindrisk del med mindre diameter. Et segment av veggen 21 er åpen inn i og forbinder brønnen med kanalen 12. Segmentet utgjør en. bue på ca. 30° og veggene 25 i kanalen 12 går mykt over i veggen 21. Bunnen 26 i kanalen 12 er i hovedsak parallell med bunnen 23,men

i et annet plan, og forbinder planet for bunnen 23 med planet for bunnen 26 ved en vertikalt hellende rampe 24, hvilken rampe hindrer overgang av testsuspensjon fra brønn 11 til brønn 13.

Kanal 12 strekker seg radielt fra aksen i brønnen 11 og parallelt med siden 44. Ved sin bortre ende tverrvender den og går inn i brønnen 13, hvis akse går på tvers av og eksentrisk i forhold til brønnen 11's akse. Brønnen 13 er dannet av sylindrisk vegg 29 som står loddrett på bunnen 28 som er i hovedsak parallell med bunnen 26 og i hovedsak i samme plan som bunnen 23. Planet til bunnen 26 går over i planet eller nivået til bunnen

28 ved en skarp sylindrisk veggstruktur 27, som danner en del av

veggen 29. Aksialt gående■ribber 30 som er anordnet innenfor veggene 29 og 27 opptrer som medvirkende deler ved opptak av en substrat-skive når den plasseres der inne.

Den andre passasjen 14 avskjærer veggen 29 i brønnen 13 eksentrisk og strekker seg i hovedsak parallelt med kanal 12.

Bunnen 32 i passasjen eller kanalen 14 ligger i samme plan som bunnen 28 og avskjærer de. vertikale sideveggene 31a og 31b. Det tredje kammer eller den tredje brønn 15 dannes av den sylindriske

veggen 33 som står loddrett på bunnen 34, hvilken bunn ligger i samme plan- som bunnen 28. Radien til veggen 33 er i hovedsak lik radien til' veggen 29 og inneholder vertikalt gående ribber 35. Ribbene 35 går ikke til den fulle høyden av veggen 33, men.

slutter i skuldrene 35a på et middels nivå. Skuldrene 35a, av hvilke tre er plassert i lik avstand fra veggen 33, utgjør et sete eller en basis på hvilken påvisningsreagenset -plasseres, idet den hevede stillingen gjør fargeforandringen bedre synlig når inkuberingsperioden er avsluttet. Ribbene 33a tjener til å holde substratskiven i en ønsket stilling. Aksen til brønnen 15 ligger i et plan som inneholder aksen til brønnen 13 og er parallell med

kanten 44. Veggen 31b i kanalen 14 er en tangent til veggene 29 og 33, og veggen 31a overskjærer sylinderveggene 29 og 33 i det plan som inneholder aksene til brønnene.

Den tredje passasjen 16 har loddrett nedadgående vegger 36a og 36b som skjærer dens bunn 37. Planet som inneholder bunnen 37 ligger over bunnen 34 og er i hovedsak i samme plan som skuldrene 35a til ribbene 35. Dybden av testsuspensjonen må derfor overstige nivået for bunnen 37 og må gå over påvisnings-reagens-skiven før den tillater gjennomgang av væske gjennom kanalen 16. Veggene 36a og 36b er i hovedsak parallelle med veggene 25 i kanal 12, og veggen 36b ligger i samme plan som veggen 31a.. Veggen 36a overskjærer den sylindriske veggen 33 i en radius som strekker seg loddrett på denne og derfor er en tangent til radien til veggen 33 i dette punkt.

Kanalen 16 danner forbindelse med kammeret 17, hvilket kammer omfatter den sylindriske veggen 38' som skjærer bunnen 39 vertikalt, hvilken bunn ligger i samme plan som bunnen 34. Ventilanordningen 18 omfatter en kanal med vertikalt gående vegger 40 som treffer bunnen 41. Bunnen 41 er parallell med planet til

overflaten 4 2 og møter.veggen 38 i kammeret 17. Kanalen 18 mulig-gjør at eventuelle flyktige, stoffer som oppstår av reagensene

og eventuelt innestengt luft som oppstår ved innføringen av test-suspens jonen kan unnvike.

Alle brønner og kanaler i innretningen er åpne i overflaten 42. Kanalene 12, 14 og 16 og brønnene 13, 15 og 17. dekkes av en gjennomsiktig, klebende film 43, hvilken film er ugjennomtrengelig for luft og fuktighet, men tillater tydelig visuell inspeksjon av det indre. Den gjennomsiktige delen 43 .- dekker bare en del av ventilen 18 og flyktige stoffer kan derfor unnvike gjennom den udekkede delen derav. Kammeret 11 forblir udekket og åpen for omgivelsene for å tillate inokulering av. kammeret med testkulturen eller -suspensjonen. I. den foretrukne . utførelsesform av oppfinnelsen er det anordnet en rekke test-kammere og -kanaler parallelt slik at mange forskjellige tester kan utføres samtidig ved bruk av'en eneste diagnoseinnretning. Bærestrukturen og testkamrene kan støpes av meget slagfast poly-styren, såvel som av andre egnede plaster. En hengslet dekk-plate.19 er anbragt langs bakkanten av teststrukturen og er hengslet på aksen 20 slik at brønnene 11 lukkes når dekslet 19 svinges i stengestilling mot overflaten. 42. Innersiden av dekslet 19 kan dekkes med et porøst eller et annen absorberende materiale for å oppta overskudd testsuspensjon når dekslet er i lukkestilling. Innersiden av dekslet kan også inneholde egnet indikatormateriale for å identifisere de tester som skal utføres i hvert påfølgende kammer.

Enheten 10 er vanligvis laget med runde hjørner og

uten skarpe kanter. Dette trekk tillater lagring av innretningen i lufttett forseglede puter uten fare for punktering hvilket ville resultere i svekkelse av ytelsen på grunn av nærvær av vann og fuktighet. Innretningen kan også innpakkes sammen med tørre-midler for å unngå ødeleggelse p.g.a. fuktighet.

Idet det nå refereres til figurene 4 og 5 skal en typisk bruk av diagnoseinnretnihgen .gjennomgås. Med innretningen 10 i et. i hovedsak horisontalt plan som vist i fig. 1, kan brønnen 17 inokuleres med en testsuspensjon av den kultur som er laget av

den mistenkte prøve. Etter inokuleringen svinges innretningen 10 om en akse som er parallell med kanten 45 slik at det oppnås en i hovedsak 90°'s vertikal stilling. I denne stilling fåes- in-■■ okulanten 44 til å forsere rampen 24 'og gå gjennom kanalen 12,

til brønnen 13. En skive 46 fremstilt av porøst papir inneholdende et substratreagens befinner seg i brønnen 13 og holdes på plass av ribbene 30. Som. angitt i US-patént '3 645 853 kan eksempel-vis en impregnert, papirstrimmel fremstilles og en skive laget av

denne kan brukes til utførelse av nitratreduksjonstesten. Med skive-substratet i kontakt med væskeokulanten 4 4 inkuberes innretningen i den angitte romlige orientering i en periode på ca. 4 timer ved en temperatur av 35-37°C. I en positiv test reduserer enzymet nitratreduktase, som dannes i nesten 100% av de kulturer som tilhører familien Enterobacteriaceae og visse andre bakterier, det nitrat som finnes i substratsoneskiven. Etter inkuberingsperioden svinges innretningen 10 om en akse som er loddrett på overflaten 42's plan omtrent 90° som angitt i fig. 5. Innretningen 10 føres til denne stilling for å få testsuspensjonen i kontakt med indikatorskiven 47 Oorn befinner seg i det tredje kammer 15. Dersom nitrat er redusert til nitrit, påvises nitritet ved en reaksjon med sulfanilsyre og et alfa-naftylamin-derivat på påvisningsskiven hvorved det dannes et rødt slutt- ■ produkt og det oppnås en positiv indikasjon. Overskudd test-suspens jon kan . unnslippe til kammer 17 og flyktige stoffer kan unnvike gjennom ventileringskanalen 18.

I en foreslått anvendelse av innretning 10 utføres en rekke forskjellige tester, nemlig: Voges-Proskauer-, nitratreduktase-, fenylalanin-deaminase-, hydrogensulfid-, indol-, ornitin-dekarboksylase-, lysin-dekarboksylase-, malonat-ut-nyttelse-, urease-, esculinhydrolyse- og ONPG-testene og arabi-nose-adonitol-, inositol- og sorbitol-fermenteringene. Ved bruk av disse tester kan et betydelig antall forskjellige Enterobac-terieacea-identifikasjoner utføres med en høy grad av nøyaktig-het, f.eks. kan artsdifferensiering innenfor artene Escherichia, Shigella, Edwardsiella, Salmonella, Arizona, Citrobacter, Kleb-siella, Enterobacter, Serratia, Proteus, Providencia og Yersinia utføres.'Denne innretningen kan naturligvis brukes med andre kombinasjoner av biokjemiske tester for å identifisere de samme såvel som andre organismer.

Følgende tabeller angir identiteten til kjente kulturer og den prosentuelle nøyaktigheten ved identifiseringen av dem ved bruk av den nye innretningen ifølge oppfinnelsen:

I betraktning av det foranstående er det tydelig at det ifølge oppfinnelsen er oppnådd en diagnoseinnretning som muliggjør rask og nøyaktig identifisering av et stort antall

mikroorganismer. Innretningen er en meget effektiv, disponibel enhet som minsker tiden for testfremgangsmåten og reduserer sannsynligheten for feil. Den overvinner ulempene ved det tid-ligere kjente og forbedrer foreliggende metoder og apparater. Alt i alt har søkerne fremstilt en enhetlig, disponibel innretning hvori ét første kammer kan inokuleres med en ukjent testsuspensjon. Testsuspensjonen føres gjennom en kanal til et andre kammer som inneholder et identifiseringsreagens ved å plassere innretningen i en spesiell romlig stilling. Etter inkubering , i én forhåndsbestemt tidsperiode og temperatur føres den omsatte væske gj.ennom en annen kanal ved å orientere innretningen i en annen stilling. Virkningen av reagenset og indikatoren på testsuspensjonen muliggjør rask oppsamling av nøyaktige identifika-sjonsdata.

Den foranstående beskrivelse og tegningene er ment å illustrere oppfinnelsen, og alle modifikasjoner som er selvklare for fagmannen, anses å ligge innenfor oppfinnelsens område.

Claims (24)

1. Diagnoseinnretning, karakterisert ved at den omfatter: et første kammer for å inneholde en flytende testsuspensjon, et andre kammer for å bringe testsuspensjonen i kontakt med et substrat, . en første passasje som selektivt tilveiebringer væskeforbindelse mellom det første og det andre kammeret, et tredje kammer for å bringe den omsatte testsuspensjon i kontakt med en egnet indikator, og en andre passasje for forbindelse mellom det andre og det.tredje kammeret og for selektivt å tilveiebringe væskeforbindelse mellom kamrene.

2. Innretning ifølge krav 1, . karakterisert , ved at det første, andre og tredje kammeret utgjøres av oppad åpne brønnstrukturer slik at de er tilgjengelige og tillater .visuell inspeksjon.

3. Innretning ifølge krav 2, karakterisert ved at den omfatter en ramme med en plan overflate som er struk-turelt forbundet med det første, andre og tredje kammeret, og hvori brønnene har i det vesentlige sylindrisk form som går vertikalt fra den plane rammeoverflate.

4. Innretning ifølge krav 3, karakterisert ved at den første og andre passasjen omfatter kanaler som er åpne mot rammeoverflaten og har i det vesentlige rektangulært tverrsnitt, og hvori den første kanalen inneholder en vertikalt oppad-gående rampedel i bunnen for å hindre væskeforbindelse mellom den første og den andre brønnen og muliggjøre væskeforbindelse mellom brønnene-når rammen føres til en på forhånd bestemt romlig orientering.

5.. Innretning ifølge krav 4, karakterisert ved at rammen føres til en på forhånd bestemt, andre romlige orientering for å tillate væskeforbindelse.mellom den andre og tredje brønnen.

6. Innretning ifølge krav 5, karakterisert ved at reagenset foreligger i form av en substratskive i den andre brønnen.

1.. Innretning ifølge krav 6, karakterisert ■ ved at reagenset foreligger i form av én påvisningsskive i den tredje brønnen.

8. Innretning ifølge krav 7, karakterisert ved at veggene i den andre og tredje brønnen inneholder vertikalt ordnede ribber som holder skivene i en ønsket stilling.

9. Innretning ifølge krav 7, karakterisert ved at brønnene og kanalene dekkes tett av et gjennomsiktig deksel, og omfatter en ventileringsanordning som er forbundet med det andre og tredje kammeret for at innesluttet luft skal kunne unnslippe. .

10. Innretning ifølge krav 5, karakterisert ved at rammen har en første kant som strekker seg på tvers derav, den første kanalen strekker seg radialt fra den første brønnen . i en retning som er i hovedsak loddrett på den første kanten og at den hår en bueformet retningsforandring ved sin fjerneste ende som forbinder den med den andre brønnen, den andre brønnen har en akse som er forskjøvet på tvers av aksen til den første brønnen og ligger i et plan- som er loddrett på den første kant og inneholder aksen til den tredje brønnen, den andre og tredje brønnen har bunner.som er i hovedsak i samme plan som bunnen i den første brønnen, den tredje brønnen er plassert mellom den andre brønnen og den første kanten, den andre kanalen har et i hovedsak rektangulært tverrsnitt med en første vegg som ligger i det plan som inneholder aksene for den andre og tredje brønnen og en andre vegg som er forskjøvet på tvers av den første veggen i et plan . som er en tangent til den andre og tredje brønnen.. •

11. Innretning ifølge krav 10, karakterisert ved at et fjerde kammer er laget for. å motta overstrømning av testsuspensjon .fra den tredje brønnen, og det fjerde kammeret er forbundet med den tredje brønnen med en tredje kanal med i hovedsak rektangulært tverrsnitt.

12. Innretning ifølge krav 11, karakterisert ved at det fjerde kammeret har i hovedsak sylindrisk' form og den tredje kanalen har vegger som er i hovedsak parallelle.med den første kanalen og en bunn som er i hovedsak parallell med og befinner seg mellom den plane overflate og bunnen i den fjerde brønnen.

13. Innretning ifølge krav 12, karakterisert ved at den tredje kanalen har en første vegg som er en tangent til den tredje og fjerde brønnen og en andre vegg i et plan som inneholder aksene til den andre og tredje brønnen.

14. Innretning ifølge krav 13, karakterisert ved at den fjerde brønnen har en akse som ligger i planet til aksene til den andre og tredje brønnen, og den andre, tredje og fjerde brønnen har i hovedsak samme diameter.

15. Innretning ifølge krav 14, karakterisert ved at en ventileringskanal foreligger som har i hovedsak rektangulært tverrsnitt og som går vertikalt, fra den plane overflaten på et nivå som ligger mellom den plane overflate og bunnen til den .fjerde brønnen og hvor ventileringskanalen står i forbindelse med den fjerde brønnen.

16. Innretning ifølge krav 15, karakterisert ved at rammen er utstrakt i tverretningen og inneholder flere individuelle diagnoseinnretninger anordnet parallelt i serie.

17. Innretning ifølge krav 16, karakterisert ved at den omfatter en integrert, støpt plastenhet. .'

18. Innretning ifølge krav 17, karakterisert ved at et klart, gjennomsiktig deksel legges i tettende kontakt med den plane rammeoverflaten og dekker den andre, tredje og fjerde brønnen og den første, andre og tredje kanalen og en del av ventileringskanalen, og hvor rammen har et deksel som er montert med hengsler på denne for å dekke den første brønnen og. ventileringskanalen når det plasseres i utfyllende, tett posi sjon med den plane overflaten og hvor dekslets indre overflate inneholder et absorberende stoff for å oppta væskesuspensjonen •og at det absorberende stoff inneholder et germicid middel.

19., Fremgangsmåte for identifisering av ukjente bakterielle testsuspensjoner, karakterisert ved at et første kammer inokuleres med testsuspensjonen, testsuspensjonen føres gjennom en første kanal inn i et andre kammer inneholdende et egnet reagens ved å orientere nevnte første kanal i en på forhånd bestemt stilling, den inkuberte testløsningen føres så gjennom en andre kanal inn i et tredje kammer inneholdende en egnet indikator ved å plassere den andre kanalen i en andre på forhånd bestemt romlig posisjon, og testeksemplaret karakteriseres ved dets reaksjon og fargeforandringen av påvisningsreagenset.

20. Diagnoseinnretning, karakterisert ved at den omfatter en rammedel med i hovedsak plan form med en overflate som inneholder en første brønn som skal inneholde et fly-. tende testeksemplar, en andre brønn hvor testeksemplaret bringes i kontakt med et reagens, en første kanal som selektivt skaffer væskeforbindels.é mellom den første og den andre brønnen når. ram men plasseres i en på forhånd bestemt romlig stilling, en tredje brønn hvor den omsatte testsuspensjon bringes i kontakt med en indikator, og en andre kanal som forbinder den andre og tredje brønnen og som selektivt skaffer forbindelse mellom disse brønnene når rammen plasseres i en på forhånd bestemt andre romlige stilling.

21. Innretning ifølge krav 20, karakterisert ved at rammen har en kant som går på tvers, den første kanalen går fra den første brønnen, loddrett mot kanten og snur i det vesentlige parallelt med kanten ved sin bortre ende for å gå over i den andre brønnen, den andre brønnen ligger på tvers av den første brønnen, den andre kanalen går vekk fra og i det vesentlige loddrett mot kanten for å gå over i den.tredje brønnen, og den tredje brønnen ligger aksialt på linje med den andre brønnen, hvorved det skaffes væskeforbindelse fra den første til den andre brønnen når rammen svinges omtrent 90° fra den normale horisontale stilling om en akse gjennom kanten slik at væske strømmer fra den første til den andre brønnen og væskeforbindelse mellom den andre og tredje brønnen når rammen svinges omtrent 90° i urviserretningen om en akse som er loddrett på kanten.

22. Innretning ifølge krav 21, karakterisert ved at den første, andre og tredje brønnen og den første, og andre kanalen er åpne mot rammeoverflaten og hvor.den andre og tredje brønnen og den første og andre kanalen dekkes tett av et gjennomsiktig deksel.

23. Innretning ifølge krav 22, karakterisert ved at den omfatter en fjerde brønn som er nedsenket i rammen og forbundet med den tredje brønnen ved en tredje nedsenket kanal, en ventileringskanal nedsenket i rammeoverflaten som er forbundet med den fjerde brønnen for å tillate avgang av flyktige stoffer, idet den. fjerde brønnen og en del av ventileringskanalen dekkes tett av det gjennomsiktige dekslet.

24. Diagnoseinnretning, karakterisert ved at den omfatter et første kammer som skal inneholde en testsuspensjon, et andre kammer hvor testsuspensjonen bringes i kontakt med et substrat, og passasjer som selektivt bringer.det første og andre kammeret i kontakt med hverandre og skaffer væskeforbindelse mellom det første og andre kammeret når innretningen plasseres i en på forhånd bestemt stilling i rommet.