FI89135C - Foerfarande foer inaktivering av vaermesensitiva, patogena, i blod existerande virus i igg-preparat - Google Patents

Description

a. 89135

Menetelmä lämpöherkkien, patogeenisten, veren sisältämien virusten inaktivoimiseksi IgG-valmisteissa

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää lämpöherkkien, patogeenisten, veren sisältämien virusten, kuten LAV/HTLV-III tai hepatitis-viruksen inaktivoimiseksi IgG-valmisteissa.

IgGctä sisältäviä valmisteita käytetään useisiin erilaisiin tarkoituksiin, joiden välillä ei kuitenkaan ole selvästi määriteltävää eroa. Esimerkkejä neljästä pääalueesta ovat: 1) Laajaspektriset IgG-valmisteet, joita annostellaan immunopuutospotilaille, jotka kärsivät veren gammaglobu-liinipuutoksesta tai veren gammaglobuliininiukkuudesta.

2) Laajaspektriset IgG-valmisteet annosteltaviksi en naltaehkäisevästi virus- tai bakteeriperäisiä infektioita vastaan, kuten Hepatitis A:ta.

3) Laajaspektriset IgG-valmisteet käytettäviksi esim.

itsenäisen verihiutalepuutepurppuran hoitoon, koska suuri määrä IgG:tä kykenee lisäämään verihiutaleiden määrää.

4) Spesifiset IgG-valmisteet käytettäviksi ennaltaehkäisevästi esim. jäykkäkouristusmyrkytystä vastaan, Hepatitis B-virusinfektioita vastaan ja esim. äitien Rhesus-immu-nisaatiota vastaan.

Suonensisäisesti (i.v.) annosteltavia IgG-valmisteita käytetään yleisesti näihin ja useihin muihin tarkoituksiin, vaikkakin lihaksensisäisiä (i.m) ja ihonalaisia (s.c.) käytetään myöskin jossain määrin. Tunnetut valmisteet usein sisältävät epäpuhtauksia, jotka aiheuttavat sivuvaikutuksia. Tämä haittapuoli on pyritty poistamaan suorittamalla valmisteille puhdistuksia ja kemiallisia modifikaatioita.

2 89135

Varsinkin viime vuosikymmenellä on kehitetty suuri määrä valmisteita, joita voidaan annostella i.v. Täten useita menetelmiä on ehdotettu sellaisten valmisteiden valmistamiseksi, jotka ovat käyttökelpoisia annosteltaessa i.v. Ehdotetut menetelmät voidaan karkeasti jakaa kolmeen ryhmään.

Ensimmäisessä ryhmässä IgG-molekyylit altistetaan kemialliselle käsittelylle. Tämä voi olla SH-ryhmien alkylointi IgG-mol ekyyl i ssä , tai se voi olla IgG-molekyyli n sulfi to i mi nen , ks. DK-patenttijui kai su 141 432 , hakemus nro 3991 /75.

Toisessa menetel ikäryhmässä I gG-mol ekyyl i t altistetaan entsy-maattiselle vaikutukselle. Tämä voi esimerkiksi olla käsittely pepsiinillä alhaisella pH-arvossa, ks. esim. DK-patentti-julkaisu 143 249, hakemus nro 1322/84.

Kolmas menetelmä ryhmä ei sisällä IgG-molekyyleihin vaikuttavaa kemiallista tai entsymaattista käsittelyä, ja näiden valmisteiden sanotaan olevan natiiveja. Tällöin IgG-fraktio voidaan puhdistaa suhteellisen korkeaan puhtauteen käyttäen erilaisia eristysmenetelmiä, ks. esim. DK-patenttihakemus nro 441/74 ja 265/83.

Strategia kehitettäessä kaikentyyppisiä i.v.-IgG-valmisteita on sen tähden ollut sivuvaikutusriskin alentaminen, samalla kun säilytetään I g G:1 le tyypilliset funktionaaliset ominaisuudet, kuten antigeenin sitoutuminen ja vieraan materiaalin o p s o n i s o i n t i .

Mahdolliset sivuvaikutukset johtuvat siitä tosiasiasta, että fraktioitaessa valmisteet modi fioi tuvat sellaisella tavalla, joka aktivoi potilaan komplementtisysteemin annosteltaessa. Tämä johtaa aineisiin, jotka saattavat aiheuttaa yllämainitut sivuvaikutukset. Viime aikoina kömpiementtiakti vaati on on li 3 89135 katsottu johtuvan fraktioinnin aikana syntyneistä IgG-valmis-teista, mutta myöskin IgG-molekyy1ien ja immunokompleks ien modi fioituminen voi aiheuttaa tällaisen kömpiementtiakti vaati o n .

Kuten edellä esitetystä ilmenee, on suuresti pyritty välttämään kömpiementtiaktiivisuus IgG-vaimisteissa.

Useita vuosia on tiedetty, että immunoglobuliinimolekyy1ien kuumentaminen aiheuttaa aggregaattien muodostumista, jotka ovat kömpiemenettiakti voivia. Tämän on osoittanut B. Olhagen,

Acta Medica Scandinavica 1945, täydennys 162. Ainoastaan mel- o ko lyhyt kuumennus, esim. 10 minuuttia 62 C:ssa aiheuttaa huomattavan kasvun komplementin sitoutumisominaisuuksissa ja laskun antigeenin sitoutumisominai suuksisa, ks. J. Römer & P. J. Späth: Die Immunochemotherapy, Eds. U. E. Nydegger, A. P. 1981, s. 123-130.

On havaittu, että Hepatitis B useissa tapauksissa on siirtynyt vastaanottajille Cohn'in fraktiointimenetelmäl1ä valmistetusta IgG-vai misteesta, ks. E. Tabor & R. J. Gerety, Lancet, ii, 1293, 1979. Viime aikoina on osoitettu, että Hepatitis Non A-Non B voi siirtyä Cohn'in frakti oi ntimenetelmäl1ä tuotettujen IgG-valmi s teiden kautta, ks. A.M.L. Lever et ai., Lancet, ii, 1062-1064, 1984.

Epäilemättä IgG-valmisteiden sisältämät neutraloivat vasta-aineet ovat osaltaan vaikuttaneet vähentävästi IgG-valmistei-den kautta siirtyneiden infektioiden esiintymistiheyteen. Kuitenkin LAV/HTLV-III suhteen, joka aiheuttaa AIDS:ia, näyttää siltä, että neutraloivia vasta-aineita ei kehity (R. A. Weiss et ai., Nature, 316 , 69-72 , 1985 ). Tämä voi tarkoittaa sitä, että AIDS-viruksen siirtymisriski tässä yhteydessä kasvaa.

Kaikkien IgG-valmisteiden tekemiseksi varmoiksi infektioiden siirtymisen suhteen, olisi luonnollista 1ämpökäsitel 1ä vai- 4 89135 misteet lämpötiloissa, joissa mikro-organismit tuhoutuvat. Kuitenkaan tähän saakka ei ole ollut mahdollista lämpökäsi-tellä valmisteita ja samalla säilyttää sekä antigeenejä sitovat aggregaatit että alhainen komplementtiaktivoivien aggregaattien taso ja tähän saakka ei ole tuotettu IgG-valmisteita, jotka ovat turvallisia patogeenisten organismien siirtymisen suhteen.

DK-patenttihakemuksesta 1071/85 on tunnettua inaktivoida patogeeniset mikro-organismit verivalmisteissa, sisältäen IgG-valmisteet, lämpökäsittelemällä vähintään 5 paino-% vettä tai alkoholia läsnäollessa ja lämpötiloissa 121°C:een saakka, kuten 50-90°C. Patogeeniset mikro-organismit inaktivoi-tuvat tehokkaasti tällaisissa olosuhteissa. Kuitenkin tähän sisältyy immunoglobuliinien vahingoittumisen tai huonontumisen riski.

WO-patenttihakemuksesta nro 82/03871 ilmenee, että pelkistävien hiilihydraattien poistamisen ja kylmäkuivaamisen jälkeen veriplasma voidaan steriloida, esim. Hepatitis-viruksen inaktivoimiseksi.

Esillä olevan keksinnön tarkoituksena on inaktivoida lämpö-herkät, patogeeniset, veren sisältämät virukset, kuten LAV/HTLV-III tai Hepatitis-virus, IgG-valmisteissa huonontamatta valmisteen ominaisuuksia.

Keksintö perustuu siihen yllättävään havaintoon, että IgG-valmisteita, jotka on puhdistettu pelkistävistä hiilihydraateista, voidaan lämpökäsiteliä kuivassa olomuodossa ja olosuhteissa, joissa mainitut veren sisältämät virukset inakti-voituvat, ilman riskiä, että antigeeniä sitovat ominaisuudet muuttuisivat tai komplementtiaktivoivat ominaisuudet lisääntyisivät .

5 89135

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, että IgG:tä sisältävä liuos puhdistetaan pelkistävien hiilihydraattien poistamiseksi ja sitten kuivataan ja lämpökäsitel-lään lämpötilassa 60-95°C 10-168 tuntia olosuhteissa, joissa valmisteen jäännösvesipitoisuus on enintään 1 paino-%.

Esillä olevalla menetelmällä on havaittu olevan mahdollista lämpökäsitellä modifioimatonta i.v.-IgG:tä siten, että sitä voidaan käyttää i.v. samoin kuin on mahdollista lämpökäsitellä s.c. ja i.m. valmisteita vaikuttamatta terapeuttiseen aktiivisuuteen.

Näin ollen ratkaisevaa ei ole se, tuotetaanko IgG-valmiste menetelmällä, jossa käytetään kemiallista modifiointia, entsymaattista vaikutusta tai niin kutsuttua natiivi IgG:tä vai onko valmiste tarkoitettu käytettäväksi s.c. tai i.v.

Erilaisia edullisia suoritusmuotoja on esitetty patenttivaatimuksissa 2 ja 3. Näillä saadaan aikaan optimiolosuhteet tai kestävyys uudelleenliukenemisen, samenemisen ja kellastumisen suhteen sekä polymeeri- ja fragmentin muodostumisen suhteen. Lisäksi säilytetään muuttumattomat antigeenin si-toutumisominaisuudet ja alhainen komplementtiaktivoivien aggregaattien taso.

Taulukosta 1 ilmenee, että saadaan erilaisia tuloksia lämpö-käsittelemällä kolmea kaupallista IgG(i.v.)-valmistetta kylmäkuivatussa muodossa. Yhdessä tapauksessa valmiste saa voimakkaan keltaisen värin. Polymeerifraktion suuri alkuperäinen sisältö voi johtua sekä aggregoituneesta IgGrstä että suurimolekyylisistä epäpuhtauksista, joita ei ole fraktioitu pois, 6 89135 mutta kaikissa tapauksissa polymeeri frakti on havaitaan kasvavan 1ämpökäsitel taessa. Tätä täytyy pitää osoituksena siitä, että valmiste on muuttunut enemmän tai vähemmän lämpökäsitel -taessa .

Taulukko 1

Kaupallisesti saatavien i.v. IgG-valmisteiden lämpökäsittely. Vertailu lämpökäsitellyn näytteen (T = 7 2) ja näytteen, jota ei ole lämpökäsitelty (T=) välillä Δ°°403 pH~ > ^ Uudelleen liuke- lasku % kaikista nemisaika T = 72 T=0 T=72 lei dia- heikosti liukeneva, lyysiä 9,50 1,46 8 38 kokkareita 2 ei dialyysiä 1,024 0,55 30 70 2 min 3 ei dialyysiä -0,033 0,02 6 82 min

Suoritettaessa esillä oleva menetelmä pelkistävien hiilihydraattien määrä edullisesti vähennetään alle 50^ug/ml.

Saavutettu vaikutus ilmenee taulukosta 2, jossa esitetään erilaiset glukoosipitoisuudet sisältävien IgG-vai misteiden lämpökäsittelyn tulokset.

Glukoosi, joka on pelkistävä hiilihydraatti, on luonnollisesti esiintyvä veressä ja plasmassa, koska kuten hyvin tiedetään, solut käyttävät glukoosia energian tuottamiseen. Lisäksi glukoosia usein lisätään koagul oitumista estävään väliaineeseen verta otettaessa. Tässä tapauksessa glukoosin määrä on erityisen suuri. Täten on havaittu, että pelkistävillä li 7 89135 hiilihydraateilla, tässä erityisesti glukoosilla, on ratkaiseva vaikutus IgG-valmisteiden lämpökäsittelyn yhteydessä. Lämpökäsittelyn tulos on sitä parempi, mitä alhaisempi glukoosi pi toi suus on. Tämän vuoksi on erityisen tärkeää, että glukoosi erotetaan IgG:stä ennen lämpökäsittelyä.

Pelkistävien hiilihydraattien läsnäolon merkityksen osoittamiseksi, erityisesti glukoosin, lämpökäsittelyn aikana, on suoritettu kokeita, joissa kasvavia glukoosi pitoisuuksia on 1 i -sätty IgG-valniisteisiin ennen kylmäkuivausta ja lämpökäsittelyä. IgG-valmiste stabiloidaan 1 %: 11 a albumiinia ja 7,5 %:11 a sakkaroosia ennen ky 1mäkuivanmista ja lämpökäsittelyä. Kylmäkuivaamisen ja 1ämpökäsittelemi sen jälkeen valmiste uudelleen liotetaan tislattuun veteen 3-fc:k s i IgG:ksi.

Δ 0D4q2 Ja pH-lasku ovat sameuden lisääntyminen ja lasku pH-arvossa, vastaavasti, laskettuna käsittelemättömästä näytteestä. Sarake > 7S osoittaa molekyylien prosentuaalisen pitoisuuden, joiden molekyylipaino on suurempi kuin monomeeri-sen IgG:n. Tämä tarkoittaa, että sekä dimeerinen, oligomeeri-nen että polymeerinen IgG vaikuttaa tähän fraktioon. Fragmentit osoittavat, mikäli hajonneita IgG-molekyylejä on läsnä.

Kuten taulukosta 2 nähdään, esiintyy hyvä korrelaatio glukoosi pi toi suuden ja kellastumisen { ΔOD ), pH-laskun ja 403 kompleksien sisällön, joiden molekyylipaino on suurempi kuin monomeerisen IgG:n, välillä.

e 89135

Taulukko 2

Glukoosi- ΔΟϋ pH- Uudelleen AC- > 7S Frag- • · 403 y pitoisuus lasku liukene- akti i- % kai- mentti- ^ug/nl nemisaika visuus kesta en ¾ CH/g k a i - 50

IgG kesta T = 72 T=72 T=72 0 0,041 0,00 2 min 21 2,6 < 2 % 100 0,195 0,03 2 min 21 6,9 < 2 % 200 0,236 0,05 2 min 21 5,6 < 2 % 4C0 0,356 0,08 2 min 25 9,4 < 2 % 80C 0,848 0,20 2 min 24 17,1 < 2 % 1600 1,62 0,46 2 min 22 26,1 3 % 3200 2,40 0,72 2 min < 14 31,0 5 % Lämpökäsitellyn näytteen AC-aktiivisuus näkyy lisääntyvän, kunnes saavutetaan glukoosipitoisuus 400-800^ug/ml. Glukoosi pi toi suuden kasvaessa tämän tason yli, AC-aktiivisuus laskee. Syynä tähän AC-aktiivisuuden kulkuun on todennäköisesti se, että IgG-molekyylien NH-ryhmät reagoivat glukoosin kanssa. Tämä aiheuttaa sen, että IgG-molekyy1it "paketoituvat" siten, että F -reseptorit estyvät, eivätkä kykene εις tomaan komplementtia. Tällainen reaktio heijastuu AC-akti i visuuden laskuna.

Tulos on esitetty taulukossa 1, josta näkyy lämpökäsitellyn (T = 72) ja ei -1ämpckäsitel 1yn (T=0) IgG-valmisteen risti-immunoelektroforeesi lisättynä 500 ug/ml glukoosia kylmä-kuivattaessa ja lämpökäsiteltäessä. 5^ul 3 %:sta (p/til) IgG-liuosta 1isättiin .^Käytetyt vasta-aineet ovat antiplasma-vasta-aineita 10^ul/cm .

9 89135

Kuviossa 1 esitetään ero lämpökäsitellyn valmisteen ja lämpö-käsittelemättömän valmisteen välillä. Lämpökäsitellyssä näytteessä on läsnä sakkaa, osittain IgG-sakan alla, jota sakkaa ei ole läsnä käsittelemättömässä näytteessä. Tällä sakalla saattaa olla immunologista samankaltaisuutta sekä IgG:n että albumiinin kanssa. Tämä voi osoittaa, että IgG- ja albumiini -molekyylit ovat reagoineet.

Kun IgG-fraktiosta on erotettu glukoosi, IgG-valmistetta voidaan lämpökäsitellä lyofilisoidussa muodossa tämän keksinnön yhteydessä kuvatuissa olosuhteissa, ilman että antigeeniä sitovat ominaisuudet muuttuvat, ilman vaikutusta komplementti-sitoutumisominaisuuksiin ja ilman värjäytymistä, pH:n ja uu-delleenliukenemisajan muutosta. Tämä ilmenee seuraavista esimerkeistä .

Valmisteita lämpökäsitellään lämpötilassa 60-95°C, edullisesti 65-85°C, 10-168 tuntia ja olosuhteissa, joissa jään-nösvesipitoisuus valmisteessa on enintään 1 paino-%. Edulliset olosuhteet ovat 72 tuntia 68°C:ssa. Lämpökäsittely suoritetaan edullisesti kuivaamisen jälkeen jäännösvesipitoisuu-teen alle 0,5 %, ja erityisesti alle 0,3 %.

Esimerkki 1

IgG-valmistetta (i.v.), joka on valmistettu, kuten on esitetty US-patentissa 4 164 495, mutta infektoitu AIDS-viruksella, puhdistetaan pelkistetyt hiilihydraatit dialyysillä, siten, että näiden hiilihydraattien (glukoosi) sisältö pienenee < 50 μg/ml. Sitten valmiste stabiloidaan lisäämällä albumiinia ja sakkaroosia 1 % ja 7,5 % vastaavasti, minkä jälkeen valmisteen jäännöskosteus kylmäkuivatukeen yhteydessä säädetään arvoon, joka on pienempi kuin 1 paino-%. Sen jälkeen valmistetta lämpökäsitellään 68°C:ssa 72 tuntia. IgG-valmiste on stabiloitu 1 %:lla albumiinia ja 7,5 %:lla sakkaroosia ennen kylmäkuivaa-mista ja lämpökäsittelyä. Pelkistettävien hiilihydraattien, glukoosin määrä, on vähennetty alle 50 /xg/ml. Koe suoritettiin - : - vertaamalla käsittelemätöntä valmistetta (T=0) lämpökäsiteltyyn valmisteeseen (T=72) . Uudelleenliuottoimisen jälkeen IgG-pitoisuus on 3 % p/til.

10 891 35

Taulukko 3 Δ00 pH Uudelleenliukenemisaika 403 T = 0 0,058 6,99 5 mi n T=72 0,075 7,03 5 min

Taulukko 4 AC-aktiivi- Anti-Rubella Anti-HBsAg > 7S Fragment- suus CH /g IU/ml IU/ml % kai- teja % 50

IgG kesta kaikesta T=0 16 426+143 0,13 3 % < 1 % 1=72 10 549+148 0,13 4 % < 1 %

Taulukoista 3 ja 4 ilmenee, että IgG-pitoisuus valmisteessa säilyy käytännöllisesti katsottuna koskemattomana ilman alentumista aktiivisuudessa.

Valmiste tutkittiin tarttuvan LAV/HTLV-III suhteen kääntei s-transkriptaasi11 a . Näyte osoitti, että valmiste ei sisältänyt akti ivista LAV/HTLV-lII-virusta.

Kokeen toistaminen 5 % vettä sisältävällä valmisteella johtaa alentuneen aktiivisuuden omaavaan värjäytyneeseen tuotteeseen.

Tulokset on esitetty kuviossa 2, jossa näkyy lämpökäsitellyn (T = 72} ja lämpökäsittelemättömän (T = 0) IgG:n (i.v.) risti-immunoelektroforeesi, joka IgG on stabiloitu albumiinilla ennen kylmäkuivausta ja lämpökäsittelyä. Käytettiin 5 ui 3 %:sta (p/til) IgG-liuosta. Käytetyt vasta-aineet ovat an-tiplasmavasta-aineita lO^ul/cm .

Kuviossa 2 ei voida havaita eroa lämpökäsitellyn ja lämpokä-sittelemättömän näytteen välillä.

l· 11 89135

Pitoisuus > 7S-fraktlossa on dimeeristä IgG:tä yksinään, jonka tavallisesti uskotaan olevan harmitonta. Sen tähden tämän kokeen tulokset osoittavat, että lämpökäsitellyn ja lämpökäsit-telemättömän näytteen välillä ei ole mitään eroa minkään tutkitun parametrin suhteen.

Esimerkki 2

IgG-valmistetta (s.c. tai i.m.), joka on tuotettu US-patentin 4 164 495 mukaan, mutta infektoitu AIDS-viruksella, esimerkin 1 mukaisen käsittelyn jälkeen lämpökäsiteltiin 68°C:ssa 72 tuntia. igG-valmiste stabiloitiin sakkaroosilla ennen kylmä-kuivausta ja lämpökäsittelyä. Pelkistävien hiilihydraattien, erityisesti glukoosin, pitoisuus, alennettiin alle 50pg/ml.

Koe suoritettiin vertaamalla käsittelemätöntä valmistetta (T-0) lämpökäsiteltyyn valmisteeseen (T=72). Uudelleenliuotta-misen jälkeen IgG-pitoisuus on 14 % (p/til) ja sakkaroosipi-toisuus on 7,5 % (p/til).

Taulukko 5 AOD403 pH Uudelleenliukenemisaika T«0 0,138 6,45 5 min T«72 0,138 6,49 5 min

Taulukko 6 AC-aktiivi- Anti-Rubella Anti-HBsAg > 7S Fragment- suus CH50/g IU/ml IU/ml % kai- te ja %

IgG kesta kaikesta T-0 22 623 ± 98 0,27 3 % < 1 % T=72 22 730 ±174 0,27 3 % < 1 %

Taulukot 5 ja 6 osoittavat, että IgG-pitoisuus valmisteessa säilyy käytännöllisesti katsoen koskemattomana ilman aktiivisuuden laskua. Lämpökäsitelty valmiste ei sisältänyt aktiivista LAV/HTLV-III-virusta.

12 891 35

Tulokset on esitetty kuviossa 3, jossa on lämpökäsitellyn (T = 7 2 ) ja lämpökäsittelemattomä n (T=0) IgG:n (s.c. tai i.m.) risti-immunoelektroforeesi Lisättiin 4 ui näytettä, joka on laimennettu IgG-pitoisuudesta 15 %:sta (p/til) 5 %:iin (p/ti 1). Käytetyt vasta-aineet olivat antiplasmavasta-aineita 10^ul/cm .

Kuviossa 3 ei voida nähdä eroa lämpökäsitellyn näytteen ja 1ämpökäsittelemättömän näytteen välillä.

Pitoisuus > 7S-fraktiossa on yksinään dimeeristä IgG:tä, jonka tavallisesti uskotaan olevan harmitonta. Sen tähden kokeen tulokset osoittavat, että lämpökäsitellyn ja lämpökäsittelemättömän näytteen välillä ei ole mitään eroa minkään tutkitun parametrin suhteen.

Esimerkki 3

IgG-vai mistetta, joka oli infektoitu Hepatitis B:llä, lämpö-käsiteltiin 68 C:ssa, kuten esimerkissä 1 on esitetty, ei infektoivan IgG-valmisteen aikaansaamiseksi, joka on käyttökelpoinen injektiotarkoituksiin.

Esimerkki 4

Esimerkissä 1 kuvattu käsittely toistettiin sillä erolla, βίο tä lämpökäsittely suoritettiin 90 C:ssa 12 tuntia. Käsitellyllä valmisteella on samat ominaisuudet kuin esimerkissä 1 tuotetulla valmisteella.

li

Claims (3)

13 891 35

1. Förfarande för inaktivering av i blod ingäende värmekäns-liga, patogena virus, säsom LAV/HTLV-III eller hepatitis-virus i IgG-preparat, kännetecknat av att en IgG-haltig lösning re-nas för avlägsning av reducerande karbohydrater och därefter torkas och värmebehandlas vid en temperatur av 60-90°C för 10-168 timmar under förhällanden i vilka preparatets restvatten-halt är högst 1 vikt-%.

1. Menetelmä lämpöherkkien, patogeenisten, veren sisältämien virusten, kuten LAV/HTLV-III tai hepatitis-viruksen, inakti-voimiseksi IgG-valmisteissa, tunnettu siitä, että IgG:tä sisältävä liuos puhdistetaan pelkistävien hiilihydraattien poistamiseksi ja sitten kuivataan ja lämpökäsitellään lämpötilassa 60-95°C 10-168 tuntia olosuhteissa, joissa valmisteen jäännös-vesipitoisuus on enintään 1 paino-%.

2. Förfarande enligt patentkravet 1, kännetecknat av att den IgG-haltiga lösningen är en fraktion av människoblod.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että IgG:tä sisältävä liuos on ihmisen verifraktio.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lämpökäsittely suoritetaan lämpötilassa 65-95°C, ja että jäännösvesipitoisuus on alle 0,5 %, edullisesti alle 0. 3.%.

3. Förfarande enligt patentkravet 1 eller 2, kännetecknat av att värmebehandlingen utförs vid en temperatur av 65-95°C och att restvattenhalten är mindre än 0,5 %, fördelaktigt mindre än 0,3 %.