NO174630B - Fremgangsmaate ved fremstilling av en vaksine mot streptokokkinfeksjoner - Google Patents
Fremgangsmaate ved fremstilling av en vaksine mot streptokokkinfeksjoner Download PDFInfo
- Publication number
- NO174630B NO174630B NO883763A NO883763A NO174630B NO 174630 B NO174630 B NO 174630B NO 883763 A NO883763 A NO 883763A NO 883763 A NO883763 A NO 883763A NO 174630 B NO174630 B NO 174630B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- protein
- antigen
- typhimurium
- streptococcal
- virulent
- Prior art date
Links
- 206010061372 Streptococcal infection Diseases 0.000 title claims abstract description 10
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 39
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 29
- 230000001662 opsonic effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 claims description 23
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 claims description 23
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 claims description 18
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 16
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 9
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 claims description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 6
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 6
- 241001138501 Salmonella enterica Species 0.000 claims description 3
- 241000596091 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Anatum Species 0.000 claims description 3
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 claims description 3
- 241000210647 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Montevideo Species 0.000 claims description 3
- 241001546666 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Newport Species 0.000 claims description 3
- 241000531795 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi A Species 0.000 claims description 3
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 claims description 2
- 235000018343 nutrient deficiency Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims 1
- 108010010318 streptococcal M protein Proteins 0.000 abstract description 15
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 abstract description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 36
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 29
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 27
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 23
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 21
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 13
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241001505901 Streptococcus sp. 'group A' Species 0.000 description 10
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 10
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 9
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 8
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 5
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 5
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 4
- 102100032965 Myomesin-2 Human genes 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 101100083745 Caenorhabditis elegans pmk-2 gene Proteins 0.000 description 3
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 3
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 3
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000000181 anti-adherent effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- GLDQAMYCGOIJDV-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC(O)=C1O GLDQAMYCGOIJDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001167018 Aroa Species 0.000 description 2
- 241000197194 Bulla Species 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 101100491986 Emericella nidulans (strain FGSC A4 / ATCC 38163 / CBS 112.46 / NRRL 194 / M139) aromA gene Proteins 0.000 description 2
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 2
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 2
- 241001607429 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium str. SL1344 Species 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 101150037081 aroA gene Proteins 0.000 description 2
- 208000002352 blister Diseases 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 2
- 208000004124 rheumatic heart disease Diseases 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000007023 DNA restriction-modification system Effects 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000588915 Klebsiella aerogenes Species 0.000 description 1
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000194034 Lactococcus lactis subsp. cremoris Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 102000036675 Myoglobin Human genes 0.000 description 1
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 101710194807 Protective antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000607132 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Gallinarum Species 0.000 description 1
- 241000577475 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi C Species 0.000 description 1
- 241000405383 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium str. LT2 Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 description 1
- 101100129180 Streptococcus pyogenes serotype M5 emm5 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000194024 Streptococcus salivarius Species 0.000 description 1
- 241000194023 Streptococcus sanguinis Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003095 anti-phagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000935 anti-streptococcal effect Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- APGFPQCBDNWQSB-UHFFFAOYSA-N cyclohexa-1,3-diene-1-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CCC1 APGFPQCBDNWQSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229940092559 enterobacter aerogenes Drugs 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- OOYGSFOGFJDDHP-KMCOLRRFSA-N kanamycin A sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N OOYGSFOGFJDDHP-KMCOLRRFSA-N 0.000 description 1
- 229960002064 kanamycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 238000012510 peptide mapping method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 101150079601 recA gene Proteins 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/746—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for lactic acid bacteria (Streptococcus; Lactococcus; Lactobacillus; Pediococcus; Enterococcus; Leuconostoc; Propionibacterium; Bifidobacterium; Sporolactobacillus)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
- A61K39/092—Streptococcus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/879—Salmonella
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/885—Streptococcus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Denne oppfinnelse angår en fremgangsmåte ved fremstilling av en vaksine for immunisering av et pattedyr mot streptokokkinfeksjoner ved å frembringe opsoniske antistoffer mot et Streptokokk M antigen uten å frembringe antistoffer som er kryssreaktive med menneskers hjertevevsantigener.
Så vidt oppfinneren har kjennskap til, er det for første gang tilveiebrakt en biologisk levende bærer som bærer et beskyttende antigen fra en virulent bakterie hvilket antigen er effektivt til immunisering mot infeksjoner forårsaket av den virulente bakterie.
Leting etter en sikker og effektiv vaksine mot de stammer av streptokokker i gruppe A som utløser reumatisk feber og reumatisk hjertesykdom, har pågått i mer enn seksti år. Lancefield, "Current Knowledge of Type-Specific M Protein Antigens to Group A Streptococci", J. Immunol, vol. 89, s. 307-313 (1962). Det er blitt rapportert at få bakteriearter er blitt mer grundig undersøkt i løpet av dette århundre enn streptococcus pyogenes eller gruppe A-streptokokken. Etter som man ble overbevist om at denne organisme først var den viktigste, og deretter den eneste agens ved akutt reumatisk feber, prøvde forskere med stor besluttsomhet og anstrengelse å finne produktet hos bakterien hvis toksiske eller antigene bestanddeler utløste den reumatiske prosess. For en grundig undersøkelse av reumatisk feber og streptokokk-infeksjon, se Stollerman, Rheumatic Fever and Streptococcal Infection (New York Clinical Cardiological Monographs, Grune og Stratton, 197 5). M-proteins sentrale rolle ved immunitet mot gruppe A-streptokokker er blitt beskrevet av Stollerman. Det henvises også til Beachey og Seyer, "Primary Structure and Immunochemistry of Group A Streptococcal M Proteins", Seminars in Infectious Disease, vol. 4, s. 401-410 (J.B. Robbins, J.C. Hill og J.C. Sadoff, forf., Georg Thiemeverlag, pub., New York og Stuttgart, 198 2).
De fleste anstrengelser for å utvikle en vaksine ble for-styrret av kraftige toksiske reaksjoner overfor nesten hvilket som helst streptokokk-produkt som ble innført i den menneskelige vert. Noen av disse produkter er blitt vist å gi opphav til antistoffer som kryssreagerer med vertsvev, særlig hjertet. Kaplan og Meyerserian, "An Immunological Cross-Reaction Between Group A Streptococcal Cells and Human Heart Tissue", Lancet, vol. i, s. 706-710 (1962); Zabriskie og Freimer, "An Immunological Relationship Between the Group A Streptococcus and Mammalian Muscle", J. Exp. Med, vol. 124, s. 661-678 (1966). Skjønt det lenge har vært anerkjent at M-proteinet på overflaten av gruppe A-streptokokken inneholder de beskyttende antigener hos disse organismer, har det vært frykt for at det isolerte M-protein kan være forbundet med potensielt skadelige vevs-kryssreaktive antigener som gir opphav til, heller enn å forebygge, reumatisk feber. Denne frykt er blitt opprettholdt ved det funn at visse reumatigene streptokokker frembringer M-proteiner som er nær forbundet med et hjerte-kryssreaktivt antigen. Kaplan, "Immunologic Relation of Streptococcal and Tissue Antigens. I. Properties of an Antigen in Certain Strains of Group A Streptococci Exhibiting an Immunologic Cross-Reaction with Human Heart Tissue", J. Immunol. vol. 90, s. 595 (1963). Det er faktisk nylig blitt anerkjent at ett av M-proteinmolekylene i sin kovalente struktur inneholder en epitop som frembringer et beskyttende anti-streptokokk-antistoff som også kryssreagerer med et sarkolemmalt protein i humant hjertevev. Dale og Beachey, "Protective Antigenic Determinant of Streptococcal M Protein Shared with Sarcolemmal Membrane Protein of Human Heart", J. Exp. Med., vol. 156, s. 1165-1176 (1982).
US-patent nr. 4 284 537 tilhørende E. Beachey, utstedt 18. august 1981, beskrev aminosyresekvensen hos to peptidfragmenter som stammer fra protein-type 24 M. Det beskrev også at hvert av disse naturlige fragmenter var i stand til å frembringe typespesifikke opsoniske antistoffer effektive mot Streptococcus pyogenes, når de var bundet kovalent til en bærer såsom et polylysin. Hvert av disse fragmenter var et naturlig ekstrakt, og hvert inneholdt 35 aminosyrer.
US-patent nr. 4 4 54 121 tilhørende E. Beachey, utstedt 12. juni 1984, beskrev et syntetisk peptid (S-CB7) og at én av de beskyttende determinanter finnes i et spesifikt fragment av S-CB7 hos protein type 24 M som bare inneholder 12 aminosyrerester (S-CB7(18-29)). S-CB7 er, som beskrevet, forskjellig fra det naturlig forekommende CB-7-fragment ved at den COOH-terminale rest hos S-CB7 er metionin, i motsetning til homoserin. Beskrivelsen lærer også og beskriver kovalent bundne konjugater av S-CB7 og passende haptenbærere, naturlige, såsom BSA eller OVA, eller syntetiske, såsom polylysin. Ytterligere detaljer om dette arbeid er blitt publisert i Nature 30 juli 1981 av Beachey et al, 292, sider 457-459.
US-patent nr. 4 521 334 med tittelen "Synthetic Polypeptid Fragments" tilhørende Edwin H. Beachey, utstedt 4. juni 1985, beskriver aminosyresekvensen hos tre peptidfragmenter CB3, CB4 og CB5, og 35 og 37 aminosyresekvenser hos type 24 M som inneholder antigene determinanter tilsvarende de antigene determinanter som finnes i CB3-CB7. US-patent nr. 4 597 967 med tittelen "Synthetic Polypeptide Fragments" tilhørende Edwin H. Beachey, utstedt 1. juli 1986, beskriver at disse fragmenter kan frembringe typespesifikke opsoniske antistoffer som er effektive mot Streptococcus pyogenes, når de bindes kovalent til en bærer såsom polylysin.
US-patentsøknad nr. 739 963 med tittelen "Biologically Active Hybrid Peptides of Streptococcal M Protein and Compo-sitions and use" tilhørende Edwin H. Beachey et al inngitt 31. mai 1985 beskriver peptidsekvenser som inneholder fragmenter av M5-, M6- og M24-proteiner som kan frembringe opsoniske og baktericide antistoffer mot Streptococcus pyogenes som ikke er serologisk kryssreaktive med vevsantigener hos det menneskelige eller verts-hjertet. US-patentsøknad nr. 839 750 med tittelen "Synthetic M Proteins-Streptococci Type 6" tilhørende Edwin H. Beachey et al. inngitt 14. mars 1986 beskriver syntesen av M6-proteintype-antigenkonjugater. US-patentsøknad nr. 858 436 med tittelen "Localization of Protective Epitopes of the Amino Terminus of Type S Streptococcal M Protein" tilhørende Edwin H. Beachey et al. inngitt 1 mai 1986 beskriver syntese av M5-proteintype-antigenkonjugater.
Ovennevnte patenter beskriver små peptidfragmenter som er immunogene og bidrar til utvikling av en sikker og effektiv vaksine mot slike streptokokkinfeksjoner som gir feber og reumatisk hjertesykdom. Tanken var at meget små peptider ville muliggjøre avsetning av en stor del av M-proteinmolekylet og skulle derfor redusere sjansene til frembringelse av immunologiske kryssreaksjoner mot vertsvev. Se for eksempel US-patent 4 454 121, som er referert til ovenfor, spalte 1 og 2.
For ytterligere informasjon angående typespesifikk beskyttende immunitet fremkalt ved syntetiske peptider av M-protein fra Streptococcus pyogenes, se Beachey et al., "Type Specific Protective Immunity Evoked by Synthetic Peptid of Streptococcus pyogenes M Protein", Nature, vol. 292, nr. 5822, S. 457-459 (30. juli 1981).
For ytterligere litteratur på dette område, se Hasty et al., "Hybridomas Antibodies Against Protective and Non-Protective Antigenic Determinants of a Structurally Defined Polypeptide Fragment of Streptococcal M Protein", J. Exp. Med. vol. 155, s. 1010 (april 1982) og Hopp og Woods, "Prediction of Protein Antigenic Determinants from Amino Acid Seguences", Proe. Nati. Acad. Sei. USA, vol. 78, nr. 6, s. 3824-28 (juni 1981).
Til tross for disse fremskritt er det et sterkt behov som hittil ikke er blitt oppfylt, for en oralt administrerbar vaksine som innbefatter disse ikke-kryssreaktive immunogene polypeptider. Ved administrering av disse peptider i form av en svekket ikke-virulent rekombinant bakterie som kan syntetisere dem, markerer den foreliggende oppfinnelse et ytterligere steg fremover og tilveiebringer et annet fremskritt innenfor medi-sinsk vitenskap, spesielt ved bekjempelse av streptokokkinfeksjoner.
Det er kjent tallrike serotyper av M-proteiner, kodet på gener som er alleler til hverandre. Hver serotype svarer til en annen stamme av S. pyogenes, og disse serotyper er bare forskjellige ved sine amino-terminale sekvenser.
Den foreliggende oppfinnelse angår generelt en gensløyd-fremgangsmåte til syntese av et streptokokk-M-proteinantigen eller -antigenfragment som effektivt frembringer opsoniske antistoffer mot streptokokkinfeksjoner.
Ifølge den foreliggende oppfinnelse transformerer man en levende ikke-virulent Salmonella med en mutasjonsvariasjon som forårsaker en ernæringssvakhet med plasmid pMK207 som koder for et fullstendig Streptokokk M-protein antigen fra Streptococcus p<y>o<g>enes serotype 5, 6 eller 24, hvilken transformerte bakterie uttrykker antigenet intracellulært, slik at antigenet etter administrering til pattedyret vil frigjøres fra den døende bakterie og frembringe opsoniske antistoffer mot antigenet.
Fortrinnsvis transformeres vertene S. Paratyphi
S. schottmulleri, S. typhimurium, S. choleraesuis,
S. montevideo. S. newport, S. typhi. S. enteritidis.
S. <g>allilnarum og S. anatum.
Ved oppfinnelsen klones det inn i vertsbakterien de nukleotidsekvenser som koder for et E. coli-overflateantigen som frembringer anti-adhesive antistoffer.
Disse gensløydtrinn fører til fremstilling av de ikke-virulente bakterier.
En særlig foretrukket bakterie er transformasjon av
S. typhimurium, særlig Aro" S.typhimurium SL 3261.
Vaksinen fremstilt ifølge oppfinnelsen kan anvendes til immunisering av et pattedyr såsom et menneske, hvor man til pattedyret, i en dose som er effektiv til frembringelse av opsoniske antistoffer og til å gi systemisk immunitet mot streptokokkinfeksjoner, administrerer den transformerte ikke-virulente bakterie beskrevet ovenfor som inneholder den heterologe nukleotidsekvens.
Mest hensiktsmessig er oral administrering av vaksinen fremstilt ifølge denne oppfinnelse, skjønt andre administ-reringer kan også anvendes.
Det er en viktig fordel at immuniteten hos pasienten er systemisk og fås forholdsvis hurtig og fullstendig selv ved oral administrering.
Andre trekk og fordeler ved oppfinnelsen vil fremgå av de eksempler som følger og ved henvisning til den medfølgende tegning, hvor: Fig. 1 viser immunoblot-analyse av 5M-proteintype uttrykt ved pMK 207-transformert Salmonella typhimurium LB5000 (felt 1) og SL 3261 (felt 2-9).
I tillegg til de patenter og andre publikasjoner som er nevnt ovenfor, innbefatter andre publikasjoner innenfor teknikkens stand som er blitt tatt hensyn til ved beskrivelsen av denne oppfinnelse: Beachey, et als., "Repeating Covalent Structure and Protective Immunogenicity of Native and Synthetic Polypeptide Fragments of Type 24 Streptococcal M
Protein," J. Biol. Chem, Vol. 258, nr. 21 s.
13,250-13,257 (1983).
van de Rijn, et als., "Group A Streptococcal Antigens Cross-Reactive with Myocardium," J. Exp. Med., Vol.
146, s. 579-599 (1977).
van de Rijn, et als., "Imraunochemical Analysis of Intact
M Protein Secretd From Cell Wall-Less Streptococci,"
Infect. Immun., Vol. 32, s. 86-91 (1981).
Edman and Begg, "A Protein Sequenator," European
J. Biochem. Vol. 1, s. 80-91 (1967).
Phillips, et als., "Streptococcal M Protein: Helical
Coiled - Coil Structure and Arrangement on the Cell Surface," Proe. Nati. Acad. Sei. USA, Vol. 78, nr. 8
s. 4689-4693 (August 1981).
Laver, et als, "Antigenic Drift in Type A Influenza Virus: Peptide Mapping and Antigenic Analysis of A/PR/8/34(H0N1) Variants Selected With Monoclonal Antibodies," Proe. Nati. Acad. Sei. USA, Vol. 76,
nr. 3, s. 1425-1429 (mars 1979).
Atassi, "Antigenic Structure of Myoglobin: The Complete Immunochemical Anatomy of a Protein and Conclusions Relating to Antigenic Structures of Proteins,"
Immunochemistry, Vol. 12, s. 423-438 (1975).
Kabat, Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry, s. 89-100 (Holt, Rhinehart &
Winston, New York, (1968).
Nisonoff, Methods in Immunology and Immunochemistry, Vol.
1, s. 120-187 (1977).
Munoz, Methods in Immunology and Immunochemistry, Vol. 3,
s. 146-160 (1970).
Man jula and Fischetti, "Tropomyosin-like Seven Residue Periodicity in Three Immunologically Distinct Streptococcal M Proteins and its Implications for the Antiphagocytic Property of the Molecule," J. Exp.
Med., Vol. 155, s. 695-708 (1980).
Beachey and Stollerman, "Toxic Effeets of Streptococcal M
protein on Platelets and Polymorphonuclear LeuJcocytes in Human Blood," J. Exp. Med. Vol. 134, s. 351-365
(1971) .
Dale, et als., "Heterogenecity of Type-Specific and Cross-Reactive Antigenic Determinants Within a Single M
Protein of Group A Streptococci," J. Exp. Med. Vol. 155, s. 1026-1038 (1980).
Beachey, et als. "Purification and Properties of M Protein Extracted from Group A Streptococci with Pepsin: Covalent Structure of the Amino Terminal Region of Type 24 M Antigen," J. Exp_. Med. Vol. 145 s.
1469-1483 (1977).
Beachey, et als., "Primary Structure of Protective Antigens of Type 24 Streptococcal M Protein," J. Biol. Chem.,
Vol. 255, s. 6284-6289 (1980).
Beachey, et als., "Repeating Covalent Structure of Streptococcal M Protein, " Proe. Nati. Acad. Sei. USA,
Vol. 75, s. 3163-3167 (1978).
Beachey, et als., "Human Immune Response to Immunization with a Structurally Defined Polypeptide Fragment of Streptococcal M Protein," J. Exp. Med., Vol. 150, s,
862 (1979).
Brown et al., "An Attenuated aroA Salmonella typhimurium Vaccine Elicits Humoral and Cellular Immunity to Cloned -Galactosidase in Mice", The Journal of Infectious Diseases, vol. 155, nr. 1 (januar 1987). Denne publikasjon omtaler Salmonella typhimurium stamme SL3261, og en svekket aroA-vaksine-stamme, som ble anvendt som bærer for plasmidet pXY411.
Denne publikasjon tilhørende Brown et al. er medtatt i det foreliggende som referanse. En annen publikasjon av interesse er Hoiseth og Stocker, "Aromatic-dependent Salmonella Typhimurium are Non-Virulent and Effective as Live Vaccines", Nature, vol. 291 (21. mai 1981); Smith et al., "Aroraatic-Dependent Salmonella Typhimurium are Non-Virulent and Effective as Live Vaccines", Am. J. Vet. Res., vol. 45, nr. 1 (januar 1984); Smith et al., "Vaccination of Calves Against Salmonella Dublin with Aromatic-Dependent Salmonella Typhimurium", Am. J. Vet. Res., vol. 15, nr. 11 (november 1984); Maskell et al., "Attenuated Salmonella Typhimurium as Live Oral Vaccines and Carriers for Delivering Antigens to the Secretory Immune System", Vaccines 86 (Cold Spring Habor Laboratory 1986).
Patenter på gensløydområdet som er av generell interesse, innbefatter: US-patent nr. 4 428 941 med tittelen "Nucleotid Sequence Coding the Surface of the Hepatitis B Virus, Vector Containing Said Nucleotid Sequence, Process Allowing the Obtention Thereof and Antigen Obtain Thereby", utstedt til Francis Galibert et al., 31. januar 1984; US-patent nr. 4 518 584 med tittelen "Human Recombinant Interleukin-2 Muteins", utstedt til Mark et al., 21. mai 1985; US-patent nr. 4 588 585 med tittelen "Human Recombinant Cysteine Depleted Interferon-B Muteins", utstedt til Mark et al. 13 mai 1986; og US-patent nr. 4 625 2 32 med tittelen "Recombinant Bacterial Plasmids Containing the Coding Seguences of Insulin Genes", utstedt til Rutter et al. 24 mars 1987.
US-patent nr. 4 666 84 6 med tittelen "Novel Cloning Vectors Containing Selectable Genetic Markers for Use in Streptomyces and Related Organisms", utstedt til Fayerman et al. 19. mai 1987; og US-patent nr. 4 666 847 med tittelen "Recombinant DNA Means and Methods", utstedt til Alford et al. 19. mai 1987.
I oppfinnelsen foretrekkes det at det plasmid som koder for M-protein-genet, klones først og uttrykkes i Escherichia coli. Hvilke som helst enteriske stavbakterier av coliform-gruppen såsom Klebsiella eller Enterobacter kan anvendes, men normalt foretrekkes E. coli. Deretter isoleres og renses det plasmid som bærer M-genet, og deretter oppbygges det en konstruksjon under transformering av de ønskede ikke-virulente bakterier, såsom aroA-S. typhimurium (SL3261). Det skal bemerkes at denne mutant-stamme har en ernæringsmarkør både for PABA og 2,3-DHB. Se Brown et al., anført ovenfor. Det skal bemerkes at en annen hensiktsmessig art av S. typhimurium er recA"<s>. typhimurium, spesielt stamme Ty21a. Se elements et al., "Construction of a Potential Live Aro Vaccine for typhoid type fever and cholorea- E. coli - related diarrheas", Infect. Immun., 46:564-9 (1984). Se også andre henvisninger anført i den ovenfor anførte artikkel av Brown et al., som også er medtatt i det foreliggende som referanse.
Det er foretrukket å få M-protein-genet fra en virulent stamme av S. pyogenes. Det er imidlertid mulig å få genet fra en svekket, ikke-virulent stamme av S. pyogenes, eller til og med å fremstille den nukleotidsekvens som koder for det ønskede M-protein.
Rekombinant-DNA-kloningsvektorene ifølge den foreliggende oppfinnelse er ikke begrenset for anvendelse i en enkelt art eller stamme av Salmonella. Tvert imot har vektorene bred anvendelse og kan transformeres i vertsceller hos andre gramnegative bakterier såsom Enterobacteriaceae-slekten (såsom Shigella og Klebsiella som Klebsiella pneumoniae, Enterobacter såsom Enterobacter aerogenes). Salmonellae, såsom Salmonella arizona, og Citrobacter kan anvendes hvis de gjøres passende ikke-virulente eller svekket.
Vanlige salmonella-arter som kan anvendes når de er svekket og gjort ikke-virulente, innbefatter følgende: S. paratyphi A, S. schottmulleri, S. typhimurium, S. paratyphi C, S. choleraesuis, S. montevideo, S. newport, S. typhi, S. enteritidis, S. gallinarum, S. anatum.
Som vert for rekombinant-DNA-kloningsvektorer kan det anvendes bakterier av Streptococcus-slekten som er ikke-virulente eller som er blitt gjort ikke-virulente eller svekket, innbefattende streptokokker av de immunologiske grupper A-0 men vanligvis andre enn A. Egnede streptokokker som kan anvendes som bakterie-vert, innbefatter S. Cremoris, S. Faecalis, S. Salivarius, S. Mitior, S. Mitis, S. Mutans og S. Sanguis, idet sistnevnte art for tiden er en foretrukket art.
Ytterligere passende mikroorganismer som kan svekkes og transformeres ifølge oppfinnelsen, er kjent. Det kan henvises til Davis et al., Microbiology (Harper & Row, annen utgave, 1973).
Ved en foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen anvendes Aro" stammen av S. typhimurium, som trenger to metabolitter som ikke finnes i pattedyr-vev, PABA og 2,3-DHB. Som et resultat dør de inokulerte bakterier etter flere generasjoner av mangel på disse metabolitter. Se Hoiseth og Stocker, anført ovenfor.
Det skal bemerkes at den ikke-virulente aro" Salmonella typhimurium SL3261 hvori et plasmid inneholdende det struk-turelle gen som koder for serotype-5M-protein-antigenet er blitt transformert, uttrykker hele M5-proteinmolekylet, hvilken ekspresjon nesten_utelukkende er begrenset til cytoplasmaområdet hos S. typhimurium. Det er et unikt og uventet aspekt ved denne oppfinnelse at et immunogent og beskyttende overflateantigen såsom streptokokk-M-proteinantigenet uttrykkes i cytoplasma hos den ikke-virulente vertsbakterie.
Den transformerte vert hvor nukleotidsekvensen finnes etter replikasjon behøver ikke å være heterolog med hensyn til nukleotidsekvensen, heller ikke behøver sekvensen være heterolog med hensyn til mikroorganismene.
Det har blitt vist at a) peroral administrering av opp til 1,65 x IO<9> mutant ikke-virulent salmonella inneholdende plasmidet pMK2 07 som koder for serotype 5-streptokokk-M-protein, tolereres godt av mus; b) plasmid pMK207 var ytterst stabilt både in vitro og in vivo; c) i musene som fikk den høyeste dose (IO<9>) av bakterier, oppholdt mikroorganismene seg i leveren så lenge som tre uker uten sykdomseffekter; d) musene som var immunisert oralt med ikke-virulent transformert salmonella som uttrykte serotype-5-streptokokk-M-proteinantigen-genet, utviklet opsoniske serumantistoffer så tidlig som tre uker mot serotype-M5-streptokokker; og e) de immuniserte mus var fullstendig beskyttet etter tre uker mot intraperitoneale angrepsmaterialer av de homologe serotype-M5-(men ikke de heterologe serotype M24-) streptokokker. Det er bemerkelsesverdig at det ikke observeres noen kryssreaktiv immunitet når preparatet administreres oralt. Den cyto-plasmiske ekspresjon av M-proteinantigenet i den ikke-virulente bakterie er særlig fordelaktig for denne orale administrering. Antigenet beskyttes i cytoplasma hos den ikke-virulente bakterie mot syrene i magesekken og andre øde-leggende midler inntil den ikke-virulente celle dør og frigir antigenet, vanligvis i tynntarmen, det foretrukkede sted for tilveiebringelse av antigenene.
Immunogene polypeptider fremstilt ifølge oppfinnelsen innbefatter syntetiske oligopeptider som kopierer områder i M-proteinmolekylene som mangler autoimmun-epitoper, som beskrevet i US-patent nr. 4 284 537 utstedt til E. Beachey 18. august 1981, US-patent nr. 4 454 121 utstedt til E. Beachey 12. juni 1984, US-patent nr. 4 521 334 utstedt til E. Beachey 4. juni 1985, US-patent nr. 4 597 967 utstedt til E. Beachey 1. juli 1986, US-patentsøknad nr. 739 963 tilhørende E. Beachey et al., inngitt 31. mai 1985, US-patentsøknad nr.
839 750 tilhørende E. Beachey et al., inngitt 14. mars 1986 og US-patentsøknad nr. 858 436 tilhørende E. Beachey et al. inngitt 1. mai 1986, alle anført ovenfor og medtatt som referanse.
Kapasiteten hos serotype M24-polypeptider som bærer for en høyst multivalent vaksine, utprøves med andre serotype-M-polypeptid-fragmenter.
En fremgangsmåte har vært å klone i vertsorganismen, sammen med det M-protein-eksprimerende plasmid, et plasmid som uttrykker antigenet hos en tredje bakterie-art. Spesielt er et pSH-2-plasmid klonet fra CSH50-stammen av E. coli blitt klonet i Sal. typhimurium slik at verten uttrykte et E.coli-overflateantigen på 29 kilodalton som frembringer Fim H-antiadhesive antistoffer. Disse antiadhesive antistoffer er ikke bare effektive mot E. coli, de er også effektive mot andre gramnegative bakterier.
Andre fordeler som er karakteristiske for oppfinnelsen, vil fremgå av de ikke-begrensende eksempler som følger.
Eksempel 1
TRANSFORMASJON AV IKKE-VIRULENT VERTSBAKTERIE
FOR EKSPRESJON AV STREPTOKOKK- M- PROTEIN
aro""<s>tammen av Salmonella typhimurium SL3261, utviklet av Stocker og Hoiseth (omtalt ovenfor) ble valgt fordi denne mutante form av mikrobiell agens kan invadere uten at den forårsaker sykdom. Denne mutante stamme oppviser en ernæringsmarkør både for p-aminobenzosyre (PABA) og 2,3-dihydrobenzosyre (DHB). Se Stocker og Hoseith, omtalt ovenfor.
M5-proteinantigen-strukturgenet (smp 5) ble klonet og uttrykt i E. coli LE392 som beskrevet av Kehoe et al., "Cloning and Genetic Analysis of Serotype 5M Protein Determinant of Group A Streptococci: Evidence for Multiple Copies of the M5 Determinant in the Streptococcus pyogenes Genome", Infect Immun., vol. 48, s. 190-197 (1985) og Poirer et al., "Expression of Protective and Cardiac Tissue Cross-Reactive Epitopes of Type 5 Streptococcal M Protein in Escherichia coli", Infect. Immun. vol. 48, s. 198-203 (1985), som begge er medtatt i det foreliggende som referanse.
Plasmidet pMK2 07 ble isolert, renset og transformert først til en rm+-stamme LB5000 av Sal. typhimurium, som beskrevet av Bullas og Ryo, "Salmonella typhimurium LT2 Strains which are
r-m+ for all Three Cromosomally Located Systems of DNA Restriction and Modification", J. Bacteriol., vol. 156, s.
471-474 (1983) og Lederberg og Cohen, "Transformation of Salmonella typhimurium by Plasmid Deoxyribonucleic Acid", J. Bacteriol., vol. 119, s. 1072-1074 (1974), som begge er medtatt i det foreliggende som referanse. Plasmidet som ble isolert og renset fra LB5000, ble deretter anvendt for transformering av aro"<s>al. typhimurium SL32 61 ved anvendelse av de samme ovenfor omtalte fremgangsmåter som er beskrevet av Lederberg og Cohen og Bullas og Ryo.
De transformerte LB5000 og SL3261 uttrykte hele M5-proteinmolekylet som vist ved "Western blot"-analyse av hele cel-lelysater (Fig. 1, felt 1 og 2). Den typiske triplett av M5-protein (Se Poirer et al. og Kehoe et al, omtalt ovenfor) vandret som bånd Mr 59, 56 og 54k. Foreløpige undersøkelser utformet for bestemmelse av plasseringen av M5-proteinet uttrykt av Sal. typhimurium SL 3261 anga at det rekombinante protein nesten utelukkende var begrenset til cytoplasmaområdet. M5-proteinet ble uttrykt på en stabil måte av SL3261 selv i fravær av antibiotisk press, d.v.s. at ekspresjonen var tydelig etter gjentatte underkulturer i løpet av fem dager, hvilket representerer ca. 35 generasjoners vekst (Fig. 1, felt 3-8).
Eksempel 2
MUSE-TOLERANSE OVERFOR TRANSFORMERT
SAL. TYPHIMURIUM SL 3261
Ved foreløpige undersøkelser ble BALB/c-mus angrepet med økende doser av SL3261-pMK207 for bestemmelse av om hvorvidt dyrene ville tolerere de transformerte organismer. Ingen av musene som fikk opp til maksimalt 1,65 x 10<9> organismer pr. oral dose ble verken syke eller døde. Ved 1, 3, 5 og 10 uker etter inokulering ble to mus fra hver doseringsgruppe ofret, og deres lever, milt og tarmer dyrket for å få SL3261-pMK207 på McConkey's agar inneholdende 50 mg/ml kanamycinsulfat og 10 mg/ml av hver av PABA og DHB. Ikke-laktose-fermenterende kolonier kunne isoleres etter bare én uke fra de mus som fikk 10<6> organismer eller mer, og etter bare tre uker, fra dem som fikk IO<9> organismer (Tabell 1). Ingen isolater ble utvunnet etter tre uker. Koloniene som ble isolert etter tre uker, uttrykte et intakt M5-protein<v>, hvilket antyder at smp5 var stabilt in vivo (Fig. 1, felt 9). Seraene etter 1, 3, 5, 9, 10, 15 og 20 uker fra inokulering av musene oralt viste seg å oppvise antistoffer mot 5M-proteintype og streptokokktype 5 ved henholdsvis ELISA og opsoniserings-forsøk (Tabell 2). Spyttet fra mus 2 0 uker etter immunisering ble også vist å ha anti-M5-protein-antistoffer, hovedsakelig av IgA-klassen (Tabell 3).
Eksempel 3
En gruppe mus ble inokulert oralt med to doser SL32 61-pMK207 og angrepet 22 dager etter den første dose med streptokokker type 5 eller 24, eller den virulente moderbakterie Sal. typhimurium 1344 (Tabell 3). Som det lett vil kunne sees av resultatene, ble de mus som fikk den M5-eksprimerende Sal. typhimurium-mutant, fullstendig beskyttet mot et intraperitonealt angrepsmateriale av streptokokktype 5, men ikke mot streptokokktype 24. Kontrollmus som var angrepet intraperitonealt med den virulente SL1344-Sal. typhimurium, ble også beskyttet. De type 5-angrepne mus ble beskyttet mot en dose som oversteg LD50 1 00 ganger (Tabell 4) . Denne beskyttelse mot parenteralt angrepsmateriale ved streptokokktype 5 angir at den oppnådde immunitet er systemisk.
TABELL 4
Angrep ved intraperitoneal injeksjon av streptokokker M type 5 og type 24 eller S. typhimurium SL1344 i BALB/c-mus immunisert oralt<1> med levende aro" S.typhimurium transformert med pMK 2 07 som uttrykker protein type 5 M.
En gruppe BALB/c-mus som var blitt immunisert oralt med SL3261-pMK207, ble angrepet intranasalt med streptokokker type 5 eller 24, eller den virulente moderbakterie Sal. typhimurium SL13 44. Som det vil kunne sees av Tabell 5, var bare de mus som ble immunisert oralt med SL3261-pMK207, i stand til å overleve et intranasalt angrep med en dose av homologe organismer som ellers var i stand til å drepe alle immuniserte dyr. Videre er den beskyttelse som gis ved Sal. typhimurium SL3261 som uttrykker rekombinant M5-protein, M-typespesifikk som vist ved den manglende evne hos intranasalt angrepne mus til å tolerere streptokokker M type 24. Det faktum at mus var upåvirkelige overfor angrepsmaterialer ved intranasal inokulering, antydet at oral immunisering med M5-protein-eksprimerende Sal. typhimurium SL3261, var tilstrekkelig til å gi lokal immunitet.
TABELL 5
Angrep ved intranasal inokulering av streptokokker M type 5 og type 24 eller S. typhimurium SL 1344 i BALB/c-mus immunisert oralt<1> med levende aro" S. typhimurium transformert med pMK207 som uttrykker proteintype 5 M.
De ovenfor beskrevne eksempler skal ikke forstås som begrensninger, men er kun illustrerende for oppfinnelsen. Oppfinnelsen omfatter også kombinasjoner av hvilket som helst antall immunogene polypeptid-sekvenser av hvilket som helst streptokokk-serotype-M-proteinantigen i en kovalent binding til en naturlig eller syntetisk bærer for dannelse av en multi valent vaksine som i store trekk er beskyttende mot serotype-M-streptokokker.
Oppfinnelsen omfatter også anvendelse av en M-protein-polypeptidsekvens som den bærer til hvilken de andre sekvenser er bundet kovalent, idet den fremkaller en opsonisk respons overfor hver av streptokokk-serotypene, hvis polypeptider er bundet til bæreren, såvel som streptokokk-serotypen, hvis polypeptid tjener som bærer.
Oppfinnelsen omfatter også koding for en nukleotidsekvens for et slikt multivalent polypeptid på et S. pyogenes-kromosom i området for M-protein-strukturgenet, kloning av den i plas-mider og transformering av plasmidene i ikke-virulent vertsbakterie. Syntetiske nukleotidsekvenser foretrekkes, men nukleotidsekvenser oppnådd fra levende bakterieceller kan også anvendes. Oppfinnelsen omfatter også kloning i ikke-virulent vertsbakterie som allerede er transformert for ekspresjon av immunogene polypeptider som fremkaller opsoniske responser overfor genetisk materiale med streptokokktype M-infeksjon for ekspresjon av immunogene polypeptider som fremkaller opsoniske responser overfor andre virulente bakteriearter og kovalent binding av begge polypeptid-typer. Oppfinnelsen omfatter også den resulterende svekkede ikke-virulente vertsorganisme, oralt administrerbar som en bredspektret vaksine som kan fremkalle opsoniske responser overfor mer enn én bakterieart.
En fagmann på området vil ikke ha noen vanskelighet med å utvikle forskjellige variasjoner når det gjelder fremgangsmåte og produkter som er innenfor oppfinnelsens prinsipp og rammen for kravene eller deres ekvivalent.
Claims (4)
1. Fremgangsmåte ved fremstilling av en vaksine for immunisering av et pattedyr mot streptokokkinfeksjoner ved å frembringe opsoniske antistoffer mot et Streptokokk M antigen uten å frembringe antistoffer som er kryssreaktive med menneskers hjertevevsantigener,
karakterisert ved at man transformerer en levende ikke-virulent Salmonella med en mutasjonsvariasjon som forårsaker en ernæringssvakhet med plasmid pMK207 som koder for et fullstendig Streptokokk M-protein antigen fra Streptococcus pyo<g>enes serotype 5, 6 eller 24, hvilken transformerte bakterie uttrykker antigenet intracellulært,
slik at antigenet etter administrering til pattedyret vil frigjøres fra den døende bakterie og frembringe opsoniske antistoffer mot antigenet.
2. Fremgangsmåte ifølae krav 1,
karakterisert ved at salmonellaen som transformeres er valgt fra gruppen bestående av artene S. paratyphi, S. schottmulleri, S. typhimurium, S. choleraesuis. S. montevideo, S. newport, S. typhi. S. enteritidis, S. gallilnarum og S. anatum.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at salmonellaen er typhimurium.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 3, karakterisert ved at typhimuriumet er en aro-stamme av SL 3 261.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/088,626 US5162226A (en) | 1987-08-24 | 1987-08-24 | Therapeutic compositions against streptococcal infections, transformed hosts, methods of immunization and genetically engineered products |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO883763D0 NO883763D0 (no) | 1988-08-23 |
| NO883763L NO883763L (no) | 1989-02-27 |
| NO174630B true NO174630B (no) | 1994-02-28 |
| NO174630C NO174630C (no) | 1994-06-08 |
Family
ID=22212456
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO883763A NO174630C (no) | 1987-08-24 | 1988-08-23 | Fremgangsmåte ved fremstilling av en vaksine mot streptokokkinfeksjoner |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5162226A (no) |
| EP (1) | EP0305279B1 (no) |
| JP (1) | JPH02420A (no) |
| AT (1) | ATE120487T1 (no) |
| AU (1) | AU631524B2 (no) |
| CA (1) | CA1341255C (no) |
| DE (1) | DE3853454T2 (no) |
| DK (1) | DK472988A (no) |
| FI (1) | FI97603C (no) |
| HU (1) | HU205263B (no) |
| NO (1) | NO174630C (no) |
| PT (1) | PT88329B (no) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6254874B1 (en) | 1995-04-13 | 2001-07-03 | President And Fellows Of Harvard College | Attenuated auxotrophic microorganisms having a combination of non-attenuating mutations and method for making same |
| US5846547A (en) * | 1996-01-22 | 1998-12-08 | Regents Of The University Of Minnesota | Streptococcal C5a peptidase vaccine |
| US6355255B1 (en) * | 1998-12-07 | 2002-03-12 | Regents Of The University Of Minnesota | Streptococcal C5a peptidase vaccine |
| US6399097B1 (en) | 1997-10-31 | 2002-06-04 | New Horizons Diagnostics Corporation | Composition for treatment of a bacterial infection of the digestive tract |
| US6406692B1 (en) | 1997-10-31 | 2002-06-18 | New Horizons Diagnostics Corp | Composition for treatment of an ocular bacterial infection |
| US6428784B1 (en) * | 1997-10-31 | 2002-08-06 | New Horizons Diagnostics Corp | Vaginal suppository for treating group B Streptococcus infection |
| US6399098B1 (en) | 1997-10-31 | 2002-06-04 | New Horizons Diagnostics Corp | Composition for treating dental caries caused by streptococcus mutans |
| US20020136712A1 (en) * | 1997-10-31 | 2002-09-26 | Fischetti Vincent | Bacterial phage associated lysing enzymes for the prophylactic and therapeutic treatment of colonization and infections caused by streptococcus pneumoniae |
| US7232576B2 (en) | 1997-10-31 | 2007-06-19 | New Horizons Diagnostics Corp | Throat lozenge for the treatment of Streptococcus Group A |
| US20030082110A1 (en) * | 1997-10-31 | 2003-05-01 | Vincent Fischetti | Use of bacterial phage associated lysing proteins for treating bacterial dental caries |
| US6432444B1 (en) | 1997-10-31 | 2002-08-13 | New Horizons Diagnostics Corp | Use of bacterial phage associated lysing enzymes for treating dermatological infections |
| US20030129146A1 (en) * | 1997-10-31 | 2003-07-10 | Vincent Fischetti | The use of bacterial phage associated lysing proteins for treating bacterial dental caries |
| US6277399B1 (en) * | 1997-10-31 | 2001-08-21 | New Horizon Diagnostics Corporation | Composition incorporating bacterial phage associated lysing enzymes for treating dermatological infections |
| US6056954A (en) | 1997-10-31 | 2000-05-02 | New Horizons Diagnostics Corp | Use of bacterial phage associated lysing enzymers for the prophylactic and therapeutic treatment of various illnesses |
| US20030129147A1 (en) * | 1997-10-31 | 2003-07-10 | Vincent Fischetti | Use of bacterial phage associated lysing proteins for treating bacterial dental caries |
| US6752988B1 (en) * | 2000-04-28 | 2004-06-22 | New Horizons Diagnostic Corp | Method of treating upper resiratory illnesses |
| US6423299B1 (en) | 1997-10-31 | 2002-07-23 | Vincent Fischetti | Composition for treatment of a bacterial infection of an upper respiratory tract |
| US20020127215A1 (en) * | 1999-09-14 | 2002-09-12 | Lawrence Loomis | Parenteral use of bacterial phage associated lysing enzymes for the therapeutic treatment of bacterial infections |
| US7063837B2 (en) * | 1999-09-14 | 2006-06-20 | New Horizons Diagnostics Corp | Syrup composition containing phage associated lytic enzymes |
| US7256265B2 (en) * | 1999-12-03 | 2007-08-14 | Regents Of The University Of Minnesota | Streptococcal C5a peptidase vaccine |
| AU2001259205A1 (en) * | 2000-04-28 | 2001-11-12 | New Horizons Diagnostic Corporation | The use of bacterial phage associated lysing enzymes for treating various illnesses |
| US6395504B1 (en) | 2000-09-01 | 2002-05-28 | New Horizons Diagnostics Corp. | Use of phage associated lytic enzymes for the rapid detection of bacterial contaminants |
| CA2427928A1 (en) * | 2000-11-02 | 2002-12-27 | New Horizons Diagnostics Corporation | The use of bacterial phage associated lytic enzymes to prevent food poisoning |
| US20040213765A1 (en) * | 2001-07-13 | 2004-10-28 | Vincent Fischetti | Use of bacterial phage associated lytic enzymes to prevent food poisoning |
| AU2002365223A1 (en) * | 2001-10-26 | 2003-09-02 | Id Biomedical Corporation Of Washington | Multivalent streptococcal vaccine compositions and methods for use |
| US7255867B2 (en) * | 2002-11-15 | 2007-08-14 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Vaccine |
| CN102203122A (zh) | 2008-11-05 | 2011-09-28 | 惠氏有限责任公司 | 用于预防β-溶血链球菌(BHS)疾病的多组分免疫原性组合物 |
| JP2015522692A (ja) | 2012-07-16 | 2015-08-06 | ファイザー・インク | 糖およびその使用 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2480779B2 (fr) | 1979-08-30 | 1986-07-18 | Anvar | Vecteur contenant une sequence nucleotidique de l'antigene de surface du virus de l'hepatite b et procede de fabrication d'une molecule immunogene mettant en oeuvre ce vecteur |
| US4735801A (en) * | 1982-09-07 | 1988-04-05 | Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University | Novel non-reverting salmonella live vaccines |
| US4550081A (en) * | 1980-05-19 | 1985-10-29 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University | Non-reverting salmonella |
| US4284537A (en) | 1980-07-03 | 1981-08-18 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Conjugate of streptococcal M protein peptide vaccine |
| US4666847A (en) | 1981-01-16 | 1987-05-19 | Collaborative Research, Inc. | Recombinant DNA means and method |
| WO1982003088A1 (en) * | 1981-03-09 | 1982-09-16 | Corp Cetus | Vaccines |
| US4625252A (en) | 1981-09-03 | 1986-11-25 | Basf Aktiengesellschaft | Guide system and magnetic tape cassette comprising such a system |
| US4597967A (en) * | 1982-07-27 | 1986-07-01 | The University Of Tennessee Research Corp. | Synthetic polypeptide fragments |
| US4521334A (en) | 1982-07-27 | 1985-06-04 | The University Of Tennesse Research Corporation | Synthetic polypeptide fragments |
| US4454121A (en) * | 1982-07-27 | 1984-06-12 | The University Of Tennessee Research Corporation | Synthetic peptides corresponding to antigenic determinants of the M protein of Streptococcus pyogenes |
| US4588585A (en) | 1982-10-19 | 1986-05-13 | Cetus Corporation | Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins |
| US4518584A (en) | 1983-04-15 | 1985-05-21 | Cetus Corporation | Human recombinant interleukin-2 muteins |
| US4919930A (en) * | 1983-06-10 | 1990-04-24 | University Of Tennessee Research Corporation | Synthetic M proteins-streptococci type 5 |
| US4784948A (en) * | 1983-08-10 | 1988-11-15 | The Rockefeller University | Production of streptococcal m protein immunogens and molecular probes |
| WO1985003521A1 (en) * | 1984-02-01 | 1985-08-15 | Enterovax Research Pty. Ltd. | Bacterial strains |
| US4666846A (en) | 1984-02-17 | 1987-05-19 | Eli Lilly And Company | Novel cloning vectors containing selectable genetic markers for use in streptomyces and related organisms |
-
1987
- 1987-08-24 US US07/088,626 patent/US5162226A/en not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-08-22 FI FI883876A patent/FI97603C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-08-22 CA CA000575374A patent/CA1341255C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-08-22 DE DE3853454T patent/DE3853454T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-22 AT AT88402132T patent/ATE120487T1/de active
- 1988-08-22 EP EP88402132A patent/EP0305279B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-23 AU AU21451/88A patent/AU631524B2/en not_active Expired
- 1988-08-23 HU HU884433A patent/HU205263B/hu not_active IP Right Cessation
- 1988-08-23 NO NO883763A patent/NO174630C/no unknown
- 1988-08-23 JP JP63209327A patent/JPH02420A/ja active Pending
- 1988-08-24 DK DK472988A patent/DK472988A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-08-24 PT PT88329A patent/PT88329B/pt not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3853454D1 (de) | 1995-05-04 |
| AU2145188A (en) | 1989-03-09 |
| EP0305279B1 (en) | 1995-03-29 |
| FI883876A (fi) | 1989-02-25 |
| FI97603C (fi) | 1997-01-27 |
| DE3853454T2 (de) | 1995-11-09 |
| PT88329A (pt) | 1989-06-30 |
| ATE120487T1 (de) | 1995-04-15 |
| AU631524B2 (en) | 1992-12-03 |
| HUT50048A (en) | 1989-12-28 |
| NO174630C (no) | 1994-06-08 |
| NO883763D0 (no) | 1988-08-23 |
| DK472988A (da) | 1989-02-25 |
| DK472988D0 (da) | 1988-08-24 |
| NO883763L (no) | 1989-02-27 |
| FI883876A0 (fi) | 1988-08-22 |
| EP0305279A1 (en) | 1989-03-01 |
| PT88329B (pt) | 1995-07-03 |
| CA1341255C (en) | 2001-06-19 |
| JPH02420A (ja) | 1990-01-05 |
| HU205263B (en) | 1992-04-28 |
| FI97603B (fi) | 1996-10-15 |
| US5162226A (en) | 1992-11-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO174630B (no) | Fremgangsmaate ved fremstilling av en vaksine mot streptokokkinfeksjoner | |
| Poirier et al. | Protective immunity evoked by oral administration of attenuated aroA Salmonella typhimurium expressing cloned streptococcal M protein. | |
| EP0625043B1 (en) | Recombinant multivalent m protein vaccine | |
| Vodkin et al. | A heat shock operon in Coxiella burnetti produces a major antigen homologous to a protein in both mycobacteria and Escherichia coli | |
| EP0618813B1 (en) | Antigen of hybrid m protein and carrier for group a streptococcal vaccine | |
| Sjöstedt et al. | Humoral and cell-mediated immunity in mice to a 17-kilodalton lipoprotein of Francisella tularensis expressed by Salmonella typhimurium | |
| JP5566684B2 (ja) | Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅに対する、組換え毒素Ａ／毒素Ｂワクチン | |
| JPH08503602A (ja) | 弱毒化細菌における組換え融合タンパク質の発現 | |
| Curtiss III et al. | Avirulent Salmonella typhimurium Δcya Δcrp oral vaccine strains expressing a streptococcal colonization and virulence antigen | |
| FI104638B (fi) | Menetelmä flagelliinifuusioproteiinin, sitä koodaavan geenin ja mikro-organismin valmistamiseksi | |
| US5124153A (en) | Therapeutic compositions against streptococcal infections, transformed hosts, methods of immunization and genetically engineered products | |
| JP2577280B2 (ja) | 組換えポックスウイルス及び連鎖球菌ｍタンパク質ワクチン | |
| JP7121016B2 (ja) | 抗原に対する防御免疫の誘導 | |
| CN103893747A (zh) | 增强针对艾美球虫属的免疫反应的组合物和方法 | |
| JP2011502165A (ja) | 鞭毛細菌に対する免疫応答を強化する組成物および方法 | |
| JPH0866198A (ja) | 肺炎球菌の表面タンパクａのエピトープ領域 | |
| EP0527724B1 (en) | Compositions and treatments for pneumonia in animals | |
| US5364774A (en) | Treponema hyodysenteriae vaccine | |
| ES2224097T3 (es) | Suministro y expresion de una proteina de superficie hibrida sobre la superficie de bacterias gram positivas. | |
| US5288617A (en) | Method of producing an antigenic preparation | |
| US20050025787A1 (en) | Transformed bacteria producing CS6 antigens as vaccines | |
| das Graças Luna et al. | Salmonella flagellin fused with a linear epitope of colonization factor antigen I (CFA/I) can prime antibody responses against homologous and heterologous fimbriae of enterotoxigenic Escherichia coli | |
| AU590230B2 (en) | Improved antigenic preparation | |
| Curtiss et al. | Stable recombinant avirulent Salmonella vaccine strains | |
| CN116751307A (zh) | 大肠杆菌多表位嵌合蛋白及其应用 |