NO170055B - Fremgangsmaate for inaktivering av termisk foelsomme, patogene, blod-baarede virus i igg-preparater - Google Patents
Fremgangsmaate for inaktivering av termisk foelsomme, patogene, blod-baarede virus i igg-preparater Download PDFInfo
- Publication number
- NO170055B NO170055B NO873491A NO873491A NO170055B NO 170055 B NO170055 B NO 170055B NO 873491 A NO873491 A NO 873491A NO 873491 A NO873491 A NO 873491A NO 170055 B NO170055 B NO 170055B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- igg
- heat
- treated
- preparations
- preparation
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 69
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 15
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 title description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 20
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims abstract description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 abstract 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 18
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 8
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 6
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 4
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 206010020983 Hypogammaglobulinaemia Diseases 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010019786 Hepatitis non-A non-B Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 206010043561 Thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 239000013542 high molecular weight contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000004383 yellowing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
- A61L2/0011—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using physical methods
- A61L2/0023—Heat
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/02—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor using physical phenomena
- A61L2/04—Heat
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
Ved en fremgangsmåte for inaktivering av varme-ømfintlige, blod-bårede virus i IgG-preparater underkastes en IgG-holdig løsning, spesielt en blodfraksjon, en rensning for å fjerne reduserende karbohydrater og etterfølgende tørking og varmebehandling ved en temperatur på 60-95°C i 10-168 timer under betingelser hvor restvanninnholdet i preparatet er maksimalt 1 vekt%.Slike varmebehandlede IgG-preparater har bevart sine opprinnelige antigen-bindende egenskaper og et lavt innhold av komplement-aktiverende aggregater, samtidig med at de er befridd for de nevnte virustyper så som LAV/HILV-III eller Hepatitt.
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for inaktivering av varmeømfintlige, patogene, blod-bårede virus som f.eks. LAV/HILV-III eller hepatittvirus i IgG-preparater.
Preparater som inneholder IgG, anvendes på flere forskjellige områder som dog ikke er skarpt avgrenset. Eksempler på fire hovedområder er: 1) Bredspektrede IgG-preparater gitt til pasienter med immunsvikt, som lider av agammaglobulinemi eller hypo-gamma-globulinemi. 2) Bredspektrede IgG-preparater gitt profylaktisk mot infeksjoner av viral og bakteriell opprinnelse, så som Hepatitt A. 3) Bredspektrede IgG-preparater for behandling av f.eks.
Idopathic Thrombocytopenic Purpura, idet store mengder IgG kan få blodplateantallet til å stige. 4) Spesifikke IgG-preparater anvendt profylaktisk mot f.eks.
tetanus-forgiftninger, mot Hepatitt B virusinfeksjoner og f.eks. mot Rhesus-immuniseringer av mødre.
Ved disse og andre anvendelsesformål brukes som regel IgG-preparater som gis intravenøst (i.v.), selv om det også i noen grad benyttes intramuskulære (i.m.) og subkutane (s.c.) preparater. De kjente preparater inneholder ofte urenheter som forårsaker bivirkninger. Denne ulempe har man forsøkt å hjelpe på ved å underkaste preparatene rensinger og kjemiske modifikasjoner.
Spesielt innenfor de siste ti år er det utviklet en lang rekke preparater som kan gis i.v. Det er således foreslått forskjellige metoder for å gjøre preparatene egnet for i.v. anvendelse. De metoder som er foreslått, kan grovt inndeles i tre grupper.
I den første gruppe utsettes IgG-molekylene for en kjemisk behandling. Denne kan være en alkylering av SH-grupper i IgG-molekylene, eller det kan være en sulfitering av IgG-molekylene, se Dansk Patent nr. 141432, søknad nr. 3991/75.
I den andre gruppe metoder utsettes IgG-molekylene for en enzymatisk påvirkning. Det kan f.eks. være en behandling med pepsin ved lav pH-verdi, se f.eks. Dansk Patent nr. 143249, søknad nr. 1322/84.
I den tredje gruppe metoder foretas ingen kjemisk eller enzymatisk behandling som virker inn på IgG-molekylene, og disse preparater sies å være opprinnelige. Her kan IgG-fraksjonen være renset til relativt høy renhet ved bruk av forskjellige isoleringsteknikker, se f.eks. de danske patent-søknader nr. 441/74 og 265/83.
Strategien for å utvikle alle typer i.v. IgG-preparater har derfor vært å redusere risikoen for bivirkninger og samtidig bibeholde de funksjonelle karakteristiske egenskaper for IgG, så som antigenbinding og opsonering av fremmed materiale.
Mulige bivirkninger skyldes at preparatene ved fraksjon-eringer modifiseres på en måte som aktiverer pasientens kom-plementsystem ved administreringen. Derved oppstår forbindel-ser som kan gi ovenfor nevnte bivirkninger. Som oftest til-skrives IgG-aggregater, dannet under fraksjoneringen, årsaken til komplementaktiveringen, men også en modifikasjon av IgG-molekylene samt immunkomplekser kan være årsak til en slik komplementaktivering.
Som det fremgår av det ovennevnte, er det foretatt store anstrengelser for å unngå at IgG-preparater virker komplement-akt i ver ende.
I mange år har det vært kjent at det ved oppvarming av immunglobulinmolekyler blir dannet aggregater som er komple-mentakt iverende . Således har B. Olhagen, Acta Medica Scandinavia 1945, suppl. 162 vist dette. Det skal bare ganske kort oppvarming til, f.eks. 10 minutter ved 60°C, til at det skjer en kraftig økning i de komplement-bindende egenskaper og et fall i antigen-bindende egenskaper, se J. Romer & P.J. Spåth: Die Immunochemotherapy, Eds. U.E. Nydegger, A.P. 1981, s. 123-130.
Det er iakttatt flere tilfeller av overførsel av Hepatitt B til recipienter fra IgG-preparater som er fremstilt ved Cohns fraksjoneringsmetode, se E. Tabor & R.J. Gerety, Lancet, ii, 1293, 1979. Nylig er det også vist at Hepatitt ikke A-ikke B kan overføres gjennom IgG-preparater fremstilt ved Cohns fraksjonering, se A.M.L. Lever et al., Lancet, ii, 1062-1064, 1984.
Innholdet av nøytraliserende antistoffer i IgG-preparatene har uten tvil medvirket til å nedsette hyppigheten av smitteoverføring ved IgG-preparatene. For LAV/HILV-III, som forårsaker AIDS, forholder det seg imidlertid slik at det tilsynelatende ikke utvikles nøytraliserende antistoffer (R.A. Weiss et al., Nature, 316; 69-72, 1985). Det kan bety at risikoen for overføring av AIDS-virus derved økes.
For å sikre alle IgG-preparater mot smitteoverføring, ville det være nærliggende å varmebehandle preparatene ved temperaturer hvor mikroorganismene uskadeliggjøres. Hittil har det likevel ikke lykkes å foreta varmebehandlinger av preparatene med bevarelse av både antigenbindende aggregater og et lavt nivå av komplementaktiverende aggregater, og det er hittil ikke fremstilt IgG-preparater som er sikre mot overfø-ring av patogene organismer.
Fra Dansk Patentsøknad nr. 1071/85 er det kjent å inakti-vere patogene mikroorganismer i blodprodukter, herunder IgG-preparater, ved varmebehandling i nærvær av minst 5 vekt% vann eller en alkohol og ved temperaturer opptil 121°C, så som 50-90°C. Ved disse betingelser inaktiveres patogene mikroorganismer effektivt. Imidlertid er det risiko for en beskadigelse eller forringelse av immunglobulinet.
Av beskrivelsen i WO patentsøknad nr. 82/03871 fremgår det at blodplasma etter rensing med hensyn til reduserende karbohydrater og frysetørking kan steriliseres, f.eks. for inaktivering av Hepatitt-virus.
Den foreliggende oppfinnelses siktemål er å oppnå en inaktivering av varmefølsomme, patogene, blod-bårede virus, så som LAV/HILV-III eller Hepatitt-virus, i IgG-preparater uten å redusere preparatets egenskaper.
Oppfinnelsen bygger på den overraskende erkjennelse at IgG-preparater som er renset med hensyn til reduserende karbohydrater, kan varmebehandles i tørr tilstand og under betingelser hvor de nevnte blod-bårede virus inaktiveres, uten at det er risiko for å forandre de antigenbindende egenskapene, eller øke de komplementaktiverende egenskapene.
Dette oppnås ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen som er karakterisert ved at en IgG-holdig oppløsning renses for å fjerne reduserende karbonhydrater og deretter tørkes og varmebehandles ved en temperatur på 60 - 95°C i 10 til 168 timer under betingelser hvor restvanninnholdet i preparatet er maksimalt 1 vekt%.
Ved den foreliggende fremgangsmåte har det vist seg mulig å varmebehandle umodifisert i.v. IgG slik at det er anvendelig til i.v., likesom det er mulig å varmebehandle s.c- og i.m.-preparater uten at den terapeutiske aktivitet påvirkes.
Det er således ikke av avgjørende betydning om IgG-preparatet er fremstilt ut fra en metode hvor det er benyttet en kjemisk modifikasjon, enzymatisk påvirkning eller såkalt opprinnelig IgG, eller om preparatet er beregnet til s.c. eller i.v. bruk.
Forskjellige foretrukne utførelsesformer er angitt i krav 2 og 3. Derved oppnås optimale egenskaper eller upåvirkelig-het med hensyn til gjenoppløselighet, uklarhet og gulfarging, polymer- og fragmentdannelse. Dessuten opprettholdes ufor-andrede antigenbindende egenskaper og et lavt nivå av komplementaktiverende aggregater.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen egner seg særlig for inaktivering av LAV/HILV-III-virus og Hepatitt-virus i IgG-preparater .
Av Tabell I fremgår at man ved varmebehandling av tre IgG (i.v.) handelspreparater i frysetørket form får varierende resultater. I ett tilfelle blir preparatet kraftig gulfarget. Det høye begynnelsesinnhold i polymer-fraksjonen kan både skyldes aggregert IgG og høymolekylære forurensninger som ikke er fraksjonert fra, men i alle tilfeller ses polymer-fraksjonen å stige ved varmebehandlingen. Dette må tas som tegn på at preparatet i større eller mindre grad er forandret ved varmebehandlingen.
Ved utøvelsen av den foreliggende fremgangsmåte reduseres innholdet av reduserende karbohydrater fortrinnsvis til under 50 /xg/ml.
Den oppnådde virkning fremgår av Tabell 2 som viser resultatene ved varmebehandling av IgG-preparater med varierende glukose-konsentrasj oner.
Glukose, som er et reduserende karbohydrat, forekommer naturlig i plasma og blod, idet glukose som kjent benyttes av
cellene til energiproduksjon. Videre tilsettes ofte glukose til anti-koagulasjonsmediet når blodporsjonen tappes. I så tilfelle blir innholdet av glukose særlig høyt. Det har således vist seg at reduserende karbohydrater - her er det spesielt glukose - er av avgjørende betydning for forløpet av varmebehandlingen av IgG-preparatet. Resultatet av varmebehandlingen blir bedre jo lavere innholdet av glukose er. Det er derfor av største vik-tighet at glukose skilles fra IgG før varmebehandlingen.
For å belyse betydningen av nærvær av reduserende karbohydrater - spesielt glukose - under varmebehandlingen, er det utført forsøk hvor stigende konsentrasjoner av glukose er satt til et IgG-preparat før frysetørking og varmebehandling. IgG-preparatet er stabilisert med 1 % albumin og 7,5 % sakkarose før frysetørking og varmebehandling. Etter frysetørking og varmebehandling gjenoppløses preparatet med destillert vann til 3 % IgG.
4 ODA03 og pH-fall er henholdsvis stigningen i uklarhet og fallet i pH beregnet ut fra den ubehandlede prøve. Kolonnen med
> 7S angir innholdet av det prosentvise innhold av molekyler med en større molekylvekt enn monomert IgG. Det vil si at såvel dimert, oligomert som polymert IgG bidrar til denne fraksjonen. Fragmenter angir om det finnes nedbrutte IgG-molekyler.
Som det fremgår av Tabell 2, er det en fin korrelasjon mellom innholdet av glukose og gulfargingen (4ODA03) , pH-fall og innholdet av komplekser med større molekylvekt enn monomert IgG.
AC-aktiviteten av den varmebehandlede prøve ses å stige inntil et glukoseinnhold på 400-800 /ig/ml. Når glukosekon-sentrasjonen stiger utover dette nivå, faller AC-aktiviteten. Årsaken til dette forløp av AC-aktiviteten er sannsynligvis at NH2-gruppene på IgG-molekylene reagerer med glukose. Herved blir IgG-molekylene "innpakket", slik at Fc-receptorene blokkeres og ikke kan binde komplement. En slik reaksjon vil gi seg utslag i at AC-aktiviteten vil falle.
Resultatet illustreres av Fig. 1 som viser krysset immun-elektroforese av varmebehandlet (T=72) og ikke-varmebehandlet (T=0) IgG-preparat tilsatt 500 /Ltg/ml glukose under frysetørking og varmebehandling. Det påsettes 5 /il 3 I (vekt/vol.) IgG-løsning. Som antistoff anvendes antiplasma-antistoffer 10 /xl/cm<z>.
Av Fig. 1 ses en forskjell mellom det varmebehandlede og det ikke-varmebehandlede preparat. I den varmebehandlede prøven ligger det, delvis under IgG-fellingen, en felling som ikke finnes i den ubehandlede prøven. Denne fellingen kunne se ut til å ha immunologisk identitet med både IgG og albumin. Det kan være et uttrykk for at IgG- og albuminmolekylene har rea-gert.
Når IgG-fraksjonen er skilt fra glukose, kan IgG-preparatet i frysetørket form varmebehandles ved de betingelser som er beskrevet ifølge oppfinnelsen, uten at de antigen-bindende egenskapene forandres, uten de komplement-bindende egenskapene og uten at misfarging, pH og gjenoppløsningstid påvirkes. Dette fremgår av etterfølgende eksempler.
Preparatene varmebehandles ved en temperatur på 60-95°C, fortrinnsvis 65-85°C, i 10-168 timer og under behandlingsbeting-elser hvor restvanninnholdet i preparatet er maksimalt 1 vekt%. Foretrukne betingelser er 72 timer ved 68°C. Varmebehandlingen utføres fortrinnsvis etter tørking til et restvanninnhold på under 0,5 %, og spesielt under 0,3 %.
Eksempel 1
Et IgG-preparat (i.v.) fremstilt som angitt i U.S. Patent 4.164.495, men smittet med AIDS-virus, varmebehandles ved 68°C i 72 timer. IgG-preparatet er før frysetørking og varmebehandling stabilisert med 1 % albumin og 7,5 % sakkarose. Innholdet av reduserende karbohydrater - glukose - er redusert til < 50 jzg/ml. Undersøkelsen er utført ved at et ubehandlet preparat (T=0) er sammenlignet med et varmebehandlet preparat (T=72). Etter gjenoppløsning er IgG-innholdet 3 % (vekt/vol.).
Av tabellene 3 og 4 fremgår at IgG-innholdet i preparatet er praktisk talt intakt uten aktivitetsreduksjon.
Preparatet ble undersøkt med hensyn til infiserende LAV/- HILV-III ved revers transkriptase. Prøven viste at preparatet var befridd for aktivt LAV/HILV-III-virus.
Ved gjentagelse av forsøket med et preparat med 5 % vann-innhold oppnås et misfarget produkt med nedsatt aktivitet.
Resultatet illustreres av Fig. 2 som viser krysset immun-elektroforese av varmebehandlet (T=72) og ikke-varmebehandlet (T=0) IgG (i.v.) som før frysetørking og varmebehandling er stabilisert med albumin. Det påsettes 5 jul av en 3 %
(vekt/vol.) IgG-løsning. Som antistoff benyttes anti-plasma-antistoffer
10 /ul/cm<2.>
I Fig. 2 kan det ikke ses forskjell på den varmebehandlede og den ikke-varmebehandlede prøve.
Innholdet i > 7S-fraksjonen består alene av dimert IgG som normalt antas å være uskadelig. Resultatene av disse under-søkelser viser derfor at det ikke for noen av de undersøkte parametre kan ses noen forskjell på den varmebehandlede og den ubehandlede prøve.
Eksempel 2
Et IgG-preparat (s.c. eller i.m.) fremstilt ifølge U.S.
Patent 4.164.495, men smittet med AIDS-virus, varmebehandles ved 68°C i 72 timer. IgG-preparatet er før frysetørking og varmebehandling stabilisert med sakkarose. Innholdet av reduserende karbohydrater, spesielt glukose, er redusert til < 50 jug/ml. Undersøkelsen er gjennomført ved at et ubehandlet preparat (T=0) er sammenlignet med et varmebehandlet preparat (T=72). Etter gjenoppløsning er IgG-innholdet 14 % (vekt/vol.) og sakkarose-innholdet 7,5 % (vekt/vol.).
Tabellene 5 og 6 viser at IgG-innholdet i preparatet er praktisk talt intakt uten aktivitetsforringelse. Det varmebehandlede preparat var befridd for aktivt LAV/HILV-III-virus.
Resultatet illustreres av Fig. 3 som viser krysset immun-elektroforese av varmebehandlet (T=72) og ikke-varmebehandlet (T=0) IgG (s.c. eller i.m.). Det påsettes 4 /il av en prøve fortynnet fra et IgG-innhold på 15 % (vekt/vol.) til 5 %
(vekt/vol.). Som antistoff benyttes anti-plasma antistoffer 10 /il/cm<2>.
På Fig. 3 kan det ikke ses forskjell på den varmebehandlede og den ikke-varmebehandlede prøve.
Innholdet i > 7S-fraksjonen består alene av dimert IgG som normalt antas å være uskadelig. Resultatene av disse under-søkelser viser derfor at det ikke for noen av de undersøkte parametre kan ses noen forskjell på den varmebehandlede og den ubehandlede prøve.
Eksempel 3
Et IgG-preparat, smittet med Hepatitt B, varmebehandles ved 68°C som angitt i Eksempel 1, og gir et smittefritt IgG-preparat som er velegnet for injeksjonsformål.
Eksempel 4
Den behandling som er beskrevet i Eksempel 1, gjentas med den forandring at varmebehandlingen utføres ved 90°C i 12 timer. Det behandlede preparat har samme egenskaper som det som er fremstilt i Eksempel 1.
Claims (3)
1. Fremgangsmåte ved inaktivering av varmeømfintlige, patogene, blod-bårede virus som f.eks. LAV/HILV-III eller Hepatittt-virus i IgG-preparater,
karakterisert ved at en IgG-holdig oppløsning renses for å fjerne reduserende karbohydrater og deretter tørkes og varmebehandles ved en temperatur på 60-95°C i 10 til 168 timer under betingelser hvor restvanninnholdet i preparatet er maksimalt 1 vekt%.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at den IgG-holdige oppløs-ning som varmebehandles er en fraksjon av menneskeblod.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at varmebehandlingen utfø-res ved en temperatur på 65-95°C, og at restvanninnholdet er under 0,5%, fortrinnsvis under 0,3%.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK595285A DK595285D0 (da) | 1985-12-20 | 1985-12-20 | Injicerbart og varmebehandet igg-praeparat og fremgangsmaade til fremstilling af samme |
| PCT/DK1986/000134 WO1987003813A1 (en) | 1985-12-20 | 1986-12-18 | A PROCESS FOR INACTIVATING THERMALLY SENSITIVE, PATHOGENIC, BLOOD-CARRIED VIRA IN IgG PREPARATIONS |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO873491L NO873491L (no) | 1987-08-19 |
| NO873491D0 NO873491D0 (no) | 1987-08-19 |
| NO170055B true NO170055B (no) | 1992-06-01 |
| NO170055C NO170055C (no) | 1992-09-09 |
Family
ID=8146398
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO873491A NO170055C (no) | 1985-12-20 | 1987-08-19 | Fremgangsmaate for inaktivering av termisk foelsomme, patogene, blod-baarede virus i igg-preparater |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0250502B1 (no) |
| AT (1) | ATE90206T1 (no) |
| AU (1) | AU6780087A (no) |
| DE (1) | DE3688557T2 (no) |
| DK (1) | DK595285D0 (no) |
| FI (1) | FI89135C (no) |
| NO (1) | NO170055C (no) |
| WO (1) | WO1987003813A1 (no) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8628104D0 (en) * | 1986-11-25 | 1986-12-31 | Connaught Lab | Pasteurization of immunoglobin solutions |
| NL1005037C2 (nl) | 1997-01-17 | 1998-07-20 | Nl Zuivelonderzoek Inst | Werkwijze voor het selectief afbreken van melkeiwit, in het bijzonder voor het selectief hydrolyseren van caseïne/caseïnaat in aanwezigheid van andere melkeiwitten, in het bijzonder wei-eiwitten. |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3176491D1 (en) * | 1980-03-05 | 1987-11-26 | Miles Lab | Pasteurized therapeutically active protein compositions |
| US4495278A (en) * | 1981-04-27 | 1985-01-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Process for making novel blood clotting enzyme compositions |
| US4456590B2 (en) * | 1981-11-02 | 1989-05-30 | Heat treatment of lyphilized blood clotting factor viii concentrate | |
| ZA838856B (en) * | 1982-12-02 | 1984-07-25 | Usv Pharma Corp | Hepatitis b and non-a-non-b-safe biological products |
| DE3473407D1 (en) * | 1983-05-02 | 1988-09-22 | Immuno Ag | Method of inactivating pathogens |
| JPS6054287B2 (ja) * | 1983-10-19 | 1985-11-29 | 株式会社ミドリ十字 | 血漿蛋白の加熱処理方法 |
| AT389815B (de) * | 1984-03-09 | 1990-02-12 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
| DE3434472A1 (de) * | 1984-09-20 | 1986-03-27 | Lentia GmbH Chem. u. pharm. Erzeugnisse - Industriebedarf, 8000 München | Verfahren zur pasteurisation von plasmaproteinen bzw. von plasmaproteinfraktionen |
| JPH0669961B2 (ja) * | 1984-09-25 | 1994-09-07 | 株式会社ミドリ十字 | 免疫グロブリンの加熱処理方法 |
| GB8817288D0 (en) * | 1988-07-20 | 1988-08-24 | Racal Milgo Ltd | Methods of & networks for information communication |
| DE59711346D1 (de) * | 1996-12-20 | 2004-04-01 | Nutrinova Gmbh | Verfahren zur verstärkung der süsskraft und zur geschmacksverbesserung einer mischung hochintensiver süssstoffe |
-
1985
- 1985-12-20 DK DK595285A patent/DK595285D0/da not_active Application Discontinuation
-
1986
- 1986-12-18 WO PCT/DK1986/000134 patent/WO1987003813A1/en active IP Right Grant
- 1986-12-18 DE DE8787900077T patent/DE3688557T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-12-18 AT AT87900077T patent/ATE90206T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-12-18 AU AU67800/87A patent/AU6780087A/en not_active Abandoned
- 1986-12-18 EP EP87900077A patent/EP0250502B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-08-19 NO NO873491A patent/NO170055C/no unknown
- 1987-08-20 FI FI873602A patent/FI89135C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3688557D1 (de) | 1993-07-15 |
| ATE90206T1 (de) | 1993-06-15 |
| WO1987003813A1 (en) | 1987-07-02 |
| FI873602A (fi) | 1987-08-20 |
| FI873602A0 (fi) | 1987-08-20 |
| FI89135C (fi) | 1993-08-25 |
| AU6780087A (en) | 1987-07-15 |
| DE3688557T2 (de) | 1993-09-23 |
| EP0250502B1 (en) | 1993-06-09 |
| EP0250502A1 (en) | 1988-01-07 |
| NO873491L (no) | 1987-08-19 |
| DK595285D0 (da) | 1985-12-20 |
| FI89135B (fi) | 1993-05-14 |
| NO170055C (no) | 1992-09-09 |
| NO873491D0 (no) | 1987-08-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1341505C (en) | Intravenously administered polyclonal immunoglobulin preparation containing igm and method of manufacture | |
| US5633349A (en) | Method of inactivating prions (slow viruses) conventional viruses and other infections agents in biological material | |
| AU618157B2 (en) | Viral inactivation process | |
| RU2008916C1 (ru) | Способ пастеризации водного раствора иммуноглобулина | |
| EP0058993A2 (en) | Process for heat treatment of aqueous solution containing cold insoluble globulin | |
| US4845199A (en) | Process for heat treating chemically unmodified gamma-globulin | |
| CA1340062C (en) | Method of inactivating reproductive filterable pathogens | |
| JP2879427B2 (ja) | ウイルスおよびバクテリア汚染物の熱的不活性化中の生物学的および製薬的生成物の安定化 | |
| JPS59134730A (ja) | 血液凝固第８因子の加熱処理法 | |
| NO170055B (no) | Fremgangsmaate for inaktivering av termisk foelsomme, patogene, blod-baarede virus i igg-preparater | |
| AU700736B2 (en) | Preparation of immunoglobulin | |
| JPH09124507A (ja) | ウイルスを不活化した静脈内注射可能な免疫血清グロブリンの調製 | |
| US6465170B2 (en) | Method for depleting viral and molecular pathogens in a biological material | |
| WO1998030230A1 (fr) | Compositions proteinees et procede de production | |
| KR20140020746A (ko) | 카프릴레이트 바이러스 불활성화 | |
| AU726808B2 (en) | Process for reducing the concentration of viral and molecular pathogens in a biological material | |
| CA2633338C (en) | The invention relates to a method of viral inactivation by dry heating | |
| RU2470664C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулина для внутривенного введения, обогащенного иммуноглобулином м, и препарат, полученный этим способом | |
| Nazari et al. | Virus reduction of human plasma-derived biological medicines | |
| JPS62292731A (ja) | 低温殺菌された免疫グロブリン製剤の製法 | |
| KR960015104B1 (ko) | 화학적으로 변형되지 않은 γ-글로부린을 열처리하는 방법 | |
| CN102584993A (zh) | 一种高效价人破伤风免疫血浆及其制备工艺 | |
| Nishisaka et al. | A PRELIMINARY STUDY FOR ELIMINATION OF CONTAMINATED BABESIA MICROTI FROM THE MODEL OF HUMAN PLASMA FRACTION | |
| Knevelman et al. | Effect of monosaccharides during severe dry heat treatment of coagulation factor VIII concentrates | |
| KR100276155B1 (ko) | 화학적으로 변형되지 않은 γ-글로불린 제제 |