NO341454B1

NO341454B1 - GSK-3 inhibitorer

Info

Publication number: NO341454B1
Application number: NO20081052A
Authority: NO
Inventors: Miguel Medina Padilla; Mercedes Alonso Cascón; Ana Martinez Gil; Ana Fuertes Huerta; Maria José Pérez Puerto; Maria Luisa Navarro Rico; Ana Castro Morera; Ester Martín Aparicio
Original assignee: Noscira Sa
Priority date: 2005-07-29
Filing date: 2008-02-28
Publication date: 2017-11-13
Also published as: ZA200800983B; DK1919465T3; KR20080031440A; CN101257900B; RU2449998C2; EP1919465B1; US8686042B2; PT1919465T; RU2008107733A; WO2007017145A3; PL1919465T3; BRPI0615968B1; CY1119971T1; WO2007017145A2; HUE036844T2; EP1919465A2; NO20081052L; CA2616451C; KR101471999B1; IL189048A0

Description

GSK-3 INHIBITORER

DEN FORELIGGENDE OPPFINNELSENS FELT

Den foreliggende oppfinnelsen relateres til enzyminhibitorer, og mer spesielt til ureaderivater som inhibitorer av glykogen syntase kinase 3(3, GSK-3, til prosesser for fremstilling av slike forbindelser, til farmasøytiske sammensetninger som omfatter dem, og til deres anvendelse for behandlingen og eller profylaksen av en sykdom der GSK-3 er involvert, slik som Alzheimers sykdom eller ikke-insulin avhengig diabetes mellitus.

BAKGRUNN FOR DEN FORELIGGENDE OPPFINNELSEN

Letingen etter nye terapeutiske midler har blitt godt hjulpet i løpet av de siste årene ved bedre forståelse av strukturen til enzymer og andre biomolekyler assosiert med målsykdommer. En viktig klasse av enzymer som har blitt gjort til gjenstand for omfattende studie er proteinkinasene. Mange sykdommer er assosiert med avvikende cellulære responser trigget ved protein kinase-medierte hendelser. Disse sykdommene inkluderer autoimmune sykdommer, inflammatoriske sykdommer, nevrologiske og nevrodegenerative sykdommer, cancer, kardiovaskulære sykdommer, allergier og astma, Alzheimers sykdom eller hormon-relaterte sykdommer. Derfor, har det vært en vesentlig anstrengelse i medisinsk kjemi for å finne protein kinase inhibitorer som er effektive som terapeutiske midler.

Glykogen syntase kinase-3 (GSK-3) er en serin/treonin protein kinase omfattet av a og p isoformer som hver er kodet for av distinkte gener (Coghlan et al., Chemistry & Biology, 7, 793-803 (2000); Kim og Kimmel, Curr. Opinion Genetics Dev., 10, 508-514 (2000)). Treonin/serin kinase glykogen syntase kinase-3'en (GSK-3) innfrir en vesentlig rolle i forskjellige reseptor-forbundede signalveier (Doble, BW, Woodgett, JR J. Cell Sei. 2003, 116:1175-1186). Dysregulering innen disse veiene er betraktet som en sentral begivenhet i utviklingen av flere prevalente humane forstyrrelser, slik som type II diabetes (Kaidanovich O, Eldar-Finkelman H, Expert Opin. Ther. Targets, 2002, 6:555-561), Alzheimers sykdom (Grimes CA, Jope RS, Prog. Neurobiol. 2001, 65:391-426) , CNS forstyrrelser slik som manisk depressiv forstyrrelse og nevrodegenerative sykdommer, og kronisk inflammatoriske forstyrrelser (Hoeflich KP, Luo J, Rubie EA, Tsao MS, Jin 0, Woodgett J, Nature 2000, 406:86-90). Disse sykdommene kan være forårsaket av, eller resultere i, den avvikende operasjonen av visse cellesignalveier der GSK-3 spiller en rolle.

GSK-3 har blitt funnet å fosforylere og modulere aktiviteten til et antall av regulatoriske proteiner. Disse proteinene inkluderer glykogen syntase som er det hastighetsbegrensende enzymet nødvendig for glykogen syntese, det mikrotubuli assosierte proteinet Tau, gentranskripsjonsfaktoren [3-catenin, translasjonsinitieringsfaktoren e1F2B, så vel som ATP citrat lyase, aksin, heat shock faktor-1, c-Jun, c-Myc, c-Myb, CREB, og CEPBa. Disse ulike proteinmålene impliserer GSK-3 i mange aspekter av cellulær metabolisme, proliferering, differensiering og utvikling.

Fortiden, kan inhibering av GSK-3 representere en gjennomførbar strategi for å utvikle nye medisinske enheterfor behandlingen av slike umøtte sykdommer (Martinez A, Castro A, Dorronsoro I, Alonso M, Med. Res. Rev., 2002, 22:373-384) gjennom insulin mimikry, tau defosforylering og amyloid prosessering, eller transkripsjonen modulering respektivt.

Ifølge teknikkens stand, har noen forbindelser som inneholder en ureagruppe allerede blitt beskrevet som å ha GSK-3 inhibitoriske egenskaper. Dette er tilfellet, for eksempel, for publikasjoner WO03/004472, WO03/004475 og WO03/089419. Disse publikasjonene refererer hver og en til et veldig bredt antall forbindelser definert ved en Markush struktur, der ovennevnte struktur er stor og kompleks, denne omstendigheten gjør deres fremstilling mer komplisert og som øker sannsynligheten for reaktivitet for forbindelsene. Spesielt, tilhører disse forbindelsene strukturelle undergrupper slik som substituerte tiazolforbindelser og heterosykliske aminer. Disse forbindelsene kan inneholde, blant mange andre grupper, en urea funksjonell gruppe. Disse forbindelsene er generelt sagt å ha inhibitoriske effekter på GSK-3, og således potensiell aktivitet i behandlingen og forebyggingen av en serie sykdommer relatert til GSK-3, slik som demenser, diabetes og humørforstyrrelser. Likevel, ingen resultater angående GSK-3 inhibering for noen som helst spesielle forbindelser er inkludert i noen av de ovennevnte publikasjonene; det vil si, heller ikke for de som omfatter en urea funksjonell gruppe er det noen som helst resultater som virkelig påviser noen som helst aktivitet for disse ureaderivatene som er vist.

På den annen side, Publikasjon WO03/004478 og artikkel " Structural Insights and Biological Effects of GSK-3 specific Inhibitor AR-A014418", J. Biol. Chem., 278 (46), 2003 tar for seg en spesiell urea, 4-(4-metoksybenzyl)-N'-(5-nitro-1,3-tiazol-2-yl)urea; denne ureaen har virkelig en mye mindre og enklere struktur enn ureaene nevnt over. Den er beskrevet som å ha GSK-3 inhibitoriske egenskaper, og derfor som å ha potensiell aktivitet for å behandle og/eller forebygge mange tilstander assosiert med glykogen syntase kinase 3. Likevel, er det ikke klart hvorvidt den GSK-3 inhibitoriske effekten er på grunn av ureaen selv eller av nitro-tiazolen, ettersom heterosykliske forbindelser har blitt beskrevet som å ha GSK-3 inhibitoriske egenskaper, se for eksempel overnevnte WO03/089419.

Noen andre ureaer har blitt beskrevet i forbindelse med behandlingen av nevrologiske forstyrrelser, men i relasjon med helt forskjellige handlingsmåter, for eksempel WO00/06156, hvori de beskrevne ureaene er beskrevet å være potensiatorer for glutamat reseptor funksjon.

Det er derfor fortsatt et behov for å finne gode GSK-3 inhibitorer, som er både effektive og selektive, og som har gode "legemiddelanlegg" egenskaper, dvs. gode farmasøytiske egenskaper relatert til administrering, distribuering, metabolisme og utskillelse. En annen fordel ville være å finne forbindelser med enkle, stabile strukturer, som er lette å fremstille med ordinære fremgangsmåter kjent for den dyktige personen.

BESKRIVELSE AV DEN FORELIGGENDE OPPFINNELSEN

Det har nå blitt funnet at en gruppe av stabile og små ureaderivater viser inhibitoriske effekter på GSK-3 enzym.

Anvendelse av en forbindelse med formel (I)

eller et hvilket som helst farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, hvori:

Rber valgt fra

R3, R4, R'2, R'3, R'5og R'e er hydrogen; R4' er H eller OR12.

hvor R12er usubstituert alkyl;

ved fremstillingen av et medikament for behandlingen og/eller forebyggingen av en GSK-3 mediert sykdom eller tilstand hvori sykdommen eller tilstanden er valgt fra gruppen av diabetes, tilstander assosiert med diabetes, kronisk nevrodegenerative tilstander inkludert demenser slik som Alzheimers sykdom, Parkinsons sykdom, progressiv supranukleær lammethet, subakutt skleroserende panencefalittisk parkinsonisme, postencefalittisk parkinsonisme, pugilistisk encefalitt, guam parkinsonisme-demens kompleks, Picks sykdom, kortikobasal degenerering, frontotemporal demens, Huntingtons Sykdom, AIDS assosiert demens, amyotrofisk lateral sklerose, multippel sklerose og nevrotraumatiske sykdommer slik som akutt slag, epilepsi, humørforstyrrelserslik som depresjon, schizofreni og bipolare forstyrrelser, promosjon av funksjonell bedring post slag, cerebral blødning slik som på grunn av solitær cerebral amyloid

angiopati, hårtap, fettsyke, hypertensjon, polycystisk ovarie syndrom, syndrom X, iskemi, hjerneskade, traumatisk hjerneskade, cancer, leukopeni, Downs syndrom, Lewy klump-sykdom, inflammasjon, kroniske inflammatoriske sykdommer, cancer og hyperproliferative sykdommer som hyperplasier og immunsvikt.

I et tilleggsaspekt, er den foreliggende oppfinnelsen relatert til en forbindelse med formel

I et annet aspekt, er den foreliggende oppfinnelsen relatert til en farmasøytisk sammensetning som omfatter en forbindelse med formel (I) som beskrevet over eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav og en farmasøytisk akseptabel bærer, adjuvant eller hjelpemiddel.

Fortrinnsvis, er sykdommen eller tilstanden mediert med GSK-3 valgt fra Alzheimers sykdom, type II diabetes, depresjon og hjerneskade.

Ifølge et annet aspekt, kan forbindelsene av formel (I) som definert over bli anvendt som reaktiver for biologiske assayer, fortrinnsvis som et reaktiv for GSK-3 inhibering.

KORT BESKRIVELSE AV FIGURENE

Figur 1.- Representerer 1H-NMR og 13C-NMR spektrene til 1-Benzyl-3-naftalen-1-yl-urea Figur 2.- Representerer 1H-NMR og 13C-NMR spektrene til 1 -Benzo[1,3]dioksol-5-yl-3-benzyl-urea Figur 3.- Diagram som viser GSK-3 aktivitet til 1-Benzyl-3-naftalen-1-yl-urea målt ved forskjellige konsentrasjoner. Resultatene er reflektert i sammenligning med kontrollen.

Figur 4.- Diagram som viser GSK-3 aktivitet til 1 -Benzo[1,3]dioksol-5-yl-3-benzyl-urea målt ved forskjellige konsentrasjoner. Resultatene er reflektert i sammenligning med kontrollen.

DETALJERT BESKRIVELSE AV DEN FORELIGGENDE OPPFINNELSEN

Ureaderivatene med formel (I) ifølge den foreliggende oppfinnelsen er kjemiske enheter som overraskende har vist gode inhibitoriske effekter på GSK-3 enzym, sammen med en god stabilitet og lav toksisitet.

Som indikert over, er den foreliggende oppfinnelsen i et første aspekt relatert til anvendelsen av forbindelser med formel (I) eller et hvilket som helst farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, i fremstillingen av et medikament for behandlingen av en sykdom eller tilstand mediert av GSK-3.

Rbvalgt fra:

To foretrukne forbindelser med formel (I) er:

Innen den foreliggende oppfinnelsen, betyr uttrykket "GSK-3 mediert sykdom eller tilstand" en hvilken som helst sykdom eller annen fordervelig tilstand eller forfatning der GSK-3 er kjent å spille en rolle. Denne sykdommen eller tilstanden kan være, men er ikke begrenset til, diabetes, tilstander assosiert med diabetes, kroniske nevrodegenerative tilstander inkludert demenser slik som Alzheimers sykdom, Parkinsons sykdom, progressiv supranukleær lammethet, subakutt skleroserende panencefalittisk parkinsonisme, postencefalittisk parkinsonisme, pugilistisk encefalitt, guam parkinsonisme-demens kompleks, Picks sykdom, kortikobasal degenerering, frontotemporal demens, Huntingtons Sykdom, AIDS assosiert demens, amyotrofisk lateral sklerose, multippel sklerose og nevrotraumatiske sykdommer slik som akutt slag, epilepsi, humørforstyrrelser slik som depresjon, schizofreni og bipolare forstyrrelser, promosjon av funksjonell bedring post slag, cerebral blødning slik som på grunn av solitær cerebral amyloid angiopati, hårtap, fettsyke, hypertensjon, polycystisk ovarie syndrom, syndrom X, iskemi, hjerneskade, traumatisk hjerneskade, cancer, leukopeni, Downs syndrom, Lewy klump-sykdom, inflammasjon, kroniske inflammatoriske sykdommer, cancer og hyperproliferative sykdommer som hyperplasier og immunsvikt.

Fortrinnsvis, er den GSK-3 medierte sykdommen eller tilstanden enten Alzheimers Sykdom, type II diabetes, depresjon eller hjerneskade.

Ifølge videre aspekter av den foreliggende oppfinnelsen, er det relatert til en forbindelse med formel

og til dennes anvendelse som et medikament.

Et annet aspekt av den foreliggende oppfinnelsen er en farmasøytisk sammensetning som omfatter en forbindelse som definert over, eller et hvilket som helst farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer adjuvant eller hjelpemiddel; fortrinnsvis, er ovennevnte farmasøytiske sammensetning for oral administrering. Foretrukne sykdommer eller tilstander som kan bli behandlet med denne farmasøytiske sammensetningen kan være, men er ikke begrenset til, diabetes, tilstander assosiert med diabetes, kronisk nevrodegenerative tilstander inkludert demenser slik som Alzheimers sykdom, Parkinsons sykdom, progressiv supranukleær lammethet, subakutt skleroserende panencefalittisk parkinsonisme, postencefalittisk parkinsonisme, pugilistisk encefalitt, guam parkinsonisme-demens kompleks, Picks sykdom, kortikobasal degenerering, frontotemporal demens, Huntingtons Sykdom, AIDS assosiert demens, amyotrofisk lateral sklerose, multippel sklerose og nevrotraumatiske sykdommer slik som akutt slag, epilepsi, humørforstyrrelser slik som depresjon, schizofreni og bipolare forstyrrelser, promosjon av funksjonell bedring post slag, cerebral blødning slik som på grunn av solitær cerebral amyloid angiopati, hårtap, fettsyke, hypertensjon, polycystisk ovarie syndrom, syndrom X, iskemi, hjerneskade, traumatisk hjerneskade, cancer, leukopeni, Downs syndrom, Lewy klump-sykdom, inflammasjon, kroniske inflammatoriske sykdommer, cancer og hyperproliferative sykdommer som hyperplasier og immunsvikt.

I et annet aspekt relateres den foreliggende oppfinnelsen til å inhibere GSK-3

aktivitet i en biologisk prøve med forbindelsene med formel (I), hvilken fremgangsmåte omfatter å kontakte den biologiske prøven med en GSK-3

inhibitor med formel (I). Termen "biologisk prøve", som anvendt heri,

inkluderer, uten begrensning, cellekulturer eller ekstrakter derav;

fremstillinger av et enzym passende for in vitro assay; biopsiert materiale ervervet fra et pattedyr eller ekstrakter derav; og blod, spytt, urin, avføring,

sæd, tårer, eller andre kroppsvæsker eller ekstrakter derav. Derfor, er den foreliggende oppfinnelsen i et aspekt rettet mot anvendelsen av forbindelser med formel I som reaktiver for biologiske assayer, spesielt som et reaktiv for GSK-3 inhibering.

I definisjonen over av forbindelser med formel (I) har de følgende termene meningen indikert: "Alkyl" refererer til et rett eller forgrenet hydrokarbonkjederadikal som består av karbon- og hydrogen-atomer, som ikke inneholder noen metning, har et til åtte karbonatomer, og som er festet til resten av molekylet med et enkelt bånd, f.eks., metyl, etyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, t-butyl, n-pentyl, etc.

Med mindre på annen måte oppgitt, så er forbindelsene av den foreliggende oppfinnelsen også ment å inkludere forbindelser som er forskjellig bare i nærværet av en eller flere isotopisk berikede atomer. For eksempel, forbindelser som har de foreliggende strukturene unntatt erstatningen av et hydrogen med et deuterium eller tritium, eller erstatningen av et karbon med en<13>C- eller<14>C-beriket karbon eller<15>N-beriket nitrogen er innen omfanget av denne foreliggende oppfinnelsen.

Termen "farmasøytisk akseptable salter, solvater" refererer til et hvilket som helst farmasøytisk akseptabelt salt, solvat, som etter administrering til mottakeren er i stand til å fremskaffe (direkte eller indirekte) en forbindelse som beskrevet heri. Imidlertid, vil det bli anerkjent at ikke-farmasøytisk akseptable salter også faller innen omfanget av den foreliggende oppfinnelsen siden de kan bli nyttige i fremstillingen av farmasøytisk akseptable salter. Fremstillingen av salter kan bli utført med fremgangsmåter kjent i faget.

For eksempel, er farmasøytisk akseptable salter og forbindelser fremskaffet heri syntetisert fra foreldreforbindelsen som inneholder en basisk eller sur gruppe med konvensjonelle kjemiske fremgangsmåter. Generelt, er slike salter, for eksempel, fremstilt ved å reagere de frie syre- eller base-formene av disse forbindelsene med en støkiometrisk mengde av den passende basen eller syren i vann eller i et organisk solvent eller i en blanding av de to. Generelt, er ikke-vandig media som eter, etyl acetat, etanol, isopropanol eller acetonitril foretrukket. Eksempler på syreaddisjonssaltene inkluderer mineralsyreaddisjonssalter slik som, for eksempel, hydroklorid, hydrobromid, hydrojodid, sulfat, nitrat, fosfat, og organiske syreaddisjonssalter slik som, for eksempel, acetat, maleat, fumarat, citrat, oksalat, succinat, tartrat, malat, mandelat, metansulfonat og p-toluenesulfonat. Eksempler på de alkaliske addisjonssaltene inkluderer uorganiske salter slik som, for eksempel, natrium-, kalium-, kalsium-, ammonium-, magnesium-, aluminium- og litium-salter, og organiske alkaliske salter slik som, for eksempel, etylendiamin, etanolamin, N,N-dialkylentanolamin, trietanolamin, glukamin og basiske aminosyresalter.

Forbindelsene av den foreliggende oppfinnelsen kan være i krystallinsk form enten som frie forbindelser eller som solvater (f.eks. hydrater) og det er ment at begge former er innen omfanget av den foreliggende oppfinnelsen. Fremgangsmåter for oppløsning er generelt kjent innen faget. Passende solvater er farmasøytisk akseptable solvater. I en spesiell utførelsesform er solvatet et hydrat.

Forbindelsene med formel (I) eller deres salter eller solvater er fortrinnsvis i farmasøytisk akseptabel eller vesentlig ren form. Med farmasøytisk akseptabel form er det ment, blant annet, å ha et farmasøytisk akseptabelt renhetsnivå ekskludert normale farmasøytiske tilsetningsstoffer slik som fortynningsmidler og bærere, og ikke inkludert noe materiale betraktet som toksisk ved normale dosenivåer. Renhetsnivåer for legemiddelsubstansen er fortrinnsvis over 50%, mer foretrukket over 70%, mest foretrukket over 90%. I en foretrukket utførelsesform er det over 95% av forbindelsen med formel (I), eller av dennes salter eller solvater..

Forbindelsene av den foreliggende oppfinnelsen representert ved formelen (I) beskrevet over kan inkludere enantiomerer avhengig av nærværet av kirale sentere eller isomerer avhengig av tilstedeværelsen av mangfoldige bindinger (f.eks. Z, E). De enkle isomerene, enantiomerene eller diastereoisomerene og blandingene derav faller innen omfanget av den foreliggende oppfinnelsen.

Forbindelsene med formel (I) definert over kan bli ervervet med tilgjengelige syntetiske prosedyrer, for eksempel ved å reagere:

i et passende solvent, slik som N,N-dimetylformamid, dimetyl sulfoksid, dioksan, diklorometan eller tetrahydrofuran, ved en temperatur innen området +20 til +150°C.

En foretrukket farmasøytisk akseptabel form er den krystallinske formen, inkludert slik form i en farmasøytisk sammensetning. I tilfellet med salter og solvater må ytterligere ioniske og solvente grupper også være ikke-toksiske. Forbindelsene av den foreliggende oppfinnelsen kan presentere forskjellige polymorfe former, det er ment at den foreliggende oppfinnelsen omfatter alle slike former.

Eksempler på farmasøytiske sammensetninger inkluderer et hvilket som helst fast stoff (tabletter, piller, kapsler, granuler osv.) eller flytende (oppløsninger, suspensjoner eller emulsjoner) sammensetning for oral, topisk eller parenteral administrering.

I en foretrukket utførelsesform er de farmasøytiske sammensetningene i oral form. Egnede doseformer for oral administrering kan være tabletter og kapsler og kan inneholde konvensjonelle eksipienter kjent i faget slik som bindingsmidler, for eksempel sirup, akasie, gelatin, sorbitol, tragant, eller polyvinylpyrrolidon; fyller, for eksempel laktose, sukker, maisstivelse, kalsium fosfat, sorbitol eller glycin; tablettsmøremidler, for eksempel magnesium stearat; disintegranter, foreksempel stivelse, polyvinylpyrrolidon, natriumstivelse glykolat eller mikrokrystallin cellulose; eller farmasøytisk akseptable vætemidler slik som natrium lauryl sulfat.

De fast stoff orale sammensetningene kan bli fremstilt med konvensjonelle fremgangsmåter for blanding, fylling eller tablettforming. Gjentatte blandingsoperasjoner kan bli anvendt for å distribuere det aktive middelet gjennom hele de sammensetningene som anvender store kvantiteter med fyllere. Slike operasjoner er konvensjonelle i faget. Tablettene kan for eksempel bli fremstilt med våt eller tørr granulering og valgfritt belagt ifølge fremgangsmåter godt kjent i normal farmasøytisk praksis, spesielt med et enterisk dekke.

De farmasøytiske sammensetningene kan også bli tilpasset for parenteral administrering, slik som sterile løsninger, suspensjoner eller lyofiliserte produkter i den passende enhetsdoseform. Adekvate eksipienter kan bli anvendt, slik som svulmemidler, buffringsmidler eller surfaktanter.

De nevnte formuleringene vil bli fremstilt ved å anvende standard fremgangsmåter slik som de beskrevet eller referert til i det Spanske og USA Farmakopoeias og lignende referansetekster.

Administrering av forbindelsene eller sammensetningene av den foreliggende oppfinnelsen kan være ved en hvilken som helst egnet fremgangsmåte, slik som intravenøs infusjon, orale fremstillinger, og intraperitoneal og intravenøs administrering. Oral administrering er foretrukket på grunn av bekvemmeligheten for pasienten og den kronisk karakteren til mange av sykdommene som skal bli behandlet.

Generelt vil en effektiv administrert mengde av en forbindelse av den foreliggende oppfinnelsen avhenge av den relative effekten til forbindelsen som er valgt, alvorlighetsgraden til forstyrrelsen som blir behandlet og vekten til den lidende. Likevel, vil aktive forbindelser typisk bli administrert en eller flere ganger per dag for eksempel 1, 2, 3 eller 4 ganger daglig, med typiske totale daglige doser i området fra 0.1 til 1000 mg/kg/dag.

Forbindelsene og sammensetningene fra denne foreliggende oppfinnelsen kan bli anvendt med andre legemidler for å fremskaffe en kombinasjonsterapi. De andre legemidlene kan danne en del av den samme sammensetningen, eller bli fremskaffet som en separat sammensetning for administrering på samme tid eller ved forskjellig tid.

I det følgende, er den foreliggende oppfinnelsen videre illustrert med eksempler. De skulle ikke i noe tilfelle bli tolket som en begrensning av omfanget av den foreliggende oppfinnelsen som definert i kravene.

EKSEMPLER

Fremstilling av forbindelser med formel II

Forbindelsene med formel II ifølge den foreliggende oppfinnelsen ble fremstilt ved å reagere en lett tilgjengelig isocyanat med et lett tilgjengelig amin for å kunne få den korresponderende urea, som beskrevet over.

Eksempel 1

Fremstilling av 1-Benzyl-3-naftalen-1-yl-urea

0.44 ml (4 mmol) benzylamin er reagert med 0.58 ml (4 mmol) 2-Isocyanato-naftalen i diklorometan ved romtemperatur i løpet av natten:

Det resulterende hvite presipitatet er filtrert og vasket med dietyleter. 1.18 gr av et hvitt pulver med en molekylvekt på 276 er ervervet. Korresponderende 1H-NMR og 13C-NMR spektre er indikert i Figur 1. De viser den hvite forbindelsen til å være 1-benzyl-3-naftalen-1-yl-urea.

Eksempel 2

Fremstilling av 1-Benzo[1,3]dioksol-5-yl-3-benzyl-urea

0.44 ml (4 mmol) benzylamin er reagert med 654.5 mg (4 mmol) 5-isocyanato-benzo[1,3]dioksol i diklorometan ved romtemperatur i løpet av natt:

Det resulterende hvite presipitatet er filtrert og vasket med dietyleter. 1 gr av et hvitt pulver med en molekylvekt på 276 er ervervet. Korresponderende 1H-NMR og 13C-NMR spektre er vist i Figur 2. De viser den hvite forbindelsen å være 1 -benzyl-3-naftalen-1 -yl-urea.

Biologiske fremgangsmåter

GSK- 33 inhibering

GSK-3J3 aktiviteten ble bestemt ved inkubering av en blanding av rekombinant humant GSK-3 enzym, en fosfatkilde og GSK-3 substrat i nærvær av og i fraværet av den korresponderende prøveforbindelsen, og ved å måle GSK-3 aktiviteten til denne blandingen.

Rekombinant human glykogen syntase kinase 3Q> ble assayet i MOPS 8 mM pH 7.3, EDTA 0.2 mM, MgCb 10 mM og natrium ortovanadat 0.25 mM i nærvær av 62.5 uM av Fosfo-Glykogen Syntase Peptid-2 (GS-2), 0.5 uCi y-<33>P-ATP og umerket ATP med en sluttkonsentrasjon på 12.5 uM. Det endelige assayvolumet var 20 ul. Etter inkubering i 30 minutter ved 30 °C, ble 15 ul alikvoter plassert i punkter på P81 fosfocellulose papir. Filtere ble vasket fire ganger i minst 10 minutter hver og talt med 1.5 ml av scintillerings-cocktail i en scintillerings-teller.

Verdiene for GSK-3 aktivitet i nærvær av forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen ble målt ved forskjellige konsentrasjoner; resultatene, reflektert i sammenligning med kontrollen, er vist i Figurer 3 og 4.

Forbindelsenes IC50 verdier ble beregnet ved å analysere inhiberingskurver med ikke-lineær regresjon ved å anvende GraphPad Prism. IC50 (konsentrasjon der 50 % av enzyminhibering er vist) verdiene er samlet i tabell 1: