JPH09124507A - ウイルスを不活化した静脈内注射可能な免疫血清グロブリンの調製 - Google Patents
ウイルスを不活化した静脈内注射可能な免疫血清グロブリンの調製Info
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- JPH09124507A JPH09124507A JP8265084A JP26508496A JPH09124507A JP H09124507 A JPH09124507 A JP H09124507A JP 8265084 A JP8265084 A JP 8265084A JP 26508496 A JP26508496 A JP 26508496A JP H09124507 A JPH09124507 A JP H09124507A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 静注可能な免疫血清グロブリンの調製方法及
び調製物の提供。 【解決手段】 抗体溶液のウイルス不活化処理からもた
らされる抗補体活性（ＡＣＡ）を低下する方法であり、
その方法は、ウイルス活性を実質的に低下させるのに十
分な条件下で、溶液を、リン酸トリ−ｎ−ブチルのよう
なリン酸トリアルキルおよびコール酸ナトリウムのよう
な界面活性剤と接触させること、そして次に、抗補体活
性が許容レベルまで低下されるように、時間、ｐＨ、温
度およびイオン強度の制御条件下で、溶液をインキュベ
ートすることを含む。好適な実施態様では、ＡＣＡは、
約６０ＣＨ50単位／ｍｌ未満まで低下され、インキュベ
ーションは、ｐＨ３．５〜５．０で少なくとも約１０日
間であり、温度は、２〜５０℃の範囲内に維持され、そ
して溶液のイオン強度は、約０．００１未満である。
び調製物の提供。 【解決手段】 抗体溶液のウイルス不活化処理からもた
らされる抗補体活性（ＡＣＡ）を低下する方法であり、
その方法は、ウイルス活性を実質的に低下させるのに十
分な条件下で、溶液を、リン酸トリ−ｎ−ブチルのよう
なリン酸トリアルキルおよびコール酸ナトリウムのよう
な界面活性剤と接触させること、そして次に、抗補体活
性が許容レベルまで低下されるように、時間、ｐＨ、温
度およびイオン強度の制御条件下で、溶液をインキュベ
ートすることを含む。好適な実施態様では、ＡＣＡは、
約６０ＣＨ50単位／ｍｌ未満まで低下され、インキュベ
ーションは、ｐＨ３．５〜５．０で少なくとも約１０日
間であり、温度は、２〜５０℃の範囲内に維持され、そ
して溶液のイオン強度は、約０．００１未満である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、一般に、静脈内注
射可能な免疫グロブリン産物に関し、そしてより具体的
には、ウイルス不活化段階にかけられ、低レベルの抗補
体活性をもつ静脈内注射可能な免疫血清グロブリン（Ｉ
ＧＩＶ）に関する。
射可能な免疫グロブリン産物に関し、そしてより具体的
には、ウイルス不活化段階にかけられ、低レベルの抗補
体活性をもつ静脈内注射可能な免疫血清グロブリン（Ｉ
ＧＩＶ）に関する。
【０００２】
【従来の技術】免疫血清グロブリンの初期の医薬製剤
は、有害反応の許容できないほどの高い発生のために、
静脈内に投与することができなかった。これらの有害反
応は、血清の補体レベルにおける減少に関連していて、
明らかに、投与されたγ−グロブリンに結合する補体に
よって引き起こされる（１）。γ−グロブリンの補体結
合能、またはその抗補体活性（ＡＣＡ）は、分画操作の
間にもたらされる変性の結果として非常に増進される。
いくつかのアプローチが、静脈内投与に安全なＩＳＧを
与えるという問題を目指して取られてきた（（２）およ
び本明細書に組み入れられる引用文献、参照）。Tenold
は、静脈内注射によって投与できる低ＡＣＡをもつ免疫
血清グロブリン（ＩＳＧ）を調製する方法を報告した
（２、引用によって本明細書に組み入れられる）。Ｔｅ
ｎｏｌｄ’６０８法は、低イオン強度（好ましくは、約
０．００１未満）および低ｐＨ（３．５〜５．０）にお
いて、ＩＳＧを製剤化することを必要としている。
は、有害反応の許容できないほどの高い発生のために、
静脈内に投与することができなかった。これらの有害反
応は、血清の補体レベルにおける減少に関連していて、
明らかに、投与されたγ−グロブリンに結合する補体に
よって引き起こされる（１）。γ−グロブリンの補体結
合能、またはその抗補体活性（ＡＣＡ）は、分画操作の
間にもたらされる変性の結果として非常に増進される。
いくつかのアプローチが、静脈内投与に安全なＩＳＧを
与えるという問題を目指して取られてきた（（２）およ
び本明細書に組み入れられる引用文献、参照）。Tenold
は、静脈内注射によって投与できる低ＡＣＡをもつ免疫
血清グロブリン（ＩＳＧ）を調製する方法を報告した
（２、引用によって本明細書に組み入れられる）。Ｔｅ
ｎｏｌｄ’６０８法は、低イオン強度（好ましくは、約
０．００１未満）および低ｐＨ（３．５〜５．０）にお
いて、ＩＳＧを製剤化することを必要としている。
【０００３】マルトースのような炭水化物による安定化
を含む、静脈内注射可能な免疫血清グロブリン（ＩＧＩ
Ｖ）を調製する他の方法も、報告されている（３）。ｐ
Ｈ４．０で３７℃におけるＩＳＧのインキュベーション
を含む方法（４）は、静脈内注射によって投与できる低
ＡＣＡをもつ生産物をもたらす；しかしながら、保存中
に、その生産物は高いＡＣＡを取り戻す。また、ＩＧＩ
Ｖは、ＩＳＧの共有結合の改変によって、例えば、タン
パク質分解（５）によるか、またはジスルフィド結合の
還元に続く遮断剤との反応（１，６）によって調製され
た。
を含む、静脈内注射可能な免疫血清グロブリン（ＩＧＩ
Ｖ）を調製する他の方法も、報告されている（３）。ｐ
Ｈ４．０で３７℃におけるＩＳＧのインキュベーション
を含む方法（４）は、静脈内注射によって投与できる低
ＡＣＡをもつ生産物をもたらす；しかしながら、保存中
に、その生産物は高いＡＣＡを取り戻す。また、ＩＧＩ
Ｖは、ＩＳＧの共有結合の改変によって、例えば、タン
パク質分解（５）によるか、またはジスルフィド結合の
還元に続く遮断剤との反応（１，６）によって調製され
た。
【０００４】抗体調製物は、それらが単離された血液産
物であるが故に、ウイルスの介在する疾病を伝達すると
いう本質的危険性を有している。ウイルスの不活化は、
安全なそして有効な血液産物を生産する上で、重要な段
階である。引用によって本明細書に組み入れられるNeur
athらによる米国特許第4,540,573号は、リン酸トリアル
キルと界面活性剤処理を用いるウイルス不活化法（以
下、溶剤／界面活性剤工程、またはＳＤ工程）を述べて
いる（７）。その溶剤／界面活性剤法は、生物学的活性
や血液産物プロフィルに限られた悪影響を及ぼす脂質外
皮ウイルスの不活化に有効であるとして、受け入れられ
た（８，１５；また、種々のウイルスの不活化処理の検
討に関する１２、参照）。
物であるが故に、ウイルスの介在する疾病を伝達すると
いう本質的危険性を有している。ウイルスの不活化は、
安全なそして有効な血液産物を生産する上で、重要な段
階である。引用によって本明細書に組み入れられるNeur
athらによる米国特許第4,540,573号は、リン酸トリアル
キルと界面活性剤処理を用いるウイルス不活化法（以
下、溶剤／界面活性剤工程、またはＳＤ工程）を述べて
いる（７）。その溶剤／界面活性剤法は、生物学的活性
や血液産物プロフィルに限られた悪影響を及ぼす脂質外
皮ウイルスの不活化に有効であるとして、受け入れられ
た（８，１５；また、種々のウイルスの不活化処理の検
討に関する１２、参照）。
【０００５】現在、市場にある抗体調製物は、一般に、
ウイルス汚染に関して安全であるとみなされてきた
（９）。これは、これらの血液産物を単離するために使
用される分画工程の特色によると考えられる。しかしな
がら、生産工程において明白なウイルス不活化段階を含
むことによって、抗体調製物の安全性をさらに確実にす
ることが望ましいであろう。ＩＧＩＶ溶液におけるウイ
ルス活性の確実な低下が、種々のウイルスについて、い
くつかの異なるウイルス不活化方法を用いて報告された
（１６，１７）。レトロウイルスを実質的に含まない免
疫グロブリンの調製方法が報告されたが、それは、時
間、温度およびｐＨの制御条件下でのＩＳＧのインキュ
ベーションを含む。その方法は、冷エタノールによる血
漿分画工程を通してＩＳＧを単離し、次いで、２つの貯
蔵条件：（ａ）ｐＨ≦４．２５、温度２７℃、少なくと
も３日間、または（ｂ）ｐＨ≦６．８、温度４５℃、少
なくとも６時間、の１つの条件下でＩＳＧを貯蔵するこ
とを伴う（１０）。
ウイルス汚染に関して安全であるとみなされてきた
（９）。これは、これらの血液産物を単離するために使
用される分画工程の特色によると考えられる。しかしな
がら、生産工程において明白なウイルス不活化段階を含
むことによって、抗体調製物の安全性をさらに確実にす
ることが望ましいであろう。ＩＧＩＶ溶液におけるウイ
ルス活性の確実な低下が、種々のウイルスについて、い
くつかの異なるウイルス不活化方法を用いて報告された
（１６，１７）。レトロウイルスを実質的に含まない免
疫グロブリンの調製方法が報告されたが、それは、時
間、温度およびｐＨの制御条件下でのＩＳＧのインキュ
ベーションを含む。その方法は、冷エタノールによる血
漿分画工程を通してＩＳＧを単離し、次いで、２つの貯
蔵条件：（ａ）ｐＨ≦４．２５、温度２７℃、少なくと
も３日間、または（ｂ）ｐＨ≦６．８、温度４５℃、少
なくとも６時間、の１つの条件下でＩＳＧを貯蔵するこ
とを伴う（１０）。
【０００６】本発明者らは、ＩＳＧ調製物、特にＴｅｎ
ｏｌｄ’６０８特許にしたがって後続して製剤化される
ものを処理するために、ＳＤ工程を用いることが、許容
できるまで不活化されたウイルスをもつが、許容できな
いほど高いレベルのＡＣＡをもつ生産物をもたらすこと
を発見した。上昇したＡＣＡレベルは、工程の規模に拘
わらず、すべてのリン酸トリ−ｎ−ブチル（ＴＮＢＰ）
／界面活性剤処理されたＩＧＩＶ調製物の無菌バルク段
階において（すなわち、５％または１０％ＩＧＩＶとし
て製剤化し、そして０．２μｍ無菌フィルターにより濾
過した後）、常に検出された。高いＡＣＡレベルをもつ
ＩＳＧ調製物は、静脈内注射にとって不適切であり、そ
の代わりに、他の経路、例えば筋肉内（ＩＭ）注射を通
して投与されねばならない。しかしながら、ＩＧＩＶ調
製物は、血流中で直ちに利用され、そしてＩＭ注射に伴
う損失にはかかわらないので、それらはより望ましいも
のである。かくして、ＡＣＡにおいてもともに低く、ウ
イルス不活化段階にかけられたＩＧＩＶ生産物を得るこ
とが望まれる。
ｏｌｄ’６０８特許にしたがって後続して製剤化される
ものを処理するために、ＳＤ工程を用いることが、許容
できるまで不活化されたウイルスをもつが、許容できな
いほど高いレベルのＡＣＡをもつ生産物をもたらすこと
を発見した。上昇したＡＣＡレベルは、工程の規模に拘
わらず、すべてのリン酸トリ−ｎ−ブチル（ＴＮＢＰ）
／界面活性剤処理されたＩＧＩＶ調製物の無菌バルク段
階において（すなわち、５％または１０％ＩＧＩＶとし
て製剤化し、そして０．２μｍ無菌フィルターにより濾
過した後）、常に検出された。高いＡＣＡレベルをもつ
ＩＳＧ調製物は、静脈内注射にとって不適切であり、そ
の代わりに、他の経路、例えば筋肉内（ＩＭ）注射を通
して投与されねばならない。しかしながら、ＩＧＩＶ調
製物は、血流中で直ちに利用され、そしてＩＭ注射に伴
う損失にはかかわらないので、それらはより望ましいも
のである。かくして、ＡＣＡにおいてもともに低く、ウ
イルス不活化段階にかけられたＩＧＩＶ生産物を得るこ
とが望まれる。
【０００７】
【発明の構成】本発明は、脂質外皮をもつウイルスを実
質的に不含にするために化学的に処理された、低い抗補
体活性をもつ静脈内注射可能な免疫血清グロブリン（Ｉ
ＧＩＶ）を生産する方法である。本方法は、溶剤／溶剤
界面活性剤によるウイルス不活化段階と、それに続くイ
ンキュベーション段階を含む。本発明者らは、インキュ
ベーション段階が、ＩＳＧを静脈内注射により投与可能
とするのに、十分低い許容できるＡＣＡレベルを達成す
るために必要であることを発見した。インキュベーショ
ン段階は、制御された時間、ｐＨ、温度およびイオン強
度下で実施されねばならない。好ましくは、ｐＨは、約
３．５〜約５．０に維持する必要があり、温度は、約２
〜約５０℃の範囲内の必要があり、そしてイオン強度
は、約０．００１未満の必要がある。好適な実施態様で
は、ＩＳＧ調製物のＡＣＡは、ＩＳＧが、ｐＨ約４．２
５、低イオン強度（約０．００１未満）に維持される場
合、少なくとも約１０日の期間にわたって徐々に減少
し、そしてウイルス不活化段階（模範的系において）
は、脂質外皮ウイルスの力価において実質的な低下（す
なわち、少なくとも対数で４）をもたらす。
質的に不含にするために化学的に処理された、低い抗補
体活性をもつ静脈内注射可能な免疫血清グロブリン（Ｉ
ＧＩＶ）を生産する方法である。本方法は、溶剤／溶剤
界面活性剤によるウイルス不活化段階と、それに続くイ
ンキュベーション段階を含む。本発明者らは、インキュ
ベーション段階が、ＩＳＧを静脈内注射により投与可能
とするのに、十分低い許容できるＡＣＡレベルを達成す
るために必要であることを発見した。インキュベーショ
ン段階は、制御された時間、ｐＨ、温度およびイオン強
度下で実施されねばならない。好ましくは、ｐＨは、約
３．５〜約５．０に維持する必要があり、温度は、約２
〜約５０℃の範囲内の必要があり、そしてイオン強度
は、約０．００１未満の必要がある。好適な実施態様で
は、ＩＳＧ調製物のＡＣＡは、ＩＳＧが、ｐＨ約４．２
５、低イオン強度（約０．００１未満）に維持される場
合、少なくとも約１０日の期間にわたって徐々に減少
し、そしてウイルス不活化段階（模範的系において）
は、脂質外皮ウイルスの力価において実質的な低下（す
なわち、少なくとも対数で４）をもたらす。
【０００８】材料および方法 本発明の方法のための出発材料は、未改変のヒト免疫血
清グロブリンである。本明細書および特許請求の範囲で
は、用語「免疫血清グロブリン」は、また、γ−グロブ
リン、ＩｇＧおよび免疫グロブリンＧとして、文献にお
いてさまざまに呼ばれる物質を定義するために使用され
る。それは、主として、そして好ましくは、分子量約１
６０，０００をもつγ−グロブリンの７Ｓ種、少なくと
も約８５％からなる。その他の残りのものは、好ましく
は、分子量約３００，０００の９Ｓ種である。標準免疫
および高度免疫の両血清グロブリン、例えば破傷風、狂
犬病および肝炎免疫血清グロブリンは、それぞれ免疫お
よび高度免疫ＩＳＧである溶剤／界面活性剤処理された
生産物を用いることができる。かくして、本発明の方法
のための適切な出発材料は、コーン（Ｃｏｈｎ）の画分
ＩＩまたは画分ＩＩＩ濾液である（引用文献１３，１
４、参照）。
清グロブリンである。本明細書および特許請求の範囲で
は、用語「免疫血清グロブリン」は、また、γ−グロブ
リン、ＩｇＧおよび免疫グロブリンＧとして、文献にお
いてさまざまに呼ばれる物質を定義するために使用され
る。それは、主として、そして好ましくは、分子量約１
６０，０００をもつγ−グロブリンの７Ｓ種、少なくと
も約８５％からなる。その他の残りのものは、好ましく
は、分子量約３００，０００の９Ｓ種である。標準免疫
および高度免疫の両血清グロブリン、例えば破傷風、狂
犬病および肝炎免疫血清グロブリンは、それぞれ免疫お
よび高度免疫ＩＳＧである溶剤／界面活性剤処理された
生産物を用いることができる。かくして、本発明の方法
のための適切な出発材料は、コーン（Ｃｏｈｎ）の画分
ＩＩまたは画分ＩＩＩ濾液である（引用文献１３，１
４、参照）。
【０００９】画分ＩＩは、超遠心試験によって、主とし
て（約８５％）、平均分子量１６０，０００をもつγ−
グロブリンの７Ｓ（沈降定数７）種である。その残りの
タンパク質は、本質的に、Ｍ．Ｗ．約３００，０００を
もつ９Ｓ物質である。湿潤画分ＩＩペースト（固形分約
３０％）は、通常、凍結乾燥されて、乾燥ＩＳＧ末を得
るが、それは、次に溶解され、１６．５％無菌溶液とし
て筋肉内注射用に調製される。湿潤画分ＩＩペーストも
乾燥ＩＳＧ末もいずれも、本発明の方法のための適切な
出発材料である。
て（約８５％）、平均分子量１６０，０００をもつγ−
グロブリンの７Ｓ（沈降定数７）種である。その残りの
タンパク質は、本質的に、Ｍ．Ｗ．約３００，０００を
もつ９Ｓ物質である。湿潤画分ＩＩペースト（固形分約
３０％）は、通常、凍結乾燥されて、乾燥ＩＳＧ末を得
るが、それは、次に溶解され、１６．５％無菌溶液とし
て筋肉内注射用に調製される。湿潤画分ＩＩペーストも
乾燥ＩＳＧ末もいずれも、本発明の方法のための適切な
出発材料である。
【００１０】本質的に、Ｃｏｈｎ画分ＩＩまたは画分Ｉ
ＩＩ濾液に見いだされるようなタンパク質成分の同じ組
成をもつ、すべての方法によって得られるγ−グロブリ
ンも、本方法における出発材料として使用することがで
きる。標準免疫血清グロブリンおよび高度免疫血清グロ
ブリンの両方とも、出発材料として用いられる。周知の
ように、後者は、平均的集団に通常見いだせるよりも、
特異抗体に対するはるかに高い力価をもつ選ばれた献血
者から得られる血漿または血清から生成される。これら
の献血者は、最近、特定のワクチンにより免疫化された
か、あるいは、彼らは、最近、感染または病気から回復
したかのいずれかである。これらの高力価血清や血漿
は、保存され、そして画分ＩＩを単離する時点までの通
常のＣｏｈｎ分画操作にかけられる。
ＩＩ濾液に見いだされるようなタンパク質成分の同じ組
成をもつ、すべての方法によって得られるγ−グロブリ
ンも、本方法における出発材料として使用することがで
きる。標準免疫血清グロブリンおよび高度免疫血清グロ
ブリンの両方とも、出発材料として用いられる。周知の
ように、後者は、平均的集団に通常見いだせるよりも、
特異抗体に対するはるかに高い力価をもつ選ばれた献血
者から得られる血漿または血清から生成される。これら
の献血者は、最近、特定のワクチンにより免疫化された
か、あるいは、彼らは、最近、感染または病気から回復
したかのいずれかである。これらの高力価血清や血漿
は、保存され、そして画分ＩＩを単離する時点までの通
常のＣｏｈｎ分画操作にかけられる。
【００１１】さらにまた、目的の免疫応答を達成するた
めに必要な抗体量は、静脈内に投与された場合には実質
的に少ないので、静脈内用量が、同じ血清抗体価を産む
であろう筋肉内用量よりも実質的に低いことは、明らか
である。かくして、筋肉内のＩＳＧと高度免疫血清グロ
ブリンの用量は、同じ抗体活性のグロブリンが静脈内に
投与される場合には、同じ血清抗体価を達成するために
必要な用量よりも高くなければならない。
めに必要な抗体量は、静脈内に投与された場合には実質
的に少ないので、静脈内用量が、同じ血清抗体価を産む
であろう筋肉内用量よりも実質的に低いことは、明らか
である。かくして、筋肉内のＩＳＧと高度免疫血清グロ
ブリンの用量は、同じ抗体活性のグロブリンが静脈内に
投与される場合には、同じ血清抗体価を達成するために
必要な用量よりも高くなければならない。
【００１２】出発材料の湿潤ペーストまたは凍結乾燥粉
末は、一定容量の水または他の生理学的に許容できるキ
ャリアー中に溶解されて、濃度約０．５〜２０％、好ま
しくは約５〜１０％のタンパク質溶液を与える。もし、
画分ＩＩＩ濾液が使用される場合には、水溶液は、目的
のタンパク質濃度まで慣用の技術により濃縮されねばな
らない。この方法では、いかなるタンパク質濃度が使用
されてもよい；しかしながら、上記範囲が、実用的観点
から好適である。
末は、一定容量の水または他の生理学的に許容できるキ
ャリアー中に溶解されて、濃度約０．５〜２０％、好ま
しくは約５〜１０％のタンパク質溶液を与える。もし、
画分ＩＩＩ濾液が使用される場合には、水溶液は、目的
のタンパク質濃度まで慣用の技術により濃縮されねばな
らない。この方法では、いかなるタンパク質濃度が使用
されてもよい；しかしながら、上記範囲が、実用的観点
から好適である。
【００１３】タンパク質が、溶解または濃縮された後、
その溶液は、塩酸のような生理学的に許容できる酸の添
加によって、ｐＨ約３．５〜５．０、好ましくは約３．
８〜４．２に調整される。一般に、ｐＨは、タンパク質
溶液中の単量体材料が、最大量に保たれる点に調整され
る。しかしながら、ｐＨは、ゲル化を生じるほど低くて
はならない。温度は、ＩＳＧ材料に有害であってはなら
ない。良好な結果は、温度範囲約０〜２０℃内で得られ
る。そのように調整された材料を、次の段階前に、いず
れか時間を置くことは不要である；しかしながら、必要
ならば、その材料は、悪い影響もなく保存されるであろ
う。
その溶液は、塩酸のような生理学的に許容できる酸の添
加によって、ｐＨ約３．５〜５．０、好ましくは約３．
８〜４．２に調整される。一般に、ｐＨは、タンパク質
溶液中の単量体材料が、最大量に保たれる点に調整され
る。しかしながら、ｐＨは、ゲル化を生じるほど低くて
はならない。温度は、ＩＳＧ材料に有害であってはなら
ない。良好な結果は、温度範囲約０〜２０℃内で得られ
る。そのように調整された材料を、次の段階前に、いず
れか時間を置くことは不要である；しかしながら、必要
ならば、その材料は、悪い影響もなく保存されるであろ
う。
【００１４】適当なｐＨ（好ましくは、３．８〜４．
２）におけるタンパク質溶液は、少なくとも４倍量の交
換水を用いて透析濾過されてもよく、アルコール濃度は
約１７％（濾液ＩＩＩ）から約２％アルコールまで低下
される。ウイルス不活化法としての溶剤／界面活性剤の
効力は、周囲温度またはそれ以上で、より一層良好であ
る；しかしながら、これらの温度における高アルコール
濃度は、ＩｇＧ分子を変性するであろう。かくして、こ
の不活化は、低アルコール濃度において実施されねばな
らない。
２）におけるタンパク質溶液は、少なくとも４倍量の交
換水を用いて透析濾過されてもよく、アルコール濃度は
約１７％（濾液ＩＩＩ）から約２％アルコールまで低下
される。ウイルス不活化法としての溶剤／界面活性剤の
効力は、周囲温度またはそれ以上で、より一層良好であ
る；しかしながら、これらの温度における高アルコール
濃度は、ＩｇＧ分子を変性するであろう。かくして、こ
の不活化は、低アルコール濃度において実施されねばな
らない。
【００１５】次に、そのように処理された材料のタンパ
ク質濃度は、ＴＮＢＰ／界面活性剤によるインキュベー
ションに望ましいレベル、一般には、最大のウイルス不
活化のためにはタンパク質１０％未満に調整される。こ
の調整は、ＩｇＧにとって有害ではない慣用技術、例え
ば限外濾過、逆浸透、昇華、蒸発等によって行われる。
ＴＮＢＰ／界面活性剤の添加前に、ｐＨは、使用される
界面活性剤に応じて広い範囲内で調整されてもよい。ト
ウィーン（Ｔｗｅｅｎ）８０を用いる場合には、ｐＨ
は、ＩｇＧが不安定になり始める３．５と同じぐらい低
くてもよい。コール酸塩では、ＴＮＢＰ／界面活性剤の
添加前に、ｐＨは、範囲５．０〜６．４内、好ましくは
約５．６に調整される。インキュベーションの間の満足
できるコール酸塩の溶解度は、ＴＮＢＰとコール酸ナト
リウムの添加前に、ｐＨ５．５またはそれ以上に、免疫
グロブリン溶液を調整することによって達成された。Ｉ
ｇＧ溶液をｐＨ値５．５以下に調整することは、適切で
はない、何故ならば、コール酸ナトリウムの溶解度は、
強くｐＨに依存し、ｐＨ５．５以下では低いからであ
る。さらにまた、ＴＮＢＰ／コール酸塩を用いるインキ
ュベーションの間の最大のウイルス不活化は、ＩｇＧ溶
液中に阻止されるモデル・ウイルスを用いる実験におい
て、ｐＨ値６．０未満で観察された。ＨＩＶ−１および
ＢＶＤＶ（Ｃ型肝炎のモデルとして用いられたウシのウ
イルス性下痢ウイルス）の不活化は、ｐＨ５．８で加速
され、１〜２時間で検出限界までの不活化が起きたが、
一方ｐＨ７条件が使用された場合には、検出限界までの
不活化は、最小でも６時間を要した。
ク質濃度は、ＴＮＢＰ／界面活性剤によるインキュベー
ションに望ましいレベル、一般には、最大のウイルス不
活化のためにはタンパク質１０％未満に調整される。こ
の調整は、ＩｇＧにとって有害ではない慣用技術、例え
ば限外濾過、逆浸透、昇華、蒸発等によって行われる。
ＴＮＢＰ／界面活性剤の添加前に、ｐＨは、使用される
界面活性剤に応じて広い範囲内で調整されてもよい。ト
ウィーン（Ｔｗｅｅｎ）８０を用いる場合には、ｐＨ
は、ＩｇＧが不安定になり始める３．５と同じぐらい低
くてもよい。コール酸塩では、ＴＮＢＰ／界面活性剤の
添加前に、ｐＨは、範囲５．０〜６．４内、好ましくは
約５．６に調整される。インキュベーションの間の満足
できるコール酸塩の溶解度は、ＴＮＢＰとコール酸ナト
リウムの添加前に、ｐＨ５．５またはそれ以上に、免疫
グロブリン溶液を調整することによって達成された。Ｉ
ｇＧ溶液をｐＨ値５．５以下に調整することは、適切で
はない、何故ならば、コール酸ナトリウムの溶解度は、
強くｐＨに依存し、ｐＨ５．５以下では低いからであ
る。さらにまた、ＴＮＢＰ／コール酸塩を用いるインキ
ュベーションの間の最大のウイルス不活化は、ＩｇＧ溶
液中に阻止されるモデル・ウイルスを用いる実験におい
て、ｐＨ値６．０未満で観察された。ＨＩＶ−１および
ＢＶＤＶ（Ｃ型肝炎のモデルとして用いられたウシのウ
イルス性下痢ウイルス）の不活化は、ｐＨ５．８で加速
され、１〜２時間で検出限界までの不活化が起きたが、
一方ｐＨ７条件が使用された場合には、検出限界までの
不活化は、最小でも６時間を要した。
【００１６】次に、ＴＮＢＰ／界面活性剤が、徹底的に
混合されるタンパク質溶液（好ましくは、８％未満［ｗ
／ｗ］，ｐＨ５．８）に添加され、次いで、連続撹拌ま
たは混合しつつ、周囲温度以上、例えば３０℃でインキ
ュベートされる。インキュベーション段階の間、最適な
ウイルス不活化のための標的ＴＮＢＰ／コール酸塩レベ
ルは、Edwardsら（８）により定められたようにＴＮＢ
Ｐ＞３ｍｇ／ｍｌおよびコール酸塩＞２ｍｇ／ｍｌでな
ければならない。さらに、効果的なウイルス不活化で
は、溶剤／界面活性剤とＩｇＧ溶液の混合を通じて促進
するために、溶液は、実質的に粒子を含まないことが重
要である。これらの条件下でＴＮＢＰ／コール酸塩によ
るインキュベーションの後、ＨＩＶ−１では対数で５．
２を超える低下そしてＢＶＤＶでは対数で４．０を超え
る低下が認められた。
混合されるタンパク質溶液（好ましくは、８％未満［ｗ
／ｗ］，ｐＨ５．８）に添加され、次いで、連続撹拌ま
たは混合しつつ、周囲温度以上、例えば３０℃でインキ
ュベートされる。インキュベーション段階の間、最適な
ウイルス不活化のための標的ＴＮＢＰ／コール酸塩レベ
ルは、Edwardsら（８）により定められたようにＴＮＢ
Ｐ＞３ｍｇ／ｍｌおよびコール酸塩＞２ｍｇ／ｍｌでな
ければならない。さらに、効果的なウイルス不活化で
は、溶剤／界面活性剤とＩｇＧ溶液の混合を通じて促進
するために、溶液は、実質的に粒子を含まないことが重
要である。これらの条件下でＴＮＢＰ／コール酸塩によ
るインキュベーションの後、ＨＩＶ−１では対数で５．
２を超える低下そしてＢＶＤＶでは対数で４．０を超え
る低下が認められた。
【００１７】ウイルスを不活化させるインキュベーショ
ンの終了後、静脈内投与に適切な低レベルの残留ＴＮＢ
Ｐとコール酸塩を含む最終産物を得るために、溶剤と界
面活性剤分子が除去されねばならない。一般に、界面活
性剤を除去する操作は、ＴＮＢＰを除去するのにも有効
であり、そしてその逆も言える。最終容器中の非常に低
レベルのＴＮＢＰおよびコール酸塩は、濾過、透析濾過
および疎水的クロマトグラフィーの組み合わせによって
達成できる。インキュベーション終了後、溶液が、予め
４．０のような低ｐＨ値に調整されれば、コール酸ナト
リウムは、そのようなｐＨで水溶液に容易に溶解するの
で、コール酸塩（およびＴＮＢＰ）の大部分が、濾過に
よってタンパク質溶液から除去できる。さらに、ＩｇＧ
分子は、低イオン強度の溶液においてはｐＨ値３．５〜
５．０で、より安定である（２）ので、溶剤／界面活性
剤インキュベーションに続くすべての処理は、低ｐＨ値
（すなわち４．０）において実施される。かくして、Ｔ
ＮＢＰ／コール酸塩によるインキュベーション後、タン
パク質溶液は、ほぼｐＨ４．０に調整され、そしてコー
ル酸塩の沈殿を促進するために，０〜８℃でインキュベ
ートされる。次に、濾過が行われて、ＩｇＧ溶液から沈
殿したコール酸塩が除去される。
ンの終了後、静脈内投与に適切な低レベルの残留ＴＮＢ
Ｐとコール酸塩を含む最終産物を得るために、溶剤と界
面活性剤分子が除去されねばならない。一般に、界面活
性剤を除去する操作は、ＴＮＢＰを除去するのにも有効
であり、そしてその逆も言える。最終容器中の非常に低
レベルのＴＮＢＰおよびコール酸塩は、濾過、透析濾過
および疎水的クロマトグラフィーの組み合わせによって
達成できる。インキュベーション終了後、溶液が、予め
４．０のような低ｐＨ値に調整されれば、コール酸ナト
リウムは、そのようなｐＨで水溶液に容易に溶解するの
で、コール酸塩（およびＴＮＢＰ）の大部分が、濾過に
よってタンパク質溶液から除去できる。さらに、ＩｇＧ
分子は、低イオン強度の溶液においてはｐＨ値３．５〜
５．０で、より安定である（２）ので、溶剤／界面活性
剤インキュベーションに続くすべての処理は、低ｐＨ値
（すなわち４．０）において実施される。かくして、Ｔ
ＮＢＰ／コール酸塩によるインキュベーション後、タン
パク質溶液は、ほぼｐＨ４．０に調整され、そしてコー
ル酸塩の沈殿を促進するために，０〜８℃でインキュベ
ートされる。次に、濾過が行われて、ＩｇＧ溶液から沈
殿したコール酸塩が除去される。
【００１８】そのように処理された溶液は、少なくとも
４倍交換量の水で透析濾過されて、イオン強度を低下
し、そしてさらなるＴＮＢＰおよびコール酸塩を除去さ
れる。上記処理の後、または処理中、ｐＨが測定され、
範囲約３．５〜５．０に維持される。そのように処理さ
れた材料のタンパク質濃度は、ＩＳＧに無害な慣用技
術、例えば限外濾過、逆浸透、昇華、蒸発などによっ
て、１０〜３０％、通常は１３％（ｗ／ｖ）に調整され
る。再び、調製物のｐＨは、範囲約３．５〜５．０、好
ましくは、約３．８〜４．２に維持される。
４倍交換量の水で透析濾過されて、イオン強度を低下
し、そしてさらなるＴＮＢＰおよびコール酸塩を除去さ
れる。上記処理の後、または処理中、ｐＨが測定され、
範囲約３．５〜５．０に維持される。そのように処理さ
れた材料のタンパク質濃度は、ＩＳＧに無害な慣用技
術、例えば限外濾過、逆浸透、昇華、蒸発などによっ
て、１０〜３０％、通常は１３％（ｗ／ｖ）に調整され
る。再び、調製物のｐＨは、範囲約３．５〜５．０、好
ましくは、約３．８〜４．２に維持される。
【００１９】本発明では、疎水的クロマトグラフィー
が、濾過や透析濾過段階によって除かれないＴＮＢＰと
コール酸塩を除去するために実施され、その結果、静脈
内投与に適切な低レベルの残留ＴＮＢＰおよびコール酸
塩を含む最終産物を提供する。疎水的クロマトグラフィ
ーは、オイル抽出、イオン交換またはアフィニティーク
ロマトグラフィーのような他に利用できる方法よりも、
より欠点と制約の少ない、タンパク質溶液からのＴＮＢ
Ｐ除去の方法である。これは、いくぶんか、目的のタン
パク質（ＩｇＧ）が、ＴＮＢＰ除去工程を通して溶液中
に残留するからである。本発明者らは、シリカに基づく
Ｃ−１８樹脂のような他の樹脂より優れているポリスチ
レンに基づく樹脂（典型的には、ＰＬＲＰ−Ｓ、Polyme
r Laboratory, Amherst, MA）を見いだしたので、ポリ
スチレンに基づく樹脂が、溶液から溶剤／界面活性剤を
除去するのに使用された。
が、濾過や透析濾過段階によって除かれないＴＮＢＰと
コール酸塩を除去するために実施され、その結果、静脈
内投与に適切な低レベルの残留ＴＮＢＰおよびコール酸
塩を含む最終産物を提供する。疎水的クロマトグラフィ
ーは、オイル抽出、イオン交換またはアフィニティーク
ロマトグラフィーのような他に利用できる方法よりも、
より欠点と制約の少ない、タンパク質溶液からのＴＮＢ
Ｐ除去の方法である。これは、いくぶんか、目的のタン
パク質（ＩｇＧ）が、ＴＮＢＰ除去工程を通して溶液中
に残留するからである。本発明者らは、シリカに基づく
Ｃ−１８樹脂のような他の樹脂より優れているポリスチ
レンに基づく樹脂（典型的には、ＰＬＲＰ−Ｓ、Polyme
r Laboratory, Amherst, MA）を見いだしたので、ポリ
スチレンに基づく樹脂が、溶液から溶剤／界面活性剤を
除去するのに使用された。
【００２０】次に、ＩＳＧ調製物は、５％または１０％
タンパク質に調整され、そしてそれを等張（ｔｏｎｉ
ｃ）にするため、すなわちそれを生理学的条件に適合さ
せるか、または注射において生理学的に許容できるよう
にするために処理される。好適な実施態様では、張性
は、約２３０〜約４９０ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ溶媒に調整
される。より好ましくは、張性範囲は、約２５０〜約３
５０ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ溶媒であり、そしてもっとも好
ましくは、張性範囲は、約２６０〜約３２５ｍｏｓｍｏ
ｌ／ｋｇ溶媒である。５％製剤（５％ＩＧＩＶ）は、１
０％マルトースの添加によって等張にされる。１０％製
剤は、大量の糖を含まない等張な調製物を得るために
０．２Ｍグリシンを含む。いずれの製剤化（Ｇａｍｉｍ
ｕｎｅ（商標）Ｎ５％またはＧａｍｉｍｕｎｅ（商標）
Ｎ１０％）経過をもつ生産物も、低ｐＨ溶液のイオン強
度が高められる場合には、分子分布（抗体凝集）を起こ
す。それ故、しばしば等張化に使用される塩化ナトリウ
ムは、使用されるべきでない。
タンパク質に調整され、そしてそれを等張（ｔｏｎｉ
ｃ）にするため、すなわちそれを生理学的条件に適合さ
せるか、または注射において生理学的に許容できるよう
にするために処理される。好適な実施態様では、張性
は、約２３０〜約４９０ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ溶媒に調整
される。より好ましくは、張性範囲は、約２５０〜約３
５０ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ溶媒であり、そしてもっとも好
ましくは、張性範囲は、約２６０〜約３２５ｍｏｓｍｏ
ｌ／ｋｇ溶媒である。５％製剤（５％ＩＧＩＶ）は、１
０％マルトースの添加によって等張にされる。１０％製
剤は、大量の糖を含まない等張な調製物を得るために
０．２Ｍグリシンを含む。いずれの製剤化（Ｇａｍｉｍ
ｕｎｅ（商標）Ｎ５％またはＧａｍｉｍｕｎｅ（商標）
Ｎ１０％）経過をもつ生産物も、低ｐＨ溶液のイオン強
度が高められる場合には、分子分布（抗体凝集）を起こ
す。それ故、しばしば等張化に使用される塩化ナトリウ
ムは、使用されるべきでない。
【００２１】そのように処理された溶液は、ＡＣＡレベ
ルを低下するために、低イオン強度条件下、ｐＨ４．２
５でインキュベート（好適には、２０〜２７℃でＮＬＴ
２１日）される。イオン強度は、Perrinの方法（１８）
により測定され、そして好適な実施態様では、イオン強
度は、約０．００１未満であるべきである。上昇したＡ
ＣＡレベルは、常に、すべてのＴＮＢＰ／コール酸塩処
理されたＩＧＩＶ調製物（工程規模に拘わらず）のこの
段階で検出された；しかしながら、ＡＣＡレベルは、低
イオン強度条件下、ｐＨ４．２５でのインキュベーショ
ンによって徐々に低下される（表３，５〜７）。ＡＣＡ
レベルが、静脈内投与に適切な許容レベルであるよう十
分低い場合には、検出についての厳格な法則は存在しな
いが、ＩＧＩＶ調製物は、出来るだけ低いＡＣＡレベル
をもつべきである。
ルを低下するために、低イオン強度条件下、ｐＨ４．２
５でインキュベート（好適には、２０〜２７℃でＮＬＴ
２１日）される。イオン強度は、Perrinの方法（１８）
により測定され、そして好適な実施態様では、イオン強
度は、約０．００１未満であるべきである。上昇したＡ
ＣＡレベルは、常に、すべてのＴＮＢＰ／コール酸塩処
理されたＩＧＩＶ調製物（工程規模に拘わらず）のこの
段階で検出された；しかしながら、ＡＣＡレベルは、低
イオン強度条件下、ｐＨ４．２５でのインキュベーショ
ンによって徐々に低下される（表３，５〜７）。ＡＣＡ
レベルが、静脈内投与に適切な許容レベルであるよう十
分低い場合には、検出についての厳格な法則は存在しな
いが、ＩＧＩＶ調製物は、出来るだけ低いＡＣＡレベル
をもつべきである。
【００２２】図は、ＳＤ処理に続く５％ＩＧＩＶ溶液で
観察されるＡＣＡの典型的な平均的減少を図示する。５
％ＩＳＧ製剤では、静脈内投与に適切な許容レベルは、
好ましくは、約４５ＣＨ50単位／ｍｌ未満であり、より
好ましくは、約３０ＣＨ50単位／ｍｌ未満であろう。１
０％ＩＳＧ製剤では、静脈内投与に適切な許容レベル
は、好ましくは、約６０ＣＨ50単位／ｍｌ未満であり、
より好ましくは、約４５ＣＨ50単位／ｍｌ未満であろ
う。本明細書に使用されるように、ＡＣＡ活性の１単位
（１ＣＨ50単位）は、最適力価の補体および赤血球細胞
／溶血系において、補体の５０％を活性化できるタンパ
ク質量として定義される。アッセイは、標準量の補体と
タンパク質の混合物によって結合される補体量を測定す
る。そのアッセイの検討については、引用文献１９〜２
０参照。簡単には、赤血球細胞抗体とのプレインキュベ
ーションによって感作された赤血球細胞が、補体／タン
パク質混合液に添加される。遊離の補体（タンパク質と
まだ未結合の）の存在下で、これらの感作細胞は溶解さ
れ、溶解の程度の測定値として定量化できるヘモグロビ
ンを放出する。平行して、感作された赤血球細胞は、溶
解の程度が１００％と定められるバッファー対照−補体
混合液にも添加される。１００％溶解を与えるのに必要
な補体の実量とタンパク質の存在下で未結合のまま残っ
ている補体量の差は、タンパク質によって実際に結合さ
れた補体量、または抗補体活性に等しい。
観察されるＡＣＡの典型的な平均的減少を図示する。５
％ＩＳＧ製剤では、静脈内投与に適切な許容レベルは、
好ましくは、約４５ＣＨ50単位／ｍｌ未満であり、より
好ましくは、約３０ＣＨ50単位／ｍｌ未満であろう。１
０％ＩＳＧ製剤では、静脈内投与に適切な許容レベル
は、好ましくは、約６０ＣＨ50単位／ｍｌ未満であり、
より好ましくは、約４５ＣＨ50単位／ｍｌ未満であろ
う。本明細書に使用されるように、ＡＣＡ活性の１単位
（１ＣＨ50単位）は、最適力価の補体および赤血球細胞
／溶血系において、補体の５０％を活性化できるタンパ
ク質量として定義される。アッセイは、標準量の補体と
タンパク質の混合物によって結合される補体量を測定す
る。そのアッセイの検討については、引用文献１９〜２
０参照。簡単には、赤血球細胞抗体とのプレインキュベ
ーションによって感作された赤血球細胞が、補体／タン
パク質混合液に添加される。遊離の補体（タンパク質と
まだ未結合の）の存在下で、これらの感作細胞は溶解さ
れ、溶解の程度の測定値として定量化できるヘモグロビ
ンを放出する。平行して、感作された赤血球細胞は、溶
解の程度が１００％と定められるバッファー対照−補体
混合液にも添加される。１００％溶解を与えるのに必要
な補体の実量とタンパク質の存在下で未結合のまま残っ
ている補体量の差は、タンパク質によって実際に結合さ
れた補体量、または抗補体活性に等しい。
【００２３】
【実施例】ウイルス不活化工程から得られるＩＳＧの抗補体活性 Ｔｅｎｏｌｄ’６０８特許にしたがって製剤化されるＩ
ＳＧを含む溶液に及ぼす、ＳＤウイルス不活化工程の効
果を確立するために、表１に示す実験を実施した。出発
材料（ＳＭ）は、約５％タンパク質まで限外濾過され、
次いで、４倍量の水で透析濾過されたＣｏｈｎ法濾液Ｉ
ＩＩであった。
ＳＧを含む溶液に及ぼす、ＳＤウイルス不活化工程の効
果を確立するために、表１に示す実験を実施した。出発
材料（ＳＭ）は、約５％タンパク質まで限外濾過され、
次いで、４倍量の水で透析濾過されたＣｏｈｎ法濾液Ｉ
ＩＩであった。
【００２４】対照実験、インキュベーション（−）／Ｓ
Ｄ（−）では、ＳＭを、いかなるインキュベーションま
たは溶剤／界面活性剤処理にもかけなかった。インキュ
ベーション（＋）／ＳＤ（−）実験では、ＳＭのｐＨを
７．０に調整し、溶液を３０℃で１０時間インキュベー
トし、次いで、ｐＨを４．０まで下げた。インキュベー
ション（＋）／ＳＤ、ＴＮＢＰ＆Ｔｗｅｅｎ８０（＋）
実験では、ＳＭのｐＨを７．０に調整し、ＴＮＢＰ３ｍ
ｇ／ｍｌおよびＴｗｅｅｎ８０ ２ｍｇ／ｍｌを溶液に
添加し、溶液を３０℃で１０時間インキュベートし、次
いで、ｐＨを４．０まで下げた。インキュベーション
（＋）／ＳＤ、ＴＮＢＰ＆コール酸塩（＋）実験では、
ＳＭのｐＨを７．０に調整し、ＴＮＢＰ３ｍｇ／ｍｌお
よびコール酸塩２ｍｇ／ｍｌを溶液に添加し、溶液を３
０℃で１０時間インキュベートし、次いで、ｐＨを４．
０まで下げた。各実験における溶液を、次に、４倍量の
ＣＷＦＩ（注射用冷水、ｃｏｌｄ ｗａｔｅｒ ｆｏｒ
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）を用いて透析濾過し、限外濾過
で濃縮した。１０％ｗ／ｖまで乾燥マルトースを添加し
た後、５％ＩＧＩＶ溶液（ｐＨ４．２５）を、０．２μ
ｍフィルターを通して濾過した。
Ｄ（−）では、ＳＭを、いかなるインキュベーションま
たは溶剤／界面活性剤処理にもかけなかった。インキュ
ベーション（＋）／ＳＤ（−）実験では、ＳＭのｐＨを
７．０に調整し、溶液を３０℃で１０時間インキュベー
トし、次いで、ｐＨを４．０まで下げた。インキュベー
ション（＋）／ＳＤ、ＴＮＢＰ＆Ｔｗｅｅｎ８０（＋）
実験では、ＳＭのｐＨを７．０に調整し、ＴＮＢＰ３ｍ
ｇ／ｍｌおよびＴｗｅｅｎ８０ ２ｍｇ／ｍｌを溶液に
添加し、溶液を３０℃で１０時間インキュベートし、次
いで、ｐＨを４．０まで下げた。インキュベーション
（＋）／ＳＤ、ＴＮＢＰ＆コール酸塩（＋）実験では、
ＳＭのｐＨを７．０に調整し、ＴＮＢＰ３ｍｇ／ｍｌお
よびコール酸塩２ｍｇ／ｍｌを溶液に添加し、溶液を３
０℃で１０時間インキュベートし、次いで、ｐＨを４．
０まで下げた。各実験における溶液を、次に、４倍量の
ＣＷＦＩ（注射用冷水、ｃｏｌｄ ｗａｔｅｒ ｆｏｒ
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）を用いて透析濾過し、限外濾過
で濃縮した。１０％ｗ／ｖまで乾燥マルトースを添加し
た後、５％ＩＧＩＶ溶液（ｐＨ４．２５）を、０．２μ
ｍフィルターを通して濾過した。
【００２５】
【表１】
【００２６】表１に挙げた結果は、ＡＣＡのレベルが、
ＴＮＢＰ／コール酸塩またはＴＮＢＰ／Ｔｗｅｅｎ８０
を用いるインキュベーション後、ＩｇＧサンプルにおい
て増大することを示している。ＡＣＡレベルは、溶剤／
界面活性剤不在下で３０℃、１０時間インキュベートし
たＩｇＧサンプルでは増大しなかった。これらの結果
は、ＩＧＩＶサンプルのＡＣＡレベルは、溶剤／界面活
性剤不在下では、処理操作や、３０℃１０時間のインキ
ュベーションのいずれによっても上昇しなかったことを
示唆する。
ＴＮＢＰ／コール酸塩またはＴＮＢＰ／Ｔｗｅｅｎ８０
を用いるインキュベーション後、ＩｇＧサンプルにおい
て増大することを示している。ＡＣＡレベルは、溶剤／
界面活性剤不在下で３０℃、１０時間インキュベートし
たＩｇＧサンプルでは増大しなかった。これらの結果
は、ＩＧＩＶサンプルのＡＣＡレベルは、溶剤／界面活
性剤不在下では、処理操作や、３０℃１０時間のインキ
ュベーションのいずれによっても上昇しなかったことを
示唆する。
【００２７】
【表２】
【００２８】さらにまた、阻止実験（ＴＮＢＰおよびコ
ール酸Ｎａによる）は、上昇した抗補体活性レベルが、
痕跡レベルのＴＮＢＰ／コール酸Ｎａの存在下で抗補体
アッセイを実施することによって、引き起こされた人為
産物でないことを例証した。かくして、ＩＳＧを含む溶
液のウイルス不活化に対して先行技術のＳＤ工程を用
い、続いてＴｅｎｏｌｄ’６０８特許にしたがって製剤
化することが、高いＡＣＡをもち、そして静脈内投与に
不適切である生産物を生じる。同様な実験で、インキュ
ベートされなかったＳＤ処理サンプル（表３、始発試
験）は、１００単位を超えるＡＣＡレベルを有した。
ール酸Ｎａによる）は、上昇した抗補体活性レベルが、
痕跡レベルのＴＮＢＰ／コール酸Ｎａの存在下で抗補体
アッセイを実施することによって、引き起こされた人為
産物でないことを例証した。かくして、ＩＳＧを含む溶
液のウイルス不活化に対して先行技術のＳＤ工程を用
い、続いてＴｅｎｏｌｄ’６０８特許にしたがって製剤
化することが、高いＡＣＡをもち、そして静脈内投与に
不適切である生産物を生じる。同様な実験で、インキュ
ベートされなかったＳＤ処理サンプル（表３、始発試
験）は、１００単位を超えるＡＣＡレベルを有した。
【００２９】
【表３】
【００３０】しかしながら、並列のＳＤ処理サンプル
を、長時間（５℃で６週間および２２℃で３週間）イン
キュベートした場合、ＡＣＡレベルは、顕著に減少した
（表３、インキュベーション後）。このことは、この驚
くべき観察のさらなる検討へと導いた。
を、長時間（５℃で６週間および２２℃で３週間）イン
キュベートした場合、ＡＣＡレベルは、顕著に減少した
（表３、インキュベーション後）。このことは、この驚
くべき観察のさらなる検討へと導いた。
【００３１】ＴＮＢＰ／コール酸塩に曝されたＩＳＧの
凝集物含量 先の実験（表３、始発試験）のサンプルを、開始時点に
おけるＩＧＩＶの凝集程度を測定するために、製剤化直
後にサイズ排除（ゲル浸透）ＨＰＬＣによって分析し
た。ＨＰＬＣ分析は、サンプル中、ほとんど完全な単量
体含量を示している（表４）。
凝集物含量 先の実験（表３、始発試験）のサンプルを、開始時点に
おけるＩＧＩＶの凝集程度を測定するために、製剤化直
後にサイズ排除（ゲル浸透）ＨＰＬＣによって分析し
た。ＨＰＬＣ分析は、サンプル中、ほとんど完全な単量
体含量を示している（表４）。
【００３２】
【表４】
【００３３】先に、高いレベルのＩｇＧ凝集物は、高い
抗補体活性と相関することが示された。しかしながら、
サンプルの分析から得られた結果は、１００単位を超え
るサンプル中のＡＣＡレベルを示している（表３、始発
試験）。ＨＰＬＣ分析は、ＴＮＢＰ／コール酸塩処理に
続く高ＡＣＡが、凝集したＩｇＧ分子の存在によるもの
ではないことを示している。
抗補体活性と相関することが示された。しかしながら、
サンプルの分析から得られた結果は、１００単位を超え
るサンプル中のＡＣＡレベルを示している（表３、始発
試験）。ＨＰＬＣ分析は、ＴＮＢＰ／コール酸塩処理に
続く高ＡＣＡが、凝集したＩｇＧ分子の存在によるもの
ではないことを示している。
【００３４】時間および温度の種々の条件 ＳＭは、前記実験と同じであり、そして実験条件は、次
の変更のとおりであった。溶液を、ＴＮＢＰ／コール酸
塩を用いてｐＨ７．０で処理し、次いで、前記のように
５％ＩＧＩＶ、１０％マルトース、ｐＨ４．２５に製剤
化した。ＡＣＡを、最終製剤化後、５℃、９日間の第１
のインキュベーション後、および２２℃か５℃のいずれ
かで、２１日間の第２のインキュベーション後、直ぐに
アッセイした。
の変更のとおりであった。溶液を、ＴＮＢＰ／コール酸
塩を用いてｐＨ７．０で処理し、次いで、前記のように
５％ＩＧＩＶ、１０％マルトース、ｐＨ４．２５に製剤
化した。ＡＣＡを、最終製剤化後、５℃、９日間の第１
のインキュベーション後、および２２℃か５℃のいずれ
かで、２１日間の第２のインキュベーション後、直ぐに
アッセイした。
【００３５】
【表５】
【００３６】ＴＮＢＰ／コール酸塩によりｐＨ７．０で
処理した始発の無菌バルクサンプルでは、ＡＣＡレベル
は、開始時点について再び１００単位を超えており、表
３に見られた観察が確認された。５℃で９日間のインキ
ュベーションでは、ＡＣＡは、１００単位を超えたまま
であった。５℃か２２℃のいずれかにおける最終インキ
ュベーション段階は、ＡＣＡの減少が、より高温で観察
されるＡＣＡのより速い減少のように温度に依存するこ
とを示す。
処理した始発の無菌バルクサンプルでは、ＡＣＡレベル
は、開始時点について再び１００単位を超えており、表
３に見られた観察が確認された。５℃で９日間のインキ
ュベーションでは、ＡＣＡは、１００単位を超えたまま
であった。５℃か２２℃のいずれかにおける最終インキ
ュベーション段階は、ＡＣＡの減少が、より高温で観察
されるＡＣＡのより速い減少のように温度に依存するこ
とを示す。
【００３７】ＡＣＡに及ぼす溶剤／界面活性剤処理中の
ｐＨの影響 比較的良好な殺ウイルス力は、６．０未満のｐＨ値で観
察されたので、ＡＣＡレベルを、ＴＮＢＰ／コール酸塩
によるｐＨ５．８のインキュベーション後に評価した。
一般に、ｐＨ５．８でインキュベートされた材料のイン
キュベートされない無菌バルクサンプルは、ｐＨ７．０
サンプルよりも低いＡＣＡレベルをもつが、インキュベ
ーションにおけるＡＣＡ減少の傾向は、ｐＨ５．８サン
プルにおいても繰り返された。事実、ＴＮＢＰ／コール
酸塩によるｐＨ５．８のインキュベーション後、始発時
にＡＣＡレベルを上昇したサンプルにおいては、ＡＣＡ
レベルは、２１日間インキュベーションを超えて低下し
続ける（表６）。ｐＨ７．０でインキュベートされたサ
ンプルで既に見られたように、ＡＣＡの減少は、凝集し
たＩｇＧ分子レベルの低下によるものではない。何故な
らば、ｐＨ５．８で処理した材料は、２２℃のインキュ
ベーション前に、実質的に単量体ＩｇＧであったからで
ある（ＨＰＬＣ分析、サンプルＡ４、表８）。
ｐＨの影響 比較的良好な殺ウイルス力は、６．０未満のｐＨ値で観
察されたので、ＡＣＡレベルを、ＴＮＢＰ／コール酸塩
によるｐＨ５．８のインキュベーション後に評価した。
一般に、ｐＨ５．８でインキュベートされた材料のイン
キュベートされない無菌バルクサンプルは、ｐＨ７．０
サンプルよりも低いＡＣＡレベルをもつが、インキュベ
ーションにおけるＡＣＡ減少の傾向は、ｐＨ５．８サン
プルにおいても繰り返された。事実、ＴＮＢＰ／コール
酸塩によるｐＨ５．８のインキュベーション後、始発時
にＡＣＡレベルを上昇したサンプルにおいては、ＡＣＡ
レベルは、２１日間インキュベーションを超えて低下し
続ける（表６）。ｐＨ７．０でインキュベートされたサ
ンプルで既に見られたように、ＡＣＡの減少は、凝集し
たＩｇＧ分子レベルの低下によるものではない。何故な
らば、ｐＨ５．８で処理した材料は、２２℃のインキュ
ベーション前に、実質的に単量体ＩｇＧであったからで
ある（ＨＰＬＣ分析、サンプルＡ４、表８）。
【００３８】
【表６】
【００３９】同様の結果は、無菌バルク段階において１
０％ＩＧＩＶ、０．２Ｍグリシンに製剤化したサンプル
によって得られた。低イオン強度でｐＨ４．２５、１０
および２１日間のインキュベーションにおいて、ＡＣＡ
レベルは、５％ＩＧＩＶサンプルおよび１０％ＩＧＩＶ
サンプルの両方で下降することが分かった（表７）。か
くして、ＡＣＡの減少は、溶剤／界面活性剤処理の際の
ＩＳＧ濃度およびｐＨ値の広い範囲にわたって観察でき
る（表３，５，７）。表７に示される無菌バルクサンプ
ルのＨＰＬＣ分析（表８）は、上昇したＡＣＡレベル
が、ＩＳＧ分子の凝集によるものではないことを確認し
た。
０％ＩＧＩＶ、０．２Ｍグリシンに製剤化したサンプル
によって得られた。低イオン強度でｐＨ４．２５、１０
および２１日間のインキュベーションにおいて、ＡＣＡ
レベルは、５％ＩＧＩＶサンプルおよび１０％ＩＧＩＶ
サンプルの両方で下降することが分かった（表７）。か
くして、ＡＣＡの減少は、溶剤／界面活性剤処理の際の
ＩＳＧ濃度およびｐＨ値の広い範囲にわたって観察でき
る（表３，５，７）。表７に示される無菌バルクサンプ
ルのＨＰＬＣ分析（表８）は、上昇したＡＣＡレベル
が、ＩＳＧ分子の凝集によるものではないことを確認し
た。
【００４０】
【表７】
【００４１】総括すると、上記結果は、望ましくないＡ
ＣＡの増加を生じる溶剤／界面活性剤ウイルス不活化工
程にかけられたＩＳＧ産物が、許容できるレベルまでＡ
ＣＡを減少させるべき本明細書記載の条件下の付加的な
インキュベーション段階を組み入れることによって、Ｉ
Ｖ投与に適切なものに作成できることを示唆する。
ＣＡの増加を生じる溶剤／界面活性剤ウイルス不活化工
程にかけられたＩＳＧ産物が、許容できるレベルまでＡ
ＣＡを減少させるべき本明細書記載の条件下の付加的な
インキュベーション段階を組み入れることによって、Ｉ
Ｖ投与に適切なものに作成できることを示唆する。
【００４２】
【表８】
【００４３】ＩＧＩＶ（抗体）溶液の溶剤／界面活性剤
処理から生じるＡＣＡの増加は、その溶液のウイルスを
不活化すべきＴＮＢＰ／界面活性剤処理の避けられない
２次的影響であると考えられる。本発明者は、低ｐＨ
（４．２５）と低イオン強度（０．００１）において比
較的長期間（少なくとも約１０日間）、ＩＧＩＶ溶液を
インキュベートすることによって、ＡＣＡが、インキュ
ベーションの間にわたって徐々に減少することを発見し
た。
処理から生じるＡＣＡの増加は、その溶液のウイルスを
不活化すべきＴＮＢＰ／界面活性剤処理の避けられない
２次的影響であると考えられる。本発明者は、低ｐＨ
（４．２５）と低イオン強度（０．００１）において比
較的長期間（少なくとも約１０日間）、ＩＧＩＶ溶液を
インキュベートすることによって、ＡＣＡが、インキュ
ベーションの間にわたって徐々に減少することを発見し
た。
【００４４】先行技術は、低ｐＨと低イオン強度を用い
るＩＧＩＶの生産方法（Ｔｅｎｏｌｄ’６０８特許）を
開示している。Ｔｅｎｏｌｄ’６０８法は、ウイルス不
活化段階を略し、それによりＡＣＡ増加の問題を回避す
るが、ウイルス活性の可能性は残っている。Ｔｅｎｏｌ
ｄとは異なり、インキュベーションは、ＡＣＡを減少さ
せるための本発明の本質的態様である。
るＩＧＩＶの生産方法（Ｔｅｎｏｌｄ’６０８特許）を
開示している。Ｔｅｎｏｌｄ’６０８法は、ウイルス不
活化段階を略し、それによりＡＣＡ増加の問題を回避す
るが、ウイルス活性の可能性は残っている。Ｔｅｎｏｌ
ｄとは異なり、インキュベーションは、ＡＣＡを減少さ
せるための本発明の本質的態様である。
【００４５】Ｎｅｕｒａｔｈら’５７３特許は、溶剤／
界面活性剤ウイルス不活化段階を教示する。しかしなが
ら、Ｎｅｕｒａｔｈ’５７３は、ｐＨを調整することを
述べてないし、またＡＣＡに関する工程の影響も何ら述
べていない。上昇したＡＣＡレベルは、ＴＮＢＰ／コー
ル酸塩処理したＩＧＩＶ調製物の無菌バルク段階におい
て検出された。しかしながら、ＡＣＡレベルは、ｐＨ
４．２５、低イオン強度、そして約２０℃以上で、少な
くとも約１０日間のインキュベーションにおいて低下し
た（表５〜７参照）。先行技術は、ＩｇＧ凝集物の除去
を含む、精製ＩｇＧ調製物のＡＣＡレベルを低下させる
ためのいくつかのアプローチを述べている（１１）。Ｉ
ｇＧ凝集物は、イン・ビボで補体系を活性化すると考え
られてきた（１）。しかしながら、本発明においては、
これらのＴＮＢＰ／コール酸塩処理されたＩＧＩＶ調製
物は、先の条件下でのインキュベーション前に低レベル
の凝集ＩｇＧ（ＨＰＬＣによって測定されたように、表
４，８）を含んでいたので、ＩｇＧＡＣＡの減少は、Ｉ
ｇＧ凝集物レベルの低下に因るものではなかった。
界面活性剤ウイルス不活化段階を教示する。しかしなが
ら、Ｎｅｕｒａｔｈ’５７３は、ｐＨを調整することを
述べてないし、またＡＣＡに関する工程の影響も何ら述
べていない。上昇したＡＣＡレベルは、ＴＮＢＰ／コー
ル酸塩処理したＩＧＩＶ調製物の無菌バルク段階におい
て検出された。しかしながら、ＡＣＡレベルは、ｐＨ
４．２５、低イオン強度、そして約２０℃以上で、少な
くとも約１０日間のインキュベーションにおいて低下し
た（表５〜７参照）。先行技術は、ＩｇＧ凝集物の除去
を含む、精製ＩｇＧ調製物のＡＣＡレベルを低下させる
ためのいくつかのアプローチを述べている（１１）。Ｉ
ｇＧ凝集物は、イン・ビボで補体系を活性化すると考え
られてきた（１）。しかしながら、本発明においては、
これらのＴＮＢＰ／コール酸塩処理されたＩＧＩＶ調製
物は、先の条件下でのインキュベーション前に低レベル
の凝集ＩｇＧ（ＨＰＬＣによって測定されたように、表
４，８）を含んでいたので、ＩｇＧＡＣＡの減少は、Ｉ
ｇＧ凝集物レベルの低下に因るものではなかった。
【００４６】実質的にウイルス不含ＩＧＩＶを生産する
ことが期待されるけれども、先行技術にしたがうこと
は、許容できないＡＣＡレベルをもつ生産物をもたら
す。Ｔｅｎｏｌｄ’６０８では、生産物は、実質的にＡ
ＣＡ不含であるが、Ｔｅｎｏｌｄ’６０８と組み合わせ
たＳＤ工程の使用が、高レベルのＡＣＡをもたらすと述
べていることは注目すべきである：本明細書に報告され
た実験結果は、ＳＤ工程によりＩＳＧ溶液を処理し、次
いで、Ｔｅｎｏｌｄ’６０８特許にしたがって製剤化す
ることが、高いＡＣＡをもつ生産物を生むことを示して
いる（表１，３，５〜７）。ここで報告された驚くべき
発見は、後続の（最終の）インキュベーション段階が、
溶剤／界面活性剤処理された溶液のＡＣＡを低下させる
ことである。ＳＤ工程により処理され、そして後続のイ
ンキュベーションをした場合としない場合の、５％ＩＧ
ＩＶ溶液について観察された典型的な平均ＡＣＡレベル
は、図において比較される。かくして、本発明は、ｐ
Ｈ、温度およびイオン強度の制御条件下で一定期間、イ
ンキュベートすることによって、ＡＣＡを低下させ、そ
れによって生産物を静脈内注射により投与可能にする、
以前には見られなかった方法を含む。
ことが期待されるけれども、先行技術にしたがうこと
は、許容できないＡＣＡレベルをもつ生産物をもたら
す。Ｔｅｎｏｌｄ’６０８では、生産物は、実質的にＡ
ＣＡ不含であるが、Ｔｅｎｏｌｄ’６０８と組み合わせ
たＳＤ工程の使用が、高レベルのＡＣＡをもたらすと述
べていることは注目すべきである：本明細書に報告され
た実験結果は、ＳＤ工程によりＩＳＧ溶液を処理し、次
いで、Ｔｅｎｏｌｄ’６０８特許にしたがって製剤化す
ることが、高いＡＣＡをもつ生産物を生むことを示して
いる（表１，３，５〜７）。ここで報告された驚くべき
発見は、後続の（最終の）インキュベーション段階が、
溶剤／界面活性剤処理された溶液のＡＣＡを低下させる
ことである。ＳＤ工程により処理され、そして後続のイ
ンキュベーションをした場合としない場合の、５％ＩＧ
ＩＶ溶液について観察された典型的な平均ＡＣＡレベル
は、図において比較される。かくして、本発明は、ｐ
Ｈ、温度およびイオン強度の制御条件下で一定期間、イ
ンキュベートすることによって、ＡＣＡを低下させ、そ
れによって生産物を静脈内注射により投与可能にする、
以前には見られなかった方法を含む。
【００４７】Ｍｉｔｒａ’７１４は、Ｓ／Ｄ工程の使用
を示唆していないが、その代わり、同様な条件下でＩＳ
Ｇ産物の比較的短時間のインキュベーションが、実質的
にウイルス不含の調製物をもたらすことを報告している
（１０）。しかしながら、そのような条件下でインキュ
ベーションを行って抗補体活性を低下させることは、外
皮ウイルスの不活化のために、ＩＧＩＶ法において以前
に使用されたこれらのインキュベーション条件の新規な
応用である。
を示唆していないが、その代わり、同様な条件下でＩＳ
Ｇ産物の比較的短時間のインキュベーションが、実質的
にウイルス不含の調製物をもたらすことを報告している
（１０）。しかしながら、そのような条件下でインキュ
ベーションを行って抗補体活性を低下させることは、外
皮ウイルスの不活化のために、ＩＧＩＶ法において以前
に使用されたこれらのインキュベーション条件の新規な
応用である。
【００４８】国際的に受け入れられた付加的なウイルス
不活化操作（ＴＮＢＰ／コール酸塩による処理）を含
む、本明細書に報告の新しく開発されたＩＧＩＶ法は、
低いＡＣＡレベルをもち、ＩＶ投与に適切であるＩｇＧ
調製物を生み出す。主要な利点は、改善された安全性を
もつＩＧＩＶ産物が、ウイルス不活化のＴＮＢＰ／コー
ル酸塩処理と、そしてＩＶ投与に適切な低いＡＣＡレベ
ルを与える条件下でのインキュベーションを含む２段階
工程によって得ることができることである。 前記開示
は、本発明を具体的に説明することを意図し、そして種
々の変法が、当業者に起こるであろうと考えられる。し
たがって、本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲によ
ってのみ限定されるべきであることを意図する。
不活化操作（ＴＮＢＰ／コール酸塩による処理）を含
む、本明細書に報告の新しく開発されたＩＧＩＶ法は、
低いＡＣＡレベルをもち、ＩＶ投与に適切であるＩｇＧ
調製物を生み出す。主要な利点は、改善された安全性を
もつＩＧＩＶ産物が、ウイルス不活化のＴＮＢＰ／コー
ル酸塩処理と、そしてＩＶ投与に適切な低いＡＣＡレベ
ルを与える条件下でのインキュベーションを含む２段階
工程によって得ることができることである。 前記開示
は、本発明を具体的に説明することを意図し、そして種
々の変法が、当業者に起こるであろうと考えられる。し
たがって、本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲によ
ってのみ限定されるべきであることを意図する。
【００４９】本発明の特徴および態様は以下のとおりで
ある。
ある。
【００５０】１． ウイルス活性をもつかもしれない抗
体溶液を処理する方法であって、 ａ）いかなるウイルス活性をも実質的に低下させるのに
十分な条件下で、溶液を、リン酸トリアルキルおよび界
面活性剤と接触させ、そして一定レベルの抗補体活性を
もたらすこと；そして ｂ）次に、溶液の抗補体活性が、静脈内投与に適切な許
容レベルまで低下されるように、制御された時間、ｐ
Ｈ、温度およびイオン強度の条件下で、段階ａ）の溶液
をインキュベートすることを含む方法。
体溶液を処理する方法であって、 ａ）いかなるウイルス活性をも実質的に低下させるのに
十分な条件下で、溶液を、リン酸トリアルキルおよび界
面活性剤と接触させ、そして一定レベルの抗補体活性を
もたらすこと；そして ｂ）次に、溶液の抗補体活性が、静脈内投与に適切な許
容レベルまで低下されるように、制御された時間、ｐ
Ｈ、温度およびイオン強度の条件下で、段階ａ）の溶液
をインキュベートすることを含む方法。
【００５１】２． 抗補体活性が、約６０ＣＨ50単位／
ｍｌ未満まで低下される、第１項の方法。
ｍｌ未満まで低下される、第１項の方法。
【００５２】３． 溶液が、約５％ｗｔ．／ｗｔ．抗体
を含み、そして抗補体活性が、約４５ＣＨ50単位／ｍｌ
未満である、第１項の方法。
を含み、そして抗補体活性が、約４５ＣＨ50単位／ｍｌ
未満である、第１項の方法。
【００５３】４． 溶液が、約５％ｗｔ．／ｗｔ．抗体
を含み、そして抗補体活性が、約３０ＣＨ50単位／ｍｌ
未満である、第３項の方法。
を含み、そして抗補体活性が、約３０ＣＨ50単位／ｍｌ
未満である、第３項の方法。
【００５４】５． 溶液が、約１０％ｗｔ．／ｗｔ．抗
体を含み、そして抗補体活性が、約６０ＣＨ50単位／ｍ
ｌ未満である、第１項の方法。
体を含み、そして抗補体活性が、約６０ＣＨ50単位／ｍ
ｌ未満である、第１項の方法。
【００５５】６． 溶液が、約１０％ｗｔ．／ｗｔ．抗
体を含み、そして抗補体活性が、約４５ＣＨ50単位／ｍ
ｌ未満である、第５項の方法。
体を含み、そして抗補体活性が、約４５ＣＨ50単位／ｍ
ｌ未満である、第５項の方法。
【００５６】７． インキュベーションが、少なくとも
約１０日間である、第１項の方法。 ８． ｐＨが、約３．５〜約５．０の範囲内に維持され
る、第１項の方法。
約１０日間である、第１項の方法。 ８． ｐＨが、約３．５〜約５．０の範囲内に維持され
る、第１項の方法。
【００５７】９． 温度が、約２℃〜約５０℃の範囲内
に維持される、第１項の方法。
に維持される、第１項の方法。
【００５８】１０．イオン強度が、約０．００１未満で
ある、第１項の方法。
ある、第１項の方法。
【００５９】１１．抗体の少なくとも約９９％が、単量
体である、第１項の方法。
体である、第１項の方法。
【００６０】１２．イオン強度が有意に変化されないよ
うな条件下で、溶液の張性を生理的な値に調整するとい
うさらなる段階を含む、第１項の方法。
うな条件下で、溶液の張性を生理的な値に調整するとい
うさらなる段階を含む、第１項の方法。
【００６１】１３．溶液の張性が、溶液に炭水化物を添
加することによって調整される、第１２項の方法。
加することによって調整される、第１２項の方法。
【００６２】１４．使用される炭水化物がマルトースで
ある、第１３項の方法。
ある、第１３項の方法。
【００６３】１５．溶液の張性が、約２３０〜約４９０
ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ溶媒の範囲に調整される、第１２項
の方法。
ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ溶媒の範囲に調整される、第１２項
の方法。
【００６４】１６．溶液の張性が、約２７４〜約３０９
ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ溶媒の範囲に調整される、第１５項
の方法。
ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ溶媒の範囲に調整される、第１５項
の方法。
【００６５】１７．溶液の張性が、溶液にアミノ酸を添
加することによって調整される、第１２項の方法。
加することによって調整される、第１２項の方法。
【００６６】１８．使用されるアミノ酸がグリシンであ
る、第１７項の方法。
る、第１７項の方法。
【００６７】１９．リン酸トリアルキルが、リン酸トリ
−ｎ−ブチルであり、そして界面活性剤が、ポリソルベ
ート８０およびコール酸ナトリウムから選ばれる、第１
項の方法。
−ｎ−ブチルであり、そして界面活性剤が、ポリソルベ
ート８０およびコール酸ナトリウムから選ばれる、第１
項の方法。
【００６８】２０．溶液が、段階ａ）の間ｐＨ約３．５
〜約６．０をもつ、第１項の方法。 ２１．調製物が、イオン強度約０．００１未満、ｐＨ約
３．５〜約５．０、抗体濃度約５％ｗｔ．／ｗｔ．およ
びマルトース濃度約１０％ｗｔ．／ｗｔ．をもつ、第１
項の方法によって生産され、そして実質的に脂質外皮ウ
イルスを含まない静脈内注射可能な免疫血清グロブリン
調製物。
〜約６．０をもつ、第１項の方法。 ２１．調製物が、イオン強度約０．００１未満、ｐＨ約
３．５〜約５．０、抗体濃度約５％ｗｔ．／ｗｔ．およ
びマルトース濃度約１０％ｗｔ．／ｗｔ．をもつ、第１
項の方法によって生産され、そして実質的に脂質外皮ウ
イルスを含まない静脈内注射可能な免疫血清グロブリン
調製物。
【００６９】２２．ｐＨが約４．２５である、第２１項
の調製物。
の調製物。
【００７０】２３．調製物が、イオン強度約０．００１
未満、ｐＨ約３．５〜約５．０、抗体濃度約１０％ｗ
ｔ．／ｗｔ．およびグリシン濃度約０．２Ｍをもつ、第
１項の方法によって生産され、そして実質的に脂質外皮
ウイルスを含まない静脈内注射可能な免疫血清グロブリ
ン調製物。
未満、ｐＨ約３．５〜約５．０、抗体濃度約１０％ｗ
ｔ．／ｗｔ．およびグリシン濃度約０．２Ｍをもつ、第
１項の方法によって生産され、そして実質的に脂質外皮
ウイルスを含まない静脈内注射可能な免疫血清グロブリ
ン調製物。
【００７１】２４．ｐＨが約４．２５である、第２３項
の調製物。
の調製物。
【００７２】
【表９】
【図１】ＳＤ工程にしたがって処理され、そして本発明
の後続のインキュベーションを実施するか、しない場合
の、５％ＩＧＩＶ溶液の典型的な平均ＡＣＡレベルの比
較を示す。
の後続のインキュベーションを実施するか、しない場合
の、５％ＩＧＩＶ溶液の典型的な平均ＡＣＡレベルの比
較を示す。
Claims (3)
- 【請求項１】 ウイルス活性をもつ可能性のある抗体
溶液を処理する方法であって、 ａ）いかなるウイルス活性をも実質的に低下させるのに
十分な条件下で、溶液を、リン酸トリアルキルおよび界
面活性剤と接触させ、そして一定レベルの抗補体活性を
もたらすこと；ならびに ｂ）次に、溶液の抗補体活性が、静脈内投与に適切な許
容レベルまで低下されるように、制御された時間、ｐ
Ｈ、温度およびイオン強度の条件下で、段階ａ）の溶液
をインキュベートすることを特徴とする方法。 - 【請求項２】 イオン強度約０．００１未満、ｐＨ約
３．５〜約５．０、抗体濃度約５％ｗｔ．／ｗｔ．およ
びマルトース濃度約１０％ｗｔ．／ｗｔ．をもつ、請求
項１の方法によって生産され、そして実質的に脂質外皮
ウイルスを含まない静脈内注射可能な免疫血清グロブリ
ン調製物。 - 【請求項３】 イオン強度約０．００１未満、ｐＨ約
３．５〜約５．０、抗体濃度約１０％ｗｔ．／ｗｔ．お
よびグリシン濃度約０．２Ｍをもつ、請求項１の方法に
よって生産され、そして実質的に脂質外皮ウイルスを含
まない静脈内注射可能な免疫血清グロブリン調製物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/532,211 US6686191B1 (en) | 1995-09-22 | 1995-09-22 | Preparation of virally inactivated intravenously injectable immune serum globulin |
| US532211 | 1995-09-22 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09124507A true JPH09124507A (ja) | 1997-05-13 |
| JP4036494B2 JP4036494B2 (ja) | 2008-01-23 |
Family
ID=24120836
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26508496A Expired - Lifetime JP4036494B2 (ja) | 1995-09-22 | 1996-09-17 | ウイルスを不活化した静脈内注射可能な免疫血清グロブリンの調製 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6686191B1 (ja) |
| EP (2) | EP0764447B1 (ja) |
| JP (1) | JP4036494B2 (ja) |
| AT (1) | ATE257016T1 (ja) |
| AU (1) | AU709608B2 (ja) |
| CA (1) | CA2185859C (ja) |
| DE (1) | DE69631229T2 (ja) |
| DK (1) | DK0764447T3 (ja) |
| ES (1) | ES2213760T3 (ja) |
| PT (1) | PT764447E (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100791502B1 (ko) * | 2006-09-29 | 2008-01-03 | 한스바이오메드 주식회사 | 바이러스 불활화된 무세포 인체 이식재 생산방법 |
| JP2011508771A (ja) * | 2008-01-07 | 2011-03-17 | クオ レイ バイオメディカル テクノロジー コーポレイション | 凝固可能な血小板成長因子濃縮物及びその調製法 |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998044948A2 (en) * | 1997-04-07 | 1998-10-15 | Cangene Corporation | Intravenous immune globulin formulation containing a non-ionic surface active agent with improved pharmacokinetic properties |
| AT405608B (de) * | 1997-04-08 | 1999-10-25 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von pathogenen, insbesondere von viren, in einem biologischen material |
| DE59800935D1 (en) | 1997-04-08 | 2001-08-02 | Baxter Ag | Immuntolerante prothrombinkomplex-präparation |
| US6717116B1 (en) * | 1999-08-10 | 2004-04-06 | Ibiden Co., Ltd. | Semiconductor production device ceramic plate |
| US8703126B2 (en) | 2000-10-12 | 2014-04-22 | Genentech, Inc. | Reduced-viscosity concentrated protein formulations |
| IL155002A0 (en) | 2000-10-12 | 2003-10-31 | Genentech Inc | Reduced-viscosity concentrated protein formulations |
| CA2754528A1 (en) | 2009-03-06 | 2010-09-10 | Genetech, Inc. | Antibody formulation |
| NZ602115A (en) | 2010-03-01 | 2014-12-24 | Bayer Healthcare Llc | Optimized monoclonal antibodies against tissue factor pathway inhibitor (tfpi) |
| CN102357259A (zh) | 2011-07-28 | 2012-02-22 | 王珊珊 | 一种生物蛋白海绵及其制备方法 |
| CN107188926B (zh) | 2012-06-29 | 2021-02-09 | Emd密理博公司 | 在蛋白纯化过程中灭活病毒的方法 |
| US8613919B1 (en) | 2012-08-31 | 2013-12-24 | Bayer Healthcare, Llc | High concentration antibody and protein formulations |
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