FI101543B - Biomolekyylien kytkeminen kiintofaasiin - Google Patents
Biomolekyylien kytkeminen kiintofaasiin Download PDFInfo
- Publication number
- FI101543B FI101543B FI965066A FI965066A FI101543B FI 101543 B FI101543 B FI 101543B FI 965066 A FI965066 A FI 965066A FI 965066 A FI965066 A FI 965066A FI 101543 B FI101543 B FI 101543B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- solid phase
- antibody
- process according
- antigen
- advantageously
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/961—Chemistry: molecular biology and microbiology including a step of forming, releasing, or exposing the antigen or forming the hapten-immunogenic carrier complex or the antigen per se
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/823—Immunogenic carrier or carrier per se
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Emulsifying, Dispersing, Foam-Producing Or Wetting Agents (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
101543
Biomolekyylien kytkeminen kiintofaasiin
Keksinnön kohteena on menetelmä vasta-aine- tai antigeenimolekyylien sitomiseksi kiintofaasiin. Vasta-aine tai antigeenimolekyylin ja kiintofaasin muodostama reaktiivinen 5 yhdiste muodostetaan kytkemällä spesifinen vasta-aine- tai antigeenimolekyyli kiintofaasiin kaksivaiheisella reaktiolla. Lopputuloksena on kiintofaasiin kovalenttisesti sitoutunut, immunologisissa reaktioissa erittäin aktiivinen vasta-aine- tai antigeenimolekyyli-kompleksi. Sidottu vasta-aine voi olla mono- tai polyklonaalinen sekä kokonainen vasta-aine tai sen osa. Kyseinen menetelmä mahdollistaa erittäin korkean spesifiteetin ja sen-10 sitiivisyyden omaavien immunologisten määritysten suorittamisen. Valmistusprosessi on tuotannollisesti yksinkertainen verrattuna aiemmin esitettyihin kovalenttisiin kytkentäme-netelmiin. Kyseessä olevaa keksintöä voidaan teollisesti hyödyntää testipakkauksessa, joka sisältää partikkelisuspension tai muun kiintofaasin, johon on kiinnitetty keksinnön-mukai sella menetelmällä vasta-aineita, sen osia tai antigeenejä. Keksinnölle on tunnus-13 omaista se, mikä määritellään patenttivaatimuksissa.
Ennestään tunnetaan menetelmiä, joissa vasta-aine tai antigeenimolekyyli kiinnitetään adsorptiivisesti tai kovalenttisesti lateksipartikkeleihin, tai joissa menetelmissä modifioidaan kokonaista vasta-ainemolekyyliä (U.S. patentit no. 5,095,097, 4,184,849, 20 4,210,723, 4,401,765, 4,480,042, 4,397,960, 4,164,558, Euroopan pat. hakemus EP 0 709 676 A2).
Viimeksimainitussa patenttihakemuksessa (EP 0 709 676 A2) kokonaisen IgG-molekyylin esikäsittely happamassa liuoksessa muuntaa molekyylin tertiäärirakennetta siten, että neutraloinnin jälkeen suoritettu kokonaisen reformoidun IgG-molekyylin 25 kiinnitys mahdollistaa seerumin häiritsevien tekijöiden vähenemisen immunologisten *, määritysten suorittamisen yhteydessä. Lisäksi kyseisessä patenttihakemuksen mukaisessa menetelmässä käytetään zwitterionista tai nonionista surfaktanttia tehostamaan happo-käsitellyn ja neutraloidun vasta-ainemolekyylin kovalenttista kiinnittymistä lateksipartik-kelin pintaan. Kyseisessä patenttihakemuksessa mainitaan erityisesti, että anioniset tai 30 kationiset surfaktantit ovat tehottomia tehostamaan vasta-ainemolekyylin kovalenttista kiinnittymistä lateksipartikkelin pintaan. Edellämainitussa patenttihakemuksessa sovelle- 2 101543 taan kytkentäkemiaa erityisiin ydin-kuoripartikkeleihin, joissa varsinainen kovalenttinen sitoutuminen tapahtuu partikkelin uloimman kuoren vinyylikloridi-, oksiraani-, karboksi-aldehydi-, tosyyli-, mesyyli, n-akryloksisukkinimidiryhmien tai näiden seosten ja vasta-ainemolekyylin aminoryhmien välillä zwitterionisen tai nonionisen surfaktantin tai näiden S seoksen läsnäollessa. Kyseinen menetelmä soveltuu kuitenkin yksinomaan IgG-luokan vasta-ainemolekyylien kiinnittämiseen eikä näinollen sovellu esimerkiksi antigeenimole-kyylien kiinnittämiseen, toisin kuin nyt keksinnön kohteena oleva menetelmä.
Kvantitatiivisissa ja kvalitatiivisissa immunologisissa määrityksissä mitataan useimmiten 10 joko vasta-aineen tai antigeenin määrää biologisista nesteistä, eritteistä tai kudosnesteistä (veri, seerumi, plasma, aivo-selkäydinneste, pleuraneste, askitesneste, märkä, haavaerite, virtsa, yskös, uloste, nielunäyte jne ). Testit voivat olla joko suoria, epäsuoria tai inhibi-torisia. Immunologisissa reaktioissa vasta-aine sitoutuu kyseiselle vasta-aineelle spesifiseen antigeenirakenteeseen. Sekä vasta-aine että vaihtoehtoisesti antigeeni voivat olla IS erityiseen signaaliaineeseen (leima-aineeseen) sidottuja. Leima-aineena toimivat mm. polymeeriset partikkelit (myös värilliset ja magneettiset). Lisäksi vasta-aine tai anti-geenimolekyylit voidaan kiinnittää myöskin muun tyyppisen kiintofaasin pintaan (esimerkiksi aktiivisia sitovia ryhmiä pinnallaan kantava mikrotiitterilevy tai koeput-ki/kyvetti). Kvantitatiivisissa määrityksissä käytetään usein apuna analysointilaitteistoa, 20 jonka toimintaperiaate on näytteen optinen mittaus (absorbanssi, ekstinktio, nefelometria, - reflektanssi, fluoresenssi, fosforesenssi jne.).
Nyt keksinnön kohteena olevassa menetelmässä vasta-aine (kokonainen molekyyli tai sen fragmentti) tai vaihtoehtoisesti antigeenimolekyyli (myöskin esim. hapteeni, lektiini tai 25 kemiallinen yhdiste) kiinnitetään kaksivaiheisesti kopolymeerisen styreeni vinyyli bent syy-likloridipartikkelin (S/VBC) pintaan anionisen surfaktantin läsnäollessa, jolloin lopputuloksena on kovalenttinen partikkeli-vasta-ainekompleksi tai vaihtoehtoisesti kovalenttinen partikkeli-antigeenikompleksi. Polymeeripartikkelit voivat olla homopolymeeria, kopolymeeria tai rakenteeltaan ydinkuoripartikkeleita. Partikkeleiden kokoalue on tyy-30 pillisesti 10 nm - 10000 nm. Partikkelimateriaalina S/VBC:n lisäksi tulevat kyseeseen polystyreeni, polyvinyylinaftaleeni, polyvinyylikarbatsoli, polyvinyylitolueeni, polyvinyy- 101543 libutylstyreeni, polyvinyylibetseeni, polyvinyylikloridi sekä näiden seos. Partikkeleiden lisäksi kiintofaasi voi olla esimerkiksi mikrotiitterilevy, koeputki, mittakyvetti, immuno-kromatografia-materiaali, suodatin, testiliuska tai kultakolloidi.
Nyt kyseesä olevassa menetelmässä vasta-aineen, sen osan tai antigeenin rakenne muun-S tuu kiintofaasiin kytkeytyessään in statu nascendi kytkeytymiselle ja immunologiselle reaktiolle edulliseksi. Kytkeytymisen on kovalenttinen, kun se tapahtuu anionisen surfak-tantin läsnäollessa kiintofaasin aktiivisten ryhmien ja vasta-aineen, sen osan tai anti-geenimolekyylin välillä.
Kuten edellä mainittiin myös muista raaka-aineista kuin S/VBC:sta valmistetut partikkelit 10 tulevat kyseeseen. Näitä raaka-aineita ovat esim. polystyreeni, polyvinyylinaftaleeni, polyvinyylikarbatsoli, polyvinyylitolueeni, polyvinyylibutylstyreeni, polyvinyylibetseeni, polyvinyylikloridi sekä näiden seos ja kolloidinen kulta. Nyt kyseessä oleva kytkentäme-netelmä poikkeaa aiemmin esitetystä (EP 0 709 676 A2) mm. siinä, että kytkettävä vasta-ainemolekyyli voi olla kokonainen tai sen fragmentti sekä myöskin antigeenimolekyyli. 15 Lisäksi menetelmä on erittäin nopea suorittaa, koska se ei vaadi erillisiä vaiheita tai kyt-kentäreagensseja, jotka jo sinällään voivat denaturoida kiinnitettäviä biomolekyylejä mm. molekyylien sisäisillä ja välisillä ristisidoksilla (esim. karbodi-imidikytkennät). Keksinnön kohteena oleva menetelmä mahdollistaa lisäksi valmiin reagenssin (esimerkiksi partikkeli-biomolekyylikonjugaatti) erittäin hyvän säilyvyyden sekä liukoisessa että lyofilisoidussa 20 muodossa.
: Kytkeytyminen tapahtuu ensimmäisessä vaiheessa erittäin nopeasti pääasiallisesti hydro fobisten interaktioiden kautta (vetysidokset, van der Waals’in voimat) ja välittömästi seuraavassa toisessa vaiheessa kovalenttisesti, jolloin vinyylikloridiryhmät reagoivat vasta-aine- (kokonainen molekyyli tai sen osa) tai antigeenimolekyylien primaaristen tai se-25 kundaaristen aminoryhmien kanssa (substituutioreaktio). Vinyylikloridiryhmien reaktiot myös muiden ryhmien kanssa ovat mahdollisia. Kovalenttinen sitoutuminen on suhteeli-sen hidas tapahtuma ja vaatii tehostuakseen emäksisen pH:n (8 - 11, edullisesti pH 9.0). Paitsi vinyylikloridiryhmiä, kiintofaasin kovalenttisesti sitovia ryhmiä voivat olla klorome-tyyli-, epoksi-, aldehydi-, tosyyli-, mesyyli-, n-hydroksisukkinimidi- tai näiden seoksesta 30 muodostuvia ryhmiä, jolloin varsinaisen kovalenttisen reaktiovaiheen (2. vaihe) olosuhteet ovat optimoidut tyypillisesti kyseiselle reaktiokemialle.
4 101543
Kytkennässä S/VBC-partikkelit siirretään dialysoimalla laimeaan happoon tai puskuriliuokseen, edullisesti 5 mM HCl iin ( pH 2 - 6, edullisesti pH 2.5 ), johon lisätään sekoittaen anionista surfaktanttia, edullisesti polyoksi-l,2-etaanidiyyli-a-nonyylifenyyli-o-hydroksi-fosfaatti-surfaktanttia (Rhodafac-RE610) siten, että surfaktantin pitoisuus lopullisessa 5 kytkentävaiheessa on vasta-aineesta tai antigeenistä riippuen 0.01 - 0.1 %, edullisesti 0.025 %. Vasta-aine tai antigeeni, edullisesti 0.9 % NaCl:n liuoksena, lisätään 5 mM HCl:ssa olevaan partikkelisuspensioon tehokkaasti sekoittaen siten, että partikkelipitoi-suus kytkentävaiheessa on n. 0.5 - 10 %, edullisesti 2 %. Vasta-aineen tai antigeenin pitoisuus kytkentävaiheessa on 0.01 - 1 %, edullisesti 0.01 - 0.2 %, vasta-aineesta ja an-10 tigeenista riippuen. Vasta-aineen tai antigeenin ja partikkelien kuivapainon suhde on 0.001 - 1.0, edullisimmin 0.1 - 0.3. Vasta-aineen tai antigeenin ja S/VBC partikkeleiden seosta inkuboidaan 1 -60 minuuttia, edullisesti 10-20 minuuttia 4 °C - 50 °C:ssa, edullisesti 20 °C:ssa. Inkuboinnin aikana vasta-aineen tai antigeenin tehokas, pääasiallisesti adsorptiivinen kiinnittyminen tapahtuu happamassa ( pH 2 - 6, edullisesti pH 2.5 ) anioni-15 sen surfaktantin läsnäollessa partikkelin pintaan (kytkentäreaktion ensimmäinen vaihe). Lisätään emäksistä puskuriliuosta, edullisesti 0,1 M boraattipuskuria pH 9.0 siten, että tilavuus kaksinkertaistuu ja partikkelipitoisuudeksi tulee 1 %. Inkuboidaan seosta 16 -24 tuntia 4 °C - 50 °C:ssa, edullisimmin 20 °C:ssa jatkuvasti sekoittaen, jolloin varsinainen kovalenttinen kytkeytyminen pääasiallisesti tapahtuu (kytkentäreaktion toinen vaihe). 20 Nyt kyseessä oleva kytkentämenetelmä poikkeaa aiemmin esitetyistä (EP 0 709 676 A2) mm. siinä, että kytkentäreaktio (ensimmäinen vaihe) tapahtuu suoraan happamassa pH:ssa anionisen surfaktantin läsnäollessa (aiemmissa patenttihakemuksissa kationisen surfaktantin läsnäollessa), jonka jälkeen ilman erillistä neutralointivaihetta (aiemmissa patenttihakemuksissa on erillinen neutralointivaihe) siirrytään kytkentäreaktion kovalent-25 tiseen vaiheeseen (toinen vaihe) emäksisessä pH:ssa.
Seuraavassa keksintöä kuvataan yksityiskohtaisesti esimerkkien valossa. Kuvatut esimerkit ovat aiemmin mainitun kytkentämenetelmän spesifisiä sovellutuksia eivätkä ne millään tavoin rajoita keksintöä.
30 5 101543
Esimerkki 1.
C-reaktiivinen proteiini (CRP) on eräs yleisesti hyväksytty tulehdusreaktion indikaattori, jonka pitoisuus pyritään määrittämään tutkittavan potilaan kokoverinäytteestä tai seerumista. CRP-määrityksen yhteydessä käytetään usein apuna analysointilaitteistoa, jonka 5 toimintaperiaate on näytteen optinen mittaus (absorbanssi, ekstinktio, nefelometria, ref-lektanssi, fluoresenssi, fosforesenssi jne.). CRP-pitoisuuden määrittämiseksi valmistetaan lampaan anti-humaani-CRP-vasta-aineella (F(ab’)2-fragmentti) päällystettyjä polymeeri-partikkeleita keksinnön mukaisesti seuraavasti: 9 % suspensiona 5 mM HCl:ssä olevaan, partikkelikooltaan 90 nm S/VBC-partikkelisuspensioon lisätään 0,33 ml 0,9 % Rhodafac-10 RE610-liuosta NaCI ssa yhtä partikkelisuspension millilitraa kohden. Seosta sekoitetaan 15 minuutin ajan huoneen lämmössä. Lisätään seokseen 1,82 mg anti-humaani-CRP-F(ab’)2-vasta-ainettata 10 mg partikkeleiden kuivapainoa kohden 0,9 % NaCl:lla laimennettuna siten, että partikkeleiden pitoisuus suspensiossa on 2 %. Seosta sekoitetaan 20 °C:ssa 15 minuuttia pH:ta tarkkaillen. Sopiva pH-alue on 2,5 - 3. Seokseen lisätään 15 puolet sen tilavuudesta 0,1 M boraattipuskuria pH 9,0. Tarkistetaan pH, jonka pitää olla 9,0. Seosta sekoitetaan 18 tuntia 20 °C:ssa. Reagoimattomat aktiiviset ryhmät partikkeleiden pinnalla blokeerataan 30 mM glysiinipuskurilla, jossa on 6 % BSA (naudan seerumin albumiinia) ja 0,1 % NaN3, pH 8,7 siten, että BSA-pitoisuudeksi tulee 0,2 %. Seosta ravistellaan 16 tuntia 20 °C:ssa. Päällystetyt partikkelit pestään sentrifUgoimalla tai 20 diafiltroimalla 30 mM glysiini, 0,1 % BSA, 0,1 % NaNj, pH 8,7 -pesupuskuriliuoksessa,
. jonka jälkeen ne siirretään 30 mM glysiini, 0,1 % BSA, 5 % sakkaroosi, 0,1 % NaN3, pH
8,7 -säilytyspuskuriliuokseen. Partikkelisuspensiota sonikoidaan, kunnes partikkelikoko on alle 110 nm ja suspensio on monodisperssi. Lopullinen partikkelikonsentraatio säädetään sovellutuskohtaisesti säilytyspuskuriliuoksessa 1 - 4 %. Tyypillinen syntyneellä rea-25 genssilla aikaansaatu reaktiokäyrä on esitetty kuvassa 1.
Esimerkki 2.
30 Reumatekijän eli reumafaktorin (RF) määrittäminen on erittäin tärkeää pyrittäessä diagnosoimaan eri reumasairauksia. Reumatekijä on ihmisen muodostama, useimmiten im- 6 101543 munoglobuliiniluokkaan M kuuluva autovasta-aine, kyseisen ihmisen omaa IgG:tä kohtaan. Reaktio ihmisen omien rakenteiden ja RF:n välillä laukaisee sairauden, joka yleisimmässä muodossaan on nivelreuma. RF:n määrittäminen voidaan suorittaa kuten edellisessäkin esimerkissä, suoraan kokoverinäytteestä tai seerumista. Tässä testissä 5 ovat edelliseen esimerkkiin nähden poikkeavia spesifiset leimapartikkelit, jotka tässä tapauksessa on päällystetty ihmisen immunoglobuliini-G -molekyyleillä. Varsinainen kytkentäreaktio suoritetaan kuten edellisessäkin esimerkissä, mutta anti-humaani-CRP-vasta-aineen (F(ab*^-fragmentti) tilalla kytkentäreaktiossa on humaani-IgG-molekyyli. %. Tyypillinen syntyneellä reagenssilla aikaansaatu reaktiokäyrä on esitetty kuvassa 2.
10
Esimerkki 3.
A-ryhmän streptokokit tuottavat ympäristöönsä useita erilaisia yhdisteitä, jotka voidaan todeta. Eräät näistä ektrasellulaarisista tuotteista ovat toksiineja. Eräs sellainen toksiini on streptolysiini O. A-ryhmän streptokokki-infektio aiheuttaa vasta-aineiden tuoton ih-15 misessä. Vasta-ainetesti, joka useimmiten suoritetaan A-ryhmän streptokokki-infektion toteamiseksi, on ASO-testi (antistreptolysiini-O). Noin 80 % potilaista, joilla on akuutti A-ryhmän streptokokkaalinen nielutulehdus (pharyngiitti), tapahtuu vasta-aineiden kehittyminen streptolysiini-Oita vastaan. Lisäksi ASO-määritystä suositellaan reumakuumeen sekä glomerulonefriitin toteamisen yhteydessä. Edellämainitulla kaksivaiheisella kytken-20 tämenetelmällä voidaan S/VB C-partikkeleiden pintaan kiinnittää streptolysiini-O-:\ antigeeniä (SLO). Täten vasta-aineiden määrittäminen potilasnäytteistä SLO ta vastaan on mahdollista (ASO-testi). Kytkeminen tapahtuu käytännössä samoin kuin aiemmin käsiteltyjen vasta-aineiden tai niiden fragmenttienkin kiinnitys, eli kaksivaiheisesti. Tyypillinen syntyneellä reagenssilla aikaansaatu reaktiokäyrä on esitetty kuvassa 3.
25 30
Claims (15)
1. Menetelmä vasta-ainemolekyylin, sen osan tai antigeenimolekyylin kovalenttiseksi kytkemiseksi kiintofaasiinkaksivaiheisesti, tunnettu siitä, että 5 a) vasta-aine, sen osa tai antigeeni saatetaan anionisen surfaktantin läsnäollessa kosketukseen happamassa liuoksessa olevan kiintofaasin kanssa vasta-aineen, sen osan tai antigeenin kiinnittämiseksi kiintofaasiin, ja b) vaiheessa a) saatuun, vasta-aineen, sen osan tai antigeenin ja kiintofaasin yhdistelmään lisätään emäksistä liuosta, siten että pH muuttuu emäksiseksi, kovalenttisen sidok-10 sen muodostamiseksi vasta-aineen, sen osan tai antigeenin primaaristen tai sekundaaristen aminoryhmien ja kiintofaasin funktionaalisten ryhmien välille.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hapan liuos on suolahappo, edullisesti 5 mM HC1 pH 2-4. 15
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että emäksinen liuos on boraattipuskuri, edullisesti 0,1 M boraattipuskuri pH 9,0.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että anioninen sur-20 faktantti on polyoksi-l,2-etaanidiyyli-a-nonyylifenyyli-o-hydroksi-fosfaattisurfaktantti 0,1 - 0,01 % pitoisuutena.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kiintofaasin ko-valenttisesti sitovat ryhmät ovat klorometyyli-, epoksi-, aldehydi-, tosyyli-, mesyyli-tai n- 25 hydroksisukkinimidiryhmiä tai näiden seoksesta muodostuvia ryhmiä, edullisesti klorome-tyyliryhmiä.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kytkennän hapan vaihe kestää 5-30 minuuttia, edullisesti 15 minuuttia. 30 101543
7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kytkennän emäksinen vaihe ajoittuu heti happaman vaiheen jälkeen ja kestää 1-24 tuntia, edullisesti 18 tuntia.
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kiintofaasi on polymeeripartikkeli, mikrotiitterilevy, koeputki, mittakyvetti, immunokromatografia-materiaali, suodatin, testiliuska, kultakolloidi tai edullisesti polymeeripartikkeli.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polymeeripartik-10 kelit on muodostettu polymeeristä tai kopolymeeristä tai ne ovat rakenteeltaan ydin- kuoripartikkeleita
10. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polymeeripar-tikkeleiden rakennekomponenttina on polystyreeni, polyvinyylinaftaleeni, polyvinyyli- 15 karbatsoli, polyvinyylitolueeni, polyvinyylibutylstyreeni, polyvinyylibentseeni tai poly-vinyylikloridi tai näiden seos.
11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polymeeripar-tikkeleiden rakennekomponenttina on polystyreenin ja polyvinyylikloridin kopolymeeri. 20
12. Patenttivaatimuksen 10 tai 11 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että poly-meeripartikkeleiden koko on 10 nm - 10000 nm, edullisesti 90 nm.
13. Kiintofaasi-biomolekyylikonjugaatti, tunnettu siitä, että se sisältää kiintofaasin, 25 johon patenttivaatimuksen 1 mukaisella menetelmällä on kovalenttisesti kytketty vasta- ainemolekyyli sen osa tai antigeenimolekyyli.
14. Patenttivaatimuksen 13 mukainen kiintofaasi-biomolekyylikonjugaatti, tunnettu siitä, että se sisältää lampaan antihumaani-CRP-vasta-aineen F(ab ^-fragmentin kytketty- 30 nä styreenivinyyli-bentsyylikloridipolymeeripartikkeleihin. 101543
15. Diagnostinen testipakkaus, tunnettu siitä, että se sisältää patenttivaatimuksen 13 tai 14 mukaisen kiintofaasi-biomolekyylikonjugaatin. 5 10 15 20 25 -> « I 30 101543
Priority Applications (13)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI965066A FI101543B (fi) | 1996-12-17 | 1996-12-17 | Biomolekyylien kytkeminen kiintofaasiin |
| PCT/FI1997/000774 WO1998027429A1 (en) | 1996-12-17 | 1997-12-10 | Method of coupling ligands to a solid phase in acidic solution and anionic surfactant |
| DK97947054T DK0946871T3 (da) | 1996-12-17 | 1997-12-10 | Fremgangsmåde til kobling af ligander til en fast fase i sur opløsning og anionisk tensid |
| ES97947054T ES2179376T3 (es) | 1996-12-17 | 1997-12-10 | Metodo para unir ligandos a una fase solida en solucion acida y en presencia de un tensioactivo anionico. |
| AT97947054T ATE221199T1 (de) | 1996-12-17 | 1997-12-10 | Methode zur kupplung von liganden an festphasen in saurer lösung und anionisches tensid |
| DE69714291T DE69714291T2 (de) | 1996-12-17 | 1997-12-10 | Methode zur kupplung von liganden an festphasen in saurer lösung und anionisches tensid |
| IL13045997A IL130459A (en) | 1996-12-17 | 1997-12-10 | Method of coupling ligands to solid phase, solid phase-biomolecule conjugate and diagnostic test kit comprising the same |
| EP97947054A EP0946871B1 (en) | 1996-12-17 | 1997-12-10 | Method of coupling ligands to a solid phase in acidic solution and anionic surfactant |
| US09/331,056 US6358753B1 (en) | 1996-12-17 | 1997-12-10 | Method of coupling ligands to a solid phase in acidic solution and anionic surfactant |
| CA002274956A CA2274956C (en) | 1996-12-17 | 1997-12-10 | Method of coupling ligands to a solid phase in acidic solution and anionic surfactant |
| JP52736098A JP3845118B2 (ja) | 1996-12-17 | 1997-12-10 | 酸性溶液および陰イオン性界面活性剤中リガンドを固相へ結合させる方法 |
| AU52240/98A AU732232B2 (en) | 1996-12-17 | 1997-12-10 | Method of coupling ligands to a solid phase in acidic solution and anionic surfactant |
| NO19992781A NO320586B1 (no) | 1996-12-17 | 1999-06-08 | Fremgangsmate for kovalent kopling av et antistoffmolekyl, et fragment derav eller et antigenmolekyl til en fast fase. |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI965066A FI101543B (fi) | 1996-12-17 | 1996-12-17 | Biomolekyylien kytkeminen kiintofaasiin |
| FI965066 | 1996-12-17 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI965066A0 FI965066A0 (fi) | 1996-12-17 |
| FI101543B1 FI101543B1 (fi) | 1998-07-15 |
| FI101543B true FI101543B (fi) | 1998-07-15 |
Family
ID=8547295
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI965066A FI101543B (fi) | 1996-12-17 | 1996-12-17 | Biomolekyylien kytkeminen kiintofaasiin |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6358753B1 (fi) |
| EP (1) | EP0946871B1 (fi) |
| JP (1) | JP3845118B2 (fi) |
| AT (1) | ATE221199T1 (fi) |
| AU (1) | AU732232B2 (fi) |
| CA (1) | CA2274956C (fi) |
| DE (1) | DE69714291T2 (fi) |
| DK (1) | DK0946871T3 (fi) |
| ES (1) | ES2179376T3 (fi) |
| FI (1) | FI101543B (fi) |
| IL (1) | IL130459A (fi) |
| NO (1) | NO320586B1 (fi) |
| WO (1) | WO1998027429A1 (fi) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4703018A (en) | 1985-02-20 | 1987-10-27 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | High refractive index haloalkyl-functional shell-core polymers and their use in light scattering immunoassays |
| EP0257758B1 (en) | 1986-08-07 | 1993-03-10 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Stable biologically active fluorochemical emulsions |
| US5585278A (en) | 1994-10-27 | 1996-12-17 | Bayer Corporation | Method for coupling antibody to novel latex substrate and its use in immunoassay |
-
1996
- 1996-12-17 FI FI965066A patent/FI101543B/fi not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-12-10 IL IL13045997A patent/IL130459A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-12-10 EP EP97947054A patent/EP0946871B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-10 CA CA002274956A patent/CA2274956C/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-10 JP JP52736098A patent/JP3845118B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-10 ES ES97947054T patent/ES2179376T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-10 AT AT97947054T patent/ATE221199T1/de active
- 1997-12-10 WO PCT/FI1997/000774 patent/WO1998027429A1/en active IP Right Grant
- 1997-12-10 DK DK97947054T patent/DK0946871T3/da active
- 1997-12-10 AU AU52240/98A patent/AU732232B2/en not_active Expired
- 1997-12-10 US US09/331,056 patent/US6358753B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-10 DE DE69714291T patent/DE69714291T2/de not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-06-08 NO NO19992781A patent/NO320586B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO992781D0 (no) | 1999-06-08 |
| FI101543B1 (fi) | 1998-07-15 |
| JP2001509887A (ja) | 2001-07-24 |
| NO320586B1 (no) | 2005-12-27 |
| DE69714291D1 (de) | 2002-08-29 |
| JP3845118B2 (ja) | 2006-11-15 |
| EP0946871A1 (en) | 1999-10-06 |
| WO1998027429A1 (en) | 1998-06-25 |
| AU732232B2 (en) | 2001-04-12 |
| ATE221199T1 (de) | 2002-08-15 |
| CA2274956C (en) | 2007-07-03 |
| CA2274956A1 (en) | 1998-06-25 |
| DK0946871T3 (da) | 2002-11-04 |
| DE69714291T2 (de) | 2003-03-20 |
| IL130459A0 (en) | 2000-06-01 |
| ES2179376T3 (es) | 2003-01-16 |
| NO992781L (no) | 1999-06-08 |
| EP0946871B1 (en) | 2002-07-24 |
| IL130459A (en) | 2002-07-25 |
| US6358753B1 (en) | 2002-03-19 |
| FI965066A0 (fi) | 1996-12-17 |
| AU5224098A (en) | 1998-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU614109B2 (en) | Test method and reagent kit therefor | |
| US4184849A (en) | Mixed agglutination | |
| WO2010082681A1 (ja) | 免疫ラテックス粒子及びその製造方法 | |
| EP2287609B1 (en) | Method for production of insoluble carrier particle, insoluble carrier particle, measurement reagent, sample analysis tool, and immunology turbidimetric method | |
| JPH0664061B2 (ja) | 免疫反応性試薬、その製造法及び免疫反応性種を測定するためのその用途 | |
| US20200209238A1 (en) | Optimizing diagnostics for galactofuranose containing antigens | |
| EP0643307A1 (en) | Visual immunoassay method for the detection of ligands, based in the use of opaque plastic supports | |
| EP1845375A2 (en) | Flow through assay device, diagnostic kit comprising said device and use in the detection of an analyte in a sample | |
| US4828978A (en) | Agglutination reagent and method of preparing same | |
| CN112625145A (zh) | 1,3-β-D葡聚糖衍生物、试剂盒及制备方法及测定1,3-β-D葡聚糖含量的方法 | |
| GB1590525A (en) | Biological analysis | |
| FI101543B (fi) | Biomolekyylien kytkeminen kiintofaasiin | |
| US6890765B2 (en) | Particles for immunoassays and methods for treating the same | |
| CA1234044A (en) | Specific binding assay reagent | |
| JPH08220099A (ja) | 物質の検出試薬及び慢性関節リウマチの検知法 | |
| US20030113794A1 (en) | Method for reducing non-specific aggregation of latex microparticles in the presence of serum or plasma | |
| Singer | The use of polystyrene latexes in medicine | |
| EP0280561B1 (en) | Agglutination reagent and method of preparing same | |
| EP2734844B1 (en) | Method for the detection of an analyte in a sample | |
| KR101311736B1 (ko) | 샌드위치 면역분석 바이오칩 및 이를 사용한 면역분석법 | |
| Boas et al. | A generic protocol to immobilize lipopolysaccharides on microbeads for multiplex analysis | |
| US20030092201A1 (en) | Particles for immunoassays and methods for treating the same | |
| WO1996024845A1 (fr) | Reactif de detection de substances et procede de diagnostic de la polyarthrite rhumatoide | |
| JP2002340902A (ja) | 微生物ないし微生物成分の測定方法およびこれに用いる測定キット |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |