NO179181B - Tredimensjonal stromacellekultur, anvendelse av stromacellekulturen for dyrking av ulike celletyper in vitro, samt anvendelse av cellekulturen for in vitro testing av cytotoksisk eller medikamentell virkning - Google Patents
Tredimensjonal stromacellekultur, anvendelse av stromacellekulturen for dyrking av ulike celletyper in vitro, samt anvendelse av cellekulturen for in vitro testing av cytotoksisk eller medikamentell virkning Download PDFInfo
- Publication number
- NO179181B NO179181B NO875286A NO875286A NO179181B NO 179181 B NO179181 B NO 179181B NO 875286 A NO875286 A NO 875286A NO 875286 A NO875286 A NO 875286A NO 179181 B NO179181 B NO 179181B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- cells
- cell culture
- stromal
- dimensional
- stromal cell
- Prior art date
Links
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 80
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims abstract description 66
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 title claims description 101
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 21
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 title claims description 5
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 title claims description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 5
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 16
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 claims abstract description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 claims abstract description 6
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 33
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 11
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 10
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 10
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 10
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 8
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 6
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 claims 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims 3
- -1 polypropylene Polymers 0.000 claims 3
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 claims 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 claims 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 claims 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims 2
- 210000003668 pericyte Anatomy 0.000 claims 2
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 claims 2
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 claims 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 claims 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 claims 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims 1
- 239000002729 catgut Substances 0.000 claims 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 claims 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 claims 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 claims 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 claims 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 claims 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims 1
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims 1
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 claims 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 37
- 230000010076 replication Effects 0.000 abstract description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 abstract 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 10
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 6
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 6
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 5
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 5
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 4
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 3
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 3
- 239000003570 air Substances 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 3
- VWQWXZAWFPZJDA-CGVGKPPMSA-N hydrocortisone succinate Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)COC(=O)CCC(O)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VWQWXZAWFPZJDA-CGVGKPPMSA-N 0.000 description 3
- 229950006240 hydrocortisone succinate Drugs 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000002629 repopulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 206010051779 Bone marrow toxicity Diseases 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 206010008805 Chromosomal abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 102100033167 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101000980898 Homo sapiens Cell division cycle-associated protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 238000011256 aggressive treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012080 ambient air Substances 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003005 anticarcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 231100000366 bone marrow toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 1
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000788 granulopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000003547 hepatic macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 102000044493 human CDCA4 Human genes 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008722 morphological abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000037983 regulatory factors Human genes 0.000 description 1
- 108091008025 regulatory factors Proteins 0.000 description 1
- 210000003660 reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0697—Artificial constructs associating cells of different lineages, e.g. tissue equivalents
- C12N5/0698—Skin equivalents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B90/00—Instruments, implements or accessories specially adapted for surgery or diagnosis and not covered by any of the groups A61B1/00 - A61B50/00, e.g. for luxation treatment or for protecting wound edges
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/60—Materials for use in artificial skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B10/00—Other methods or instruments for diagnosis, e.g. instruments for taking a cell sample, for biopsy, for vaccination diagnosis; Sex determination; Ovulation-period determination; Throat striking implements
- A61B10/02—Instruments for taking cell samples or for biopsy
- A61B10/0233—Pointed or sharp biopsy instruments
- A61B10/025—Pointed or sharp biopsy instruments for taking bone, bone marrow or cartilage samples
- A61B2010/0258—Marrow samples
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/09—Coculture with; Conditioned medium produced by epidermal cells, skin cells, oral mucosa cells
- C12N2502/094—Coculture with; Conditioned medium produced by epidermal cells, skin cells, oral mucosa cells keratinocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/13—Coculture with; Conditioned medium produced by connective tissue cells; generic mesenchyme cells, e.g. so-called "embryonic fibroblasts"
- C12N2502/1323—Adult fibroblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/13—Coculture with; Conditioned medium produced by connective tissue cells; generic mesenchyme cells, e.g. so-called "embryonic fibroblasts"
- C12N2502/1394—Bone marrow stromal cells; whole marrow
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
- C12N2533/40—Polyhydroxyacids, e.g. polymers of glycolic or lactic acid (PGA, PLA, PLGA); Bioresorbable polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/70—Polysaccharides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Surgery (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en tredimensjonal stromacellekultur, anvendelse av stromacellekulturen for dyrking av ulike celletyper in vitro, samt anvendelse av cellekulturen for in virto testing av cytotoksisk eller medikamentell virkning.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en tredimensjonal stromacellekultur for anvendelse in vitro, kjennetegnet ved at den omfatter stromaceller og bindevevsproteiner som naturlig blir utskilt av stromacellene som er koblet til, og vesentlig omhyller, et nettverk bestående av et biokompatibelt, ikke-levende materiale formet i en tredimensjonal struktur med interstitielle områder koblet sammen av stromaceller.
Den tredimensjonale stromacellekulturen ifølge oppfinnelsen har, som det vil fremgå nedenfor, mange anvendelser. En viktig anvendelse er anvendelsen i forbindelse med benmargceller, og oppfinnelsen vil i det følgende bli beskrevet med dette som eksempel.
Fremgangsmåter for transplantering av benmarg er kjente. Generelt utføres benmargstransplantasjoner på pasienter som lider av en sykdom, så som kreft, som ødelegger friske benmargsceller eller undertrykker deres funksjonsevne. I tillegg påvirker behandlinger, så som kjemoterapi eller strålingsterapi, benmargen i negativ retning, selv i tilfeller hvor benmargen ikke er direkte angrepet av sykdommen som behandles. Kjente fremgangsmåter for benmargstransplantasjoner er beheftet med en rekke ulemper. En hovedårsak til avvisning av benmargstransplantater er pode-versus-vert reaksjonen som finner sted når benmargen, som er
•fjernet fra en person, transplanteres inn i en annen person. En annen hovedårsak til mislykkede benmargstransplantasjoner er vasooklusiv sykdom som skyldes dannelsen av margemboli. Fremgangsmåter for fjernelse og lagring av en persons marg før kombinert kjemoterapi og stråling og gjeninnføring av
denne margen finnes i dag (dvs. autolog transplantasjon). Imidlertid lider pasienten ofte av gjeninntreden av sykdommen selv om innpodningen finner sted fordi margen allerede var syk når den først ble fjernet.
Ytterligere formål og fordeler ved foreliggende oppfinnelse vil fremgå for fagmannen i den etterfølgende detaljerte beskrivelsen.
Oppfinnelsen kan bedre forstås under henvisning til den eneste figuren i de følgende tegningene som viser et sveip-elektronmikroskopbilde ved en forstørrelse på 1,65 tusen ganger som viser et nettverk med benmargsstromaceller som vokser på dette.
Foreliggende oppfinnelse vedrører videre anvendelse av en tredimensjonal stromacellekultur, som omtalt ovenfor, for dyrking av parenchymalceller in vitro, hvorved man (a) inokulerer utgangsceller på en stromacellekultur fremstilt in vitro, omfattende stromaceller og bindevevsproteiner naturlig utskilt av stromacellene koblet til, og som vesentlig omfatter, et nettverk bestående av et biokompatibelt, ikke-levende materiale formet til en tredimensjonal struktur med
interstitielle områder koblet av stromaceller; og
(b) inkuberer den inokulerte stromacellekulturen i et naeringsmedium, slik at de inokulerte cellene prolifererer i kultur.
Videre omfatter oppfinnelsen anvendelse av en tredimensjonal stromacellekultur, som omtalt ovenfor, for dyrking av benmargceller in vitro, hvorved man
(a) inokulere hematopoietiske celler på en stromacelle-kul tur fremstilt in vitro, omfattende stromaceller og bindevevsproteiner naturlig utskilt av stromacellene koblet til, og som vesentlig omfatter, et nettverk bestående av et biokompatibelt, ikke-levende
materiale formet til en tredimensjonal struktur med
interstitielle områder koblet av stromaceller; og
(b) inkuberer den inokulerte stromacellekulturen i et næringsmedium, slik at de inokulerte cellene prolifererer i kultur.
Videre omfatter oppfinnelsen anvendelsen av en tredimensjonal stromacellekultur, som omtalt ovenfor, for dyrking av hudceller in vitro, hvorved man
(a) inokulerer melanocytter og keratinocytter på en stromacellekultur fremstilt in vitro, omfattende stromaceller og bindevevsproteiner naturlig utskilt av stromacellene koblet til og som vesentlig omfatter et nettverk bestående av et biokompatibelt, ikke-levende materiale formet til en tredimensjonal struktur med interstitielle områder koblet av
stromacellene; og
(b) inkuberer den inokulerte stromacellekulturen i et næringsmedium, slik at de inokulerte cellene prolifererer i kultur.
Videre omfatter oppfinnelsen anvendelsen av en tredimensjonal stromacellekultur, som omtalt ovenfor, for å dyrke leverceller in vitro, hvorved man
(a) inokulerer hepatocytter på en stromacellekultur fremstilt in vitro, omfattende stromaceller og bindevevsproteiner som naturlig blir utskilt av stromacellene koblet til, og som vesentlig omfatter, et nettverk bestående av et biokompatibelt, ikke-levende materiale formet i en tredimensjonal struktur
med interstitielle områder koblet av stromaceller; og (b) inkuberer den inokulerte tredimensjonale stromacellekulturen i et næringsmedium, slik at de inokulerte cellene prolifererer i kultur.
Endelig omfatter oppfinnelsen anvendelse av en tredimensjonal stromacellekultur, som omtalt ovenfor, for in vitro testing av cytotoksisk eller medikamentell virkning, hvorved parenchymalceller i et første trinn dyrkes på den tredimensjonale stromacellekulturen, denne eksponeres deretter mot forsøksforbindelsen eller medikamentet, og endelig måles virkningen av forsøksforbindelsen eller medikamentet ved å måle en forandring i den tredimensjonale cellekulturen.
Den tredimensjonale stromacellekulturen kan som nevnt anvendes for cytotoksisitetsundersøkelse av farmasøytiske preparater, næringsmiddeladditiver, helseprodukter, anti-neoplastiske midler og karcinogener. En proporsjonal, nedskalert dose av midlet som skal undersøkes tilsettes til in vitro systemet ifølge oppfinnelsen, og virkningen på forskjellige celletyper noteres. Andre celletyper enn benmargceller anvendes for å undersøke et spesielt middel når dette er nødvendig.
Som det fremgår beskriver oppfinnelsen en tredimensjonal bærer for dyrking av celler i kultur. Veksten av celler i nærvær av denne bæreren kan videre forbedres ved å tilsette proteiner, glykoproteiner, glykosaminglykaner, en cellulær matriks og andre materialer til bæreren selv, eller ved å belegge bæreren med disse materialene. Anvendelsen av en tredimensjonal bærer tillater cellene å vokse i flere lag, derved skapes det tredimensjonale cellekultursystemet ifølge foreliggende oppfinnelse. Det tredimensjonale bærersystemet kan benyttes for å skape tredimensjonale cellekultursystemer for benmarg, hud, lever, og mange andre celletyper og vev.
Den tredimensjonale bæreren foreligger fortrinnsvis i form av et nett. Preparerte bærere kan preserveres for senere anvendelse i et tredimensjonalt, fysiologisk cellekultursystem. I en utførelse for dyrking av hematopoetiske benmargsceller prepareres nettet ved å dyrke et lag av stroma-margceller på nettet inntil stromamargcellene når subsammen-flytning.
Under henvisning til den eneste figuren i tegningene, er det vist et nettverk 10 som er nyttig ved foreliggende oppfinnelse. Nettverket 10 inneholder varptråder 12 og vefttråder 13. Som vist i figuren, fremgår det at stromaceller 14 kan dyrkes på trådene 12, 13.
Replikering og kryopreservering av benmarg for anvendelse ved benmargstransplantas. i oner
Foreliggende oppfinnelse kan anvendes i forbindelse med en fremgangsmåte for behandling av sykdommer eller tilstander som ødelegger friske benmargceller eller undertrykker deres funksjonsevne. Fremgangsmåten er effektiv spesielt ved behandling av hematogoliske ondartede sykdommer og andre neoplasier som danner metastaser i benmargen. Fremgangsmåten er også effektiv ved behandling av pasienter hvis benmarg er negativt påvirket av kjemoterapi og/eller strålingsterapi nødvendiggjort av en sykdom som ikke direkte påvirker benmargen. Fremgangsmåten i forbindelse med hvilken foreliggende oppfinnelse kan anvendes tilveiebringer videre en metode for fjernelse og preservering av benmargceller fra en frisk pasient og videre replikering og gjeninnføring av benmargcellene dersom pasienten utvikler en sykdom som enten ødelegger benmargen direkte eller hvis behandling negativt påvirker margen.
Ved den ovenfor omtalte fremgangsmåten benyttes det en liten mengde (10-15 cm<3> benmarg/perifer blodsuspensjon) utvunnet fra hoftekammen hos en donor. Resultatene av prosessen er optimale dersom: 1. Individet er under 40 år gammelt ved det tidspunktet når margen kryopreserveres, 2. pasienten er sykdomsfri. Denne fremgangsmåten kan vise seg fordelaktig for visse pasienter med metastatiske sykdommer eller hematologiske ondartede sykdommer dersom "spyling" av ondartede celler ved hjelp av fysikalske eller kjemoterapeutiske fremgangsmåter kan utføres før kultivering. I dag er disse fremgangsmåtene mest effek-tive når lave antall celler benyttes. Et faktum som kan være
viktig ved den følgende fremgangsmåten. Fremgangsmåter for oppsuging av benmarg fra en donor er velkjente innen teknikken. Eksempler på apparatur og fremgangsmåte for utsugning av benmarg fra en donor finnes i US-patentene 4.481.946 og 4.486.188.
Benmargen som er fjernet fra donoren replikeres eller oppbevares for replikering på et senere tidspunkt. Dersom benmargen skal oppbevares, kan benmargen nedfryses trinnvis ved anvendelse av datamaskinstyrt kryoteknisk utstyr. Fersk benmarg/blodsuspensjon utporsjoneres i like store volumer i sterile Nunc-rør og plasseres i et begerglass av nedknust is inntil kryopreserveringskammeret er brakt til en tilsvarende temperatur (4°C). Like før prøveinnføringen i kammeret, tilsettes en oppløsning til hvert Nunc-rør ved anvendelse av steril teknikk slik at kryo-beskyttelsesmidlene, dimetylsulfoksyd og glycerol, vil foreligge i endelige konsentrasjoner på henholdsvis 7$ og 5$. Nedfrysningsprogrammet initieres straks etter innføring av prøven. Nedfrysningsprogram nr. 1 på "CryoMed Model nr. 1010"-kontrollenheten benyttes.
Ved anvendelse av denne teknikken overskrider den cellulære levedyktigheten etter nedfrysning og rask opptining i et vannbad ved 80 "C 90% via den den "tryfanblå-utelukkelsesfrem-gangsmåten". I tillegg kan mer enn 80% av den opprinnelige kolonidannende enhetskulturen (CFU-C) gjenvinnes etter frysing. Eksempler på systemer for nedfrysning av benmarg og biologiske stoffer i • overensstemmelse med en på forhånd beregnet temperatur- og tidskurve er beskrevet i "US-patentene nr. 4.107.937 og 4.117.881. Fortrinnsvis lagres benmargcellene i den flytende fasen av flytende nitrogen ved en temperatur på -196°C, ved hvilken temperatur all cellulær metabolisk aktivitet har opphørt.
Etter opptining gjeninnføres benmargcellene i et individ eller replikeres og gjeninnføres deretter.
En fremgangsmåte som omtalt ovenfor har flere fordeler for en pasient som trenger en benmargstransplantasjon. Dersom pasienten får sine egne celler, betegnes dette en autolog transplantasjon. En slik transplantasjon har liten sannsyn-lighet for avvisning. Autologe transplantasjoner eliminerer en hovedårsak for avvisning av benmargstransplantater, dvs. pode-versus-vert-reaksjonen. Videre kan hematopoetiske celler når de dyrkes i kultur, lett separeres ved hjelp av fysikalsk manipulering og/eller enzymbehandling. Dette reduserer faren for vasookklusiv sykdom som skyldes margembolier. I tillegg tillater denne fremgangsmåten mer aggresiv behandling av neoplastiske tilstander med kjermoterapeutiske midler og stråling. I dag er omfanget av disse behandlingene ofte begrenset av benmargstoksisiteten.
In vitro benmargsreplikeringssystem
Foreliggende oppfinnelse omfatter replikering av benmargceller in vitro, i et system sammenlignbart med fysiologiske betingelser. Videre innbefatter benmargcellene som er replikert i dette systemet alle cellene som er tilstede i normal benmarg, under antagelse av at alle celletyper var tilstede i det opprinnelige benmargsinokulatet.
Benmargcellene blir, enten de oppnås direkte fra donoren eller hentes fra kryopreserveringslagring, først separert fra reticulum ved hjelp av fysikalske fremgangsmåter. Benmargcellene dyrkes deretter i kokulturer med stromale komponenter av normal marg, som innbefatter fibroblaster, makrofager, retikulærceller og adipocyter, på en tredimensjonal bærer. Faktorer avledet fra medier av milt og/eller levermakrofag-kulturer eller fra underserier av stromale celler kan også tilsettes til kulturen.
Selv om margceller er i stand til begrenset vekst når de dyrkes alene, er langvarig vekst av disse kulturene mulig bare dersom stromale celler eller deres utskillelsesprodukter er tilstede. Se "Long-Term Bone Marrow Culture", D.G. Wright &J.S. Greenberger, redaktører, A.R. Liss, New York, (1984).
Foreliggende oppfinnelse søker å maksimere formeringen av multipotensiale hematopoetiske stamceller som har evne til å gjenskape benmarg når benmargen er ødelagt ved intrinsikk eller omgivelses-formidlet sykdom ved behandling av slik sykdom med kjemoterapi og/eller bestråling. Stamceller som har marggjenskapende aktivitet (MRA - Marrow repopulating activity) er vist å bestå og replikere i langvarige benmargskulturer. Imidlertid replikeres og formeres stamceller, hematopoetiske etterkommende celler, hematopoetiske for-stadieceller, alle i systemet ifølge foreliggende oppfinnelse. Videre kan differensiering foregå i dette systemet på en fysiologisk måte. F.eks. kan erythroide, myeloide, lymfoide, makrofage og megakaryocytiske kolonier kontinuerlig oppstå i det samme kultursystemet ved anvendelse av systemene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Hematopoetisk stamcellevekst oppnås fortrinnsvis som følger:
1. Etablering av det stromale basrerlaget
Margsuspensjoner sentrifugeres ved 3000 x g i 20 minutter og den hvite basisen av celler inneholder makrofager, fibroblaster, adipocyter, mononukleære blodceller, retikulærceller, encothelceller og andre tilstedeværende celler fjernes. Cellene suspenderes i et medium betegnet "Roswell Park Memorial Institute medium number 1640" eller enklere "RPMI 1640". RPMI 1640 er innkjøpt fra GIBC0 Incorporated of Grand Island, New York, USA. RPMI 1640 suppleres med 10% føtalt bovinserum, 10$ hesteserum, hydrokortisonhemisuksinat og egnede antibiotiske forbindelser.
IO<6> av disse cellene belegges på sterile nylonnett fra Tetko Corp. of New York, New York, USA i en petriskål. Dette nettet er på forhånd skåret slik at det stemmer overens med inner-dimensjonene på 25 mm<2> av kulturkolber av plast. Nettet har et sikteareal på 400 pm<2> og en fiberdiameter på 100 pm.
Det inokulerte nettet oppvindes deretter og plasseres i kuturkolben inneholdende 5 milliliter medium som beskrevet ovenfor. Nettet vinder seg ut inne i kulturkolben og dekker fullstendig bunnen av kolben. Kulturene dyrkes ved 37°C i 5% CO2 i omgivende luft ved en relativ fuktighet høyere enn 90%. Stromale celler som er hovedsakelig fibroblaster gror først alene og omslutter fullstendig alle nylonfibrene før de begynner å gro inn i nettåpningene. Denne prosessen tar ca. 14 til 18 dager. Graden av undersammenflytning av de stromale cellene bør svare til det som fremgår i figuren i tegningen, før inokuleringen av hematopoetiske celler. Suspenderte stromaceller kan kryopreserveres ved anvendelse av den samme teknikken som beskrevet ovenfor for benmargceller. For kryopreservering av under-sammenflytende celler på nettet, må nylonnettet sammenrulles og innføres i Nunc-røret inneholdende RPMI 1640 medium med kryobeskyttelses-midlene dimetylsulfoksyd og glycerol i endelige konsentrasjoner på henholdsvis 5% og 15%. Nedfrysning av stromacellene på nettet kan oppnås ved innledende avkjølingshastigheter på -l°C/min fra +1°C til -40°C. En avkjølingshastighet på -2 til -3°C/min anvendes optimalt inntil sluttrinnstemperaturen på-84 °C er oppnådd. 20-25$ av stromacellene vil løsne fra nylonnettet.
2. Inokulering med hematopoetiske celler
Benmargceller suspenderes i et modifisert Fischer' eller McCoy's 5A medium supplert med 5-10$ føtalt bovinserum og 5-10% hesteserum, vitaminer, hydrokortison, glutamin og antibiotika. Disse cellene kan enten være friske eller avledet fra en tidligere kryopreservert prøve som er raskt opptint i et varmtvannsbad på 80° C. 2 til 5 x 10^ celler inokuleres på undersammenflytende stromacellenettverk i kulturkolber av plast med diameter 25 mm<2>, og dyrkes ved 33 til 34°C ved 5% C02 i værelsesluft. Den relative fuktigheten av disse kulturene må være høyere enn 90%. Etter 3 dager heves kulturtemperaturen til 35 til 37°C.
Hematopoetiske celler gror i de naturlige lommene som dannes av de undersammenflytende stromacellene, og etterkommercell-ene forblir i det vedhengende laget av celler. Det vedhengende laget er de cellene som er direkte knyttet til nettverket eller de som er indirekte forbundet ved tilknytning til celler som i seg selv er bundet direkte til nettet. Etter 4 til 5 dager kommer modne granulocyter, mononukleærceller og erythrocyter tilsyne i det ikke-vedhengende laget, hvilket observeres ved cytospinpreparering. Etter 7 til 10 dager kan tallrike hematopoetiske kolonier observeres i hulrommene i nettet og er morfologisk samsvarende med CFU-C, blandede kolonier og lymfoide kolonier. Megakaryocytisk vekst er begrenset, men kan observeres også i denne matriksen. En gjennomsnittlig kultur vil produsere 450 til 950 CFU-C pr. uke.
Kulturer som består av stromaceller og hematopoetiske celler avledet fra det samme individet (autologer) må fores to ganger ukentlig. Kulturer som består av en pasients benmarg som er inokulert på et stromacellenettverk avledet fra andre individer (allogenisk) må fores tre ganger pr. uke for å sikre tilstrekkelig depopulasjon av modne immunokompetente celler fra det ikke-vedhengende laget. 3. Variasjoner i in vitro benmargsreplikeringssystemet
Økning av veksten av margstromaceller
Den primære hastighetsbegrensende faktoren ved veksten av margstromaceller er den relativt lave mitotiske indeksen for fibroblastene, innbefattet blant margstromacellene. Veksten av disse cellene og deres avsetning av ekstracellulære matrikskomponenter kan økes ved å tilsette: 1. hydrokortisonhemisuksinat og/eller 2. selvregulerende vekstfaktorer avledet fra mediet av dyrkede humane føtale fibroblaster som har en høy hastighet for celledeling.
Tilknytning og vekst av f ibroblaster på nettet kan også økes ved: 1. forbelegging av nettet med oppløseliggjort type I-IV kollagen, eller 2. anvendelse av et nett som er belagt eller neddykket med kollagen utskilt av føtale humane fibroblaster eller av voksne fibroblaster (i det følgende betegnet som "vekstøkende fibroblaster") som er underinndelt ved deres evne til å syntetisere visse kollagentyper. I dette hen-seendet løftes de vekstfremmende fibroblastene ved hjelp av mild trypsinisering fra nettet når de når sammenflytning (5 til 7 dager for føtale humane fibroblaster og 14 til 18 dager for voksne fibroblaster) og kan enten 1. inokuleres med stromale margceller som beskrevet tidligere eller 2. kryopreserveres for fremtidig anvendelse.
I en utførelse av oppfinnelsen dyrkes vekstfremmende fibroblaster som syntetiserer kollagen og deres ekstracellulære matrikskomponenter på nettverket inntil de når undersammenflytning. En blanding av både hematopoetiske og stromale benmargsceller inokuleres deretter på det undersammenflytende vekstforbedrende fibroblastnettverket.
Fremgangsmåtene for dyrking, underinndel ing og kryopreservering av vekstfremmende fibroblaster er som følger:
a. Kultur av vekstfremmende fibroblaster
Fibroblaster dyrkes i RPMI 1640 supplert med 2-10$ føtalt bovinserum eller 2-10$ hesteserum hvortil det er tilsatt 1 jjg/ml hydrokortisonhemisuksinat og 2 jjg/ml gentamycin, penicillin, streptomycin og fungizon. Kulturer dyrkes ved 5$ CO2 i værelsesluft ved 37° C med en relativ fuktighet større enn 90$.
b. Underinndeling av vekstfremmende fibroblaster
5,0 x 10^ fibroblaster avledet fra "buffy"-belegget av en benmargsuspensjon, dermale fibroblaster eller fibroblaster avledet fra kadaverlevere belegges på mikrotiterbrønner (1 mm<2>) og dyrkes til sammenflytning. Disse cellene løftes fra kulturbrønnene ved gjentatte vaskinger, vanligvis fire til fem ganger med Hank's balanserte saltoppløsning uten Ca<++ >eller Mg<++.> Matriksen som blir igjen på mikrotiterplaten undersøkes ved indirekte immunofluorescens ved anvendelse av monoklonale antistoffer til forskjellige matrikskomponenter og fluoresceinisotiocyanat-merket, kanin anti-mus immuno-globulin G for å fastslå kollagentypene som er tilstede. De suspenderte cellene behandles med monoklonale antistoffer rettet mot kollagentyper I-IV, elastin, tropoelastin og fibronektin for å isolere underpopulasjoner av celler som er i stand til å syntetisere hvert produkt. Cellene behandles med marsvinkomplement som vil skade eller ødelegge de cellene hvortil monoklonalt antistoff er knyttet. De levedyktige cellene gjenbelegges på mikrotiterbrønner som beskrevet ovenfor og dyrkes til sammenflytning og løftes av. Effekti-viteten av isolasjonsteknikken verifiseres deretter ved å undersøke matriksen som utskilles av de cellene med monoklonale antistoffer og indirekte immunofluorescens.
For optimal vekst av hematopoetiske celler bør matriksen inneholde kollagentyper III, IV og I i et tilnærmet forhold på 6:3:1. c. Kryopreservering av vekstfremmende fibroblaster Vekstfremmende fibroblaster kan kryopreserveres ved anvendelse av de samme teknikkene som beskrevet ovenfor for stromaceller. På samme måte som stromacellene, vil noen av de vekstfremmende fibroblastene også løsne fra nettet under nedfrysning. Denne matriksen vil imidlertid fremdeles bidra til tilknytningen av margstromaceller og derfor redusere tiden som er påkrevet for å etablere en matriks som fører til hematopoetisk cellevekst.
Inokulering med mononukleære celler
For å øke den langvarige veksten av benmargskulturer, prepareres perifere blodmononukleære celler fra en heparini-sert suspensjon ved anvendelse av Ficoll-hypague eller Percoll. Perifere blodceller og benmargshematopoetiske celler er avledet fra det samme individet (autologe). Disse bør være fjernet ved venipunktur og kryopreservert ved det tidspunktet når benmargsprøven tas. Ytterligere perifere blodceller bør kunne skaffes fra pasienten dersom dette er nødvendig under dyrkingsfremgangsmåten. Dersom imidlertid metastatisk sykdom mistenkes må prøven først underkastes spyling som nevnt ovenfor. 5 x IO15 til 10^ mononukleære celler (monocyt-underpopulasjonen er den foretrukne celletypen innenfor det mononukleære cellelaget for dette trinnet) inokuleres på nettverk 4 til 5 dager etter den innledende inokuleringen med benmargshematopoetiske celler og deretter hver tredje uke. Denne fremgangsmåten øker hematopoesen med 10 til 13% observert på en ukentlig basis.
Fortsettelse av kulturen og oppsamling av etterkommerceller Ifølge oppfinnernes erfaring vil sammenflytende stromacelle-kul turer ikke, eller dårlig, understøtte hematopoese. Uendelig vekst av humane hematopoetiske etterkommerceller er mulig dersom de utstyres med de nødvendige stromal-avledede vekst/reguleringsfaktorene.
For eksempel oppdeles den innledende margprøven i et antall porsjoner inneholdende ca. IO<6> hematopoetiske celler. Hver av disse inokuleres på et under-sammenflytende stromacellenettverk. Kulturene overvåkes ved direkte observasjon med et inverst fasemikroskop og differensielle tellinger av de ikke-vedhengende cellene slik dette fremgår på cytospinpreparatet etter hver foring. Før de når sammenflytning, behandles kulturene med kollagenase og plasseres under mild ultralyd i 6-10 min. Hematopoetiske celler og stromaceller separeres ved hjelp av tetthetsgradientsfremgangsmåter. De hematopoetiske cellene telles ved anvendelse av et hemacytometer og ca.
50$ kryopreserveres ved anvendelse av fremgangsmåter beskrevet tidligere. De gjenværende 50$ av de hematopoetiske cellene oppdeles i porsjoner bestående av ca. 10^ celler og inokuleres på under-sammenflytende stromacellekulturer som har vært forskjøvet i forhold til hverandre og dyrket parallelt. Når disse begynner å nå sammenflytning, utføres den samme fremgangsmåten.
Denne teknikken: 1. variggjør veksten av hematopoetiske celler ved å tilveiebringe en mikroomgivelse som produserer de påkrevde vekstfaktorene og, 2. danner en kontinuerlig bank hvor hematopoetiske etterkommerceller kan avsettes inntil et antall egnet for innpodning er oppnådd.
Modulering av hematopoetisk cellevekst med celleprodukter Det eksisterer i dag teknologi for å underdyrke de forskjellige cellulære komponentene av human marg som separate kulturer. Makrofager, retikulærceller, adipocyter og fibroblaster kan dyrkes separat og deres utskillingsaktivitet modifiseres ved behandling med forskjellige midler. Modulering av fibroblastaktivitet er beskrevet tidligere.
Hematopoese i langvarige humane margkulturer på det tredimensjonale nettverket kan også moduleres ved utskillelse av ekstramedulære makrofager (Kupffer-celler) når disse dyrkes i kultur på følgende måte. Kupffer-celler separeres fra deres organstroma etter pronasenedbrytning. Kort sagt inkuberes vevsprøver i 1 time i pronaseoppløsning (0,2$ pronase (Calbiochem) og Geys' balanserte saltoppløsning (BSS)) samtidig som de omrøres forsiktig. pH for oppløsningen holdes ved 7,3 til 7,5 med IN NaOE. Deoksyr ibonuklease (0,5 mg)
(Calbiochem) tilsettes ved 30 minutters intervaller under fremgangsmåten ovenfor og den resulterende cellesuspensjonen filtreres og sentrifugeres ved 350 x G i 10 minutter. Pelleten resuspenderes i Geys' BSS og 1 ittoralcellene (makrofager og endothelidceller) separeres fra cellulærav-fallet og modne blodceller ved anvendelse av en Percoll
(Pharmacia) gradient. Den resulterende cellefraksjonen vaskes 3x3 minutter med et modifisert Dulbecco's medium anriket med 10$ føtalt bovint serum og belegges på plastkulturskåler ved et volum inneholdende 3 til 4 x 10^ celler.
Etter inkubering i 1 dag fjernes de ikke-vedhengende cellene ved vasking med kulturmediet og de vedhengende cellene holdes ved 33°C i en gassblanding bestående av 6$ C02 i værelsesluft ved over 80$ relativ fuktighet. Veksten og/eller utskill-elsesaktiviteten av disse cellene kan stimuleres ved: 1. variasjon av CO2:02~forholdet, 2. behandling av kulturene med lateksperler, 3. behandling av kulturene med silisiumdioksyd, 4. tilsetning av prostaglandin E2, E^ eller F2a til mediet, 5. supplering av mediet med interleukin 1 eller interleukin 2. Makrofag-utskillelsesprodukter kan moduleres ved hjelp av disse fremgangsmåtene/midlene.
Mediet som er kondisjonert med utskillelsesproduktene fra disse makrofagene kan benyttes til å supplere det langvarige benmargskultur-erythropoetiske/granulopoetiske forholdet på tilnærmet samme måte som finner sted in vivo.
Anvendelse av in vitro benmargsreplikeringssystem for å overvåke en pasients tilstand
I en pasient med kreft eller annen sykdom, er det ofte virksomt å overvåke pasientens tilstand ved å suge ut en del av pasientens benmarg og undersøke prøven. På denne måten kan en metastase eller en gjeninntreden detekteres før den er klinisk åpenbar. Pasienter med andre tilstander som kan detekteres ved å undersøke benmargceller, kan også overvåkes på denne måten.
Den langvarige veksten av celler i en utsugd benmargsprøve ved anvendelse av benmargsreplikeringssystemet ifølge foreliggende oppfinnelse, øker sannsynligheten for deteksjon av klonale metastatiske celler og hematopoetiske celler med kromosomale abnormaliteter. Disse cellene kan unngå deteksjon ved en konvensjonell utstrykning av ny utsuget (udyrket) benmarg.
Anvendelse av in vitro benmargsreplikeringssystem i cvto-toksisitetssystem
Cytotoksisiteten overfor benmarg av farmasøytiske preparater, anti-neoplastiske midler, karcinogener, næringsmiddeladditiver og andre stoffer undersøkes ved å anvende in vitro benmargs-replikeringssystemet som oppnås ifølge foreliggende oppf innelse.
Først etableres stabile, voksende kulturer av benmargceller (inbefattende både stromale og hematopoetiske celler). Deretter eksponeres kulturene mot varierende konsentrasjoner av forsøksmidlet. Etter inkubering med forsøksmidlene, undersøkes kulturen ved hjelp av f asemikroskopi for å bestemme den høyeste tålte dosen (HTD) - den konsentrasjonen av forsøksmidlet hvorved de tidligste morfologiske abnormali-tetene kommer tilsyne. Cytotoksisitetundersøkelse kan utføres ved å anvende en rekke supravitale fargestoffer for å fastslå cellelevedyktigheten i dette tredimensjonale systemet, ved anvendelse av teknikker som er velkjente for fagmannen. HTD-bestemmelsen tilveiebringer et konsentrasjonsområde for ytterligere undersøkelse.
Når et undersøkelsesområde er etablert, kan varierende konsentrasjoner av forsøksmidlet undersøkes vedrørende effekten på levedyktigheten, veksten og/eller morfologien av de forskjellige celletypene som utgjør benmargskulturen ved hjelp av fremgangsmåter som er velkjente innen teknikken.
Andre tredimensjonale cellekultursystemer enn beskrevet ved foreliggende oppfinnelse kan tilpasses for anvendelse ved cytotoksisitetsundersøkelse.
Etablering av et tredimensjonalt cellekultursystem Foreliggende oppfinnelse beskriver en tredimensjonal bærer og dens anvendelse som gitteret for et tredimensjonalt, fler-lagscellekultursystem. I tidligere kjente vevskultursystemer blir cellene dyrket i et monolag. Celler dyrket på en tredimensjonal bærer vokser i flere lag og danner en cellulær matriks. Dette tredimensjonale cellekultursystemet nærmer seg fysiologiske tilstander som finnes in vivo i større grad enn tidligere omtalte monolagsvevskultursystemer. Det tredimensjonale cellekultursystemet ifølge oppfinnelsen kan overføres på, eller inn i, en levende organisme.
Den tredimensjonale bæreren kan være av et hvilket som helst materiale som: 1. tillater cellene å feste seg til det (eller kan modifiseres slik at cellene kan feste seg til det) og 2. tillater cellene å vokse i mer enn ett lag. Den tredimensjonale bæreren er et nett i en foretrukket utførelse av foreliggende oppfinnelse.
Det tredimensjonale cellekultursystemet kan anvendes på benmarg, hud, lever og mange andre celletyper og vev. F.eks. fremstilles et tredimensjonalt hudcellekultursystem som følger: 1. Fibroblast får feste seg til et nett og dyrkes i 7-9 dager, avsetning av kollagentyper I og III, som beskrevet ovenfor med hensyn på vekstforbedrende fibroblast benyttet i in vitro benmargsreplikeringssystemene; 2. Melanocyter belegges på det behandlede nettet og får vokse i 5 dager; 3. Keratinocyter inokuleres på undersammenflytende melanocyter .
Claims (23)
1.
Tredimensjonal stromacellekultur for anvendelse in vitro, karakterisert ved at den omfatter stromaceller og bindevevsproteiner som naturlig blir utskilt av stromacellene som er koblet til, og vesentlig omhyller, et nettverk bestående av et biokompatibelt, ikke-levende materiale formet i en tredimensjonal struktur med interstitielle områder koblet sammen av stromaceller.
2.
Tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 1, karakterisert ved at stromacellene er fibroblaster.
3.
Tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 1, karakterisert ved at stromacellene er en kombinasjon av fibroblaster og endotheliske celler, pericytter, makrofager, monocytter, leukocytter, plasmaceller, mastceller eller adipocytter.
4 .
Tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 1, karakterisert ved at nettverket består av et biodegraderbart materiale.
5 .
Tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 4, karakterisert ved at det biodegraderbare materialet omfatter bomull, polyglykolsyre, kattetarmsting, cellulose, gelatin eller dekstran.
6.
Tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 1, karakterisert ved at nettverket består av et ikke-biodegraderbart materiale.
7.
Tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 6, karakterisert ved at det ikke-biodegraderbare materialet er et polyamid, en polyester, en polystyren, en polypropylen, et polyakrylat, en polyvinyl, et polykarbonat, en polytetrafluoretylen eller en nitrocelluloseforbindelse.
8.
Tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 4, 5, 6 eller 7, karakterisert ved at nettverket på forhånd er belagt med kollagen.
9.
Tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 1, 2, 3, 4, 5, 6 eller 7,karakterisert ved at nettverket er en mesh.
10.
Tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 8, karakterisert ved at nettverket er en mesh.
11.
Anvendelse av tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 1 for dyrking av parenchymalceller in vitro, hvorved man (a) inokulerer utgangsceller på en stromacellekultur fremstilt in vitro, omfattende stromaceller og bindevevsproteiner naturlig utskilt av stromacellene koblet til, og som vesentlig omfatter, et nettverk bestående av et biokompatibelt, ikke-levende materiale formet til en tredimensjonal struktur med interstitielle områder koblet av stromaceller; og (b) inkuberer den inokulerte stromacellekulturen i et næringsmedium, slik at de inokulerte cellene prolifererer i kultur.
12.
Anvendelse ifølge krav 11, hvor stromacellene er fibroblaster .
13.
Anvendelse av tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 1 for dyrking av benmargceller in vitro, hvorved man (a) inokulere hematopoietiske celler på en stromacellekultur fremstilt in vitro, omfattende stromaceller og bindevevsproteiner naturlig utskilt av stromacellene koblet til, og som vesentlig omfatter, et nettverk bestående av et biokompatibelt, ikke-levende materiale formet til en tredimensjonal struktur med interstitielle områder koblet av stromaceller; og (b) inkuberer den inokulerte stromacellekulturen i et næringsmedium, slik at de inokulerte cellene prolifererer i kultur.
14.
Anvendelse av tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 1 for dyrking av hudceller in vitro, hvorved man (a) inokulerer melanocytter og keratinocytter på en stromacellekultur fremstilt in vitro, omfattende stromaceller og bindevevsproteiner naturlig utskilt av stromacellene koblet til og som vesentlig omfatter et nettverk bestående av et biokompatibelt, ikke-levende materiale formet til en tredimensjonal struktur med interstitielle områder koblet av stromacellene; og (b) inkuberer den inokulerte stromacellekulturen i et næringsmedium, slik at de inokulerte cellene prolifererer i kultur.
15 .
Anvendelse ifølge krav 14, karakterisert ved at den tredimensjonale stromacellekulturen omfatter konfluente stromaceller.
16.
Anvendelse av tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 1 for å dyrke leverceller in vitro, hvorved man (a) inokulerer hepatocytter på en stromacellekultur fremstilt in vitro, omfattende stromaceller og bindevevsproteiner som naturlig blir utskilt av stromacellene koblet til, og som vesentlig omfatter, et nettverk bestående av et biokompatibelt, ikke-levende materiale formet i en tredimensjonal struktur med interstitielle områder koblet av stromaceller; og (b) inkuberer den inokulerte tredimensjonale stromacellekulturen i et næringsmedium, slik at de inokulerte cellene prolifererer i kultur.
17.
Anvendelse av tredimensjonal stromacellekultur ifølge krav 1 for in vitro testing av cytotoksisk eller medikamentell virkning, hvorved parenchymalceller i et første trinn dyrkes på den tredimensjonale stromacellekulturen, denne eksponeres deretter mot forsøksforbindelsen eller medikamentet, og endelig måles virkningen av forsøksforbindelsen eller medikamentet ved å måle en forandring i den tredimensjonale cellekulturen.
18.
Anvendelse ifølge krav 17, hvor det for bestemmelse av cytotoksisk virkning foretas følgende målinger: (bl) måling av antall skadede eller døde celler i den
tredimensjonale cellekulturen, hvori antall skadede eller døde celler korrelerer med cytotoksisiteten til testforbindelsen; (b2) analysering av det cellulære innholdet i den
tredimensjonale cellekulturen, hvori en økning i celleantall eller en celletype korrelerer med veksten/den regulatoriske aktiviteten til testforbindelsen;
(b3) måling av en metabolitt produsert av en tredimen
sjonal cellekultur, hvori en økning eller reduksjon i mengden av metabolitt som blir produsert korrelerer med aktiviteten til testforbindelsen, eller (b4) for bestemmelse av den allergeniske virkningen,
måling av frigjøringen av en vasoaktiv mediator fra mastcellene, hvori frigjøringen av vasoaktiv mediator er i samsvar med den allergeniske virkningen til testforbindelsen.
19.
Anvendelse ifølge krav 17, hvor stromacellene er fibroblaster .
20.
Anvendelse ifølge krav 17, hvor stromacellene er en kombinasjon av fibroblaster og endotheliske celler, pericytter, makrofager, monocytter, leukocytter, plasmaceller, mastceller eller adipocytter.
21.
Anvendelse ifølge krav 17 eller 18, hvor de parenchymale cellene er hematopoietiske celler, melanocytter og keratinocytter eller hepatocytter.
22.
Anvendelse ifølge krav 17 for testing av medikamentell virkning, hvor nettverket på forhånd er belagt med kollagen.
23.
Anvendelse ifølge krav 17 for testing av medikamentell virkning, hvor nettverket er en mesh.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US85356986A | 1986-04-18 | 1986-04-18 | |
| US07/036,154 US4721096A (en) | 1986-04-18 | 1987-04-03 | Process for replicating bone marrow in vitro and using the same |
| US3811087A | 1987-04-14 | 1987-04-14 | |
| PCT/US1987/000869 WO1987006120A1 (en) | 1986-04-18 | 1987-04-15 | Process for replicating bone marrow |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO875286L NO875286L (no) | 1987-12-17 |
| NO875286D0 NO875286D0 (no) | 1987-12-17 |
| NO179181B true NO179181B (no) | 1996-05-13 |
| NO179181C NO179181C (no) | 1996-08-21 |
Family
ID=27364979
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO875286A NO179181C (no) | 1986-04-18 | 1987-12-17 | Tredimensjonal stromacellekultur, anvendelse av stromacellekulturen for dyrking av ulike celletyper in vitro, samt anvendelse av cellekulturen for in vitro testing av cytotoksisk eller medikamentell virkning |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0309456B1 (no) |
| JP (2) | JP2857392B2 (no) |
| KR (1) | KR0142885B1 (no) |
| AT (1) | ATE127692T1 (no) |
| AU (3) | AU615414B2 (no) |
| BG (1) | BG51337A3 (no) |
| BR (1) | BR8707673A (no) |
| DE (1) | DE3751519T2 (no) |
| DK (1) | DK665687A (no) |
| FI (1) | FI100249B (no) |
| HK (1) | HK1007684A1 (no) |
| HU (1) | HU202578B (no) |
| NO (1) | NO179181C (no) |
| RO (1) | RO106655B1 (no) |
| WO (1) | WO1987006120A1 (no) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU644578B2 (en) * | 1986-04-18 | 1993-12-16 | Marrow-Tech Incorporated | Three-dimensional cell and tissue culture system |
| US5902741A (en) * | 1986-04-18 | 1999-05-11 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-dimensional cartilage cultures |
| US6309635B1 (en) | 1986-11-20 | 2001-10-30 | Children's Medical Center Corp. | Seeding parenchymal cells into compression resistant porous scaffold after vascularizing in vivo |
| US5567612A (en) * | 1986-11-20 | 1996-10-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Genitourinary cell-matrix structure for implantation into a human and a method of making |
| US5759830A (en) * | 1986-11-20 | 1998-06-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Three-dimensional fibrous scaffold containing attached cells for producing vascularized tissue in vivo |
| US5736372A (en) * | 1986-11-20 | 1998-04-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Biodegradable synthetic polymeric fibrous matrix containing chondrocyte for in vivo production of a cartilaginous structure |
| WO1993007913A1 (en) * | 1991-10-24 | 1993-04-29 | Children's Medical Center Corporation | Neomorphogenesis of urological structures in vivo from cell culture |
| US5436151A (en) * | 1992-04-03 | 1995-07-25 | Regents Of The University Of Minnesota | Method for culturing human hematopoietic stem cells in vitro |
| US5460964A (en) * | 1992-04-03 | 1995-10-24 | Regents Of The University Of Minnesota | Method for culturing hematopoietic cells |
| US7214654B1 (en) | 1994-12-07 | 2007-05-08 | Karlheinz Schmidt | Agent for the manufacture of biological parts including an active ingredient complex and carrying materials suitable for the active ingredient complex |
| US5709854A (en) | 1993-04-30 | 1998-01-20 | Massachusetts Institute Of Technology | Tissue formation by injecting a cell-polymeric solution that gels in vivo |
| US5855610A (en) | 1995-05-19 | 1999-01-05 | Children's Medical Center Corporation | Engineering of strong, pliable tissues |
| US5728581A (en) * | 1995-06-07 | 1998-03-17 | Systemix, Inc. | Method of expanding hematopoietic stem cells, reagents and bioreactors for use therein |
| US5741685A (en) * | 1995-06-07 | 1998-04-21 | Children's Medical Center Corporation | Parenchymal cells packaged in immunoprotective tissue for implantation |
| AU1720400A (en) * | 1998-11-12 | 2000-05-29 | Cell Science Therapeutics, Inc. | Lymphoid tissue-specific cell production from hematopoietic progenitor cells in three-dimensional devices |
| RU2249039C2 (ru) * | 1999-02-04 | 2005-03-27 | Текнион Рисерч Энд Дивелопмент Фаундейшн Лтд. | Способ размножения/поддержания недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников (варианты), способ приготовления кондиционированной среды стромальных клеток, способ трансплантации недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников (варианты) |
| US7087431B2 (en) | 2000-03-02 | 2006-08-08 | University Of Rochester | Ex vivo generation of functional leukemia cells in a three-dimensional bioreactor |
| DE10203644A1 (de) * | 2002-01-30 | 2003-08-07 | Fraunhofer Ges Forschung | Kryokonservierung an textilen Geweben |
| AU2005215211B2 (en) | 2004-02-13 | 2011-11-03 | Smith & Nephew Orthopaedics Ag | Wound healing profile |
| EP1856245A2 (en) * | 2005-03-01 | 2007-11-21 | National Center for Cell Sciences | A composition for creating an artificial bone-marrow like environment and uses thereof |
| JP4977854B2 (ja) * | 2005-10-21 | 2012-07-18 | 国立大学法人名古屋大学 | 組織形成用複合材料およびその製造方法 |
| WO2010048441A2 (en) * | 2008-10-22 | 2010-04-29 | Regenemed, Inc. | Culture systems |
| KR20190042747A (ko) * | 2011-06-02 | 2019-04-24 | 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 | 생체외 조직 배양 시스템을 위한 방법 및 용도 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH593339A5 (no) * | 1973-07-02 | 1977-11-30 | Monsanto Co | |
| US4144126A (en) * | 1975-05-21 | 1979-03-13 | Beecham Group Limited | Cell culture method |
| JPS51151384A (en) * | 1975-06-20 | 1976-12-25 | Olympus Optical Co Ltd | Process for cultivating organic tissue or cells automatically |
| US4024020A (en) * | 1975-12-15 | 1977-05-17 | Monsanto Company | Method of cell culture on polyacrylonitrile surface |
| US4184922A (en) * | 1977-11-11 | 1980-01-22 | The Government Of The United States | Dual circuit, woven artificial capillary bundle for cell culture |
| US4228243A (en) * | 1978-07-13 | 1980-10-14 | Toray Industries, Inc. | Cell culture propagation apparatus |
| IL74715A0 (en) * | 1984-03-27 | 1985-06-30 | Univ New Jersey Med | Biodegradable matrix and methods for producing same |
-
1987
- 1987-04-15 AT AT87903124T patent/ATE127692T1/de active
- 1987-04-15 DE DE3751519T patent/DE3751519T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-15 KR KR1019870701161A patent/KR0142885B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1987-04-15 AU AU73568/87A patent/AU615414B2/en not_active Ceased
- 1987-04-15 EP EP87903124A patent/EP0309456B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-15 JP JP62502719A patent/JP2857392B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-15 HU HU872758A patent/HU202578B/hu not_active IP Right Cessation
- 1987-04-15 WO PCT/US1987/000869 patent/WO1987006120A1/en active IP Right Grant
- 1987-04-15 BR BR8707673A patent/BR8707673A/pt unknown
- 1987-04-15 RO RO135557A patent/RO106655B1/ro unknown
- 1987-12-17 NO NO875286A patent/NO179181C/no not_active IP Right Cessation
- 1987-12-17 DK DK665687A patent/DK665687A/da not_active Application Discontinuation
-
1988
- 1988-10-17 FI FI884783A patent/FI100249B/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-10-17 BG BG085721A patent/BG51337A3/xx active Active
-
1990
- 1990-12-18 AU AU68159/90A patent/AU6815990A/en not_active Abandoned
- 1990-12-18 AU AU68160/90A patent/AU6816090A/en not_active Abandoned
-
1997
- 1997-10-01 JP JP9268792A patent/JP3032492B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-06-26 HK HK98106932A patent/HK1007684A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3032492B2 (ja) | 2000-04-17 |
| AU7356887A (en) | 1987-11-09 |
| JPH01503195A (ja) | 1989-11-02 |
| KR880701093A (ko) | 1988-07-25 |
| DE3751519D1 (de) | 1995-10-19 |
| FI884783A0 (fi) | 1988-10-17 |
| AU615414B2 (en) | 1991-10-03 |
| AU6816090A (en) | 1991-03-14 |
| WO1987006120A1 (en) | 1987-10-22 |
| HUT48112A (en) | 1989-05-29 |
| RO106655B1 (ro) | 1993-06-30 |
| JPH10114664A (ja) | 1998-05-06 |
| DK665687D0 (da) | 1987-12-17 |
| KR0142885B1 (ko) | 1998-07-15 |
| ATE127692T1 (de) | 1995-09-15 |
| NO875286L (no) | 1987-12-17 |
| DE3751519T2 (de) | 1996-03-28 |
| FI100249B (fi) | 1997-10-31 |
| NO179181C (no) | 1996-08-21 |
| BR8707673A (pt) | 1989-08-15 |
| EP0309456B1 (en) | 1995-09-13 |
| HU202578B (en) | 1991-03-28 |
| HK1007684A1 (en) | 1999-04-23 |
| DK665687A (da) | 1987-12-17 |
| JP2857392B2 (ja) | 1999-02-17 |
| NO875286D0 (no) | 1987-12-17 |
| EP0309456A1 (en) | 1989-04-05 |
| FI884783A (fi) | 1988-10-17 |
| BG51337A3 (en) | 1993-04-15 |
| EP0309456A4 (en) | 1989-06-27 |
| AU6815990A (en) | 1991-03-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO179181B (no) | Tredimensjonal stromacellekultur, anvendelse av stromacellekulturen for dyrking av ulike celletyper in vitro, samt anvendelse av cellekulturen for in vitro testing av cytotoksisk eller medikamentell virkning | |
| US4963489A (en) | Three-dimensional cell and tissue culture system | |
| US5032508A (en) | Three-dimensional cell and tissue culture system | |
| US5160490A (en) | Three-dimensional cell and tissue culture apparatus | |
| US5518915A (en) | Three-Dimensional mucosal cell and tissue culture system | |
| US4721096A (en) | Process for replicating bone marrow in vitro and using the same | |
| AU595813B2 (en) | Process for replicating bone marrow in vitro | |
| Jiang et al. | Harvesting and cryopreservation of lymphatic endothelial cells for lymphatic tissue engineering | |
| Askenasy et al. | The topologic and chronologic patterns of hematopoietic cell seeding in host femoral bone marrow after transplantation | |
| CA1310926C (en) | Process for replicating bone marrow and other tissues in vitro and using the same | |
| AU644578B2 (en) | Three-dimensional cell and tissue culture system | |
| IL85957A (en) | Live substrate tissue produced by NI ORTIV and consisting of substrate cells and connective tissue proteins | |
| RU2160112C1 (ru) | Способ приготовления клеточного трансплантата из фетальных тканей | |
| KR0156685B1 (ko) | 3차원 배양물을 이용한 약물의 효과를 테스트하는 방법 | |
| KR0156571B1 (ko) | 3차원 세포 및 조직 배양계 | |
| IL91536A (en) | A three-dimensional cell and a tissue culture system that includes parenchymal cells cultured on living stromal tissue, a method for preparing such a system and its uses |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |