NO302387B1 - Fremgangsmåte og pröveanordning for bestemmelse av urea - Google Patents

Fremgangsmåte og pröveanordning for bestemmelse av urea Download PDF

Info

Publication number
NO302387B1
NO302387B1 NO914711A NO914711A NO302387B1 NO 302387 B1 NO302387 B1 NO 302387B1 NO 914711 A NO914711 A NO 914711A NO 914711 A NO914711 A NO 914711A NO 302387 B1 NO302387 B1 NO 302387B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
indicator
buffer
base
urea
reagents
Prior art date
Application number
NO914711A
Other languages
English (en)
Other versions
NO914711L (no
NO914711D0 (no
Inventor
Sinikka Rajamaeki
Anne-Maria Riihimaeki
Original Assignee
Valio Meijerien
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Valio Meijerien filed Critical Valio Meijerien
Publication of NO914711D0 publication Critical patent/NO914711D0/no
Publication of NO914711L publication Critical patent/NO914711L/no
Publication of NO302387B1 publication Critical patent/NO302387B1/no

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/02Food
    • G01N33/04Dairy products
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/58Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving urea or urease

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Description

Oppfinnelsen angår en fremgangsmåte og en prøveanord-ning for bestemmelse av urea i en prøve ved hjelp av urease, base og en indikator. Fremgangsmåten egner seg spesielt godt for hurtig bestemmelse av ureainnholdet i melk.
Hos drøvtyggere, som kuer, påvirkes stoffskiftet i vesentlig grad av vommens og de fremste magenes funksjoner. Hvor bra foret blir utnyttet påvirkes av vommikrobenes tilgang på energi og eggehvitestoffer. Dersom tilgangen på energi og eggehvitestoffer ikke er balansert, blir utnyttelsen av for-proteinene dårligere. Dette kommer til syne blant annet ved en økning i blodets ureanivå etter foringen.
Ifølge flere undersøkelser er det konstatert at mengden urea i melk følger variasjonene i blodets ureainnhold (f.eks. Oltner & Wiktorsson 1983, Livestock Prod.Sci. 10:457, Refsdal 1983, Acta Vet.Scand. 24:518). Variasjoner i urea-mengden i blodet, og også i melken, kom for en stor del av forandringer i foringen (f.eks. Refsdal og Oltner &
Wiktorsson, ovenfor). På grunn av dette har man ved oppfølg-ing av foringen anvendt melkens ureainnhold som en indikator på riktig foring. Som ureaområde for normgivende foring er det fastsatt 20-30 mg urea pr. 100 ml melk (Setåla et al. 1987, Karjatalous 10:52 og 11:54).
Urea kan bestemmes ved en fremgangsmåte hvorved det spaltes til ammoniumkarbonat ved hjelp av urease og hvor ammoniumionene omsettes med fenol og hypokloritt for å oppnå
en blå forbindelse som kan bestemmes spektrofotometrisk (Fawcett & Scott 1960, J. Clin. Path. 13:156). Fremgangsmåten er også tillempet for melk (f.eks. Rajamåki & Rauramaa 1984, Finnish Chemical Letters 2:47-48).
Vil man ha størst mulig nytte av bestemmelsen bør den utføres hos kuene i fjøset som en såkalt "på stedet"-hurtig-test. Ovennevnte fremgangsmåte egner seg ikke for dette, ettersom den bør utføres i et laboratorium.
Urea kan også bestemmes ved at en prøve som inneholder urea omsettes med urease, og den forandring i pH som hydrolyseproduktet får observeres ved hjelp av en passende indikator. Fremgangsmåten anvendes for bestemmelse av ureainnholdet i f.eks. blod, plasma og urin (GB-patentskrift nr.
922 665). Indikatorpinner for melk basert på dette omtales i publikasjonen Tierårtzl. Prax. 1985, 13:559.
Indikatorpinnene har generelt den ulempe at de bare tillater analyse av en svært liten prøvemengde, hvorved det oppnådde resultat ofte blir upålitelig. Resultatet varierer på grunn av den lille prøvemengden. Resultatet påvirkes også av utførelsen ved pipettering av prøve på pinnen, eller ved dyp-ping av pinnen i løsningen som skal undersøkes. Dette problem forverres når indikatorpinnen dyppes i melk fordi melken i seg selv vil ødelegge en nøyaktig tolkning av fargeforandringen på pinnen. For å eliminere melkens ødeleggende innvirkning har man utviklet pinner hvor en reaksjonssone som kommer i kontakt med melken er plassert inntil en indikatorsone (Fl patent-søknad nr. 891920). Reaksjonssonen inneholder urease, base, glukose og tensid. Pinnen holdes i et rør, som er lukket bare i den ene ende, inntil ammoniakk frigjøres fra reaksjonssonen og diffunderer inn i indikatorsonen, hvilket tar lang tid. Pinnene avleses fortrinnsvis først etter to timer.
Man har nå funnet en fremgangsmåte for bestemmelse av urea som er mer pålitelig enn pinner som dyppes ned i melk og som er hurtigere enn pinner med en indikatorsone plassert inntil den nedsenkbare reaksjonssone og som under reaksjonstiden holdes i et rør som er lukket i den ene ende.
Med oppfinnelsen tilveiebringes således en fremgangsmåte for bestemmelse av ureainnhold i en prøve, spesielt i melk, ved hjelp av urease, base og en indikator. Fremgangsmåten er kjennetegnet ved at i det minste omsetningen med basen utføres i et lukket rom hvor et indikatorsystem er plassert slik at det ikke kommer i kontakt med de øvrige reagenser.
Med oppfinnelsen tilveiebringes også en prøveanordning for bestemmelse av urea ved hjelp av urease, base og en indikator, kjennetegnet ved at den omfatter et lukket rom hvor i det minste omsetningen med basen finner sted og hvor et indikatorsystem er plassert slik at det ikke kommer i kontakt med de øvrige reagenser .
Ved fremgangsmåten omsettes prøven med urease og base, og i det minste utføres omsetningen med basen i et lukket rom hvor indikatorsystemet er plassert slik at det ikke berører de øvrige reagenser. Prøven kan først omsettes med urease og så først deretter med base, hvorved i det minste den siste omsetning utføres i det nevnte lukkede rom. Dersom prøven der-imot omsettes samtidig med urease og base, utføres hele omsetningen i et lukket rom. Prøveanordningen omfatter et lukket rom hvor i det minste omsetningen med basen utføres og hvor indikatorsystemet er plassert slik at det ikke kommer i kontakt med de øvrige reagenser.
Reaksjonsreagensene omfatter urease og base. Ureasen spalter prøven som skal undersøkes til ammoniumsalter, og basen frigjør ammoniakk fra saltene. Ammoniakk absorberes i indikatorsystemet og frembringer en fargeforandring i pH-indikatoren i løpet av en gitt tid.
Indikatorsystemet omfatter en eller flere pH-indikatorer. Vanligvis løses indikatoren i en passende buffer. Man kan også anvende flere slike buffer/indikatorblandinger som forandrer farge ved ulike pH-verdier. Bestemmelse av melkens ureainnhold utføres fortrinnsvis i form av en såkalt dobbelttest. Fortrinnsvis er den aktuelle dobbelttestens buffer/indikatorblandinger slik at ureainnhold < 20 mg/100 ml ikke frembringer noen fargeforandring i noen av buffer/- indikatorblandingene, men ved et innhold av 20-30 mg/100 ml reagerer den ene buffer/indikatorblanding, og når urea finnes i en mengde på over 30 mg/100 ml reagerer begge buffer/- indikatorblandingene.
Fortrinnsvis inneholder hver buffer/indikatorblanding fosfatbuffer, men av forskjellig konsentrasjon. Fortrinnsvis inneholder fosfatbufferene natriumsalt av fenolrødt og natriumsalt av bromtymolblått, f.eks. med vektforhold 1:1. Den ene fosfatbuffer er fortrinnsvis en 0,00025M og den andre en 0,00230M natriumdihydrogenfosfatbuffer.
Indikatorsystemet kan være i fast eller flytende form. Et indikatorsystem i flytende form kan skilles fra de øvrige reagenser med en folie som slipper gjennom gass. Folien kan f.eks. være teflonrørtape eller teflonfilterfolie med en porestørrelse på 0,5 um. Indikatorsystemet kan fortrinnsvis bringes over i fast form ved hjelp av alginat og/eller ved at det absorberes i et i filtrerpapir som får tørke.
Indikatorsystemet plasseres fortrinnsvis i lokket på et lukket kar. Lokket kan være todelt slik at to ulike buffer/indikatorblandinger kan plasseres i dette. Urease, prøve og base plasseres på bunnen av karet og lokket lukkes tett til. Etter en gitt tid avleses indikatorsystemets farge. Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen egner seg spesielt godt for bestemmelse av ureainnholdet i melk, men også andre prøver, slik som urinprøver, kan være aktuelle.
Oppfinnelsen belyses ved hjelp av følgende eksempler.
Eksempel 1
Buffer/indikatorblanding I, som inneholder 25 mg natriumsalt av fenolrødt, 25 mg natriumsalt av bromtymolblått og 3 g alginat pr. 100 ml 0,00025M natriumdihydrogenfosfat, trekkes opp i et filtrerpapir. Buffer/indikatorblanding II,
som er lik I med unntak av at natriumdihydrogenfosfåtets konsentrasjon er 0,00230M, trekkes opp i et annet filtrerpapir. Papirene tørkes ved 90 °C i 60 min og plasseres deretter i et todelt lokk på et 10 ml kar med tettsluttende lokk, slik at papirene atskilles av en mellomvegg i lokket. Urease (ca. 60-250 U) i fast eller flytende form plasseres på bunnen av karet. I karet tilsettes 1 ml melk og etter 2,5 min. tilsettes 0,5-1 ml 0,1M NaOH, hvoretter lokket legges på. Etter 2,5 min. avleses i lokket på testkaret de fargene som er dannet av buffer/- indikatorblandingene I og II. Resultatene sammenlignes med et fargekart og tolkes i henhold til følgende:
Eksempel 2
Ureainnholdet i 118 melkeprøver ble bestemt etter fremgangsmåten ifølge eksempel 1 og ved en spektrofotometrisk referanseutførelse (Fawcett & Scott 1960, J. Clin. Path. 13:156). Resultatene vises i tabell 1.
Med fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen ble 86,4 % av prøvene klassifisert i rett klasse sammenlignet med referanse-utførelsen. I tabell 2 vises en tilsvarende prøvefordeling hvor det er tatt hensyn til det indre avvik (± 5 %) i referanseutførelsen. Derigjennom ble andelen rett klassifi-serte prøver 94,1 %.
Eksempel 3
Ureainnholdet i 64 melkeprøver ble bestemt ved hjelp av testpinner av type Azostix" (Rierårzl. Prax. 1985, 13:559) beregnet for gårdsbruk, ovennevnte referanseutførelse, samt fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen. Resultatene vises tabel-lene 3 og 4.
Ved hjelp av indikatorpinnene ble 82,8 % av prøvene (53/64) plassert i riktig klasse.
Med fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen ble 89,1 % av prøvene (57/64) plassert i riktig klasse.
Eksempel 4
I et 4 ml kar ble det tilsatt 0,5 ml av den i eksempel 1 nevnte buffer/indikatorblanding I i flytende form, dvs. uten alginat. Karets munning ble dekket med en teflon-folie med en porestørrelse på 0,5 um. I et annet tilsvarende kar ble det tilsatt 0,2 ml melk og ca. 15 U urease. Etter 2,5 min. ble det tilført 200^ul 0,IM NaOH. Karet med buffer/ indikatorblandingen og karet med prøven og de øvrige reagenser ble forenet ved at munningene ble stilt mot hverandre og karene tapet sammen slik at det ble oppnådd et helt lukket rom hvor en gassgjennomtrengelig folie skilte buffer/indikatorblandingen fra de øvrige reagenser. De således forenede kar fikk stå i kontakt i ett min, hvoretter indikatorblandingens farge ble avlest. En parallell bestemmelse ble utført med den i eksempel 1 nevnte buffer/indikatorblanding II i flytende form. Resultatet ble tolket på samme måte som i eksempel 1. Ureainnholdet for 24 melkeprøver ble bestemt. 87,5 % av prøvene ble plassert i riktig klasse. Resultatene er vist i tabell 5.

Claims (10)

1. Fremgangsmåte for bestemmelse av ureainnhold i en prøve, spesielt i melk, ved hjelp av urease, base og en indikator, karakterisert vedat i det minste omsetningen med basen utføres i et lukket rom hvor et indikatorsystem er plassert slik at det ikke kommer i kontakt med de øvrige reagenser.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,karakterisert vedat i det minste omsetningen med basen utføres i lukket kar hvor indikatorsystemet er plassert i karets lokk.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1,karakterisert vedat bestemmelsen utføres som en dobbelttest ved at det anvendes et indikatorsystem som omfatter to buffer/indikatorblandinger som forandrer farge ved ulike pH-verdier.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 3,karakterisert vedat den ene buffer/- indikatorblanding forandrer farge når ureainnholdet er minst 20 mg/100 ml og den andre buffer/indikatorblanding forandrer farge når ureainnholdet overstiger 30 mg/100 ml.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 4,karakterisert vedat buffer/indikatorbland-ingene inneholder to fosfatbuffere av forskjellig konsentrasjon.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 5,karakterisert vedat fosfatbufferene inneholder natriumsalt av fenolrødt og natriumsalt av bromtymolblått i vektforholdet 1:1.
7. Prøveanordning for bestemmelse av urea ved hjelp av urease, base og en indikator, karakterisert vedat den omfatter et lukket rom hvor i det minste omsetningen med basen finner sted og hvor et indikatorsystem er plassert slik at det ikke kommer i kontakt med de øvrige reagenser.
8. Prøveanordning ifølge krav 7,karakterisert vedat indikatorsystemet er i fast form.
9. Prøveanordning ifølge krav 7,karakterisert vedat den omfatter et gjen-lukkbart kammer med indikatorsystemet plassert i lokket og de øvrige reagenser på bunnen.
10. Prøveanordning ifølge krav 7,karakterisert vedat den omfatter de reagenser ifølge krav 3-6 som er nødvendige for å utføre en dobbelttest.
NO914711A 1990-12-03 1991-11-29 Fremgangsmåte og pröveanordning for bestemmelse av urea NO302387B1 (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI905949A FI88310C (fi) 1990-12-03 1990-12-03 Foerfarande och medel foer bestaemning av urea

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO914711D0 NO914711D0 (no) 1991-11-29
NO914711L NO914711L (no) 1992-06-04
NO302387B1 true NO302387B1 (no) 1998-02-23

Family

ID=8531506

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO914711A NO302387B1 (no) 1990-12-03 1991-11-29 Fremgangsmåte og pröveanordning for bestemmelse av urea

Country Status (7)

Country Link
DK (1) DK195091A (no)
EE (1) EE02945B1 (no)
FI (1) FI88310C (no)
GB (1) GB2250590A (no)
IE (1) IE913920A1 (no)
NO (1) NO302387B1 (no)
SE (1) SE512818C2 (no)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2731276A1 (fr) * 1995-03-03 1996-09-06 D Aquitaine Comp Chimique Bandelette, ensemble et procede de mesure pour estimer le niveau d'uree dans le lait, utilisation pour les ruminants
ATE487145T1 (de) * 2005-07-26 2010-11-15 Raudszus Electronic Gmbh Verfahren und vorrichtung zur probennahme und unmittelbaren analyse fliessfähiger sammelgutmengen, insbesondere von milchlieferungen
CN102539421A (zh) * 2010-12-21 2012-07-04 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司 一种乳中尿素定性检测方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2711634A1 (de) * 1977-03-17 1978-09-21 Riedel De Haen Ag Testvorrichtung zur bestimmung von harnstoff in fluessigkeiten
EP0339331A3 (de) * 1988-04-29 1990-09-19 ARZNEIMITTELWERK DRESDEN GmbH Teststreifen zur Bestimmung von Harnstoff und seine Anwendung

Also Published As

Publication number Publication date
GB2250590A (en) 1992-06-10
DK195091D0 (da) 1991-12-02
FI905949A0 (fi) 1990-12-03
FI88310C (fi) 1993-04-26
FI905949A (fi) 1992-06-04
SE512818C2 (sv) 2000-05-22
GB9125040D0 (en) 1992-01-22
SE9103370L (sv) 1992-06-04
NO914711L (no) 1992-06-04
SE9103370D0 (sv) 1991-11-14
FI88310B (fi) 1993-01-15
IE913920A1 (en) 1992-06-03
DK195091A (da) 1992-06-04
EE02945B1 (et) 1996-10-15
NO914711D0 (no) 1991-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5925026B2 (ja) クレアチニン測定用乾式試験片及びクレアチニン測定法
CN105388146B (zh) 一种同时检测尿液中钠、肌酐和微量白蛋白的试剂盒
US5783399A (en) Chemiluminescent assay methods and devices for detecting target analytes
DK156730B (da) Testkomposition og -materiale til bestemmelse af tilstedevaerelsen af glucose i en flydende proeve samt fremgangsmaade til semikvantitativ bestemmelse af glucose i urin
FI801025A (fi) Foerfarande och reagens foer enzymatisk bestaemning av enzymsubstrat
CN108070635B (zh) 一种粪便乳糖检测试剂盒及其应用和检测方法
CN103175965A (zh) 一种大便隐血检测试剂盒及制备方法
CN101315368A (zh) 一种用于现场检测的elisa试剂盒
FR2625566A1 (fr) Melange de substrats chromogenes stable de phosphate d&#39;indoxyle et de sel de tetrazolium, son procede de preparation et son application dans les essais biologiques et diagnostiques
JPH0425000B2 (no)
KR900700883A (ko) 식육의 질을 평가하기 위한 스카톨의 검출방법
NO302387B1 (no) Fremgangsmåte og pröveanordning for bestemmelse av urea
US3406016A (en) Means for detecting the fertile period
US3087794A (en) Chemical test for differentiating leucocytes from erythrocytes
NO742322L (no)
GB2127962A (en) Hygiene-testing food-contacting surface
JPS6047695A (ja) 魚介類の鮮度判定恒数k値の簡易測定法
CA2306554A1 (en) Uric acid assay device with stabilized uricase reagent composition
CN101216490B (zh) 干化学法torch检测试剂盒及其制造方法
DK153334B (da) Diagnostiske praeparater
EP2351849A1 (en) Reagent kit for measuring freshness
US3778384A (en) Diagnostic composition for the quantitative determination of glucose
GB1582224A (en) Apparatus for the preparation of a fluid for examination in optical analytic instruments
EP0348144B1 (en) Method for treating mucus-containing immunoassay samples
NO140691B (no) Fremgangsmaate for kvalitativt og kvantativt aa bestemme katalase i melk og andre vaesker, fortrinnsvis av biologisk opprinnelse

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees