DE19544150C2 - Stabile 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin-Lösungen - Google Patents
Stabile 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin-LösungenInfo
- Publication number
- DE19544150C2 DE19544150C2 DE1995144150 DE19544150A DE19544150C2 DE 19544150 C2 DE19544150 C2 DE 19544150C2 DE 1995144150 DE1995144150 DE 1995144150 DE 19544150 A DE19544150 A DE 19544150A DE 19544150 C2 DE19544150 C2 DE 19544150C2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- mmol
- tmb
- tetramethylbenzidine
- solutions
- methyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/10—Benzidines
- C12Q2326/12—3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine, i.e. TMB
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Die Erfindung betrifft die Stabilisierung von 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin(TMB)-Lösungen,
die als Chromophor für den Produktnachweis, insbesondere in Enzymimmunoassays zum
Substanznachweis und zur Substanzquantifizierung auf der Grundlage enzymatischer
Reaktionen mit Peroxidasen und Peroxiden Verwendung finden. Sie bezieht sich auch auf
Nachweisverfahren für Produkte, die in vorgeschalteten Reaktionen - wie z. B. durch Antigen-
Antikörper-Interaktionen oder DNA/RNA-Amplifikationen, z. B. der PCR
(Polymerasekettenreaktion) - entstanden sind und mittels Peroxidase markierter Binder (z. B.
Antikörper, Protein A oder spezifischer DNA-Sonden) nachgewiesen werden.
Die photometrische Messung der farbgebenden Produktbildung nach enzymatischer Reaktion
(Gallati, H. und I. Pracht: Peroxidase aus Merettich, Kinetische Studien und Optimierung der
Peroxidase-Aktivitätsbestimmung mit den Substraten H2O2 und T-L, J. Clin. Chem. Clin.
Biochem. Vol 23, 1985, 453-460) ist gegenwärtig das am häufigsten angewendete Prinzip
bei Immunoassays, das darüber hinaus zunehmend zum Nachweis von Hybridisierungs- oder
Amplifikationsprodukten eingesetzt wird.
Um die Teste weitgehend zu standardisieren und zu automatisieren und vom Verhältnis der
Anzahl an Kalibratoren zur Probenzahl günstig zu gestalten, werden zunehmend
gebrauchsfertige Reagenzien in den Testkits verwendet und diese an Automaten adaptiert, die
die erstellten Standardkurven speichern. An diesen Standards werden nach jeweiliger
Richtigkeitsbestimmung im aktuellen Test über ein bis zwei Kalibratoren die zu
bestimmenden Proben über einen längeren Zeitraum verglichen und die Konzentrationen an
der (langzeit)gespeicherten Eichkurve ermittelt.
Das setzt eine hohe Konstanz der Testbesteckbestandteile hinsichtlich ihrer Reaktivität und im
Falle der Substratlösung hinsichtlich des Reagenzienleerwertes und der Extinktionsausbeute
voraus. In den meisten Fällen wird die Substratlösung am gleichen Tag aus
Einzelkomponenten zusammengesetzt, da im Falle von Tetramethylbenzidin (TMB) mit den
bisherigen Lösungsvermittlern der Reagenzienleerwert und die Extinktionsausbeute nur über
einen sehr begrenzten Zeitraum konstant gehalten werden kann. Dadurch müssen entweder
ständig Leerwertkorrekturen erfolgen, wenn man an einer einmal erstellten Standardkurve
Proben zu unterschiedlichen Zeiten in unterschiedlichen Ansätzen quantifizieren will, oder
aber es muss zu jedem Testansatz eine separate Standardkurve erstellt werden. Auch die
sogenannten "ready for use" Substratlösungen zeigen, wenn auch verringert, noch diesen
Blankdrift und weisen meistens erheblich geringere Extinktionsausbeuten auf.
Enzymatische Reaktionen mit Peroxidasen und Peroxiden, in denen
Tetraalkyl(methyl)benzidin-Lösungen als Chromophor für den Produktnachweis Verwendung
findet, sind in der Patentliteratur mehrfach beschrieben worden. Es sind auch Vorschläge zur
Stabilisierung solcher Lösungen bekannt. So hat die US (US-Patentschrift) 5206150 eine
Zusammensetzung zur Bestimung der Peroxidaseaktivität zum Inhalt, die - neben TMB bzw.
Tetraalkylbenzidinen, H2O2, mit Wasser mischbare organische Lösungsmittel und
Puffersubstanz - als Stabilisierungsmittel Bacitracin oder seine Derivate (Bacitracin-Precusore
oder Hydrolyse-Komponenten) enthält.
Ein Agens zur Bestimmung der Peroxidase- bzw. Pseudoperoxidaseaktivität ist Gegenstand
der US-Patentschrift 4891314, derzufolge Penicillin oder dessen Spaltprodukte aus saurer
Hydrolyse als Stabilisatoren Verwendung finden.
Die Erfindung zielt darauf ab, eine Substratlösung mit Tetraalkyl(methyl)benzidin-Lösungen
so zu stabilisieren, dass sie als "ready for use" Lösung einen für die Richtigkeit der Ergebnisse
ohne notwendige Leerwertkorrektur akzeptablen Blankwertdrift hat und eine hohe, der frisch
aus Einzelkomponenten angesetzten Lösung vergleichbare Extinktionsausbeute liefert.
Der Erfindung liegt des weiteren die Aufgabe zugrunde, den Leerwert einer
Tetraalkyl(methyl)benzidin-Substratlösung bei der niedrigsten Extinktion konstant zu halten.
Die Aufgabe wurde erfindungsgemäß durch eine neue Formulierung gelöst, die neben
Tetraalkyl(methyl)benzidin ein mit Wasser unbegrenzt mischbares organisches Lösungsmittel
als Stabilisator, Chelatbildner, Citrat, Wasserstoffperoxid und ein Konservierungsmittel
enthält und die einen pH-Wert von 3,5 bis 5 aufweist. Es wurde überraschenderweise
gefunden, dass bestimmte mit Wasser mischbare Lösungsmittel als Stabilisatoren verwendet
werden können. Ein bevorzugtes Lösungsmittel ist beispielsweise 2-Pyrrolidon (Gamma-
Butyrolactam).
Das Wesen der Erfindung besteht darin, dass die Bildungsgeschwindigkeit des TMB-
Radikalanions immer etwas geringer gehalten wird als die Reaktionsgeschwindigkeit des
TMB-Radikalanions mit dem Radikalfänger (Stabilisator).
Die erfindungsgemäßen Formulierungen lassen sich zur Herstellung stabiler TMB-
Substratlösungen für den allgemeinen Aktivitätsnachweis von Peroxidase in
Enzymimmunoassays, Immunoblottechniken und DNA/RNA-Amplifikationstechniken
verwenden.
Als mit Wasser mischbare organische Lösungsmittel kommen beispielsweise
Diethylenglycoldiethylether, 1,3-Dimethyl-2-imidazolidinon, Dimethylsulfoxid,
Dipropylenglycol, Ethylenglycolmonoisopropylether, 1-Methoxy-2-propanol, 1-Methyl-2-
pyrrolidon, 2-Pyrrolidon oder Tetrahydrofurfurylalkohol (THFA) zur Anwendung, weiterhin
alle Lösungsmittel, die mit Wasser unbegrenzt mischbar sind, einen Siedepunkt über 100°C
haben und TMB lösen können, z. B. aus den Stoffklassen aliphatische Ether, zyklische Ether,
Lactame, Lactone oder Carbonsäureamide.
Als Chelatbildner eignen sich z. B. Nitrilotriessigsäure, Ethylendinitrilotetraessigsäure, 1,2-
Cyclohexandiamin-N,N,N,N'-tetraessigsäure, 3-Aza-3-(carboxymethyl)-
pentamethylendinitrilo-tetraessigsäure, Ethylendioxybis(ethylennitrilo)tetraessigsäure, N-(2-
Hydroxyethyl)-ethylendiamin-N,N',N'-triessigsäure oder Triethylentetraminhexaessigsäure.
Als Konservierungsmittel kommen 5-Chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-on und 2-Methyl-4-
isothiazolin-3-on zur Anwendung.
Die Erfindung beruht auf einer Kombination bekannter Substanzen und organischer
Lösungsmittel zu einem neuen Zweck sowie auf der neuen Lehre, dass die
Bildungsgeschwindigkeit des TMB-Radikalanions immer etwas geringer gehalten werden
muss als die Reaktionsgeschwindigkeit des TMB-Radikalanions mit dem Radikalfänger
(Stabilisator).
Es hat sich überraschenderweise herausgestellt, dass durch die erfindungsgemäße
Zusammensetzung sämtliche Teste, deren Substanznachweis auf dem Peroxidase-TMB-
System als Indikator beruhen, besser standardisiert und autokalibriert und ohne aktuelle
Bezugskurve quantifiziert werden können.
Insbesondere kann durch die Verwendung langzeitstabiler (mehrere Monate) TMB-
Gebrauchslösungen eine separate, testbesteck-unabhängige Bestückung der Automaten mit
Substratlösung erfolgen (Fig. 1).
Die Ursache der Leerwertextinktion ist das TMB-Radikalanion, dessen Konzentration
möglichst gering sein sollte, weil es eine Kette von noch nicht vollständig aufgeklärten
radikalischen Folgereaktionen auslöst, die ihrerseits in einem Kreisprozess wieder das TMB-
Radikalanion bilden. Letztendlich führt der ganze Vorgang zu einer allgemeinen
Substratverarmung, die sich in steigenden Leerwerten und zunehmend geringeren
Extinktionsausbeuten niederschlägt. Hält man die Konzentration des Radikalanions niedrig,
so wird die Reaktionsgeschwindigkeit der Folgereaktionen dermaßen gesenkt, dass eine
Stabilität der TMB-Substratlösung über Wochen und Monate erreicht werden kann.
Erfindungsgemäß wird die Konzentration des Radikalanions mit geeigneten Radialfängern,
die einerseits Bestandteil des Lösungsmittelsystems - z. B. 2-Pyrrolidon - andererseits aber
auch besondere Zusätze - z. B. EDTA - sein können, niedrig gehalten. Dazu wird das System
so eingestellt, dass die Bildungsgeschwindigkeit des TMB-Radikalanions immer etwas
geringer ist als die Reaktionsgeschwindigkeit des Radikalfängers mit dem Radikalanion. Die
Einstellung erfolgt durch die Wahl der Lösungsmittelkonzentration. Das hat zur Folge, dass
ein geringer Leerwertanstieg (z. B. durch Lichteinwirkung) reversibel ist (Fig. 2). Die
Reaktionsgeschwindigkeit des Radikalfängers mit dem Radikalanion darf auf der anderen
Seite aber nicht so groß werden, dass bei der eigentlichen Indikatorreaktion im EIA eine
Verringerung der Extinktionsausbeute resultiert. Das wird durch ein optimiertes
Lösungsmittel-Puffer-Stabilisatorsystem definierter Zusammensetzung erreicht.
Eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung besteht in einer Zusammensetzung folgender
Art:
0,3 bis 2 mmol/l: 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin (TMB)
362 bis 2415 mmol/l: 2-Pyrrolidon
0,5 bis 10 mmol/l: Ethylendinitrilotetraessigsäure (EDTA)
5 bis 200 mmol/l: Citrat
0,5 bis 10 mmol/l: Wasserstoffperoxid
1 bis 24 µmol/l: Konservierungsmittel
pH 3,5 bis 5.
0,3 bis 2 mmol/l: 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin (TMB)
362 bis 2415 mmol/l: 2-Pyrrolidon
0,5 bis 10 mmol/l: Ethylendinitrilotetraessigsäure (EDTA)
5 bis 200 mmol/l: Citrat
0,5 bis 10 mmol/l: Wasserstoffperoxid
1 bis 24 µmol/l: Konservierungsmittel
pH 3,5 bis 5.
Die Erfindung soll anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert werden, ohne dass sie
auf die Beispiele eingeschränkt wird.
- 1. 0,3 bis 2 mmol/l: 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin (TMB)
- 2. 362 bis 2415 mmol/l: 2-Pyrrolidon
- 3. 0,5 bis 10 mmol/l: Chelatbildner
- 4. 5 bis 200 mmol/l: Citrat
- 5. 0,5 bis 10 mmol/l: Wasserstoffperoxid
- 6. 1 bis 24 µmol/l: Konservierungsmittel
- 7. pH 3,5 bis 5.
Unter Punkt 2 kommen folgende mit Wasser unbegrenzt mischbare Lösungsmittel zur
Anwendung:
Diethylenglycoldiethylether
1,3-Dimethyl-2-imidazolidinon
Dimethylsulfoxid
Dipropylenglycol
Ethylenglycolmonoisopropylether
1-Methoxy-2-propanol
1-Methyl-2-pyrrolidon
2-Pyrrolidon
Tetrahydrofurfurylalkohol.
Diethylenglycoldiethylether
1,3-Dimethyl-2-imidazolidinon
Dimethylsulfoxid
Dipropylenglycol
Ethylenglycolmonoisopropylether
1-Methoxy-2-propanol
1-Methyl-2-pyrrolidon
2-Pyrrolidon
Tetrahydrofurfurylalkohol.
Weiterhin kommen alle Lösungsmittel, die mit Wasser unbegrenzt mischbar sind, einen
Siedepunkt über 100°C haben und TMB lösen können, aus folgenden Stoffklassen zum
Einsatz:
aliphatische Ether
zyklische Ether
Lactame
Lactone
Carbonsäureamide.
aliphatische Ether
zyklische Ether
Lactame
Lactone
Carbonsäureamide.
Unter Punkt 3 kommen alle Chelatbildner zur Anwendung,
z. B.:
Nitrilotriessigsäure
Ethylendinitrilotetraessigsäure
1,2-Cyclohexandiamin-N,N,N',N'-tetraessigsäure
3-Aza-3-(carboxymethyl)-pentamethylendinitrilotetraessigsäure
Ethylendioxybis(ethylennitrilo)tetraessigsäure
Triethylentetraminhexaessigsäure.
Nitrilotriessigsäure
Ethylendinitrilotetraessigsäure
1,2-Cyclohexandiamin-N,N,N',N'-tetraessigsäure
3-Aza-3-(carboxymethyl)-pentamethylendinitrilotetraessigsäure
Ethylendioxybis(ethylennitrilo)tetraessigsäure
Triethylentetraminhexaessigsäure.
- 1. 1 mmol/l: 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin (TMB)
- 2. 966 mmol/l: 2-Pyrrolidon
- 3. 2 mmol/l: Ethylendinitrilotetraessigsäure (EDTA)
- 4. 24,6 mmol/l: Citrat
- 5. 2,4 mmol/l: Wasserstoffperoxid
- 6. 6,08 µmol/l: 5-Chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-on
- 7. 1,97 µmol/l: 2-Methyl-4-isothiazolin-3-on
- 8. pH 4,1.
Claims (4)
1. Stabile 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin(TMB)-Lösungen, die als Formulierungen einen pH-
Wert von 3,5 bis 5,5 aufweisen, bestehend aus 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin (TMB), einem
mit Wasser unbegrenzt mischbaren organischen Lösungsmittel als Stabilisator, ferner aus
Chelatbildner, Citrat und Wasserstoffperoxid, dadurch gekennzeichnet, dass sie
Konservierungsmittel enthalten.
2. Formulierung nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch die Zusammensetzung
- 1. 0,3 bis 2 mmol/l: 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin (TMB)
- 2. 362 bis 2415 mmol/l: 2-Pyrrolidon
- 3. 0,5 bis 10 mmol/l: Chelatbildner
- 4. 5 bis 200 mmol/l: Citrat
- 5. 0,5 bis 10 mmol/l: Wasserstoffperoxid
- 6. 1 bis 24 µmol/l: Konservierungsmittel
- 7. pH 3,5 bis 5.
3. Formulierung nach den Ansprüchen 1 und 2, gekennzeichnet durch die Zusammensetzung
- 1. 1 mmol/l: 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin (TMB)
- 2. 966 mmol/l: 2-Pyrrolidon
- 3. 2 mmol/l: Ethylendinitrilotetraessigsäure (EDTA)
- 4. 24,6 mmol/l: Citrat
- 5. 2,4 mmol/l: Wasserstoffperoxid
- 6. 6,08 µmol/l: 5-Chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-on
- 7. 1,97 µmol/l: 2-Methyl-4-isothiazolin-3-on
- 8. pH 4,1.
4. Verwendung der Formulierungen nach den Ansprüchen 1 bis 3 zur Herstellung stabiler
TMB-Substratlösungen für den allgemeinen Aktivitätsnachweis von Peroxidase in
Enzymimmunoassays, Immunoblottechniken und DNA/RNA-Amplifikationstechniken.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE1995144150 DE19544150C2 (de) | 1995-11-16 | 1995-11-16 | Stabile 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin-Lösungen |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE1995144150 DE19544150C2 (de) | 1995-11-16 | 1995-11-16 | Stabile 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin-Lösungen |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE19544150A1 DE19544150A1 (de) | 1997-05-22 |
DE19544150C2 true DE19544150C2 (de) | 2002-06-13 |
Family
ID=7778508
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE1995144150 Expired - Fee Related DE19544150C2 (de) | 1995-11-16 | 1995-11-16 | Stabile 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin-Lösungen |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE19544150C2 (de) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE19813158C2 (de) * | 1998-03-19 | 2002-06-06 | Seramun Diagnostica Gmbh | Stabile TMB-/Substratlösungen |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1986004610A1 (en) * | 1985-02-11 | 1986-08-14 | Travenol-Genentech Diagnostics | Stabilized enzyme substrate solutions |
EP0253548A2 (de) * | 1986-07-15 | 1988-01-20 | Savyon Diagnostics Ltd. | Verfahren zur Bestimmung von okkultem Blut und chemische Zusammensetzungen dafür |
EP0271713A2 (de) * | 1986-12-15 | 1988-06-22 | Savyon Diagnostics Ltd. | Verfahren zur Herstellung von chromogene Stoffe enthaltenden wässrigen Lösungen |
US4891314A (en) * | 1985-11-28 | 1990-01-02 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Agent for the determination of peroxidase activity, with stabilizer, a process for its preparation and its use |
WO1990002339A1 (en) * | 1988-08-16 | 1990-03-08 | Cetus Corporation | Stable indicator solutions for detection of peroxidatic activity |
US5206150A (en) * | 1990-10-26 | 1993-04-27 | University Of Kentucky Research Foundation | Composition of, method of producing and method of using a stabilized formulation for assaying peroxidase activity |
-
1995
- 1995-11-16 DE DE1995144150 patent/DE19544150C2/de not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1986004610A1 (en) * | 1985-02-11 | 1986-08-14 | Travenol-Genentech Diagnostics | Stabilized enzyme substrate solutions |
US4891314A (en) * | 1985-11-28 | 1990-01-02 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Agent for the determination of peroxidase activity, with stabilizer, a process for its preparation and its use |
EP0253548A2 (de) * | 1986-07-15 | 1988-01-20 | Savyon Diagnostics Ltd. | Verfahren zur Bestimmung von okkultem Blut und chemische Zusammensetzungen dafür |
EP0271713A2 (de) * | 1986-12-15 | 1988-06-22 | Savyon Diagnostics Ltd. | Verfahren zur Herstellung von chromogene Stoffe enthaltenden wässrigen Lösungen |
WO1990002339A1 (en) * | 1988-08-16 | 1990-03-08 | Cetus Corporation | Stable indicator solutions for detection of peroxidatic activity |
US5206150A (en) * | 1990-10-26 | 1993-04-27 | University Of Kentucky Research Foundation | Composition of, method of producing and method of using a stabilized formulation for assaying peroxidase activity |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Lück E., Chemische Lebensmittelkonservierung, 2.Aufl., Springer Verlag, Berlin 1989, S.92-95 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE19544150A1 (de) | 1997-05-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE69632466T3 (de) | Lösung die chaotropische mittel enthält und verwendung dieser lösung in verfahren zur isolierung von dna, rna und proteinen | |
DE69130482T3 (de) | Luciferase-zusammensetzungen und verfahren | |
EP0071730B1 (de) | Stabilisiertes Reagenz zum Nachweis von Wasserstoffperoxid | |
DE2833612A1 (de) | Mittel und verfahren zur bestimmung von wasserstoffperoxyd | |
DE3788828T2 (de) | Stabilisierte flüssige Enzymzusammensetzung zur Bestimmung von Glucose. | |
DE2603856A1 (de) | Verfahren und reagentien fuer den nachweis, die schaetzung und quantitative bestimmung von nitrationen | |
FR2404638A1 (fr) | Procede de preparation d'acide pseudomonique | |
DE2928880C2 (de) | Bilirubin-Standard-Zubereitung mit verbesserter Stabilität | |
DE69121456T2 (de) | Stabilisiertes Harnsäurereagens | |
DE19544150C2 (de) | Stabile 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin-Lösungen | |
DE2264847A1 (de) | Verfahren und reagenz zur bestimmung von cholesterin | |
DE1213641B (de) | Substrat zur bestimmung der konzentration des enzyms glutaminsaeure-oxylessigtransaminase in koerperfluessigkeiten | |
DE2906732C2 (de) | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung der Peroxidase | |
DE2459087A1 (de) | Verfahren und reagenz zur bestimmung von serumtriglyceriden | |
DE69430410T2 (de) | Methode zum Nachweis von Fructosamin | |
DE69128873T2 (de) | Verfahren zur enzymatischen Messung von Wasserstoffperoxid und Reagenz dafür | |
Rankine | Factors influencing the pyruvic acid content of wines | |
EP1315832A2 (de) | Verfahren zur messung der aktivität der no-synthase | |
DE2523697A1 (de) | Verfahren zur lipasen-aktivitaetsbestimmung | |
EP0007057A1 (de) | Kontrollserum für die klinisch-chemische Analyse mit einem bestimmten Gehalt an Creatin-kinase | |
EP0131826B1 (de) | Lagerstabiles Universalkontrollserum | |
DE1299445B (de) | Glukose-Diagnostikum | |
DE102008030142A1 (de) | Verfahren zur Proteinaufreinigung unter denaturierenden Bedingungen | |
Goldner et al. | The chemical composition of sea nettle nematocysts | |
DE19813158C2 (de) | Stabile TMB-/Substratlösungen |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
OP8 | Request for examination as to paragraph 44 patent law | ||
8181 | Inventor (new situation) |
Free format text: NUGEL, HELMUT, 10179 BERLIN, DE PORSTMANN, TOMAS, PROF. DR., 10179 BERLIN, DE |
|
D2 | Grant after examination | ||
8364 | No opposition during term of opposition | ||
R119 | Application deemed withdrawn, or ip right lapsed, due to non-payment of renewal fee |
Effective date: 20130601 |