NO305582B1 - FremgangsmÕte for fremstilling av et farmas°ytisk preparat av et protein med t-PA-aktivitet - Google Patents
FremgangsmÕte for fremstilling av et farmas°ytisk preparat av et protein med t-PA-aktivitet Download PDFInfo
- Publication number
- NO305582B1 NO305582B1 NO912775A NO912775A NO305582B1 NO 305582 B1 NO305582 B1 NO 305582B1 NO 912775 A NO912775 A NO 912775A NO 912775 A NO912775 A NO 912775A NO 305582 B1 NO305582 B1 NO 305582B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- activity
- protein
- pharmaceutical preparation
- acid
- preparation according
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 22
- 102100033571 Tissue-type plasminogen activator Human genes 0.000 title claims abstract 8
- 108050006955 Tissue-type plasminogen activator Proteins 0.000 title claims abstract 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims abstract description 14
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 9
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims abstract description 8
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 claims abstract description 4
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract 1
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 46
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 46
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 46
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 2
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 101000801481 Homo sapiens Tissue-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- -1 arginine ion Chemical class 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 102000047823 human PLAT Human genes 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/49—Urokinase; Tissue plasminogen activator
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
- Oscillators With Electromechanical Resonators (AREA)
- Lubricants (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat av et protein med t-PA-aktivitet.
Menneskelig vevs-plasminogen-aktivator (t-PA) har en stor terapeutisk betydning ved oppløsning av blodkoagler, for eksempel ved hjerteinfarkt. t-PA innvirker på blodkoagu-leringskaskaden gjennom aktivering av plasminogen til plasmin. Plasmin løser deretter fibrin, som utgjør hoved-komponenten av proteinmatrisen i koagulert blod.
Naturlig t-PA er sammensatt av flere funksjonelle domener F, G, Kl, K2 og P. Domenet P innbefatter det proteolytisk aktive sentrumet som bevirker spaltning av plasminogen til plasmin. Genteknologisk fremstilling av t-PA eller forskjellige t-PA-muteiner, der noen av domenene F, G, Kl og K2 er deletert i eukaryote og prokaryote celler, er allerede kjent. Derved blir t-PA-derivater fra prokaryoter i forhold til naturlig t-PA syntetisert i ikke-glykosylert form.
Proteiner med t-PA-aktivitet løser seg bare i lavere konsentrasjon i buffere som vanligvis blir anvendt for solubilisering av proteiner som eksempelvis 50 mmol/1 Na-citrat, 50 mmol/1 fosfat eller fysiologisk NaCl-oppløsing. For anvendelse som terapeutisk virkestoff skal derimot proteiner med t-PA-aktivitet foreligge med en høyere enzymatisk aktivitet på minst 0,25 MU/ml, fortrinnsvis 0,25 MU/ml til 10 MU/ml.
Fra EP-A 0 217 379 er det kjent å forhøye oppløseligheten av t-PA gjennom nøytral eller lett alkalisk argininformulering. En ulempe med denne fremgangsmåten er derimot den lave stabiliteten av høykonsentrert t-PA under nøytrale eller lett alkaliske betingelser.
US-patent 4.777.043 beskriver en farmasøytisk sammensetning med menneskelig t-PA, og en farmasøytisk holdbar argininion- inneholdende buffer med en kloridionkonsentrasjon på 0,3 mol/l. EP-A 0.156.169, EP-A 0.303.351 og EP-A 0.297.294 beskriver videre muligheter for å oppløse proteiner med t-PA-aktivitet i buffere gjennom aminosyrer, salter derav, derivater og homologer. Videre kan t-PA stabiliseres gjennom tilsetning av gelatiner ifølge EP-A 0.123.304 gjennom tilsetning av albumin ifølge EP-A 0.112.940, eller gjennom tilsetning av en polysvovelsyreester av et sakkarid eller et sulfatert sukker ifølge EP-A 0.198.321. PCT/US88/04402 beskriver en fremgangsmåte for å forhøye t-PA-oppløseligheten der man anvender et vandig medium med en basisk aminosyre, spesielt arginin, i en konsentrasjon på 0,02 til 0,2 mol/l sammen med en sitronsyregruppe i en konsentrasjon på 0,02 til 0,08 mol/l ved en pH-verdi på 5 til 8.
Disse forskjellige sammensetningene er derimot ikke egnet generelt for alle proteiner med t-PA-egenskaper. Det ble spesielt fastslått at ikke-glykosylert t-PA, ikke-glykosylert t-PA-muteiner og glykosylert t-PA har sterkt forskjellige oppløsningsegenskaper.
Formålet for oppfinnelsen var å utvikle farmasøytiske preparater som inneholder glykosylerte og ikke-glykosylerte t-PA, henholdsvis t-PA-muteiner med en aktivitet på mer enn 0,25 MU/ml, der t-PA skal være stabil i et lengere tidsrom.
Gjenstand for foreliggende oppfinnelse er følgelig en fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat av et protein med t-PA-aktivitet, kjennetegnet ved at man oppløser proteinet i en farmasøytisk tålbar buffer, som minst inneholder en forbindelse fra gruppen sitronsyre, askorbinsyre, 2-oksoglutarsyre, fumarsyre, Tris og EDTA i en konsentrasjon på minst 0,2 mol/l, innstiller pH-verdi på 4,5 til 9, og tilsetter proteinet til man oppnår en enzymatisk aktivitet på minst 0,25 MU/ml.
Foretrukket er en konsentrasjon av ovennevnte stoffer på 0,2 til 1 mol/l, spesielt foretrukket 0,3 til 1 mol/l.
Egnet for en sammensetning ifølge oppfinnelsen er, som nevnt en pH-verdi mellom 4,5 og 9, spesielt foretrukket er en pH-verdi på 6 til 7,5.
Under protein med t-PA-aktivitet i forbindelse med foreliggende oppfinnelse skal forståes ikke-modifisert t-PA fra prokaryote og eukaryote prismer samt alle t-PA-muteinene. Eksempler på t-PA-muteiner er f.eks. beskrevet av Harris (Protein Engineering (1987), 449-458).
Sammensetningen som fremstilles ifølge oppfinnelsen inneholder fortrinnsvis native glukosylerte t-PA, f.eks. fra CH0-celler. Inneholder et preparat ifølge oppfinnelsen et nativt glykosylert t-PA, skal denne enzymatiske aktivitet utgjøre fortrinnsvis minst 1,4 MU/ml.
Enheten U er en enhet for aktiviteten til t-PA ifølge definisjoen til WHO, National Institute for Biological Standards and Control.
Videre foretrukket er en ikke-glykosylert t-PA fra prokaryoter (t-PA pro), som kan oppnås ifølge DE-35.37.708. Under t-PA pro forstår man en t-PA som begynner med aminosyrene -3 (Gly) til +1 (Ser) og som slutter ved 527 (Pro)
(nomenklatur ifølge Harris, Protein Engineering, bind 1
(1987). Inneholder et preparat fremstilt ifølge oppfinnelsen t-PA pro, skal den ensymatiske aktiviteten minst utgjøre 0,25 MU/ml.
Videre foretrukket er også et ikke-glykosylert t-PA-mutein med domenene Kl, K2 og P, som blir betegnet som K1K2P pro (fremstilling ifølge DE 39.233.391.1). K1K2P pro begynner ved amionosyre 85-92 og slutter ved 527 (Pro). Dersom et preparat fremstilt ifølge oppfinnelsen inneholder K1K2P pro, skal den enzymatiske aktiviteten forsøksvis utgjøre minst 0,4 MU/ml.
Videre foretrukket er også et ikke-glykosylert t-PA-mutein med domenene K2 og P, som blir betegnet som K2P pro (fremstilling ifølge EP-A 0.382.174). K2P pro begynner ved aminosyre 174-179 og slutter med 527 (Pro). Likeledes kan K2P pro og også K1K2P pro inneholde deler eller hele aminosyrene -3 (Gly) til +5 (Ile) ifølge Harris, supra. Dersom et preparat fremstilt ifølge oppfinnelsen inneholder K2P pro, skal den enzymatiske aktiviteten utgjøre fortrinnsvis 1,4 MU/ml. Egnet er derimot også alle andre t-PA-varianter fra prokaryoter og eukaryoter.
Nedenfor er en rekke spesielt foretrukne preparater fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse oppført.
En formulering inneholder 300 mmol/1 sitronsyre/NaOH, pH 6. En ytterligere formulering inneholder 300 mmol/1 askorbinsyre, pH 6. Videre inneholder en ytterligere formulering 300 mmol/1 2-oksoglutarsyre, pH 6. Videre inneholder en ytterligere formulering 300 mmol/1 EDTA, pH 6. Videre Inneholder en ytterligere formulering 300 mmol/1 fumarsyre/NaOH, pH 6. Videre inneholder en ytterligere formulering 1 mol/l Tris/HCl, pH 7,2.
De farmasøytiske preparatene fremstilt ifølge oppfinnelsen anvendes fortrinnsvis som injeksjons- og infusjonsopp-løsninger. Dette kan oppstå ved at en allerede sprøyteferdig oppløsning blir stilt til rådighet som inneholder sammensetningen. Det er derimot også mulig å stille til rådighet de farmasøytiske preparatene i form av lyofilisater. Disse blir deretter rekonstituert med i seg selv kjente, for injeksjons-formål egnede, midler eller oppløsninger. Som injeksjons-medium anvendes fortrinnsvis vann som inneholder de i injeksjonsoppløsningene vanlige tilsetningsstoffer som stabiliseringsmiddel, oppløsningsformidler, buffer og isotoniske tilsetningsstoffer, eksempelvis en fysiologisk NaCl-konsentrajson. Slike tilsetningsstoffer er eksempelvis mannit, tartrat- eller sitratbuffer, etanol, kompleksdanner som f.eks. etylendiamintetraeddiksyre og ikke-toksiske salter derav, samt høymolekylære polymerer som flytende polyetylen-oksid for viskositetsregulering. Flytende bærestoffer for injeksjonsoppløsninger må være sterile, og blir fortrinnsvis fylt i ampuller.
Eksemplene nedenfor beskriver den konkrete utførelsen ifølge oppfinnelsen.
EKSEMPEL 1
Innvirkning av forskjellige forbindelser på oppløseligheten av et ikke- glykosylert t- PA- mutein med domenesammensetning K2P.
I dette eksemplet blir oppløseligheten av K2P pro (fremstilling ifølge EP-A 0.382.174) beskrevet i forskjellige bufferoppløsninger. Som det fremgår fra tabell 1, løser K2P pro seg i den oppførte bufferoppløsningen med en tydeligere høyere aktivitet enn 1,4 MU/ml.
Gjennomføring
170 ml renset K2P pro (løst i 0,5 mol/l arginin/fosforsyre pH 7,2) blir konsentrert gjennom ultrafiltrering over en Amicon YM 10-membran. 1 ml av konsentratet blir hver gang dialysert mot den i tabell 1 oppførte bufferen. Etter sentrifugering av proben blir den enzymatiske aktiviteten målt i den klare supernatanten.
Den enzymatiske aktiviteten er angitt som volumaktivitet i MU/ml og som total aktivitet i MU.
Måling av t-PA-aktiviteten kan bestemmes på vanlig måte gjennom spaltning av et kromogent substrat (H. Lill, ZGIMAL 42, (1987), 478-486). Enheten U er en enhet på aktiviteten for t-PA ifølge definisjon av WHO, National Intstitute for Biological Standards and Control.
EKSEMPEL 2
Oppløseligheten til K1K2P pro
Renset K1K2P pro (oppløst i 0,5 mol/l arginin/H3P04) blir gjennom ultrafiltrering konsentrert over en YM 10-membran (Amicon). 0,5 ml av konsentratet (aktivitet: 3,5 MU/ml) blir dialysert mot bufferen oppført I tabell 2. Etter sentrifugering av proben blir den enzymatiske aktiviteten bestemt i den klare supernatanten.
Den enzymatiske aktiviteten er angitt som volumenhet i MU/ml og som totalaktivitet i MU.
Målingen av t-PA-aktivitet kan bestemmes på vanlig måte gjennom spaltning av et kromogent substrat (H. Lill, ZGIMAL 42 (1987), 478-486). Enheten U er en aktivitetsenhet ifølge definisjonen til WHO, National Institute for Biological Standards and Control.
EKSEMPEL 3
Oppløselighet til t- PA pro
Renset t-PA pro (oppløst i 0,5 mol/l arginin/H3P04) blir konsentrert gjennom ultrafiltrering over en YM 10-membran (Amicon). 1 ml av konsentratet (aktivitet: 2,4 MU/ml) blir dialysert mot bufferen oppført i tabell 3. Etter sentrifugering av proben blir den enzymatiske aktiviteten bestemt i supernatanten.
Den enzymatiske aktiviteten er angitt som volumenhet i MU/ml og som totalaktivitet i MU.
Måling av t-PA-aktivitet kan dermed bestemmes på vanlig måte gjennom spaltning av et kromogent substrat (H. Lill, ZGIMAL 42 (1987), 478-486). Enheten U er en aktivitetsenhet ifølge definisjon til WHO, National Institute for Biological Standards and Control.
EKSEMPEL 4
O<pp>løseli<g>het til CHO- t- PA
Renset CHO-t-PA (oppløst i 0,5 mol/l arginin/H3P04) blir konsentrert gjennom ultrafiltrering over en YM 10-membran (Amicon). 1 ml av konsentratet (aktivitet: 6,6MU/ml) blir dialysert mot bufferen oppført i tabell 4. Etter sentrifugering av proben blir den enzymatiske aktiviteten bestemt i den klare supernatanten.
Den enzymatiske aktiviteten er angitt som volumenhet i MU/ml og som totalaktivitet.
Måling av t-PA-aktivitet kan dermed bli bestemt på vanlig måte gjennom spaltning av et kromogent substrat (H. Lill, ZGIMAL 42, (1987), 478-486)- Enheten U er en aktivitetsenhet ifølge definisjon til WHO, National Institute for Biological Standards and Control.
Claims (8)
1.
Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat av et protein med t-PA-aktivitet,karakterisertved at man oppløser proteinet i en farmasøytisk tålbar buffer, som minst inneholder en forbindelse fra gruppen sitronsyre, askorbinsyre, 2-oksoglutarsyre, fumarsyre, Tris og EDTA i en konsentrasjon på minst 0,2 mol/l, innstiller pH-verdi på 4,5 til 9, og tilsetter proteinet til man oppnår en enzymatisk aktivitet på minst 0,25 MU/ml.
2.
Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat ifølge krav 1,karakterisert vedat konsentrasjonen av ovennevnte forbindelse utgjør 0,2 til 1 mol/l.
3.
Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat ifølge ett av kravene 1 og 2,karakterisertved at proteinet med t-PA-aktiviteten har domenesammen-setningen K2P, er ikke-glykosylert og har en enzymatisk aktivitet på minst 1,4 MU/ml.
4 .
Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat ifølge ett av kravene 1 og 2,karakterisertved at proteinet med t-PA-aktiviteten har domenesammen-setningen K1K2P, er ikke-glykosylert og har en enzymatisk aktivitet på minst 0,4 MU/ml.
5 .
Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat ifølge ett av kravene log2,karakterisertved at proteinet med t-PA-aktivitet er et glykosylert t-PA med en enzymatisk aktivitet på minst 1,4 MU/ml.
6.
Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat ifølge et av ovennevnte krav,karakterisertved at det inneholder 300 mmol/1 sitronsyre/ NaOH, pH 6.
7.
Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat ifølge et av ovennevnte krav,karakterisertved at det inneholder 300 mmol/1 askorbinsyre/NaOH, pH 6.
8.
Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat ifølge et av ovennevnte krav,karakterisertved at det inneholder 300 mmol/1 2-oksoglutarsyre/NaOH, pH 6.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3942145A DE3942145A1 (de) | 1989-12-20 | 1989-12-20 | T-pa-solubilisierung |
| PCT/EP1990/002249 WO1991008764A1 (de) | 1989-12-20 | 1990-12-19 | t-PA-Solubilisierung |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO912775L NO912775L (no) | 1991-07-15 |
| NO912775D0 NO912775D0 (no) | 1991-07-15 |
| NO305582B1 true NO305582B1 (no) | 1999-06-28 |
Family
ID=6395928
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO912775A NO305582B1 (no) | 1989-12-20 | 1991-07-15 | FremgangsmÕte for fremstilling av et farmas°ytisk preparat av et protein med t-PA-aktivitet |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0458929B1 (no) |
| JP (1) | JPH0657660B2 (no) |
| KR (1) | KR920700683A (no) |
| AT (1) | ATE102046T1 (no) |
| AU (1) | AU625831B2 (no) |
| CA (1) | CA2046598C (no) |
| DE (2) | DE3942145A1 (no) |
| FI (1) | FI95998C (no) |
| HU (2) | HUT60133A (no) |
| NO (1) | NO305582B1 (no) |
| WO (1) | WO1991008764A1 (no) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3942141A1 (de) * | 1989-12-20 | 1991-06-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | K2p pro-stabilisierung |
| WO2005072803A1 (en) | 2004-01-16 | 2005-08-11 | Biodel, Inc. | Sublingual drug delivery device |
| US20080090753A1 (en) | 2004-03-12 | 2008-04-17 | Biodel, Inc. | Rapid Acting Injectable Insulin Compositions |
| US9060927B2 (en) | 2009-03-03 | 2015-06-23 | Biodel Inc. | Insulin formulations for rapid uptake |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZW14486A1 (en) * | 1985-07-29 | 1986-10-22 | Smithkline Beckman Corp | Pharmaceutical dosage unit |
| US4777043A (en) * | 1985-12-17 | 1988-10-11 | Genentech, Inc. | Stabilized human tissue plasminogen activator compositions |
| GB8612868D0 (en) * | 1986-05-27 | 1986-07-02 | Mars G B Ltd | Beverage packages |
| US4830853A (en) * | 1986-10-20 | 1989-05-16 | Warner-Lambert Company | Drug compositions stabilized against oxidation |
| US4898826A (en) * | 1987-12-10 | 1990-02-06 | Invitron Corporation | Method to solubilize tissue plasminogen activator |
| US4980165A (en) * | 1989-01-27 | 1990-12-25 | Genetics Institute, Inc. | Pharmaceutical formulations of plasminogen activator proteins |
| DE3942142A1 (de) * | 1989-12-20 | 1991-06-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | Stabilisierung von glykosyliertem t-pa |
-
1989
- 1989-12-20 DE DE3942145A patent/DE3942145A1/de not_active Withdrawn
-
1990
- 1990-12-19 DE DE91900785T patent/DE59004814D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 AU AU69149/91A patent/AU625831B2/en not_active Ceased
- 1990-12-19 KR KR1019910700927A patent/KR920700683A/ko not_active Application Discontinuation
- 1990-12-19 WO PCT/EP1990/002249 patent/WO1991008764A1/de active IP Right Grant
- 1990-12-19 CA CA002046598A patent/CA2046598C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 JP JP3501251A patent/JPH0657660B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 HU HU912740A patent/HUT60133A/hu unknown
- 1990-12-19 HU HU912740A patent/HU208630B/hu unknown
-
1991
- 1991-07-12 AT AT91900785T patent/ATE102046T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-07-12 EP EP91900785A patent/EP0458929B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-15 NO NO912775A patent/NO305582B1/no not_active IP Right Cessation
- 1991-08-19 FI FI913907A patent/FI95998C/fi active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI95998C (fi) | 1996-04-25 |
| WO1991008764A1 (de) | 1991-06-27 |
| KR920700683A (ko) | 1992-08-10 |
| HU912740D0 (en) | 1992-01-28 |
| JPH04503680A (ja) | 1992-07-02 |
| CA2046598C (en) | 1997-01-14 |
| NO912775L (no) | 1991-07-15 |
| EP0458929B1 (de) | 1994-03-02 |
| EP0458929A1 (de) | 1991-12-04 |
| AU625831B2 (en) | 1992-07-16 |
| DE59004814D1 (de) | 1994-04-07 |
| HUT60133A (en) | 1992-08-28 |
| DE3942145A1 (de) | 1991-06-27 |
| ATE102046T1 (de) | 1994-03-15 |
| HU208630B (en) | 1993-12-28 |
| AU6914991A (en) | 1991-07-18 |
| NO912775D0 (no) | 1991-07-15 |
| FI913907A0 (fi) | 1991-08-19 |
| CA2046598A1 (en) | 1991-06-21 |
| JPH0657660B2 (ja) | 1994-08-03 |
| FI95998B (fi) | 1996-01-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0876155A1 (en) | Highly concentrated, lyophilized, and liquid factor ix formulations | |
| US20010031721A1 (en) | Highly concentrated, lyophilized, and liquid factor IX formulations | |
| NO171345B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av farmasoeytiske preparater inneholdende vevsplasminogenaktivator | |
| JPH0672105B2 (ja) | 血栓溶解剤及びその製法 | |
| US5747030A (en) | Pharmaceutical preparation containing plasminogen activators | |
| KR890000103A (ko) | 조직 플라스미노겐 활성화제(t-PA) 활성을 갖는 단백질의 고농도 용액의 제조방법, t-PA 활성을 갖는 단백질을 함유하는 용액, 및 인체 및 수의약제에 있어서 용액의 용도 | |
| US5352452A (en) | Stabilized compositions containing non-glysylated human tissue type plasminogen activator derivative K2P pro | |
| US5409699A (en) | Compositions containing glycosylated molecules having human tissue type plasminogen activator enzymatic activity | |
| US5366730A (en) | Stabilized compositions having human tissue type plasminogen activator enzymatic activity | |
| NO305582B1 (no) | FremgangsmÕte for fremstilling av et farmas°ytisk preparat av et protein med t-PA-aktivitet | |
| JPH0273022A (ja) | 組織プラスミノーゲン活性化因子を用いた薬学的製剤 | |
| US5352453A (en) | Compositions containing non-glycosylated human tissue type plasminogen activator | |
| JPH0418032A (ja) | 組織プラスミノーゲンアクチベーター若しくはその誘導体を含有する血栓溶解剤 | |
| NO305584B1 (no) | FremgangsmÕte for fremstilling av et farmas°ytisk preparat av et ikke-glykosylert t-PA-derivat K1K2P pro | |
| JPS62234030A (ja) | ｔＰＡ医薬組成物 | |
| JPH04503525A (ja) | グリコシル化されていないｔ―ＰＡ誘導体Ｋ１Ｋ２Ｐｐｒｏの製薬学的製剤および医薬品ならびに該製剤の製造方法 | |
| JPS6226234A (ja) | 非経口溶液製剤 | |
| JPH1112194A (ja) | 組織プラスミノーゲン活性化因子医薬組成物 | |
| JPS604718B2 (ja) | 安定なウロキナーゼ組成物およびその製造法 | |
| JPS6259221A (ja) | 組織プラスミノ−ゲン活性化因子含有組成物 | |
| JP2001081040A (ja) | 組織プラスミノーゲンアクティベーター含有組成物 | |
| EP1432437A2 (en) | Human tissue urokinase type plasminogen activator formulation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |