NO171417B - Middel for paavisning og bestemmelse av peroksydase-aktivitet, en fremgangsmaate for fremstilling av midlet samt detsanvendelse - Google Patents
Middel for paavisning og bestemmelse av peroksydase-aktivitet, en fremgangsmaate for fremstilling av midlet samt detsanvendelse Download PDFInfo
- Publication number
- NO171417B NO171417B NO864775A NO864775A NO171417B NO 171417 B NO171417 B NO 171417B NO 864775 A NO864775 A NO 864775A NO 864775 A NO864775 A NO 864775A NO 171417 B NO171417 B NO 171417B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- penicillin
- agent
- tetraalkylbenzidine
- solution
- determination
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 6
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 21
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims abstract description 20
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims abstract description 20
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 4
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical group CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 12
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 2
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 3
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 3
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 2
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- WOHLSTOWRAOMSG-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydro-1,3-benzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SCNC2=C1 WOHLSTOWRAOMSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 6-aminopenicillanic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H]([NH3+])C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 0.000 description 1
- NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 6beta-amino-penicillanic acid Natural products OC(=O)C1C(C)(C)SC2C(N)C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical class OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 1
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930195708 Penicillin V Natural products 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYNRGZULARUZCC-UHFFFAOYSA-N [4-(4-azaniumyl-3,5-dimethylphenyl)-2,6-dimethylphenyl]azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 NYNRGZULARUZCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 108010046301 glucose peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000002535 lyotropic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002444 monopotassium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000015861 monopotassium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002524 monosodium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000018342 monosodium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000002352 nonmutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007248 oxidative elimination reaction Methods 0.000 description 1
- VOUGEZYPVGAPBB-UHFFFAOYSA-N penicillin acid Natural products OC(=O)C=C(OC)C(=O)C(C)=C VOUGEZYPVGAPBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940056367 penicillin v Drugs 0.000 description 1
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 1
- BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N phenoxymethylpenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)COC1=CC=CC=C1 BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- WKZJASQVARUVAW-UHFFFAOYSA-M potassium;hydron;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate Chemical compound [K+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC([O-])=O WKZJASQVARUVAW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001922 sodium perborate Drugs 0.000 description 1
- YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M sodium;oxidooxy(oxo)borane Chemical compound [Na+].[O-]OB=O YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N urea hydrogen peroxide Chemical compound OO.NC(N)=O AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/725—Haemoglobin using peroxidative activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/10—Benzidines
- C12Q2326/12—3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine, i.e. TMB
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/904—Oxidation - reduction indicators
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Dram (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår et middel for påvisning og bestemmelse av peroksydase-aktivitet, inneholdende et tetraalkylbenzidin eller et salt derav, et peroksyd eller et hydrogenperoksyddannende system og en buffer.
Oppfinnelsen angår videre en fremgangsmåte for fremstilling av dette middel og oppfinnelsen angår til slutt anvendelse av midlet i analytiske fremgangsmåter.
En vesentlig forutsetning for innføring av enzymimmuno-analyser, som med hensyn til deres påvisningsfølsomhet er like gode som radioimmunologiske metoder, er disponerbarheten av stabile markørenzymer og tilsvarende høyfølsomme farve-dannelsesreagenser, hvorved den katalytiske aktivitet av disse markørenzymer kunne registreres i måleteknisk enkel måte. Spesielt egnede markørenzymer er oksidoreduktasene glukoseoksydase og peroksydase. Peroksydase-reaksJoner hører generelt til de hyppigst anvendte enzymatiske påvirknlngs-reaksjoner. I alle, for eksempel i "Methods of Enzymatic Analyses", H.U.Bergmeyer, Ed., 3. utgave, vol. 1, s.210-221, Verlag Chemie, Weinheim (1983), omtalte fremgangsmåter, beror som glukosebestemmelsen ved hjelp av glukoseoksydase, på støkiometrisk frembringelse av hydrogenperoksyd. Dette kan derefter i en av peroksydase-katalysert oksydasjon av et farveløst substrat omsettes til et farveprodukt som enkelt kan kvantifiseres spektrofotometrisk.
For denne peroksydase-katalyserte reaksjon egnede kromogene systemer er derfor undersøkt og omtalt i stort antall (se Bergmeyer). For bestemmelse av peroksydase-antiviteten i enzymimmuno-analyser oppfyller bare få kravene, spesielt med hensyn til påvisningsfølsomheten. Generelt skulle et kromogent substrat muligjøre en høy omsetningshastighet og føre til et farvestabilt produkt med en høy molar ekstink-sjonskoeffisient. Videre skulle det foretrekkes stoffer, hvis håndtering ikke medfører sunnhetsmessig risiko. I kommer-sielle analysesett for på peroksydase basert enzymimmuno-analyser kommer det fremfor alt til anvendelse o-fenyldiamin (OPD) og 2,2'-azinodi-(3-etylenbenzotiazolinsulfonat-6)
(ABTS). Både OPD og ABTS er, som de fleste peroksydasesubstrater, mutagene. En gruppe av de hyppigst anvendte substrater er de av benzidin-typen, hvortil også tetrametylbenzidin (TMB) hører. TMB er en sikrere ikke-mutagen erstatning for karcinogene peroksydasesubstrater av benzidin-typen som benzidin, diaminobenzidin og lignende. I tallrike undersøkelser fantes det ingen henvisning til mutagene egenskaper av dette benzidinderivatet ("Tetrahedron" 30, 3299 (1976), "Cancer Lett", 1, 39 (1975), "J. Forensic Sei." 21, 816 (1976). TMB ble efter 1974 anvendt av forskjellige forskere til bestemmelse av pseudoperoksydase-aktiviteten av hemoglobin eller cytokrom P 450 og allerede av Liem et al., "Anal. Biochem." 98, 388-393 (1979) til påvisning av peroksydaseaktivitet i immunkomplekser ved immunperoksydase-farveteknikken. Disse forfattere henviser i deres konklusjon på side 392 til de gode farveegenskaper, imidlertid også til den lille oppløselighet av TMB i vanligvis anvendte buffer-systemer og til den oksydative spalting av TMB.
En ulempe ved de hittil anvendte kromogensystemer under anvendelse av TMB for påvisning av peroksydase er den lave stabilitet av TMB i bruksferdig blanding. Også i fravær av peroksydase bevirker hydrogenperoksyd allerede i løpet av få timer en farvedannelse som gjør substratoppløsningene ubrukelige for anvendelse i enzymimmuno-analyse på grunn av den høye blindverdi.
Det bestå derfor det behov for å finne et til bestemmelse av peroksydase egnet tetraalkylbenzidinholdig middel som ikke har de ovennevnte ulemper. Et slikt middel, dets fremstilling og anvendelse er oppfinnelsens gjenstand.
I henhold til dette angår oppfinnelsen et middel av den innledningsvis nevnte art og dette middel karakteriseres ved at det inneholder penicillin eller et av dets ved sur hydrolyse dannede hydrolysater.
Oppfinnelsen angår også som nevnt en fremgangsmåte for fremstilling av dette middel og denne fremgangsmåte karakteriseres ved at et tetraalkylbenzidin eller et salt derav bringes i oppløsning ved en pH-verdi av 1,5 til 2 og at det til denne oppløsning settes et penicillin eller et ved sur hydrolyse av penicilinet dannet hydrolysat i en konsentrasjon på 2,7 pmol/1 til 2,7 mmol/1, beregnet på slutt-volumet, og at denne oppløsning blandes sammen med en ytterligere oppløsning som inneholder peroksyd og buffere.
Til slutt angår oppfinnelsen også anvendelsen av dette middel i analytiske fremgangsmåter hvori det påvises eller bestemmes peroksydase- eller pseudoperoksydaseaktivitet.
Overraskende ble det således funnet at et med hensyn til stabilitet vesentlig forbedret middel av tetraalkylbenzidin kan fåes, idet en oppløsning som inneholder denne forbindelse eller et av dens derivater, blandes med penicillin eller med penicillinderivater, som oppstår ved sur hydrolyse av penicillin i en konsentrasjon mellom 2,7 pmol/1 og 2,7 mmol/1, fortrinnsvis mellom 13,5 jjmol/1 og 135 pmol/l og ved blanding med en vandig buffer, som inneholder en egnet hydrogenperoksyd-konsentrasjon innstilt på en pH-verdi mellom pH 2,5 og 6. Mens midler uten en slik tilsetning viser en ikke-akseptabel økning av reagensblindverdien i løpet av en til flere timer, økes ved tilsetning av penicillin eller -derivater holdbarheten til varigheten på en til flere uker.
Oppfinnelsen vedrører derfor som nevnt et middel i form av en flytende tilberedning til påvisning og til bestemmelse av peroksydase inneholdende i en overveiende vandig oppløsning tetraalkylbenzidin eller dets salt, penicillin eller dets ved svakt sur hydrolyse fra det biocykliske grunnlegeme av penicillin dannede avbygningsprodukter, for eksempel penicillinsyre eller 6-aminopenicillansyre eller også det Ikke cykliske penlcillinamln med et Innhold på 2,7 ymol/1 inntil 2,7 mmol/1, peroksyder som substrat for peroksydase med et innhold av 0,5 til 50 mmol/1 og bufferstoffer.
Midlet kan som nevnt fremstilles ved oppløsning av et fast preparat, for eksempel et lyofilisat, et granulat eller en
tablett, idet de for den flytende tilberedning anvendte komponenter tetraalkylbenzidin, penicillin eller dets avbygningsprodukter, peroksydene og bufferstoffene er inne-holdt i mengdeforholdene at, ved oppløsning i et bestemt volum overveiende vandig oppløsningsmiddel, foreligger komponentene i de nevnte konsentrasjoner. De faste preparater kan i tillegg dessuten inneholde tilsetninger som glide-midler, fyllstoffer og sprengmidler, for eksempel polyetylen-glykol, urinstoff og bikarbonater.
Som tetraalkylbenzidiner er fremfor alt slike anvendbare, som inneholder en til tre karbonatomer i alkyldelen, fortrinnsvis 3,3', 5,5'-tetrametylbenzidin (TMB) eller dets dihydroklorid. Som penicillin anvendes fortrinnsvis penicillin G og V. Som peroksyder er det egnet natriumperborat, hydrogenperoksyd i flytende form eller som fast urinstoffaddukt eller også et hydrogenperoksyd-genererende system bestående av G-glukose og glukoseoksydase, idet det innstilles en konsentrasjon på 0,5 til 10 mmol/1. Som bufferstoffer foretrekkes lyotrope stoffer som citrater og acetater i konsentrasjoner på 5 til 100 mmol/1.
Ved fremstillingen av et middel i flytende form oppløses tetralkylbenzidin i en første sur oppløsning av fortynnet saltsyre eller av maursyre med en pH-verdi fra 1,5 til 2,0. Fortrinnsvis tilsettes til denne oppløsning penicillinet eller dets ver sur hydrolyse dannede nedbrytningsprodukter.
En andre, mindre sur oppløsning fremstilles ved oppløsning av peroksydene eller ved deres innføring når det anvendes en oppløsning av hydrogenperoksyd. Til bufring anvendes eksempelvis eddiksyre eller mononatrium- henholdsvis monokalium-citrat, hvis pH-verdi kan reguleres med natrium-hydroksyd til mellom 3 og 6. De nevnte nedbrytningsprodukter av penicillinet tilsettes til denne andre oppløsning, når denne eller et penicillin enda ikke var blitt tilsatt den surere oppløsning.
Ved sammenblanding av de to oppløsninger i et bestemt forhold fåes det bruksferdige preparat.
Oppfinnelsen skal forklares nærmere ved hjelp av noen eksempler.
Eksempler
1. Fremstilling av et bruksferdig TMB- substratpreparat
Stamoppløsning 1: TMB-dihydroklorid ble under omrøring
oppløst i en konsentrasjon på 5 g/l, det vil si av 16 mmol/1 i dobbeltdestillert vann og innstilt med 5 normal saltsyre til pH 1,5. Til denne oppløsning ble det satt penicillin G under omrøring i en sluttkonsentrasjon på 200 mg/l, det vil si på 0,56 mmol/1.
Til sammenligning fremstilte man stamoppløsning 1 uten tilsetning av penicillin.
Stamoppløsning 2: Til 900 ml dobbeltdestillert vann ble det satt 1,4 ml iseddik, 1,5 ml 1 normal NaOH og 250 mg det vil si 3 mmol B^Og urinstoff-hydrogenperoksyd-addukt. Efter fullstendig oppløsning ble det oppfylt med dobbeltdestillert vann til 1 liter.
Bruksoppløsning: En volumdel av stamoppløsning 1 og 10 volumdeler av stamoppløsning 2 ble blandet med hverandre. Denne oppløsning viste ved 650 nm en optisk densitet på 0,025. Efter tilsetning av 5 ganger volumet av 0,5 normal svovelsyre utgjorde den ved 450 nm målte ekstinksjon 0,008.
2. Holdbarhetsundersøkelse av bruksoppløsningen
TMB-bruksoppløsningen ble fremstilt ifølge eksempel 1 og lagret i kjøleskap ved 4-8°C. På samme måte ble det fremstilt en bruksferdig oppløsning ifølge eksempel 1, imidlertid uten tilsetning av penicillin G, som også ble lagret. Efter definert lagringsvarighet ble det tatt ut aliquoter av disse bruksoppløsninger, blandet med 5 ganger volumet av 0,5 normal svovelsyre og ekstinksjonen registrert ved 450 nm (TMB). Resultatene er oppstilt i følgende tabell.
Claims (6)
1.
Middel for påvisning og bestemmelse av peroksydaseaktivitet inneholdende et tetraalkylbenzidin eller et salt derav, et peroksyd eller et hydrogenperoksyd-dannende system og en buffer, karakterisert ved at midlet inneholder penicilin eller et av dets ved sur hydrolyse dannede hydrolysater.
2.
Middel ifølge krav 1, karakterisert ved at tetraalkylbenzidinet inneholder en til tre karbonatomer i alkyldelen.
3.
Middel ifølge krav 1, karakterisert ved at tetraalkylbenzidinet er 3,3', 5,5'-tetrametylbenzidin.
4.
Fremgangsmåte til fremstilling av et middel for påvisning og bestemmelse av peroksydase-aktivitet, karakterisert ved at et tetraalkylbenzidin eller et salt derav bringes i oppløsning ved en pH-verdi av 1,5 til 2 og at det til denne oppløsning settes et penicillin eller et ved sur hydrolyse av penicilinet dannet hydrolysat i en konsentrasjon på 2,7 jjmol/1 til 2,7 mmol/1, beregnet på slutt-volumet, og at denne oppløsning blandes sammen med en ytterligere oppløsning som inneholder peroksyd og buffere.
5.
Fremgangsmåte ifølge krav 4, karakterisert ved at oppløsningen inneholdende tetraalkylbenzidinet eller et salt derav først blandes med oppløsningen inneholdende peroksyd og buffere og at derefter penicillin eller et ved sur hydrolyse av penicillinet oppnådd hydrolysat, tilsettes.
6.
Anvendelse av midlet ifølge krav 1 i analytiske fremgangsmåter, hvori det påvises eller bestemmes peroksydase- eller pseudoperoksydase-aktivitet.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853541979 DE3541979A1 (de) | 1985-11-28 | 1985-11-28 | Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet mit stabilisator, verfahren zur herstellung und seine verwendung |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO864775D0 NO864775D0 (no) | 1986-11-27 |
| NO171417B true NO171417B (no) | 1992-11-30 |
| NO171417C NO171417C (no) | 1993-03-10 |
Family
ID=6287014
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO864775A NO171417C (no) | 1985-11-28 | 1986-11-27 | Middel for paavisning og bestemmelse av peroksydase-aktivitet, en fremgangsmaate for fremstilling av midlet samt detsanvendelse |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4891314A (no) |
| EP (1) | EP0224813B1 (no) |
| JP (1) | JPH0722519B2 (no) |
| AT (1) | ATE56991T1 (no) |
| AU (1) | AU611629B2 (no) |
| CA (1) | CA1291401C (no) |
| DE (2) | DE3541979A1 (no) |
| DK (1) | DK571186A (no) |
| ES (1) | ES2018154B3 (no) |
| FI (1) | FI85504C (no) |
| GR (1) | GR3001137T3 (no) |
| MX (1) | MX170909B (no) |
| NO (1) | NO171417C (no) |
| PT (1) | PT83825B (no) |
| ZA (1) | ZA868981B (no) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3541978A1 (de) * | 1985-11-28 | 1987-06-04 | Behringwerke Ag | Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet, verfahren zur herstellung und seine verwendung |
| US4895798A (en) * | 1987-11-13 | 1990-01-23 | Miles, Inc. | Test devices for determination of occult blood |
| IE68446B1 (en) * | 1989-07-19 | 1996-06-12 | Noctech Technology Limited | A colour stable chromogen composition |
| US5225325A (en) * | 1990-03-02 | 1993-07-06 | Ventana Medical Systems, Inc. | Immunohistochemical staining method and reagents therefor |
| US5532138A (en) * | 1990-04-26 | 1996-07-02 | Behringwerke Ag | Method and kits for determining peroxidatively active catalysts |
| US5215885A (en) * | 1990-10-23 | 1993-06-01 | Beckman Instruments, Inc. | Stable two-part chromogen substrate |
| US5206150A (en) * | 1990-10-26 | 1993-04-27 | University Of Kentucky Research Foundation | Composition of, method of producing and method of using a stabilized formulation for assaying peroxidase activity |
| DE4037776A1 (de) * | 1990-11-28 | 1992-06-04 | Behringwerke Ag | Waschloesung fuer festphasen-immunometrisches verfahren, die einen komplexbildner fuer metallionen enthaelt und ihre verwendung |
| DE4037764A1 (de) | 1990-11-28 | 1992-06-04 | Behringwerke Ag | Waschloesung fuer festphasen-immunometrische verfahren, die stabilisatoren fuer das markierungssystem enthaelt und ihre verwendung |
| GB9027131D0 (en) * | 1990-12-14 | 1991-02-06 | Rice Evans Catherine | Diagnostic test |
| US5332662A (en) * | 1992-07-31 | 1994-07-26 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Methods for determining peroxidatively active substances |
| US5447868A (en) * | 1993-09-14 | 1995-09-05 | Propper Manufacturing Co. Inc. | Method, reagent and kit for the detection of fecal occult blood |
| US5650284A (en) * | 1995-03-14 | 1997-07-22 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Enhancing the sensitivity of immunoassay procedures by use of antibodies directed to the product of a reaction between probe labels and assay substrates |
| US5925532A (en) * | 1995-03-14 | 1999-07-20 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Enhancing the sensitivity of immunoassay procedures by use of antibodies directed to the product of a reaction between probe labels and assay substrates |
| DE19544150C2 (de) * | 1995-11-16 | 2002-06-13 | Seramun Diagnostica Gmbh | Stabile 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin-Lösungen |
| US5804404A (en) * | 1996-01-22 | 1998-09-08 | Dako Corporation | Stable substrate-chromogen solutions for enenzyme activity detection |
| CN1114830C (zh) * | 1997-06-18 | 2003-07-16 | 金红军 | 过氧化物酶测定用显色底物组合物 |
| EP1000358B1 (en) | 1997-07-15 | 2003-04-02 | Kem-En-Tec A/S | Pre-stained 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine substrates for the detection of enzyme activity |
| CN101354354B (zh) * | 2007-07-23 | 2010-06-23 | 深圳市生科源技术有限公司 | 一种过氧化物酶测定用显色液体系及其制备方法 |
| US9393249B2 (en) | 2008-03-26 | 2016-07-19 | Institute Of Technology Sligo | Antimicrobial composition |
| CN103712982B (zh) * | 2013-12-13 | 2016-02-03 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种高灵敏度的tmb显色液及其制备方法 |
| CN103884563B (zh) * | 2014-04-10 | 2016-08-17 | 上海太阳生物技术有限公司 | 过氧化物酶（pox）染色液（化学染色法） |
| CN105116141B (zh) * | 2015-07-02 | 2016-09-14 | 深圳市卫光生物制品股份有限公司 | 一种单组份tmb显色液及其制备方法 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2460903C3 (de) * | 1974-12-21 | 1981-12-24 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Neue 3,3',5,5'-Tetraalkylbenzidine |
| JPS5263794A (en) * | 1975-11-21 | 1977-05-26 | Shionogi Seiyaku Kk | Test piece for latent blood |
| US4077772A (en) * | 1977-05-31 | 1978-03-07 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Method for the determination of hemoglobin in trace amounts |
| US4340394A (en) * | 1979-11-13 | 1982-07-20 | Miles Laboratories, Inc. | Stabilization of benzidine-type indicators with various enhancers |
| US4503143A (en) * | 1982-08-20 | 1985-03-05 | Btc Diagnostics Limited Partnership | Enzyme immunoassay with two-part solution of tetramethylbenzidine as chromogen |
| US4504579A (en) * | 1982-11-08 | 1985-03-12 | Abbott Laboratories | Stabilized peroxidase compositions |
| ZA841078B (en) * | 1983-03-01 | 1984-09-26 | Warner Lambert Co | Peroxidase activity detection composition |
| EP0121137A1 (en) * | 1983-04-04 | 1984-10-10 | Combustion Engineering, Inc. | Seal welded tube sleeve |
| US4789630A (en) * | 1985-10-04 | 1988-12-06 | Cetus Corporation | Ionic compounds containing the cationic meriquinone of a benzidine |
| DE3541978A1 (de) * | 1985-11-28 | 1987-06-04 | Behringwerke Ag | Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet, verfahren zur herstellung und seine verwendung |
-
1985
- 1985-11-28 DE DE19853541979 patent/DE3541979A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-11-21 ES ES86116138T patent/ES2018154B3/es not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-21 DE DE8686116138T patent/DE3674549D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-21 EP EP86116138A patent/EP0224813B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-21 AT AT86116138T patent/ATE56991T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-11-26 FI FI864815A patent/FI85504C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-11-26 US US06/935,332 patent/US4891314A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-27 ZA ZA868981A patent/ZA868981B/xx unknown
- 1986-11-27 NO NO864775A patent/NO171417C/no not_active IP Right Cessation
- 1986-11-27 AU AU65779/86A patent/AU611629B2/en not_active Ceased
- 1986-11-27 MX MX004450A patent/MX170909B/es unknown
- 1986-11-27 DK DK571186A patent/DK571186A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-11-27 PT PT83825A patent/PT83825B/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-11-27 JP JP61280950A patent/JPH0722519B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-28 CA CA000524124A patent/CA1291401C/en not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-11-30 GR GR90400904T patent/GR3001137T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU6577986A (en) | 1987-06-04 |
| GR3001137T3 (en) | 1992-06-25 |
| FI864815A0 (fi) | 1986-11-26 |
| DE3541979A1 (de) | 1987-06-04 |
| CA1291401C (en) | 1991-10-29 |
| ATE56991T1 (de) | 1990-10-15 |
| DK571186D0 (da) | 1986-11-27 |
| PT83825A (de) | 1986-12-01 |
| ZA868981B (en) | 1987-07-29 |
| FI85504C (fi) | 1992-04-27 |
| DE3674549D1 (de) | 1990-10-31 |
| EP0224813A1 (de) | 1987-06-10 |
| FI85504B (fi) | 1992-01-15 |
| NO171417C (no) | 1993-03-10 |
| AU611629B2 (en) | 1991-06-20 |
| MX170909B (es) | 1993-09-22 |
| JPH0722519B2 (ja) | 1995-03-15 |
| JPS62130700A (ja) | 1987-06-12 |
| FI864815A (fi) | 1987-05-29 |
| NO864775D0 (no) | 1986-11-27 |
| EP0224813B1 (de) | 1990-09-26 |
| PT83825B (pt) | 1989-06-30 |
| DK571186A (da) | 1987-05-29 |
| ES2018154B3 (es) | 1991-04-01 |
| US4891314A (en) | 1990-01-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO171417B (no) | Middel for paavisning og bestemmelse av peroksydase-aktivitet, en fremgangsmaate for fremstilling av midlet samt detsanvendelse | |
| Pryor et al. | [34] Chemical methods for the detection of lipid hydroperoxides | |
| EP0102504B1 (en) | Ascorbate-resistant broad range glucose test composition, test device and method | |
| CA1155737A (en) | Process and diagnostic agents for the detection of redox reactions | |
| US6008006A (en) | Determination of glycated proteins | |
| GB2043891A (en) | Determination of hydrogen peroxide | |
| JPS60259185A (ja) | グリセリンオキシダ−ゼの取得法 | |
| Kusakabe et al. | Methods for determining L-glutamate in soy sauce with L-glutamate oxidase | |
| WO1986004610A1 (en) | Stabilized enzyme substrate solutions | |
| US5460948A (en) | Assay of salicylates or reduced pyridine nucleotides | |
| NO174262B (no) | Middel for p}visning og bestemmelse av peroksydase-aktivitet | |
| CA2057395A1 (en) | Enzymatic composition for ethanol assay | |
| US5266472A (en) | Stabilization of the enzyme urate oxidase in liquid form | |
| JPH07155196A (ja) | 生体成分の測定法 | |
| SUGIURA et al. | A new method for the assay of xanthine oxidase activity | |
| EP0314046B1 (en) | Method of quantitative analysis of hydrogen peroxide and reagent therefor | |
| EP0138530A2 (en) | Method for the estimation of salicylates or reduced Pyridine nucleotides | |
| EP0255708B1 (en) | Indicator composition and method for the preparation thereof | |
| AU595993B2 (en) | Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation | |
| US4591553A (en) | Process and analytical agent for the determination of the activity of glutamate-oxalacetate-transaminase | |
| Girotti et al. | Bioluminescent Flou Sensor for L-Glutamate | |
| Aguilera‐Tejero et al. | Quantification of plasma bile acids in the dog with a direct spectrophotometric method | |
| JP2663257B2 (ja) | 生体成分測定用試薬の安定化方法 | |
| GB2043244A (en) | A process for the determination of two or more components in a liquid sample and a reagent kit for carrying out such a photometric determination | |
| JPH0630630B2 (ja) | 遊離脂肪酸の定量方法及びそれに用いる定量用試薬組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |
Free format text: LAPSED IN MAY 2002 |