NO320586B1 - Fremgangsmate for kovalent kopling av et antistoffmolekyl, et fragment derav eller et antigenmolekyl til en fast fase. - Google Patents
Fremgangsmate for kovalent kopling av et antistoffmolekyl, et fragment derav eller et antigenmolekyl til en fast fase. Download PDFInfo
- Publication number
- NO320586B1 NO320586B1 NO19992781A NO992781A NO320586B1 NO 320586 B1 NO320586 B1 NO 320586B1 NO 19992781 A NO19992781 A NO 19992781A NO 992781 A NO992781 A NO 992781A NO 320586 B1 NO320586 B1 NO 320586B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- solid phase
- antibody
- antigen
- fragment
- polyvinyl
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 34
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 230000008878 coupling Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 40
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 9
- UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N Naphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC=CC=C21 UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 5
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 3
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 claims description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 claims description 3
- 239000011258 core-shell material Substances 0.000 claims description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KETWBQOXTBGBBN-UHFFFAOYSA-N hex-1-enylbenzene Chemical compound CCCCC=CC1=CC=CC=C1 KETWBQOXTBGBBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 125000004170 methylsulfonyl group Chemical group [H]C([H])([H])S(*)(=O)=O 0.000 claims description 3
- 229920003227 poly(N-vinyl carbazole) Polymers 0.000 claims description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 3
- 229920001447 polyvinyl benzene Polymers 0.000 claims description 3
- 229920002102 polyvinyl toluene Polymers 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 3
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 claims description 3
- YPDJUUNZSDFFBR-UHFFFAOYSA-N 1-chloroprop-2-enylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC(Cl)C1=CC=CC=C1 YPDJUUNZSDFFBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 claims description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical group ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 2
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims description 2
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 claims description 2
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 2
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 claims description 2
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 claims 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 6
- 238000007039 two-step reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 abstract 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 6
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N Vinyl chloride Chemical compound ClC=C BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010075210 streptolysin O Proteins 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 3
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 3
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- YXMISKNUHHOXFT-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) prop-2-enoate Chemical group C=CC(=O)ON1C(=O)CCC1=O YXMISKNUHHOXFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JECYNCQXXKQDJN-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methylhexan-2-yloxymethyl)oxirane Chemical compound CCCCC(C)(C)OCC1CO1 JECYNCQXXKQDJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 206010034839 Pharyngitis streptococcal Diseases 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 208000033809 Suppuration Diseases 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 206010048629 Wound secretion Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229940098197 human immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 210000004910 pleural fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000012536 storage buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/961—Chemistry: molecular biology and microbiology including a step of forming, releasing, or exposing the antigen or forming the hapten-immunogenic carrier complex or the antigen per se
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/823—Immunogenic carrier or carrier per se
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Emulsifying, Dispersing, Foam-Producing Or Wetting Agents (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Den foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for binding av antistoff eller antigenmolekyler til fast fase. Den reaktive forbindelse omfatter et antistoff eller antigenmolekyl og en fast fase dannes ved kopling av et spesifikt antistoff eller antigenmolekyl til en fast fase anvendende en to-trinns reaksjon. Koplingen er kovalent mellom de aktive gruppene på den faste fasen og antistoffet, et fragment herav eller antigenmolekylet i nærvær av et anionisk overfiateaktivt stoff etter tilsetting av en alkalisk/løsning for å øke pH til det basiske området.
Description
Oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for kovalent kopling av et antistoffmolekyl,' et fragment derav eller et antigenmolekyl til en fast fase. Den reaktive forbindelsen omfattende et antistoff eller antigenmolekyl og fast fase dannes ved kopling av et spesifikt antistoff eller antigenmolekyl til en fast fase anvendende en to-trinns reaksjon. Det endelige resultat er et antistoff eller antigenmolekyl kompleks som er kovalent bundet til den faste fase og er meget aktiv i immunologiske reaksjoner. Antistoffet som er bundet kan være mono- eller polyklonal og et helt antistoff eller en del herav. Foreliggende fremgangsmåte muliggjør utførselen av immunologiske analyser med meget høy spesifikkhet og følsomhet. Fremgangsmåten for fremstilling er meget enkel sammenlignet med kovalente kopolingsfremgangsmåter beskrevet tidligere. Den foreliggende oppfinnelse kan utnyttes industrielt i et testsett som omfatter en fast fase-biomolekyl konjugert forbindelse, dvs. en partikkelsuspensjon eller en annen fast fase til hvilken antistoffer, deres fragmenter eller antigener er blitt fastgjort ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen. Kjennetegnene ved oppfinnelsen er definert i kravene.
Det er tidligere kjente fremgangsmåter ved hvilke et antistoff eller antigenmolekyl fastgjøres ved absorpsjon eller kovalent binding til latekspartikler eller fremgangsmåter i hvilke hele antistoffmolekyler modifiseres (US-patenter nr. 5.095.097,4.184.849, 4.210.723,4.401.765,4.480.042,4.397.960 og 4.164.558 så vel som europeisk patentsøknad
0 709 676 A2).
1 den sistnevnte patentsøknad (EP 0 709 676 A2) modifiserer den innledende behandling av et helt IgG-molekyl i en sur oppløsning den tertiære strukturen av molekylet, slik at vedheftingen av et helt omdannet IgG-molekyl utført etter nøytralisasjonen muliggjør reduksjon i distribueringsfaktorene i forbindelse med de immunologiske analysene. I tillegg anvendes en toverdig ionisk eller ikke-ionisk overfiateaktivt stoff i fremgangsmåten ifølge den omtalte patentsøknad for å øke den kovalente binding av det syrebehandlede og nøytraliserte antistoff til overflaten av latekspartikler. I omtalte patentsøknad er det spesifikt nevnt at anioniske eller kationiske overflateaktive stoffer er ineffektive ved forsterkningen av den kovalente binding av antistoffet til overflaten av latekspartikkelen. I den ovenfor nevnte patentsøknad anvendes koplingskjemi til spesifikk kjerne-skallpartikler i hvilke den aktuelle kovalente binding finner sted mellom vinylkloridet, og oxiran, karboksyaldehyd, tosyl, mesyl eller n-akryloksysuksinimidgrupper på den aller ytterste skall av en partikkel, eller blandinger av slike grupper og aminogruppene på antistoffmolekylet i nærvær av et zwitterionisk eller ikke-ionisk overfiateaktivt stoff eller en blanding herav. Omtalte fremgangsmåte er imidlertid bare egnet til fastgjøring av antistoffer av IgG-klassen, og dermed er den ikke egnet for fastgjøring av f.eks. antigenmolekyler i motsetning til den foreliggende fremgangsmåte.
I kvantitative og kvalitative immunologiske analyser måles mengden av enten et antistoff eller et antigen fra biologiske fluider, sekresjoner eller vevsvæsker (blod, serum, plasma, cerebrospinalvæske, pleuralvæske, ascites, puss, sårsekresjon, urin, sputum, faeces, faryngalprøve, etc.). Tester kan være enten direkte, ikke-direkte eller inhiberende. I immunologiske reaksjoner bindes antistoffet til en antigenstruktur spesifikk til omtalte antistoff. Enten antistoffet eller antigenet kan være bundet til en spesifikk signalsubstans (merke). Merker omfatter polymerpartikler (også farvede eller magnetiske). Antistoff eller antigenmolekylene kan også være bundet til overflaten av en fast fase av en annen type (f.eks. en mikrotitreplate eller et testrør eller en kuvette bærende aktive bindingsgrupper på dens overflate). I kvantitative analyser anvendes ofte et analyseutstyr, hvis prinsipp er den optiske måling av prøven (absorbans, ekstinksjon, nefelometri, reflektans, fluoressens, fosforessens, etc.).
I den foreliggende fremgangsmåten festes et antistoff (et helt molekyl eller dets fragment) eller alternativt et antigenmolekyl (inklusiv f.eks. haptener, lektiner eller kjemiske forbindelser) i to trinn til overflaten av en kopolymerisk styrenvinylbenzyl-klorid (S/VBC) partikkel i nærvær av et anionisk overfiateaktivt stoff, derved oppnås som sluttprodukt en kovalent partikkel-antistoffkompleks eller, alternativt et kovalent partikkel-antigenkompleks. Polymerpartikler kan være homopolymere eller kopolymere eller de kan være kjerne-skallpartikler. Størrelsesfordelingen av partiklene er typisk fra 10 nm til 10000 nm. Som partikkelmaterialer, utover S/VBC, kommer styren, polyvinylnaftalen, polyvinylkarbazol, polyvinyltoluen, polyvinylbutylstyren, polyvinylbenzen, polyvinylklorid, og blandinger derav i betraktning. Ved siden av partikler kan den faste fasen f.eks. også være en mikrotitreplate, et testrør, en analysekuvette, immunokromatografimateriale, et filter, en teststripp eller gullkolloid.
I den foreliggende fremgangsmåte når antistoffet, et fragment derav eller antigenet er fastgjort til den faste fasen er deres struktur modifisert for å være fordelaktig for koplingen in statu nascendi og for en immunologisk reaksjon. Koplingen er kovalent når den finner sted mellom de aktive gruppene og den faste fasen og antistoffet, et fragment derav eller antigenmolekylet i nærvær av et anionisk overfiateaktivt stoff. Som nevnt ovenfor, kommer partikler fremstilt fra råmaterialer andre enn S/VBC i betraktning. Disse råmaterialer er valgt f.eks. fra polystyren, polyvinylnaftalen, polyvinylkarbazol, polyvinyltoluen, polyvinylbutylstyren, polyvinylbenzen og polyvinylklorid og deres blandinger så vel som kolloidalt gull. Den foreliggende koplingsfremgangsmåten adskiller seg fra den tidligere beskrevne (EP 0 709 676 A2) f.eks. ved det at antistoffmolekylet som skal koples kan være et helt molekyl eller et fragment derav og også et antigenmolekyl. I tillegg er fremgangsmåten meget hurtig og utføre da den ikke krever separate trinn eller koplingsreagenser, som selv som slike kan denaturere biomolekylene som skal koples med f.eks. intra- og intramolekylære tverrbindinger (f.eks. karbodiimidbindinger). Fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse muliggjør også en meget lang lagringstid av det fremstilte reagenset (dvs. fast fase-biomolekyle konjugert forbindelse) på både oppløsning og lyofilisert form.
Kopling finner sted i det første trinn meget hurtig hovedsakelig via hydrofobe interaksjoner (hydrogenbindinger, van der Waals krefter) og i det øyeblikkelig følgende andre trinn kovalent, derved reagerer vinylkloirdgruppene med primær eller sekundær aminogrupper på antistoffmolekylene (et helt molekyl eller et fragment herav) eller antigenmolekylene (substitusjonsreaksjon). Det er også mulig at vinylkloirdgrupper reagerer med noen andre grupper. Kovalent binding er en forholdsvis langsom hendelse og forbedring derav krever basisk pH (8 til 11, fortrinnsvis pH 9,0). Bortsett fra vinylkloirdgrupper kan også klormetyl, epoksy, aldehyd, tosyl, mesyl eller n-hydroksysuksinimidgrupper eller blandinger herav, virke som kovalent bindingsgrupper for den faste fasen, hvor betingelsene for det aktuelle kovalente reaksjonstrinnet (trinn 2) er blitt optimert for omtalte reaksjonskjemi.
I koplingsprosedyren blir S/VBC partiklene overført ved dialyse til en fortynnet syre eller en bufferoppløsning fortrinnsvis til 5 mM HC1 (pH 2 til 6, fortrinnsvis 2,5), hvortil der tilsettes et antionisk overfiateaktivt stoff, fortrinnsvis det overflateaktive stoffet polyoky-1,2-etandiyl-a-nonylfenyl-o-hydroksy-fosfat (Rhodafac-RE610), under omrøring for å oppnå en overflateaktiv stoffkonsentrasjon på 0,01 til 0,1 %, fortrinnsvis 0,025% i det endelige koplingstrinnet avhengig av antistoffet eller antigenet som anvendes. Antistoffet eller antigenet tilsettes fortrinnsvis som en 0,9% løsning i NaCl under kraftig omrøring til partikkelsuspensjonen i 5 mM HC1 for å oppnå en partikkelkonsentrasjon på omkring 0,5 til 10%, fortrinnsvis 2% i koplingstrinnet. Konsentrasjonen av antistoffet eller antigenet i koplingstrinnet er 0,01 til 1%, fortrinnsvis 0,01 til 0,2% avhengig av antistoffet og antigenet som anvendes. Forholdet mellom antistoffet eller antigenet og tørrstoffvekten av S/VBC partiklene er 0,001 til 1,0, mer foretrukket 0,1 til 0,3.
Blandingen av antistoffet eller antigenet og S/VBC partiklene inkuberes i 1 til 60 minutter fortrinnsvis 10 til 20 minutter ved 4°C til 50°C, fortrinnsvis ved 20°C. Under inkubasjonen finner en effektiv i det vesentlige adsorptiv vedhefting av antistoffet eller antigenet til overflaten av partiklene sted i nærværet av et anionisk overfiateaktivt stoff (det første trinn av koplingsreaksjonen). Deretter tilsettes en basisk bufferløsning fortrinnsvis 0,1 M boratbuffer, pH 9,0, for således å fordoble volumet og oppnå en partikkelkonsentrasjon på 1%. Blandingen inkuberes i 16 til 24 timer ved 4°C til 50°C, mest foretrukket ved 20°C omrørende kontinuert, hvorved den aktuelle kovalente koplingen i det vesentlige finner sted (det andre trinn av koplingsreaksjonen).
Den foreliggende koplingsfremgangsmåte adskiller seg fra tidligere beskrevne fremgangsmåter (EP 0 709 676 A2) f.eks. ved det at koplingsreaksjonen (det første trinn) finner sted direkte i sur pH i nærvær av et anionisk overfiateaktivt stoff (i de tidligere patentsøknader i nærvær av et kationisk overfiateaktivt stoff), hvoretter det kovalente trinn av koplingsreaksjonen (det andre trinn) blir utført uten et separat nøytraliseirngstrinn (i de tidligere patentsøknader er der et separat nøytraliseirngstrinn) i basisk pH.
Kort beskrivelse av figurene
Fig. 1 Analyse av C-reaktiv protein (CRP). En typisk reaksjonskurve oppnådd
anvendende et reagens fremstilt ifølge oppfinnelsen.
Fig. 2 Analyse av rheumatoid faktor (RF). En typisk reaksjonskurve oppnådd
anvendende et reagens fremstilt ifølge oppfinnelsen.
Fig. 3 Analyse av streptolysin O. En typisk reaksjonskurve oppnådd
anvendende et reagens fremstilt ifølge oppfinnelsen.
I det følgende er oppfinnelsen illustrert i detaljer ved eksempler. Eksemplene beskriver spesifikke anvendelser av de ovenfor indikerte koplingsfremgangsmåter.
Eksempel 1
Det C-reaktive protein (CRP) er en generell akseptert indikator for inflammasjons-reaksjoner, som forutsettes å bli bestemt fra en hel blodprøve eller en serumprøve fra en pasient. CRP analyse blir ofte utført anvendende en analyseinnretning med et prinsipp av optisk måling (absorbans, ekstinksjon, nefelometri, reflektans, fluoressens, fosforessens, etc.) av prøven. For å bestemme CRP konsentrasjonen blir polymerpartikler fremstilt som er belagt med et sau anti-human-CRP antistoff (F(ab')2 fragment). Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er som følger: til 1 ml av partikkelsuspensjonen av S/ VBC (9% suspensjon i 5 mM HC1, partikkelstørrelse 90 nm) tilsettes 0,33 ml 0,9% Rhodafac-RE610 løsning i NaCl. Blandingen omrøres ved romtemperatur i 15 minutter. Til blandingen tilsettes 1,82 mg anti-human-CRP-F(ab')2-antistoff pr. 10 mg partikkel tørr vekt, fortynnet med 0,9% NaCl, for å oppnå en partikkelkonsentrasjon på 2% i suspensjonen. Blandingen omrøres ved 20°C i 15 minutter mens pH'en kontrolleres. Et egnet pH område er 2,5 til 3,0. Til blandingen tilsettes 0,1M boratbuffer, pH 9,0, for å fordoble dens volumen. pH bør være 9,0. Blandingen omrøres i 18 timer ved 20°C. De ikke-reaktive aktive gruppene på overflaten av partiklene blokkeres med 30 mM glycinbuffer inklusiv 6% BSA (bovin serum albumin) og 0,1 % NaN3, pH 8,7 slik at BSA-konsentrasjonen vil være 0,02%. Blandingen rystes i 16 timer ved 20°C. De belagte partiklene blir vasket ved sentrifugering eller diafiltrering i en vaskebufferløsning (30 mM glycin, 0,1% BSA, 0,1% NaN3, pH 8,7), deretter blir de overført til en lagringsbufferløsning (30 mM glycin, 0,1% BSA, 5% sukrose, 0,1% NaN3, pH 8,7). Partikkelsuspensjonen utsettes for lydbølger inntil partikkelstørrelsen er under 110 nm og suspensjonen er på monodispergert form. Den endelige partikkelkonsentrasjonen blir justert ifølge anvendelsen av den lagrede bufferløsningen til å være 1 til 4%. En typisk reaksjonkurve oppnådd anvendende reagenset oppnådd således er gitt i figur 1.
Eksempel 2
Bestemmelse av reumatoidfaktoren (RF) er meget viktig i diagnosen av forskjellige reumatoide sykdommer. Reumatoidfaktoren er et autoantistoffav immunoglobulin-klasse M dannet av et menneske rettet mot dens egen IgG. En reaksjon mellom RF og de egne strukturer (IgG) til mennesket frigir en sykdom, som i dens vanlige former er reumatoid artritt. Bestemmelsen av RF kan utføres som beskrevet i det tidligere eksempel, direkte fra en hel blodprøve eller fra serum. I denne test er de spesifikt merkede partiklene belagt med human immunoglobulin G molekyler. Den aktuelle koplingsreaksjonen blir utført som beskrevet i det tidligere eksempel, men anti-human-CRP-antistoff (F(ab')2 fragment) er erstattet med koplingsreaksjon med et humant IgG molekyl. En typisk reaksjonskurve oppnådd ved anvendelse av det resulterende reagenset er gitt i figur 2.
Eksempel 3
Streptokokkus av type A produserer til deres omgivelser forskjellige forbindelser som kan detekteres. Noen av disse ekstracellulære produkter er toksiner. Et av slike toksiner er streptolysin O. En infeksjon med streptokokkus av type A genererer antistoffer hos et humant vesen. En antistofftest som i de fleste tilfeller utføres for å detektere type A-streptokokkus infeksjon er en ASO test (anti-streptolysin 0). Omkring 80% av pasientene med en akutt type A-streptokokk faryngitis genererer antistoffer mot streptolysin O. I tillegg er ASO bestemmelsen anbefalt ved deteksjonen av reumatisk feber og glomerulonefrititt. Anvendende to-trinns koplingsfremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan streptolysin O antigen (SLO) festes til overflaten av S/VBC partiklene. Således er det mulig å bestemme antistoffer mot SLO i pasientprøvene (ASO test). Koplingen utføres som beskrevet ovenfor for antistoffer og deres fragmenter, dvs. i to trinn. En typisk reaksjonskurve oppnådd anvendende det oppnådde reagenset er gitt i figur 3.
Claims (14)
1.
Fremgangsmåte for kovalent kopling av et antistoffmolekyl, et fragment derav eller et antigenmolekyl til en fast fase, karakterisert ved å omfatte a) bringende et antistoff, et fragment derav eller et antigen i nærvær av et anionisk overfiateaktivt stoff i kontakt med en fast fase tilstede i en sur oppløsning, for å hefte omtalte antistoff, et fragment derav eller omtalte antigen til den faste fasen, og b) tilsettende en basisk oppløsning til kombinasjonen av antistoffet, et fragment derav eller antigenet og den faste fase oppnådd i trinn a) for således å endre pH'en til basisk for å danne kovalente bindinger mellom de primære eller sekundære aminogrupper på antistoffet, et fragment derav eller antigenet og funksjonelle grupper på den faste fasen.
2.
Fremgangsmåten ifølge krav 1, karakterisert ved at den sure oppløsningen er saltsyre, fortrinnsvis 5 mM HC1, pH 2-4.
3.
Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at den basiske løsning er en buratbuffer, fortrinnsvis 0,1M boratbuffer, pH 9,0.
4.
Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det anioniske overflateaktive stoffet er polyoksy-l,2-etan-diyl-a-nonylfenyl-o-hydroksy-fosfat overfiateaktivt stoff med konsentrasjonen på 0,1 til 0,01%.
5.
Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at de kovalente koplingsgruppene på den faste fasen er valgt fra klormetyl, epoksy, aldehyd, tosyl, mesyl og n-hydroksysuksinimidgrupper og blandinger av omtalte grupper, fortrinnsvis klormetylgrupper.
6.
Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det sure trinnet i fremgangsmåten tar 1 til 60 minutter, fortrinnsvis 15 minutter.
7.
Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det basiske trinnet i koplingen begynner umiddelbart etter det sure trinnet og tar 1 til 24 timer, fortrinnsvis 18 timer.
8.
Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at den faste fasen er en polymerpartikkel, en mikrotiterplate, et testrør, en analysekuvette, immunokromatografimateriale, et filter, en teststripp eller gullkoloid, fortrinnsvis en polymerpartikkel.
9.
Fremgangsmåte ifølge krav 8, karakterisert ved at polymerpartiklene er blitt dannet av en homopolymer eller en kopolymer eller er kjerne-skallpartikler.
10.
Fremgangsmåte ifølge krav 9, karakterisert ved at de strukturelle bestanddelene av polymerpartiklene er valgt fra polystyren, polyvinylnaftalen, polyvinylkarbazol, polyvinyltoluen, polyvinylbutylstyren, polyvinylbenzen og polyvinylklorid og blandinger herav.
11.
Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved at strukturbestanddelen av polymerpartiklene er en kopolymer av polystyren og polyvinylklorid.
12.
Fremgangsmåte ifølge krav 10 eller 11, karakterisert v e d at størrelsen av polymerpartiklene er 10 nm til 10.000 nm, fortrinnsvis 90 nm.
13.
Fremgangsmåte ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene for fremstilling av et fast fase-biomolekyl konjugat, karakterisert ved at den omfatter en fast fase til hvilken antistoffmolekyler, et fragment derav eller antigen molekyler er blitt kovalent fastgjort.
14.
Fremgangsmåte ifølge krav 13 for fremstilling av et fast fase-biomolekyle konjugat, karakterisert ved at det omfatter et F(ab')2 fragment av et sau anti-human-CRP-antistoff koplet til styrenvinyl-benzylkloridpolymerpartikler.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI965066A FI101543B (fi) | 1996-12-17 | 1996-12-17 | Biomolekyylien kytkeminen kiintofaasiin |
| PCT/FI1997/000774 WO1998027429A1 (en) | 1996-12-17 | 1997-12-10 | Method of coupling ligands to a solid phase in acidic solution and anionic surfactant |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO992781D0 NO992781D0 (no) | 1999-06-08 |
| NO992781L NO992781L (no) | 1999-06-08 |
| NO320586B1 true NO320586B1 (no) | 2005-12-27 |
Family
ID=8547295
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19992781A NO320586B1 (no) | 1996-12-17 | 1999-06-08 | Fremgangsmate for kovalent kopling av et antistoffmolekyl, et fragment derav eller et antigenmolekyl til en fast fase. |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6358753B1 (no) |
| EP (1) | EP0946871B1 (no) |
| JP (1) | JP3845118B2 (no) |
| AT (1) | ATE221199T1 (no) |
| AU (1) | AU732232B2 (no) |
| CA (1) | CA2274956C (no) |
| DE (1) | DE69714291T2 (no) |
| DK (1) | DK0946871T3 (no) |
| ES (1) | ES2179376T3 (no) |
| FI (1) | FI101543B (no) |
| IL (1) | IL130459A (no) |
| NO (1) | NO320586B1 (no) |
| WO (1) | WO1998027429A1 (no) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4703018A (en) | 1985-02-20 | 1987-10-27 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | High refractive index haloalkyl-functional shell-core polymers and their use in light scattering immunoassays |
| EP0257758B1 (en) | 1986-08-07 | 1993-03-10 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Stable biologically active fluorochemical emulsions |
| US5585278A (en) | 1994-10-27 | 1996-12-17 | Bayer Corporation | Method for coupling antibody to novel latex substrate and its use in immunoassay |
-
1996
- 1996-12-17 FI FI965066A patent/FI101543B/fi not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-12-10 IL IL13045997A patent/IL130459A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-12-10 EP EP97947054A patent/EP0946871B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-10 CA CA002274956A patent/CA2274956C/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-10 JP JP52736098A patent/JP3845118B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-10 ES ES97947054T patent/ES2179376T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-10 AT AT97947054T patent/ATE221199T1/de active
- 1997-12-10 WO PCT/FI1997/000774 patent/WO1998027429A1/en active IP Right Grant
- 1997-12-10 DK DK97947054T patent/DK0946871T3/da active
- 1997-12-10 AU AU52240/98A patent/AU732232B2/en not_active Expired
- 1997-12-10 US US09/331,056 patent/US6358753B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-10 DE DE69714291T patent/DE69714291T2/de not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-06-08 NO NO19992781A patent/NO320586B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO992781D0 (no) | 1999-06-08 |
| FI101543B1 (fi) | 1998-07-15 |
| JP2001509887A (ja) | 2001-07-24 |
| DE69714291D1 (de) | 2002-08-29 |
| JP3845118B2 (ja) | 2006-11-15 |
| EP0946871A1 (en) | 1999-10-06 |
| WO1998027429A1 (en) | 1998-06-25 |
| AU732232B2 (en) | 2001-04-12 |
| ATE221199T1 (de) | 2002-08-15 |
| CA2274956C (en) | 2007-07-03 |
| CA2274956A1 (en) | 1998-06-25 |
| DK0946871T3 (da) | 2002-11-04 |
| DE69714291T2 (de) | 2003-03-20 |
| FI101543B (fi) | 1998-07-15 |
| IL130459A0 (en) | 2000-06-01 |
| ES2179376T3 (es) | 2003-01-16 |
| NO992781L (no) | 1999-06-08 |
| EP0946871B1 (en) | 2002-07-24 |
| IL130459A (en) | 2002-07-25 |
| US6358753B1 (en) | 2002-03-19 |
| FI965066A0 (fi) | 1996-12-17 |
| AU5224098A (en) | 1998-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0466914B1 (en) | Immunochromatographic assay and method of using same | |
| Wisdom | Enzyme-immunoassay. | |
| US4847199A (en) | Agglutination immunoassay and kit for determination of a multivalent immune species using a buffered salt wash solution | |
| AU614109B2 (en) | Test method and reagent kit therefor | |
| JP2901296B2 (ja) | カンピロバクター・ピロリの高分子型細胞関連蛋白の調製法とカンピロバクター・ピロリ感染の血清学的検出のための用法 | |
| JPS63229367A (ja) | 免疫反応性試薬、その製造法及び免疫反応性種を測定するためのその用途 | |
| Reiss et al. | Dissociation of mannan--serum complexes and detection of Candida albicans mannan by enzyme immunoassay variations. | |
| US5017474A (en) | Wash solution, test kit and method for the determination of an immunological ligand | |
| US6136545A (en) | Homogeneous detection methods for the determination of subpopulations of an analyte | |
| US4828978A (en) | Agglutination reagent and method of preparing same | |
| GB1590525A (en) | Biological analysis | |
| US5166053A (en) | Specimen adequacy control for chlamydia assays | |
| Ishikawa et al. | Development and applications of sensitive enzyme immunoassay for antibodies: a review | |
| NO320586B1 (no) | Fremgangsmate for kovalent kopling av et antistoffmolekyl, et fragment derav eller et antigenmolekyl til en fast fase. | |
| JP3337575B2 (ja) | 抗ストレプトリジンｏ抗体の決定方法 | |
| EP0990902A1 (en) | METHOD FOR DETECTING INFECTION WITH ENTEROHEMORRHAGIC $i(ESCHERICHIA COLI) | |
| US9500648B1 (en) | Rapid Lyme antigen test for detection of Lyme disease | |
| JPH03170058A (ja) | イムノアッセイ用試薬複合体 | |
| WO2008068554A1 (en) | Complement-based analyte assay | |
| JPH08220099A (ja) | 物質の検出試薬及び慢性関節リウマチの検知法 | |
| EP0280561B1 (en) | Agglutination reagent and method of preparing same | |
| CA1243944A (en) | Reagent and process for quantitatively measuring antibodies | |
| US5185128A (en) | Test kit containing labeled receptor and wash solution for determination of an immunological ligand | |
| Guesdon | Amplification systems for enzyme immunoassay | |
| JPH07191036A (ja) | グリココンジュゲートの測定方法および試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |