NO341198B1 - Humane anti-KIR antistoff. - Google Patents
Humane anti-KIR antistoff. Download PDFInfo
- Publication number
- NO341198B1 NO341198B1 NO20070585A NO20070585A NO341198B1 NO 341198 B1 NO341198 B1 NO 341198B1 NO 20070585 A NO20070585 A NO 20070585A NO 20070585 A NO20070585 A NO 20070585A NO 341198 B1 NO341198 B1 NO 341198B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- antibody
- human
- kir
- antibodies
- cells
- Prior art date
Links
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 title claims abstract description 288
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims abstract description 222
- 101001027081 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL1 Proteins 0.000 claims abstract description 192
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 192
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 191
- 102100037363 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL1 Human genes 0.000 claims abstract description 186
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 147
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 66
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 66
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 66
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 60
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 57
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 claims abstract description 49
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 claims abstract description 49
- 108010043610 KIR Receptors Proteins 0.000 claims description 219
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 204
- 102000002698 KIR Receptors Human genes 0.000 claims description 192
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 156
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 109
- 101000945371 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL2 Proteins 0.000 claims description 89
- 102100033599 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL2 Human genes 0.000 claims description 85
- 101000945333 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL3 Proteins 0.000 claims description 59
- 102100033634 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL3 Human genes 0.000 claims description 59
- 102100028971 HLA class I histocompatibility antigen, C alpha chain Human genes 0.000 claims description 52
- 108010052199 HLA-C Antigens Proteins 0.000 claims description 51
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 51
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 44
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 43
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 43
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 39
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 35
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 29
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 29
- 108010069149 HLA-C*04 antigen Proteins 0.000 claims description 27
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 21
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 21
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 21
- 101000945342 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DS4 Proteins 0.000 claims description 19
- 102100033624 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DS4 Human genes 0.000 claims description 19
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 19
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 19
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 18
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 claims description 16
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 16
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 14
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 12
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 12
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 12
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 11
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 11
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 10
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 9
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 9
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 8
- 101000945343 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DS3 Proteins 0.000 claims description 7
- 102100033625 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DS3 Human genes 0.000 claims description 7
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 claims description 7
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 7
- 108010070768 HLA-C*03 antigen Proteins 0.000 claims description 6
- 229940125697 hormonal agent Drugs 0.000 claims description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 6
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 5
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 229960005475 antiinfective agent Drugs 0.000 claims description 4
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 claims description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 145
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 77
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 32
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 102
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 81
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 73
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 63
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 58
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 58
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 54
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 52
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 51
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 50
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 50
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 49
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 48
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 46
- 239000000047 product Substances 0.000 description 46
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 44
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 42
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 38
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 33
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 27
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 27
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 26
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 26
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 26
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 25
- -1 BCGF Proteins 0.000 description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 24
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 20
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 20
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 20
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 18
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 17
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 17
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 16
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 15
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 14
- 101000945340 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DS1 Proteins 0.000 description 14
- 102100033631 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DS1 Human genes 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 14
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 14
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 13
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 13
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 13
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 12
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 12
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 12
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 12
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 12
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 12
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 11
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 11
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 11
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 11
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 10
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 10
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 10
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 10
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 10
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 10
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 10
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 10
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 10
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 10
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 10
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 9
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 9
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 9
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 9
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 9
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 9
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 9
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 8
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 8
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 8
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 8
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 8
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 8
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 8
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 8
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 8
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 8
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 7
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 7
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 7
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 7
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 7
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 7
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 7
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 7
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 7
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 7
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 7
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 7
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 7
- 238000012383 pulmonary drug delivery Methods 0.000 description 7
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 7
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 7
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 101000945339 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DS2 Proteins 0.000 description 6
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 6
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 6
- 102100033630 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DS2 Human genes 0.000 description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 6
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 6
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 6
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 6
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 6
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 6
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 6
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 6
- 102000047041 human KIR2DL1 Human genes 0.000 description 6
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 6
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 6
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 5
- 102100025698 Cytosolic carboxypeptidase 4 Human genes 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 5
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 5
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 101000932590 Homo sapiens Cytosolic carboxypeptidase 4 Proteins 0.000 description 5
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 5
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 5
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 5
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 5
- 101001033003 Mus musculus Granzyme F Proteins 0.000 description 5
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 5
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 5
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 5
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 5
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 5
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 5
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 5
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 5
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 5
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 5
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 5
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 5
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 5
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 5
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 5
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 5
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 5
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 5
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 4
- 101000945351 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL1 Proteins 0.000 description 4
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 4
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 4
- 102100033627 Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL1 Human genes 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 4
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 4
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 4
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 4
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 4
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 4
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 4
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 4
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 4
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical group O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 4
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 4
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 102000058207 human KIR2DL2 Human genes 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000014705 isoleucine Nutrition 0.000 description 4
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 4
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000010403 protein-protein docking Methods 0.000 description 4
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 4
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 4
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JADVWWSKYZXRGX-UHFFFAOYSA-M thioflavine T Chemical group [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=[N+](C)C2=CC=C(C)C=C2S1 JADVWWSKYZXRGX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 3
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 3
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 3
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 101000945490 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL2 Proteins 0.000 description 3
- 101000633786 Homo sapiens SLAM family member 6 Proteins 0.000 description 3
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 3
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 3
- 108010023852 KIR2DL2 Receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000011419 KIR2DL2 Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010023867 KIR2DL3 Receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000011414 KIR2DL3 Receptors Human genes 0.000 description 3
- 102100034840 Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL2 Human genes 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 3
- 102100029197 SLAM family member 6 Human genes 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 3
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 3
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical class OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 3
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 3
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 3
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 3
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 3
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 3
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 3
- 230000008676 import Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 3
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 3
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 3
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 3
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 3
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 2
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CLPFFLWZZBQMAO-UHFFFAOYSA-N 4-(5,6,7,8-tetrahydroimidazo[1,5-a]pyridin-5-yl)benzonitrile Chemical compound C1=CC(C#N)=CC=C1C1N2C=NC=C2CCC1 CLPFFLWZZBQMAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LGZKGOGODCLQHG-CYBMUJFWSA-N 5-[(2r)-2-hydroxy-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)ethyl]-2-methoxyphenol Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1C[C@@H](O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 LGZKGOGODCLQHG-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 2
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 208000009746 Adult T-Cell Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 206010001413 Adult T-cell lymphoma/leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- BFYIZQONLCFLEV-DAELLWKTSA-N Aromasine Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC(=C)C2=C1 BFYIZQONLCFLEV-DAELLWKTSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 108010037003 Buserelin Proteins 0.000 description 2
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BLCLNMBMMGCOAS-URPVMXJPSA-N Goserelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](COC(C)(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NNC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 BLCLNMBMMGCOAS-URPVMXJPSA-N 0.000 description 2
- 108010069236 Goserelin Proteins 0.000 description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000945331 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL4 Proteins 0.000 description 2
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 2
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 2
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 2
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 2
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 2
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 2
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 2
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 108010023842 KIR2DL1 Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000011417 KIR2DL1 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 101150069255 KLRC1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100033633 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL4 Human genes 0.000 description 2
- 125000002059 L-arginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(=N[H])N([H])[H] 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N L-methionine (R)-S-oxide Chemical compound C[S@@](=O)CC[C@H]([NH3+])C([O-])=O QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N 0.000 description 2
- QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N L-methionine sulphoxide Natural products CS(=O)CCC(N)C(O)=O QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 101100074179 Lactobacillus johnsonii (strain CNCM I-12250 / La1 / NCC 533) lafA gene Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 208000006404 Large Granular Lymphocytic Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 108010000817 Leuprolide Proteins 0.000 description 2
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 2
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 2
- 101100404845 Macaca mulatta NKG2A gene Proteins 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 2
- 241000186364 Mycobacterium intracellulare Species 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100022682 NKG2-A/NKG2-B type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 2
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 2
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 description 2
- 201000010208 Seminoma Diseases 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000009359 Sezary Syndrome Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 description 2
- 201000008717 T-cell large granular lymphocyte leukemia Diseases 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N Thiotepa Chemical compound C1CN1P(N1CC1)(=S)N1CC1 FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 2
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 2
- 108010050144 Triptorelin Pamoate Proteins 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 2
- 238000012382 advanced drug delivery Methods 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 2
- 108700025316 aldesleukin Proteins 0.000 description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N anthracene Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C21 MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000002280 anti-androgenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 229940046836 anti-estrogen Drugs 0.000 description 2
- 230000001833 anti-estrogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000000051 antiandrogen Substances 0.000 description 2
- 229940030495 antiandrogen sex hormone and modulator of the genital system Drugs 0.000 description 2
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 description 2
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 2
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 2
- 239000003972 antineoplastic antibiotic Substances 0.000 description 2
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 2
- 230000034720 apoptotic signaling pathway Effects 0.000 description 2
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 2
- 239000003886 aromatase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940046844 aromatase inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 2
- 229960004217 benzyl alcohol Drugs 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- CUWODFFVMXJOKD-UVLQAERKSA-N buserelin Chemical compound CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](COC(C)(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 CUWODFFVMXJOKD-UVLQAERKSA-N 0.000 description 2
- 229960002719 buserelin Drugs 0.000 description 2
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 2
- DWKPZOZZBLWFJX-UHFFFAOYSA-L calcium;1,4-bis(2-ethylhexoxy)-1,4-dioxobutane-2-sulfonate Chemical compound [Ca+2].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC.CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC DWKPZOZZBLWFJX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- XREUEWVEMYWFFA-CSKJXFQVSA-N carminomycin Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=C(O)C=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XREUEWVEMYWFFA-CSKJXFQVSA-N 0.000 description 2
- 229930188550 carminomycin Natural products 0.000 description 2
- XREUEWVEMYWFFA-UHFFFAOYSA-N carminomycin I Natural products C1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C2=C(O)C(C(=O)C3=C(O)C=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2CC(O)(C(C)=O)C1 XREUEWVEMYWFFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229950001725 carubicin Drugs 0.000 description 2
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 2
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- VUHJZBBCZGVNDZ-TTYLFXKOSA-N chlormadinone Chemical compound C1=C(Cl)C2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2 VUHJZBBCZGVNDZ-TTYLFXKOSA-N 0.000 description 2
- 229960003996 chlormadinone Drugs 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- LGZKGOGODCLQHG-UHFFFAOYSA-N combretastatin Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1CC(O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 LGZKGOGODCLQHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- DUSHUSLJJMDGTE-ZJPMUUANSA-N cyproterone Chemical compound C1=C(Cl)C2=CC(=O)[C@@H]3C[C@@H]3[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2 DUSHUSLJJMDGTE-ZJPMUUANSA-N 0.000 description 2
- 229960003843 cyproterone Drugs 0.000 description 2
- 238000011266 cytolytic assay Methods 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 2
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- TXKMVPPZCYKFAC-UHFFFAOYSA-N disulfur monoxide Inorganic materials O=S=S TXKMVPPZCYKFAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 2
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 2
- 229960000255 exemestane Drugs 0.000 description 2
- 229950011548 fadrozole Drugs 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N flutamide Chemical compound CC(C)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(F)(F)F)=C1 MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002074 flutamide Drugs 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 2
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002913 goserelin Drugs 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 2
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 229960003881 letrozole Drugs 0.000 description 2
- HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N letrozole Chemical compound C1=CC(C#N)=CC=C1C(N1N=CN=C1)C1=CC=C(C#N)C=C1 HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GFIJNRVAKGFPGQ-LIJARHBVSA-N leuprolide Chemical compound CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 GFIJNRVAKGFPGQ-LIJARHBVSA-N 0.000 description 2
- 229960004338 leuprorelin Drugs 0.000 description 2
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 229960001786 megestrol Drugs 0.000 description 2
- JBVNBBXAMBZTMQ-CEGNMAFCSA-N megestrol Chemical compound C1=CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2 JBVNBBXAMBZTMQ-CEGNMAFCSA-N 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- XWXYUMMDTVBTOU-UHFFFAOYSA-N nilutamide Chemical compound O=C1C(C)(C)NC(=O)N1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(F)(F)F)=C1 XWXYUMMDTVBTOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002653 nilutamide Drugs 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 2
- QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N o-cresol Chemical compound CC1=CC=CC=C1O QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 229940127084 other anti-cancer agent Drugs 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- CACRHRQTJDKAPJ-UHFFFAOYSA-M potassium;1,4-bis(2-ethylhexoxy)-1,4-dioxobutane-2-sulfonate Chemical compound [K+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC CACRHRQTJDKAPJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000009117 preventive therapy Methods 0.000 description 2
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 2
- 229940095055 progestogen systemic hormonal contraceptives Drugs 0.000 description 2
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 2
- 229940087463 proleukin Drugs 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M sodium docusate Chemical compound [Na+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 2
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 2
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 2
- 208000001608 teratocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001196 thiotepa Drugs 0.000 description 2
- XFCLJVABOIYOMF-QPLCGJKRSA-N toremifene Chemical compound C1=CC(OCCN(C)C)=CC=C1C(\C=1C=CC=CC=1)=C(\CCCl)C1=CC=CC=C1 XFCLJVABOIYOMF-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- 229960005026 toremifene Drugs 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VXKHXGOKWPXYNA-PGBVPBMZSA-N triptorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 VXKHXGOKWPXYNA-PGBVPBMZSA-N 0.000 description 2
- 229960004824 triptorelin Drugs 0.000 description 2
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 2
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 2
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 2
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 2
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 2
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 2
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 description 2
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 2
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N (+)-propylene glycol Chemical compound C[C@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- BEJKOYIMCGMNRB-GRHHLOCNSA-N (2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 BEJKOYIMCGMNRB-GRHHLOCNSA-N 0.000 description 1
- LAXXPOJCFVMVAX-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-amino-4-butylsulfanylbutanoic acid Chemical compound CCCCSCC[C@H](N)C(O)=O LAXXPOJCFVMVAX-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- BUVCJVSDXCCEOY-LURJTMIESA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-(ethylamino)pentanoic acid Chemical compound CCN[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N BUVCJVSDXCCEOY-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- LKJPYSCBVHEWIU-KRWDZBQOSA-N (R)-bicalutamide Chemical compound C([C@@](O)(C)C(=O)NC=1C=C(C(C#N)=CC=1)C(F)(F)F)S(=O)(=O)C1=CC=C(F)C=C1 LKJPYSCBVHEWIU-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- MXOAEAUPQDYUQM-QMMMGPOBSA-N (S)-chlorphenesin Chemical compound OC[C@H](O)COC1=CC=C(Cl)C=C1 MXOAEAUPQDYUQM-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 1,3-propanediol Substances OCCCO YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- ZPDQFUYPBVXUKS-YADHBBJMSA-N 1-stearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O ZPDQFUYPBVXUKS-YADHBBJMSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 2-methylthioethanol Chemical compound CSCCO WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEACJMVNYZDSKR-UHFFFAOYSA-N 2-octyldodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCC(CO)CCCCCCCC LEACJMVNYZDSKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 3-[6-[4-(trifluoromethoxy)anilino]-4-pyrimidinyl]benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC(C=2N=CN=C(NC=3C=CC(OC(F)(F)F)=CC=3)C=2)=C1 WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TUBRCQBRKJXJEA-UHFFFAOYSA-N 3-[hexadecyl(dimethyl)azaniumyl]propane-1-sulfonate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O TUBRCQBRKJXJEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WADQOGCINABPRT-UHFFFAOYSA-N 3-chloro-2-methylphenol Chemical compound CC1=C(O)C=CC=C1Cl WADQOGCINABPRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108010066676 Abrin Proteins 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000036762 Acute promyelocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000001049 Amyloid Human genes 0.000 description 1
- 108010094108 Amyloid Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000212384 Bifora Species 0.000 description 1
- 229940122361 Bisphosphonate Drugs 0.000 description 1
- 241000593992 Blicca bjoerkna Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000588779 Bordetella bronchiseptica Species 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N Bronopol Chemical compound OCC(Br)(CO)[N+]([O-])=O LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N Butylparaben Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 241001647378 Chlamydia psittaci Species 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- 241000251556 Chordata Species 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 1
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 description 1
- 102000016736 Cyclin Human genes 0.000 description 1
- AMRLSQGGERHDHJ-FXQIFTODSA-N Cys-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AMRLSQGGERHDHJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical group [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000570065 Domene Species 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- 241001466953 Echovirus Species 0.000 description 1
- 241000607473 Edwardsiella <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000589566 Elizabethkingia meningoseptica Species 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 208000002460 Enteropathy-Associated T-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 101710163305 Fibril protein Proteins 0.000 description 1
- 108010029961 Filgrastim Proteins 0.000 description 1
- 241000589565 Flavobacterium Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102100021260 Galactosylgalactosylxylosylprotein 3-beta-glucuronosyltransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000207202 Gardnerella Species 0.000 description 1
- 241000207201 Gardnerella vaginalis Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 1
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 108010086377 HLA-A3 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010002634 HLA-Bw4 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010016670 HLA-C*02 antigen Proteins 0.000 description 1
- 229920003114 HPC-L Polymers 0.000 description 1
- 229920003115 HPC-SL Polymers 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101100099884 Homo sapiens CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000894906 Homo sapiens Galactosylgalactosylxylosylprotein 3-beta-glucuronosyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000986084 Homo sapiens HLA class I histocompatibility antigen, C alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 101001056180 Homo sapiens Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001082063 Homo sapiens Interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000945493 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL3 Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000589305 Homo sapiens Natural cytotoxicity triggering receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000971513 Homo sapiens Natural killer cells antigen CD94 Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102100026539 Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102100027356 Interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 5 Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 206010023347 Keratoacanthoma Diseases 0.000 description 1
- 102100034834 Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL3 Human genes 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- GGLZPLKKBSSKCX-YFKPBYRVSA-N L-ethionine Chemical compound CCSCC[C@H](N)C(O)=O GGLZPLKKBSSKCX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 108010062867 Lenograstim Proteins 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 101100181099 Mus musculus Klra1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000763311 Mus musculus Thrombomodulin Proteins 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 241001467553 Mycobacterium africanum Species 0.000 description 1
- 241000186367 Mycobacterium avium Species 0.000 description 1
- 241000186366 Mycobacterium bovis Species 0.000 description 1
- 241000186363 Mycobacterium kansasii Species 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001880 NK Cell Lectin-Like Receptor Subfamily C Proteins 0.000 description 1
- 102000000834 NK Cell Lectin-Like Receptor Subfamily C Human genes 0.000 description 1
- 108010001657 NK Cell Lectin-Like Receptor Subfamily K Proteins 0.000 description 1
- 102000000812 NK Cell Lectin-Like Receptor Subfamily K Human genes 0.000 description 1
- 230000006051 NK cell activation Effects 0.000 description 1
- 108010004217 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010004222 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100032870 Natural cytotoxicity triggering receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100032851 Natural cytotoxicity triggering receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100032852 Natural cytotoxicity triggering receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100021462 Natural killer cells antigen CD94 Human genes 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 1
- 208000003788 Neoplasm Micrometastasis Diseases 0.000 description 1
- 244000038458 Nepenthes mirabilis Species 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010056995 Perforin Proteins 0.000 description 1
- 102000004503 Perforin Human genes 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 1
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 1
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 244000110797 Polygonum persicaria Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 208000009052 Precursor T-Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000017414 Precursor T-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000033766 Prolymphocytic Leukemia Diseases 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 208000010362 Protozoan Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 101000762949 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- 108091008103 RNA aptamers Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 241000606683 Rickettsiaceae Species 0.000 description 1
- 208000006257 Rinderpest Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- IDIDJDIHTAOVLG-UHFFFAOYSA-N S-methyl-L-cysteine Natural products CSCC(N)C(O)=O IDIDJDIHTAOVLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDIDJDIHTAOVLG-VKHMYHEASA-N S-methylcysteine Chemical compound CSC[C@H](N)C(O)=O IDIDJDIHTAOVLG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 241000607717 Serratia liquefaciens Species 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical group [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004288 Sodium dehydroacetate Substances 0.000 description 1
- HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N Sorbitan monostearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241001478878 Streptobacillus Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000029052 T-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000037913 T-cell disorder Diseases 0.000 description 1
- 208000026651 T-cell prolymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002359 Tetronic® Polymers 0.000 description 1
- 241000203770 Thermoactinomyces vulgaris Species 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- PITVQFJBUFDJDD-XEGUGMAKSA-N Trp-Ile Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)=CNC2=C1 PITVQFJBUFDJDD-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- 238000008083 Urea Assay Methods 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 235000010726 Vigna sinensis Nutrition 0.000 description 1
- 241000219994 Vigna unguiculata subsp. unguiculata Species 0.000 description 1
- 241000863480 Vinca Species 0.000 description 1
- 229940122803 Vinca alkaloid Drugs 0.000 description 1
- 238000012452 Xenomouse strains Methods 0.000 description 1
- 201000006083 Xeroderma Pigmentosum Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008055 alkyl aryl sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940063655 aluminum stearate Drugs 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- HAMNKKUPIHEESI-UHFFFAOYSA-N aminoguanidine Chemical compound NNC(N)=N HAMNKKUPIHEESI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 229960002932 anastrozole Drugs 0.000 description 1
- YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N anastrozole Chemical compound N#CC(C)(C)C1=CC(C(C)(C#N)C)=CC(CN2N=CN=C2)=C1 YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 206010002449 angioimmunoblastic T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011122 anti-angiogenic therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003474 anti-emetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000719 anti-leukaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002111 antiemetic agent Substances 0.000 description 1
- 229940125683 antiemetic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Chemical class 0.000 description 1
- 229940082988 antihypertensives serotonin antagonists Drugs 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 description 1
- 229940125687 antiparasitic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003904 antiprotozoal agent Substances 0.000 description 1
- 239000003420 antiserotonin agent Substances 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001483 arginine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 238000005844 autocatalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 description 1
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 description 1
- 229940054066 benzamide antipsychotics Drugs 0.000 description 1
- 150000003936 benzamides Chemical class 0.000 description 1
- LZCZIHQBSCVGRD-UHFFFAOYSA-N benzenecarboximidamide;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].NC(=[NH2+])C1=CC=CC=C1 LZCZIHQBSCVGRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229940049706 benzodiazepine Drugs 0.000 description 1
- 150000001557 benzodiazepines Chemical class 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960004365 benzoic acid Drugs 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 229960000997 bicalutamide Drugs 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 150000004663 bisphosphonates Chemical class 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N brefeldin A Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\[C@@H]2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N 0.000 description 1
- JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N brefeldin-A Natural products CC1CCCC=CC2(C)CC(O)CC2(C)C(O)C=CC(=O)O1 JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 229960003168 bronopol Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 1
- 229930003827 cannabinoid Natural products 0.000 description 1
- 239000003557 cannabinoid Substances 0.000 description 1
- 229940065144 cannabinoids Drugs 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000006652 catabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000005889 cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 1
- 229940081733 cetearyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229960004830 cetylpyridinium Drugs 0.000 description 1
- NEUSVAOJNUQRTM-UHFFFAOYSA-N cetylpyridinium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 NEUSVAOJNUQRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000012829 chemotherapy agent Substances 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 229960003993 chlorphenesin Drugs 0.000 description 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011281 clinical therapy Methods 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000005354 coacervation Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 238000002288 cocrystallisation Methods 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002447 crystallographic data Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000004807 desolvation Methods 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940099371 diacetylated monoglycerides Drugs 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- GXGAKHNRMVGRPK-UHFFFAOYSA-N dimagnesium;dioxido-bis[[oxido(oxo)silyl]oxy]silane Chemical compound [Mg+2].[Mg+2].[O-][Si](=O)O[Si]([O-])([O-])O[Si]([O-])=O GXGAKHNRMVGRPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- FRKBLBQTSTUKOV-UHFFFAOYSA-N diphosphatidyl glycerol Natural products OP(O)(=O)OCC(OP(O)(O)=O)COP(O)(O)=O FRKBLBQTSTUKOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940018614 docusate calcium Drugs 0.000 description 1
- 229940018600 docusate potassium Drugs 0.000 description 1
- 229960000878 docusate sodium Drugs 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- QBHFVMDLPTZDOI-UHFFFAOYSA-N dodecylphosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCOP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C QBHFVMDLPTZDOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940059082 douche Drugs 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 239000008387 emulsifying waxe Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940095399 enema Drugs 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 229940031098 ethanolamine Drugs 0.000 description 1
- 150000002169 ethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004403 ethyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043351 ethyl-p-hydroxybenzoate Drugs 0.000 description 1
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 239000003885 eye ointment Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000001752 female genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 229960004177 filgrastim Drugs 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N fusidic acid Chemical class O[C@@H]([C@@H]12)C[C@H]3\C(=C(/CCC=C(C)C)C(O)=O)[C@@H](OC(C)=O)C[C@]3(C)[C@@]2(C)CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H](O)[C@H]2C IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 1
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 1
- UBHWBODXJBSFLH-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol;octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO.CCCCCCCCCCCCCCCCCCO UBHWBODXJBSFLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006158 high molecular weight polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000005745 host immune response Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 description 1
- 150000002462 imidazolines Chemical class 0.000 description 1
- ZCTXEAQXZGPWFG-UHFFFAOYSA-N imidurea Chemical compound O=C1NC(=O)N(CO)C1NC(=O)NCNC(=O)NC1C(=O)NC(=O)N1CO ZCTXEAQXZGPWFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940113174 imidurea Drugs 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 108091008915 immune receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000027596 immune receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000028802 immunoglobulin-mediated neutralization Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000005414 inactive ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 229940102213 injectable suspension Drugs 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007919 intrasynovial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 229960002618 lenograstim Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000391 magnesium silicate Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099273 magnesium trisilicate Drugs 0.000 description 1
- 229910000386 magnesium trisilicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019793 magnesium trisilicate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000000260 male genitalia Anatomy 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000005497 microtitration Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 229940042472 mineral oil Drugs 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 230000020279 natural killer cell cytokine production Effects 0.000 description 1
- 238000002663 nebulization Methods 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 208000007538 neurilemmoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000344 non-irritating Toxicity 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 229960000470 omalizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000007500 overflow downdraw method Methods 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N pamidronate Chemical compound NCCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003978 pamidronic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N pentaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCO JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229940083254 peripheral vasodilators imidazoline derivative Drugs 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 229960005323 phenoxyethanol Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 229920001987 poloxamine Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Chemical class 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 238000012667 polymer degradation Methods 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 1
- 229920000166 polytrimethylene carbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 1
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 1
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000011809 primate model Methods 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000003439 radiotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 229940100618 rectal suppository Drugs 0.000 description 1
- 239000006215 rectal suppository Substances 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 231100000916 relative toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 201000002793 renal fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 201000006845 reticulosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029922 reticulum cell sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 150000003355 serines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004249 sodium acetate Drugs 0.000 description 1
- 229960005480 sodium caprylate Drugs 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940001593 sodium carbonate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960000999 sodium citrate dihydrate Drugs 0.000 description 1
- 235000019259 sodium dehydroacetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079839 sodium dehydroacetate Drugs 0.000 description 1
- OABYVIYXWMZFFJ-ZUHYDKSRSA-M sodium glycocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 OABYVIYXWMZFFJ-ZUHYDKSRSA-M 0.000 description 1
- BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M sodium octanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC([O-])=O BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M sodium taurocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M 0.000 description 1
- DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M sodium;(1e)-1-(6-methyl-2,4-dioxopyran-3-ylidene)ethanolate Chemical compound [Na+].C\C([O-])=C1/C(=O)OC(C)=CC1=O DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M 0.000 description 1
- IWQPOPSAISBUAH-VOVMJQHHSA-M sodium;2-[[(2z)-2-[(3r,4s,5s,8s,9s,10s,11r,13r,14s,16s)-16-acetyl-3,11-dihydroxy-4,8,10,14-tetramethyl-2,3,4,5,6,7,9,11,12,13,15,16-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-ylidene]-6-methylheptanoyl]amino]ethanesulfonate Chemical compound [Na+].C1C[C@@H](O)[C@@H](C)[C@@H]2CC[C@]3(C)[C@@]4(C)C[C@H](C(C)=O)/C(=C(C(=O)NCCS([O-])(=O)=O)/CCCC(C)C)[C@@H]4C[C@@H](O)[C@H]3[C@]21C IWQPOPSAISBUAH-VOVMJQHHSA-M 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000935 solvent evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001587 sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000011076 sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035048 sorbitan monostearate Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000006076 specific stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- XTQHKBHJIVJGKJ-UHFFFAOYSA-N sulfur monoxide Chemical compound S=O XTQHKBHJIVJGKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 230000000930 thermomechanical effect Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 150000003588 threonines Chemical class 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 238000005891 transamination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 108020005087 unfolded proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 description 1
- 229960001661 ursodiol Drugs 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000006213 vaginal ring Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 235000008979 vitamin B4 Nutrition 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000003871 white petrolatum Substances 0.000 description 1
- 229940099073 xolair Drugs 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
- XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N zoledronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CN1C=CN=C1 XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004276 zoledronic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
-
- E—FIXED CONSTRUCTIONS
- E06—DOORS, WINDOWS, SHUTTERS, OR ROLLER BLINDS IN GENERAL; LADDERS
- E06B—FIXED OR MOVABLE CLOSURES FOR OPENINGS IN BUILDINGS, VEHICLES, FENCES OR LIKE ENCLOSURES IN GENERAL, e.g. DOORS, WINDOWS, BLINDS, GATES
- E06B7/00—Special arrangements or measures in connection with doors or windows
- E06B7/02—Special arrangements or measures in connection with doors or windows for providing ventilation, e.g. through double windows; Arrangement of ventilation roses
- E06B7/08—Louvre doors, windows or grilles
- E06B7/084—Louvre doors, windows or grilles with rotatable lamellae
- E06B7/086—Louvre doors, windows or grilles with rotatable lamellae interconnected for concurrent movement
-
- E—FIXED CONSTRUCTIONS
- E06—DOORS, WINDOWS, SHUTTERS, OR ROLLER BLINDS IN GENERAL; LADDERS
- E06B—FIXED OR MOVABLE CLOSURES FOR OPENINGS IN BUILDINGS, VEHICLES, FENCES OR LIKE ENCLOSURES IN GENERAL, e.g. DOORS, WINDOWS, BLINDS, GATES
- E06B9/00—Screening or protective devices for wall or similar openings, with or without operating or securing mechanisms; Closures of similar construction
- E06B9/02—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary
- E06B9/06—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type
- E06B9/0607—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type comprising a plurality of similar rigid closing elements movable to a storage position
- E06B9/0615—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type comprising a plurality of similar rigid closing elements movable to a storage position characterised by the closing elements
- E06B9/0638—Slats or panels
-
- E—FIXED CONSTRUCTIONS
- E06—DOORS, WINDOWS, SHUTTERS, OR ROLLER BLINDS IN GENERAL; LADDERS
- E06B—FIXED OR MOVABLE CLOSURES FOR OPENINGS IN BUILDINGS, VEHICLES, FENCES OR LIKE ENCLOSURES IN GENERAL, e.g. DOORS, WINDOWS, BLINDS, GATES
- E06B9/00—Screening or protective devices for wall or similar openings, with or without operating or securing mechanisms; Closures of similar construction
- E06B9/02—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary
- E06B9/06—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type
- E06B9/0607—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type comprising a plurality of similar rigid closing elements movable to a storage position
- E06B9/0646—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type comprising a plurality of similar rigid closing elements movable to a storage position characterised by the relative arrangement of the closing elements in the stored position
- E06B9/0653—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type comprising a plurality of similar rigid closing elements movable to a storage position characterised by the relative arrangement of the closing elements in the stored position stored side by side in the closing plane
- E06B9/0661—Lazy tongue, pantograph or scissor-like systems in the plane of the opening
-
- E—FIXED CONSTRUCTIONS
- E06—DOORS, WINDOWS, SHUTTERS, OR ROLLER BLINDS IN GENERAL; LADDERS
- E06B—FIXED OR MOVABLE CLOSURES FOR OPENINGS IN BUILDINGS, VEHICLES, FENCES OR LIKE ENCLOSURES IN GENERAL, e.g. DOORS, WINDOWS, BLINDS, GATES
- E06B9/00—Screening or protective devices for wall or similar openings, with or without operating or securing mechanisms; Closures of similar construction
- E06B9/24—Screens or other constructions affording protection against light, especially against sunshine; Similar screens for privacy or appearance; Slat blinds
- E06B9/26—Lamellar or like blinds, e.g. venetian blinds
- E06B9/28—Lamellar or like blinds, e.g. venetian blinds with horizontal lamellae, e.g. non-liftable
- E06B9/30—Lamellar or like blinds, e.g. venetian blinds with horizontal lamellae, e.g. non-liftable liftable
- E06B9/302—Lamellar or like blinds, e.g. venetian blinds with horizontal lamellae, e.g. non-liftable liftable without ladder-tape, e.g. with lazy-tongs, with screw spindle
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2299/00—Coordinates from 3D structures of peptides, e.g. proteins or enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- E—FIXED CONSTRUCTIONS
- E06—DOORS, WINDOWS, SHUTTERS, OR ROLLER BLINDS IN GENERAL; LADDERS
- E06B—FIXED OR MOVABLE CLOSURES FOR OPENINGS IN BUILDINGS, VEHICLES, FENCES OR LIKE ENCLOSURES IN GENERAL, e.g. DOORS, WINDOWS, BLINDS, GATES
- E06B9/00—Screening or protective devices for wall or similar openings, with or without operating or securing mechanisms; Closures of similar construction
- E06B9/02—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary
- E06B9/06—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type
- E06B9/0607—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type comprising a plurality of similar rigid closing elements movable to a storage position
- E06B9/0646—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type comprising a plurality of similar rigid closing elements movable to a storage position characterised by the relative arrangement of the closing elements in the stored position
- E06B9/0653—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type comprising a plurality of similar rigid closing elements movable to a storage position characterised by the relative arrangement of the closing elements in the stored position stored side by side in the closing plane
-
- E—FIXED CONSTRUCTIONS
- E06—DOORS, WINDOWS, SHUTTERS, OR ROLLER BLINDS IN GENERAL; LADDERS
- E06B—FIXED OR MOVABLE CLOSURES FOR OPENINGS IN BUILDINGS, VEHICLES, FENCES OR LIKE ENCLOSURES IN GENERAL, e.g. DOORS, WINDOWS, BLINDS, GATES
- E06B9/00—Screening or protective devices for wall or similar openings, with or without operating or securing mechanisms; Closures of similar construction
- E06B9/02—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary
- E06B9/06—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type
- E06B9/0607—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type comprising a plurality of similar rigid closing elements movable to a storage position
- E06B9/0646—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type comprising a plurality of similar rigid closing elements movable to a storage position characterised by the relative arrangement of the closing elements in the stored position
- E06B9/0676—Shutters, movable grilles, or other safety closing devices, e.g. against burglary collapsible or foldable, e.g. of the bellows or lazy-tongs type comprising a plurality of similar rigid closing elements movable to a storage position characterised by the relative arrangement of the closing elements in the stored position stored in a stacked configuration
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Structural Engineering (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Civil Engineering (AREA)
- Architecture (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Blinds (AREA)
Description
OPPFINNELSENS OMRÅDE
Den foreliggende oppfinnelsen angår humane antistoffer så vel som fragmenter og derivater av disse som tverreagerer med og/eller blokkerer to eller flere hemmende KIR-reseptorer som er tilstede på overflaten av NK-celler og forsterker NK-cellecytotoksitet i pattedyrpasienter eller i en biologisk prøve. Oppfinnelsen angår også fremgangsmåter for fremstilling av slike antistoffer, fragmenter, varianter og derivater; farmasøytiske sammensetninger som omfatter det samme; og anvendelsen av slike molekyler og sammensetninger, da spesielt i terapi, for å øke NK-celleaktivitet eller cytotoksitet i pasienter.
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN
Naturlige dreper (NK) -celler er en underpopulasjon av lymfocytter som inngår i immunitet og i det vertsspesifikke immunovervåkingssystemet.
NK-celler er mononukleære celler som utvikler seg i benmargen fra lymfoide progenitorer og morfologiske og biologiske egenskaper inkluderer typisk ekspresjonen av klusterdeterminantene (CD'er) CD16, CD56 og/eller CD57; fraværet av alfa/beta eller gamma/delta TCR-komplekset på celleoverflaten; evnen til å binde og avlive målceller som ikke makter å uttrykke "selv" det store histokompatibilitetskomplekset (MHC)/humane leukocyttantigen (HLA) -proteiner; og evnen til å avlive tumorceller eller andre syke celler som uttrykker ligander for aktivering av NK-reseptorer. NK-celler erkarakterisert vedsin evne til å binde og avlive flere typer humane cellelinjer uten et foregående behov for immunisering eller aktivering. NK-celler kan også frigjøre løselige proteiner og cytokiner som utøver en regulerende effekt på immunsystemet; og de kan gå gjennom flere runder med celledeling og produsere datterceller med lignende biologiske egenskaper som foreldrecellen. Ved aktivering av interferoner og/eller cytokiner, vil NK-celler mediere eller styre oppløsningen av tumorceller og celler som er infisert med intracellulære patogener, noe som skjer ved mekanismer som krever en direkte fysisk kontakt mellom NK-cellen og målcellen. Oppløsning av målceller innbefatter frigjøringen av cytotoksiske granulater fra NK-cellen på overflaten av det bundne målet og effektorproteiner så som perforin og granzym B som trenger gjennom plasmamembranen i målcellen og induserer apoptose eller programmert celledød. Normale friske celler er beskyttet mot oppløsning av NK-celler.
Basert på deres biologiske egenskaper, er det blitt foreslått forskjellige terapeutiske og vaksinestrategier som bygger på en modulering av NK-celler. NK-celleaktivitet blir imidlertid regulert ved komplekse mekanismer som innbefatter både stimulerende og hemmende signaler.
Kort beskrevet så er den oppløsende aktiviteten til NK-celler regulert ved forskjellige celleoverflatereseptorer som overfører enten positive eller negative intracellulære signaler ved interaksjon med ligander på målcellen. Balansen mellom positive og negative signaler som overføres via disse reseptorene bestemmer om en målcelle blir eller ikke blir oppløst (avlivet) av en NK-celle. NK-cellestimulerende signaler kan være mediert av naturlige cytotoksitetsreseptorer (NCR) så som NKp30, NKp44 og NKp46; så vel som NKG2C-reseptorer, NKG2D-reseptorer, visse aktiverende avlivnings Ig-lignende reseptorer (KIRer) og andre aktiverende NK-reseptorer (Lanier, Annual Review of Immunology 2005; 23: 225-74). NK-cellehemmende signaler kan være mediert av reseptorer så som Ly49, CD94/NKG2A så vel som visse hemmende KIRer som gjenkjenner hovedhistokompabilitetskompleks (MHC) klasse I-molekyler (Karre et al., Nature 1986; 319: 675-8; Ohlén et al, Science 1989; 246: 666-8). Disse hemmende reseptorene binder seg til polymorfe determinanter på MHC klasse I-molekyler (inklusive HLA klasse I) som er tilstede på andre celler og hemmer den NK-cellemedierte oppløsningen.
KIRer, noen ganger betegnet som avlivningshemmende reseptorer, er blittkarakterisertbåde i mennesker og i ikke-humane primater og er polymorfe type 1 transmembranmolekyler som er tilstede på visse undersett av lymfocytter, inklusive NK-celler og noen T-celler. KIRer virker sammen med determinanter i alfa 1 - og 2-domenene i MHC klasse I-molekylene og som beskrevet ovenfor, så er distinkte KIRer enten stimulerende eller hemmende for NK-celler.
Nomenklaturen for KIRer er basert på antallet ekstracellulære domener (KIR2D og KIR3D har henholdsvis to eller tre ekstracellulære Ig-domener) og hvorvidt den cytoplasmiske halen er lang (KIR2DL eller KIR3DL) eller kort (KIR2DS eller KIR3DS). Nærværet eller fraværet av et gitt KIR er varierende fra én NK-celle til en annen innenfor den NK-populasjonen som er tilstede i et enkelt individ. Blant mennesker er det også et relativt høyt nivå med hensyn til polymorfisme av KIR-gener og hvorvidt KIR-gener er tilstede hos noen, men ikke hos alle individer. Ekspresjonen av KIR-alleler på NK-celler er stokastisk regulert, noe som betyr at i et gitt individ så vil en gitt lymfocytt kunne uttrykke en, to eller flere KIRer, avhengig av individets genotype. NK-cellene i et enkeltindivid vil typisk uttrykke forskjellige kombinasjoner av KIRer, noe som tilveiebringer et repertoar av NK-celler med forskjellige spesifiteter for MHC klasse I-molekyler.
Visse KIR-genprodukter frembringer en stimulering av lymfocyttaktivitet når de er bundet til en passende ligand. De aktiverende KIRer har alle en kort cytoplasmisk hale med en ladd transmembranrest som er assosiert med et adaptermolekyl med immunreseptortyrosinbaserte aktiveringsmotiver (ITAM'er) som overfører stimulerende signaler til NK-cellen. I motsetning til dette har hemmende KIRer en lang cytoplasmisk hale som inneholder et immunreseptortyrosinbasert hemmende motiv (ITIM) som overfører hemmende signaler til NK-cellen ved aktivering av deres MHC klasse I-ligander. De kjente hemmende KIRene inkluderer reseptorer fra KIR2DL- og KIR3DL-underfamiliene. Hemmende KIR'er har to Ig-domener (KIR2DL) som gjenkjenner HLA-C-allotyper: KIR2DL2 (tidligere betegnet p58.2) og det meget nært beslektede alleliske genproduktet KIR2DL3 gjenkjenner begge "gruppe 1" HLA-C-allotyper (inklusive HLA-Cwl, -3, -7 og -8), mens KIR2DL1 (p58.1) gjenkjenner "gruppe 2" HLA-C-allotyper (så som HLA-Cw2, -4, -5 og -6). Gjenkjennelsen av KTR2DL1 er diktert ved nærværet av en Lys-rest i posisjon 80 i HLA-C-alleler. KTR2DL2- og KTR2DL3-gjenkjenning er diktert ved nærværet av en Asn-rest i posisjon 80 i HLA-C. Det er viktig å understreke at de fleste HLA-C-alleler har enten en Asn- eller en Lys-rest i posisjon 80. Derfor vil KTR2DL1, -2 og -3 kollektivt gjenkjenne i alt vesentlig alle HLA-C-allotyper som finnes hos mennesker. Et KTR med tre Ig-domener, KTR3DL1 (p70), gjenkjenner en epitop som er felles for HLA-Bw4-alleler. Endelig vil KTR3DL2 (pl40), som er en homodimer av molekyler med tre Ig-domener, gjenkjenne HLA-A3 og -Al 1.
Skjønt multiple hemmende KTR'er og/eller andre MHC klasse I-spesifikke hemmende reseptorer (Moretta et al, Eur J Immunogenet. 1997; 24(6): 455-68; Valiante et al, Immunol Rev 1997; 155: 155-64; Lanier, Annu Rev Immunol 1998; 16: 359-93) kan uttrykkes sammen med NK-celler, så vil det i ethvert gitt individs NK-repertoar være celler som bare uttrykker en enkelt KIR og således bare er hemmet av spesifikke MHC klasse I-alleler (eller alleler som hører til den samme gruppen av MHC klasse I-allotyper). Humane MHC klasse I-molekyler blir ofte betegnet som humant histokompabilitetsantigen (HLA) klasse I.
NK-cellepopulasjoner eller kloner som er KIR-ligandmistilpasset med hensyn til sine mål, det vil si uttrykker KIRer som ikke gjenkjenner noe HLA-molekyl i en vert, har vist seg å mediere eller aktivere sterke livreddende antitumorresponser etter allogenisk benmargstransplantering i leukemipasienter (Ruggeri et al., Science 2002, 295: 2097-2100). Det er antatt at den underliggende mekanismen er at HLA-mistilpasset hematopoietisk transplantering fører til ekspansjonen av donoravledede NK-celler som uttrykker KIR som ikke gjenkjennes av noen HLA-ligander i mottakeren og således ikke blir hemmet via KIR. Disse allogene NK-klonene utøver sterk antitumoraktivitet. Denne responsen er svært sterk i pasienter som er diagnostisert med akutt myeloid leukemi (AML) og som blir behandlet med KIR-MHC-mistilpassede haploidentiske transplanter. En måte for å reprodusere denne effekten ved farmakologisk behandling av en pasient vil være å administrere reagenser som blokkerer KIR/HLA-interaksjonen for å aktivere pasientens endogene NK-celler.
Visse monoklonale antistoffer som er spesifikke for KIR2DL1 har vist seg å blokkere interaksjonen mellom KIR2DL1 og "gruppe 2" HLA-C-allotyper så som HLA-Cw4 (Moretta et al., J Exp Med 1993; 178: 597-604) og å fremme NK-mediert oppløsning av målceller som uttrykker disse HLA-C-allotypene. Monoklonale antistoffer mot KIR2DL2/3 som blokkerer interaksjonen mellom KIR2DL2/3 og HLA-Cw3 og lignende allotyper, er også blitt beskrevet (Moretta et al., J Exp Med 1993; 178: 597-604). Slike antistoffer er ikke ideelle for bruk i kliniske situasjoner ettersom utviklingen av to terapeutiske monoklonale antistoffer (mAb'er) og administrering av begge slike antistoffer eller en seleksjon av ett av slike antistoffer (etter passende diagnose) vil nødvendiggjøre en behandling av alle mulige pasienter, avhengig av hvorvidt en gitt pasient uttrykker gruppe 1 - eller gruppe 2 HLA-C-allotyper.
Watzl et al. (Tissue Antigens 2000; 56: 240-247) fremstilte tverreagerende murine antistoffer som gjenkjenner multiple isotyper av KIR, men disse antistoffene forsterker ikke den lytiske aktiviteten til NK-celler. Videre utførte Spaggiari et al.
(Blood 2002; 99: 1706-1714 og Blood 2002; 100: 4098-4107) eksperimenter hvor det ble anvendt tallrike murine monoklonale antistoffer mot forskjellige KIR. Ett av disse antistoffene, NKVSF1 (også kjent som Pan2D), ble angitt å gjenkjenne en felles epitop av KIR2DL1 (CD158a), KIR2DL2 (CD158b) og KIR2DS4 (p50.3). Shin et al. (Hybridoma 1999; 18: 521-7) rapporterte også produksjonen av to monoklonale antistoffer som ble betegnet A210 og A803g som var i stand til å binde seg til alle KIR2DL1, KIR2DL3 og KIR2DS4. For terapeutisk anvendelse av et antistoff som blokkerer de hemmende KIRer i en pasients NK-celler, vil imidlertid ha den ulempen at jo færre aktiverende KIR-molekyler et antistoff tverreagerer med, jo bedre etter som blokaden av aktiverende reseptorer også vil kunne svekke stimuleringen av NK-celler. Et antistoff med antigenbindende egenskaper som NKVSFl, A210 eller A803g vil således ikke være optimale i en klinisk sammenheng. Bruken av murine monoklonale antistoffer ved behandlingen av en human pasient vil dessuten kunne resultere i en vertsimmunrespons mot antistoffene og således ødelegge effekten av behandlingen.
WARREN et al., Tissue Antigens, 2000, vol 55, suppl. 1, s 80-81 beskriver monoklonal antistoff som er spesifikk for et epitop av KIR2DL1, KIR2DL2/3 og KIR2DL4.
WARRES et al., Int Immunology, 2001, vol 13, no 8, s 1043-1052 beskriver tverreagerende antistoffer som binder KIR2DS2, KIR2DL2 og KIR2DL3, og som påvirker aktiviteten til NK-celler.
MORETTA et al., Annu Rev Immunol, 2001, vol 19, s 197-223; NATARAJAN K et al., Annu Rev Immunol, 2002, vol 20, s 853-885 og FAN et al., Nat Immunol, 2001, vol 2, no 5, s 452-60 beskriver KIR reseptorer.Praktiske og effektive fremgangsmåter for terapeutisk modulering av hemmende KIRer har således hittil ikke vært tilgjengelige innenfor den medisinske vitenskapen.
SAMMENDRAG AV OPPFINNELSEN
Den foreliggende beskrivelse tilveiebringer nye og brukbare humane antistoffer som spesifikt binder seg til KTR2DL1 og minst én av KTR2DL2 og KTR2DL3 eller til alle disse tre KTR'ene og/eller antistoffer som forsterker en NK-cellelytisk aktivitet ved å blokkere interaksjonene mellom en eller flere slike KIR'er og HLA-C. Det er også tilveiebrakt fragmenter og derivater av slike antistoffer. Det beskrives også nye og brukbare antistoffer, antistoffragmenter og derivater av antistoffer som omfatter VH- og VL-sekvenser som i alt vesentlig er identiske til de i de humane antistoffene 1-7F9 og 1-4F1 som er beskrevet her. Beskrivelsen tilveiebringer også nukleinsyrer som omfatter nukleotidsekvenser som koder slike antistoffer; vektorer som omfatter slike nukleinsyrer; vertsceller og organismer som omfatter slike nukleinsyrer og/eller vektorer; og sammensetninger så som farmasøytisk akseptable sammensetninger og sett som omfatter slike proteiner, nukleinsyrer, vektorer og/eller celler og typisk en eller flere ytterligere bestanddeler som kan være aktive bestanddeler eller inaktive bestanddeler som fremmer formulering, levering, stabilitet eller andre egenskaper til sammensetningen (for eksempel forskjellige bærere). Beskrivelsen tilveiebringer videre forskjellige nye og brukbare fremgangsmåter for fremstilling av slike antistoffer, nukleinsyrer, vektorer, celler, organismer og/eller sammensetninger så som ved moduleringen av KIR-medierte biologiske aktiviteter, for eksempel ved behandlingen av sykdommer som er beslektet med disse.
I ett aspekt tilveiebringer oppfinnelsen et humant eller humanisert antistoff ifølge krav 1 som binder seg til hver enkelt av KIR2DL1, KIR2DL2 og KIR2DL3, men som ikke binder seg til KIR2DS4.1 en annen utførelse så blokkerer det humane eller humaniserte antistoffet bindingen av minst en av KIR2DL1, KIR2DL2 og KIR2DL3 til et HLA-C klasse I-molekyl. I en ytterligere utførelse kan antistoffet blokkere bindingen av et HLA-Cw4-molekyl til KIR2DL1, og bindingen av et HLA-Cw3-molekyl til minst en av KIR2DL2 eller KIR2DL3. For eksempel kan antistoffet blokkere bindingen av et HLA-Cw4-molekyl til restene M44, F45 og D72 i den ekstracellulære delen av KIR2DL1 (SEKV.ID. NR. 23). I enda en ytterligere utførelse forsterker antistoffet den oppløsende aktiviteten til en NK-celle i forhold til en human målcelle som uttrykker et HLA-C klasse I-molekyl.
I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen et humant eller humanisert antistoff ifølge krav 1 som konkurrerer med et antistoff som omfatter et lettkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen i SEKV.ID. NR. 15 og et tungkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen som angitt i SEKV.ID. NR. 17 i bindingen til minst ett av KIR2DL1, KIR2DL2 og KIR2DL3.1 en annen utførelse konkurrerer antistoffet med et antistoff som omfatter et lettkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen fra SEKV.ID. NR. 15 og et tungkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen fra SEKV.ID. NR. 17 ved bindingen til hver av KXR2DL1, KXR2DL2 og KIR2DL3. I en annen utførelse omfatter antistoffet et lettkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen som angitt i SEKV.ID. NR. 15. I en ytterligere utførelse som omfatter antistoffene (a) en tungkjede CDRl-aminosyresekvens som tilsvarer restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 17; (b) en tungkjede CDR2-aminosyresekvens som tilsvarer restene 50-65 i SEKV.ID. NR. 17; og (c) en tungkjede CDR3-aminosyresekvens som omfatter restene 99-112 i SEKV.ID. NR. 17. For eksempel antistoffet omfatter et tungkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen som angitt i SEKV.ID. NR. 17.
I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen et isolert humant eller humanisert antistoff som binder seg til en KIR2DL1 -epitop som i alt vesentlig omfatter aminosyrerestene L38, R41, M44, F45, N46, D47, T48, L49, R50,152, F64, D72, Y80, P87 og Y88.
I et ytterligere aspekt tilveiebringer oppfinnelsen et isolert humant eller humanisert antistoff ifølge krav 1 som har en dissosiasjonskonstant (Kd) for KIR2DL1 på ikke mer enn omtrent 0,45 nM og/eller en Kdfor KIR2DL3 på ikke mer enn omtrent 0,025 nM.
Oppfinnelsen tilveiebringer også et humant eller humanisert antistoff eller antistoffragment eller et derivat av ifølge krav 1, slike som har enhver av de foran nevnte egenskaper, enten alene eller i enhver egnet kombinasjon. I en utførelse er antistoffet et monoklonalt antistoff. I en annen utførelse er antistoffet et IgGl -, IgG2-, IgG3- eller IgG4-antistoff. For eksempel kan antistoffet være et IgG4-anti stoff.
Oppfinnelsen tilveiebringer også en nukleinsyre som koder det humane eller humaniserte antistoffet eller antistoffragmentet ifølge krav 1 med enhver av de foran nevnte egenskaper, en vektor som omfatter en slik nukleinsyre, en celle som omfatter en slik vektor, foruten en fremgangsmåte for å fremstille et humant anti-KIR-antistoff som omfatter at en slik celle dyrkes under betingelser som er egnet for ekspresjon av anti-KIR-antistoffet.
Oppfinnelsen tilveiebringer også en farmasøytisk sammensetning som omfatter et
humant eller humanisert antistoff eller antistoffragment som har en eller flere av de foran nevnte egenskaper eller fremstilt ved enhver fremgangsmåte, i enhver mengde som effektivt og påvisbart forsterker NK-cellecytotoksitet i en pasient sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer eller eksipient. Sammensetningen kan for
eksempel omfatte polysorbat 80, sukrose eller både polysorbat 80 og sukrose.
Oppfinnelsen tilveiebringer også en anvendelse av det humane antistoffet ifølge kravene 1-18, eller det humane antistoffet fremstilt ved fremgangsmåten ifølge krav22, til fremstilling av et medikament for å forsterke NK-celleaktivitet hos en pasient som har behov for dette, hvor fremgangsmåten omfatter å administrere pasienten en effektiv mengde av enhver av de foran nevnte sammensetninger. I en utførelse lider pasienten av kreft. Pasienten kan for eksempel lide av en kreftform valgt fra akutt myeloid leukemi, kronisk myeloid leukemi, multippelt myelom og ikke-Hodgkins lymfom. Alternativt kan pasienten lide av en kreftform valgt fra kolorektal kreft, nyrekreft, eggstokkreft, lungekreft, brystkreft og ondartet melanom. I en annen utførelse lider pasienten av en infeksjonssykdom. I enda en ytterligere utførelse omfatter fremgangsmåten ytterligere å administrere et terapeutisk middel valgt fra et immunmodulerende middel, et hormonelt middel, et kjemoterapeutisk middel, et antiangiogent middel, et apoptotisk middel og et andre antistoff som binder seg til en hemmende KIR, et antiinfiserende middel, et målsøkende middel og en tilhørende forbindelse.
Disse og andre aspekter og egenskaper ved oppfinnelsen er ytterligere detaljert beskrevet i det etterfølgende.
KORT BESKRIVELSE AV TEGNINGENE
Figur 1 viser den murine monoklonale antistoff DF200-bindingen til en vanlig determinant for forskjellige humane KIR2DL-reseptorer. (A) Klon CPU, KIR2DL1+, DF200, (B) klon CP502, KIR2DL3+, (c) Klon CPU, KIR2DL1+, anti-KIR2DL1, (D) klon CP502, KIR2DL3+, anti-KIR2DL2/3. Figur 2 viser det murine monoklonale antistoffet DF200 som nøytraliserer den KIR2DL1-medierte hemmingen av NK-cellecytotoksitet mot Cw4-uttrykkende målceller og viser rekonstitueringen av oppløsning med anti-KIR mAb på C1R-Cw4-mål ved et effektor/mål (E/T) -forhold på 4/1. Figur 3 viser hvorledes det murine monoklonale antistoffet DF200, et F ab -fragment av DF200 og vanlige murine antistoffer som er spesifikke enten for KIR2DL1 (mAb EB6 og XA-141) eller KIR2DL2/3 (mAb GLI83 og Y249) på nøytralisering av KIR2DL1-mediert hemming av cytotoksitet mot Cw4-positive målceller og den KIR2DL2/3-medierte hemmingen av NK-cellecytotoksitet mot Cw3 -positive målceller. (A) og (C) KIR2DL1+, målceller 721.221-Cw4+. (B) KIR2DL2+, målceller 721.221-Cw3+. (D) KIR2DL3+, målceller 721.221-Cw3+. Figur 4 viser rekonstituering av celleoppløsning ved NK-celler som uttrykker KIR2DL1 mot HLA-Cw4-positive målceller i nærvær av F (ab')2-fragmenter av DF200- og EB6-antistoffene. (A) Målceller 721.221-Cw4; E/T-forhold = 1. (B) Målceller B-EBV-celler som uttrykker Cw4, E/T-forhold = 2. Figur 5 viser induksjon av NK-mediert avlivning ved tverreaktivt murint (DF200 og NKVSF1 (Pan2D)) og humane (1-7F9, 1-4F1, 1-6F5 og 1-6F1) mAb'er, og et murint vanlig KIR2DL1 -spesifikt mAb (EB6). Nevnte mAb'er induserer (rekonstituerer) avlivning ved KXR2DL1 -uttrykkende NK-celler (YTS-KIR2DL1) av 721.221-målceller som er transfektert med HLA-Cw4. E/T-forhold = 1. (A) 30Hg/ml mAb. (B) 10 ug/ml mAb. Figur 6 viser induksjon av NK-mediert avlivning ved de samme antistoffene som vist på figur 5. Nevnte mAb'er induserer (rekonstituerer) avlivning ved KIR2DL1-uttrykkende NK-celler (YTS-KIR2DL1) av B-EBV-celler som uttrykker endogent HLA-Cw4. E/T-forhold = 2. (A) 30 ug/ml mAb. (B) 10 ug/ml mAb. Figur 7 er et epitopkart som viser resultatene av konkurrerende bindingseksperimenter oppnådd ved overflateplasmonresonans (Biacore®) -analyser med anti-KIR-antistoffer til KIR2DL1 hvor overlappende sirkler betegner overlapping mellom de nevnte mAb med hensyn til binding til KIR2DL1. Resultatene viser at 1-7F9 konkurrerer med EB6 og 1-4F1, men ikke med NKVSFl (Pan2D) og DF200 på KIR2DL1. Antistoff 1-4F1 er på sin side konkurransedyktig med EB6, DF200, NKVSFl (Pan2D) og 1-7F9. Antistoff NKVSFl (Pan2D) konkurrerer med DF200, 1-4F1 og EB6, men ikke med 1-7F9 på KIR2DL1. DF200 konkurrerer med NKVSFl (Pan2D), 1-4F1 og EB6, men ikke med 1-7F9 på KIR2DL1. Figur 8 er et epitopkart som viser resultatene fra konkurrerende bindingseksperimenter oppnådd ved Biacore®-analyser med anti-KIR-anti stoffer til KIR2DL3 hvor overlappende sirkler betegner overlapping med hensyn til binding til KIR2DL3. Resultatene viser at 1-4F1 er konkurransedyktig med NKVSFl (Pan2D), DF200, gl 183 og 1-7F9 på KIR2DL3. 1-7F9 er konkurransedyktig med DF200, gl 183 og 1-4F1, men ikke med NKVSFl (Pan2D) på KIR2DL3. NKVSFl (Pan2D) konkurrerer med DF200, 1-4F1 og GLI 83, men ikke med 1-7F9 på KIR2DL3. DF200 konkurrerer med NKVSFl (Pan2D), 1-4F1 og 1-7F9, men ikke med GL183 på KIR2DL3. Figur 9 er et epitopkart som viser resultatene av konkurrerende bindingseksperimenter oppnådd ved Biacore®-analyser med anti-KIR-anti stoffer til KIR2DS1 hvor overlappende sirkler betegner overlapping med hensyn til binding til KIR2DS1. Resultatene viser at antistoffet 1-4F1 konkurrerer med NKVSFl (Pan2D), DF200 og 1-7F9 påKIR2DSl. Antistoff 1-7F9 konkurrerer med 1-4F1, men ikke med DF200 og NKVSFl (Pan2D) på KIR2DS1. NKVSFl konkurrerer med DF200 og 1-4F1, men ikke med 1-7F9 på KIR2DS1. DF200 konkurrerer med NKVSFl og 1-4F1, men ikke med 1-7F9 på KIR2DS1. Figur 10 viser Pan2D (NKVSFl) mAb-titrering som demonstrerer binding av nevnte mAb til cynomolgus NK-celler. Cynomolgus NK-celler (NK bulkdag 16) ble innkubert med forskjellige mengder av NKVSFl (Pan2D) mAb fulgt av PE-konjugerte geit F(ab')2-fragmenter av anti-mus IgG (H+L) -antistoffer. Prosentandelen av positive celler ble bestemt med en isotypisk kontroll (renset mus IgGl). Prøvene ble utført i duplikat og midlere fluorescensintensitet = MFL Figur 11 viser bindingen av løselig KXR2DL1- og KIR2DLl(R131W)-mutant til celler. (A) Binding ved økende konsentrasjoner av løselig KIR2DL1 -Fc og en KIR2DLl(R131W)-hFc-mutant til celler som uttrykker HLA-Cw3 eller -Cw4. De bundne KTR-Fc-proteinene ble påvist ved å bruke et sekundært fluorokromkonjugert antistoff og påvist ved flowcytometri. Midlere fluorescens er vist på y-aksen. (B) Binding av de angitte anti-KXR mAb (GLI83, EB6, DF200 og Pan2D (NKVSFl)) til KIR2DL1-Fc og det 2DL1(R13 lW)-mutante proteinet ved å bruke humant lg som kontroll. Figuren viser at DF200 og Pan2D (NKVSFl) binder seg mindre godt til mutanten enn villtype KIR2DL1-Fc, noe som indikerer at begge de nevnte mAb er påvirket av R131W-mutasjonen. R131 er derfor en av de restene som utgjør epitopen for DF200 og Pan2D på KIR2DL1. Figur 12 viser en sammenlignende sammenstilling av aminosyresekvensene i lettkjedevariable områder og lettkjede CDRer for antistoffene DF200 og Pan2D (NKVSFl). (A) Sammenstilling av anti-KIR-variable lette (VL) -områder fra DF200 (SEKV.ID. NR. 1) og Pan-2D (SEKV.ID. NR. 2). Tallene over aminosyresekvensene indikerer posisjon med hensyn til start av translatering Met (+1) i det umodne (ikke-utskilte) immunglobulinet. (B) Sammenstilling av CDR-L1-sekvenser. Rest før: Normalt Cys. Rester etter: Trp. Typisk Trp-Tyr-Leu. Lengde: 10-17 aa. (C) Sammenstilling av CDR-L2-sekvenser. Rester før: Generelt Ile-Tyr. Lengde: 7 aa. Start: Tilnærmet 16 aa etter slutten på CDR-L1. Start: Tilnærmet 24 aa fra begynnelsen av det utskilte proteinet. (D) Sammenstilling av CDR-L3-sekvenser. Rester før: Cys. Rester etter: Phe-Gly-XXX-Gly. Lengde: 7-11 aa. Start: Tilnærmet 33 aa etter slutten på CDR-L2. Figur 13 viser det tungkjedevariable området og de tungkjede CDRene for antistoff DF200. (A) DF-200 VH-områder, umodent protein. Det utskilte modne VH starter ved posisjon 20: Rest Q. VH-området slutter med rest S, hvoretter det konstante området (ikke vist) fortsetter. (B) CDR-H1. Rester før: Cys-XXX-XXX-XXX. Rester etter: Trp. Generelt Trp-Val eller Trp-Ile. Lengde: 10-14 aa. Start: Tilnærmet 22-26 aa fra begynnelsen av det utskilte proteinet. (C) CDR-H2. Rester før: Leu-Glu-Trp-Ile-Gly, men også andre varianter er mulige. Rester etter: Lys eller Arg/Leu eller Ile eller Val eller Phe eller Thr eller Ala/Thr eller Ser eller Ile eller Ala. Lengde: 16-20 aa. Start: Tilnærmet 15 aa etter slutten på CDR-H1. (D) CDR-H3. Rester før: Cys-XXX-XXX (typisk Cys-Ala-Arg). Rester etter: Trp-Gly-XXX-Gly. Lengde: 3-25 aa. Start: Tilnærmet 33 etter slutten av CDR-H2. Figur 14 viser nukleotid- og aminosyresekvensene for VH- og VL-sekvensene i det humane antistoffet 1-7F9. (A) Translatering av HuKIR 1-7F9 moden variabel lettkjede. (B) Nukleotidsekvens som koder HuKIR 1-7F9 moden variabel lettkjede. (C) Translatering av HuKIR 1-7F9 moden variabel tungkjede. (D) Nukleotidsekvens som koder den HuKIR 1-7F9 modne tungkjeden. Figur 15 viser aminosyresekvensene for VH- og VL-sekvensene i de monoklonale antistoffene 1-7F9, DF200 (VH-sekvens: SEKV.ID. NR. 19; VL-sekvens: SEKV.ID. NR. 21) og Pan2D (NKVSFl; VH-sekvens: SEKV.ID. NR. 20; VL-sekvens: SEKV.ID. NR. 22). De angitte CDR er innrammet. Figur 16 viser flowcytometridata som igjen viser bindingen av det murine antistoffet Pan2D (NKVSFl) og de humane mAb 1-7F9 og 1-4F1 til celler transfektert med KIR2DL1, KIR2DL3, KIR2DS1, KIR2DS2, KIR2DS3 eller KIR2DS4, som angitt (renset antistoff: 1 ug/ml). (A) - (R) NKVSFl (pan2D), 1-7F9 og 1-4F1 binder seg alle til KIR2DL1, KIR2DL3, KIR2DS1 og KIR2DS2. Ingen av antistoffene binder seg til KIR2DS3. NKVSFl, men ikke 1-7F9 eller 1-4F1, binder seg til KIR2DS4. Figur 17 viser resultatene av FACS-analyser. (A) Antistoffmediert nøytralisering av binding av løselig KIR-Fc til HLA-Cw4 på celler, påvist ved flowcytometri (FACS). FACS-måling av KIR2DLl-mFc-binding til LCL721.221-Cw4-celler etter preinnkubering med forskjellige konsentrasjoner av det tverreaktive mAb DF200 eller det KIR2DL2/3-spesifikke mAb GL183. DF200, men ikke GL183, reduserer bindingen av KIR2DL1 til HLA-Cw4. Målingene er avsatt som prosent av KIR2DLl-hFc-binding i fravær av hemmende antistoffer. (B) FACS-måling av KIR2DLl-mFc-binding til LCL721.221-Cw4-celler etter preinnkubering med forskjellige konsentrasjoner av 1-1F4 og 1-7F9. Målingene er avsatt som prosent av KIR2DLl-mFc-binding i fravær av hemmende antistoffer. Figur 18 viser resultatene av<51>Cr-frigjøringscytotoksitetsprøver. (A) LCL 721.221-Cw3-celler blir effektivt avlivet av både YTS-celler (romber) og YTS-2DL1 -celler (trekanter) ved forskjellige E:T-forhold. I motsetning til dette blir LCL 721.221-Cw4-celler effektivt avlivet av YTS-celler (kvadrater), men kan ikke avlives av YTS-2DL1 -celler (kryss) på grunn av KIR-restriksjoner. (B) I fravær av antistoff kan YTS-2DL1 -celler ikke avlive LCL-721.221-Cw4 (E:T-forhold 12:1). 1-7F9 induserer avlivning av LCL 721.221-Cw4-celler av YTS-2DL1 -celler på en doseavhengig måte. Figur 19 viser en overlagring av to krystallkomplekse strukturer; KIR2DL1/1-7F9 Fab' og KIR2DL1/MHC klasse I, PDB-kode 1IM9 (Fan et al., Nat. Immunol. 2001; 2: 452-460) ved å bruke Ca-atomene i det vanlige KIR-molekylet (merket "KIR") som templat. KIR2DL1/1-7F9 Fab' er angitt som et grått stripete bånd mens KIR2DL1/MHC klasse I er vist som et svart bånd. 1-7F9 Fab' er angitt som "1-7F9", mens MHC klasse I er merket som "MHC". En overlapping mellom MHC og Fab' kan ses i overlagringen, noe som viser at 1-7F9 Fab' har evne til å hindre MHC klasse I-binding til KIR2DL1-reseptoren. Se eksempel 11. Figur 20 viser den bindende epitopen til 1-7F9 på KTR2DL1, slik dette er angitt i KXR2DL1 -sekvensen. Aminosyrer med en avstand på 4.0 Å fra 1-7F9 er angitt med henholdsvis grå og svart bakgrunn. Aminosyrene med svart bakgrunn inngår i hydrogenbinding til 1-7F9.
DEFINISJONER
Av hensiktsmessighetsgrunner er flere begreper definert i det etterfølgende. Listen av de definerte begrepene er imidlertid ikke uttømmende. Andre begreper vil kunne være definert i beskrivelsen av oppfinnelsen.
I den foreliggende beskrivelse betegner "aktive" NK-celler biologisk aktive NK-celler inklusive NK-celler som har evnen til å oppløse målceller eller forsterke immunfunksjonen til andre celler. For eksempel kan en "aktiv" NK-celle være i stand til å avlive celler som uttrykker en ligand for en aktiverende NK-reseptor og/eller som ikke utrykker MHC/HLA-antigener som gjenkjennes av et KIR på NK-cellen. NK-cellene kan fremstilles eller oppnås ved hjelp av forskjellige teknikker som i seg selv er kjente innenfor molekylærbiologien så som isolering fra blodprøver, cytaferese, vevs- eller cellesamlinger, osv. Brukbare protokoller for prøver som innbefatter NK-celler kan finnes i Natural Killer Cells Protocols (utgitt av Campbell KS og Colonna M). Human Press, sidene 219-238 (2000).
Slik det brukes her, refererer begrepene "avlivende Ig-lignende reseptor", "avlivende hemmende reseptor" eller "KIR" til et protein eller polypeptid som er kodet av et gen som hører til KIR-genfamilien eller av et cDNA fremstilt fra et slikt gen. En detaljert oversikt over KIR-genfamilien inklusive nomenklaturen med hensyn til KIR-gener og KIR-genprodukter og Genbanktilvekstnumre for eksempler på KIR, kan finnes i "The KIR Gene Guster" av M. Carrington og P. Norman, tilgjengelige fra NCBI-hjemmesiden som kalles "Bookshelf (tilgjengelig via World-Wide Web (WWW) adresse ncbi.nlm.nih.gov/books). Sekvensene for humane KIR-gener og cDNA-molekyler så vel som deres proteinproprodukter er tilgjengelige i offentlige databaser inklusive GenBank. Ikke-begrensende eksempler på GenBank-innføringer av humane KIR har de følgende innleveringsnumrene: KIR2DL1: Genbank innleveringsnummer U24076, NM 014218, AAR16197 eller L41267; KIR2DL2: Genbank innleveringsnummer U24075 eller L76669; KIR2DL3: Genbank innleveringsnummer U24074 eller L41268; KIR2DL4: Genbank innleveringsnummer X97229; KIR2DS1: Genbank innleveringsnummer X89892; KIR2DS2: Genbank innleveringsnummer L76667; KIR2DS3: Genbank innleveringsnummer NM O12312 eller L76670 (spleisevariant); KIR3DL1: Genbank innleveringsnummer L41269; og KIR2DS4: Genbank innleveringsnummer AAR26325. Et KIR kan omfatte fra 1 til 3 ekstracellulære domener og kan ha en lang (det vil si mer enn 40 aminosyrer) eller kort (det vil si mindre enn 40 aminosyrer) cytoplasmisk hale. Som beskrevet tidligere, så er det disse egenskapene som bestemmer nomenklaturen for et KIR. Eksempler på KIR2DL1 -, KIR2DL2-, KIR2DL3- og KIR2DS4-molekylene omfatter de følgende respektive aminosyresekvensene: KIR2DL1 ekstracellulært domene: HEGVHRKPSLLAHPGXLVKSEETVILQCWSDVMFEHFLLHREGMFNDTLRLI GEHHDGVSKANFSISRMTQDLAGTYRCYGSVTHSPYQVSAPSDPLDIVIIGLY EKPSLSAQXGPTVLAGENVTLSCSSRSSYDMYHLSREGEAHERRLPAGPKVN GTFQADFPLGPATHGGTYRCFGSFHDSPYEWSKSSDPLLVSVTGNPSNSWPSP TEPSSKTGNPRHLH (SEKV.ID. NR. 23), hvor "X" i posisjon 16 er P eller R og hvor "X" i posisjon 114 er P eller L og representerer alleliske varianter.
KIR2DL2 ekstracellulært domene:
KIR2DL3 ekstracellulært domene:
KIR2DS4 ekstracellulært domene:
Begrepet "KIR2DL2/3" refererer seg til en til en eller til begge KIR2DL2- og KIR2DL3-reseptorene. Disse to reseptorene har svært høy homologi og de er alleliske former av det samme genet og anses å ha lik funksjon.
Hvis intet annet er angitt, så omfatter begrepet "MHC" MHC-molekyler i alle pattedyr, mens et "HLA"-molekyler refererer seg til et humant MHC-molekyl.
Hvis det i den foreliggende beskrivelse er angitt at et antistoff "binder seg" til en determinant (det vil si ordene "binder seg" i sammenheng med en antistoff:determinantinteraksjon), så betegner det at antistoffet binder determinanten med en spesifitet og/eller affinitet. For eksempel er GLI83 et vanlig kjent monoklonalt antistoff som binder seg til KXR2DL2/3. EB6 er et vanlig kjent monoklonalt antistoff som binder seg til KIR2DL1. EB6 og GLI 83 er begge kommersielt tilgjengelige (Beckman Coulter Inc., Fullerton, CA).
Et "tverreaktivt" anti-KIR-anti stoff er et antistoff som binder seg til mer enn ett KIR-molekyl med spesifitet og/eller affinitet. For eksempel er DF200 og 1-7F9 monoklonale antistoffer som er tverreaktive med KIR2DL1, -2 og -3. Det hybridomproduserende antistoffet DF200 er blitt innlevert til CNCM-kultursamlingen under identifikasjonsnummeret "DF200" og registreringsnummer CNCM 1-3224, registrert 10. juni 2004, Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, Institut Pasteur, 25, Rue du Docteur Roux, F-75724 Paris Cedex 15, Frankrike. NKVSFl, også betegnet "Pan2D", er tverreaktivt med KIR2DL1, -2 og -3 og KIR2DS4. Dette antistoffet er kommersielt tilgjengelig fra Serotec (Cergy Sainte-Christophe, Frankrike), katalogreferansenummer MCA2243.
"Spesifikk binding" eller "spesifitet" refererer seg til et antistoffs eller et annet middels evne til påvisbart å binde en epitop som er tilstede på et antigen, så som et KIR, med en relativt liten påvisbar reaktivitet med andre proteiner eller strukturer (så som andre proteiner som måtte være tilstede på NK-celler på andre celletyper). Spesifitet kan relativt bestemmes ved binding eller ved hjelp av konkurrerende bindingsprøver, for eksempel ved å bruke Biacoreinstrumenter slik dette er beskrevet i det etterfølgende. Spesifitet kan være vist ved for eksempel et omtrent 10:1, omtrent 20:1, omtrent 50:1, omtrent 100:1, 10.000:1 eller et større forhold mellom affinitet/aviditet ved binding til det spesifikke antigenet i forhold til ikke-spesifikk binding til andre irrelevante molekyler (i dette tilfellet er det spesifikke antigenet et KIR). Et KIR-bindende antistoff som er spesifikt for et KIR som er tilstede påNK-cellene i en spesiell organisme, for eksempel i et menneske, kan enkelte ganger oppvise binding til lignende KIR fra andre arter (for eksempel et KIR-bindende antistoff eller et annet KIR-bindende middel kan tverreagere med KIR fra forskjellige arter).
"Selektivitet" refererer seg til den preferensielle eller foretrukne bindingen av et protein til et spesielt område, mål eller peptid i motsetning til ett eller flere andre biologiske molekyler, strukturer, celler, vev, osv. Et KIR-bindende antistoff kan også være selektivt for et KIR som er produsert i en spesiell organisme (for eksempel i et menneske i motsetning til i en primat) og/eller en spesiell type av KIR (for eksempel et KIR med en lang cytoplasmatisk hale), spesielt i de tilfeller hvor antistoffet tverreagerer med mer enn en type KIR som er fremstilt i en spesiell organisme og/eller en spesiell del av et KIR (så som en spesiell epitop eller et spesielt antigenisk determinant område). Selektivitet kan for eksempel bestemmes ved konkurrerende ELISA- eller Biacoreprøver. Forskjellen i affinitet/aviditet som betegner selektivitet kan være enhver påvisbar preferanse (for eksempel et forhold på mer enn 1:1,1 eller mer enn 1:5, hvis den lar seg påvise, og vil således være
egnet, inklusive 1:10, 1:100, 1:1000 eller mer). Hvis intet annet er angitt, så vil enhver referanse til enhver type kvantitative data med hensyn til "affinitet" referere seg til målinger av bivalent (i motsetning til monovalent) binding.
En "epitop" eller et "bindingssete" er et område som et antigenbindende peptid (så som et antistoff) spesifikt binder seg til. En proteinepitop kan omfatte aminosyrerester som direkte er involvert i bindingen (også kalt den immundominante komponenten av epitopen) og andre aminosyrerester som ikke direkte inngår i bindingen så som aminosyrerester som effektivt er blokkert av det spesifikke antigenbindende peptidet (med andre ord ligger aminosyreresten innenfor "fingeravtrykket" til det spesifikke antigenbindende peptidet). Begrepet epitop inkluderer her begge typer aminosyrebindingsseter i ethvert spesielt område av et KIR som spesifikt binder seg til et anti-KIR-anti stoff, eller et annet KIR-spesifikt middel, hvis intet annet er angitt (beskrevet heri er også antistoffer som binder seg direkte til spesielle aminosyrerester). KIR kan omfatte en rekke forskjellige epitoper og disse kan, uten begrensning, inkludere (1) lineære peptidantigene determinanter, (2) konformelle antigene determinanter som består av en eller flere ikke-sammenhengende aminosyrer plassert nær hverandre i en moden KIR-konformasjon, og (3) posttranslaterte antigene determinanter som helt eller delvis består av molekylære strukturer som kovalent er knyttet til et KIR så som karbohydratgrupper.
Uttrykket at et første antistoff binder seg "i alt vesentlig" eller "i det minste delvis" til den samme epitopen som et andre antistoff, betyr at epitopbindings setet for det første antistoffet omfatter minst 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% eller mer av aminosyrerestene på antigenet som utgjør det epitopbindende setet i det andre antistoffet. At et første antistoff binder seg i alt vesentlig eller delvis til samme epitop som et andre antistoff, betyr også at de nevnte første og andre antistoffer konkurrerer om binding til antigenet slik det er beskrevet ovenfor. Begrepet "binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen eller determinanten som" det monoklonale antistoffet 1-7F9, betyr således at et antistoff "konkurrerer" med 1-7F9. Generelt, når det er angitt at et antistoff som "binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen eller determinanten som" det monoklonale antistoffet av interesse (for eksempel DF200, NKVSFl, 1-7F9), så betyr dette at antistoffet "konkurrerer" med nevnte antistoff av interesse med hensyn til binding til ett eller flere KIR-molekyler, fortrinnsvis et KIR-molekyl valgt fra gruppen bestående av KIR2DL1 og KIR2DL2/3. I andre eksempler så vil et antistoff som binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen eller determinanten på et KIR2DL1 -molekyl som antistoffet av interesse, "konkurrere" med antistoffet av interesse for binding til KIR2DL1. Et antistoff som binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen eller determinanten på et KIR2DL2/3 -molekyl som antistoffet av interesse, vil "konkurrere" med antistoffet av interesse for binding til KIR2DL2/3.
Begrepet "binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen eller determinanten som" et antistoff av interesse, betyr at et antistoff "konkurrerer" med nevnte antistoff av interesse for minst ett eller ethvert av alle KIR-molekyler som nevnte antistoff av interesse binder seg spesifikt til. Begrepet "binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen eller determinanten som" det monoklonale antistoffet 1-7F9, betyr at et antistoff "konkurrerer" med 1-7F9 med minst ett, fortrinnsvis ethvert eller alle KIR-molekyler som 1-7F9 spesifikt binder seg til. For eksempel vil et antistoff som binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen eller determinanten som de monoklonale antistoffene 1-7F9 eller NKVSFl således "konkurrere" med nevnte 1-7F9 eller NKVSFl henholdsvis for binding til KIR2DL1, KIR2DL2/3, KIR2DS1 og KIR2DS2.
Et anti-KIR-antistoffs evne til å "blokkere" bindingen av et KIR-molekyl og et HLA-molekyl, betyr at antistoffet i en prøve som bruker løselige eller celleoverflateassosierte KIR- og HLA-molekyler påvisbart kan redusere bindingen av et KIR-molekyl til et HLA-molekyl på en doseavhengig måte, hvor KIR-molekylet påvisbart binder seg til HLA-molekylet i fravær av antistoffet. Et eksempel på en prøve for å bestemme hvorvidt et anti-KIR-anti stoff er i stand til slik blokkering, er beskrevet i eksempel 8.
Et anti-KIR-antistoffs evne til å "redusere den hemmende aktiviteten til et KIR", "lette NK-celleaktivitet", "lette NK-cellecytotoksitet", "lette NK-celler", "forsterke NK-celleaktivitet", "forsterke NK-cellecytotoksitet" eller "forsterke NK-celler", betyr at en NK-celle som uttrykker et KIR, når denne kontaktes antistoffet, er i stand til å oppløse målceller som på sin overflate uttrykker et spesielt MHC - eller HLA klasse I som er en ligand for nevnte KIR. Begrepet "forsterkning av NK-cytotoksitet" betyr for eksempel en vesentlig forsterkning, i det minste 5%, 10%, 20%, 30% eller sterkere forsterkning av NK-cytotoksiteten, det vil si minst 50% forsterkning av NK-cytotoksitet (for eksempel minst omkring 60%, minst omkring 70%, minst omkring 80%, minst omkring 85%, minst omkring 90% eller minst omkring 95%) sammenlignet med en kontroll. Dette inkluderer for eksempel 55-100%, omtrent 65-100%, omtrent 75-100%, omtrent 80-100% eller omtrent 90-100% forsterkning av NK-cellecytotoksitet sammenlignet med en kontroll. Det inkluderer også mer enn omtrent 100%, mer enn omtrent 500%, mer enn omtrent 1000% og mer enn omtrent 2000% eller høyere forsterkning av cytotoksiteten. Dette kan for eksempel måles i en prøve så som en standard cytotoksitetsprøve hvor et høyere antall, det vil si en høyere prosent, av målcellene blir oppløst av NK-celler i nærvær av en NK-forsterker (så som et anti-KIR mAb) enn i fraværet av en slik forsterker (det vil si kontrollen).
Begrepet "nøytralisere KIR-mediert hemming av NK-celletoksitet" eller "nøytralisere den hemmende aktiviteten for et KIR" slik det brukes her, betyr evnen til spesifikt å forsterke oppløsningen til mer enn omtrent 20%, fortrinnsvis med minst omtrent 40%, med minst omtrent 40% eller minst omtrent 50% eller minst omtrent 100% eller mer, av den spesifikke oppløsning som oppnås ved det samme effektor:målcelleforholdet med NK-celler eller NK-cellelinjer som ikke er blokkert av sine KIR, slik dette kan måles ved en klassisk kromfrigjøringstest for cytotoksitet. "Nøytralisere KIR-mediert hemming" kan også bety at i nevnte kromfrigjøringsprøve eller en annen cytotoksitetsprøve hvor det anvendes en NK-celleklon eller transfektant som uttrykker ett eller flere hemmende KIR og en målcelle som uttrykker minst ett HLA-klasse I-allel som gjenkjennes av ett av de nevnte KIR på NK-cellen, så vil den spesifikke oppløsning som oppnås med antistoffet være mer enn omtrent 100%, fortrinnsvis minst omtrent 101%, minst omtrent 150%, minst omtrent 200% eller mer (for eksempel omtrent 101-150%, omtrent 120-150%, omtrent 120-200%, omtrent 150-200% eller omtrent 200-1000%) eller mer av den spesifikke oppløsning som oppnås ved den samme konsentrasjonen av NKVSFl (kommersielt tilgjengelig fra Serotec), ved å bruke de samme NK-cellene og målcellene, ved det samme effektonmålcelleforholdet.
Begrepet "humant antistoff' slik det brukes her, er tenkt å inkludere antistoffer med variable og konstante områder som er identiske eller i alt vesentlig identiske til, eller avledet fra humane kimlinjeimmunglobulinsekvenser. Slike humane antistoffer kan inkludere aminosyrerester som ikke er kodet av de humane kimlinjeimmunglobulinsekvensene (for eksempel mutasjoner innført ved vilkårlig eller setespesifikk mutagenese in vitro eller ved somatisk mutasjon in vivd). Begrepet "humant antistoff' slik det brukes her, er imidlertid ikke tenkt å inkludere antistoffer hvor CDR-sekvensene er avledet fra kimlinjen i andre pattedyrarter så som mus og som er blitt podet på humane rammeverkssekvenser.
Hvis intet annet er angitt, betyr "behandling" forebygging, lindring, behandling, helbredelse eller reduksjon av en eller flere symptomer eller klinisk relevante manifestasjoner av en sykdom eller lidelse, hvis dette ikke er utelukket ut fra sammenhengen. For eksempel så vil "behandling" av en pasient hvor det ikke er blitt identifisert noen symptomer eller klinisk relevante manifestasjoner av en sykdom eller lidelse være en forebyggende terapi, mens "behandling" av en pasient hvor symptomer eller klinisk relevante manifestasjoner av en sykdom eller lidelse ikke er blitt identifisert, vil vanligvis ikke utgjøre eller omfatte forebyggende terapi. Ikke desto mindre er det underforstått at de forskjellige terapeutiske og profylaktiske fremgangsmåter og bruksanvendelser beskrevet heri er distinkt fra en i mange henseende (for eksempel dose av en eller flere forbindelser som skal leveres en pasient, tidspunktet for anvendelsen, indikasjonen på anvendelsen, osv.) og hver kan være ansett å være et enestående trekk.
Begrepet "kreft" refererer til enhver neoplastisk lidelse som inkluderer, men som ikke er begrenset til, cellulære lidelser så som sarkom, carcinom, melanom, leukemi og lymfom, som kan inkludere kreft i brystet, hodet og nakken, eggstokkene, urinblæren, lungene, svelget, strupen, spiserøret, magesekken, tolvfingertarmen, leveren, pankreas, kolon, hunnlige eller mannlige kjønnsorganer, prostata, nyrer og sentralnervesystemet.
Begrepet "biologisk prøve" slik det brukes her inkluderer, men er ikke begrenset til, en biologisk væske (for eksempel serum, lymfe og blod), celleprøver eller vevsprøver (for eksempel benmarg eller tumorvev) som er avledet fra et menneske eller et ikke-humant pattedyr.
Begrepet "i alt vesentlig identisk" i sammenheng med to aminosyresekvenser, betyr at sekvensene når de er optimalt sammenstilt, som for eksempel ved hjelp av programmene GAP eller BESTFIT som bruker default gapvekter, har minst omkring 50, minst omkring 60, minst omkring 70, minst omkring 80, minst omkring 90, minst omkring 95, minst omkring 98 eller minst omkring 99 prosent sekvensidentitet. I en utførelse så skiller de restposisjoner som ikke er identiske seg ved konservative aminosyresubstitusjoner (ytterligere beskrevet i det etterfølgende). Sekvensidentitet blir typisk målt ved å bruke sekvensanalysedataprogrammer. Slike dataprogrammer for proteinanalyse tilpasser tilsvarende sekvenser ved å bruke mål for likhet som er gitt forskjellige substitusjoner, delesjoner eller andre modifikasjoner inklusive konservative aminosyresubstitusjoner. Således vil det offentlige tilgjengelige GCG-programvaren som inneholder programmer så som "Gap" og "BestFit" brukes med defaultparametere for bestemme sekvenshomologi eller sekvensidentitet mellom nært beslektede polypeptider så som homologe polypeptider fra forskjellige arter eller mellom et villtypeprotein og et mutein av dette. Se for eksempel GCG versjon 6.1. Polypeptidsekvenser kan også sammenlignes ved å bruke FASTA og ved å anvende default eller anbefalte parametere. Et program i GCG versjon 6.1., så vil FASTA (for eksempel FASTA2 og FASTA3) gi sammenstilling og prosent sekvensidentitet i de områder hvor det er best overlapping mellom de forskjellige søkesekvensene (Pearson, Methods Enzymol. 1990; 183: 63-98; Pearson, Methods Mol. Biol. 2000; 132: 185-219). En annen foretrukket algoritme som sammenligner en sekvens med en database som inneholder et stort antall sekvenser fra forskjellige organismer er dataprogrammet BLAST, da spesielt blastp, som bruker defaultparametere. Se for eksempel Altschul et al., J. Mol. Biol. 1990; 215: 403-410; Altschul et al., Nucleic Acids Res. 1997; 25: 3389-402 (1997). "Tilsvarende" aminosyreposisjoner i to i alt vesentlig identiske aminosyresekvenser er de som er sammenstilt ved ethvert av de proteinanalyseprogrammer som er nevnt her, ved å bruke defaultparametere.
Et "l-7F9-lignende" eller "1-4F1-lignende" antistoff slik det brukes her, betyr (1) et antistoff som i alt vesentlig binder seg til den samme epitopen som et antistoff som omfatter VH- og VL-sekvensene til henholdsvis 1-7F9 eller 1-4F1 så som for eksempel det monoklonale antistoffet 1-7F9 eller 1-4F1 henholdsvis og/eller (2) et antistoff som omfatter VH- og VL-sekvenser som er identiske eller i alt vesentlig identiske til VH- og VL-sekvensene i 1-7F9 eller 1-4F1 henholdsvis.
En "konservativ" aminosyresubstitusjon er en hvor en aminosyrerest blir substituert med en annen aminosyrerest med en sidekjede ("R-gruppe") med lignende kjemiske egenskaper (for eksempel ladning eller hydrofobisitet). Generelt så vil en konservativ aminosyresubstitusjon ikke i vesentlig grad endre proteinets funksjonelle egenskaper. I de tilfeller hvor aminosyresekvensene skiller seg fra hverandre ved konservative substitusjoner, så kan prosent sekvensidentitet justeres oppover for å korrigere den konservative typen av substitusjon. Fremgangsmåter for utførelse av slike justeringer er velkjente innen bioteknologien. Se for eksempel Pearson, Methods Mol. Biol. 1994; 243: 307-31. Eksempler på grupper av aminosyrer som har sidekjeder med lignende kjemiske egenskaper inkluderer 1) alifatiske sidekjeder: Glysin, alanin, valin, leukin og isoleukin; 2) alifatiske hydroksylsidekjeder: Serin og treonin; 3) amidholdige sidekjeder: Asparagin og glutamin; 4) aromatiske sidekjeder: Fenylalanin, tyrosin og tryptofan; 5) basiske sidekjeder: Lysin, arginin og histidin; 6) sure sidekjeder: Aspartinsyre og glutaminsyre; og 7) svovelholdige sidekjeder: Cystein og metionin. Eksempler på konservative aminosyresub sti tusj onsgrupper inkluderer: Valin-leukin-isoleukin, fenylalanin-tyrosin, lysin-arginin, alanin-valin, glutamat-asparat og asparagin-glutamin.
BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Den foreliggende oppfinnelsen er basert på utviklingen av nye tverreaktive og nøytraliserende antistoffer som binder seg til hemmende KIR og hvor antistoffene muliggjør effektiv aktivering av NK-celler hos de fleste individer i humane populasjoner.
Det er her for eksempel beskrevet antistoffer som binder seg til alle av KIR2DL1, KIR2DL2 og KIR2DL3 og forsterker NK-cellelytisk aktivitet ved å blokkere interaksjoner mellom disse KIR og HLA-C. Slike antistoffer er her betegnet som "tverreaktive og nøytraliserende anti-KIR mAb'er".
I et spesielt aspekt beskrives nye tverreaktive, nøytraliserende eller både tverreagerende og nøytraliserende, fullhumane anti-KIR-anti stoffer såvel som sammensetninger som omfatter slike antistoffer, foruten fremgangsmåter for anvendelse av slike antistoffer eller sammensetninger. Disse antistoffene inkluderer humane antistoffer 1-7F9 og 1-4F1 som er beskrevet i PCT/DK2004/000470, innsendt 1. juli 2004.
Antistoffer, sammensetninger og fremgangsmåter som er beskrevet her, vil blant annet unngå de for tiden herskende begrensninger som er assosiert med terapeutisk modulering av KIR og med terapeutisk NK-celleaktivering, og derved tilveiebringe ytterligere fordelaktige egenskaper og fordeler. For eksempel kan antistoffene tverreagere med multiple hemmende KIR og nøytralisere eller redusere deres hemmende signaler, noe som resulterer i en forsterkning av NK-cellecytotoksitet av NK-celler som uttrykker slike hemmende KIR-reseptorer. Evnen til å tverreagere med multiple KIR-genprodukter vil gjøre at antistoffene som beskrevet heri effektivt kan brukes for å forsterke eller øke NK-celleaktivitet hos de fleste eller hos alle mennesker, uten bryet eller utgiftene med å forutbestemme pasientens KIR-eller HLA-type. Antistoffene binder seg ikke til KIR2DS4, noe som gjør at man unngår en reduksjon av det stimulerende potensialet som ville være assosiert med nøytralisering av den aktiverende KIR2DS4-reseptoren. Ytterligere eller alternativt så binder antistoffene ikke KIR3DS3.
Fra slike antistoffer kan det også utvikles forskjellige antistoffragmenter og derivater som kan brukes for de samme eller lignende formål som beskrevet her med hensyn til antistoffene og at de aspekter som er beskrevet med hensyn til antistoffene kan også anvendes på lignende måte for antistoffragm enter og derivater hvis intet annet er angitt eller klart motsies av sammenhengen. Med andre ord, en egenskap som beskrevet heri med hensyn til et antistoff, bør således hvis intet annet er angitt, også implisitt være underforstått at det også beskriver et lignende trekk med hensyn til et antistoffragment eller derivat med lignende funksjonalitet med hensyn til spesifitet. Det skal imidlertid understrekes at "fullengde"-antistoffer og antistoff-"fragmenter" kan værekarakterisertsom distinkte aspekter, ettersom deres biologiske og fysiokjemiske egenskaper kan skille seg signifikant.
Enkelte antistoffer kan værekarakterisertsom "humane", noe som gjør at de typisk er assosiert med en mindre risiko for en immunrespons mot antistoffene hos en human pasient til hvilke de blir administrert. I et eksempel er det beskrevet et isolert antistoff som letter aktiveringen av humane NK-celler hos så å si alle mennesker. I et eksempel på en utførelse, er antistoffet det humane antistoffet 1-7F9 eller et humant l-7F9-lignende antistoff.
Antistoffer, fragmenter eller derivater av disse kan tverreagere med minst to hemmende KIR-reseptorer på overflaten av NK-celler og derved redusere eller nøytralisere de hemmende signalene til NK-cellene og forsterke aktiviteten til NK-cellene. For eksempel kan et antistoff, antistoffragment eller derivat binde en vanlig determinant i humane KIR2DL-reseptorer, slik at antistoffet, antistoffragmentet eller derivatet binder minst KIR2DL1-, KIR2DL2- og KIR2DL3-reseptorer. For det foreliggende formål, så refererer således begrepet "KIR2DL2/3" til enten en av dem eller begge KIR2DL2- og KIR2DL3-reseptorene.
Slik det er beskrevet her, så har anti-KIR mAb'ene 1-7F9 og 1-4F1 flere fordeler fremfor tidligere produserte anti-KIR-anti stoffer. For eksempel er 1-7F9 og 1-4F1 helhumane, noe som reduserer eller minimaliserer risikoen for en immunrespons mot antistoffet når så snart dette er administrert en pasient. Videre er både 1-7F9 og 1-4F1 og egnede isotyper for terapeutiske anti-KIR-anti stoffer (IgG4 og IgG2 henholdsvis) slik dette er beskrevet i det etterfølgende. 1-7F9 er også mer effektiv for å indusere avliving av NK-celler som uttrykker enten KIR2DL1, -2 og/eller -3 enn de murine mAb'ene EB6, GLI83, DF200 og NKVSFl (Pan2D). Slik det for eksempel er vist på figurene 5 og 6, så induserte 1-7F9 høyere nivåer med hensyn til spesifikk oppløsning av KIR2DL1-uttrykkende NK-celler blant målceller som uttrykte HLA-Cw4 enn det som var tilfellet med EB6, DF200 eller NKVSFl (Pan2D). 1-7F9 hadde videre en høyere affinitet for KIR sammenlignet med tidligere kjente anti-KIR mAb'er. For eksempel binder 1-7F9 seg til KIR2DL1 og KIR2DL3 med dissosiasjonskonstanter (Kd'er) på 0,43 nM og 0,025 nM henholdsvis, noe som representerer høyere affinitet for begge antigenere enn for eksempel DF200 (se eksemplene 3 og 8). I motsetning til de murine antistoffene NKVSFl (Pan2D), A210 og A208g, så binder ingen av 1-7F9 og 1-4F1 seg til KIR2DS4, noe som gjør dem bedre egnet for terapeutiske formål. Lik NKVSFl (Pan2D) og DF200, så binder 1-7F9 og 1-4F1 seg også til KIR2DS1 og KIR2DS2, men de sistnevnte er antatt ikke å være særlig viktige med hensyn til anti-leukemieffekt. Spesielle antistoffer som beskrevet heri har derfor den eller de samme eller lignende antigenspesifiteter som 1-7F9 og/eller 1-4F1. For eksempel vil antistoffer som omfatter de samme eller lignende VH- og VL-områder som 1-7F9 ha de samme eller lignende antigenbindende og/eller NK-stimulerende egenskaper som 1-7F9, mens antistoffer som omfatter de samme eller lignende VH-og VL-områder som 1-4F1 kan ha de samme eller lignende antigenbindende egenskaper som 1-4F1.
Som vist på figur 14, så er aminosyresekvensene for VL- og VH-områdene i 1-7F9 blitt bestemt:
1-7F9 VL-område (SEKV.ID. NR. 15):
1-7F9 VH-område (SEKV.ID. NR. 17):
Aminosyresekvensene for 1-4F1 VL- og VH-områdene er gitt i SEKV.ID. NR. 39 og 41 henholdsvis, og de nukleotidsekvensene som koder 1-4F1 VL- og VH-områdene er gitt i SEKV.ID. NR. 40 og 42 henholdsvis. I en spesiell utførelse er restene 3, 4, 9, 24, 32, 41, 47, 50, 55, 71 og 74 i SEKV.ID. NR. 39 Q, L, S, R, A, G, L, D, E, F og A henholdsvis. I en annen spesiell utførelse er restene 3, 4, 9, 24, 32, 41, 47, 50, 55, 71 og 74 i SEKV.ID. NR. 39 R, M, F, W, Y, A, F, Y, Q, Y og T henholdsvis.
Som vist på figur 15, så er aminosyresekvensene for de nevnte 1-7F9 CDR blitt identifisert som følger: Lettkjede CDR1 -aminosyresekvensen tilsvarer restene 24-34 i SEKV.ID. NR. 15; lettkjede CDR2-aminosyresekvensen tilsvarer restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 15; lettkjede CDR3-aminosyresekvensen tilsvarer restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 15; tungkjede CDR1 -aminosyresekvensen tilsvarer restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 17; tungkjede CDR2-aminosyresekvensen tilsvarer restene 50-65 SEKV.ID. NR. 17; og tungkjede CDR3-aminosyresekvensen tilsvarer restene 99-112 i SEKV.ID. NR. 17. Aminosyresekvensene for nevnte 1-4F1 CDR er blitt identifisert som følger: Lettkjede CDR1 -aminosyresekvensen tilsvarer restene 24-34 i SEKV.ID. NR. 39; lettkjede CDR2-aminosyresekvensen tilsvarer restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 39; lettkjede CDR3-aminosyresekvensen tilsvarer restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 39; tungkjede CDR1 -aminosyresekvensen tilsvarer restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 41; tungkjede CDR2-aminosyresekvensen tilsvarer restene 50-66 i SEKV.ID. NR. 41; og tungkjede CDR3-aminosyresekvensen tilsvarer restene 99-113 i SEKV.ID. NR. 41.
Aminosyresekvensene for hele de 1-7F9 lette og tunge kjedene er gitt i SEKV.ID. NR. 36 og 37 henholdsvis.
Ytterligere antistoffer, for eksempel forskjellige humane antistoffunderklasser; antistoffragmenter, antistoffderivater og andre KIR-bindende peptider, kan følgelig lett fremstilles, for eksempel ved rekombinante teknikker basert på denne informasjonen. I et eksempel så tilveiebringer oppfinnelsen i ett aspekt et antistoff med en VL- og en VH-sekvens som i alt vesentlig består av SEKV.ID. NR. 15 og SEKV.ID. NR. 17 henholdsvis og/eller et antistoff med en VL- og en VH-sekvens som i alt vesentlig består av SEKV.ID. NR. 39 og SEKV.ID. NR. 41 henholdsvis. I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen et antistoff som omfatter CDR-områder som i alt vesentlig består av 1-7F9 eller 1-4F1 VH CDR1-3 og VL CDR1-3 som beskrevet ovenfor. I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen et antistoff som omfatter CDR-områder som følger: En lettkjede CDR1 -aminosyresekvens som tilsvarer omtrent restene 24-34 i SEKV.ID. NR. 15; en lettkjede CDR2-aminosyresekvensen som tilsvarer omtrent restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 15; en lettkjede CDR3-aminosyresekvensen som tilsvarer omtrent restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 15; en tungkjede CDR1 -aminosyresekvensen som tilsvarer omtrent restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 17; en tungkjede CDR2-aminosyresekvensen som tilsvarer omtrent restene 50-65 i SEKV.ID. NR. 17; og en tungkjede CDR3-aminosyresekvensen som tilsvarer omtrent restene 99-112 i SEKV.ID. NR. 17. I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen et antistoff som omfatter CDR-områder som følger: En lettkjede CDR1 -aminosyresekvens som tilsvarer omtrent restene 24- 34 i SEKV.ID. NR. 39; en lettkjede CDR2-aminosyresekvens som tilsvarer omtrent restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 39; og en lettkjede CDR3-aminosyresekvens som tilsvarer omtrent restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 39; en tungkjede CDR1-aminosyresekvens som tilsvarer omtrent restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 41; en tungkjede CDR2-aminosyresekvens som tilsvarer omtrent restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 41; og en tungkjede CDR3-aminosyresekvens som tilsvarer omtrent restene 99-113 i SEKV.ID. NR. 41.1 et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen et antistoff som omfatter en lettkjede CDR 1-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 24-34 i SEKV.ID. NR. 15; en lettkjede CDR2-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 15; en lettkjede CDR3-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 15; en tungkjede CDR1 -aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 17; en tungkjede CDR2-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 50-65 i SEKV.ID. NR. 17; og en tungkjede CDR3-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 99-112 i SEKV.ID. NR. 17.1 et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen et antistoff som omfatter CDR-områder som følger: En lettkjede CDR1 -aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 24-34 i SEKV.ID. NR. 39; en lettkjede CDR2-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 39; og en lettkjede CDR3-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 39; en tungkjede CDR1-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 41; en tungkjede CDR2-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 41; og en tungkjede CDR3-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 99-113 i SEKV.ID. NR. 41.
Det beskrives også heri et anti-KIR-antistoff, antistoffragment eller antistoffderivat eller et KIR-bindende polypeptid som omfatter minst én variantaminosyresekvens
som i alt vesentlig er identisk med 1-7F9 eller 1-4F1 VH- eller VL-sekvens eller til et CDR-område i disse. En variantaminosyresekvens kan omfatte eller i alt vesentlig bestå av en aminosyresekvens som er minst 50, 80, 90, 95, 98 eller 99 (for eksempel omtrent 50-99, omtrent 65-99, omtrent 75-99 eller omtrent 85-99) prosent identisk med 1-7F9 eller 1-4F1 CDR, VH- eller VL-område. En variantaminosyresekvens kan også eller alternativt omfatte 1, 2 eller 3 CDRer som omfatter eller består av aminosyresekvenser som er minst omtrent 80%, minst omtrent 90% eller minst omtrent 95% identiske med 1-7F9 eller 1-4F1 CDRer. I ett aspekt beskrives således et humant antistoff som omfatter en lettkjede CDR 1-aminosyresekvens med minst omtrent 80%, minst omtrent 90% eller minst omtrent 95% identitet med restene 24-34 i SEKV.ID. NR. 15 eller SEKV.ID. NR. 39; en lettkjede CDR2-aminosyresekvens med minst omtrent 80%, minst omtrent 90% eller minst omtrent 95% identitet med restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 15 eller SEKV.ID. NR. 39; en lettkjede CDR3-aminosyresekvens med minst omtrent 80%, minst omtrent 90% eller minst omtrent 95% identitet med restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 15 eller
SEKV.ID. NR. 39; en tungkjede CDR1-aminosyresekvens med minst omtrent 80%, minst omtrent 90% eller minst omtrent 95% identitet med restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 17 eller SEKV.ID. NR. 41; en tungkjede CDR2-aminosyresekvens med minst omtrent 80%, minst omtrent 90% eller minst omtrent 95% identitet med restene 50-65 i SEKV.ID. NR. 17 eller til restene 50-66 i SEKV.ID. NR. 41; en tungkjede CDR3-aminosyresekvens med minst omtrent 80%, minst omtrent 90% eller minst omtrent 95% identitet med restene 99-112 i SEKV.ID. NR. 17 eller til restene 99-113 SEKV.ID. NR. 41. De grunnleggende egenskapene for 1-7F9- eller 1-4F1-avledede KIR-bindende aminosyresekvenser er beholdt i slike variante aminosyresekvenser og inkluderer fortrinnsvis og ønskelig spesifiteten og/eller aviditeten til 1-7F9- eller 1-4F1-sekvenser for en eller flere KIRer, eller kan også eller alternativt inkludere evnen til 1-7F9 til å blokkere en KIR/HLA-C-interaksjon og forsterke den lytiske aktiviteten til NK-celler.
I et annet aspekt beskrives heri et anti-KIR-anti stoff, antistoffragment eller antistoffderivat eller et KIR-bindende polypeptid som omfatter en KIR-bindende aminosyresekvens som skiller seg fra en 1-7F9 eller 1-4F1 KIR-bindende sekvens i en eller flere aminosyrerester (for eksempel minst 2, 3, 5, minst omtrent 10, minst omtrent 15, minst omtrent 20, minst omtrent 25, minst omtrent 30, minst omtrent 35, minst omtrent 40, minst omtrent 50 eller flere aminosyrerester) ved en eller flere restinnsettinger, -delesjoner og/eller -substitusjoner. En slik variant KIR-bindende sekvens kan gi større affinitet; større eller annen type spesifitet; mindre immunogenisitet (med hensyn til vertsrespons til sekvensen); større in vivo stabilitet; og/eller andre fordelaktige effekter i den variante sekvensen i forhold til en i alt vesentlig identisk aminosyresekvens som omfatter den native eller naturlige 1-7F9- eller 1-4F1-sekvensen. Egnede sekvensvariasjoner er ytterligere beskrevet i det etterfølgende. En KIR-bindende del av et anti-KIR-anti stoff, antistoffragment eller antistoffderivat eller et KIR-bindende polypeptid kan også omfatte ethvert egnet antall ikke-aminosyrekomponenter eller substitusjoner så som ikke-aminosyre organiske grupper som letter KIR-binding og/eller tilveiebringer andre fordelaktige fysiokjemiske eller immunologiske egenskaper.
Enkelte antistoffer beskrevet heri kan også eller alternativt værekarakterisert vedsin bindende affinitet til en eller flere KIR. For eksempel som vist i eksemplene 3 og 8, så har når det gjelder bivalent binding DF200 en Kdfor KIR2DL1 på omtrent II nM og en Kdfor KIR2DL3 på omtrent 2,0 nM og 1-7F9 har en Kdfor KIR2DL1 på omtrent 0,43 nM og en Kdfor KIR2DL3 på omtrent 0,025 nM. Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer følgelig i ett aspekt humane eller ikke-humane (for eksempel murine, kimære eller humaniserte) antistoffer med en Kdi bivalent binding til KIR2DL1 på ikke mer enn omtrent 20 nM, ikke mer enn omtrent 11 nM, ikke mer enn omtrent 5 nM, ikke mer enn omtrent 1 nM, ikke mer enn omtrent 0,5 nM eller ikke mer enn omtrent 0,43 nM. I tillegg eller alternativt kan de humane eller ikke-humane (for eksempel murine, kimære eller humaniserte) antistoffene ifølge den foreliggende oppfinnelsen ha en Kdfor KIR2DL3 på ikke mer enn omtrent 20 nM, ikke mer enn omtrent 2 nM, ikke mer enn omtrent 1 nM, ikke mer enn omtrent 0,1 nM, ikke mer enn omtrent 0,05 nM eller ikke mer enn omtrent 0,025 nM. I et spesielt aspekt har antistoffene omtrent de samme Kd-verdier for bivalent binding til KIR2DL1 og KIR2DL3 som 1-7F9. Som vist i eksempel 13 når det monovalent binding, så har 1-7F9 og 1-4F1 Kd-verdier for KIR2DL3 på omtrent 3,5 og 7 nM henholdsvis. I ett aspekt tilveiebringer således oppfinnelsen humane eller ikke-humane (for eksempel murine, kimære eller humaniserte) antistoffer med en Kdi monovalent binding til KIR2DL3 på ikke mer enn omtrent 20 nM, ikke mer enn omtrent 10 nM, ikke mer enn omtrent 7 nM eller ikke mer enn omtrent 3,5 nM.
Et anti-KIR-anti stoff, antistoffragment eller antistoffderivat eller et KIR-bindende polypeptid binder seg selektivt og/eller spesifikt (typisk spesifikt) til minst ett KIR og mer spesielt et antigenisk determinantområde eller epitop i minst én KIR, under passende betingelser (for eksempel med hensyn til temperatur, pH, osv., som typisk vil tilsvare humane fysiologiske betingelser i en normal eller en NK-celleassosiert sykdomstilstand og i sammenheng med et egnet protein som omfatter sekvensen eller kombinasjonen). I ett aspekt beskrives for eksempel antistoffer som kan værekarakterisert ved(blant andre ting) evnen til å konkurrere med 1-7F9-, 1-4F1- eller et 1-7F9- eller 1-4F1-lignende antistoff og forskjellige fremgangsmåter som involverer samme. Andre antistoffer (og/eller som brukes ved praktisk gjennomføring av de fremgangsmåter som er beskrevet her) kan også alternativt karakteriseres ved sin evne til å konkurrere med ett eller flere av antistoffene DF200, NKVSFl, EB6 og GL183.
De tverreaktive og nøytraliserende anti-KIR-anti stoffene, antistoffragmentene eller derivatene ifølge den foreliggende oppfinnelsen reduserer eller nøytraliserer den hemmende aktiviteten til KIR ved spesifikt å binde MHC og/eller HLA-molekyler til minst to hemmende KIR-reseptorer og lette NK-celleaktivitet, noe som betyr at slike antistoffer, fragmenter og derivater gjør det mulig for NK-celler å uttrykke en hemmende KIR-reseptor på sin overflate som er i stand til å oppløse celler som uttrykker en tilsvarende HLA-ligand for den spesielle hemmende KIR-reseptoren (for eksempel et spesielt HLA-antigen). I ett aspekt tilveiebringes antistoffer som spesifikt hemmer bindingen av HLA-C-molekyler til KIR2DL1- og KIR2DL2/3-reseptoren. I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen antistoffer som hemmer bindingen av KIR2DL1 og/eller KIR2DL2/3 til HLA-C. I et ytterligere aspekt tilveiebringer oppfinnelsen antistoffer som letter NK-celleaktivitet in vivo og/eller in vitro.
Minst én av KIR2DL1 eller KIR2DL2/3 er tilstede i minst 90% eller mer av verdens befolkning og de antistoffene ifølge den foreliggende oppfinnelsen er i stand til å forsterke aktiviteten til NK-celler som uttrykker enten en av dem eller begge de nevnte KIR. Sammensetninger ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan således brukes for effektivt å aktivere eller forsterke NK-celler hos de fleste mennesker, typisk i omtrent 90% eller mer av enhver befolkning. En enkelt antistoffsammensetning ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan følgelig brukes for å behandle de fleste mennesker og det er sjelden behov for å bestemme KIR-eller HLA-alleliske grupper eller å bruke blandinger eller cocktailer av to eller flere av anti-KIR-mAb'er.
I ett aspekt så binder antistoffet spesifikt både KIR2DL1 og KIR2DL2/3 humane reseptorer og reverserer hemming av NK-cellecytotoksitet som er mediert eller kontrollert av disse KIR. Antistoffet ifølge krav kan også være humant og konkurrere med det monoklonale antistoffet 1-7F9 og/eller 1-4F1. Begrepet "konkurrere med" når det refererer seg til et spesielt par av antistoffer (for eksempel ett eller flere antistoffer valgt fra DF200, NKVSFl (Pan2D), 1-7F9, EB6 og GLI 83), betyr at et første antistoff påvisbart konkurrerer med et andre antistoff (eller et annet molekyl) i en bindingsprøve hvor det anvendes enten rekombinante KIR-molekyler eller celleoverflateuttrykte KIR-molekyler. For eksempel i ett aspekt hvor prosentene med hensyn til hemming for et visst antistoffpar er over omtrent 20%, over omtrent 30%, over omtrent 40%, over omtrent 50%, uansett hvilket antistoff som brukes som første antistoff, så vil antistoffene konkurrere. Alternativt, hvis prosenten med hensyn til hemming for et visst antistoffpar i middel er minst omtrent 29%, minst omtrent 30%, minst omtrent 40% eller minst omtrent 50%, så vil antistoffene konkurrere. Prosent hemming for et andre antistoff for binding til KIR2D-protein av et første antistoff kan beregnes som 100<*>(1-(påvist binding av andre antistoff)/(påvist binding av første antistoff)). Det samme gjelder antistoffragmenter og antistoffderivater. Hvis intet annet er angitt, så vil et antistoff som "konkurrerer" med 1-7F9, 1-4F1 eller et 1-7F9- eller 1-4F1-lignende antistoff kunne konkurrere med 1-7F9, 1-4F1 eller det 1-7F9- eller 1-4F1-lignende antistoffet for binding til humant KIR2DL1, humant KIR2DL2/3 eller både humant KIR2DL1 og KIR2DL2/3. For eksempel vil antistoffet DF200 konkurrere med 1-7F9 og 1-4F1 for binding til KIR2DL3.
Eventuelt kan et antistoff som konkurrerer med 1-7F9 eller 1-4F1 være forskjellig fra 1-7F9 eller 1-4F1 henholdsvis (det vil si antistoffersom er forskjellige fra 1-7F9 og 1-4F1 og som blant annet erkarakterisert vedsin evne til å konkurrere med 1-7F9 og/eller 1-4F1 for binding til en eller begge av de nevnte KIR).
I et annet aspekt så binder antistoffet både KIR2DL1 og KIR2DL2/3 humane reseptorer og reduserer eller nøytraliserer eller reverserer hemming av NK-cellecytotoksitet som er mediert av disse KIR og konkurrerer med 1-7F9 for binding til den KIR2DL1-humane reseptoren, den KIR2DL2/3-humane reseptoren eller begge disse reseptorene. Eventuelt kan nevnte antistoff være kimært, humant eller et humanisert antistoff.
I et annet aspekt så binder antistoffet både KIR2DL1 og KIR2DL2/3 humane reseptorer, reduserer, nøytraliserer eller reverserer hemmingen av NK-cellecytotoksitet som er mediert av disse KIR og konkurrerer med EB6 for binding til den KIR2DL1-humane reseptoren eller konkurrerer med GLI83 og/eller DF200 for binding til den KIR2DL2/3-humane reseptoren; eller konkurrerer med både EB6 for binding til den KIR2DL1-humane reseptoren og GLI83 og/eller DF200 for binding til den KIR2DL2/3-humane reseptoren. I en utførelse er antistoffet ikke NKVSFl (Pan2D), ikke A210, ikke A803g og/eller ikke DF200. Antistoffet kan for eksempel være et murint, kimært, humant eller humanisert antistoff.
I et annet aspekt så omfatter antistoffet VH-, VL- eller begge VH- og VL-områdene som i alt vesentlig er identisk med VH- og/eller VL-områdene i 1-7F9 eller 1-4F1. Antistoffet kan være av enhver underklasse og inkluderer IgGl, IgG2, IgG3 og IgG4.1 et spesielt aspekt er antistoffet et humant IgG4-antistoff. I et annet spesielt aspekt er antistoffet et humant IgG2-antistoff. Antistoffet kan været et kimært, humant eller humanisert antistoff.
I et annet aspekt er antistoffet humant og konkurrerer med 1-7F9 eller 1-4F1 og gjenkjenner binding til, eller har immunspesifitet for i det minste delvis den samme eller den samme epitopen eller "epitopisk sete" på et KIR-molekyl som det monoklonale antistoffet 1-7F9 eller 1-4F1. Det er foretrukket at nevnte KIR-molekyl er en human KIR2DL1- eller KIR2DL2/3-reseptor.
I et annet aspekt binder antistoffet en felles determinant som er tilstede på begge KIR2DL1- og KIR2DL2/3-humane reseptorer og reduserer, nøytraliserer eller reverserer hemming av NK-cellecytotoksitet som er mediert eller kontrollert av disse KIR. Antistoffet kan mer spesifikt binde i det minste delvis den samme, i alt vesentlig den samme eller den samme epitopen på KIR som det monoklonale antistoffet 1-7F9.
I et spesielt aspekt er antistoffet et monoklonalt antistoff som har en eller flere av de ovenfor beskrevne karakteristika.
I et annet aspekt kan funksjonelle fragmenter og derivater av de antistoffer som her er beskrevet fremstilles slik at de i alt vesentlig har lignende antigenbinding, spesifitet og/eller aktivitet og inkluderer, uten begrensning, Fab-fragmenter, Fab'2-fragmenter, immunadhesiner, dialegemer, kameliserte antistoffer, Janusiner, minilegemer, CDRer og ScFv-fragmenter.
Hvis intet annet er angitt, så er antistoffer eller bivalente fragmenter eller derivater av disse monospesifikke, det vil si at begge "armene" til antistoffene, fragmentene eller derivatene binder det eller de samme antigenene.
Det mulig å fremstille antistoffderivater som omfatter et antistoff som beskrevet heri som er konjugert eller kovalent bundet til et toksin, et radionukleid, en påvisbar gruppe (for eksempel et fluoratom) eller et fast underlag.
Oppfinnelsen omfatter også farmasøytiske sammensetninger som inneholder et antistoff som beskrevet ovenfor, et fragment av dette eller et derivat av det eller begge deler. Oppfinnelsen angår følgelig også bruken av et antistoff som beskrevet her i en fremgangsmåte for fremstilling av et medikament. I foretrukne utførelser er medikamentet eller den farmasøytiske sammensetningen tenkt brukt for behandlingen av kreft eller andre proliferative lidelser, en infeksjon eller ved bruk ved transplantering.
I ett aspekt beskrives en sammensetning (for eksempel en sammensetning formulert for farmasøytisk administrering, et sett for fremstilling av en slik sammensetning, et prøvesett eller et medium, rensemedium, osv.) som omfatter et antistoff som binder minst to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenprodukter og som er i stand til å nøytralisere KIR-mediert hemmende cytotoksitet av NK-celler som uttrykker minst én av de to nevnte forskjellige humane hemmende KIR-reseptorer og hvor antistoffet er inkorporert i et liposom. Liposomet kan også omfatte et ytterligere stoff så som for eksempel et nukleinsyremolekyl for levering av gener i genterapi; et nukleinsyremolekyl for levering av antisens RNA, RNAi eller siRNA for å undertrykke et gen i en NK-celle; eller et toksin eller et medikament som er måltilpasset for avlivning av NK-celler.
Det er her også beskrevet fremgangsmåter for å regulere human NK-celleaktivitet in vitro, ex vivo eller in vivo som omfatter å kontakte humane NK-celler med en effektiv mengde av et antistoff som beskrevet heri, et fragment av et slikt antistoff, et derivat eller begge deler, eller en farmasøytisk sammensetning som omfatter minst en av de nevnte. Foretrukne fremgangsmåter omfatter å administrere en effektiv mengde av en farmasøytisk sammensetning som beskrevet heri som vil forsterke eller øke den cytotoksiske aktiviteten for humane NK-celler, mest foretrukket ex vivo eller in vivo, i en pasient som har en kreftsykdom, en infeksjonssykdom eller en immunsykdom. For eksempel kan administreringen gjennomføres ved intravenøs infusjon av antistoffet i en egnet buffer til en pasient med kreft eller en infeksjonssykdom (så som en viral sykdom).
Beskrivelsen tilveiebringer også en sammensetning som omfatter et antistoff som binder seg til minst to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenprodukter hvor antistoffet er i stand til å nøytralisere en KIR-mediert hemming av NK-cellecytotoksitet i NK-celler som uttrykker minst én av de to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorene og hvor antistoffet er tilstede i en mengde som effektivt påvisbart forsterker NK-cellecytotoksitet i en pasient eller i en biologisk prøve som omfatter NK-celler; og en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel. Det er foretrukket at antistoffet binder seg til en felles determinant som er tilstede på KXR2DL1 og KXR2DL2/3. Sammensetninger som omfatter et antistoff som beskrevet heri kan eventuelt også omfatte et andre terapeutisk middel (et middel som induserer, fremmer og/eller forbedrer en terapeutisk effekt i en vert som er beslektet med en tilstand eller en lidelse for hvilken antistoffet er administrert, for eksempel en tilstand som er relatert til kreft, transplantering, en infeksjonssykdom, en viral infeksjonssykdom, osv.). I ett aspekt kan et andre terapeutisk middel administreres sammen med et antistoff som beskrevet heri slik at nevnte andre terapeutiske middel i en slik kombinert sammensetning kan velges fra for eksempel et immunmodulerende middel, et hormonelt middel, et kjemoterapeutisk middel, et antiangiogent middel, et apoptotisk middel, et andre antistoff som er spesifikt for ikke-KTR-antigen, et eventuelt andre antistoff som binder seg til og hemmer og nøytraliserer et hemmende KIR, eller reduserer signaliseringen fra et hemmende KIR, et antiinfeksjonsmiddel, et målsøkende middel eller en tilhørende forbindelse. Fordelaktige immunmodulerende midler kan velges fra IL-lalfa, IL-lbeta, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-21, TGF-beta, GM-CSF, M-CSF, G-CSF, TNF-alfa, TNF-beta, LAF, TCGF, BCGF, TRF, BAF, BDG, MP, LIF, OSM, TMF, PDGF, IFN-alfa, IFN-beta eller IFN-gamma. Eksempler på kjemoterapeutiske midler inkluderer alkylerende midler, antimetabolitter, cytotoksiske antibiotika, adriamycin, daktinomycin, mitomycin, karminomycin, daunomycin, doksorubicin, tamoksifen, taksol, taksoter, vinkristin, vinblastin, vinorelbin, etoposid (VP-16), 5-fluoruracil (5FU), cytosinarabinosid, syklofosfamid, tiotepa, metotreksat, kamptotecin, aktinomycin-D, mitomycin C, cisplatin (CDDP), aminopterin, kombretastatin(er) og andre vinkaalkyloider og derivater eller formedikamenter av disse. Eksempler på hormonelle midler inkluderer leuprorelin, goserelin, triptorelin, buserelin, tamoksifen, toremifen, flutamid, nilutamid, cyproteronbikalutamidanastrozol, eksemestan, letrozol, fadrozolmedroksy, klormadinon, megestrol andre LHRH-agonister, andre antiøstrogener, andre antiandrogener, andre aromatasehemmere og andre progestagener. Nevnte andre antistoff som binder seg til og hemmer en hemmende KIR-reseptor er fortrinnsvis et antistoff eller et derivat eller fragment av dette som binder seg til en epitop ved en hemmende KIR-reseptor som er forskjellig fra den epitopen som bindes av antistoffet som binder en felles determinant som er tilstede på minst to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenprodukter. I et annet aspekt kan et andre antistoff være rettet inn mot et mål som er assosiert med sykdomstilstanden som i det minste delvis lar seg behandle ved administrering av antistoffet (for eksempel et kreftassosiert antigen, en virusinfeksjonsassosiert antigen, osv.).
Beskrivelsen tilveiebringer videre en fremgangsmåte for påvisbart å forsterke NK-celleaktivitet i en pasient som har behov for dette som omfatter et trinn hvor pasienten administreres en sammensetning som beskrevet heri. En pasient som har behov for NK-celleaktivitetsforsterkning kan være enhver pasient som er diagnostisert med en sykdom eller lidelse hvor en slik forsterkning kan fremme, forbedre og/eller indusere en terapeutisk effekt (eller fremmer, forbedrer og/eller induserer en slik effekt i det minste i en vesentlig andel av pasientene med sykdommen eller lidelsen og som i alt vesentlig har lignende karakteristika som pasienten og som kan bestemmes ved for eksempel kliniske forsøk). En pasient som har behov for en slik behandling kan for eksempel lide av kreft, en annen proliferativ lidelse, en infeksjonssykdom eller en immunlidelse. Fremgangsmåten omfatter fortrinnsvis et ytterligere trinn for å administrere pasienten et passende ytterligere terapeutisk middel valgt fra et immunmodulerende middel, et hormonelt middel, et kjemoterapeutisk middel, et antiangiogent middel, et apoptotisk middel, et andre antistoff som er spesifikt for et antigen som er forskjellig fra KIR, eventuelt et andre antistoff som binder seg til og hemmer og nøytraliserer en hemmende KIR-reseptor eller reduserer signaliseringen fra et hemmende KIR, et antiinfiserende middel, et målsøkende middel eller en tilhørende forbindelse hvor nevnte ytterligere terapeutiske middel blir administrert nevnte pasient som en enkeltdoseform sammen med nevnte antistoff eller som separate doseringsformer. Dosen av antistoffet (eller antistoffragmentet/derivåtet) og dosen av nevnte ytterligere terapeutiske middel bør kollektivt være tilstrekkelig til at man påvisbart kan indusere, fremme og/eller forbedre en terapeutisk respons i pasienten og hvor nevnte respons omfatter forsterkningen av NK-celleaktivitet. Ved separat administrering bør antistoffet, fragmentet eller derivatet av dette og nevnte ytterligere terapeutiske middel fortrinnsvis og ønskelig administreres under betingelser (for eksempel med hensyn til tidspunktet, antallet doser, osv.) som resulterer i en påvisbar samlet terapeutisk fordel for pasienten.
Det beskrives videre heri antistoffer som er i stand til spesifikt å binde NK-celler og/eller KIR-reseptorer i en ikke-human primat, fortrinnsvis en ape. Videre beskrives fremgangsmåter for å bedømme toksiteten, dosen og/eller aktiviteten eller effekten av antistoffer beskrevet heri som er kandidatmedikamenter. Beskrevet heri er en fremgangsmåte for å bestemme en dose av et antistoff som er toksisk for et dyr eller et målvev ved å administrere et antistoff ifølge oppfinnelsen til en mottakende ikke-human primat med NK-celler og så bedømme eventuelle toksiske eller skadelige effekter middelet på dyret, fortrinnsvis i et målvev. I et annet aspekt beskrives en fremgangsmåte for å identifisere et antistoff som er toksisk for et dyr eller et målvev ved å administrere et antistoff ifølge beskrivelsen til en mottakende ikke-human primat med NK-celler og så bedømme eventuelle toksiske eller skadelige effekter av middelet på dyret eller fortrinnsvis i et målvev. I et annet aspekt beskrives heri en fremgangsmåte for å identifisere et antistoff som er effektivt for behandling av en infeksjon, sykdom eller tumor ved å administrere et antistoff som beskrevet heri til en ikke-human primatmodell på infeksjon, sykdom eller kreft og så identifisere antistoffet som lindrer infeksjonen, sykdommen eller nevnte kreft eller et symptom på disse. I en utførelse er nevnte antistoff som beskrevet heri et antistoff som (a) tverreagerer med minst to hemmende humane KIR-reseptorer på overflaten av humane NK-celler og (b) tverreagerer med NK-celler eller en KIR-reseptor i nevnte ikke-humane primat.
Det beskrives heri en fremgangsmåte for å påvise nærværet av NK-celler som bærer en hemmende KIR på sin celleoverflate i en biologisk prøve eller en levende organisme og hvor nevnte fremgangsmåte omfatter de følgende trinn: a) kontakte nevnte biologiske prøve eller levende organisme med et antistoff som beskrevet heri hvor nevnte antistoff er konjugert eller kov al ent bundet til en
påvisbar gruppe; og
b) påvise nærværet av nevnte antistoff i nevnte biologiske prøve eller levende organisme.
Det beskrives heri også en fremgangsmåte for å rense fra en prøve NK-celler som bærer en hemmende KIR på sin celleoverflate og hvor fremgangsmåten omfatter de følgende trinn: a) kontakte nevnte prøve med et antistoff som beskrevet heri under betingelser som gjør det mulig for nevnte NK-celler som bærer en hemmende KIR på sin celleoverflate å binde seg til nevnte antistoff, hvor nevnte antistoff er konjugert eller kovalent bundet til et fast underlag (for eksempel en perle, en matrise, osv.); og b) eluere nevnte bundne NK-celler fra nevnte antistoff konjugert eller kovalent bundet til et fast underlag.
Man har også funnet at antistoffet NKVSFl (Pan2D) også binder seg til NK-celler fra cynomolgusaper, se figur 10.
Beskrevet heri er derfor et antistoff så vel som fragmenter og derivater av dette hvor nevnte antistoff, fragment eller derivat tverreagerer med minst to hemmende humane KIR-reseptorer på overflaten av humane NK-celler og som ytterligere binder seg til NK-celler fra cynomolgusaper. I en utførelse er antistoffet ikke antistoffet NKVSFl, ikke A210 og/eller ikke A802g. Beskrevet heri er også en fremgangsmåte for å teste toksiteten for et antistoff så vel som fragmenter og derivater av dette hvor nevnte antistoff, fragment eller derivat tverreagerer med minst to hemmende humane KIR-reseptorer på overflaten av humane NK-celler hvor fremgangsmåten omfatter å teste antistoffet i en cynomolgusape.
I et ytterligere aspekt beskrives et antistoff, antistoffragment eller derivat av en av disse som omfatter det lettkjedevariable området eller ett eller flere lette variable områder CDRer fra antistoff 1-7F9 eller 1-4F1. I et ytterligere aspekt beskrives heri et antistoff, antistoffragment eller derivat av en av disse som omfatter en sekvens som er svært lik alle eller i alt vesentlig alle de lettkjedevariable områdesekvensene fra 1-7F9 eller 1-4F1.
I et ytterligere aspekt beskrives heri et antistoff, antistoffragment eller derivat av en av disse som omfatter det tungkjedevariable området eller ett eller flere lette variable områder CDR'er fra antistoff 1-7F9 eller 1-4F1. I et ytterligere aspekt beskrives et antistoff, antistoffragment eller derivat av en av disse som omfatter en sekvens som er svært lik alle eller i alt vesentlig alle de tungkjedevariable områdesekvensene fra 1-7F9 eller 1-4F1.
Antistoffer
Heri beskrives tilveiebringelse av nye antistoffer og fragmenter eller derivater av disse som binder seg til felles determinanter som er konservert blant humane hemmende KIR-reseptorer og som fortrinnsvis inkluderer en determinant som er tilstede på minst to forskjellige KIR2DL-genprodukter, men ikke på KIR2DS4 og som frembringer en forsterkning av NK-celler som uttrykker minst én av disse KIR-reseptorene. Her beskriver for første gang at slike tverreagerende og nøytraliserende antistoffer kan fremstilles og effektivt brukes ved modulering av NK-celleaktivitet, noe som representerer et uventet resultat og åpner for store muligheter med hensyn til nye og effektive NK-baserte terapier, da spesielt for mennesker.
I den foreliggende sammenhengen betegner en "felles determinant" en determinant eller epitop som er felles for flere genprodukter fra de humane hemmende KIR-reseptorene. Den felles determinanten er fortrinnsvis felles for minst to reseptorer fra KIR2DL-gruppen. Mer foretrukket er det at determinanten er felles for minst KIR2DL1 og KIR2DL2/3. Visse antistoffer i denne beskrivelse kan i tillegg til å gjenkjenne multiple genprodukter av KIR2DL-typen også gjenkjenne determinanter som er tilstede på andre hemmende KIRer så som genproduktet fra KIR3DL-reseptorgruppen, for eksempel KIR3DL1 og/eller KIR3DL2. Determinanten eller epitopen kan representere et peptidfragment eller en konform ell epitop som er felles for nevnte reseptorer. Antistoffet kan binde seg spesifikt til i alt vesentlig den samme epitopen som gjenkjennes av det monoklonale antistoffet DF200. Denne determinanten er tilstede både på KIR2DL1 og KIR2DL2/3. Antistoffet kan binde seg spesifikt til i alt vesentlig den samme epitopen som gjenkjennes av det humane mAb 1-7F9 eller den epitopen som gjenkjennes av det humane mAb 1-4F1, og hvor nevnte epitoper er tilstede på KIR2DL1, -2 og -3, men ikke på KIR2DS4.
Med begrepet "antistoffer" slik det brukes her, forstås polyklonale og monoklonale antistoffer så vel som fragmenter og derivater av nevnte polyklonale og monoklonale antistoffer, hvis intet annet klart er angitt eller klart er motsagt av sammenhengen. Avhengig av typen på det konstante domenet i de tunge kjedene, så vil fullengde antistoffer typisk være tilskrevet eller angitt i forhold til en av de fem hovedklassene: IgA, IgD, IgE, IgG og IgM. Flere av disse er ytterligere oppdelt i underklasser eller isotyper så som IgGl, IgG2, IgG3, IgG4 og lignende. De tungkjedekonstante domenene som tilsvarer de forskjellige klassene av immunglobuliner er henholdsvis betegnet "alfa", "delta", "epsilon", "gamma" og "my". Underenhetsstrukturene og de tredimensjonale konfigurasjonene på de forskjellige klassene av immunglobuliner er velkjente. IgG og/eller IgM er de foretrukne klasser for antistoffer som anvendes ifølge den foreliggende oppfinnelsen, ettersom de er de mest vanlige antistoffene i den fysiologiske situasjonen og fordi at de er de letteste å fremstille under laboratoriebetingelser. Typisk vil et "antistoff i sammenheng med den foreliggende oppfinnelsen referere seg til et monoklonalt antistoff, mer foretrukket et "humant" monoklonalt antistoff.
En utførelse av oppfinnelsen tilveiebringer en fremgangsmåte for å blokkere interaksjonen mellom et hemmende KIR og dens tilsvarende HLA-ligand in vivo for terapeutiske formål som innbefatter aktivering av endogene NK-celler. Under slike omstendigheter vil det være fordelaktig å unngå en fjerning av NK-celler, ettersom slike fraværende NK-celler da ikke vil kunne utøve sine terapeutisk fordelaktige effekter. Antistoffisotyper så som IgG4 og IgG2 som viser lite binding til Fc-reseptorer og følgelig ikke vil aktivere komplementsystemet, vil derfor typisk være foretrukket. Isotypen av 1-7F9 er IgG4. IgG2-antistoffer er også generelt ansett for å være ikke-fj ernende og vil ofte være mer stabile molekyler enn IgG4-antistoffer og vil derfor bidra til et lengre halvliv in vivo. 1-4F1 er av IgG2-isotypen.
Antistoffproduksjon
Antistoffene som beskrevet heri kan fremstilles ved hjelp av en rekke teknikker som er velkjente inne molekylærbiologien. Typisk vil de bli fremstilt ved å immunisere et ikke-humant dyr, fortrinnsvis en mus, med et immunogen som omfatter et hemmende KIR-polypeptid, fortrinnsvis et KIR2DL-polypeptid, mer foretrukket et humant KIR2DL-polypeptid. Det hemmende KIR-polypeptidet kan omfatte fullengdesekvensen fra et humant hemmende KIR-polypeptid, et fragment eller derivat av dette, typisk et immunogent fragment, det vil si en del av polypeptidet som omfatter en epitop som er eksponert på overflaten av den cellen som uttrykker en hemmende KIR-reseptor. Slike fragmenter vil typisk inneholdt minst omtrent 7 sammenhengende aminosyrer fra den modne polypeptidsekvensen eller mer foretrukket minst 10 sammenhengende aminosyrer fra denne. Fragmentene vil i alt vesentlig være avledet fra det ekstracellulære domenet i reseptoren. Enda mer foretrukket er et humant KIR2DL-polypeptid som inkluderer minst én, og fortrinnsvis begge, de ekstracellulære Ig-domenene fra det fullengde KIR2DL-polypeptidet og som er i stand til å etterligne minst én konformell epitop som er tilstede i en KIR2DL-reseptor. I andre utførelser omfatter nevnte polypeptid minst 8 sammenhengende aminosyrer fra et ekstracellulært Ig-domene fra aminosyreposisjonene 1-224 i KIR2DL1 -polypeptidet (aminosyrenummereringen er ifølge Wagtmann et al., Immunity 1995; 2: 439-449 eller ifølge PROW internetthjemmesiden som kan finnes på world wide web (www) -addressen ncbi.nlm.nih.gov/prow/guide/1326018082.htm).
I en utførelse omfatter immunogenet et villtype humant KTR2DL-polypeptid i en lipidmembran, typisk på overflaten av en celle. I en spesifikk utførelse omfatter immunogenet intakte NK-celler, da spesielt intakte humane NK-celler. I en annen utførelse er cellene oppløst eller på annen måte behandlet slik at de ikke er intakte. Immunogenet kan for eksempel være suspendert eller løst i en buffer, eventuelt med en adjuvant så som fullstendig Freunds adjuvant, før administrering til et ikke-humant dyr så som en mus, kanin, geit, hest, hund, sau, marsvin, rotte, hamster, osv.
Selve immuniseringen av et ikke-humant dyr med et antigen kan utføres på en måte som er velkjent for å stimulere produksjonen av antistoffer i en mus (se for eksempel E. Harlow og D. Lane, Antibodies: A Laboratory Manual., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1988)). Immunogenet blir så suspendert eller løst i en buffer, eventuelt med en adjuvant så som Freunds fullstendige adjuvant. Fremgangsmåter for å bestemme mengden av immunogen, typer av buffere og mengder av adjuvant er velkjente innenfor bioteknologien. Disse parametrene kan være forskjellige for forskjellige immunogener, men lar seg lett utlede.
På lignende måte er prinsipper som er relevante for valg av sted og frekvens med hensyn til immunisering som er tilstrekkelig for å stimulere produksjonen av antistoffer også velkjente innenfor bioteknologien. I et eksempel på en immuniseringsprotokoll blir de ikke-humane dyrene injisert intraperitonealt med antigenet på dag 1 og deretter omtrent en uke senere. Dette følges så opp ved supplerende injeksjoner av antigenet omkring dag 20, eventuelt med en adjuvant så som Freunds ufullstendige adjuvant. De supplerende injeksjonene kan utføres intravenøst og kan gjentas på flere påfølgende dager. Dette følges av en såkalt boosterinjeksjon på dag 40, enten intravenøst eller intraperitonealt, typisk uten adjuvant. Denne protokollen resulterer i produksjonen av antigenspesifikke antistoffproduserende B-celler etter omtrent 40 dager. Andre protokoller kan også brukes så lenge de resulterer i produksjonen av B-celler som uttrykker et antistoff som er rettet inn mot det antigenet som brukes ved immuniseringen.
For fremstilling av polyklonale antistoffer, blir serum oppnådd fra et immunisert ikke-humant dyr og de antistoffer som er tilstede der, isolert ved hjelp av velkjente teknikker. Nevnte serum kan affinitetsrenses ved å bruke enhver av de immunogener som er angitt ovenfor, festet til et fast underlag slik at det er mulig å få fremstilt antistoffer som reagerer med hemmende KIR-reseptorer.
I en alternativ metode blir lymfocytter fra ikke-immuniserte ikke-humane pattedyr isolert, dyrket in vitro og så eksponert for immunogenet i cellekulturen. Lymfocyttene kan så innhøstes, hvoretter man kan utføre det fusjonstrinn som er beskrevet ovenfor.
For monoklonale antistoffer så vil det neste trinnet være isoleringen av splenocytter fra det immuniserte ikke-humane pattedyret, hvoretter den etterfølgende fusjonen av disse splenocyttene med en immortalisert cellelinje vil gi grunnlaget for en antistoffproduserende hybridom. Isoleringen av splenocytter fra et ikke-humant dyr er velkjent innenfor bioteknologien og innbefatter typisk å fjerne milten fra et bedøvet ikke-humant dyr, skjære milten opp i små stykker og presse ut splenocyttene fra miltkapslene og gjennom et nylonnett i en cellesikt og inn i en passende buffer, hvorved man får fremstilt en enkeltcellesuspensjon. Cellene blir så vasket, sentrifugert og på nytt suspendert i en buffer som oppløser eventuelle røde blodceller. Løsningen blir igjen sentrifugert og de gjenværende lymfocyttene i pelleten blir så på nytt suspendert i frisk buffer.
Så snart de er isolert og tilstede i en enkeltcellesuspensjon, kan lymfocyttene fusjoneres til en immortal cellelinje. Dette vil typisk være en
musemyelomcellelinje, skjønt man også kan bruke mange andre immortale cellelinjer for fremstilling av hybridom er, noe som er velkjent innenfor bioteknologien. Foretrukne murine myelomlinjer inkluderer, men er ikke begrenset til, de som er avledet fra MOPC-21- og MPC-ll-musetumorer (tilgjengelige fra Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, Calif. U.S.A.) eller X63 Ag8653-og SP-2-cellelinjene (tilgjengelige fra the American Type Culture Collection, Rockville, Maryland U.S.A.). Cellefusjonen utføres ved å bruke polyetylenglykol eller lignende. De resulterende hybridomer kan så dyrkes i selektive media som inneholder ett eller flere stoffer som hemmer veksten eller overlevelsen av ufusjonerte, parenterale myelomceller. Hvis for eksempel de parenterale
myelomcellene mangler enzymet hypoxantinguaninfosforibosyltransferase (HGPRT eller HPRT), så vil dyrkningsmediet for hybridomene typisk inkludere hypoksantin, aminopterin og tymidin (HAT-medium) som er stoffer som hindrer veksten av celler med HGPRT-svikt.
Hybridomer blir typisk dyrket på et fødedag av makrofager. Makrofagene er fortrinnsvis fra søsken av det ikke-humane pattedyret som brukes for å isolere splenocytter og vil vanligvis være primet med Freunds ufullstendige adjuvans eller lignende flere dager før hybridomene blir utplatet. Fusjonsmetoder er for eksempel beskrevet i Goding, "Monoclonal Antibodies: Principles and Practice," sidene 59-103 (Academic Press, 1986).
Cellene blir dyrket i seleksjonsmedia i et tilstrekkelig langt tidsrom til at det danner seg kolonier og det produseres antistoffer. Dette vil vanligvis være mellom omtrent 7 og omtrent 14 dager. Hybridomkoloniene blir så bedømt for produksjonen av antistoffer som tverreagerer med multiple hemmende KIR-reseptorgenprodukter. Prøven er typisk en kolorimetrisk ELISA-typen, skjønt man kan også bruke flere andre typer av prøver, for eksempel immunutfelling og radioimmunitetsprøver eller FACS, Biacore, scintillasjonsnærhetsprøver (SPA) eller andre typer av prøver som er velkjente innenfor bioteknologien. De brønnene som inneholder antistoffene med den forønskede spesifitet blir så undersøkt for å bestemme hvorvidt en eller flere av de distinkte hybridomcellekoloniene er tilstede. Hvis mer enn én koloni er tilstede, kan cellene klones på nytt og dyrkes for å sikre at bare en enkelt celle har gitt opphav til den kolonien som produserer det forønskede antistoffet. Positive brønner med en enkelt tilsynelatende koloni blir typisk klonet på nytt og så undersøkt på nytt for å sikre at bare ett monoklonalt antistoff er blitt påvist og produsert.
Det ikke-humane dyret som brukes for å fremstille antistoffer ifølge de anvendbare fremgangsmåtene kan være et pattedyr så som en gnager (for eksempel en mus, rotte, osv.), et storfe, et svin, en hest, en kanin, en geit, en sau, osv. Det ikke-humane pattedyret kan også være genetisk modifisert eller manipulert slik at det fremstilles "humane" antistoffer så som Xenomusen™ (Abgenix) eller HuMAb-musen™ (Medarex), slik det er beskrevet i det etterfølgende.
Antistoffer kan også fremstilles transgenisk ved utviklingen av et kordat (så som et pattedyr eller en fugl) eller en plante som er transgen for de immunglobulin tunge og lette kjedesekvensene av interesse og som kan brukes for fremstilling av antistoffet i en innvinnbar form (se for eksempel Ma et al., Nature Rev. Genetics 4: 794-805 (2003); Nolke et al., Expert Opin Biol Ther. 2003 okt; 3(7): 1153-62; Schillberg et al., Cell Mol Life Sei. 2003 mars; 60(3): 433-45; Tekoah et al., Arch Biochem Biophys. 15. juni 2004; 426(2): 266-78; Fischer et al., Eur. J. of Biochem., 262(3): 810 (1999); og US patentsøknad 20030084482 som angår produksjonen av antistoffer og antistofflignende proteiner i planter). I forbindelse med transgen produksjon i pattedyr, så kan antistoffer og andre proteiner også fremstilles i og innvinnes fra melken fra geiter, kuer eller andre pattedyr. Se for eksempel US patentene 5,827,690, 5,756,687, 5,750,172 og 5,741,957. Antistoffer kan også fremstilles i eggene til fugler og innvinnes fra disse. Se for eksempel Tini et al., Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 2002 mars; 131(3): 569-74 og US-patent 4,550,019.
Antistoffer kan også fremstilles ved seleksjon i kombinatoriske bibliotek av immunglobuliner, slik det for eksempel er beskrevet i Ward et al., Nature, 341
(1989) side 544.
Det beskrives heri et hybridom som er avledet fra en B-celle fra en ikke-human vert, hvor nevnte B-celle produserer et antistoff som binder en determinant som er tilstede på minst to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenprodukter og hvor nevnte antistoff er i stand til å nøytralisere den hemmende aktiviteten til nevnte reseptorer. Mer foretrukket er det at hybridomet ifølge dette aspektet av denne beskrivelse ikke er et hybridom som fremstiller det monoklonale antistoffet NKVSFl, ikke A210 og/eller ikke A802g. Hybridomet ifølge dette aspektet av denne beskrivelse kan skapes eller dannes slik det er beskrevet ovenfor ved fusjonen av splenocytter fra et immunisert ikke-humant pattedyr med en immortal cellelinje. Hybridomer fremstilt ved denne fusjonen kan så screenes for nærværet av et slikt tverreagerende antistoff slik det er beskrevet i det etterfølgende. Det er foretrukket at hybridomet produserer et antistoff som gjenkjenner en determinant som er tilstede på minst to forskjellige KIR2DL-genprodukter og som vil gi en forsterkning av NK-celler som uttrykker minst en av disse KIR-reseptorene. Enda mer foretrukket er det at hybridomet fremstiller et antistoff som binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen eller determinanten som 1-7F9 og som forsterker NK-celleaktivitet eller binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen som 1-4F1. Mer foretrukket at hybridomet er et hybridom 1-7F9 som produserer det monoklonale antistoffet 1-7F9, eller hybridom 1-4F1 som produserer det monoklonale antistoffet 1-4F1.
Hybridomer hvor det er bekreftet at de fremstiller et monoklonalt antistoff som beskrevet heri kan dyrkes opp i større mengder i et passende medium så som DMEM eller RPMI-1640. Alternativt kan hybridomcellene dyrkes in vivo som ascitestumorer i et dyr.
Etter at veksten har vært tilstrekkelig til at man har fått fremstilt det forønskede monoklonale antistoffet, så kan vekstmediet inneholde det monoklonale antistoffet (eller ascitesvæsken) skilles fra cellene, hvoretter det monoklonale antistoffet renses. Rensing utføres typisk ved kromatografi ved å bruke protein A- eller protein G-sefarose eller et anti-mus lg bundet til et fast underlag så som agarose eller sefaroseperler (alle er for eksempel beskrevet i Antibody Purification Handbook, Amersham Biosciences, publikasjon nr. 18-1037-46, utgave AC, eller ved enhver annen kjent teknikk så som ved elektroforese eller dialyse. Det bundne antistoffet blir så eluert fra protein A/protein G-kolonner ved å bruke buffere med lav pH (glysin- eller acetatbuffere med pH på 3,0 eller mindre) og med en umiddelbar nøytralisering av de antistoffholdige fraksjonene. Disse fraksjonene kan slås sammen, dialyseres og konsentreres etter behov.
Humane antistoffer
Det beskrives heri humane anti-KIR-anti stoffer. "Humane" antistoffer skiller seg fra "humaniserte" antistoffer (som er beskrevet separat i det etterfølgende). Slike "humane" antistoffer kan inkludere aminosyrerester som ikke er kodet av humane kimlinje immunglobulinsekvenser (det kan for eksempel være innført mutasjoner ved vilkårlig eller setestyrt mutagenese in vitro eller ved en somatisk mutasjon in vivo), for eksempel i CDRer så som i CDR3. Begrepet "humant antistoff' slik det brukes her, er imidlertid ikke tenkt å inkludere humaniserte antistoffer eller humane/musekimære antistoffer hvor CDR-sekvensene avledet fra kimlinjen fra et annet pattedyr så som en mus og som er podet på de humane
rammeverkssekvensene.
Transgene dyr kan og er blitt utviklet som inneholder humane Ig-gener og som ved immunisering produserer et fullt repertoar av humane antistoffer i fravær av musimmunglobulinproduksjon. Slike humane lg-transgene mus kan brukes for å fremstille antistoffer. Slike humane antistoffer kan utvikles i humane Ig-transgene dyr (for eksempel mus, rotter, sauer, griser, geiter, storfe, hester, osv.) og omfatter humane immunglobulinloci og naturlige immunglobulingendelesj oner så som i en Xenomus™ (Abgenix - Fremont, CA, USA) (se for eksempel Green et al. Nature Genetics 7: 13-21 (1994); Mendez et al. Nature Genetics 15: 146-156 (1997); Green og Jakobovits J. Exp. Med. 188: 483-495 (1998); europeisk patent nr. EP 0 463 151 Bl; internasjonale patentsøknader nr. WO 94/02602, WO 96/34096, WO 98/24893, WO 99/45031, WO 99/53049 og WO 00/037504; og US-patentene 5,916,771, 5,939,598, 5,985,615, 5,998,209, 5,994,619, 6,075,181, 6,091,001, 6,114,598 og 6,130,364) eller transgene dyr som omfatter et minilocus for humane Ig-kodende gener så som HuMab-musen™ (Medarex - Princeton, NJ, USA) (se for eksempel EP 0546073, EP0546073; U.S. patent nr. 5,545,807, 5,545,806, 5,625,825, 5,625,126, 5,633,425, 5,661,016, 5,770,429, 5,789,650, 5,814,318, 5,591,669, 5,612,205, 5,721,367, 5,789,215, 5,643,763; og internasjonale patentsøknader nr. WO 92/03918, WO 92/22645, WO 92/22647, WO 92/22670, WO 93/12227, WO 94/00569, WO 94/25585, WO 96/14436, WO 97/13852 og WO 98/24884). Splenocytter fra slike transgene mus kan brukes for å produsere hybridomer som skiller ut humane monoklonale antistoffer ved hjelp av velkjente teknikker slik det er beskrevet her. Lignende teknikker og prinsipper er for eksempel beskrevet i Jakobovits et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA, 90: 2551-255 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362: 255-258 (1993); og Bruggemann et al., Year in Immuno., 7: 33
(1993).
Humane antistoffer eller antistoffer fra andre arter kan videre utvikles ved hjelp av såkalt display-typeteknologi som inkluderer, uten begrensning, fagdisplay, retroviraldisplay, ribosomaldisplay og andre beslektede teknikker ved å bruke fremgangsmåter som i seg selv er velkjente innenfor bioteknologien, hvoretter de resulterende molekylene kan underkastes ytterligere modningsmetoder så som en affinitetsmodning, og slike teknikker er også velkjente (se for eksempel (Hoogenboom et al ., J. Mol. Biol. 227: 381 (1991) (fagdisplay); Vaughan, et al., Nature Biotech 14: 309 (1996) (fagdisplay); Hanes og Plucthau PNAS USA 94: 4937-4942 (1997) (ribosomaldisplay); Parmley og Smith Gene 73: 305-318 (1988)
(fagdisplay); Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581 (1991); Scott TIBS 17: 241-245
(1992); Cwirla et al. PNAS USA 87: 6378-6382 (1990); Russel et al. Nucl. Acids Research 21: 1081-1085 (1993); Hoganboom et al. Immunol. Reviews 130: 43-68
(1992); Chiswell og McCafferty TH3TECH 10: 80-84 (1992); og US-patent 5,733,743). Hvis displayteknologiene brukes for å fremstille antistoffer som er ikke-humane, så kan slike antistoffer humaniseres slik det for eksempel er beskrevet i det etterfølgende.
Følgelig, som beskrevet her, så er anti-KIR mAb'er lovende midler for behandling av kreft og virusinfeksjoner og andre lidelser og sykdommer. Anti-KIR mAb'er kan utvikles ved hjelp av forskjellige fremgangsmåter så som ved humanisering av murine mAb'er eller ved fusjon av splenocytter fra humane lg-transgene mus (Xenomus eller HuMab-mus), ved fagdisplay eller ved immortalisering av humane Ab-produserende B-celler eller ved hjelp av andre metoder. I ethvert tilfelle kan antistoffet bli produsert ved hjelp av cellelinjer og renses i mengder som er egnet for formulering, pakking og injeksjon i pasienter som har behov for dette.
Rekombinant produksjon
Anti-KIR-anti stoffer kan også fremstilles med rekombinant ekspresjon i enkeltcelleorganismer så som i gjør; eller i bakteriecellekulturer (så som i E. coli) ; eller i en eukaryot cellekultur (for eksempel i en kultur av pattedyrceller) ved å bruke standardteknikker.
Således kan det DNA som koder de tunge og lette kjedene i et tverreaktivt og nøytraliserende anti-KIR-anti stoff og som binder en determinant som er tilstede på minst to forskjellige humane hemmende KIR, isoleres fra hybridomet som beskrevet heri og plasseres i en passende ekspresjonsvektor for transfeksjon i en passende vert. Verten kan så brukes for den rekombinante produksjonen av antistoffet eller varianter av dette så som en humanisert versjon av det monoklonale antistoffet, aktive fragmenter av antistoffet eller kimære antistoffer som omfatter den antigengjenkjennende delen av antistoffet. Det DNA som brukes i denne utførelsen bør fortrinnsvis kodet et antistoff som gjenkjenner en determinant som er tilstede på minst to forskjellige KIR2DL-genprodukter, men ikke på DIR2DS3 eller -4 og som forårsaker en forsterking av NK-celler som uttrykker minst én av disse KIR2DL-reseptorene. Det er enda mer foretrukket at nevnte DNA koder et antistoff som binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen eller determinanten som 1-7F9 og som forsterker NK-celleaktivitet. Mest foretrukket er det at DNA koder det monoklonale antistoffet 1-7F9.
DNA som koder de monoklonale antistoffene som er beskrevet heri lar seg lett isoleres og sekvenseres ved å bruke vanlig kjente fremgangsmåter (for eksempel ved å bruke oligonukleotidprober som er i stand til spesifikt å binde seg til gener som koder de tunge og lette kjedene av murine eller humane antistoffer). Så snart det er isolert, kan nevnte DNA plasseres i ekspresjonsvektorer som så kan transfekteres inn i vertsceller så som E. co//'-celler, simian COS-celler, kinesisk hamstereggstokk (CHO) -celler eller myelomceller som ellers ikke produserer immunglobulinprotein, hvorved man oppnår at de monoklonale antistoffene syntetiseres i de rekombinante vertscellene. Rekombinant ekspresjon i bakterier av DNA-kodende fragmenter av antistoffet er velkjent innenfor bioteknologien (se for eksempel Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol., 5, side 256 (1993); og Pluckthun, Immunol. Revs. 130, side 151 (1992).
Videre er det blitt beskrevet rekombinant produksjon av antistoffer fra kjente variable tunge (VH) og variable lette (VL) kjeder og humane konstante områder, for eksempel av Ruker et al. (Annals of the New York Academy of Sciences. 1991; 646: 212-219) som rapporterer ekspresjonen av et humant monoklonalt anti-HIV-1-antistoff i CHO-celler; Bianchi et al. (Biotechnology and Bioengineering. 2003; 84: 439-444) som beskriver høynivåekspresjon av fullengde antistoffer ved å bruke trans-komplementerende ekspresjonsvektorer; No Soo Kim et al. (Biotechnol. Prog. 2001; 17: 69-75) som beskriver nøkkeldeterminanter ved forekomsten av klonal variasjon ved humanisert antistoffekspresjon i CHO-celler ved dihydrofolat-reduktasemediert genampliifsering; King et al. (Biochemical Journal. 1992; 281: 317-323) som rapporterer ekspresjon, rensing og karakterisering av et mus-humant kimært antistoff og et kimært Fab'-fragment; WO 2003064606 som beskriver isolerte humane monoklonale antistoffer som omfatter humane tung- og humane lettkjedevariable områder og som begge omfatter FRI-, CDR1-, FR2-, CDR2-, FR3-, CDR3- og FR4-sekvenser; og WO 2003040170 som beskriver kimære eller humane monoklonale antistoffer og antigenbindende deler som spesifikt binder seg til og aktiverer humant CD40.
Hele de cDNA-sekvenser som koder de konstante områdene i humant IgG kan finnes i de følgende GenBank-innføringer, og som er innført 6. januar 2005:
Humant IgGl-konstant tungkjedeområde: GenBank aksesjon nr.: J00228
Humant IgG2-konstant tungkjedeområde: GenBank aksesjon nr.: J00230
Humant IgG3-konstant tungkjedeområde: GenBank aksesjon nr.: X04646
Humant IgG4-konstant tungkjedeområde: GenBank aksesjon nr.: KO 1316
Humant kappa lettkjede konstant område: GenBank aksesjon nr.: J00241.
Som et eksempel på en utførelse for å få fremstilt rekombinant mAb fra 1-7F9 eller 1-4F1 VH- og VL-sekvenser, så kan følgende protokoll anvendes. Trinnene 1-3 beskriver innvinning av VH- og VL-områdene fra et hybridom eller celler som produserer 1-7F9 eller 1-4F1. Det cDNA som koder de nevnte 1-7F9 eller 1-4F1 VH- og VL-sekvenser (eller mutanter eller derivater av disse) som skal brukes i trinn 4, kan imidlertid også fremstilles ved hjelp av den sekvensinformasjon som er gitt på figurene 14 eller 15, ved å bruke velkjente teknikker for syntese av cDNA-fragmenter. Alternativt kan VH- og VL-fragmentene fra 1-7F9 eller 1-4F1 eller mutanter eller derivater av disse, klones inn i enhver av en rekke forskjellige ekspresjonsvektorer som er beskrevet i litteraturen eller kommersielt tilgjengelige ekspresjonsvektorer og som inneholder et konstant område av den forønskede Ig-underklassen for derved å få uttrykt et fullengde antistoff. Alternativt kan VH- og VL-fragmentene av 1-7F9 eller 1-4F1 eller mutanter eller derivater av disse, klones inn i vektorer som koder forkortede eller trunkerte konstante områder for derved å få uttrykt antistoffragmenter (for eksempel Fab-fragmenter). Et eksempel på en kommersielt tilgjengelig vektor er pASK84 som er tilgjengeliv fra ATCC (American Type Culture Collection, katalognummer 87094).
(1) Isolering av totalt RNA fra hybridomceller:
4 x IO<6>hybridomceller (så som 1-7F9 eller 1-4F1) som skiller ut antistoffer mot humant KIR kan brukes for isolering av totalt RNA ved å bruke RNeasy mini settet fra Qiagen ved å følge fabrikantens anbefalinger og instruksjoner og som kort forklart er som følger: Cellene blir pelletert ved sentrifugering i 5 minutter ved 1000 rpm og deretter brutt i stykker ved å tilsette 350 ul RLT-buffer som inneholder 10 ul/ml P-merkaptoetanol. Lysatet blir overført til en QIA-opprivningskolonne fra Qiagen og sentrifugert i 2 minutter ved maksimal hastighet.
Gjennomstrømningsproduktet blir blandet med et tilsvarende volum av 70% etanol. Opptil en 700 ul prøve blir påsatt pr RNeasy spinnkolonne (Qiagen) og sentrifugert ved 14000 rpm, hvoretter gjennomstrømningsproduktet ble kastet. 700 ul RW1-buffer ble påsatt hver kolonne som så ble sentrifugert ved 14000 rpm i 15 sekunder for å vaske kolonnen. Kolonnen ble vasket to ganger med 500 ul RPE-buffer og sentrifugert ved 14000 rpm i 15 sekunder. For å tørke kolonnen blir den sentrifugert i ytterligere 2 minutter ved 14000 rpm. Kolonnen blir så overført til et nytt oppsamlingsrør og det forønskede RNA blir eluert med 50 ul nukleasefritt vann og sentrifugert i 1 minutt ved 14000 rpm. RNA-konsentrasjonen ble målt ved absorpsjon ved OD = 260 nm. RNA-produktet blir så lagret ved -80°C inntil det skal brukes.
(2) cDNA-syntese:
1 [ ig RNA blir brukt for en første tråds cDNA-syntese ved å bruke SMART RACE cDNA amplifiseringssettet fra Clontech. For fremstilling av 5'-RACE-Ready cDNA, blir det fremstilt en reaksjonsblanding som inneholder RNA isolert som beskrevet ovenfor, den reverse primeren 5'-CDS og SMART IIA oligo, og denne blandingen blir så innkubert ved 72°C i 2 minutter og deretter avkjølt på is i 2 minutter, før det tilsettes 1 x første tråds buffer, DTT (20 mM), dNTP (10 mM) og PowerScript revers transkriptase. Reaksjonsblandingen ble innkubert ved 42°C i 1,5 timer og så tilsatt tricin-EDTA-buffer, hvoretter blandingen innkuberes ved 72°C i 7 minutter. På dette punktet kan prøvene lagres ved -20°C. (3) PCR-amplifisering og kloning av humane variable lette (VL) og humane variable tunge (VH) -kjeder.
Det blir fremstilt en PCR (polymerasekjedereaksjon) -reaksjonsblanding som inneholder 1 x Advantage HF 2 PCR-buffer, dNTP (lOmM) and 1 x Advantage HF 2-polymerase for separat amplifisering av de variable områdene av både VL og VH fra cDNA fremstilt som beskrevet ovenfor.
For amplifisering av VL, ble de følgende primere brukt:
UPM (unversiell primerblanding):
For amplifisering av VH, ble de følgende primere brukt:
UPM (universell primerbl anding):
Det ble gjennomført tre runder med PCR. Runde 1: PCR ble kjørt i 5 sykluser ved 94°C i 5 sekunder og 72°C i 3 minutter. Runde 2: PCR ble kjørt i 5 sykluser ved 94°C i 5 sekunder, 70°C i 10 sekunder og så 72°C i 1 minutt. Runde 3: PCR ble kjørt i 28 sykluser ved 94°C i 5 sekunder, 68°C i 10 sekunder og 72°C i 1 minutt.
PCR-produktene ble analysert ved elektroforese på en 1% agarosegel og det fremstilte DNA ble renset fra gelen ved å bruke QIAEX11
agarosegelekstraksjonssettet fra Qiagen.
De rensede PCR-produktene ble innført i PCR4-TOPO-vektoren ved å bruke TOPO TA kloningssettet fra Invitrogen og brukt for transformering av TOP10-kompetente celler.
Et egnet antall kolonier ble analysert ved koloni-PCR ved å bruke Taq-polymerase, 1 x Taq-polymerasebuffer, dNTP (10 mM) og de følgende primere og et PCR-program:
PCR-program:
25 sykluser ble kjørt ved 94°C i 30 sekunder, 55°C i 30 sekunder og 72°C i 1 minutt.
Plasmid DNA fra kloner som omfattet VL- og VH-innsettingene henholdsvis, ble ekstrahert og sekvensert ved å bruke primeren Ml3 forover og Ml3 revers som angitt ovenfor. I forbindelse med det humane anti-KTR-mAb 1-7F9, så er de sekvensene som koder de tung- og lettkjedevariable områdene vist på figur 15. (4) Subkloning av antistoffgener i pattedyrekspresjonsvektorer Basert på sekvensdata for de cDNA-molekyler som koder de tung- og lettkjedevariable områdene for nevnte mAb, ble det utformet primere for amplifisering av de variable lette (VL) og variable tunge (VH) kjedegenene henholdsvis. De variable områdene ble formatert ved hjelp av PCR til å inkludere en Kozaksekvens, en ledersekvens og unike restriksjonsenzymseter. For VL-kjeden ble dette oppnådd ved å utforme 5' PCR-primere som introduserte et Hindlll-sete og slik at Kozaksekvensen ble homolog til 5'-enden av ledersekvensen i det variable lettkjedeområdet. 3'-primeren er homolog til 3'-enden i det variable området og det ble innført et BsiWI-sete ved 3'-grensen til det variable området. VH-området blir utviklet på lignende måte, bortsett fra at et Noti- og Nhel-sete ble innført i 5'- og 3'-endene i stedet for Hindlll og BsiWI henholdsvis.
De amplifiserte genproduktene ble hver klonet inn i en eukaryot ekspresjonsvektor som inneholdt de lett- og tungkjedekonstante områdene ved hjelp av standardteknikker. VL DNA-fragmentene blir kuttet med Hindlll og BsiWI og ligert inn i en eukaryot ekspresjonsvektor som inneholdt beta-laktamasegenet som koder resistens for ampicillin og et E. coli replikasjonsorigo (pUC); og det resulterende plasmidet ble betegnet VLCL. VH DNA-fragmentene ble kuttet med Noti og Nhel og innført i VLCL-vektoren som var et resultat fra innføringen av VL-fragmentet som beskrevet ovenfor. Det resulterende plasmidet inneholder funksjonelle ekspresjonskassetter som koder både de tunge og lette kjedene til antistoffet på det samme plasmidet. Det ligerte plasmidet ble brukt for å transformere E. coli. Plasmid DNA ble fremstilt fra disse ampicillinresistente bakteriepopulasj onene og ble så brukt for en transfeksjon i kinesiske hamstereggstokkceller eller andre pattedyrcellelinjer. Transfeksjonen og celledyrkingen ble utført ved hjelp av standardmetoder slik det for eksempel er beskrevet i "Molecular Cloning" av Sambrook et al. Resultatet er transfekterte cellelinjer som stabilt uttrykker og skiller ut antistoffmolekylet av interesse så som 1-7F9 eller 1-4F1 humane anti-KTR-mAb eller et mAb som omfatter VH- og VL-områdene for 1-7F9 eller 1-4F1 eller et annet humant anti-KTR-mAb.
Varianter av antistoffet kan lett utvikles. For eksempel kan det fremstilles et antistoff med den nøyaktig samme spesifiteten som 1-7F9 eller 1-4F1, men av en annen isotype enn IgG4 eller IgG2 henholdsvis ved å subklone nevnte cDNA som koder VL og VH fra 1-7F9 eller 1-4F1 i plasmider som inneholder et cDNA som koder de kappa-lettkjedekonstante områdene og et tungkjedekonstant område som er valgt fra IgGl- eller IgG2- eller IgG3- eller IgG4-kostante tungkjedeområder. Det kan således utvikles et antistoff som er av enhver isotype, hvoretter antistoffet kan isotypeveksles ved å bruke vanlig kjent teknikk. Slike teknikker inkluderer bruken av direkte rekombinante teknikker (se for eksempel US patent 4,816,397), celle-cellefusjonsteknikker (se for eksempel US patent 5,916,771) eller andre egnede teknikker som er velkjente innenfor bioteknologien. Effektorfunksjonen av antistoffer som er tilveiebrakt heri kan således "forandres" med hensyn til isotypen fra det opprinnelige antistoffet ved isotypeveksling, for eksempel til et IgGl -, IgG2-, IgG3-, IgG4-, IgD-, IgA-, IgE- eller IgM-antistoff for forskjellige anvendelser, inklusivt for terapeutiske formål.
I ytterligere aspekter beskrives heri et hybridom som omfatter: (a) en B-celle fra en pattedyrvert (typisk en ikke-human pattedyrvert) som er blitt immunisert med et antigen som omfatter en epitop som er tilstede på et hemmende KIR-polypeptid, fusjonert til (b) en immortalisert celle (for eksempel en myelomcelle) hvor nevnte hybridom produserer et monoklonalt antistoff som binder seg til minst to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorer og som er i stand til i det minste i alt vesentlig å nøytralisere en KIR-mediert hemming av NK-cellecytotoksitet i en populasjon av NK-celler som uttrykker nevnte minst to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorer. I en utførelse er pattedyrverten et transgent dyr som er i stand til å produsere humane antistoffer. Eventuelt så vil nevnte hybridom ikke produsere det monoklonale antistoffet NKVSFl, ikke A210 og/eller ikke A802g. I forskjellige utførelser binder antistoffet KIR2DL1- og KIR2DL2/3-reseptorer eller en felles determinant som er tilstede både på KIR2DL1 og KIR2DL2/3. Hybridomet kan produsere et antistoff som er i stand til å hemme bindingen av et HLA-C-allelmolekyl med en Lys-rest i posisjon 80 til en human KIR2DL1-reseptor og bindingen av et HLA-C-allelmolekyl med en Asn-rest i posisjon 80 til humane KIR2DL2/3-reseptorer. For eksempel kan man ved hjelp av hybridomet få fremstilt et antistoff som binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen som det monoklonale antistoffet 1-7F9 eller 1-4F1 på enten KIR2DL1 eller KIR2DL2/3 eller både KIR2DL1 og KIR2DL2/3.
Det beskrives også heri fremgangsmåter for produksjon av et antistoff som tverreagerer med multiple KIR2DL-produkter og som produserer eller nøytraliserer den hemmende aktiviteten til slike KIR, og hvor nevnte fremgangsmåte omfatter de følgende trinn: (a) immunisering av et ikke-humant pattedyr med et immunogen som omfatter et KIR2DL-polypeptid; (b) fremstille antistoffer fra nevnte immuniserte pattedyr hvor nevnte antistoffer binder nevnte KIR2DL-polypeptid; (c) velge ut antistoffer fra (b) som tverreagerer med minst to forskjellige KIR2DL-genprodukter; og
(d) velge antistoffer fra (c) som forsterker NK-celler.
I en utførelse er nevnte ikke-humane pattedyr et transgent dyr som er manipulert slik at det uttrykker et humant antistoffrepertoar (for eksempel et ikke-humant pattedyr som omfatter humane immunglobulinloci og naturlige immunglobulingendel esj oner så som en Xenomus™ (Abgenix - Fremont, CA, USA) eller et ikke-humant pattedyr som omfatter et minilocus for humane Ig-kodende gener så som HuMab-musen™ (Medarex - Princeton, NJ, USA)). Eventuelt kan trinn a og b erstattes med alternative fremgangsmåter for å oppnå anti-KIR-mAb inklusive, uten begrensning, bruken av fagdisplay eller viral transduksjon av humane B-celler eller ved hjelp av andre fremgangsmåter som er velkjente innenfor bioteknologien. Eventuelt kan fremgangsmåten ytterligere omfatte en seleksjon av et antistoff som binder seg til KIR i en primat, fortrinnsvis en cynomolgusape, NK-celle eller KIR-polypeptid. Eventuelt kan beskrivelsen ytterligere relatere til en fremgangsmåte for å bedømme et anti-KIR-anti stoff hvor et antistoff fremstilt ved hjelp av de fremgangsmåter som er beskrevet ovenfor blir administrert en primat, en fortrinnsvis en cynomolgusape, fortrinnsvis hvor apen blir observert for nærvær eller fravær av en indikasjon på antistoffets toksitet.
Det beskrives også heri en fremgangsmåte for å produsere et antistoff som binder seg til minst to forskjellige humane KIR-reseptorgenprodukter hvor antistoffet er i stand til å nøytralisere en KIR-mediert eller -kontrollert hemming av cytotoksitet (eller forsterke NK-cytotoksitet) av en populasjon av NK-celler som uttrykker de minst to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenproduktene og hvor fremgangsmåten omfatter de følgende trinn: a) immunisering av et ikke-humant pattedyr med et immunogen som omfatter et hemmende KIR-polypeptid; b) fremstille antistoffer fra det immuniserte dyret og hvor antistoffene binder KIR-polypeptidet; c) velge antistoffer fra (b) som tverreagerer med minst to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenprodukter; og
velge ut antistoffer fra (c) som er i stand til å nøytralisere en KIR-mediert hemming av NK-cellecytotoksitet i en populasjon av NK-celler som uttrykker de i det minste to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenprodukter hvor rekkefølgen av trinnene (c) og (d) eventuelt kan reverseres og hvor ethvert antall av trinnene eventuelt kan gjentas en eller flere ganger. Det hemmende KIR-polypeptidet som brukes for immunisering kan i en utførelse være en eller flere KIR2DL-polypeptider og de antistoffene som velges i trinn (c) vil kunne tverreagere med minst KIR2DL1 og KIR2DL2/3. Det er foretrukket at antistoffet gjenkjenner en felles determinant som er tilstede på minst to forskjellige KIR-reseptorgenprodukter og nevnte KIR er fortrinnsvis KIR2DL1 og KIR2DL2/3. I en utførelse omfatter trinn (c) en seleksjon av antistoffer som reagerer med minst ett KIR2DL- eller ett KIR3DL-reseptorgenprodukt. For eksempel kan det valgte antistoffet reagere med KIR2DL1 og KIR2DL2/3 så vel som KIR3DL1 og/eller KIR3DL2. Eventuelt kan fremgangsmåten ytterligere omfatte en seleksjon eller et valg av et antistoff som binder en primat, fortrinnsvis en cynomolgusape, NK-celle eller KIR-polypeptid. Eventuelt kan beskrivelsen ytterligere beskrive en fremgangsmåte for å bedømme et antistoff hvor et antistoff fremstilt ifølge den ovennevnte fremgangsmåten blir administrert en primat, fortrinnsvis en cynomolgusape og fortrinnsvis hvor apen blir observert for nærvær eller fravær på en indikasjon på antistoffets toksitet.
I de ovenfor beskrevne fremgangsmåtene så kan eventuelt det antistoffet som er valgt i trinn c) elle d) ikke være NKVSFl, ikke A210 og/eller ikke A802g. Antistoffet fremstilt i trinn (b) i de ovennevnte fremgangsmåtene er fortrinnsvis et monoklonalt antistoff. Det antistoffet som er valgt i trinn (c) i ovennevnte fremgangsmåter hemmer fortrinnsvis bindingen av en eller flere HLA-C-allotyper med en Lys-rest i posisjon 80 til en human KIR2DL1-reseptor og bindingen av en eller flere HLA-C-allotyper med en Asn-rest i posisjon 80 til humane KIR2DL2/3-reseptorer. De antistoffer som er valgt i trinn (d) i de ovennevnte fremgangsmåtene bør fortrinnsvis frembringe en forsterkelse av NK-cytotoksitet eller en nøytralisering av en KIR-mediert eller -kontrollert hemming av NK-cytotoksitet. Det er foretrukket at antistoffet binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen som det monoklonale antistoffet 1-7F9 på KIR2DL og/eller KIR2DL2/3. Eventuelt kan fremgangsmåtene også eller alternativt omfatte ytterligere trinn for fremstilling av fragmenter av de valgte monoklonale antistoffene for fremstilling av derivater av de valgte monoklonale antistoffene (for eksempel ved konjugering med et radionuklid, cytotoksisk middel, reportermolekyl eller lignende) eller for fremstilling av derivater av antistoffragmenter fremstilt fra, eller som omfatter sekvenser som tilsvarer sekvensene i slike monoklonale antistoffer. I et annet aspekt kan en variant av et slikt antistoff produseres ved å fremstille et antistoff som omfatter en variantaminosyresekvens fra antistoffet fremstilt ved de ovennevnte beskrevne fremgangsmåtene, ved å bruke kjente genetiske manipuleringsmetoder (for eksempel en sekvens som er modifisert slik at den forandrer bindingsegenskapene til antistoffet, øker eller senker stabiliteten til antistoffet, bedrer rensing av antistoffet, bedrer påvisning av antistoffet og/eller forandrer antistoffets immunologiske egenskaper med hensyn til en vert som antistoffet eventuelt skal administreres).
Det beskrives videre heri en fremgangsmåte for fremstilling av et antistoff som binder minst to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenprodukter hvor antistoffet er i stand til å nøytralisere en KIR-mediert eller -kontrollert hemming av NK-cellecytotoksitet (eller forsterke NK-cytotoksitet) i en populasjon av NK-celler som uttrykker minst én av de forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenproduktene og hvor fremgangsmåten omfatter de følgende trinn: (a) å velge fra et bibliotek eller repertoar et monoklonalt antistoff eller et antistoffragment som tverreagerer med minst to forskjellige humane hemmende KIR2DL-reseptorgenprodukter, og (b) å velge et antistoff fra (a) som er i stand til å nøytralisere den KIR-medierte hemmingen av NK-cellecytotoksitet i en populasjon av NK-celler som uttrykker minst to forskjellige humane hemmende KIR2DL-reseptorgenprodukter. Fortrinnsvis bør antistoffet binde en felles determinant som er tilstede på KIR2DL1 og KIR2DL2/3. Eventuelt er antistoffet som er valgt i trinn (b) ikke NKVSFl. Antistoffet som er valgt i trinn (b) hemmer fortrinnsvis bindingen av et HLA-C-allelmolekyl med en Lys-rest i posisjon 80 til en human KIR2DL1-reseptor og bindingen av et HLA-C-allelmolekyl med en Asn-rest i posisjon 80 til humane KIR2DL2/3-reseptorer. Antistoffet som er valgt i trinn (b) frembringer fortrinnsvis en forsterkning av NK-cytotoksitet. Antistoffet binder seg fortrinnsvis i alt vesentlig til den samme epitopen som det monoklonale antistoffet 1-7F9 på KIR2DL1 og/eller KIR2DL2/3. Alternativt binder antistoffet seg i alt vesentlig til den samme epitopen som det monoklonale antistoffet 1-4F1. Eventuelt omfatter fremgangsmåten ytterligere trinn for fremstilling av fragmenter av de valgte monoklonale antistoffene for fremstilling av valgte monoklonale antistoffer eller for fremstilling av derivater av valgte monoklonale antistoffragmenter.
Videre beskrives heri en ytterligere fremgangsmåte for fremstilling av et antistoff som binder seg til minst to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenprodukter hvor antistoffet er i stand til å nøytralisere en KIR-mediert hemming av NK-cellecytotoksitet i en populasjon av NK-celler som uttrykker minst en av de to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenproduktene og hvor fremgangsmåten omfatter de følgende trinn:
a) dyrking av en hybridom som er beskrevet heri under betingelser som muliggjør produksjonen av det monoklonale antistoffet; og b) separere det monoklonale antistoffet fra hybridomcellene. Eventuelt kan fremgangsmåten omfatte ytterligere trinn for fremstilling av fragmenter av det
monoklonale antistoffet for fremstilling av derivater av det monoklonale antistoffer eller for fremstilling av derivater av slike monoklonale antistoffragmenter. Antistoffet binder seg fortrinnsvis til en felles determinant som er tilstede på KIR2DL1 og KTR2DL2/3.
Det beskrives også heri en fremgangsmåte for fremstilling av et antistoff som binder seg til minst to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenprodukter hvor antistoffet er i stand til å nøytralisere en KIR-mediert hemming av NK-cellecytotoksitet i en populasjon av NK-celler som uttrykker minst en av de to forskjellige hemmende KIR-reseptorproduktene og hvor fremgangsmåten omfatter de følgende trinn: a) å isolere fra et hybridom som er beskrevet heri en nukleinsyre som koder det monoklonale antistoffet; b) eventuelt modifisere nukleinsyren slik at man får oppnådd en modifisert nukleinsyre som omfatter en sekvens som koder et modifisert eller derivatisert antistoff som omfatter en aminosyresekvens som tilsvarer en funksjonell sekvens i det monoklonale antistoffet eller i alt vesentlig er likt dette (for eksempel er minst omtrent 65%, minst omtrent 75%, minst omtrent 85%, minst omtrent 90%, minst omtrent 95% (så som omtrent 70-99%) identisk med en slik sekvens) valgt fra et humanisert antistoffet, et kimært antistoff, et enkeltkjedeantistoff, et immunreaktivt fragment av et antistoff eller et fusjonsprotein som omfatter et slik immunreaktivt fragment; c) å innsette nukleinsyren eller den modifiserte nukleinsyren (eller en beslektet nukleinsyre som koder for den samme aminosyresekvensen) i en ekspresjonsvektor hvor det kodede antistoffet eller antistoffragmentet er i stand til å bli uttrykt når ekspresjonsvektoren er tilstede i en vertscelle som dyrkes under passende betingelser; d) å transfektere en vertscelle med ekspresjonsvektoren, hvor vertscellen ikke ellers produserer immunglobulinprotein; e) å dyrke den transfekterte vertscellen under betingelser som gjør at antistoffet eller antistoffragm entet blir uttrykt; og f) å isolere antistoffet eller antistoffragm entet produsert av den transfekterte vertscellen. Antistoffet binder fortrinnsvis en felles determinant som er tilstede på
KIR2DL1 og KIR2DL2/3.
Antistoffscreening og seleksjon
Spesielle antistoffer som beskrevet heri er i stand til å redusere eller nøytralisere den KTR-medierte hemmingen av NK-cellecytotoksitet; spesielt hemming som er mediert eller kontrollert av KIR2DL-reseptorer og mer spesielt minst både KIR2DL1- og KIR2DL2/3-mediert hemming. Disse antistoffene er således "nøytraliserende", "blokkerende" eller "hemmende" antistoffer i den forstand at de reduserer, nøytraliserer og/eller blokker i det minste delvis og påvisbart, den hemmende signaliserende reaksjonssekvensen som er mediert eller kontrollert av KIR-reseptorer når disse virker sammen med MHC klasse I-molekyler. Mer viktig er det at denne nøytraliseringsakti vi teten skjer eller blir oppvist med hensyn til flere typer hemmende KIR-reseptorer, fortrinnsvis flere KIR2DL-reseptorgenprodukter og mer foretrukket minst både KIR2DL1 og KIR2DL2/3 slik at disse antistoffene kan brukes i de fleste eller alle menneskep asi enter med høy effekt. Nøytralisering av KIR-mediert hemming av NK-cellecytotoksitet kan bedømmes eller undersøkes ved hjelp av forskjellige prøver eller tester så som ved hjelp av de standard in vitro cellulære cytotoksitetprøver som er beskrevet her.
Så snart det er blitt identifisert et antistoff som tverreagerer med multiple hemmende KIR-reseptorer, så kan det testes for sin evne til å redusere eller nøytralisere den hemmende effekten av disse KIR-reseptorene i intakte NK-celler. I en spesifikk variant kan den nøytraliserende aktiviteten illustreres ved nevnte antistoffs evne til å rekonstituere oppløsning av KIR2DL-uttrykkende NK-celler av mål som uttrykker HLA-C. I en annen spesifikk utførelse er antistoffet nøytraliserende aktivitet definert ved antistoffets evne til å blokkere eller redusere bindingen av HLA-C-molekyler til KIR2DL1 og KIR2DL3 (eller den nær beslektede KIR2DL2) -reseptorer og ytterligere fortrinnsvis ved antistoffets evne til å endre bindingen av KIR2DL2/3 til et HLA-C-molekyl valgt fra Cwl, Cw3, Cw7 og Cw8 (eller et annet HLC-C-molekyl med en Asn-rest i posisjon 80) og/eller bindingen av KIR2DL1 til et HLA-C-molekyl valgt fra Cw2, Cw4, Cw5 og Cw6 (eller et annet HLA-C-molekyl med en Lys-rest i posisjon 80).
I en annen variant kan antistoffets nøytraliserende aktivitet bedømmes i en cellebasert cytotoksitetsprøve slik dette er beskrevet i de etterfølgende eksemplene.
I en annen variant kan den nøytraliserende aktiviteten til et antistoff som beskrevet heri bedømmes i en cytokinfrigjøringsprøve hvor NK-cellene innkuberes med testantistoffet og en målcellelinje som uttrykker et HLA-C-allel som gjenkjennes av et KIR-molekyl fra NK-populasjonen for å stimulere NK-cellecytokinproduksjon (for eksempel IFN-y- og/eller GM-CSF-produksjon). I et eksempel på en protokoll blir IFN-y-produksjon fra PBMC bedømt ved celleoverflate og intracytoplasmatisk farging og analyse ved flowcytometri etter 4 dager i kultur. Kort beskrevet blir brefeldin A (Sigma Aldrich) tilsatt til en sluttkonsentrasjon på omtrent 5 ug/ml i løpet av minst 4 timer av dyrkingen. Cellene kan så innkuberes med anti-CD3 og anti-CD56 mAb før permeabilisering (IntraPrep™; Beckman Coulter) og farming med PE-anti-IFN-y eller PE-IgGl (Pharmingen). GM-CSF- og IFN-produksj on fra polyklonale aktiverte NK-celler kan måles i supernatantene ved å bruke ELISA (GM-CSF: DuoSet Elisa, R&D Systems, Minneapolis, MN; IFN-y: OptElA-sett, Pharmingen).
Antistoffer som beskrevet heri kan delvis (det vil si redusere) eller fullt ut nøytralisere den KIR-medierte hemmingen av NK-cellecytotoksitet. For eksempel er foretrukne antistoffer som beskrevet heri i stand til å indusere eller forsterke oppløsningen av HLA-matchede eller HL A-kompatible eller autologe målcellepopulasjoner, det vil si målpopulasjoner som ikke effektivt vil bli oppløst av NK-celler i fravær av nevnte antistoff. Antistoffene beskrevet heri kan følgelig også defineres ved at de letter NK-celleaktivitet in vivo og/eller in vitro.
Antistoffet binder seg i alt vesentlig til den samme epitopen som det monoklonale antistoffet DF200 (fremstilt av hybridom DF200), 1-7F9 eller 1-4F1. Slike antistoffer er her betegnet som henholdsvis "DF200-lignende antistoffer", "1-7F9-lignende antistoffer" og "1-4F1-lignende antistoffer". I en foretrukket utførelse er antistoffet et monoklonalt antistoff. "DF200-lignende antistoffer" beskrevet heri er mer foretrukne antistoffer som er forskjellige fra det monoklonale antistoffet NKVSFl. Mest foretrukket er det monoklonale antistoffet 1-7F9 eller 1-4F1 og hvor antistoffene omfatter VH- og/eller VL-områdene av 1-7F9 eller 1-4F1.
Identifikasjonen av ett eller flere antistoffer som binder seg i alt vesentlig eller essensielt til den samme epitopen som de monoklonale antistoffene som er beskrevet her, kan lett bestemmes ved å bruke en av en rekke forskjellige immunologiske screeningsprøver hvor antistoffkonkurranse kan bedømmes. En rekke slike prøver blir rutinemessig praktisert og er velkjente innenfor bioteknologien (for eksempel U.S. patent nr. 5,660,827, utstedt 26. august 1997). Det er underforstått at det å bestemme epitopen til hvilken antistoffet binder seg til, ikke på noen som helst måte er nødvendig for å identifisere et antistoff som binder seg til den samme eller i alt vesentlig den samme epitopen som det monoklonale antistoffet som er beskrevet her.
I de tilfeller hvor de testantistoffene som skal undersøkes er oppnådd fra forskjellige dyrekilder eller endog har en forskjellig lg-isotype, så kan man for eksempel bruke en enkel konkurranseprøve hvor kontrollantistoffet (for eksempel DF200) blandes med testanti stoffet og så påsettes en prøve som inneholder en eller begge KIR2DL1 og/eller KIR2DL2/3, som hver er kjent for å bli bundet av DF200. Protokoller basert på ELISA-prøver, radioimmunoprøver, Western blotting og bruk av en BIACORE-analyse (som for eksempel beskrevet i de etterfølgende eksemplene), er egnet for bruk i slike enkle konkurranseundersøkelser.
I visse utførelser vil man på forhånd blande kontroll antistoffet (for eksempel 1-7F9 eller 1-4F1) med varierende mengder av testanti stoffet (for eksempel i forhold på omtrent 1:1, 1:2, 1:10 eller omtrent 1:100) i et visst tidsrom før blandingen tilsettes KIR-antigenprøven. I andre utførelser kan kontrollprøven og varierende mengder av testanti stoffet ganske enkelt tilsettes separat og blandes under eksponering overfor KIR-antigenprøven. Så lenge man kan skille de bundne fra de frie antistoffene (for eksempel ved å bruke separasjon eller forskjellige vasketeknikker for å eliminere ubundne antistoffer) og kontrollantistoffet fra testantistoffet (for eksempel ved å bruke artsspesifikke eller isotypespesifikke sekundære antistoffer eller ved spesifikt å merke kontrollantistoffet med en påvisbar markør), vil man være i stand til å bestemme hvorvidt testantistoffet reduserer bindingen av kontrollantistoffet til de forskjellige KIR2DL-antigenene, noe som indikerer at testantistoffet gjenkjenner i alt vesentlig den samme epitopen som 1-7F9. Bindingen av det (merkede) kontrollantistoffet i nærvær av et fullstendig irrelevant antistoff (som ikke binder KIR), kan tjene som kontrollhøyverdien. Kontrollavverdien kan oppnås ved å innkubere det merkede kontrollantistoffet med det samme men umerkede kontrollantistoffet, hvor det vil skje en konkurranse og redusere bindingen av det merkede antistoffet. I en testprøve vil en signifikant reduksjon av reaktiviteten for det merkede antistoffet i nærvær av et testantistoff være en indikasjon på at testantistoffet i alt vesentlig gjenkjenner den samme epitopen, det vil si en som konkurrerer med det merkede kontrollantistoffet. Ethvert testantistoff som for eksempel reduserer bindingen av 1-7F9 eller 1-4F1 til både KIR2DL1- og KIR2DL2/3-antigenene med minst omtrent 50%, så som minst 60% eller mer foretrukket minst omtrent 70% (for eksempel 65-100%), ved ethvert forhold mellom l-7F9:testantistoff eller 1-4F1:antistoff mellom omtrent 1:1 eller 1:10 eller omtrent 1:100, anses å være et antistoff som i alt vesentlig binder seg til den samme epitopen eller determinanten som 1-7F9 eller 1-4F1 henholdsvis. Et slikt testantistoff vil fortrinnsvis redusere bindingen av 1-7F9 til minst en annen, fortrinnsvis hver av KIR2DL-antigenene, fortrinnsvis ved minst omtrent 50%, minst omtrent 60%, minst omtrent 80% eller minst omtrent 90% (for eksempel omtrent 95%) av bindingen av 1-7F9 eller 1-4F1 som blir observert i fravær av testantistoffet. Slike fremgangsmåter kan selvsagt tilpasses slik at de kan brukes for å identifisere og/eller bedømme antistoffer som konkurrerer med andre antistoffer og/eller KIR-antigener.
Konkurranse kan også eller alternativt bedømmes, for eksempel ved hjelp av en flowcytometritest. I en slik test eller prøve blir celler som bærer et gitt KIR innkubert først med et kontroll antistoff (for eksempel 1-7F9 eller 1-4F1) og så med testantistoffet merket med en fluorokrom eller biotin. Antistoffet angis å konkurrere med kontrollantistoffet hvis den bindingen som oppnås ved preinnkuberingen med en mettende mengde av kontrollantistoffet er omtrent 80%, fortrinnsvis omtrent 50%, omtrent 40% eller mindre (for eksempel omtrent 30%) av bindingen (slik den måles ved hjelp av fluorescens) som er oppnådd med testantistoffet uten preinnkubering med kontrollantistoffet. Alternativt kan det angis at et antistoff konkurrerer med kontrollantistoffet hvis bindingen som oppnås med et merket kontroll antistoff (ved hjelp av en fluorokrom eller biotin) på celler som er preinnkubert med en mettende mengde av testantistoffet er omtrent 80%, fortrinnsvis omtrent 50%, omtrent 40% eller mindre (for eksempel omtrent 30%) av den bindingen som oppnås uten preinnkubering med testantistoffet.
En enkel og fordelaktig konkurranseprøve som kan anvendes er en hvor et testantistoff preabsorberes og påsettes ved mettende konsentrasjon på en overflate hvor enten KXR2DL1 eller KXR2DL2/3 eller begge er immobilisert. Overflaten i denne enkle konkurranseprøven er fortrinnsvis en BIACORE-brikke (eller et annet medium som er egnet for overflateplasmonresonansanalyse). Man kan så måle bindingen av et kontrollantistoff (for eksempel 1-7F9 eller 1-4F1) på den KIR-belagte overflaten. Denne bindingen av kontrollantistoffet alene til den KTR-holdige overflaten kan så sammenlignes med bindingen av kontrollantistoffet i nærvær av et testantistoff. En signifikant reduksjon av bindingen til den KTR2DL1 og KIR2DL2/3-holdige overflaten ved kontrollantistoffet i nærvær av testantistoffet, indikerer at testantistoffet i alt vesentlig gjenkjenner den samme epitopen som kontrollantistoffet, slik at testantistoffet "konkurrerer" med kontrollantistoffet. Ethvert testantistoff som reduserer bindingen av kontrollantistoffet (så som 1-7F9 eller 1-4F1) til begge KXR2DL1- og KXR2DL2/3-antigenene med minst omtrent 20% eller mer, for eksempel med minst omtrent 40%, med minst omtrent 50%, med minst omtrent 70% eller mer, kan anses å være et antistoff som i alt vesentlig binder seg til den samme epitopen eller determinanten som kontrollantistoffet (for eksempel 1-7F9 eller 1-4F1). Et slikt testantistoff vil fortrinnsvis redusere bindingen av kontrollantistoffet (for eksempel 1-7F9 eller 1-4F1) til hver av KIR2DL-antigenene med minst omtrent 50% (for eksempel med minst omtrent 60%, med minst omtrent 70% eller mer). Det er underforstått at rekkefølgen med hensyn til bruken av kontroll- og testanti stoffer kan reverseres, det vil si at kontrollantistoffet kan først bindes til overflaten hvoretter testantistoffet bringes i kontakt med den samme overflaten i en konkurranseprøve. Det er foretrukket at antistoffet med høyere affinitet for KTR2DL1- og DIR2DL2/3-antigener bindes til den KTR2DL1- og DIR2DL2/3-holdige overflaten først, etter som det vil være forventet at nedsettelsen av den bindingen man kan observere med det andre antistoffet (idet man antar at antistoffene er konkurrerende) vil være av en annen størrelsesorden. Ytterligere eksempler på slike prøver er gitt i de etterfølgende eksempler og for eksempel i Saunal og Regenmortel, (1995) J. Immunol. Methods 183: 33-41.
Skjønt de er beskrevet i sammenheng med 1-7F9 eller 1-4F1 som eksempler på anvendelse, så er det underforstått at de beskrevne screeningsprøver også kan brukes for å identifisere antistoffer som konkurrerer med en eller flere av NKVSFl, DF200, EB6, GLI 83 eller andre antistoffer, antistoffragm enter og antistoffderi vater.
Ved immunisering og produksjon av antistoffer i en vertebratcelle, så kan det gjennomføres spesielle seleksjonstrinn for å isolere antistoffene. I en spesifikk utførelse beskrives heri således fremgangsmåter for produksjon av slike antistoffer som omfatter de følgende trinn: (a) immunisering av et ikke-humant pattedyr med et immunogen som omfatter het hemmende KIR-polypeptid; (b) fremstille antistoffet fra nevnte immuniserte dyr hvor nevnte antistoffer binder nevnte KIR-polypeptid; (c) velge antistoffer fra (b) som tverreagerer med minst to hemmende KIR-genprodukter; og (d) velge ut antistoffer fra (c) som er i stand til å nøytralisere KIR-mediert hemming av NK-cellecytotoksitet i en populasjon av NK-celler som uttrykker minst to av de nevnte forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenproduktene.
I visse utførelser kan et ytterligere trinn utføres mellom trinnene (c) og (d) som nevnt ovenfor for å selektere anti-KIR mAb'er som ikke reagerer med KIR2DS4.
Seleksjonen eller utvelgelsen av et antistoff som tverreagerer med minst to forskjellige hemmende KIR-genprodukter kan oppnås ved å screene antistoffet mot to eller flere forskjellige hemmende KIR-antigener. I en mer foretrukket utførelse er antistoffene fremstilt som beskrevet i trinn (b), monoklonale antistoffer. Begrepet "fremstille antistoffer fra nevnte immuniserte dyr" slik det brukes her, inkluderer således at man oppnår B-celler fra et immunisert dyr og bruker disse B-cellene for å fremstille et hybridom som uttrykker antistoffer så vel som å oppnå antistoffer direkte fra serum fra det immuniserte dyret. I en annet foretrukket utførelse vil de antistoffer som er selektert i trinn (c) være slike som tverreagerer med minst KIR2DL1 og KIR2DL2/3.
I en enda mer foretrukket utførelse, vil de antistoffer som er selektert i trinn (d) forårsake i det minste omtrent 10% eller mer av en spesifikk oppløsning mediert av NK-celler som fremviser minst ett KIR som er gjenkjent av antistoffet og fortrinnsvis minst omtrent 40% mer spesifikk oppløsning, minst omtrent 50% høyere spesifikk oppløsning eller mer foretrukket minst omtrent 70% forhøyet spesifikk oppløsning (for eksempel omtrent 60-100% økt eller forsterket spesifikk oppløsning), slik dette kan måles i en standard kromfrigjøringsprøve mot en målcelle som uttrykker et beslektet HLA klasse I-molekyl sammenlignet med den spesifikke oppløsningen som oppnås i fravær av et anti-KIR mAb. Når antistoffene som er selektert i trinn (d) brukes i en kromfrigjøringsprøve hvor det anvendes en NK-celleklon som uttrykker en eller flere hemmende KIR og målceller som uttrykker minst ett HLA-allel som gjenkjennes av den av de nevnte KIR på NK-klonen, så bør alternativt nivået av cytotoksitet som oppnås med antistoffet minst være omtrent 20%, fortrinnsvis minst omtrent 30% eller av den spesifikke cytotoksiteten som oppnås ved den samme konsentrasjonen av DF200 eller med et blokkerende anti-MHC-klasse I-antistoff ved det samme effektonmålcelleforholdet.
Rekkefølgen av trinnene (c) og (d) i den umiddelbart ovenfor beskrevne fremgangsmåten kan forandres. Eventuelt kan fremgangsmåten også eller alternativt omfatte trinn for å fremstille fragmenter av det monoklonale antistoffet eller derivater av det monoklonale antistoffet eller slike fragmenter som for eksempel er beskrevet i det etterfølgende.
I en annen variant beskrives en fremgangsmåte for fremstilling av et antistoff som omfatter: (a) selektere eller velge ut fra et bibliotek eller repertoar et monoklonalt antistoff, et fragment av et monoklonalt antistoff eller et derivat av en av de nevnte som tverreagerer med minst to forskjellige humane hemmende KIR2DL-reseptorgenprodukter; og (b) selektere et antistoff, fragment eller derivat av (a) som er i stand til å nøytralisere en KIR-mediert hemming av NK-cellecytotoksitet i en populasjon av NK-celler som uttrykker nevnte i det minste to forskjellige humane hemmende KIR2DL-reseptorgenprodukter.
Repertoaret kan være ethvert (rekombinant) repertoar av antistoffer eller fragmenter av disse og som eventuelt oppviser enhver egnet struktur (for eksempel fag, bakterie, syntetiske komplekser, osv.). Seleksjon eller utvelgelse av hemmende antistoffer kan utføres som beskrevet ovenfor eller som ytterligere illustrert i eksemplene.
Datamodellering av de ekstracellulære domenene i KIR2DL1, -2 og -3 (KIR2DL1-3) basert på deres publiserte krystall strukturer (Maenaka et al. Structure with Folding and design 1999; 7: 391-398; Fan et al., Nature immunology 2001; 2: 452-460; Boyington et al. Nature, 2000; 405: 537-543) viste at visse områder av KIR2DL1, -2 og -3 inngår i interaksjonen mellom disse KIR og de anti-KIR2DL-tverreaktive murine monoklonale antistoffene DF200 og NKVSFl. I en utførelse tilveiebringes således antistoffer som utelukkende binder seg til KIR2DL1 innenfor et område definert av aminosyrerestene (105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 127,
129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 181 og 192). I en annen utførelse tilveiebringes antistoffer som binder seg til KIR2DL1 og KIR2DL2/3 uten å interagere med aminosyrerester utenfor området
definert av restene (105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 181 og 192).
I en annen utførelse tilveiebringes antistoffer som binder seg til KTR2DL1 og som ikke binder seg til en mutant av KIR2DL1 hvor RI 31 (det vil si Arg-resten i posisjon 131 i KIR2DL1-mutanten) er (det vil si er substituert med) en Ala-rest.
I en annen utførelse tilveiebringes antistoffer som binder seg til KTR2DL1 og som ikke binder seg til en mutant av KIR2DL1 hvor RI 57 er Ala.
I en annen utførelse tilveiebringes antistoffer som binder seg til KTR2DL1 og som ikke binder seg til en mutant av KIR2DL1 hvor RI58 er Ala.
I en annen utførelse tilveiebringes antistoffer som binder seg til KTR2DL-restene 131, 157 og 158.
En annen utførelse tilveiebringes antistoffer som binder seg til KTR2DS3(R131W), men ikke til villtype KIR2DS3.
I en spesiell utførelse binder antistoffene seg utelukkende til KTR2DL1 innenfor et område som er definert av aminosyrerestene L38, R41, M44, F45, N46, D47, T48, L49, R50,152, F64, D72, Y80, P87 og Y88 (hvor bokstavene betegner aminosyrer i en enkelbokstavkode og nummeret er posisjonen for den resten i KIR2DL1 (SEKV.ID. NR. 23) ved å bruke det nummereringssystemet er som er beskrevet i Wagtmann et al., Immunity 1995; 2: 439-449)). Disse restene er blitt identifisert som 1-7F9 KIR2DL1 -epitopen (se eksempel 11).
I en annen utførelse binder antistoffene seg til en antigen epitop i en KIR2DL1 - sekvens som består av fragmentet L38 til Y88 i SEKV.ID. NR. 23.1 en ytterligere utførelse binder antistoffene seg til en antigen epitop i en KIR2DL1-sekvens som omfatter fragmentene L38 til Y88 i SEKV.ID. NR. 23.
I en ytterligere utførelse tilveiebringes antistoffer som binder seg til KIR2DL1 og KIR2DL2/3 uten å interagere eller virke sammen med aminosyrerester utenfor området definert av restene L38, R41, M44, F45, N46, D47, T48, L49, R50,152, F64, D72, Y80, P87 og Y88.
I en annen utførelse binder antistoffene seg til KIR2DL1 innenfor et område som omfatter minst 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% eller mer av aminosyrerestene L38, R41, M44, F45, N46, D47, T48, L49, R50,152, F64, D72, Y80, P87 og Y88. I en spesiell utførelse omfatter KIR2DL1 -epitopen for antistoffene aminosyrerestene M44 og F45 (se eksemplene 9 og 11).
I en annen utførelse binder antistoffene seg til KIR2DL1 innenfor et område som omfatter minst 1, 2, 4, 6, 8, 10 eller 12 eller alle aminosyrerestene L38, R41, M44, F45, N46, D47, T48, L49, R50,152, F64, D72, Y80, P87 og Y88. I en spesiell utførelse vil området omfatte aminosyrerestene M44 og F45 og minst 1, 2, 4, 6, 8, 10 eller alle av L38, R41, M44, F45, N46, D47, T48, L49, R50,152, F64, D72, Y80, P87 og Y88 (se eksemplene 9 og 11). I en annen spesielt foretrukket utførelse omfatter området minst aminosyrerestene M44, F45 og D72 som ligger i det KIR2DL1-området hvor l-7F9-epitopen og de HLA-C-bindende setene overlapper hverandre.
I en annen utførelse beskrives antistoffer som binder seg til KTR2DL1, KIR2DL2/3 og KXR2DS4.
Oppfinnelsen tilveiebringer antistoffer som binder seg til både KTR2DL og KIR2DL2/3, men ikke til KXR2DS4.
I en annen utførelse beskrives antistoffer som binder seg både til KIR2DL1 og KIR2DL2/3, men ikke til KXR2DS3 eller KXR2DS4.
En bestemmelse om hvorvidt et antistoff, antistoffragment eller antistoffderivat binder seg innenfor en av de epitopområder som er definert ovenfor, kan utføres ved hjelp av fremgangsmåter som i seg selv er kjent innenfor bioteknologien. Se for eksempel eksemplene 9 og 11.1 et annet eksempel på slike kartleggings/karakteriseringsmetoder kan et epitopområde for et anti-KIR-anti stoff bestemmes ved epitop-"fotavtrykk" ved å bruke en kjemisk modifikasjon av de eksponerte aminer/karboksylgrupper i KIR2DL1- eller KIR2DL2/3-proteinet. Ett spesifikt eksempel på en slik fotavtrykksteknikk er bruken av HXMS (hydrogendeuteriumutbytting påvist ved massespektrometri), hvor det skjer en hydrogen/deuteriumutbytting av reseptor og proteinligandamidprotoner, binding og tilbakeutbytting og hvor amidgruppene i hovedkjeden som deltar i proteinbindingen er beskyttet mot tilbakeutbytting og derfor vil forbli deuterert. Relevante områder kan på dette punktet identifiseres ved peptidisk proteolyse, hurtig mikrobore høytrykks væskekromatografiseparasjon og/eller elektrosprayioniseringsmassespektrometri. Se for eksempel Ehring H, Analytical Biochemistry, bind 267 (2) sidene 252-259 (1999) og/eller Engen, J.R. og Smith, D.L. (2001) Anal. Chem. 73, 256A-265A. Et annet eksempel på en egnet epitopidentifikasjonsteknikk er kjernemagnetisk resonans epitopkartlegging (NMR) hvor man typisk sammenligner posisjonen for signalene i de todimensjonale NMR-spektra for det frie antigenet og antigenet kompieksdannet med det antigenbindende peptidet så som et antistoff. Antigenet vil typisk selektivt bli isotopisk merket med 15 N, slik at bare signaler som tilsvarer antigenet og ingen signaler fra det antigenbindende peptidet kan ses i NMR-spekteret. Antigensignaler som har sin opprinnelse fra aminosyrer som er involvert i interaksjonen med det antigenbindende peptidet, vil typisk skifte posisjon i spektraene for komplekset sammenlignet med spektraene for det frie antigenet slik at man på denne måten kan identifisere de aminosyrene som inngår i bindingen. Se for eksempel Ernst Schering Res Found Workshop. 2004; (44): 149-67; Huang et al, Journal of Molecular Biology, bind 281 (1) sidene 61-67 (1998); og Saito og Patterson, Methods. 1996 juni; 9(3): 516-24.
Epitopkartlegging/karakterisering kan også utføres ved å bruke massespektrometrimetoder. Se for eksempel Downward, J Mass Spectrom. 2000 Apr; 35(4): 493-503 og Kiselar og Downard, Anal Chem. 1999 May 1; 71(9): 1792-801.
Proteasekuttingsteknikker kan også brukes i sammenheng med epitopkartl egging og identifikasjon. Antigeniske determiant-relevante områder/sekvenser kan bestemmes ved proteasekutting, for eksempel ved å bruke trypsin i et forhold på omtrent 1:50 til KIR2DL1 eller KIR2DL2/3 o/n-kutting ved 37°C og pH 7-8 fulgt av massespektrometri (MS) -analyse for peptididentifikasjon. Peptidene som er beskyttet fra trypsinspalting på grunn av anti-KIR-anti stoffet kan deretter identifiseres ved en sammenligning av de prøvene som er underkastet trypsinkutting og prøver som er innkubert med antistoffet og deretter underkastet kutting med for eksempel trypsin (som derved vil avsløre et "fotavtrykk" for antistoffet). Andre enzymer som kymotrypsin, pepsin, osv., kan også eller alternativt brukes i lignende epitopkarakteriseringsmetoder. Enzymatisk kutting kan videre gi en rask fremgangsmåte for å analysere hvorvidt en mulig antigen determinantsekvens ligger innenfor området til KIR2DL1 i sammenheng med et KIR-bindende polypeptid. Hvis polypeptidet ikke er overflateeksponert, så er det mest sannsynlig ikke relevant med hensyn til immunogenisitet/antigenisitet. Se for eksempel Manca, Ann Ist Super Sanita. 1991; 27(1): 15-9 for en diskusjon av lignende teknikker.
Seterettet mutagenese er en annen teknikk som brukes for belysning av en bindende epitop. I "alaninskanning" vil for eksempel hver rest innenfor et proteinsegment bli erstattet med en alaninrest, hvoretter konsekvensene for bindingsaffinitet måles. Hvis mutasjonen fører til en signifikant reduksjon med hensyn til bindingsaffinitet, så er det mest sannsynlig at mutasjonen inngår i binding. Monoklonale antistoffer som er spesifikke for strukturelle epitoper (det vil si antistoffer som ikke binder seg til det ufoldede proteinet) kan brukes for å verifisere at alaninerstatningen ikke påvirker proteinets generelle folding. Se for eksempel Clackson and Wells, Science 1995; 267: 383-386; og Wells, Proe Nati Acad Sei USA 1996; 93: 1-6.
Elektronmikroskopi kan også brukes for epitop-"fotavtrykking". For eksempel brukte Wang et al., Nature 1992; 355: 275-278 en koordinert anvendelse av kryoelektronmikroskopi, tredimensjonal billedrekonstruksjon og røntgenkrystallografi for å bestemme det fysiske fotavtrykket av et Fab-fragment på kapsidoverflaten av naturlig Vigna sinensis-virus.
Andre former for "markørfrie" prøver for epitopbelysning eller -undersøkelse inkluderer overflateplasmonresonans (SPR, BIACORE) og reflektometrisk interferensspektroskopi (RifS). Se for eksempel Fågerstam et al., Journal Of Molecular Recognition 1990; 3: 208-14; Nice et al., J. Chromatogr. 1993; 646: 159-168; Leipert et al., Angew. Chem. Int. Ed. 1998; 37: 3308-3311; Kroger et al., Biosensors and Bioelectronics 2002; 17: 937-944.
Antistoffragmenter og derivater
Fragmenter og derivater av antistoffer ifølge den foreliggende oppfinnelsen (som inngår i begrepene "antistoff og "antistoffer" slik de brukes i den foreliggende søknad, hvis intet annet er angitt eller klart motsies av sammenhengen), fortrinnsvis et 1-7F9- eller 1-4F1-lignende antistoff, kan produseres eller frembringes ved hjelp av teknikker som i seg selv er kjente innenfor bioteknologien. "Immunreaktive fragmenter" omfatter en del av det intakte antistoffet, generelt det antigenbindende setet eller variable området. Eksempler på antistoffragmenter inkluderer "kappalegemer" (se for eksempel Hl et al., Protein Eng 10: 949-57 (1997)) og "janusiner" (ytterligere beskrevet et annet sted i søknaden). Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab)2, F(ab')2, dAb (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546); består i alt vesentlig av et VH-domene, Fd (består i alt vesentlig av VH- og CH1 -domener) og Fv (består i alt vesentlig av VL- og VH-domener) fragmenter; dialegemer; kappalegemer; og janusiner. For eksempel kan antistoffragmenter inkludere et polypeptid med en primærstruktur som består av en uavbrutt sekvens av sammenhengende aminosyrerester (her betegnet som "enkeltkjedeantistoffragment" eller "enkeltkjedepolypeptid") og inkluderer, uten begrensning (1) enkeltkjede Fc (scFv) -molekyler, (2) enkeltkjedepolypeptider som bare inneholder ett lettkjedevariabelt domene eller et fragment av dette som inneholder de tre CDRer i det lettkjedevariable domenet uten å være assosiert med en tungkjedegruppe og (3) enkeltkjedepolypeptider som inneholder bare ett tungkjedevariabelt område eller et fragment av dette som inneholder de tre CDRer i det tungkjedevariable området uten å være assosiert med en lettkjedegruppe; og multispesifikke antistoffer dannet av antistoffragmenter. Det kan for eksempel fremstilles Fab - eller F(ab')2-fragmenter ved proteasekutting av isolerte antistoffer ved hjelp av vanlig kjent teknikk.
Det er underforstått at immunreaktive fragmenter kan modifiseres ved å bruke kjente fremgangsmåter, for eksempel for å redusere eller forsinke fjerningen av antistoffet in vivo og derved oppnå en mer ønskelig farmakokinetisk profil. Fragmentet kan for eksempel modifiseres ved polyetylenglykol (PEG) eller polyoksy etyl erte polyoler. Fremgangsmåter for kobling og setespesifikk konjugering av PEG til et Fab'-fragment er for eksempel beskrevet i Leong et al, Cytokine 16(3): 106-119 (2001) og Delgado et al, Br. J. Cancer 73(2): 175-182
(1996).
I et spesielt aspekt tilveiebringer oppfinnelsen antistoffer, antistoffragmenter og antistoffderivater som omfatter den lett- og/eller tungkjedevariable områdesekvensen til 1-7F9 eller 1-4F1 som angitt på figur 14.1 et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen antistoffer, antistoffragmenter og derivater av disse som omfatter ett eller flere av de lett- og/eller tungkjedevariable områdene CDR'er til 1 - 7F9 eller 1-4F1 som angitt på figur 15 eller beskrevet ovenfor. Funksjonelle varianter/analoger av slike sekvenser kan utvikles ved å anvende egnede substitusjoner, adderinger og/eller delesjoner i de beskrevne aminosyresekvensene ved å bruke standardteknikker som kan lettes ved sammenligningen av sekvensene. Ut fra en superimposisjon av krystall strukturene til 1-7F9/KTR2DL1 -komplekset og KIR2DL1/MHC klasse I-komplekset (Fan et al., Nat. Immunol. 2001; 2: 452-460), PDB-kode 1IM9, kan det konkluderes at et scFv-derivat av 1-7F9 vil være i stand til å blokkere MHC klasse I-binding til KXR2DL1. Også enkelt L-kjeden av 1-7F9 eller enkelt VL-domenet av 1-7F9 alene når de er bundet til KTR2DL1, vil være i stand til å blokkere MHC klasse I-binding.
Funksjonelle varianter/analoger av slike sekvenser kan utvikles ved å anvende egnede substitusjoner, adderinger og/eller delesjoner av disse beskrevne aminosyresekvensene ved å bruke standardteknikker som kan lettes ved sammenligningen av sekvensene. I et annet aspekt kan posisjoner hvor en rest er tilstede i en sekvens i ett av disse antistoffene men ikke i et annet, være egnet for delesjoner, substitusjoner og/eller innsettinger.
Alternativt kan det DNA som koder et antistoff ifølge den foreliggende oppfinnelsen så som et 1-7F9- eller 1-4F1-lignende antistoff modifiseres slik at det koder for et fragment ifølge oppfinnelsen. Det modifiserte DNA kan så innsettes i en ekspresjonsvektor og brukes for å transformere eller transfektere en passende celle som så vil uttrykke det forønskede fragmentet, slik det er beskrevet et annet sted i søknaden.
I en alternativ utførelse kan DNA fra et hybridom som produserer et murint antistoff som beskrevet heri så som et DF200-lignende antistoff, modifiseres før det innsettes i en ekspresjonsvektor, for eksempel ved å anvende den kodende sekvensen for humane tung- og lettkjedekonstante domener i stedet for de homologe ikke-humane sekvensene (slik det for eksempel er beskrevet av Morrison et al., Proe. Nati. Acad. Sei. U.S.A., 81, side 6851 (1984)). I en annen utførelse kan de variable områdene som koder antistoffet forenes ved hjelp av rekombinant DNA-manipulering med den immunglobulinkodende sekvensen eller hele eller en del av den kodende sekvensen for et ikke-immunglobulinpolypeptid. På denne måten får man fremstilt "kimære" eller "hybride" antistoffer som har den bindende spesifiteten til det opprinnelige antistoffet. Slike ikke-immunglobulinpolypeptider vil så typisk erstatte de konstante domenene i et antistoff som beskrevet heri.
Således vil antistoffet som beskrevet heri, fortrinnsvis et DF200-lignende antistoff, bli humanisert. "Humaniserte" former av antistoffer er spesifikke kimære immunglobuliner, immunglobulinkjeder eller fragmenter av disse (så som Fv, Fab, Fav', F(ab')2 eller andre antigenbindende undersekvenser av antistoffer) som inneholder en minimal sekvens avledet fra det murine immunglobulinet. I de fleste tilfeller vil de humaniserte antistoffene være humane immunglobuliner (mottakende antistoff) hvor rester fra et komplementært bestemmende område (CDR) fra mottakeren er erstattet med rester fra et CDR fra det opprinnelige antistoffet (donorantistoffet) samtidig som den forønskede spesifiteten, affiniteten og kapasiteten til det opprinnelige antistoffet beholdes. I enkelte tilfeller kan Fv-rammeverksrester fra det humane immunglobulinet erstattes med tilsvarende ikke-humane rester. Videre kan humaniserte antistoffer omfatter rester som ikke finnes hverken i mottakerantistoffet eller i det importerte CDR eller rammeverkssekvensene. Disse modifikasjonene kan utføres for ytterligere å raffinere og optimalisere antistoffets atferd eller reaksjonsevne. Generelt vil det humaniserte antistoffet omfatte i vesentlig alle eller i det minste ett, typisk to, variable domener hvor alle eller i alt vesentlig alle CDR-områdene tilsvarer de fra det opprinnelige antistoffet og alle eller i alt vesentlig alle FR-områdene er de fra en human immunglobulin konsensussekvens. Det humaniserte antistoffet vil også optimalt kunne omfatte i det minste en del av et immunglobulinkonstant område (Fc), typisk fra et humant immunglobulin. For ytterligere detaljer, se Jones et al., Nature, 321, side 522 (1986); Reichmann et al., Nature, 332, side 323 (1988); og Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2, side 593 (1992).
Fremgangsmåter for å humanisere antistoffene som beskrevet heri er velkjente innenfor bioteknologien. Et humanisert antistoff ifølge den foreliggende oppfinnelsen vil generelt inneholde en eller flere aminosyrerester som er innført fra det opprinnelige antistoffet. Disse murine eller andre ikke-humane aminosyrerestene blir ofte betegnet som "import"-rester og vil typisk være tatt fra et "import"-variabelt domene. Humaniseringen kan i alt vesentlig utføres ved å anvende fremgangsmåten til Winter og hans medarbeidere (Jones et al., Nature, 321, side 522 (1986); Riechmann et al., Nature, 332, side 323 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239, side 1534 (1988)). Slike "humaniserte" antistoffer er følgelig kimære antistoffer (Cabilly et al., U.S. patent nr. 4,816,567), hvori alt vesentlig mindre enn et intakt humant variabelt område er blitt erstattet med den tilsvarende sekvensen fra det opprinnelige murine antistoffet. I praksis vil humaniserte antistoffer ifølge den foreliggende oppfinnelsen typisk være humane antistoffer hvor noen CDR-rester og muligens noen FR-rester er blitt erstattet med rester fra de analogene setene i det opprinnelige murine antistoffet.
Valget av humane variable domener, både lette og tunge, som kan brukes ved fremstilling av humaniserte antistoffer er meget viktig for å redusere antigenisitet. Ifølge den såkalte "best-tilpassede" metoden, så vil sekvensen for det variable domenet i et antistoff bli screenet mot hele biblioteket av kjente humane variable domenesekvenser. Den humane sekvensen som så ligger nærmest tilsvarende sekvens fra musen, blir så akseptert som det humane rammeverket (FR) for det humaniserte antistoffet (Sims et al., J. Immunol., 151, side 2296 (1993); Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196, side 901 (1987)). En annen fremgangsmåte bruker et spesielt rammeverk fra konsensussekvensen fra alle humane antistoffer av en spesiell undergruppe av lette eller tunge kjeder. Det samme rammeverket kan brukes for flere humaniserte antistoffer (Carter et al., Proe. Nati. Acad. Sei. U.S.A., 89, side 4285 (1992); Presta et al., J. Immunol., 51, side 1993)).
Det er videre viktig at antistoffene blir humanisert samtidig som de beholder den høye affiniteten for multiple hemmende KIR-reseptorer og andre gunstige biologiske egenskaper. For å oppnå dette ifølge en foretrukket fremgangsmåte, så blir det fremstilt humaniserte antistoffer ved en analyseprosess av de opprinnelige sekvensene og forskjellige konseptuelle humaniserte produkter ved å bruke tredimensjonale modeller på de parenterale eller opprinnelige og humaniserte sekvensene. Tredimensjonale immunglobulinmodeller er generelt tilgjengelige og velkjente innenfor bioteknologien. Det er tilgjengelig dataprogrammer som illustrerer og frembringer mulige tredimensjonale konformelle strukturer av valgte kandidatimmunglobulinsekvenser. En undersøkelse av disse strukturene muliggjør en analyse av den sannsynlige rollen til enkelrester med hensyn til funksjonen til kandidatimmunglobulinsekvensen, det vil si analysen av de rester som påvirker kandidatimmunglobulinets evne til å binde sitt antigen. På denne måten kan FR-rester velges og kombineres fra konsensus- og importsekvensene slik at man oppnår forønskede antistoffegenskaper, for eksempel en forbedret affinitet i forhold til målantigenet eller -antigenene. Generelt vil CDR-restene være direkte og mest vesentlig involvert når det gjelder å påvirke antigenbinding.
Som beskrevet ovenfor, så vil en fremgangsmåte for å fremstille humane monoklonale antistoffer være å bruke en Xenomus® (Abgenix, Fremont, CA) som den musen som brukes for immunisering. En Xenomus er en murin vert som har sine immunglobulingener erstattet med funksjonelle humane immunglobulingener. Antistoffer som således fremstilles ved hjelp av denne musen eller i hybridomer fremstilt fra B-celler fra denne musen vil således allerede være humaniserte. Xenomusen er beskrevet i US patent nr. 6,162,963. En analog fremgangsmåte er å bruke en HuMab-mus ™ (Medarex).
Humane antistoffer kan også fremstilles ved hjelp av forskjellige andre teknikker som for eksempel å bruke andre transgene dyr for immunisering hvor dyret er blitt manipulert slik at det uttrykker et humant antistoffrepertoar (Jakobovitz et al., Nature 362 (1993) 255) eller ved å velge ut antistoffrepertoar ved å bruke fagdisplaymetoder. Slike fremgangsmåter og teknikker er velkjente innenfor bioteknologien og kan implementeres ved å gå ut fra de monoklonale antistoffene som er beskrevet i den foreliggende søknaden.
Antistoffene, fortrinnsvis et 1-7F9- eller 1-4F1-lignende antistoff, kan også derivatiseres til "kimære" antistoffer (immunglobuliner) hvor en del av den tunge og/eller lette kjeden er identisk med eller homolog med tilsvarende sekvenser i det opprinnelige antistoffet mens resten av kjeden er identisk med eller homolog til tilsvarende sekvenser i antistoffer avledet fra andre arter eller som hører til en annen antistoffklasse eller underklasse, så vel som fragmenter av slike antistoffer, så lenge som de har den forønskede biologiske aktiviteten (Cabilly et al., supra; Morrison et al., Proe. Nati. Acad. Sei. U.S.A., 81, side 6851 (1984)).
Beskrevet heri er andre derivater som inkluderer funksjonaliserte antistoffer, det vil si antistoffer som er konjugert eller kovalent bundet til et toksin så som ri ein, difteritoksin, abrin og Pseudomonas exotoxin eller et terapeutisk radionuklid så som for eksempel<90>Y eller<131>I; til en påvisbar gruppe så som en fluorescerende gruppe, en diagnostisk radioisotop eller et billeddannende middel; eller til et fast underlag så som agaroseperler eller lignende. Fremgangsmåter for konjugering eller kovalent binding av disse andre midlene til antistoffer, er velkjente innenfor bioteknologien.
Konjugering til et toksin kan brukes for målsøkende avlivning av NK-celler som har en eller flere tverreagerende KIR-reseptorer på sin celleoverflate. Så snart antistoffet binder seg til celleoverflaten på slike celler, blir det internalisert og toksinet blir så frigjort på innsiden av cellen og derved selektivt avlive denne cellen. En slik anvendelse er en alternativ utførelse.
Konjugering til en påvisbar gruppe kan brukes når antistoffet skal brukes for diagnostiske formål. Slike formål inkluderer, men er ikke begrenset til, en undersøkelse av biologiske prøver for nærvær av NK-celler som bærer det tverreagerende KIR på sine celleoverflater og for å påvise nærværet av NK-celler som bærer det tverreagerende KIR i en levende organisme. Slike prøver og påvisningsmetoder er også alternative utførelser.
Konjugering av et antistoff til et fast underlag, kan brukes som et verktøy for affinitetsrensing av NK-celler som bærer det tverreagerende KIR på sin overflate fra en kilde så som en biologisk væske. Denne fremgangsmåten for rensing er en annen alternativ utførelse og vil resultere i en renset populasjon av NK-celler.
FARMASØYTISKE SAMMENSETNINGER OG ANVENDELSER
Det beskrives heri også farmasøytiske sammensetninger som omfatter et humant eller humanisert antistoff eller fragmenter eller derivater av disse, hvor nevnte antistoff, fragment eller derivat tverreagerer med minst to hemmende KIR-reseptorer på overflaten av NK-celler, reduserer eller nøytraliserer deres hemmende signaler og forsterker aktiviteten til disse cellene i enhver egnet bærervæske i en mengde som effektivt og påvisbart forsterker NK-cellecytotoksitet i en pasient eller i en biologisk prøve som omfatter NK-celler. Farmasøytiske sammensetninger som omfatter et humant eller humanisert anti-KIR mAb, eventuelt sammen med et annet aktivt middel for anvendelse, kan formuleres med farmasøytisk akseptable bærere eller fortynningsmidler så vel som andre kjente adjuvanter og eksipienter i overensstemmelse med vanlig kjent teknikk, for eksempel slik det er beskrevet i Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. utgave, Gennaro, red., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1995. Sammensetningene kan opptre i vanlig kjente former, for eksempel som kapsler, tabletter, aerosoler, løsninger eller suspensjoner eller som et frysetørket pulver.
Det er følgelig en hensikt å tilveiebringe en farmasøytisk formulering som omfatter et humant eller humanisert antistoff eller fragmenter eller derivater av disse, som er tilstede i en konsentrasjon fra 1 mg/ml til 500 mg/ml og hvor nevnte formulering har en pH fra 2,0 til 10,0. Formuleringen kan videre omfatte et buffersystem, konserveringsmidler, tonisitetsmidler, gelateringsmidler, stabilisatorer og overflateaktive midler. I en utførelse er den farmasøytiske formuleringen en vandig formulering, det vil si en formulering som omfatter vann. En slik formulering vil typisk være en løsning eller en suspensjon. I en ytterligere utførelse er den farmasøytiske formuleringen en vandig løsning. Slik begrepet "vandig formulering" brukes her, forstås en formulering som omfatter minst 50% vekt/vekt av vann. På lignende måte betyr begrepet "vandig løsning" en løsning som omfatter minst 50% vekt/vekt vann og begrepet "vandig suspensjon" betyr en suspensjon som omfatter minst 50% vekt/vekt av vann.
I en annen utførelse er den farmasøytiske formuleringen en frysetørket formulering hvor den behandlende legen eller pasienten tilsetter løsemidler og/eller fortynningsmidler før bruk.
I en annen utførelse er den farmasøytiske formuleringen en tørket formulering (for eksempel frysetørket eller spraytørket) som er ferdig for bruk uten en foregående oppløsning.
I et ytterligere aspekt beskrives det heri en farmasøytisk formulering som omfatter en vandig løsning av et antistoff som beskrevet her og en buffer, og hvor nevnte antistoff er tilstede i en konsentrasjon fra 1 mg/ml eller mer, og hvor nevnte formulering har en pH fra omtrent 2,0 til omtrent 10,0.
I en annen utførelse er pH-verdien på formuleringen valgt fra listen som består av 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8, 8,9, 9,0, 9,1, 9,2, 9,3, 9,4, 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9 og 10,0.
I en ytterligere utførelse er bufferen valgt fra gruppen bestående av natriumacetat, natriumkarbonat, citrat, glysylglysin, histidin, glysin, lysin, arginin, natriumhydrogenfosfat, dinatriumhydrogenfosfat, natriumfosfat og tris(hydroksymetyl)aminometan, bicin, tricin, malinsyre, succinat, maleinsyre, fumarsyre, vinsyre, aspartinsyre eller blandinger av disse. Hver av disse spesifikke buffere utgjør en alternativ formulering.
I en ytterligere utførelse omfatter formuleringen også et farmasøytisk akseptabelt konserveringsmiddel. I en annen utførelse er konserveringsmiddelet valgt fra gruppen bestående av fenol, o-kresol, m-kresol, p-kresol, metyl p-hydroksybenzoat, propyl p-hydroksybenzoat, 2-fenoksyetanol, butyl p-hydroksybenzoat, 2-fenyletanol, benzylalkohol, klorbutanol og tiomerosal, bronopol, benzosyre, imidurea, klorheksidin, natriumdehydroacetat, klorkresol, etyl p-hydroksybenzoat, benzetoniumklorid, klorfenesin (3p-klorfenoksypropan-l,2-diol) eller blandinger av disse. I en utførelse er konserveringsmiddelet tilsatt i en konsentrasjon fra 0,1 mg/ml til 20 mg/ml. I en annen utførelse er konserveringsmiddelet tilstede i en konsentrasjon fra 0,1 mg/ml til 5 mg/ml. I en ytterligere utførelse er konserveringsmiddelet tilstede i en konsentrasjon fra 5 mg/ml til 10 mg/ml. I en enda ytterligere utførelse er konserveringsmiddelet tilstede i en konsentrasjon fra 10 mg/ml til 20 mg/ml. Hvert av de spesifikke konserveringsmidler som er angitt ovenfor, utgjør en alternativ utførelse. Bruken av konserveringsmidler i farmasøytiske sammensetninger er velkjent innenfor farmasien, og rent hensiktsmessig se Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. utgave, 1995.
I en ytterligere utførelse omfatter formuleringen også et isotont middel. I en utførelse er det isotone middelet valgt fra gruppen bestående av et salt (for eksempel natriumklorid), et sukker, en sukkeralkohol, et aminosukker, en aminosyre (for eksempel L-glysin, L-histidin, arginin, lysin, isoleukin, aspartinsyre, tryptofan ogtreonin), en alditol (for eksempel glyserol (glyserin), 1,2-propandiol (propylenglykol), 1,3-propandiol, 1,3-buytandiol) og polyetylenglykol (for eksempel PEG400) eller blandinger av disse. Ethvert egnet sukker kan brukes og inkluderer, men er ikke begrenset til, mono-, di- eller polysakkarider; og vannløselige glukaner så som for eksempel fruktose, glukose, mannose, sorbose, xylose, maltose, laktose, sukrose, trehalose, dekstran, pullulan, dekstrin, syklodekstrin, løselig stivelse, hydroksyetyl stivel se og karboksymetylcellulose-Na. I en utførelse er sukkeradditivet sukrose. En sukkeralkohol er definert som et C4-C8-hydrokarbon med minst én -OH-gruppe og inkluderer for eksempel mannitol, sorbitol, inositol, galaktitol, dulcitol, xylitol og arabitol. I en utførelse er sukkeralkoholadditivet mannitol. De sukkere og sukkeralkohol er som er nevnt ovenfor kan brukes individuelt eller i kombinasjon. Det er ingen fast grense med hensyn til den mengden som brukes, så lenge som sukkeret eller sukkeralkoholen er løselig i det flytende preparatet og ikke på skadelig måte påvirker de stabiliserende effekter som oppnås ved å bruke fremgangsmåtene som beskrevet heri. I en utførelse er sukker- eller sukkeralkoholkonsentrasjonen mellom omtrent 1 mg/ml og omtrent 150 mg/ml. I en annen utførelse er det isotone middelet tilstede i en konsentrasjon fra 1 mg/ml til 50 mg/ml. I en annen utførelse er det isotone middelet tilstede i en konsentrasjon fra 1 mg/ml til 7 mg/ml. I en annen utførelse er det isotone middelet tilstede i en konsentrasjon fra 8 mg/ml til 24 mg/ml. I en annen utførelse er det isotone middelet tilstede i en konsentrasjon fra 25 mg/ml til 50 mg/ml. Hvert av de spesifikke isotone midlene som er angitt ovenfor utgjør en alternativ utførelse. Bruken av et isotont middel i farmasøytiske sammensetninger er velkjent innenfor farmasien og i så henseende henvises det til Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. utgave, 1995.
Formuleringen kan også omfatte et gelateringsmiddel. Gelateringsmiddelet kan være valgt fra salter av etylendiamintetraeddiksyre (EDTA), sitronsyre og aspartinsyre og blandinger av disse. I en annen utførelse er gelateringsmiddelet tilstede i en konsentrasjon fra 0,1 mg/ml til 5 mg/ml. I en annen utførelse er gelateringsmiddelet tilstede i en konsentrasjon fra 0,1 mg/ml til 2 mg/ml. Gelateringsmiddelet kan være tilstede i en konsentrasjon fra 2 mg/ml til 5 mg/ml. Hvert av disse spesifikke gelateringsmidler som er nevnt ovenfor utgjør en alternativ utførelse. Bruken av et gelateringsmiddel i farmasøytiske sammensetninger er velkjente innenfor farmasien og i så henseende refereres det til Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. utgave, 1995.
Formuleringen kan også omfatte en stabilisator. Bruken av en stabilisator i farmasøytiske sammensetninger er velkjent innenfor farmasien og i så henseende refereres det til Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. utgave, 1995.
Beskrevet heri er sammensetninger som for eksempel kan være stabiliserte flytende farmasøytiske sammensetninger hvis terapeutisk aktive komponenter inkluderer et polypeptid som eventuelt oppviser aggregatdannelse ved lagring i flytende farmasøytiske formuleringer. Med begrepet "aggregatdannelse" forstås en fysisk interaksjon mellom polypeptidmolekylene som resulterer i dannelsen av oligomerer som forblir løselige, eller synlige aggregater som utfelles fra løsningen. Uttrykket "under lagring" betyr at en flytende farmasøytisk sammensetning eller formulering, så snart den er fremstilt, ikke umiddelbart administreres en pasient. Etter fremstilling vil den snarere bli pakket for lagring, enten i væskeforme, i frosset tilstand eller i tørket form for senere rekonstituering i en væskeform eller en annen form som er egnet for administrering til en pasient. Med begrepet "tørket form" forstås at den flytende farmasøytiske sammensetningen eller formuleringen er tørket enten ved frysetørking (se for eksempel Williams og Polli (1984) J. Parenteral Sei. Technol. 38: 48-59), forstøvningstørking (se Masters (1991) i Spray-Drying Handbook (5. utgave; Longman Scientific and Technical, Essez, U.K.), sidene 491-676; Broadhead et al. (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18: 1169-1206; og Mumenthaler et al. (1994) Pharm. Res. 11: 12-20), eller lufttørking (Carpenter og Crowe (1988) Cryobiology 25: 459-470; og Roser (1991) Biopharm. 4: 47-53). Aggregatdannelse av et polypeptid under lagring av en flytende farmasøytisk sammensetning kan skadelig påvirke polypeptidets biologiske aktivitet, noe som resulterer i et tap av den farmasøytiske sammensetningens terapeutiske effekt. Aggregatdannelse kan videre forårsake andre problemer så som tiltetting av rør, membraner eller pumper når den polypeptidholdige farmasøytiske sammensetningen administreres via et infusjonssystem.
Det beskrives heri farmasøytiske sammensetninger som også kan omfatte en mengde av en aminosyrebase i tilstrekkelig grad til å redusere aggregatdannelse av polypeptidet under lagring av sammensetningen. Med begrepet "aminosyrebase" forstås en aminosyre eller en kombinasjon av aminosyrer hvor enhver gitt aminosyre enten er tilstede i sin frie baseform eller i en saltform. Når det brukes en kombinasjon av aminosyrer, så kan alle aminosyrene være tilstede i sine frie baseformer, alle kan være tilstede i sine saltformer eller noen kan være tilstede i sine frie baseformens mens de andre er tilstede i sine saltformer. I en utførelse er de aminosyrene som brukes for fremstilling av sammensetninger slike som har en ladd sidekjede så som arginin, lysin, aspartinsyre og glutaminsyre. Enhver stereoisomer (det vil si L, D eller en blanding av slike) av en spesiell aminosyre (for eksempel metionin, histidin, imidazol, arginin, lysin, isoleukin, aspartinsyre, tryptofan, treonin og blandinger av slike) eller kombinasjoner av slike stereoisomere former, kan være tilstede i de farmasøytiske sammensetningene så lenge den spesielle aminosyren enten er tilstede i sin frie baseform eller i sin saltform. I en utførelse brukes L-stereoisomeren. Sammensetninger kan formuleres med analoger av disse aminosyrene. Med begrepet "aminosyreanalog" forstås et derivat av en naturlig forekommende aminosyre som frembringer den forønskede effekt med hensyn til å redusere aggregatdannelse av polypeptidet under lagring av de flytende farmasøytiske sammensetningene. Egnede argininanaloger inkluderer for eksempel aminoguanidin, ornitin og N-monoetyl L-arginin, egnede metioninanaloger inkluderer etionin og butionin og egnede cysteinanaloger inkluderer S-metyl-L-cystein. Som med de andre aminosyrene, så inkorporeres eller tilsettes også aminosyreanalogene til sammensetningene i enten sin frie baseform eller sin saltform. I en ytterligere utførelse blir aminosyrene eller aminosyreanalogene brukt i en konsentrasjon som er tilstrekkelig til å hindre eller forsinke aggregering av proteinet.
I en ytterligere utførelse blir metionin (eller andre svovelholdige aminosyrer eller aminosyreanaloger) tilsatt for å hemme oksidasjon av metioninrester til metionsulfoksid når det polypeptidet som virker som det terapeutiske middelet er et polypeptid som omfatter minst én metioninrest som er utsatt for slik oksidasjon. Med å "hemme" forstås en minimal akkumulering av metioninoksiderte forbindelser over tid. En hemming av metioninoksidasjon resulterer i et større bibehold av polypeptidet i sin passende molekylære form. Enhver stereoisomer av metionin (L eller D) eller kombinasjoner av disse kan brukes. Den mengden som tilsettes bør være en mengde som er tilstrekkelig til å hemme oksidasjon av metioninrester slik at mengden av metioninsvoveloksid er akseptabel for regulerende myndigheter. Typisk betyr dette at sammensetningen inneholder maksimalt fra omtrent 10% til omtrent 30% metioninsulfoksid. Generelt kan dette oppnås ved å tilsette metionin slik at forholdet metionin til metionrester varierer fra omtrent 1:1 til omtrent 1000:1, så som fra 10:1 til omtrent 100:1.
Formuleringen kan også omfatte en stabilisator valgt fra gruppen av høymolekylære polymerer eller lavmolekylære forbindelser. Stabilisatoren kan være valgt fra polyetylenglykol (for eksempel PEG 3350), polyvinylalkohol (PVA), polyvinylpyrrolidon, karboksy-/hydroksycellulose eller derivater av disse (for eksempel HPC, HPC-SL, HPC-L og HPMC), syklodekstriner, svovelholdige stoffer så som monotioglyserol, tioglykolinsyre og 2-metyltioetanol og forskjellige salter (for eksempel natriumklorid). Hver enkelt av disse spesifikke stabilisatorene utgjør en alternativ formulering.
De farmasøytiske sammensetningene kan også omfatte ytterligere stabiliserende midler som ytterligere bedrer stabiliteten til det terapeutisk aktive polypeptidet. Stabiliserende midler av spesiell interesse som beskrevet heri inkluderer, men er ikke begrenset til, metionin og EDTA som beskytter polypeptidet mot metioninoksidasjon og et ikke-ionisk overflateaktivt middel som beskytter polypeptidet mot aggregering som er assosiert med frysetørking eller mekanisk s<k>jæring.
Formuleringen kan også omfatte et overflateaktivt middel. Det overflateaktive middelet kan være valgt fra et rensemiddel, etoksylert ricinusolje, polyglykolyserte glyserider, acetyl erte monoglyserider, sorbitan fettsyreestere, polyoksypropylen-polyoksyetylenblokkpolymerer (for eksempel poloksamerer så som Pluronic® F68, poloksamer 188 og 407, Triton X-100 ), polyoksyetylensorbitan fettsyreestere, polyoksyetylen- og polyetylenderivater så som alkylerte og alkoksylerte derivater (forskjellige typer tween, for eksempel Tween-20, Tween-40, Tween-80 og Brij-35), monoglyserider og etoksylerte derivater av disse, diglyserider eller polyoksyetylenderivater av disse, alkoholer, glyserol, lektiner og fosfolipider (for eksempel fosfatidylserin, fosfatidylkolin, fosfatidyletanolamin, fosfatidylinositol, difosfatidylglyserol og sfingomyelin), derivater av fosfolipider (for eksempel dipalmitoylfosfatidinsyre) og lysofosfolipider (for eksempel palmitoyllysofosfatidyl-L-serin og l-acyl-sn-glysero-3-fosfateestere av etanolamin, kolin, serin eller treonin) og alkyl, alkoksyl (alkylester), alkoksy (alkyleter) - derivater av lysofosfatidyl og fosfatidylkoliner, for eksempel lauroyl- og myristoylderivater av lysofosfatidylkolin, dipalmitoylfosfatidylkolin og modifikasjoner av den polare toppgruppen, det vil si koliner, etanolaminer, fosfatidinsyre, seriner, treoniner, glyserol, inositol og de positivt ladde DODAC, DOTMA, DCP og BISHOP, lysofosfatidyl serin og lysofosfatidyltreonin og glyserofosfolipider (for eksempel cefaliner), glyseroglykolipider (for eksempel galaktopyransoid), sfingoglykolipider (for eksempel ceramider, gangliosider), dodecylfosfokolin, hønseegglysolecitin, fusidinsyrederivater (for eksempel natriumtauro-dihydrofusidat, osv.), langkjedede fettsyrer og salter av disse C6-C12 (for eksempel oljesyre og kaprylsyre), acylkarnitiner og derivater, Na<->acylerte derivater av lysin, arginin eller histidin eller sidekjedeacylerte derivater av lysin eller arginin, Na<->acylerte derivater av dipeptider som omfatter enhver kombinasjon av lysin, arginin eller histidin og en nøytral eller sur aminosyre, Na<->acylert derivat av et tripeptid som omfatter enhver kombinasjon av en nøytral aminosyre og to ladde aminosyrer, DSS (dokusatnatrium, CAS-registrering nr. [577-11-7]), dokusatekalsium, CAS-registrering nr. [128-49-4]), dokusatekalium, CAS-registrering nr. [7491-09-0]), SDS (natriumdodekylsulfat eller natriumlaurylsulfat), natriumkaprylat, kolinsyre eller derivater av denne, gallsyrer og salter av disse og glysin- og taurinkonjugater, ursodeoksykolinsyre, natriumkolat, natriumdeoksykolat, natriumtaurokolat, natriumglykokolat, N-heksadecyl-N,N-dimetyl-3-ammonio-l-propansulfonat, anioniske (alkyl-arylsulfonater) monovalente overflateaktive midler, zwitterioniske overflateaktive midler (for eksempel N-alkyl-N,N-dimetylammonio-1 -propansulfonater, 3 -kolamido-1 -propyldimetylammonio-1 - propansulfonat, kationiske overflateaktive midler (kvaternære ammoniumbaser) (for eksempel cetyl-trimetylammoniumbromid, cetylpyridiniumklorid), ikke-ioniske overflateaktive midler (for eksempel dodecyl P-D-glukopyranosid), poloksaminer (for eksempel Tetronic's) som er tetrafunksjonelle blokksampolymerer avledet ved en sekvensmessig tilsetning av propylenoksid og etylenoksid til etylendiamin, eller så kan det overflateaktive middelet være valgt fra gruppen bestående av imidazolinderivater eller blandinger av slike. Hvert enkelt av disse spesifikke overflateaktive midlene utgjør en alternativ formulering.
Bruken av et overflateaktivt middel i farmasøytiske sammensetninger er velkjent innenfor farmasien, og i så henseende refereres det til Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. utgave, 1995.
Formuleringen kan også omfatte proteasehemmere så som EDTA (etylendiamintetraeddiksyre) og benzamidin-HCl, skjønt også andre kommersielt tilgjengelige og egnede proteasehemmere også kan brukes. Bruken av en proteasehemmer er spesielt fordelaktig i farmasøytiske sammensetninger som omfatter zymogener av proteaser for å hindre autokatalyse.
Andre bestanddeler kan også være tilstede i den farmasøytiske formuleringen. Slike ytterligere bestanddeler kan inkludere fuktemidler, emulgeringsmidler, antioksidanter, volumgivende midler, tonisitetsmodifiserende midler, gelateringsmidler, metallioner, oljeholdige bærervæsker, proteiner (for eksempel humant serumalbumin, gelatin eller proteiner) og et zwitterion (for eksempel en aminosyre så som betain, taurin, arginin, glysin, lysin og histidin). Slike ytterligere bestanddeler bør fortrinnsvis ikke skadelig påvirke den totale stabiliteten til den farmasøytiske formuleringen beskrevet heri.
Farmasøytiske sammensetninger som inneholder et antistoff som beskrevet heri kan administreres en pasient som har behov for en slik behandling på flere steder, for eksempel på topiske steder, for eksempel i huden eller i slimhinnene, på steder som omgår absorpsjon, for eksempel administrering i en arterie, i en vene, i hjertet eller på steder som involverer absorpsjon, for eksempel administrering i huden, under huden, i en muskel eller i buken.
Administrering av farmasøytiske sammensetninger kan utføres på flere forskjellige måter, for eksempel lingualt, sublingualt, bukalt, i munnen, oralt, i magesekken og i tarmkanalen, nasalt, i lunge, for eksempel gjennom bronkiene og alveolene eller en kombinasjon av disse, epidermalt, dermalt, transdermalt, vaginalt, rektalt, okulært, for eksempel gjennom konjunktiva, uretalt og parenteralt til pasienter som har behov for en slik behandling.
Det beskrives heri sammensetninger som kan administreres i flere doseformer, for eksempel som løsninger, suspensjoner, emulsjoner, mikroemulsjoner, som multiple emulsjoner, skum, salver, pastaer, plastere, kremer, tabletter, belagte tabletter, rensevæsker, kapsler, for eksempel harde gelatinkapsler og myke gelatinkapsler, stikkpiller, rektale kapsler, dråper, geleer, som en dusj, pulvere, aerosoler, inhaleringspreparater, øyedråper, øyesalver, øyerensevæsker, vaginale pessarer, vaginale ringer, vaginale salver, injeksjonsløsning, in situ transformerende løsninger, for eksempel in situ geldannelse, in situ herding, in situ utfelling, in situ utkrystallisering, infusjonsløsninger og implantater.
Sammensetninger som beskrevet heri kan videre opparbeides i eller knyttes til, for eksempel gjennom kovalente, hydrofobe og elektrostatiske interaksjoner, en medikamentbærer, et medikamentleveringssystem og avanserte medikamentleveringssystemer for ytterligere å bedre stabiliteten til antistoffet, øke dets biotilgjengelighet, øke løselighet, redusere skadelige effekter, oppnå kronoterapi som er velkjent innenfor den medisinske vitenskapen og bedre pasientens tilpasning til medisineringen eller enhver kombinasjon av disse. Eksempler på bærere, medikamentleveringssystemer og avanserte medikamentleveringssystemer inkluderer, men er ikke begrenset til, polymerer, for eksempel cellulose og derivater, polysakkarider, for eksempel dekstran og derivater, stivelse og derivater, poly(vinylalkohol), akrylat- og metakrylatpolymerer, polymelkesyre og polyglykolinsyre og blokksampolymerer av disse, polyetylenglykoler, bærerproteiner, for eksempel albumin, geler, for eksempel termogelende systemer, for eksempel blokksampolymeriske systemer av velkjent type, miceller, liposomer, mikrokuler, nanopartikler, flytende krystaller og dispersjoner av disse, L2-fase og dispersjoner av disse som er velkjente for de med faglig innsikt i hvorledes faser opptrer i lipid-vannsystemer, polymeriske miceller, multiple emulsjoner, selv-emulgerende preparater, selv-mikroemulgerende preparater, syklodekstriner og derivater av disse og dendrimerer.
Det beskrives heri sammensetninger som kan brukes for formulering av faste stoffer, halvfaste stoffer, pulvere og løsninger for lungeadministrering av antistoffet, for eksempel ved å bruke et inhaleringsapparat med doseutmåling, inhaleringsapparat for tørre pulvere og en forstøvningsanordning og hvor slike anordninger er velkjente innenfor farmasien og den medisinske vitenskapen.
Det beskrives heri sammensetninger som kan spesifikt brukes i formuleringen av kontrollerte, vedvarende, utstrakte, forsinkede og langsomt frigjørende medikamentleveirngssystemer. Mer spesifikt, men ikke begrenset til, så kan sammensetningene brukes ved formuleringen av parenteralt kontrollerte frigjørings-og vedvarende frigjøringssystemer (begge systemer fører til en mange gangers reduksjon med hensyn til antallet administreringer), noe som er velkjent innen den farmasøytiske industrien. Enda mer foretrukket er det at de kontrollerte, frigjørende og vedvarende frigjørende systemene administreres subkutant. Eksempler på brukbare kontrollerte frigjørende systemer og sammensetninger hydrogeler, oljeholdige geler, flytende krystaller, polymere miceller, mikrokuler og nanopartikler.
Fremgangsmåter for å produsere kontrollerte frigjørende systemer som kan brukes for sammensetninger som beskrevet heri inkluderer, men er ikke begrenset til, utkrystallisering, kondensering, samutkrystallisering, utfelling, samutfelling, emulgering, dispergering, høytrykks homogenisering, innkapsling, forstøvningstørking, mikroinnkapsling, samacervering, faseseparasjon, løsemiddelfordampning for å fremstille mikrokuler, utdrivning og superkritiske væskeprosesser. I så henseende refereres det til Handbook of Pharmaceutical Controlled Release (Wise, D.L., red. Marcel Dekker, New York, 2000) og Drug and the Pharmaceutical Sciences bind 99: Protein Formulation and Delivery (MacNally, E.J., red. Marcel Dekker, New York, 2000).
Parenteral administrering kan utføres ved subkutan, intramuskulær, intraperitoneal eller intravenøs injeksjon ved hjelp av en sprøyte, eventuelt ved hjelp av en blyantlignende sprøyte. Alternativt kan parenteral administrering utføres ved hjelp av en infusjonspumpe. En ytterligere mulighet er en sammensetning som kan være en løsning eller suspensjon for administrering av antistoffet i form av en nese- eller lungespray. Som en annen mulighet kan de farmasøytiske sammensetningene som inneholder antistoffet som beskrevet heri også tilpasses for transdermal administrering, for eksempel ved en nålefri injeksjon eller fra et plaster, eventuelt som et iontoforetisk plaster eller gjennom slimhinnen, for eksempel ved bukal administrering.
Antistoffet kan også administreres via lungene i en bærervæske som en løsning, suspensjon eller som et tørt pulver ved å bruke enhver av kjente typer anordninger som er egnet for lungemedikamentlevering. Eksempler på disse omfatter, men er ikke begrenset til, tre generelle typer av aerosolutvikling for
lungemedikamentlevering og kan inkludere stråle- eller
ultralydforstøvningsapparater, inhaleringsapparater med doseutmålingsanordning eller inhaleringsapparater for tørre pulvere (kfr. Yu J, Chien YW. Pulmonary drug delivery: Physiologic and mechanistic aspects. Crit Rev Ther Drug Carr Sys 14(4)
(1997) 395-453).
Basert på standardiserte testingsmetodologi, så vil den aerodynamiske diameteren (da) til en partikkel være definert som den geometrisk ekvivalente diameteren for en referanse standard kuleformet partikkel med enhetstetthet (1 g/cm<3>). I det enkleste tilfellet for kuleformede partikler, så vil da være relatert til en referansediameter (d) som en funksjon av kvadratroten av tetthetsforholdet slik det er beskrevet ved følgende formel:
Modifikasjoner av dette forholdet opptrer for partikler som ikke er kuleformede (kfr. Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer R. Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled partiel es. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379-385). Begrepene "MMAD" og "MMEAD" er velkjente innenfor farmasien (kfr. Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer R and represents a measure of the median value of an aerodynamic particle size distribution. Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled partiel es. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379-385). Den massemediane aerodynamiske diameteren (MMAD) og den massemediane effektive aerodynamiske diameteren (MMEAD) som brukes om hverandre, er statistiske parametere og beskriver empirisk størrelsen på aerosolpartikler i forhold til deres potensiale til å bli avsatt i lungene og er uavhengige av den virkelige formen, størrelsen eller tettheten (kfr. Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer R. Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379-385). MMAD blir normalt beregnet ut fra målinger som er gjort ved hjelp av såkalte impaktorer, et instrument som måler partiklenes inertielle opptreden i luft.
Formuleringen kan omdannes til en aerosol ved hjelp av enhver kjent teknologi for fremstilling av aerosoler, så som et forstøvningsapparat, for å oppnå en MMAD-verdi for aerosolpartiklene som er mindre enn 10 nm, fortrinnsvis 1-5 urn og mest foretrukket 1-3 nm. Den foretrukne partikkel størrelsen er basert på den mest effektive størrelsen for levering av et medikament til den dypere delen av lungen hvor proteinet blir optimalt absorbert (kfr. Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer A, Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379-385).
Dyplungeavsetning av lungeformuleringene som omfatter antistoffet kan eventuelt ytterligere optimaliseres ved å bruke modifikasjoner av inhaleringsteknikkene, for eksempel, men ikke begrenset til: Langsom inhaleringsstrøm (for eksempel 30 l/minutt), holde pusten og en tidstilpasning til det tidspunkt da virkningen opptrer.
Begrepet "stabilisert formulering" refererer seg til en formulering med bedret fysisk stabilitet, bedret kjemisk stabilitet eller bedret fysisk og kjemisk stabilitet.
Begrepet "fysisk stabilitet" for proteinformuleringen slik det brukes her, refererer seg til proteinets tendens til å danne biologisk inaktive og/eller uløselige aggregater av proteinet som et resultat av at proteinet eksponeres for varmemekanisk stress eller påkjenning og/eller interaksjon med interfaser og overflater som er destabiliserende så som hydrofobe overflater og interfaser. Fysisk stabilitet for vandige proteinformuleringer blir vanligvis bedømt ved hjelp av visuell undersøkelse og/eller ved turbiditetsmålinger etter at formuleringen fylt i egnede beholdere (for eksempel patroner eller ampuller) blir eksponert for mekanisk/fysisk stress (for eksempel røring) ved forskjellige temperaturer i forskjellige tidsrom. Visuell undersøkelse av formuleringene utføres i et skarpt fokusert lys mot en mørk bakgrunn. Formuleringens turbiditet erkarakterisert veden visuell score som rangerer graden av turbiditet, for eksempel på en skala fra 0 til 3 (en formulering som er helt uten turbiditet tilsvarer en visuell score på 0, mens en formulering som har tydelig visuell turbiditet i dagslys tilsvarer en visuell score på 3). En formulering er klassifisert som fysisk ustabil med hensyn til proteinaggregering når den har visuell turbiditet i dagslys. Alternativt kan formuleringens turbiditet bedømmes ved enkle turbiditetsmålinger av velkjent type. Fysisk stabilitet for vandige proteinformuleringer kan også bedømmes ved å bruke et spektroskopisk middel eller en probe på proteinets konformelle status. Proben er fortrinnsvis et lite molekyl som preferensielt binder seg til en ikke-nativ eller naturlig konformer av proteinet. Et eksempel på en liten molekylær spektroskopisk probe på proteinstruktur er tioflavin T. Tioflavin T er et fluorescerende fargestoff som er meget anvendt for å påvise amyloide fibriller. I nærvær av fibriller og muligens også andre konfigurasjoner, så gir tioflavin T opphav til et nytt eksitasjonsmaksimum på omtrent 450 nm og en bedret emisjon ved omtrent 482 nm når det er bundet til en fibrilproteinform. Ubundet tioflabin T er i alt vesentlig ikke-fluorescerende ved nevnte bølgelengder.
Andre mindre molekyler kan også brukes som prober på forandringer med hensyn til proteinstrukturen fra native til ikke-native tilstander. For eksempel vil "hydrofobe flekk"-prober binde seg preferensielt til eksponerte hydrofobe flekker på et protein. Hydrofobe flekker er generelt begravd eller forefinner seg i den indre tertiære strukturen til et protein i dets native eller naturlige tilstand, men blir eksponert etter hvert som proteinet begynner å folde seg ut eller bli denaturert. Eksempler på slike små molekylære spektroskopiske prober er aromatiske hydrofobe fargestoffer så som antracen, akridin, fenantrolin og lignende. Andre spektroskopiske prober er metall-aminosyrekomplekser så som koboltmetallkomplekser av hydrofobe aminosyrer så som fenylalanin, leukin, isoleukin, metionin og valin eller lignende.
Begrepet "kjemisk stabilitet" i forbindelse med proteinformuleringen slik det brukes her, refererer seg til kjemiske kovalente forandringer i proteinstrukturen som fører til dannelsen av kjemiske nedbrytningsprodukter med et mulig tap av biologisk styrke og/eller mulig bedret immunogene egenskaper sammenlignet med den naturlige opprinnelige proteinstrukturen. Forskjellige kjemiske nedbrytningsprodukter kan dannes avhengig av typen og naturen til det naturlige proteinet og det miljø som proteinet eksponeres for. Eliminering av kjemisk nedbrytning kan sannsynligvis ikke elimineres eller unngås fullstendig og økende mengder av kjemiske nedbrytningsprodukter kan ofte ses eller observeres under lagring og bruk av proteinformuleringen, noe som er velkjent for personer med faglig innsikt. De fleste proteiner er utsatt for deamidering, det vil si en prosess hvor sidekjedeamidgruppen i glutaminyl- eller asparaginylrestene blir hydrolysert og danner en fri karboksyl syre. Andre nedbrytningsveier innbefatter eller involverer dannelsen av høymolekylære transformeringsprodukter hvor to eller flere proteinmolekyler blir kovalent bundet sammen ved transaminering og/eller disulfidinteraksjoner, noe som fører til en dannelse av kovalent bundne dimer-, oligomer- og polymernedbrytningsprodukter (Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J. & Manning M.C., Plenum Press, New York 1992). Oksidasjon (for eksempel av metioninrester) kan nevntes som en annen variant av kjemisk nedbrytning. Den kjemiske stabiliteten til proteinformuleringen kan bedømmes ved å måle mengden av kjemiske nedbrytningsprodukter på forskjellige tidspunkter etter eksponering for varierende miljøbetingelser (dannelsen av nedbrytningsproduktene kan ofte akselereres ved for eksempel å øke temperaturen). Mengden av hvert av de individuelle nedbrytningsproduktene kan ofte bestemmes ved å skille produktene avhengig av molekyl størrelse og/eller ladning ved å bruke forskjellige kromatografiske teknikker (for eksempel SEC-HPLC og/eller RP-HPLC).
Som nevnt ovenfor vil således en "stabilisert formulering" referere seg til en formulering med bedret fysisk stabilitet, bedret kjemisk stabilitet eller bedret fysisk og kjemisk stabilitet. Generelt må en formulering være stabil under bruk og lagring (i overensstemmelse med de anbefalte bruks- og lagringsbetingelser) inntil utløpsdatoen blir nådd.
Den farmasøytiske formuleringen kan omfatte et antistoff som er stabilt i mer enn 6 uker under bruk og mer enn 3 år under lagring.
Den farmasøytiske formuleringen kan omfatte et antistoff som er stabilt i mer enn 4 uker under bruk og mer enn 3 år ved lagring.
Den farmasøytiske formuleringen som omfatter antistoffet kan være stabilt i mer enn 4 uker under bruk og mer enn to år under lagring.
Den farmasøytiske formuleringen som omfatter et antistoff kan være i mer enn 2 uker under bruk og i mer enn to år under lagring.
Som beskrevet ovenfor så kan farmasøytisk akseptable bærere som kan brukes i disse sammensetningene inkludere, men ikke være begrenset til, ioneutbyttere; aluminiumoksid; aluminiumstearat; lecitin; serumprotein så som humant serumalbumin; bufferstoffer så som fosfater og glysin; sorbinsyre; kaliumsorbat; delvise glyseridblandinger av mettede vegetabilske fettsyrer; vann; salter eller elektrolytter så som protaminsulfat, dinatriumhydrogenfosfat, kaliumhydrogenfosfat, natriumklorid og sinksalter; kolloidalt silika; magnesiumtrisilikat; polyvinylpyrrolidon; cellulosebaserte stoffer; polyetylenglykol; natriumkarboksymetylcellulose; polyakrylater; forskjellige typer voks; polyetylen-polyoksyprolyenblokkpolymerer; polyetylenglykol; og ullfett.
Sammensetningene som beskrevet heri kan brukes i en fremgangsmåte for å forsterke aktiviteten av NK-celler i en pasient eller i en biologisk prøve. Denne fremgangsmåten omfatter et trinn hvor nevnte sammensetning kontaktes nevnte pasient eller biologiske prøve. En slik fremgangsmåte vil kunne brukes både for diagnostiske og terapeutiske formål.
For bruk i forbindelse med en biologisk prøve, så kan antistoffsammensetningen administreres ved at den ganske enkelt blandes med eller påsettes prøven direkte, avhengig av prøvens natur (enten den er en væske eller et fast stoff). Den biologiske prøven kan direkte kontaktes antistoffet i enhver egnet anordning (plate, pose, koble, osv.). For bruk i sammenheng med en pasient, må sammensetningen formuleres for administrering til pasienten.
Som beskrevet ovenfor, så kan sammensetningen administreres oralt, parenteralt, ved inhaleringsforstøvning, topisk, rektalt, nasalt, bukalt, vaginalt eller via et implantert reservoar. Begrepet "parenteral" slik det brukes her, inkluderer subkutan, intravenøs, intramuskulær, intraartikulær, intrasynovial, intrasternal, intratekal, intrahepatisk, intralesjonal og intrakranial injeksjon eller ved hjelp av infusjonsteknikker. Det er foretrukket at sammensetningene blir administrert oralt, intraperitonealt eller intravenøst.
Sterile injiserbare former av sammensetningene kan være vandige eller være en oljeholdig suspensjon. Disse suspensjonene kan formuleres ved hjelp av velkjent farmasøytisk teknikk ved å bruke egnede dispergerings- eller fuktemidler og suspenderingsmidler. Det sterile injiserbare preparatet kan også være en steril injiserbar løsning eller suspensjon i et ikke-toksisk, parenteralt akseptabelt fortynningsmiddel eller løsemiddel, for eksempel som en løsning i 1,3-butandiol. Blant akseptable bærervæsker og løsemidler som kan anvendes, er vann, Ringers løsning og en isoton natriumkloridløsning. I tillegg blir ofte sterile fikserte oljer brukt som et løsemiddel eller suspenderende medium. For dette formålet kan enhver mild fiksert olje brukes inklusive syntetiske mono- eller diglyserider. Fettsyrer så som oljesyre og dets glyserinderivater kan også brukes ved fremstillingen av injiserbare preparater, noe som også er tilfellet med naturlige farmasøytisk akseptable oljer så som olivenolje eller ricinusolje, spesielt i deres polyoksyetylerte versjoner. Disse oljeløsningene eller suspensjonene kan også inneholde langkjedede alkoholfortynningsmidler eller dispergeringsmidler så som karboksymetylcellulose eller lignende dispergeringsmidler av den type som brukes ved formuleringen av farmasøytisk akseptable doseringsformer inklusive emulsjoner og suspensjoner. Det er også mulig å bruke vanlig anvendte overflateaktive midler så som Tween, Span og andre emulgeringsmidler eller andre midler som bedrer biotilgjengeligheten og som er vanlig bruk ved fremstillingen av farmasøytisk akseptable faste, flytende eller andre doseringsformer.
Sammensetningene kan administreres oralt i enhver oralt akseptabel doseringsform som inkluderer, men som ikke er begrenset til kapsler, tabletter, vandige suspensjoner eller løsninger. I forbindelse med tabletter for oral bruk, så vil vanlig brukte bærerstoffer inkludere kaltose og maisstivelse. Smøremidler så som magnesiumstearat blir også ofte tilsatt. For oral administrering i en kapselform, så vil man ofte kunne bruke fortynningsmidler så som laktose og tørket maisstivelse. Når vandige suspensjoner er nødvendig for oral anvendelse, så vil den aktive bestanddelen bli kombinert eller blandet med emulgeringsmidler og suspenderingsmidler. Hvis det er ønskelig, kan også søtningsstoffer, smaksstoffer og fargestoffer tilsettes.
Alternativt kan sammensetningene administreres i form av stikkpiller for rektal administrering. Disse kan fremstilles ved å blande middelet med en egnet ikke- irriterende eksipient som er fast ved romtemperatur med flytende ved rektal temperatur og vil derfor smelte i rektum slik at medikamentet frigjøres. Slike materialer inkluderer kakaosmør, bivoks og polyetylenglykoler.
Sammensetningene kan også administreres topisk, spesielt når behandlingsmålet inkluderer områder eller organer som er lett tilgjengelige ved topisk anvendelse inklusive sykdommer i øyet, huden eller i den nedre del av fordøyelseskanalen. Egnede topiske formuleringer kan lett fremstilles for hvert av disse områdene eller organene.
Topisk anvendelse i den nedre fordøyelseskanalen kan utføres ved hjelp av en rektal stikkpilleformulering (se ovenfor) eller i en egnet enemaformulering. Topisk-transdermale plastere kan også brukes.
For topiske formål kan sammensetningene formuleres i en egnet salve som inneholder den aktive komponenten som er suspendert eller løst i en eller flere bærere. Bærere for topisk administrering av forbindelsene inkluderer, men er ikke begrenset til, mineralolje, flytende petrolatum, hvit petrolatum, propylenglykol, polyoksyetylen, polyoksypropylenforbindelser, emulgerende voks og vann. Alternativt kan sammensetningene formuleres i en egnet lotion eller krem som inneholder de aktive komponentene suspendert eller løst i en eller flere farmasøytisk akseptable bærere. Egnede bærere inkluderer, men er ikke begrenset til, mineralolje, sorbitanmonostearat, polysorbat 60, cetylestervokstyper, cetearylalkohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol og vann.
For oftalmisk bruk kan sammensetningene formuleres som mikroniserte suspensjoner i isotone, pH-justerte sterile saltløsninger eller fortrinnsvis som løsninger i isotone, pH-justerte sterile saltløsninger, enten med eller uten et konserveringsmiddel så som benzylalkoniumklorid. Alternativt, for oftalmisk bruk, kan sammensetningene formuleres som en salve så som ved hjelp av petrolatum.
Sammensetningene kan også administreres ved en nasal aerosol eller ved inhalering. Slike sammensetninger kan fremstilles ved hjelp av teknikker som er velkjente innenfor den farmasøytiske industrien og kan fremstilles som løsninger i saltløsning ved å bruke benzylalkohol eller andre egnede konserveringsmidler, absorpsjonsfremmende midler for å bedre biotilgjengelighet, fluorkarboner og/eller andre kjente og vanlige løselighetsgjørende eller dispergerende midler.
Flere monoklonale antistoffer har vist seg å være effektive i kliniske situasjoner så som rituksan (rituksimab), herceptin (trastuzumab) eller xolair (omalizumab) og lignende administreringsregimer (for eksempel formuleringer og/eller doser og/eller administreringsprotokoller) kan brukes med antistoffene. Doseringsregimer og doser for administrering av antistoffet i farmasøytiske sammensetninger kan bestemmes i overensstemmelse med kjente fremgangsmåter for slike produkter, for eksempel ved å anvende fabrikantenes instruksjoner. For eksempel kan et antistoff som er tilstede i en farmasøytisk sammensetning leveres ved en konsentrasjon på 10 mg/ml i enten 100 mg (10 ml) eller 500 mg (50 ml) engangsampuller. Produktet kan formuleres for IV-administrering i 9,0 mg/ml natriumklorid, 7,35 mg/ml natriumcitratdihydrat, 0,7 mg/ml polysorbat 80 og sterilt vann for injeksjon. pH justeres til 6,5. Et eksempel på et egnet doseringsområde for et antistoff i en farmasøytisk sammensetning kan være mellom omtrent 10 mg/m<2>og 500 mg/m<2>. Det er imidlertid underforstått at disse regimene kun er eksempler og at optimale regimer kan tilpasses ved å ta hensyn til affinitet og tålegrensen for det spesielle antistoffet som brukes i den farmasøytiske sammensetningen og må følgelig bestemmes ved kliniske forsøk. De mengder og doseringsregimer når det gjelder injeksjon av et antistoff i en farmasøytisk sammensetning og som vil mette NK-celler i 24 timer, 48 timer, 72 timer eller en uke eller en måned, vil bli bestemt under hensyntagen til antistoffets affinitet og dets farmakokinetiske parametere i mennesker og ikke-humane pattedyr.
Ifølge en annen utførelse kan antistoffsammensetningene ytterligere omfatte ett eller flere andre terapeutiske midler, blant annet midler som normalt anvendes for det spesielle terapeutiske formål for hvilket antistoffet blir administrert. Det eller de ytterligere terapeutiske midlene vil normalt være tilstede i sammensetningen i mengder som er typiske når nevnte antistoff anvendes i en monoterapi for den spesielle sykdom eller tilstand som blir behandlet. Slike terapeutiske midler inkluderer, men er ikke begrenset til, terapeutiske midler for behandling av kreft, terapeutiske midler for å behandle infeksjonssykdommer, terapeutiske midler som brukes i andre immunterapi er, cytokiner (så som IL-2 eller IL-15), andre antistoffer og fragmenter av andre antistoffer.
I en alternativ utførelse kan et antistoff som binder en felles determinant som er tilstede på minst to forskjellige humane hemmende KIR-reseptorgenprodukter og hvor nevnte antistoff er i stand til å nøytralisere KIR-mediert hemming av NK-cellecytotoksitet på NK-celler som uttrykker minst ett av de to nevnte forskjellige humane hemmende KIR-reseptorene, kan inkorporeres i liposomer ("immunliposomer"), enten alene eller sammen med andre stoffer for målsøkende levering til en tumor eller et infeksjonssted i et menneske eller et annet ikke-humant pattedyr. Slike andre stoffer inkluderer nukleinsyrer for å levere gener for genterapi eller for å levere antisens RNA, RNAi eller siRNA for å undertrykke et gen i en NK-celle eller toksiner eller medikamenter for målrettet avliving av NK-celler.
Det er for eksempel tilgjengelig en rekke terapeutiske midler for behandling av kreft. Antistoffsammensetningene og fremgangsmåtene beskrevet heri kan kombineres med andre fremgangsmåter som generelt brukes for behandling av den spesielle sykdommen, den spesielle tumoren, kreftsykdommen eller andre sykdommer eller lidelser hos pasienten. Så lenge en spesiell terapeutisk fremgangsmåte ikke er kjent for å være skadelig med hensyn til pasientens tilstand som sådan og ikke signifikant motvirker aktiviteten til antistoffet i en farmasøytisk sammensetning, så er det mulig å bruke dem i kombinasjon med den foreliggende oppfinnelsen.
I forbindelse med behandling av faste tumorer, så kan de farmasøytiske sammensetningene som beskrevet heri brukes i kombinasjon med klassiske metoder så som kirurgiske inngrep, radioterapi, kjemoterapi og lignende. Beskrevet heri er derfor kombinerte terapier hvor en farmasøytisk sammensetning brukes samtidig med, før eller etter et kirurgisk inngrep eller en strålingsbehandling; eller administreres pasienter sammen med, før eller etter vanlige kjemoterapeutiske, radioterapeutiske eller antiangiogene midler eller målrettede immuntoksiner eller koaguligander.
Når ett eller flere midler brukes i kombinasjon med en antistoffholdig sammensetning i et terapeutisk regime, så er det intet krav om at de samme resultater er summen av de effekter som observeres når hver behandling utføres separat. Skjønt additive effekter generelt er ønskelig, så vil en forbedret antikrefteffekt over det som oppnås med enkle terapier være fordelaktig. Det er videre intet spesielt krav om at den samlede behandlingen oppviser synergistiske effekter, skjønt dette er mulig og fordelaktig.
Ved praktisering av kombinert antikreftterapi, vil man ganske enkelt administrere pasienten en antistoffsammensetning i kombinasjon med et annet antikreftmiddel på en måte som effektivt resulterer i deres samlede antikreftvirkninger inne i dyret eller pasienten. Midlene vil derfor bli tilveiebrakt i mengder som er effektive og i tidsperioder som effektivt resulterer i deres samlede nærvær inne i tumorvevet og hvor de utøver sine samlede virkninger i tumormiljøet. For å oppnå dette, kan en antistoffsammensetning og eventuelle andre kreftmidler administreres pasienten samtidig, enten i en enkelt kombinert sammensetning eller som to distinkte sammensetninger som bruker den samme eller forskjellige administrasjonsveier.
Alternativt kan administreringen av en antistoffsammensetning gå foran, eller komme etter, antikreftbehandlingen for eksempel ved intervaller som varierer fra minutter til uker og måneder. Man vil kunne sikre at antikreftmiddelet og et antistoff i antistoffsammensetningen utøver en fordelaktig kombinert effekt på kreften. For eksempel kan mAb'er administreres pasienter med ikke-Hodgkins lymfom (NHL). Slike pasienter blir typisk behandlet med en kombinasjon av rituksimab og en kombinasjon av kjemoterapimidler som er kjent som CHOP. Anti-KIR-anti stoffer kan således brukes for å behandle NHL-pasienter som går gjennom behandling med rituksimab og CHOP ved å kombinere administreringen av alle disse midlene i et behandlingsregime hvor midlene gis på den samme dagen eller på forskjellige dager, med en lengre behandlingsperiode.
Andre antikreftmidler kan gis før, samtidig med eller etter administrering av en anti-KIR-antistoffsammensetning . Når immunkonjugater av et antistoff brukes i antistoffsammensetningen , så kan imidlertid forskjellige antikreftmidler gis samtid eller administreres deretter.
I visse situasjoner kan det endog være ønskelig å forlenge behandlingsperioden signifikant, hvor det går flere dager (2, 3, 4, 5, 6 eller 7), flere uker (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 eller 8) eller endog flere måneder (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 eller 8) mellom de respektive administreringene av antikreftmiddelet eller antikreftbehandlingen og administreringen av en antistoffsammensetning . Dette kan være fordelaktig under omstendigheter hvor antikreftmiddelet er tenkt i alt vesentlig å ødelegge tumoren så som ved et kirurgisk inngrep eller kjemoterapi, og hvor administreringen av en antistoffsammensetning er tenkt å hindre mikrometastase eller fornyet tumorvekst.
Man kan også se for seg at en eller flere administreringer av enten en anti-KIR-antistoffbasert sammensetning eller av antikreftmiddelet. Disse midlene kan administreres om hverandre, for eksempel på alternerende dager eller uker; eller en behandling med en anti-KTR-sammensetning ifølge den foreliggende oppfinnelsen fulgt av en syklus med antikreftmiddelterapi. I ethvert tilfelle, for å oppnå turnorregresjon ved bruke en kombinert terapi, så er det utelukkende et krav at begge midlene leveres i en samlet mengde som effektivt utøver en antitumoreffekt, uansett tidspunktene for administrering.
Med hensyn til kirurgi, så kan ethvert kirurgisk inngrep praktiseres i kombinasjon med den foreliggende oppfinnelsen. I forbindelse med radioterapi, kan man tenke seg enhver mekanisme for å indusere DNA-skade lokalt inne i kreftceller så som gammabestråling, røntgenstråler, UV-stråler, mikrobølger og endog elektroniske emisjoner og lignende. Den direkte levering av radioisotoper til kreftceller kan også tenkes, og dette kan brukes i sammenheng med et målrettet antistoff eller andre målrettede anordninger.
I andre aspekter kan de immunmodulerende forbindelsene eller regimene administreres i kombinasjon med eller som en del av antistoffsammensetningene ifølge oppfinnelsen. Foretrukne eksempler på immunmodulerende forbindelser inkluderer cytokiner. Forskjellige cytokiner kan brukes i slike kombinerte metoder. Eksempler på cytokiner som kan brukes i kombinasjon med den foreliggende oppfinnelsen inkluderer IL-lalfa IL-lbeta, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-21, TGF-beta, GM-CSF, M-CSF, G-CSF, TNF-alfa, TNF-beta, LAF, TCGF, BCGF, TRF, BAF, BDG, MP, LIF, OSM, TMF, PDGF, IFN-alfa, IFN-beta, IFN-gamma. Cytokiner som brukes i kombinasjonsbehandling eller i sammensetninger ifølge den foreliggende oppfinnelsen, blir administrert ifølge standardregimer som er i overensstemmelse med kliniske indikasjoner så som pasientens tilstand og cytokinets relative toksitet. Andre immunmodulerende forbindelser som kan administreres i kombinasjon med eller som en del av antistoffsammensetningene ifølge den foreliggende oppfinnelsen inkluderer antistoffer som spesifikt binder seg til andre hemmende reseptorer på lymfocytter og inkluderer, men er ikke begrenset til, antistoffer så som anti-CTLA4-antistoffer eller anti-CD94/NKG2A-antistoffer (se for eksempel U.S. offentlige patentsøknad 20030095965). Det er også kjent varianter og derivater av disse molekylene og alternativt kan slike brukes i de nevnte fremgangsmåtene og kan inkorporeres i sammensetninger ifølge oppfinnelsen når dette måtte passe.
I visse utførelser så kan de tverreagerende, blokkerende og/eller hemmende anti-KIR-antistoff omfattende terapeutiske sammensetningene beskrevet heri administreres i kombinasjon med eller kan ytterligere omfatte et kjemoterapeutisk eller hormonelt terapimiddel. En rekke forskjellige hormonelle terapi- og kjemoterapeutiske midler kan brukes i kombinasjon med de behandlingsmetoder som er beskrevet her. Kjemoterapeutiske midler som for eksempel kan brukes inkluderer, men er ikke begrenset til, alkylerende midler, antimetabolitter, cytotoksiske antibiotika, vinkaalkaloider, for eksempel adriamycin, daktinomycin, mitomycin, karminomycin, daunomycin, doksorubicin, tamoksifen, taksol, taksoter, vinkristin, vinblastin, vinorelbin, etoposid (VP-16), 5-fluoruracil (5FU), cytosinarabinosid, syklofosfamid, tiotepa, metotreksat, kamptotecin, aktinomycin-D, mitomycin C, cisplatin (CDDP), aminopterin, kombretastatin(er) og derivater og formedikamenter av disse.
Hormonelle midler inkluderer, men er ikke begrenset til, for eksempel LHRH-agonister så som leuprorelin, goserelin, triptorelin og buserelin; antiøstrogener så som tamoksifen og toremifen; antiandrogener så som flutamid, nilutamid, cyproteron og bikalutamid; aromatasehemmere så som anastrozol, eksemestan, letrozol og fadrozol; og progestagener så som medroksy, klormadinon og megestrol.
Det er underforstått av de med faglig innsikt at de passende doser av de kjemiske terapeutiske midlene vil være nokså lik dem som allerede anvendes i kliniske terapier hvor de nevnte kjemoterapeutika administreres alene eller i kombinasjon med andre kj emoterapeutika. Som et rent eksempel er det for eksempel mulig å bruke midler så som cisplatin og andre DNA-alkylerende forbindelser. Cisplatin har vært meget anvendt for behandling av kreft og hvor effektive doser som brukes for kliniske formål er 20 mg/m<2>i 5 dager hver tredje uke med totalt tre behandlinger. Cisplatin blir ikke absorbert oralt og må derfor leveres via injeksjon, for eksempel intravenøst, subkutant, intratumoralt eller intraperitonealt.
Ytterligere brukbare kjemoterapeutiske midler inkluderer forbindelser som interfererer eller påvirker DNA-replikasjon, mitose og kromosomal segregering og midler som bryter syntesen og utviklingen av polynukleotidforløpere. En rekke eksempler på kjemoterapeutiske midler for kombinert terapi er angitt i tabell C i U.S. patent nr. 6,524,583. Hvert av de midler som der er angitt, er utelukkende eksempler og ikke begrensende som sådan. Det henvises i så henseende til "Remington's Pharmaceutical Sciences" 15. utgave, kapittel 33, spesielt sidene 624-652. Det vil være en variasjon med hensyn til dosene, alt avhengig av den tilstand som behandles. Den legen som administrerer behandlingen vil være i stand til å bestemme en passende dose for den enkelte pasient.
De foreliggende tverreagerende, blokkerende og/eller hemmende anti-KIR-antistoffsammensetningene kan brukes i kombinasjon med ethvert av en eller flere antiangiogene terapier og kan ytterligere omfatte antiangiogene midler. Eksempler på slike midler inkluderer nøytraliserende antistoffer, antisens RNA, siRNA, RNAi, RNA-aptamerer og ribozymer som hver er rettet inn mot VEGF eller VEGF-reseptorer (U.S. patent nr. 6,524,583). Varianter av VEGF med antagonistiske egenskaper kan også brukes, slik det for eksempel er beskrevet i WO 98/16551. Ytterligere eksempler på antiangiogene midler som kan brukes i sammenheng med kombinert terapi, er angitt i tabell D i U.S. patent nr. 6,524,583.
Anti-KIR-antistoffsammensetningene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan med fordel også brukes i kombinasjon med fremgangsmåter for å indusere apoptose eller kan omfatte apoptotiske midler. Det er for eksempel identifisert en rekke onkogener som hemmer apoptose eller programmert celledød. Eksempler på onkogener i denne kategorien inkluderer, men er ikke begrenset til, bcr-abl, bcl-2 (forskjellig fra bcl-1, syklin Dl; GenBank aksesjonsnummer M14745, X06487; U.S. patent nr. 5,650,491; og 5,539,094) og onkogener som hører til samme familien og som inkluderer Bcl-xl, Mcl-1, Bak, Al og A20. Overekspresjon av bcl-2 ble først oppdaget i T-cellelymfomer. Onkogenet bcl-2 fungerer ved å binde og inaktivere Bax, et protein i den apoptotiske signalveien. Hemming av bcl-2-funksjonen hindrer inaktivering av Bax, noe som gjør at den apoptotiske signalveien utvikler seg videre. Hemming av denne klassen av onkogener, for eksempel ved å bruke antisens nukleotidsekvenser, RNAi, siRNA eller småmolekylære kjemiske forbindelser, kan tenkes brukt i den foreliggende oppfinnelsen for å bedre apoptose (U.S. patentene 5,650,491; 5,539,094; og 5,583,034).
Anti-KIR-anti stoffsammensetningene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan også omfatte eller kan brukes i kombinasjon med molekyler som omfatter en målrettet del, for eksempel et antistoff, ligand eller konjugat av disse, som er rettet inn mot en spesifikk markør på en målcelle ("målrettet middel"), for eksempel en måltumorcelle. Generelt så vil målrettede midler som brukes i disse ytterligere aspekter av oppfinnelsen fortrinnsvis gjenkjenne tilgjengelige turnorantigener som preferensielt eller spesifikt blir uttrykt i tumorsetet. De målrettede eller målsøkende midlene vil generelt binde seg til en overflateuttrykt, overflatetilgjengelig eller overflatelokalisert komponent i en tumorcelle. De målrettede midlene vil fortrinnsvis også ha egenskaper som høy affinitet og vil ikke utøve signifikante in vivo sideeffekter eller bivirkninger mot livsoppholdende normalt vev så som ett eller flere vev valgt fra hjerte, nyre, hjerne, lever, benmarg, kolon, bryst, prostata, skjoldbruskkjertelen, galleblæren, lungene, binyrene, muskler, nervefibere, pankreas, hud eller andre livsopprettholdende organer eller vev i menneskekroppen. Begrepet "utøver ikke signifikante sideeffekter" slik det brukes her, refererer seg til det faktum at et målsøkende middel, når det administreres in vivo, bare vil gi neglisjerbare eller klinisk behandlbare sideeffekter, for eksempel av den type som normalt opptrer under kjemoterapi.
Med behandlingen av tumorer kan en antistoffsammensetning ifølge oppfinnelsen ytterligere omfatte, eller kan brukes i kombinasjon med, tilhørende forbindelser. Tilhørende forbindelser kan for eksempel inkludere antiemetika så som serotoninantagonister og terapier så som fenoltiaziner, substituerte benzamider, antihistaminer, butyofenoner, kortikosteroider, benzodiazepiner og cannabinoider; bifosfonater så som zoledroninsyre og pamidroninsyre; og hematopoietiske vekstfaktorer så som erytropoietin og G-CSF, for eksempel filgrastim, lenograstim og darbepoietin.
I en annen utførelse vil to eller flere antistoffer gjenkjenne forskjellige epitoper eller determinanter inklusive NKVSFl, DF200, 1-4F1 og/eller 1-7F9 og kan kombineres i en enkelt sammensetning for derved å redusere eller nøytralisere de hemmende effektene til så mange KIR-genprodukter som mulig. Sammensetninger som omfatter kombinasjoner av tverreaktive hemmende KIR-antistoffer eller fragmenter eller derivater av disse, vil muliggjøre enda videre anvendelser, ettersom det sannsynligvis foreligger en liten prosent av den humane populasjonen som vil mangle enhver av de hemmende KIR-genproduktene som gjenkjennes av et enkelt tverreagerende antistoff. På lignende måte vil en antistoffsammensetning ifølge den foreliggende oppfinnelsen ytterligere omfatte ett eller flere antistoffer som gjenkjenner enkelte hemmende KIR-undertyper. Slike kombinasjoner vil igjen gi videre anvendelser i en terapeutisk sammenheng. Et antistoff ifølge oppfinnelsen kan følgelig kombineres med annen anti-KIR-antistoffbinding til en eller flere av for eksempel KIR2DL1, KIR2DLK2, KIR2DL3, KIR3DL1, KIR3DL2 og KIR3DL3.
Det beskrives også heri en fremgangsmåte for å forsterke NK-celleaktivitet hos en pasient som har behov for dette ved å administrere en sammensetning ifølge den foreliggende oppfinnelsen til nevnte pasient. Fremgangsmåten er mer spesifikt rettet inn mot eller ment å bedre eller forsterke NK-celleaktivitet i pasienter med en sykdom hvor forsterket NK-celleaktivitet er fordelaktig eller som skyldes eller erkarakterisert vedutilstrekkelig NK-celleaktivitet så om kreft, en annen proliferativ lidelse, en infeksjonssykdom eller en immunlidelse. Mer spesifikt kan fremgangsmåtene ifølge den foreliggende oppfinnelsen brukes for å behandle en rekke forskjellige kreftformer og andre proliferative sykdommer som inkluderer, men som ikke er begrenset til, carcinom, blant annet så som i blæren, brystet, kolon, nyrene, leveren, lungene, eggstokkene, prostata, pankreas, magesekken, halsen, skjoldbruskkjertelen og huden inklusive skvamøst cellecarcinom; hematopoietiske tumorer i lymfekj erti ene inklusive leukemi, akutt lymfocyttisk leukemi, akutt lymfoblastisk leukemi, B-cellelymfom, T-cellelymfom, Hodgkins lymfom, ikke-Hodgkins lymfom, hårcellelymfom og Burketts lymfom; hematopoi etiske tumorer av myelid type inklusive akutte og kroniske myelogene leukemier og promyelocyttisk leukemi; tumorer av mesenkymal opprinnelse inklusive fibrosarkom og rabdomyosarkom; andre tumorer inklusive melanom, seminom, teratocarcinom, nevroblastom og gliom; tumorer i det sentrale og perifere nervesystemet inklusive astrocytom, nevroblastom, gliom og schwannomer; tumorer av mesenkymal opprinnelse inklusive fibrosarkom, rabdomyosarkom og osteosarkom; og andre tumorer som inkluderer melanom, xeroderma pigmentosum, keratoakantom, seminom, tyroid follikulær kreft og teratocarcinom.
Andre foretrukne lidelser som kan behandles ifølge oppfinnelsen inkluderer hematopoi eti ske tumorer av lymfoid opprinnelse, for eksempel T-celle- og B-celletumorer og som inkluderer, men som ikke er begrenset til, T-cellelidelser så som T-prolymfocyttisk leukemi (T-PLL) inklusive de av småcelle og cerebriform celletype; stor granulær lymfocyttleukemi (LGL), fortrinnsvis av T-celletypen; Sezarysyndrom (SS); voksent T-celleleukemilymfom (ATLL); a/d T-NHL hepatosplenisk lymfom; perifert/posttymisk T-cellelymfom (pleomorfe og immunoblastiske undertyper); angioimmunoblastisk T-cellelymfom; angiosentrisk (nasalt) T-cellelymfom; anaplastisk (Kil+) storcellelymfom; tarm T-cellelymfom; T-lymfoblastisk; og lymfom/leukemi (T-Lbly/T-ALL).
Andre proliferative lidelser kan også behandles ifølge den foreliggende oppfinnelsen og inkluderer for eksempel hyperplasier, fibrose (spesielt lungefibrose, men også andre typer av fibrose så som nyrefibrose), angiogenese, psoriasis, aterosklerose og glatt muskelproliferering i blodkar så som stenose og restenose etter angioplasti. Det tverreagerende hemmende KTR-antistoffet ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan brukes for å behandle eller å hindre infeksjonssykdommer og inkluderer fortrinnsvis enhver infeksjon som er forårsaket av virus, bakterier, protozoer, muggsopper eller andre typer sopp. Slike virusinfiserende organismer inkluderer, men er ikke begrenset til, hepatitt type A, hepatitt type B, hepatitt type C, influensa, varicella, adenovirus, herpes simpleks type I (HSV-1), herpes simpleks type 2 (HSV-2), kvegpest, rinovirus, ekkovirus, rotavirus, respiratorisk synkytialvirus, papillomvirus, cytomegalovirus, ekinovirus, arbovirus, huntavirus, coxsakkievirus, kusmavirus, meslingvirus, rubellavirus, poliovirus, Ebolavirus og humant immunsviktvirus type I eller type 2 (HIV-1 og HIV-2).
Bakterieinfeksjoner som kan behandles ifølge den foreliggende oppfinnelsen inkluderer, men er ikke begrenset til, infeksjoner som skyldes de følgende bakterier: Staphylococcus; Streptococcus inklusive S. pyogenes; Enterococcl; Bacillus, inklusive Bacillus anthracis og Lactobacillus; Listeria; Corynebacterium diphtheriae; Gardnerella inklusive G. vaginalis; Nocardia; Streptomyces; Thermoactinomyces vulgaris; Treponerna; Camplyobacter, Pseudomonas inklusive Raeruginosa; Legionella; Neisseria inklusive N. gonorrhoeae og N. meningitides; Flavobacterium inklusive F. meningosepticum og F. odoraturn; Brucella; Bordetella inklusive B. pertussis og B. bronchiseptica; Escherichia inklusive E. coli, Klebsiella; Enterobacter, Serratia inklusive S. marcescens og S. liquefaciens; Edwardsiella; Proteus inklusive P. mirabilis og P. vulgaris; Streptobacillus; Rickettsiaceae inklusive R. fickettsfi, Chlamydia inklusive C. psittaci og C. trachornatis; Mycobacterium inklusive M. tuberculosis, M. intracellulare, M. folluiturn, M. laprae, M. avium, M. bovis, M. africanum, M. kansasii, M. intracellulare og M. lepraernurium; og Nocardia.
Protozoinfeksj oner som kan behandles ifølge den foreliggende oppfinnelsen inkluderer, men er ikke begrenset til, infeksjoner som skyldes leishmania, kokzidioa og trypanosom. En fullstendig liste over infiserende sykdommer kan finnes på hjemmesiden til the National Center for Infectious Disease (NCID) ved Center for Disease Control (CDC) (www.cdc.gov/ncidod/diseases/). Alle de nevnte sykdommene er kandidater for behandling ved å bruke de tverreagerende hemmende KIR-anti stoffene.
Slike fremgangsmåter for å behandle forskjellige infeksjonssykdommer kan anvende antistoffsammensetningen , enten alene eller i kombinasjon med andre behandlinger og/eller terapeutiske midler som er kjent for å behandle slike sykdommer inklusive antivirale midler, antisoppmidler, antibakterielle midler, antibiotika, antiparasittiske midler og antiprotozoale midler. Når disse fremgangsmåtene innbefatter ytterligere behandlinger med ytterligere terapeutiske midler, så kan disse administreres sammen med antistoffene , enten som en enkeltdoseform eller som separate multiple doseringsformer. Ved administrasjon av en separat doseringsform, så kan det ytterligere middelet administreres før, samtidig med eller etter administreringen av antistoffet.
Ytterligere aspekter og fordeler ved oppfinnelsen er beskrevet i det følgende eksperimentelle avsnittet, som utelukkende må anses som illustrerende.
EKSEMPLER
Eksempel 1: Rensing av PBL'er og utvikling av polyklonale eller klonale NK-cellelinjer
PBL'er ble hentet fra friske frivillige forsøkspersoner ved hjelp av Ficoll-Hypaque-gradienter og fjerning av plastisk tilfestede celler. For å oppnå anrikede NK-celler ble PBL'ene innkubert med anti-CD3, anti-CD4 og anti-HLA-DR mAb'er i 30 minutter ved 4°C fulgt av en innkubering med geit antimus magnetiske perler (Dynal) (30 minutter ved 4°C) og en immunomagnetisk seleksjon ved fremgangsmåter som er velkjente (Pende et al., J Exp Med 1999; 190: 1505-1516). CD3"- CD4"- DR"-celler ble dyrket på bestrålte føderceller og 100 U/ml interleukin 2 (proleukin, Chiron Corporation) og 1,5 ng/ml fytohemagglutinin A (Gibco BRL) for å oppnå polyklonale NK-cellepopulasjoner. NK-cellene ble så klonet ved begrensende fortynning og klonene av NK-celler ble såkarakterisert vedflowcytometri for ekspresjon av celleoverflatereseptorer.
De mAb som ble brukt var JT3A (IgG2a, anti-CD3), EB6 og GL183 (IgGl, anti-KIR2DL1 og KIR2DL3 henholdsvis), XA-141 (IgM, anti-KIR2DLl med den samme spesifitet som EB6), anti-CD4 (HP2,6) og anti-DR (Dl, 12, IgG2a). I stedet for JT3A, HP2,6 og DR1,12, så er det også mulig å bruke andre kommersielt tilgjengelige mAb'er med samme spesifiteter. EB6 og GL183 er kommersielt tilgjengelige (Beckman Coulter Inc., Fullerton, CA). XA-141 er ikke kommersielt tilgjengelig, men mAb EB6 kan på lignende måte brukes for kontrollrekonstituering av oppløsning, slik det er vist i eksemplene og de foreliggende figurer og beskrevet av Moretta et al., J Exp Med 1993; 178: 597-604.
Cellene ble farget med de passende antistoffene (30 mns ved 4°C) fulgt av PE- eller FITC-konjugerte polyklonale antimusantistoffer (Southern Biotechnology Associates Inc). Prøvene ble analysert ved en cytofluorometrisk analyse (flowcytometri) i et FACScan-apparat (Becton Dickinson, Mountain View, CA).
De følgende NK-celleklonene ble brukt i denne undersøkelsen. CPU, CN5 og CN505 er KIR2DL1 -positive kloner og blir farget av EB6 (IgGl, anti-KIR2DLl) eller XA-141 (IgM, anti-KIR2DLl med den samme spesifitet som sammenlignet med EB6-antistoffer). CN12 og CP502 er KIR2DL3-uttrykkende NK-kloner og blir farget av GLI83-antistoff (IgGl, anti-KIR2DL2/3).
NK-klonenes cytolyttiske aktivitet ble undersøkt ved hjelp av en standard 4 timers 5 lCr frigjøringsprøve hvor effektor NK-celler ble testet for sin evne til å avlive målceller som uttrykte HLA-Cw3 eller -Cw4, HLA-positive cellelinjer som er kjent for sin følsomhet for NK-celleoppløsning. Alle målene ble brukt i en konsentrasjon på 5000 celler pr brønn i en mikrotitrerings 96 brønners plate og effektonmålforholdene er angitt på figurene (vanligvis 4 effektorceller pr målcelle). Den cytolyttiske prøven ble utført med eller uten hybridomsupernatant av de angitte monoklonale antistoffene ved en V2(1:1) fortynning. Fremgangsmåten var i alt vesentlig den samme som beskrevet i Moretta et al., J Exp Med 1993; 178: 597-604.
Eksempel 2: Utvikling av nye mAb'er
mAb'er ble utviklet ved å immunisere 5 uker gamle Balb/C-mus med aktiverte polyklonale eller monoklonale humane NK-cellelinjer som beskrevet i Moretta et al., J Exp Med 1990; 172: 1589-1598. Etter forskjellige cellefusjoner ble de nye mAb'er først selektert for sin evne til å tverreagere med EB6- og GLI83-positive NK-cellelinjer og kloner. Positive monoklonale antistoffer ble ytterligere screenet for sin evne til å rekonstituere oppløsning av EB6-positve eller GL 183-positive NK-kloner av Cw4- eller Cw3-positive mål henholdsvis.
Cellefarging ble utført på følgende måte. Cellene ble farget med en rekke forskjellige antistoffer (1 ng/ml eller 50 ni supernatant, 30 mns ved 4°C) fulgt av PE-konjugert geit F(ab')2-fragment antimus IgG (H+L) eller PE-konjugert geit F(ab')2-fragment antihumant IgG (Fc gamma) antistoffer (Beckman Coulter). Cytofluorometrisk analyse ble utført i et Epics XL.MCL-apparat (Beckman Coulter).
Ett av de monoklonale antistoffene, DF200 mAb, viste seg å reagere med forskjellige enheter innenfor KIR-familien inklusive KIR2DL1 og KIR2DL2/3. Både KIR2DL1 -positive og KIR2DL2/3-positive NK-celler ble skarpt farget med DF200 mAb (figur 1).
NK-kloner som uttrykte en eller en annen (eller endog begge) disse HLA klasse I-spesifikke hemmende reseptorene ble brukt som effektorceller mot målceller som uttrykker ett eller flere HLA-C-alleler. Cytotoksitetsprøvene ble utført som følger. Den cytolyttiske aktiviteten til YTS-KIR2DL1 eller YTS-Eco (KIR-negative) cellelinjer ble bedømt ved en standard 4 timers Cr-51 frigjøringsprøve. Målcellene var HLA-Cw4-positive eller -negative B-EBV-cellelinjer eller HLA-Cw4-transfekterte 721.221-celler. Alle målene ble brukt i en konsentrasjon på 3000 celler pr brønn i mikrotiterplater. Effektor/målforholdet er angitt på figurene. Den cytolyttiske prøven ble utført med eller uten de angitte fullengde eller F(ab')2-fragmentene av monoklonale mus- eller humane antistoffer. Som forventet hadde de KIR2DL1 -positive (KIR2DL1<+>) NK-klonene liten, hvis noen som helst, cytolyttisk aktivitet mot målceller som uttrykte HLA-Cw4 og KIR2DL3+ NK-kloner hadde liten eller ingen aktivitet på Cw3-positive mål. I nærvær av DF200 mAb (som ble brukt for å maskere deres KIR2DL-reseptorer), var imidlertid NK-klonene ikke i stand til å gjenkjenne sine HLA-C-ligander og hadde sterk cytolyttisk aktivitet mot mål som uttrykte Cw3 eller Cw4 (eksempler på resultater er vist på figurene 2-6). CIR-cellelinjen (CW4+ EBV-cellelinje, ATCC nr. CRL-1993) som uttrykker HLA-Cw4 (men ingen gruppe 1 HLA-C-allotyper) ble for eksempel ikke avlivet av KTR2DL1 -positive NK-kloner (CN5/CN505), men hemmingen kunne effektivt reverseres ved å bruke enten DF200 eller et vanlig anti-KIR2DLl mAb. På den annen side så viste det seg at NK-kloner som uttrykte KIR2DL2/3<+>KIR2DL1-fenotypen (CN12) effektivt avlivet CIR-celler og denne avlivingen var upåvirket av DF200 mAb (figur 2). Lignende resultater ble oppnådd med KIR2DL2- eller KIR2DL3-positive NK-kloner på Cw3-positive mål.
På lignende måte ble Cw4+ 221 EBV-cellelinjen ikke avlivet av KIR2DL1+-transfekterte NK-celler, men denne hemmingen kunne effektivt reverseres ved å bruke nevnte DF200 mAb, et Fab-fragment av DF200, eller de vanlige anti-KIR2DL1 mAb'ene EB6 eller XA141. Også en Cw3-positiv 721.221-transfektant ble ikke avlivet av KIR2DL2<+>NK-celler, men denne hemmingen kunne reverseres ved å bruke enten DF200 eller et DF200 Fab-fragment. Endelig ble Cw3+ 721.221-transfektanten ikke avlivet av KIR2DL3<+>NK-celler, men denne hemmingen kunne reverseres ved enten å bruke et DF200 Fab-fragment eller det vanlige anti-KIR2DL3 mAb GLI 83 eller Y249. Resultatene er vist på figur 3.
F(ab')2-fragmentene ble også testet for sin evne til å rekonstituere oppløsning av Cw4-positive mål. F(ab')2-fragmenter av DF200 og EB6 Ab'er var begge i stand til å reversere hemmingen av oppløsning som skyldes KIR2DL1-transfekterte NK-celler av den Cw4-transfekterte 221-cellelinjen eller den Cw4+ TUBO EBV-cellelinjen. Resultatene er vist på figur 4.
Eksempel 3: Biacoreanalyse av DF200 mAb/KIR2DL1 - og DF200 mAb/KIR2DL3-interaksjoner
Produksjon og rensing av rekombinante proteiner. De KIR2DL1 og KIR2DL3 rekombinante proteinene ble produsert i E. coli. cDNA som koder hele det ekstracellulære domenet til KIR2DL1 (SEKV.ID. NR. 23) og KIR2DL3 (SEKV.ID. NR. 25) ble amplifisert ved hjelp av PCR fra pCDM8-klon 47.11-vektoren (Biassoni et al, Eur J Immunol. 1993; 23: 1083-7) og RSV.5(gpt)183-klon 6-vektoren (Wagtmann et al, Immunity 1995; 2: 439-49 pg 1995; 3: 801-809) ved å bruke de følgende primere:
De ble klonet inn i pMLl-ekspresjonsvektoren i ramme med en sekvens som koder et biotinyleringssignal (Saulquin et al, J Exp Med. 2003; 197: 933-8). Proteinekspresj onen ble utført i BL21(DE3)-bakteriestammen (Invitrogen). Transfekterte bakterier ble dyrket til OD600 = 0,6 ved 37°C i et medium som var supplert med ampicillin (100 ng/ml) og ekspresjon ble indusert med 1 mM IPTG.
Proteinene ble innvunnet fra inneslutningslegemene under denaturerende betingelser (8 M urea). Refolding av de rekombinante proteinene ble utført i 20 mM Tris, pH 7,8, NaCl 150 mM buffer inneholdende L-arginin (400 mM, Sigma) og P-merkaptoetanol (1 mM) ved romtemperatur ved å senke ureakonsentrasjonen i en sekstrinns dialyse (4, 3, 2, 1, 0,5 og 0 M urea henholdsvis). Redusert og oksidert glutation (5 mM og 0,5 mM henholdsvis, Sigma) ble tilsatt under de nevnte 0,5 og 0 M ureanalysetrinnene. Endelig ble proteinene langvarig dialysert mot 10 mM Tris, pH 7,5, NaCl 150 mM buffer. Løselige og refoldede proteiner ble konsentrert og renset på en Superdex 200 størrelsesutelukkelseskolonne (Pharmacia; ÅKTA-system).
Overflateplasmonresonansmålinger ble utført i et Biacoreapparat (Biacore). I alle Biacoreeksperimentene ble HBS-buffer supplert med 0,05% av det overflateaktive middelet P20, brukt som løpende buffer.
Proteinimmobilisering. Rekombinante KTR2DL1- og KTR2DL3 -proteiner fremstilt som beskrevet ovenfor ble immobilisert kovalent til karboksyl grupper i dekstranlaget på en sensorbrikke CM5 (Biacore). Sensorbrikkeoverflaten ble aktivert med EDC/NHS (N-etyl-N'-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimidhydroklorid og N-hydroksysuccinimid, Biacore). Proteiner i koblingsbuffer (10 mM acetat, pH 4,5) ble så injisert. Deaktivering av de gjenværende aktiverte gruppene ble utført ved å bruke 100 mM etanolamin pH 8 (Biacore).
Affinitetsmålinger. For å få utført kinetiske målinger, ble forskjellige konsentrasjoner av det løselige antistoffet (1 x IO"7 til 4 x 10"<10>M) påsatt den immobiliserte prøven. Målingene ble utført ved en kontinuerlig strømningshastighet på 20 ul/minutt. For hver syklus ble overflaten på sensorbrikken regenerert ved en 5 ul injeksjon av 10 mMNaOH pH 11. BIAlogue Kinetics Evaluati on-programmet (BIAevaluation 3.1, Biacore) ble brukt for dataanalyse. Den løselige analytten (40 Hl ved forskjellige konsentrasjoner) ble injisert med en strømhastighet på 20 ul/minutt i HBS-buffer, på dekstranlag som inneholdt 500 eller 540 refleksjonsenheter (RU) og 1000 eller 700 RU av henholdsvis KTR2DL1 og KTR2DL3. De data som er angitt er representative for 6 uavhengige eksperimenter. Resultatene er vist i tabell 1 nedenfor.
Eksempel 4: Utvikling av nye humant anti-KIR mAb'er
Humane monoklonale anti-KIR mAb'er ble utviklet ved å immunisere transgene mus som var manipulert slik at de uttrykker et humant antistoffrepertoar med rekombinante løselige KIR-proteiner. Etter forskjellige cellefusjoner for å etablere hybridomer, ble mAb'er først selektert for sin evne til å tverreagere med immobilisert KIR2DL1- og KIR2DL3-protein (fremstilt som beskrevet i eksempel 3 ovenfor). Det viste seg at flere humane monoklonale antistoffer inklusive 1-7F9, 1-4F1, 1-6F5 og 1-6F1, viste seg å være tverreaktive med KIR2DL1 og KIR2DL2/3.
Positive monoklonale antistoffer ble ytterligere screenet eller undersøkt for sin evne til å rekonstituere oppløsning av KIR2DL1 -positive NK-transfektanter mot Cw4-positive målceller. De Nk-cellene som uttrykte HLA klasse I-spesifikke hemmende reseptorer ble brukt som effektorceller mot målceller som uttrykte ett eller flere HLA-C-alleler (figurene 5 og 6). Cytotoksitetsprøver ble utført som beskrevet ovenfor. Effektor/målforholdet er angitt i figurteksten og antistoffene ble enten brukt i en konsentrasjon på 10 ug/ml eller 30 ug/ml.
Som forventet hadde KIR2DL1+ NK-cellene liten eller ingen cytolyttisk aktivitet mot målceller som uttrykte HLA-Cw4.1 nærvær av 1-7F9 mAb ble imidlertid NK-cellene ute av stand til å gjenkjenne sin HLA-C (det vil si at de ikke lenger var hemmet av HLA-C-molekyler) og hadde nå sterk cytolyttisk aktivitet mot de Cw4-positive målene. De to cellelinjene som ble testet (HLA-Cw4 transfektert med 721.221 og CW4+ EBV-cellelinjene) ble for eksempel ikke avlivet av KIR2DL1+ NK-celler, men hemmingen kunne effektivt reverseres ved å bruke enten mAb 1 - 7F9 eller de vanlige anti-KIR2DLl mAb EB6. De murine mAb'ene DF200 og Pan2D (NKVSFl) ble sammenlignet med det humane mAb 1-7F9 og i alle eksperimentene var 1-7F9 kraftigere enn noen av de andre mAb som ble testet med hensyn til å indusere cytotoksitet i NK-cellene. Antistoffene 1-4F1, 1-6F5 og 1-6F1 var på den annen side ikke i stand til å rekonstituere celleoppløsning av NK-celler mot Cw4-positive mål.
Eksempel 5: Bioacore konkurrerende bindingsanalyse av murine og humane anti-KIR-antistoffer
Epitopkartleggingsanalyse ble utført ifølge en tidligere beskrevet fremgangsmåte (Gauthier et al., Journal of Immunology 1999; 162: 41-50; Saunal and van Regenmortel, Journal of Immunology 1995; 183: 33-41) på immobilisert KXR2DL1 (900 RU), KIR 2DL3 (2000 RU) og KIR2DS1 (1000 RU) med mus anti-KIR2D-antistoffene DF200, NKVSFl (Pan2D), gl 183 og EB6 og de humane anti-KIR2D-antistoffene 1-4F1, 1-6F1, 1-6F5 og 1-7F9.
Alle eksperimenter ble utført ved en strømhastighet på 5 ul/minutt i en HBS-buffer med 2 minutters injeksjon av de forskjellige antistoffene i en konsentrasjon på 15 ug/ml. For hvert par av antistoffer ble det utført en konkurrerende bindingsanalyse i to trinn. I det første trinnet ble det første monoklonale antistoffet (mAb) injisert på KIR2D-målproteinet fulgt av det andre mAb (uten å fjerne det første mAb) og den andre mAb RU-verdien (RU2) ble kontrollert. I det andre trinnet ble det andre mAb først injisert, direkte på det nakne KIR2D-proteinet, hvoretter mAb RU-verdien (RUI) ble kontrollert og målt. Prosent hemming av den andre mAb-binding til KIR2D-proteinet på grunn av det første mAb, ble beregnet ved formelen: 100<*>(1-RU2/RU1).
Resultatene er vist i tabellene 2, 3 og 4, hvor de antistoffene som er betegnet "første antistoff står i den vertikale kolonnen mens det "andre antistoffet" er gitt på den horisontale linjen på toppen av tabellen. For hver undersøkte antistoffkombinasjon er verdiene for direkte bindingsnivå (RU) av antistoffet til KIR2D-brikken gitt i
tabellen, hvor direkte binding av det andre stoffet til KIR2D-brikken er angitt i den øvre delen av feltet og verdien for binding av det andre antistoffet til KIR2D-brikken når det første antistoffet er tilstede, i den nedre delen av feltet. Angitt til høyre i hvert felt er prosent hemming av andre antistoffbinding. Tabell 2 viser binding på en KIR2DL1-brikke, tabell viser binding av antistoffer til en KIR2DL3-brikke og tabell 4 viser binding av antistoffer til en KIR2DS1 -brikke.
Konkurrerende binding av murine antistoffer DF200, NKVSFl og EB6 og humant antistoffer 1-4F1, 1-7F9 og 1-6F1 til immobilisert KIR2DL1, KIR2DL2/3 og KIR2DS1 ble bedømt. Epitopkartl egging (figur 7) fra eksperimentene med anti-KIR-anti stoffenes binding til KIR2DL1, viste at (a) antistoffet 1-7F9 kan konkurrere med EB5 og 1-4F1, men ikke med NKVSFl og DF200; (b) antistoffet 1-4F1 kan på sin side konkurrere med EB6, DF200, NKVSFl og 1-7 F9; (c) NKVSFl konkurrerer med DF200, 1-4F1 og EB6, men ikke med 1-7F9; og (d) DF200 konkurrerer med NKVSFl, 1-4F1 og EB6, men ikke med 1-7F9. Epitopkartl egging (figur 8) fra eksperimenter med anti-KIR-antistoffers binding til KIR2DL3 viste at (a) 1-4F1 konkurrerer med NKVSFl, DF200, gl 183 og 1-7F9; (b) 1-7F9 konkurrerer med DF200, gl 183 og 1-4F1, men ikke med NKVSFl; (c) NKVSFl konkurrerer med DF200, 1-4F1 og GLI83, men ikke med 1-7F9; og (d) DF200 konkurrerer med NKVSFl, 1-4F1 og 1-7F9, men ikke med GLI83. Epitopkartl egging (figur 9) fra eksperimenter med anti-KIR-antistoffenes binding til KIR2DS1 vist at (a) 1-4F1 konkurrerer med NKVSFl, DF200 og 1-7F9; (b) 1-7F9 konkurrerer med 1-4F1 men konkurrerer ikke med DF200 og NKVSFl; (c) NKVSFl konkurrerer med DF200 og 1-4F1, men ikke med 1-7F9; og (d) DF200 konkurrerer med NKVSFl og 1-4F1, men ikke med 1-7F9. Eksempel 6: Anti-KIR mAb-titrering med cynomolgus NK-celler Anti-KIR-anti stoffet NKVSFl ble testet for sin evne til å binde seg til NK-celler fra cynomolgusaper.
Rensing av ape PBMC og utvikling av polyklonal NK- cellebulk. Cynomolgus Macaque PBMC ble fremstilt fra natriumcitrat CPT-rør (Becton Dickinson). NK-cellerensingen ble utført ved negativ fjerning (Macaque NK-celleanrikningssett, Stem Cell Technology). NK-cellene ble dyrket på bestrålte humane føderceller med 300 U/ml interleukin 2 (Proleukin, Chiron Corporation) og 1 ng/ml fytohemagglutinin A (Invitrogen, Gibco) for å oppnå polyklonale NK-cellepopulasj oner.
Pan2D mAb- titrering med cynomolgus NK- celler. Cynomolgus NK-celler (NK-bulk på dag 16) ble innkubert med forskjellige mengder av Pan2D mAb fulgt av PE-konjugerte geit F(ab')2-fragmenter antimus IgG (H+L) -antistoffer. Prosenten av positive celler ble bestemt ved en isotypisk kontroll (renset mus IgGl). Prøvene ble utført i to paralleller. Midlere fluorescensintensitet = MFL
Binding av antistoffet til ape NK-celler er vist på figur 10.
Eksempel 7: Screening av humane anti-KIR mAb'er
Humane monoklonale anti-KIR Ab'er ble utviklet ved å immunisere transgene mus som var manipulert slik at de uttrykker et humant antistoffrepertoar med rekombinant KXR-protein slik det er beskrevet i eksempel 4. For å utvikle tverreaktive anti-KIR-anti stoffer ble dyrene sekvensmessig immunisert med foreskjellige KIR, enten i løselig form som beskrevet i eksempel 3, eller ble uttrykt på overflaten av cellene.
Etter forskjellige cellefusjoner ble nevnte mAb'er deretter først selektert for sin evne til å tverreagere med immobilisert KIR2DL1- og KIR2DL3-protein ved ELISA ved å bruke standardmetoder. Flere humane monoklonale antistoffer så som 1-7F9, 1-4F1, 1-6F5 og 1-6F1 viste seg å reagere med alle av KIR2DL1, KIR2DL2 og KIR2DL3 ved ELISA. De mAb som reagerte med både KIR2DL1 og KIR2DL2/3, ble betegnet som "KIR2DL-tverreaktive mAb".
De KIR2DL-tverreaktive mAb'ene ble så testet for sin evne til å reagere med KIR på overflaten av cellene ved hjelp av flowcytometri. Kort beskrevet ble bindingen av de humane anti-KIR mAb'er testet ved at disse ble innkubert med forskjellige cellelinjer som stabilt overuttrykker KIR (for eksempel YTS-2DL1, BWZ-KIR2DL2 og BWZ-KIR2DS4) eller som ikke uttrykker KIR (for eksempel YTS og BWZ). Kort beskrevet ble cellene innkubert med forskjellige konsentrasjoner (typisk 0-50 ug/ml) av humant anti-KIR mAbl-7F9 i DMEM-medium som inneholdt 2% FCS. Etter innkubering ble cellen vasket og innkubert med APC-konjugerte sekundære antistoffer som var spesifikke for humant IgG. Alle innkuberinger og vaskinger ble utført ved 0-4°C. Deretter ble cellene vasket, på nytt suspendert i PBS og analysert ved flowcytometri på en FACScalibur eller en FACScanto (begge fra Beckton Dickinson). Et typisk eksempel er vist på figur 16. Man fant for eksempel at 1-7F9 og 1-4F1 ikke bandt seg til celler som var transfektert med KIR2DS4, noe som var tilfellet med NKVSFl (Pan2D) (figur 16).
Evnen til de humane anti-KIR mAb'er til å blokkere interaksjonen mellom KIR og dens HLA-C-ligand ble deretter testet ved 1) biokjemiske direkte bindingseksperimenter og 2) funksjonell rekonstituering av oppløsningsprøver.
I den biokjemiske bindingsprøven ble evnen til de humane anti-KIR mAb'er, inklusive 1-7F9, til å blokkere interaksjonen mellom HLA-C og KIR-molekyl ene bedømt ved konkurrerende binding til løselige rekombinante KIR-Fc-fusjonsproteiner til celler som uttrykte HLA-C. KIR-Fc-proteinene ble fremstilt som beskrevet (Wagtmann et al., Immunity 1995; 3(6): 801-9), bortsett fra at det humane Fc ble erstattet met murint IgGl Fc. Løselig KIR-Fc binder seg til celler som uttrykker de spesifikke HLA-C-allotypene som gjenkjennes av KIR2DL1 og denne bindingen kan visualiseres ved flowcytometri ved å bruke et sekundært fluorokromkonjugert Ab som er spesifikt for den murine Fc-delen av KIR-Fc-proteinet. KIR2DL1-Fc binder seg for eksempel til celler som er transfektert med HLA-Cw<*>0402 (LCL 721.221-Cw4-transfektanter) (Litwin et al., J Exp Med. 1993; 178: 1321-36), men ikke til de utransfekterte LCL 721.221-cellene (se figur 11A). For å hvorvidt anti-KIR mAb'er kunne hindre denne interaksjonen mellom KIR2DL1-Fc og HLA-Cw4, ble KIR2DLl-FC-proteinene preinnkubert med økende konsentrasjoner av anti-KIR mAb'er og så tilsatt LCL 721.221-Cw4-cellene, innkubert ved 4°C, vasket, innkubert med APC-konjugert anti-murint IgGl Fc, vasket og analysert ved flowcytometri på en FACScalibur eller en FACScanto (Beckton Dickinson) ved hjelp av standardmetoder. Enkelte murine anti-KIR mAb'er så som DF200 og noen humane anti-KIR mAb'er, det vil si 1-7F9 og 1-4F1, hindret bindingen av KIR2DL1-Fc til celler som uttrykte HLA-Cw4, noe som viser at disse mAb'er blokkerer interaksjonen mellom KIR2DL1 og HLA-Cw4. Eksempelvis viser figur 17A at DF200 hindrer bindingen av KIR2DL1-Fc til celler som uttrykker HLA-Cw4. Figur 17B viser at 1-7F9 mAb'er hindrer at KIR2DL1 binder seg til HLA-Cw4. Parallelt ble nevnte anti-KIR mAb'er testet for sin evne til å hindre bindingen av KIR2DL2 til HLA-Cw3. Antistoffer som hindret bindingen av KIR2DL-Fc til HLA-C-uttrykkende celler på en doseavhengig måte slik det eksempelvis er vist på figur 17, ble betegnet som "blokkerende mAb'er" og ble ytterligere testet i funksjonelle cytotoksitetsprøver som beskrevet i det etterfølgende.
Den terapeutiske anvendelsen av de humane anti-KIR mAb'er er forbundet med deres evne til å indusere KIR-uttrykkende NK-celler til å avlive tumorceller ved å hindre hemmende signalisering via KIR. Det er derfor viktig å kunne bedømme hvorvidt humane KIR2DL-tverreaktive og blokkerende mAb'er er i stand til å indusere oppløsning av målceller som uttrykker HLA-C ved hjelp av NK-celler som uttrykker KIR2DL. For dette formålet ble de følgende eksperimenter utført: 1<51>Cr-frigjøringscytotoksitetsprøver så kan YTS-celler som uttrykker KIR2DL1 (YTS-2DL1) avlive LCL 721.221-Cw3, men ikke LCL 721.221-Cw4-celler (figur 18A). I motsetning til dette, så vil YTS-effektorceller som mangler KIR (YTS), meget effektivt avlive begge cellelinjene. YTS-2DLl-effektorceller kan således ikke avlive LCL 721.221-Cw4-celler på grunn av den HLA-Cw4-induserte hemmende signaliseringen via KIR2DL1. Når YTS-2DLl-celler ble preinnkubert med 1-7F9 i<51>Cr-frigjøringscytotoksitetprøver, så ble LCL 721.221-Cw4-cellene avlivet på en l-7F9-konsentrasjonsavhengig måte (figur 18B). 3-1F13, et humant tverreaktivt anti-KIR mAb som binder KIR2DL1 med høy affinitet men som ikke kan hindre interaksjonen mellom KIR2DL1 og HLA-Cw4, kan ikke indusere avliving av LCL 721.221-Cw4-celler av YTS-2DL1 -celler. 1-7F9 induserer således NK-mediert eller -kontrollert avliving av målceller ved å hindre KIR-HLA-C-interaksjoner mellom NK- og målcellene.
Eksempel 8: Affinitetsmålinger for 1-7F9
Affiniteten til 1-7F9 for binding til KIR2DL1 og KIR2DL3 ble målt ved hjelp av en Biacoreanalyse ved å bruke løselige rekombinante KIR-proteiner fremstilt som beskrevet i eksempel 3. Biacoreeksperimentene ble utført som beskrevet i eksempel 3, bortsett fra at det antistoffet som ble brukt var det humane mAb 1-7F9.
Resultatene av disse affinitetsbestemmelsene med hensyn til binding av 1-7F9 til KIR2DL1 og -3 er vist i tabell 5.
Eksempel 9: Epitopkartlegging av 1-7F9 på KIR2DL1
Epitopkartl egging av et gitt monoklonalt antistoff på et gitt antigen kan oppnås ved hjelp av in silico metoder når det eksisterer egnede
røntgenstrukturer/homologimodeller av både antistoffet og antigenet ved å utføres såkalt protein-proteindokking.
En homologimodell på et antistoff kan oppnås ved å sammenstille sekvensen for henholdsvis den lette og den tunge kjeden med et utvalg av antistoffer hvor man kjenner deres tredimensjonale struktur. Lengden av de 6 komplementaritetsbestemmende områdene (CDRer) kan beregnes og deretter kan den beste templaten velges ut fra antistoffer med de samme CDR-lengder. Ved hjelp av standardteknikker kan således en homologimodell utvikles fra den valgte templaten.
I protein-proteindokkingsmetoden, som nylig er beskrevet (Schneidman-Duhovny et al., Curr Med Chem 2004; 11: 91-107), blir de to overflatene representert ved sine karakteristiske overflateegenskaper. Disse egenskaper eller trekk inkluderer hydrogenbindingsevner, ladninger og hydrofobisitet. I en nettbasert metode blir rommet oppdelt i terninger (kuber) og hver terning blir gitt en verdi alt etter sin stilling til overflaten (indre, overflate, ytre) og betegnet etter sitt relevante trekk av egenskaper. En krafttilpasning av overflatene ved hjelp av en scoringsfunksjon kan også brukes for å lete etter de hele 3-translaterende og 3-roterende frihetsgradene. Translateringene utføres ved en Fast Fourier-transformering og rotasjonen behandles som individuelle beregninger innenfor en standard diskretisering av rotasj onsrommet. Ut fra de beste scoringskompleksene kan resultatene filtreres og scores ved hjelp av en rekke fremgangsmåter, for eksempel formkomplementaritet, Van der Waals interaksjoner, hydrofobisitet, elektrostatiske egenskaper, desolvatering, hydrogenbinding, atomkontaktenergi, rest-restparingsstatistikk og paring av de hydrofile gruppene. De beste scoringskompleksene kan så bedømmes detaljert og interagerende rester og derved epitopen kan så identifiseres.
Metoder og analyser
Rester og domenenomenklatur for de anvendte KIR er i følge Fan et al. (Nature 1997; 389: 96-100) slik at domene 1 omfatter restene 6-101, mens domene 2 omfatter aminosyrerestene 105-200.
Det ble konstruert en homologimodell på 1-7F9 ved å bruke 10M3 som en templat. 10M3-strukturen, utviklet av Calarese et al (Science 2003; 300: 2065, et seq.), ble innhentet fra proteindatabasen ved World Wide Web (WWW) adresse rcsb.org/pdb/; 10M3 VL-sekvens: SEKV.ID. NR. 34; 10M3 VH-sekvens: SEKV.ID. NR. 35). Kabatnummerering og CDR-betegnelser ble brukt. Den totale sammenstillingen var god og CDR-lengdene var identiske slik at homologimodell en vil være tilstrekkelig nøyaktig til at den kan brukes i et protein-proteindokkingseksperiment.
Ut fra protein-proteindokkingen av l-7F9-antistoffhomologimodellen på KIR2DL1-strukturen, ble det oppnådd lNKR.pdb 2000-løsninger. Disse ble filtrert for sin nærhet til Dl83 (atomer < 6 Å fra CD) og R131 (atomer < 12 Å fra CZ) og 133 resulterende løsninger ble så detaljert analysert.
Det høyeste scoringskompl ekset som var dannet ble analysert og en mulig interaksjon mellom R131 (KIR) og D100C (tung kjede) ble identifisert og dempet. Det ble valgt ut en ny rotamer for Fl81 og energien ble minimalisert. Denne modellen predikerer at antistoffet virker sammen med de følgende restene på KIR2DL1 (SEKV.ID. NR. 23): S20 (Hyd, CB) (HydAkseptor, OG), E21 (Hyd, CB, CG), M44 (Hyd, SD, CE), F45 (Hyd, CD1, CD1, CZ, CE2), R68 (HydDonor, NH2), T70 (Hyd, CB, CG2), Q71 (Hyd, CG), L104 (Hyd, CB, CG, CD1, CD2), Y105 (Hyd, CG, CD2, CE2), R131 (Ion, NH2) (HydDonor, NH2), S133 (Hyd, CA, CB)
(HydDonor/Akseptor, OG), Y134 (Hyd, CD1, CE1), F181 (Hyd, CB, CG, CD1, CD2, CE1, CE2, CZ) og Dl83 (Hyd, CB).
Eksempel 10: Biacore konkurrerende bindingsanalyser av murine og humane anti-KIR-antistoffer
Konkurrerende binding av 1-7F9, Pan2D (NKVSFl) og DF200 ble bedømt ved hjelp av den samme fremgangsmåten som er beskrevet i eksempel 5.
Resultatene er vist i tabellene 6 og 7, hvor de antistoffene som er betegnet "første antistoff er gitt i den vertikale kolonnen og det "andre antistoffet" er gitt på den horisontale linjen. For hver antistoffkombinasjon som ble testet, er det angitt prosentvis hemming av det andre antistoffet. Når den prosentvise hemmingen for et visst antistoffpar var over 40%, uansett hvilket antistoff som ble brukt som det første antistoffet, så ble antistoffene ansett å være konkurrerende. Tabell 6 viser bindingen på en KTR2DL1 -brikke mens tabell 7 viser bindingen av antistoffene til en KTR2DL3 -brikke.
Kort beskrevet så viser resultatene for KIR2DL1-binding at DF200 og Pan2D er konkurrerende, mens 1-7F9 ikke er konkurrerende hverken med DF200 eller Pan2D. For KIR2DL3-binding var DF200 og Pan2D konkurrerende, mens 1-7F9 ikke var konkurrerende med Pan2D, men konkurrerte med DF200.
Eksempel 11: Krystallstruktur for KIR2DL1 i kompleks med HuKIRl-7F9-Fab'
Krystall strukturen for KIR2DL1 i kompleks med Fab'-fragmentet av 1-7F9 ble løst og raffinert til en 2,35 Å oppløsning ved hjelp av røntgenkrystallografi. Resultatene bekreftet at antistoffet, når det er bundet til KIR2DL, vil være i stand til å blokkere bindingen til et MHC klasse I-molekyl (figur 19).
Materialer og metoder
Ekstracellulært KXR2DL1 (aminosyre 1-23 i SEKV.ID. NR. 23 hvor rest 16 er arginin (R), mens rest 114 er leukin (L) og som inkluderer en ytterligere N-terminal metionin (M) -rest) og HuKIRl-7F9 Fab' (med den lettkjedesekvensen som angitt i SEKV.ID. NR. 36 og med tungkjedesekvensen med restene 1-221 i SEKV.ID. NR. 37), ble blandet med et svakt overskudd av KIR2DL1 og komplekset ble renset på en gelfiltreringskolonne. Komplekset ble så konsentrert til omtrent 13,5 mg/ml. Krystaller ble så utviklet med den såkalte hengende dråpeteknikken i 10% PEG6000 og 500 mM citratbuffer med en pH på 4,2. Krystallene ble så flashfrosset i flytende N2og krystallografi ske data med en oppløsning på 2,35 Å ble målt ved 100 K ved å bruke strålelinjen BL711I, MAX-lab, Lund, Sverige. Dataene ble integrert ved hjelp av XDS-programmet (Kabsch, J. Appl. Crystallogr. 1993; 26: 795-800). For strukturbestemmelse ble det brukt molekylær erstatning ved å bruke MOLREP-programmet fra CCP4-rekken (Bailey, Acta Crystallogr. Sect. D-Biol. Crystallogr. 1994; 50: 760-763) og de PDB-avsatte strukturene 1RZJ (Fab del 1) og 1NKR (KIR). Faseforbedringene ble utført ved hjelp av ARPAVARP-programmet (Lamzin og Wilson, Acta Crystallogr. Sect. D-Biol. Crystallogr. 1993; 49: 129-147) og manuelle modifikasjoner av den røntgenavledede strukturen ble utført ved hjelp av QUANTA-programmet (tilgjengelig fra Accelrys Inc., San Diego, CA, USA). Finjusteringen ble utført ved hjelp av REFMAC5-dataprogrammet i CCP4-rekken. Vannmolekylene ble tilsatt ved hjelp av ARP AV ARP-programmet. Modellen omfattet restene 6-114 og 124-200 i KIR2DL1, 1-212 i den 1-7F9 lette kjeden 1-136 sammen med 143-224 i den 1-7F9 tunge kjeden. I tillegg ble det plassert 330 vannmolekyler. R- og R-frihetsgraden for modellen var henholdsvis 0,191 og 0,253.
Resultater
Kontaktene ble identifisert ved hjelp av CONTACT-dataprogrammet i CCP4-rekken ved å bruke en avskjæringsavstand på 4,0 Å mellom Fab'- og KIR2DL1-molekylene. Man fant at den resulterende KIR2DL1 -epitopen for humant 1-7F9 omfattet de følgende restene i KIR2DL1 (SEKV.ID. NR. 23): L38, R41, M44, F45, N46, D47, T48, L49, R50,152, F64, D72, Y80, P87 og Y88 (tabellene 8 og 9). Rester i 1-7F9 som inngitt i interaksjoner med KIR2DL1, inkluderte S28, V29, S30, Y32, S92, N93 og W94 fra den l-7F9-variable lette (VL) kjeden (SEKV.ID. NR. 15, tabell 8) og T28, F29, S30, F31, 154, F55, E74, S77, G102, S103, Y105, Y106, D107 og Y108 i den variable tunge (VH) kjeden (SEKV.ID. NR. 17). KIR2DL1-epitopen og de rester som er involvert i hydrogenbinding, er også angitt i aminosyresekvensen til KIR2DL1 på figur 20. De isotrope forskyvningsfaktorene (også kalt "temperaturfaktorer" eller "B-verdier") som ble oppnådd fra koordinatfinjusteringen, viste relativt lavere verdier for det N-terminale domenet i KIR2DL1 og de variable domenene i l-7F9-antistoff F ab'-fragmentet og alle disse domenene er direkte involvert i den intermolekylære bindingen. Dette viste at de bindende kreftene mellom de to molekylene i komplekset av krystallen er sterke og stabile og understøtter at krystall strukturen viser et stabilt KIR2DL1/1-7F9 Fab'-kompleks.
1-7F9 Fab'-molekylet er bundet til KXR2DL1 -molekylet på en side av CCFGA p-platen i domene Dl, men i tillegg berørte også en E P-trådrestsidekjede i det samme domenet. Forbindelser med sløyferester i Dl-domenet er også viktig for binding (for konvensjoner med hensyn til topologinavnsetting, se Fan et al., Nature 1997; 389: 96-100). Mer spesifikt er det forbindelser til de følgende topologiske delene av KIR2DL1; P-tråd C (aminosyrene L38 og R41), sløyfen mellom P-trådene C og C, L2 (M44, F45 og N46), p-tråd C (D47, T48, L49, R50 og 152), p-tråd E (F64), sløyfen mellom E- og F P-trådene, L3 (D72), P-tråd F (Y80) og sløyfen mellom F-og G p-trådene (P87 og Y88).
Mens HLA-Cw4-molekylet binder seg både til Dl- og D2-domenene i KTR2DL1-molekylet (Fan et al. Nat. Immunol. 2001; 2: 452-460), så binder l-7F9-antistoffet seg bare til KTR2DL1 Dl-domenet. Det er imidlertid en romlig overlapping mellom et bundet 1-7F9- og et bundet HLA-Cw4-molekyl og dette er tilstrekkelig stort til at l-7F9-antistoffet med godt resultat erstatter HLA-Cw4. Ved å bruke den publiserte strukturen for KIR2DL1 i kompleks med HLA-Cw4 (PDB-aksesjonskode 1IM9), så kan kontaktrester mellom KTR2DL1 og HLA-Cw4 beregnes ved hjelp av CONTACT-programmet. I en beregning ved å bruke en avstandsavskjæring på 4,0 Å, kan man se at de tre KIR2DL1 -restene som inngår i kontakter med HLA-Cw4-rester er felles med kontaktrestene i 1-7F9/KTR2DL1 -komplekset (tabell 8 og 9). Disse tre KXR2DL1 -restene er M44, F45 og D72.
Uten å være begrenset av noen spesifikk teori, så indikerer de krystallografi ske resultatene også at 1-7F9 ikke binder den aktiverende NK-reseptoren KIR2DS4 på grunn av aminosyrene N47 og V72 i den ekstracellulære delen av KTR2DS4-sekvensen (SEKV.ID. NR. 38).
Tabell 8
KIR2DL1 - 1-7F9 Fab' VL-kjedeinteraksjoner. En avkjæringsavstand på 4,0 Å ble brukt. Kontaktene ble identifisert ved hjelp av CONTACT-dataprogrammet fra CCP4-rekken. I den siste kolonnen indikerer "<***>" en sterk mulighet for en hydrogenbinding ved denne kontakten (avstand < 3,3 Å) slik det ble beregnet med CONTACT, "<*>" indikerer en svak mulighet (avstand > 3,3 Å). Åpne felter indikerer at programmet anså at det ikke var noen mulighet for en hydrogenbinding.
Tabell 9
KTR2DL1 - 1-7F9 Fab' VH-kjedeinteraksjoner. Det ble brukt en avskjæringsavstand på 4,0 Å. Kontaktene ble identifisert ved hjelp av CONTACT-dataprogrammet fra
CCP4-rekken. I den siste kolonnen indikerer "<***>" en sterk mulighet for en
hydrogenbinding ved denne kontakten (avstand < 3,3 Å) slik det ble beregnet med CONTACT, "<*>" indikerer en svak mulighet (avstand > 3,3 Å). Åpne felter indikerer at programmet anså at det ikke var noen mulighet for en hydrogenbinding.
Eksempel 12: Fysisk stabilitet for 1-7F9
De biofysiske egenskapene og stabiliteten for det humane antistoffet 1-7F9 ble undersøkt. Foldingen og proteinets sekundære struktur ble undersøkt ved hjelp av såkalt sirkulær dikroisme (CD) og oligomerisering og aggregering ved hjelp av dynamisk lysspredning (DLS). For å etterligne lagringsbetingelsene i to år ved 5°C ble proteinet innkubert ved 37°C med risting i 14 dager.
Materialer og metoder
Prøvefremstilling. 2 mg/ml 1-7F9 ble fremstilt i (a) 50 mM Na-fosfat, 0,001% polysorbat 80 (Sigma, P8074), pH 7,0; (b) 50 mM Na-fosfat, 0,001 % polysorbat 80, pH 7,0, 0,5 mM sukrose; (c) 50 mM citrat, 0,001 % polysorbat 80, pH 3,0; og d) 50 mM Tris, 0,001 % polysorbat 80, pH 8,5.
Sirkulær dikroisme ( CD). CD-målingene ble utført ved 25°C en proteinkonsentrasjon på 2,0 mg/ml i et Chirascan sirkulært dikroismespektrometer (Applied Photophysics) utstyrt med et peltierelement for temperaturkontroll. 1-7F9-prøvene ble plassert i sylindriske kvartsceller med en strålingslengde på 0,1 mm. Hver buffer ble skannet og de oppnådde data ble fratrukket hvert enkelt prøvespektrum.
Dynamisk lysspredning ( DLS). DLS ble utført ved 25°C og en proteinkonsentrasjon på 2,0 mg/ml ved å bruke et Dynapro 99 temperaturkontrollert DLS-instrument
(Protein Solutions Inc.). Dataanalysene ble utført ved å bruke det Dynamicsprogrammet som ble levert med instrumentet.
Resultater
Mens molekyl størrelsen ikke forandret seg i prøvene ved en pH på 7,0 etter 14 dager innkubering slik dette kunne bedømmes ved DLS, så ble det i begge prøvene formulert ved pH 3,0 og pH 8,5 en sterk aggregering i løpet av en periode på 14 dager. CD-målingene viste egenskaper for en total betastruktur og viste at de prøvene som var formulert ved pH 7,0 beholdt sin sekundære struktur under hele den akselererte undersøkelsen, skjønt det var et svakt fall i signalet for den prøven som bare inneholdt polysorbat 80 som eksipient. Dette kan skyldes en svak utfelling av prøven ettersom den generelle formen på spekteret forble uforandret. Prøven som inneholdt sukrose viste ingen slik senkning over tid. CD-målingene for prøvene som var formulert ved pH 3,0 og 8,5 viste en sterk forandring med hensyn til spektralegenskaper over tid, noe som sannsynligvis er et resultat av utfolding eller andre konform elle forandringer som vil kunne føre til et ikke-funksjonelt 1-7F9-protein. Forandringene ble observert umiddelbart og var mest signifikante ved pH 3,0.
Generelt beholdt 1-7F9 sine fysiske egenskaper og forble stabilt under de stressede betingelsene (37°C med risting) ved pH 7,0 med polysorbat 80 og sukrose som eksipienter.
Eksempel 13: Affinitetsbestemmelse (monovalent binding) for 1-7F9 og 1-4F1
Affinitetene til 1-7F9 og 1-4F1 i en monovalent binding til KTR2DL1- og KTR2DL3-antigen (i motsetning til de bivalente bindingsaffinitetsbestemmeisene som angitt i eksemplene 3 og 8), ble bestemt ved overflateplasmonresonans-teknologi ved å bruke et Biacore 3000-apparat.
Kort beskrevet ble et antihumant IgG (Dako RAHIgG nr. 0423) brukt sammen med en HBS-EP-buffer ved en strømhastighet på 20 ul/minutt. Rensede antistoffer ble fortynnet til 10 ug/ml. For hvert antistoff ble det injisert KIR2DL1 eller KIR2DL3 og buffer. Antigenene ble testet ved konsentrasjoner på 2000, 500, 200, 50 og 20 nM. Strømhastigheten ble hele tiden holdt på 20 ul/minutt. Regenerering av overflaten ble oppnådd ved en enkelt 30 sekunders injeksjon med glysin-HCl pH 1,8.
Resultatene er vist i tabell 10. For bindingen av 1-4F1 til KIR2DL1, var det et signifikant skift i basislinjen. Uten å være begrenset av noen som helst spesifikk teori, så kan dette representere en buffereffekt som skyldes matrisen eller at bindingsreaksjonen i virkeligheten involverer 2 trinn, for eksempel på grunn av en konformell forandring av antigenet.
EKSEMPLER PÅ ASPEKTER AV BESKRIVELSEN
1. Et antistoff som omfatter et lettkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 50% identisk med SEKV.ID. NR. 15 eller SEKV.ID. NR. 39 og/eller et tungkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 50% identisk med SEKV.ID. NR. 17 eller SEKV.ID. NR. 41. 2. Et antistoff som omfatter et lettkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 80% identisk med SEKV.ID. NR. 15 eller SEKV.ID. NR. 39 og/eller et tungkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 80% identisk med SEKV.ID. NR. 17 eller SEKV.ID. NR. 41. 3. Et antistoff som omfatter et lettkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 90% identisk med SEKV.ID. NR. 15 eller SEKV.ID. NR. 39 og/eller et tungkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 90% identisk med SEKV.ID. NR. 17 eller SEKV.ID. NR. 41. 4. Et antistoff som omfatter et lettkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 95% identisk med SEKV.ID. NR. 15 eller SEKV.ID. NR. 39 og/eller et tungkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 95% identisk med SEKV.ID. NR. 17 eller SEKV.ID. NR. 41. 5. Et antistoff som omfatter et lettkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 98% identisk med SEKV.ID. NR. 15 eller SEKV.ID. NR. 39 og/eller et tungkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 98% identisk med SEKV.ID. NR. 17 eller SEKV.ID. NR. 41. 6. Antistoff ifølge ethvert av de foregående aspekter hvor det lettkjedevariable området omfatter minst én konservativ aminosyresubstitusjon og hvor hver aminosyresubstitusjon er konservativ sammenlignet med aminosyren i den tilsvarende posisjonen i SEKV.ID. NR. 15 eller SEKV.ID. NR. 39. 7. Antistoff ifølge ethvert av de foregående aspekter hvor det tungkjedevariable området omfatter minst én konservativ aminosyresubstitusjon og hvor hver aminosyresubstitusjon er konservativ sammenlignet med aminosyren i den tilsvarende posisjonen i SEKV.ID. NR. 17 eller SEKV.ID. NR. 41. 8. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter som omfatter minst ett av (a) en lettkjede CDR1 -aminosyresekvens som er minst 90% identisk med restene 24-34 i SEKV.ID. NR. 15; (b) en lettkjede CDR2-aminosyresekvens som er minst 90% identisk med restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 15; (c) en lettkjede CDR3-aminosyresekvens som er minst 90% identisk med restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 15; (d) en tungkjede CDR1 -aminosyresekvens som er minst 90% identisk med restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 17; (e) en tungkjede CDR2-aminosyresekvens som er minst 90% identisk med restene 50-65 i SEKV.ID. NR. 17; (f) en tungkjede CDR3-aminosyresekvens som er minst 90% identisk med restene 99-112 i SEKV.ID. NR. 17. 9. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter og som omfatter minst ett av (a) en lettkjede CDR1 -aminosyresekvens som tilsvarer restene 24-34 i SEKV.ID. NR. 15; (b) en lettkjede CDR2-aminosyresekvens som tilsvarer restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 15; (c) en lettkjede CDR3-aminosyresekvens som tilsvarer restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 15; (d) en tungkjede CDR1-aminosyresekvens som tilsvarer restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 17; (e) en tungkjede CDR2-aminosyresekvens som tilsvarer restene 50-65 i SEKV.ID. NR. 17; (f) en tungkjede CDR3-aminosyresekvens som tilsvarer restene 99-112 i SEKV.ID. NR. 17. 10. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter og som omfatter minst ett av (a) en lettkjede CDR1 -aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 24-34 i SEKV.ID. NR. 15; (b) en lettkjede CDR2-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 15; (c) en lettkjede CDR3-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 15; (d) en tungkjede CDR1 -aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 17; (e) en tungkjede CDR2-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 50-65 i SEKV.ID. NR. 17; (f) en tungkjede CDR3-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 99-112 i SEKV.ID. NR. 17. 11. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 8-10, som omfatter minst 2 av (a) til (f). 12. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 8-10, som omfatter minst 3 av (a) til (f). 13. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 8-10, som omfatter minst 4 av (a) til (f). 14. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 8-10, som omfatter minst 5 av (a) til (f).
15 Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 8-10, som omfatter alle av (a) til (f).
16. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter, som omfatter et lettkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen i SEKV.ID. NR. 15 og et tungkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen i SEKV.ID. NR. 17.
17. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 1-7, som omfatter minst en av
(g) en lettkjede CDR1-aminosyresekvens som er minst 90% identisk med restene 24-34 i SEKV.ID. NR. 39; (h) en lettkjede CDR2-aminosyresekvens som er minst 90% identisk med restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 39; (i) en lettkjede CDR3-aminosyresekvens som er minst 90% identisk med restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 39; (j) en tungkjede CDR1 -aminosyresekvens som er minst 90% identisk med restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 41; (k) en tungkjede CDR2-aminosyresekvens som er minst 90% identisk med restene 50-66 i SEKV.ID. NR. 41; (1) en tungkjede CDR3-aminosyresekvens som er minst 90% identisk med restene 99-113 i SEKV.ID. NR. 41. 18. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 1-7 og 17, som omfatter minst ett av (g) en lettkjede CDR1 -aminosyresekvens som tilsvarer restene 24-34 i SEKV.ID. NR. 39; (h) en lettkjede CDR2-aminosyresekvens som tilsvarer restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 39; (i) en lettkjede CDR3-aminosyresekvens som tilsvarer restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 39; (j) en tungkjede CDR1 -aminosyresekvens som tilsvarer restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 41; (k) en tungkjede CDR2-aminosyresekvens som tilsvarer restene 50-66 i SEKV.ID. NR. 41; (1) en tungkjede CDR3-aminosyresekvens som tilsvarer restene 99-113 i SEKV.ID. NR. 41. 19. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 1-7 og 17-18, som omfatter minst ett av (g) en lettkjede CDR1 -aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 24-34 i SEKV.ID. NR. 39; (h) en lettkjede CDR2-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 50-56 i SEKV.ID. NR. 39; (i) en lettkjede CDR3-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 89-97 i SEKV.ID. NR. 39; (j) en tungkjede CDR1-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 31-35 i SEKV.ID. NR. 41; (k) en tungkjede CDR2-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 50-66 i SEKV.ID. NR. 41; (1) en tungkjede CDR3-aminosyresekvens som i alt vesentlig består av restene 99-113 i SEKV.ID. NR. 41. 20. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 17-19, som omfatter minst 2 av (g) til (1). 21. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 17-19, som omfatter minst 3 av (g) til (1). 22. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 17-19, som omfatter minst 4 av (g) til (1). 23. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 17-19, som omfatter minst 5 av (g) til (1). 24. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 17-19, som omfatter alle av (g) til (1). 25. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 1-7 og 17-24 som omfatter et lettkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen i SEKV.ID. NR. 39 og et tungkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen i SEKV.ID. NR. 41. 26. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter hvor antistoffet ikke binder seg til minst én av KIR2DS4 og KIR2DS3. 27. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 1-15 og 26 hvor antistoffet blokkerer KIR2DL1- og KIR2DL2/3-binding til et HLA-C klasse I-molekyl. 28. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 1-15 og 26-27 som forsterker den oppløsende aktiviteten for en NK-celle mot en human målcelle som uttrykker et HLA-C klasse I-molekyl. 29. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 1-15 og 26-28, hvor antistoffet er mer effektivt enn DF200 i å forsterke den oppløsende aktiviteten til en NK-celle mot en human målcelle som uttrykker et HLA-C klasse I-molekyl. 30. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 1-15 og 26-28, hvor antistoffet er mer effektivt enn NKVSFl (Pan2D) i å forsterke den oppløsende aktiviteten til en NK-celle mot en human målcelle som uttrykker et HLA-C klasse I-molekyl. 31. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 1-15 og 26-28, hvor antistoffet er mer effektivt enn EB6 i å forsterke den oppløsende aktiviteten til en NK-celle mot en human målcelle som uttrykker et HLA-C klasse I-molekyl. 32. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter, som er et humant eller humanisert antistoff. 33. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter, som er et IgGl-, IgG2-, IgG3- eller IgG4-antistoff. 34. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter, som er et humant IgG4-anti stoff. 35. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 1-34, som er et humant IgG2-antistoff. 36. Et humant IgG4-antistoff som omfatter et lettkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen i SEKV.ID. NR. 15 og et tungkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen i SEKV.ID. NR. 17. 37. Et humant IgG2-antistoff som omfatter et lettkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen i SEKV.ID. NR. 39 og et tungkjedevariabelt område som omfatter aminosyresekvensen i SEKV.ID. NR. 41. 38. Et antistoff som konkurrerer med 1-7F9 i bindingen til KIR2DL1 eller KIR2DL2/3 hvor antistoffet ikke er 1-4F1, DF200, gll83, A210, A803(g) eller EB6. 39. Et antistoff som konkurrerer med 1-4F1 i bindingen til KIR2DL1 eller KIR2DL2/3 hvor antistoffet ikke er 1-7F9, DF200, gll83, A210, A803(g) eller EB6.
40. Antistoffet ifølge aspekt 38, hvor antistoffet ikke er 1-4F1.
41. Antistoffet ifølge aspekt 39, hvor antistoffet ikke er 1-7F9.
42. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 38-39, hvor antistoffet ikke er DF200.
43. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 38-39, hvor antistoffet ikke er gl 183.
44. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 38-39, hvor antistoffet ikke er EB6.
45. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter, som har en Kdtil KIR2DL1 på ikke mer enn omtrent 20 nM. 46. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter, som har en Kdtil KIR2DL1 på ikke mer enn 10,9 nM. 47. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter, som har en Kdtil KIR2DL1 på ikke mer enn 0,45 nM. 48. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter, som har en Kdtil KIR2DL3 på ikke mer enn omtrent 20 nM. 49. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter, som har en Kdtil KIR2DL3 på ikke mer enn 2,0 nM. 50. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter, som har en Kdtil KIR2DL3 på ikke mer enn 0,025 nM.
51. Antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter, som er humant.
52. Et humant eller humanisert antistoff som konkurrerer med 1-7F9 i bindingen til KIR2DL1. 53. Et humant eller humanisert antistoff som konkurrerer med 1-4F1 i bindingen til KIR2DL1. 54. Et humant eller humanisert antistoff som konkurrerer med 1-7F9 i bindingen til KIR2DL2. 55. Et humant eller humanisert antistoff som konkurrerer med 1-4F1 i bindingen til KIR2DL2. 56. Et humant eller humanisert antistoff som konkurrerer med 1-7F9 i bindingen til KIR2DL3. 57. Et humant eller humanisert antistoff som konkurrerer med 1-4F1 i bindingen til KIR2DL3. 58. Et humant eller humanisert antistoff som konkurrerer med 1-7F9 i bindingen til KIR2DL1 og KIR2DL2/3. 59. Et humant eller humanisert antistoff som konkurrerer med 1-4F1 i bindingen til KIR2DL1 og KIR2DL2/3. 60. Det humane eller humaniserte antistoffet ifølge ethvert av aspektene 52-59, som ikke binder seg til minst én av KIR2DS4 og KIR2DS3. 61. Det humane eller humaniserte antistoffet ifølge ethvert av aspektene 52-60, som blokkerer KIR2DL1- eller KIR2DL2/3-binding til et HLA-C klasse I-molekyl. 62. Det humane eller humaniserte antistoffet ifølge ethvert av aspektene 52-57, som forsterker den oppløsende aktiviteten til en NK-celle mot en human målcelle som uttrykker et HLA-C klasse I-molekyl. 63. Det humane eller humaniserte antistoffet ifølge ethvert av aspektene 52-62, hvor antistoffet omfatter et lettkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 90% identisk med SEKV.ID. NR. 15 og et tungkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 90% identisk med SEKV.ID. NR. 17 eller et lettkjedevariabelt område som er minst 90% identisk med SEKV.ID. NR. 39 og et tungkjedevariabelt område som omfatter en aminosyresekvens som er minst 90% identisk med SEKV.ID. NR. 41. 64. Det humane eller humaniserte antistoffet ifølge ethvert av aspektene 52-63, som er et IgGl-, IgG2-, IgG3- eller IgG4-antistoff. 65. Det humane eller humaniserte antistoffet ifølge aspekt 64, som er et IgG4-anti stoff.
66. Det humane antistoffet ifølge aspekt 64, som er et IgG2-antistoff.
67. Et humanisert eller humanisert antistoff som binder seg til hver av KIR2DL1, -2 og -3 og som blokkerer KIR2DL1, -2 eller -3-binding til et HLA-C klasse I-molekyl.
68. Et antistoff som virker sammen med restene M44 og F45 i KTR2DL1.
69. Antistoffet ifølge aspekt 68 som ytterligere virker sammen med en eller flere av KIR2DL1 -restene L38, R41, N46, D47, T48, L49, R50,152, F64, D72, Y80, P87 og Y88. 70. Et antistoff som binder seg til KTR2DL1 utelukkende innenfor et område definert av aminosyrerestene L38, R41, M44, F45, N46, D47, T48, L49, R50,152, F64, D72, Y80, P87 og Y88. 71. Et antistoff som binder seg til KTR2DL1 og KTR2DL2/3 uten å virke sammen med aminosyrerestene utenfor området som er definert av restene L38, R41, M44, F45, N46, D47, T48, L49, R50,152, F64, D72, Y80, P87 og Y88. 72. Antistoffet ifølge ethvert av aspektene 67-71, som er det humane antistoffet 1-7F9. 73. Et antistoffragment eller antistoffderivat som omfatter minst ett lettkjede CDR fra et antistoff ifølge ethvert av de foregående aspekter. 74. Et antistoffragment eller antistoffderivat som omfatter minst to lettkjede CDRer av antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter. 75. Et antistoffragment eller antistoffderivat som omfatter minst tre lettkjede CDRer av antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter. 76. Et antistoffragment eller antistoffderivat som omfatter et VL-område av antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter. 77. Et antistoffragment eller antistoffderivat som omfatter minst én tungkjede CDR av antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter. 78. Et antistoffragment eller antistoffderivat som omfatter minst to tungkjede CDRer av antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter. 79. Et antistoffragment eller antistoffderivat som omfatter minst tre tungkjede CDR'er av antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter. 80. Et antistoffragment eller antistoffderivat som omfatter et VH-område av antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter. 81. Et antistoffragment eller antistoffderivat som omfatter alle CDR'er av antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter. 82. Et antistoffragment eller antistoffderivat som VH- og VL-områdene av antistoffet ifølge ethvert av de foregående aspekter. 83. Et hybridom som produserer antistoffet ifølge ethvert av de foregående krav. 84. En nukleinsyre som koder antistoffet eller antistoffragmentet ifølge ethvert av aspektene 1-82.
85. En vektor som omfatter nukleinsyren ifølge aspekt 84.
86. En celle som omfatter vektoren ifølge aspekt 85.
87. Cellen ifølge aspekt 86, hvor cellen er valgt fra en simian COS-celle, en CHO-celle eller en human myelomcelle. 88. En fremgangsmåte for å produsere et anti-KIR-anti stoff eller antistoffragment som omfatter å dyrke cellen ifølge aspekt 86 under betingelser som er egnet for ekspresjon av anti-KIR-anti stoffet og antistoffragmentet henholdsvis. 89. En fremgangsmåte for å produsere et derivat av et anti-KIR-antistoff eller anti-KIR-anti stoffragm ent som omfatter å tilveiebringe et anti-KIR-antistoff eller antistoffragment og konjugere det med minst én derivatgruppe. 90. En fremgangsmåte for å behandle kreft i en pasient hvor fremgangsmåten omfatter å administrere en pasient som lider av kreft en effektiv mengde av antistoffet eller antistoffragmentet eller derivatet ifølge ethvert av aspektene 1-82. 91. Fremgangsmåten ifølge aspekt 90, som ytterligere omfatter å administrere pasienten et middel valgt fra et kjemoterapeutisk middel, et radioterapeutisk middel, et antiangiogenisk middel, et immunmodulerende eller hormonelt middel. 92. En fremgangsmåte for å behandle en sykdom eller lidelse som skyldes et virus i en pasient hvor fremgangsmåten omfatter å administrere en pasient som lider av en sykdom eller en lidelse som skyldes et virus en effektiv mengde av antistoffet eller antistoffragmentet eller derivatet ifølge ethvert av aspektene 1-82. 93. En anvendelse av antistoffet eller antistoffragmentet eller derivatet ifølge ethvert av aspektene 1-82 ved fremstillingen av et medikament for behandling av kreft. 94. En anvendelse av antistoffet eller antistoffragmentet eller derivatet ifølge ethvert av aspektene 1-82 ved fremstillingen av et medikament for å behandle en sykdom eller lidelse som skyldes et virus. 95. En sammensetning som omfatter antistoffet eller antistoffragmentet eller derivatet ifølge ethvert av aspektene 1-82 og en farmasøytisk akseptabel bærer eller eksipient.
96. Sammensetningen ifølge aspekt 95, som omfatter polysorbat 80.
97. Sammensetningen ifølge aspekt 95, som omfatter sukrose.
98. Sammensetningen ifølge aspekt 95, som omfatter polysorbat 80 og sukrose.
99. Sammensetningen ifølge ethvert av aspektene 95-98, som ytterligere omfatter et middel valgt fra et kjemoterapeutisk middel, et radioterapeutisk middel, et antiangiogent middel, et immunmodulerende middel og et hormonelt middel.
100. Sammensetningen ifølge ethvert av aspektene 95-99, hvor antistoffet, antistoffragmentet eller antistoffderivatet er kovalent konjugert til et tumormålsøkende middel.
101. Sammensetningen ifølge ethvert av aspektene 95-99, hvor antistoffet, antistoffragmentet eller antistoffderivatet er innkapslet i et liposom.
102. Sammensetningen ifølge ethvert av aspektene 95-99, som ytterligere omfatter et antistoff som binder seg til et KIR, hvor nevnte KIR ikke er KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DS1 eller KIR2DS2.
103. En fremgangsmåte for å forsterke den lytiske aktiviteten for en celle valgt fra en lymfocytt og en NK-celle som omfatter å kontakte cellen med antistoffet, antistoffragmentet eller derivatet ifølge ethvert av aspektene 1-82.
104. En fremgangsmåte for å redusere interaksjonen mellom et KIR som blir uttrykt av en celle valgt fra en lymfocytt, T-celle og en NK-celle og et HLA-C klasse I-molekyl som er uttrykt av en målcelle, og hvor fremgangsmåten omfatter å kontakte cellen med antistoffet eller antistoffragmentet eller derivatet ifølge ethvert av aspektene 1-82.
105. En fremgangsmåte for å nøytralisere den hemmende aktiviteten for et KIR uttrykt av en NK-celle og hvor fremgangsmåten omfatter å kontakte NK-cellen med antistoffet eller antistoffragmentet eller derivatet ifølge ethvert av aspektene 1-82.
106. Et humant antistoff som binder seg til hver av KXR2DL1, KIR2DL2 og KIR2DL3 og hvor antistoffet blokkerer bindingen av et HLA-Cw4-molekyl til KXR2DL1, og bindingen av et HLA-Cw3-molekyl til minst én av KIR2DL2 eller KIR2DL3.
107. Antistoffet eller antistoffragmentet eller derivatet ifølge ethvert av aspektene 1-82, hvor KIR2DL1 omfatter aminosyresekvensen i SEKV.ID. NR. 23, KIR2DL2 omfatter aminosyresekvensen i SEKV.ID. NR. 24 og/eller KIR2DL3 omfatter aminosyresekvensen fra SEKV.ID. NR. 25.
108. En forbindelse som i alt vesentlig binder seg til den samme KIR2DL1 -epitopen som antistoffet, antistoffragmentet eller antistoffderivatet ifølge ethvert av aspektene 1-82.
109. En forbindelse som binder seg essensielt til den samme KIR2DL1 -epitopen som antistoffet, antistoffragmentet eller antistoffderivatet ifølge ethvert av aspektene 1-82.
110. Et antistoff eller antistoffderivat som omfatter en lettkjede som omfatter sekvensen fra SEKV.ID. NR. 36.
111. Et antistoff eller antistoffderivat som omfatter en tungkjede som omfatter sekvensen fra SEKV.ID. NR. 37.
112. Et antistoff eller antistoffderivat som omfatter den lette kjeden ifølge aspekt 109 og den tunge kjeden ifølge aspekt 110.
113. Et antistoff som består av en lettkjede som omfatter sekvensen fra SEKV.ID. NR. 36 og en tungkjede som omfatter sekvensen fra SEKV.ID. NR. 37.
* * *
Begrepene "en" og "et" og lignende betegnelser som er brukt i sammenheng med beskrivelsen av oppfinnelsen, må anses å dekke både entall og flertall hvis intet annet er angitt eller klart motsies av sammenhengen.
En angivelse av variasjonsområder for verdier som her er angitt, er utelukkende tenkt å tjene som en hurtig metode for å referere de individuelle separate verdier som faller innenfor nevnte område, hvis intet annet er angitt, og hver separate verdi er inkorporert i beskrivelsen som om de var individuelt angitt. Hvis intet annet er angitt, så er alle de nøyaktige verdier som her er angitt representative for de tilsvarende omtrentlige verdier (for eksempel kan alle de nøyaktige eksempler på verdier som her er tilveiebrakt eller gitt med hensyn til en spesiell faktor eller måling, anses også å tilveiebringe de tilsvarende omtrentlige målinger, modifisert med "omtrent" når dette måtte være passende).
Alle fremgangsmåter som her er beskrevet kan utføres i enhver egnet rekkefølge, hvis intet annet er angitt eller på annen måte klart motsies av sammenhengen.
Bruken av de eksempler som er angitt eller eksempler på språkbruk (for eksempel "så som") som her er tilveiebrakt, er utelukkende tenkt for bedre å belyse oppfinnelsen.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/IB2004/002464 WO2005003172A2 (en) | 2003-07-02 | 2004-07-01 | Pan-kir2dl nk-receptor antibodies and their use in diagnostik and therapy |
PCT/DK2004/000470 WO2005003168A2 (en) | 2003-07-02 | 2004-07-01 | Methods for the production and cytotoxicity evaluation of kir2dl nk-receptor antibodies |
DKPA200500025 | 2005-01-06 | ||
PCT/EP2005/053122 WO2006003179A2 (en) | 2004-07-01 | 2005-07-01 | Antibodies binding to receptors kir2dl1, -2, 3 but not kir2ds4 and their therapeutic use |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO20070585L NO20070585L (no) | 2007-01-31 |
NO341198B1 true NO341198B1 (no) | 2017-09-11 |
Family
ID=38462469
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20070585A NO341198B1 (no) | 2004-07-01 | 2007-01-31 | Humane anti-KIR antistoff. |
NO20171133A NO344566B1 (no) | 2004-07-01 | 2017-07-07 | Isolert antistoff eller fragment derav, nukleinsyre som koder for nevnte antistoff eller antistoffragment, vektor som omfatter nukleinsyren, celle som omfatter vektoren eller hybridom som uttrykker antistoffet eller antistoffragmentet, fremgangsmåte for fremstilling av antistoff eller antistoffragment, farmasøytisk sammensetning omfattende nevnte antistoff eller antistoffragment samt fremgangsmåte for fremstilling av antistoff. |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20171133A NO344566B1 (no) | 2004-07-01 | 2017-07-07 | Isolert antistoff eller fragment derav, nukleinsyre som koder for nevnte antistoff eller antistoffragment, vektor som omfatter nukleinsyren, celle som omfatter vektoren eller hybridom som uttrykker antistoffet eller antistoffragmentet, fremgangsmåte for fremstilling av antistoff eller antistoffragment, farmasøytisk sammensetning omfattende nevnte antistoff eller antistoffragment samt fremgangsmåte for fremstilling av antistoff. |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1841941A1 (no) |
JP (1) | JP5770142B2 (no) |
KR (1) | KR101299167B1 (no) |
CN (1) | CN103509111A (no) |
AT (1) | ATE499386T1 (no) |
BR (1) | BRPI0512911B1 (no) |
CY (1) | CY1122391T1 (no) |
DE (1) | DE602005026538D1 (no) |
DK (1) | DK1791868T3 (no) |
ES (2) | ES2738578T3 (no) |
HU (1) | HUE045639T2 (no) |
IL (1) | IL179635A0 (no) |
LT (1) | LT2287195T (no) |
MX (1) | MX2007000210A (no) |
NO (2) | NO341198B1 (no) |
PT (2) | PT2287195T (no) |
RU (1) | RU2410396C2 (no) |
TW (2) | TWI472338B (no) |
ZA (1) | ZA200700736B (no) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018148223A1 (en) * | 2017-02-09 | 2018-08-16 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Anti-kir3dl1 antibodies |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000026671A1 (de) * | 1998-10-29 | 2000-05-11 | Connex Gmbh | Nachweis von säure-resistenten mikroorganismen im stuhl |
EP1639013B1 (en) * | 2003-07-02 | 2012-09-12 | Innate Pharma | Pan-kir2dl NK-receptor antibodies and their use in diagnostic and therapy |
PL2287195T3 (pl) * | 2004-07-01 | 2019-10-31 | Novo Nordisk As | Przeciwciała pan-kir2dl receptora nk i ich zastosowanie w diagnostyce i terapii |
-
2005
- 2005-07-01 BR BRPI0512911-7A patent/BRPI0512911B1/pt active IP Right Grant
- 2005-07-01 HU HUE10178924A patent/HUE045639T2/hu unknown
- 2005-07-01 ES ES10178924T patent/ES2738578T3/es active Active
- 2005-07-01 DK DK05758642.2T patent/DK1791868T3/da active
- 2005-07-01 LT LTEP10178924.6T patent/LT2287195T/lt unknown
- 2005-07-01 RU RU2006144820/10A patent/RU2410396C2/ru active
- 2005-07-01 MX MX2007000210A patent/MX2007000210A/es active IP Right Grant
- 2005-07-01 ES ES05758642T patent/ES2360467T3/es active Active
- 2005-07-01 DE DE602005026538T patent/DE602005026538D1/de active Active
- 2005-07-01 TW TW94122367A patent/TWI472338B/zh active
- 2005-07-01 AT AT05758642T patent/ATE499386T1/de active
- 2005-07-01 KR KR1020077000069A patent/KR101299167B1/ko active IP Right Grant
- 2005-07-01 PT PT10178924T patent/PT2287195T/pt unknown
- 2005-07-01 TW TW101113099A patent/TWI422389B/zh active
- 2005-07-01 PT PT05758642T patent/PT1791868E/pt unknown
- 2005-07-01 CN CN201310415588.2A patent/CN103509111A/zh active Pending
-
2006
- 2006-01-19 EP EP06710695A patent/EP1841941A1/en not_active Withdrawn
- 2006-11-27 IL IL179635A patent/IL179635A0/en active IP Right Grant
-
2007
- 2007-01-26 ZA ZA2007/00736A patent/ZA200700736B/en unknown
- 2007-01-31 NO NO20070585A patent/NO341198B1/no unknown
-
2012
- 2012-08-08 JP JP2012176067A patent/JP5770142B2/ja active Active
-
2017
- 2017-07-07 NO NO20171133A patent/NO344566B1/no unknown
-
2019
- 2019-08-13 CY CY20191100871T patent/CY1122391T1/el unknown
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
FAN QR. et al. Crystal structure of the human natural killer cell inhibitory receptor KIR2DL1-HLA-Cw4 complex. Nat Immunol. 2001, vol. 2, no. 5, side 452-60. , Dated: 01.01.0001 * |
MORETTA A. et al. Activating receptors and coreceptors involved in human natural killer cell-mediated cytolysis. Annu Rev Immunol. 2001, vol. 19, side 197-223. Review. , Dated: 01.01.0001 * |
NATARAJAN K. et al. Structure and function of natural killer cell receptors: multiple molecular solutions to self, nonself discrimination. Annu Rev Immunol. 2002, vol. 20, side 853-885. Epub 2001 Oct 4. Review , Dated: 01.01.0001 * |
SPAGGIARI GM. et al. Soluble HLA class I induces NK cell apoptosis upon the engagement of killer-activating HLA class I receptors through FasL-Fas interaction. Blood. 2002, vol. 100, no. 12, side 4098-4107. Epub 2002 Jul 18 , Dated: 01.01.0001 * |
WARREN HS. et al. Biphasic response of NK cells expressing both activating and inhibitory killer Ig-like receptors. Int Immunol. 2001, vol. 13, no. 8, side 1043-1052., Dated: 01.01.0001 * |
WARREN HS. et al. Functional analysis of CD158b monoclonal antibodies recognizing the killer Ig-like receptors KIR2DS2, KIR2DL2 and KIR2DL3. Tissue Antigens. 2000, vol. 55, supplement 1, side 80-81. , Dated: 01.01.0001 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE602005026538D1 (de) | 2011-04-07 |
HUE045639T2 (hu) | 2020-01-28 |
NO344566B1 (no) | 2020-02-03 |
BRPI0512911B1 (pt) | 2023-05-16 |
RU2006144820A (ru) | 2008-09-10 |
NO20070585L (no) | 2007-01-31 |
PT1791868E (pt) | 2011-05-02 |
JP2013009676A (ja) | 2013-01-17 |
IL179635A0 (en) | 2007-05-15 |
DK1791868T3 (da) | 2011-05-16 |
RU2410396C2 (ru) | 2011-01-27 |
EP1841941A1 (en) | 2007-10-10 |
MX2007000210A (es) | 2007-08-02 |
BRPI0512911A (pt) | 2008-04-15 |
CN103509111A (zh) | 2014-01-15 |
KR101299167B1 (ko) | 2013-08-30 |
ES2738578T3 (es) | 2020-01-23 |
PT2287195T (pt) | 2019-07-29 |
JP5770142B2 (ja) | 2015-08-26 |
TWI472338B (zh) | 2015-02-11 |
TW200612986A (en) | 2006-05-01 |
KR20070034568A (ko) | 2007-03-28 |
CY1122391T1 (el) | 2021-01-27 |
ES2360467T3 (es) | 2011-06-06 |
LT2287195T (lt) | 2019-07-25 |
ZA200700736B (en) | 2008-04-30 |
TW201235048A (en) | 2012-09-01 |
ATE499386T1 (de) | 2011-03-15 |
TWI422389B (zh) | 2014-01-11 |
NO20171133A1 (no) | 2007-01-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP2287195B1 (en) | Pan-kir2dl nk-receptor antibodies and their use in diagnostik and therapy | |
US9708403B2 (en) | KIR-binding agents and methods of use thereof | |
NO20171133A1 (no) | Humane anti-KIR antistoff |