NO166258B - Fremgangsmaate for konsentrering og paavisning av biomolekyler og -celler og en anordning for dette. - Google Patents
Fremgangsmaate for konsentrering og paavisning av biomolekyler og -celler og en anordning for dette. Download PDFInfo
- Publication number
- NO166258B NO166258B NO85853749A NO853749A NO166258B NO 166258 B NO166258 B NO 166258B NO 85853749 A NO85853749 A NO 85853749A NO 853749 A NO853749 A NO 853749A NO 166258 B NO166258 B NO 166258B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- substance
- detected
- solid surface
- affinity
- elisa
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 35
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 38
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 9
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 7
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 3
- 102000018656 Mitogen Receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 108010052006 Mitogen Receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 claims description 2
- 229920002457 flexible plastic Polymers 0.000 claims 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 41
- 241000589602 Francisella tularensis Species 0.000 description 38
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 10
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 9
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 9
- HGAZMNJKRQFZKS-UHFFFAOYSA-N chloroethene;ethenyl acetate Chemical compound ClC=C.CC(=O)OC=C HGAZMNJKRQFZKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940118764 francisella tularensis Drugs 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 4
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000034784 Tularaemia Diseases 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108010001496 Galectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100021735 Galectin-2 Human genes 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000003570 air Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte og en anordning for å konsentrere og påvise biologiske substanser med affinitetsegenskaper.
Tidligere kjente metoder for å måle biologiske og biokjemiske materialer har vært utilfredsstillende, ettersom det ofte har vært vanskelig å konsentrere materialet for målingen. Forskjellige teknikker så som spin-tørking og ultrafiltrering for å oppnå en øket konsentrasjon av det biologiske og biokjemiske materiale som skal analyseres, har vært anvendt. Imidlertid viste det seg at flere molekyler ikke kunne konsentreres på en slik måte og eksempler på dette er antigener, nukleinsyrer, hormoner, enzymer, ligander osv. En alvorlig ulempe med disse teknikker er at også kontaminerende molekyler konsentreres og innvirker på påvisningen av det ønskede materiale.
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for separat konsentrering av biologiske og biokjemiske materialer med affinitetsegenskaper. Dette oppnås ved at en flytende prøve inneholdende substansen som skal påvises, hvilken substans viser affinitet overfor en annen substans, i en strøm passerer en fast overflate til hvilken overflate den andre substans, til hvilken den første substans som skal påvirkes viser affinitet,
er bundet slik at det oppnås en anrikning av substansen som skal påvises, og i forhold til væskevolumet i kontakt med den aktive overflate passerer et mange ganger større væskevolum overflaten, hvoretter det dannede komplekset, på nevnte faste overflate, av den første substansen som skal påvirkes og substansen hvortil den første substansen har affinitet,
markeres og avleses. Substansen som skal påvises og substansen til hvilken den første substans viser affinitet, består fortrinnsvis av antigen-antistoff, DNA-DNA, DNA-RNA, RNA-RNA, lektinreseptor og andre ligand-reseptorkombinasjoner. Avlesning kan foregå ved hjelp av forskjellige markører så som enzymer, radioaktivitet, laser osv.
Påvisningsprosessen ifølge foreliggende oppfinnelse kan automatiseres og ømfintligheten økes minst ti ganger sammenlignet med tidligere kjente metoder så som "enzyme-linked immunosorbent assay" (ELISA) mikroplater og ved radioimmuno-analyse (RIA) teknikker, immunofluorescens osv. (Voller, A., Bartlett, A., og Bidwell,D.E., "Enzyme immunoassays with
special reference to ELISA techniques", J. Clin. Pathol. 31. 507-520 (1978): Overby, L.R., og Mushawar, J.K., "Radioimmune assays",. s.39-70, i M.W. Rytel (ed.), Rapid diagnosis in infectious disease, CRC Press, Boca, Fla. (1979); Dahle, A.B., and Laake, M., "Diversity dynamics of marine bacteria studies by immunofluorescent staining on membrane filters", Appl. Environ. Microbiol. 43. 169-176 (1982).
Anordningen for utførelsen av fremgangsmåten er karakterisert ved en strøm over en fast overflate av en væskeprøve inneholdende substansen som skal påvises, hvilken viser affinitet overfor en annen substans, hvilken sistnevnte er bundet til den faste overflate, hvorved substansen som skal påvirkes anrikes.
Avhengig av strømningsforholdet og strømningstiden oppnås en betraktelig lavere grense for det påviselige nivå. Konsentrasjonen av bakterier og mengden av de bundede substanser er andre variable. Graden av bundet substans økes med øket spesifisitet.
Strømmengden må undersøkes hver gang og avhenger inter alia av strørrelsen til molekylene som skal påvises.
Den faste overflaten kan være enhver fast overflate som er immobilisert, men er fortrinnsvis hydrofob og består av polymere substanser så som glass, plastmateriale, metall, silikon osv. Bindingen til overflaten oppnås
1) ved passiv adsorbsjon til den hydrofobe overflate, eller
2) ved å immobilisere det spesifikke molekyl, f.eks. antistoff, enzym, antigen, til en fast fase ved adsorbsjon eller kovalent binding.
Den flytende prøve kan bestå av vann, vannbaserte systemer, f.eks. buffer, legemsvæsker, luftprøver sammenpakket i cyklon-medier, gjenoppslemmede faste prøver i egnede buffersystemer som inneholder substansen som skal påvises.
I bakteriemåling har det vist seg å være fordelaktig hvis prøven inneholder minst IO<3> bakterier pr. milliliter oppslemmet, men også så små mengder som IO<2> bakterier pr. milliliter kan påvises.
Konsentrasjonen av den ønskede substans kan reduseres hvis prøvens volum økes og likevel gir påviselige resultater.
Et ikke-begrensende eksempel på en anordning som brukes ifølge foreliggende oppfinnelse er vist i den vedlagte skjema-tiske oversikt av konsentrerings-prosessen ved hjelp av en immunologisk teknikk (fig.l).
En prøve (1) som f.eks. inneholder antigen pumpes med en pumpe (2) i et rør (3) til hvis innvendige flater antistoffer er bundet. Ved strømmen gjennom røret avsettes antigener på antistoffene og danner et kompleks som avleses ved forskjellige markører, f.eks. en fargereaksjon med alkalifosfataser.
Hittil brukte målemetoder så som de ovenfor nevnte ELISA-metoder har begrensninger med hensyn til laveste mengder påviselig antigen (sensitivitet). Forskjellige midler for å
øke konsentrasjonen direkte så som sentrifugering eller ultrafiltrering har som ovenfor angitt, vært brukt for å øke konsentrasjonen og sensitiviteten uten å gi tilfredsstillende resultater.
Antistoffer erholdt fra kaniner som hadde fått antigenet fra Francisella tularensis (kilden til tularemi) ble undersøkt med hensyn til deres evne til å gjenkjenne hele bakterier av F. tularensis . Det ble da funnet at antistoffene var bundet til bakteri-enes overflater og kunne brukes som et diagnostisk middel. Et målesystem ble utviklet basert på antistoffene hvori markøranti-stoffene ble affinitetsrenset mot antigenene og merket med alkalisk fosfatase.
Når det diagnostiske systemet ble undersøkt med hele bakterier av F. tularensis ved såkalt mikroplate-ELISA, fant man at den laveste mengde bakterier som tydelig kunne påvises ved metoden, var en konsentrasjon på 10 5 bakterier pr. milliliter (Fig. 2).
Konsentrering ved sentrifugering eller ultrafiltrering ga det samme resultat etter analyse (d.v.s. ingen økning ble oppnådd, ikke vist).
Undersøkelser av epidemier av tularemi hadde vist at F. tularensis kan foreligge i og spres ved vann og luft. Et behov for måling av vann og luft som inneholder ørsmå mengder av bakterier, er således oppstått. Et annet eksisterende behov er også å måle meget små prøver så som legemsvæsker.
Som ovenfor nevnt, har ELISA-metodene som har vært brukt vist seg å være utilfredsstillende etter som den laveste mengde bakterier som kan påvises ved metodene ligger innenfor en konsentrasjon på 10 5 bakterier pr. milliliter.
Derfor ble undersøkelser foretatt ved bruk av affiniteten av F. tularensis overfor spesifiserte antistoffer for å øke sensitiviteten av undersøkelsen.
Et overflate-antigen ble fremstilt som beskrevet av Sand-strøm, G., Tarnvik, A., Wolf-Watz, H., og Løfgren, S., "Prepara-tion of antigen from Francisella tularensis for demonstration of antibodies by the ELISA", FOA Report C 40179-B 3, Juni 1983, Umeå, Sverige.
Et overflate-antigen (Sandstrøm et al., Inf. Imm. 45, 101-106 (1984)) ble isolert, som immunisert på kanin ga spesifikke antistoffer mot F. tularensis (Sandstrøm, G., og Wolf-Watz, H., "Rapid identification of Francisella tularensis in water", FOA Report C 40188-B 3, November 1983, Umeå, Sverige.
Kanin sera.
Kaniner ble immunisert ved F. tularensis antigen som beskrevet av Sandstrøm, G., og Wolf-Watz, H., "Rapid identification of Francisella tularensis in water", FOA Report C 40188-B 3, November 1983, Umeå, Sverige.
Af f initetsrensinci og alkalisk f osf atasekooling til kaninantistoffer .
En levende vaksinestamme av F. tularensis ( F. tularensis LVS) ble fremskaffet av U.S. Army Medical Research Institute of Infections Diseases, Fort Detrick, Frederick, Md., USA. En villstamme av F. tularensis var, palaerctica (stamme SBL R45) ble fremskaffet av R. Møllby, The National Swedish Bacteriological Laboratory, Stockholm, Sverige.
Bakterier fra to stammer av F. tularensis ble dyrket på modifisert Thayer-Martin agar inneholdende Gc-mediumbase (36 g/l; Difco Laboratories, Detroit, Mich., USA), hemoglobin (10 g/l; Difco) og IsoVitalex (10 mg/l; BBL Microbiology Systems, Cockey-ville, Md., USA) ved 37°C i 5% C02 i luft. Bakteriepopulasjonen ble målt ved å telle levende bakterier.
Vaeskeundersøkelse:
Springvann ble justert til pH 5,0 ved bruk av 0,01M salt-syre. "Tween" 20 ble satt til hver prøve i en konsentrasjon på 0,05\. F. tula rensis bakterier ble oppslemmet i mengder på 0, 10 , 10<2>, 103, 104 og 10<5>/ml, henholdsvis, eller alternativt ble cyklonmedium tilført med 0,05\ "Tween" 20 (Olsson, T.r Stymne, S-, og Thore, A., Detektion av bakterieaerosoler med luminescensanalys av luftprover", FOA Report C 40061-B 2 (1977), Ursvik, Sverige.
Sammenlignin<g>seksem<p>el
Antigen - antistoff
Mikroplate ELISA ble utført i det vesentlige ifølge Voller et al., "Enzyme immuno assays with special reference to ELISA techniques", J. Clin Pathol.. 31, 507-520 (1978). Kaninantiserum mot F. tularensis-antigen fortynnet 100:1 (ELISA-styrke 1:5000) i
0,05M natrium bikarbonat-buffer pH 9,6 ble lagt på mikroplater (Flow Laboratories Svenska AB, Stockholm, Sverige). Bakterie-suspensjoner ble satt til mikroplatene som ble inkubert i en time ved 37°C. I det neste trinn ble en løsning av affinitetsrenset, alkalisk fosfatase merkede kaninantistoffer mot F. tularensis antigen påført 1 time ved 37°C. Reaksjonen utviklet seg ved tilsetning av substratet til enzymet, og absorbansen ved 405 nm ble målt. De således erholdte resultater er vist i figur 2 og tabell 2.
Eksempel.
Antigen - antistoff.
Fremgangsmåten ble utført i plastrør ("Tygon"; Noax AB, Stockholm, Sverige) forbundet med et peristaltisk pumpesystem (Technicon Corp., Ardesly, USA). Volumet av røret var 40 gl/cm rør. For hver måling ble 10 cm rør tilkoplet. Antiserum i stasjonær tilstand ble overtrukket natten over ved romtemperatur. Undersøkelsesprøver ble ført gjennom røret ved en strømnings-hastighet på 1,9 ml/min. (figur 3).
I noen eksperimenter var undersøkelsesprøvene stasjonære i røret, mens i andre undersøkelser ble en strøm frembrakt gjennom røret.
Etter vask ble stasjonær eksponering overfor alkaliske fosfatasemarkerte antistoffer utført ved 37°C i en time. Rørene ble koplet fra pumpesystemet og skåret fra hver side til en lengde på 5 cm, og substrat for alkalisk fosfatase ble tilsatt. Etter inkubering ved 37°C i 30 min. ble innholdet av hvert rør (200 pl) overført til brønnen i en mikroplate og absorbansen ved 405 nm ble målt. Prøvene ble undersøkt in triplo og middelverdi-ene ble beregnet.
Når undersøkelsesprøvene var stasjonære i røret, fikk man lavere ELISA-verdier i forhold til verdiene som oppnåddes når prøvene strømmet gjennom røret (figur 3).
Ved å bruke fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse fikk man en øket sensitivitet. Med en ubegrenset undersøkelses-prøve er det mulig å påvise ned til 10 2 F. tularenis pr. milliliter (figur 4). Levende tellinger av F. tularensis før og etter gjennomføringen gjennom røret viste ingen målbar reduksjon av bakterier.
Mulighetene for resirkulering av forskjellige volumer av undersøkelsesprøver som inneholder F. tularensis ble prøvet. Det minste volum som av praktiske grunner kunne resirkuleres, var en 5 ml prøve. Sensitiviteten ble øket minst 10 ganger (figur 5), generelt mellom 10 og 100 ganger i forhold til tiden i hvilken prøven ble resirkulert (figur 4). Ved å sirkulere 10 4 F. tularensis bakterier oppslemmet i 5, 15 og 50 ml væskeprøver i 18 timer fikk man økede verdier avhengig av mengden flytende prøve som undersøkes (tabell 1).
Når forskjellige volumer av prøven inneholdende F. tularensis fikk strømme gjennom røret som var overtrukket med spesifikke antistoffer mot F. tularensis, fikk man en anrikelse av bakterier i røret. Når større volumer ble ført gjennom røret, fikk man et platånivå (figur 3), antagelig på grunn av at alle antigen-avsetningspunkter allerede var opptatt og ingen ytterligere bakterier kunne fanges.
Lignende resultater erholdtes når F. tularensis ble sammen-trykket i cyklonen medier tilført med 0,05% "Tween" 20 (Olsson, T., Stymne, S., og Thore, A., "Detektion av bakterieaerosoler med luminescensanalys 1.Luminescensanalys av luftprover", FOA Report C 40061-B 2 (1977), Ursvik, Sverige.
Ligande- liqande- samvirke.
E. coli (HB101/pRHU845) agglutinerer A blod gjennom mannose-resistent hemagglutinering. Samvirke forekommer mellom en spesiell proteinstruktur hos bakterien overfor en Gal-NAc p (1 -» 3) Gal 2(1 4) Gal p ( 1 -» 4) GLC-ceramid reseptor på røde blodlegemer.
Et plastrør ("Tygon") ble belagt med fullstendig blod (A-blod). E. coli bakterier i konsentrasjoner fra 0 til 5.106 bakterier pr. milliliter ble kjørt gjennom rørsystemet. Deretter ble kaninantistoffer mot E. coli tilsatt. Så ble antikanin IgG merket med alkalisk fosfatase tilsatt i en time ved 37°C, og til slutt ble absorbansen ved 405 nm kontrollert ved tilsetning av substrat til alkalisk fosfatase. Ved å bruke denne metoden var det mulig å påvise E. coli ved forskjellige densiteter.
Nivået for påviselig F. tularensis LVS ble øket ved å bruke 3 4 5 væsken strømmende. Suspensjoner inneholdende 10 , 10 og 10 F. tularensis celler pr. milliliter ble ført gjennom et "Tygon" plastrør overtrukket med antistoffer mot F. tularensis. Strøm-ningshastigheten av prøvesuspensjonen var ca. 100 ml pr. 3 timer.
Ifølge denne fremgangsmåten ble mengden F. tularensis anriket, og det påviselige nivå ble lavere enn det påviselige nivå oppnådd med mikroplate ELISA.
Innflytelsen av "Tygon" plastrør ble undersøkt. ELISA målingen ble utført uten noen strøm i "Tygon" plastrøret. Fordelene ved strømmende væske ble vist også i denne prøven. Et lavere påviselig nivå oppnåddes sammenlignet med mikroplate
ELISA.
Forklaringer til figurer .
Fig. 1 -. Anrikning av rørveggene ved bruk av et strømsystem. Strømningshastigheten var 1,9 ml/min., og volumet 40 ijl/cm i røret. Prøven ble enten kjørt rett gjennom røret eller resirkulert. Målingen ble utført på samme måte som mikroplate ELISA målingen med hensyn til antigen og antistoff. Rørets lengde var 10 cm under prosessen, unntatt det siste trinn, da enzymsub-stratet ble tilsatt. Før tilsetningen ble røret skåret fra begge ender til en lengde på 5 cm. Fig. 2: ELISA ble utført i mikroplater. Mikroplatene ble preovertrukket med immunserum mot F. tularensis antigen ved romtemperatur natten over. Prøvene ble tilsatt etter vasking og fikk reagere 1 time ved 37°C. Affinitetsrensede anti- F. tularensis antistoffer merket med alkalisk fosfatase ble deretter tilsatt, og mikroplaten ble inkubert i 1 time ved 37°C. Enzym-substratet ble til slutt tilsatt, og reaksjonen kontrollert etter 30 min. ved bruk av et automatisk spektrofotometer. Angitte verdier er middelverdier ± standard avvik for 16 prøver. Fig. 3: Anrikning av F. tularensis på rørveggen ved bruk av forskjellige volumer vann inneholdende 10"<*> bakterier pr. milliliter. Prøvetiden var 3 timer. Angitte verdier er middelverdier standard avvik for 3 prøver. Fig. 4: Påvisningsnivået for forskjellige konsentrasjoner av F. tularensis var anhengig av volumet av prøven som gikk gjennom det preovertrukne "Tygon" rør. Etter 3 timer kunne 10 4 F. tularensis påvises.
For å oppnå et signifikant påvisningsnivå for så få som 10<2 >bakterier pr. milliliter, fikk ca. 4,5 liter prøve (tilsammen 4,5 x 10 5 bakterier) passere "Tygon" røret.
Prøvene viser at antigenet kan anrikes på den innvendige veggen av "Tygon" røret hvis røret er overtrukket med spesifikke antistoffer. Det er også tydelig at prøvetiden, d.v.s. anrik-ningstiden, avhenger av bakteriemengden i prøven som skal undersøkes.
Middelverdier ± standard avvik for 9-12 prøver.
Bakgrunnsverdiene (springvann uten F. tularensis) trekkes fra de angitte verdier.
Fig. 5: Påvisningsnivåer for F. tularensis når prøvene resirkuleres .
Målingene ble utført etter 3, 6, 18 og 24 timer. Angitte verdier er middelverdier ± standard avvik for 10-15 prøver.
Fig. 6: Absorbans ved 405 nm/100 min. ved forsøk med E. coli konsentrasjoner mellom 0 og 5.10 pr. milliliter. Prøven ble resirkulert i 3 timer. Volum = 5 milliliter. Angitte verdier er middelverdier for 3 prøver.
Identifikasjon av Shiqella dysenteriaeog Salmonella ty_ phimurium i vann ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen.
(Rør-ELISA).
Materialer og fremgangsmåter
Bakterier og bakteriologiske metoder
Shiqella dysenteriae (ATCC Nr.2 73 45), Salmonella typhimurium (LT2), Escherichia coli 031 og Pseudomonas aeruginosa, (klinisk isolat) ble dyrket i næringsmedium (Oxoid, Limited Basingstoke, Hampshire, Great Britain) over natten og levedyktige tellinger (antallet levende bakterier) ble bestemt på næringsagar (Oxoid) plater.
Hyperimmunisering av kaniner
Før den første immunisering ble blod tappet og serum fremstilt som kontrollserum. Konsentrasjonen av antigen (drepte bakterier) var 10 9/ml gjennom hele immuniserings-skjemaet. Dag 1 ble 0,5 ml injisert intrakutant med Freund's fullstendige adjuvans (Difco Laboratories, Detroit, Mn., USA). Dag 3, 5 og 7 ble 2 x 0,5 ml gitt subkutant med Freund's fullstendige adjuvans. Dag 14 og 15 ble 0,5 ml og dag 18
2 x 0,5 ml injisert intramuskulært.
Til slutt ble o,5 ml gitt intramuskulært hver uke i
6 uker. Deretter ble blod tappet, serum (immunserum) ble fremstilt og lagret ved -70°C.
Rensing og konjugasjon av kaninserum
Immunserum ble felt (20 ml) med like deler mettet ammoniumsulfat. Fellingen ble oppløst i 1 ml PBS (fosfat-buffret vanlig salt) og ble dialysert natten over mot PBS. Den dialyserte antistoffløsning ble blandet (10:1) med bakterier i PBS. Blandingen ble inkubert ved 37°C i 1 time og ble deretter spinntørket ved 2000 opm i 10 minutter. Klumpene ble oppløst i 1 M glycin-HCl oH 2,8. Etter en inkubering på 3 timer ved romtemperatur ble løsningen spinntørket ved 2000 opm i 10 minutter. Supernatanten (som inneholder de spesifikke antistoffer) ble dialysert mot PBS i 12 timer.
Spesifikke antistoffer, renset fra immunserum (2 mg) i PBS ble blandet med 5 mg alkaliske fosfataser (Sigma Chemical Co., St.Louis, Mo., USA) ved romtemperatur. Blandingen ble dialysert i 18 timer mot PBS ved 4°C. Deretter ble glutar-aldehyd (25 volumprosent) tilsatt til en sluttkonsentrasjon på 0,2 volumprosent etterfulgt av inkubering 1-2 timer ved romtemperatur. Dialyse mot PBS natten over ved 4°C ble foretatt, hvoretter dialysevæsken ble skiftet til 0,05 M Tris-HC1, pH 8,0 med 1 mM MgCl2 og dialysen fortsatte i 24 timer til ved 4°C. Til slutt ble 1 volumprosent kvegserum-albumin (Sigma) tilsatt. Konjugerte antistoffer ble lagret i et mørkt glass ved 4°C.
Rør- ELISA
"Tygon" rør (innvendig diameter 2,2 mm) ble fylt med _2
immunserum fortynnet 10 i 0,05 M natnumkarbonatbuf f er (3,47 g/l NaHC03, 1,18 g/l Na2C03), pH 9,6 og fikk stå natten over ved romtemperatur. Røret ble skåret i stykker med en lengde på 10 cm som ble forbundet med en pumpe (Ismatec SA, Mp 25 GJ4, Laboratoriumstechnik, Apparateban+ Elektronik, Zurich, Sveits) hvori de ble vasket i 154 mM NaCl løsning inneholdende 0,05 volumprosent Tween 20 og 0,5% kvegserum-albumin (Sigma). Prøver ble pumpet gjennom de forskjellige
rør ved romtemperatur i 3 timer etterfulgt av en ytterligere vask. Rørene ble løsnet fra pumpene og fylt med en løsning av konjugerte antistoffer. Inkuberingen ble utført i 1 time ved 37°C, hvoretter rørene ble vasket og skåret til en lengde på 5 cm. Rørene som ble fremstilt ble fylt med p-nitrofenyl-fosfatløsning (Sigma). Etter inkubering ved 37°C i 30 min. ble innholdet av rørene overført til mikrotiterplater og påvisningen ble foretatt ved hjelp av automatisk spektrofotometer (Titertech Multiscan, Flow Laboratories).
Mikrotiterplate - ELISA
ELISA ble utført hovedsaklig som forut beskrevet av Voller, A., Bertlett, A., og Bidwell, D.E.: Enzyme immunoassays, med spesiell henvisning til ELISA-teknikkene. J. Clin. Pathol. 31:507:520 (1978).
Behandling av vannprøver
Springvann ble tilsatt salter og vaskemiddel til de var lik de buffere som inngår i vanlig ELISA (Engvall, E., og Perlman, P.: Enzyme-linked immunosorbent assay. III. Kvantita-tiv måling av spesifikke antistoffer med enzym-merket artti-immunoglobulin i antigenbelagte rør. J. Immunol. 109:129-
135 (1972). Voller, A., Bartlett, A., og Bidwell, D.E.: Enzyme immunoassays, med spesiell henvisning til ELISA teknikkene. J. Clin. Pathol. 31:507-520 (1978).
Resultater og diskusjon
Identifikasjon av Shiqella dysenteria
Det var mulig å identifisere 10^/ml og mer S_;_ dysenteria (Fig. 7) med mikrotiterplate ELISA når bakteriene i vann-prøven ble inkubert ved romtemperatur i 3 timer. Dette nivå er litt høyere enn infeksjonsdosen som er 10 4 til 10 9/ml. For å forbedre sensitiviteten og eventuelt oppnå det lavere nivå
(10<4>/ml) ble rør-ELISA brukt.
Det var mulig å identifisere lavere nivåer av S_^ dysenteria ved rør-ELISA (fig. 8) sammenlignet med mikrotiterplate ELISA (fig. 7) ettersom rør-ELISA er en anriknings- og selek-sjonsmetode (Sandstrom, G. og Wolf-Watz, H.: Duct-ELISA. A manner to identify low contents Francisella tularensis. FOA rapport C 40202-B3 (1984). Man ser også fra figur 8 at denne teknikken har en større variasjon mellom de inngående verdier enn mikrotiterplate ELISA (figur 7). Dette skyldes sannsynlig-vis at antistoffene i forsøket ikke har den høyeste spesifitet. Bakterieproduktene må renses og brukes som et immunogen for å oppnå en så høy spesifitet som mulig. Rensing av bakterie-produkter fra Francisella tularensis (Sandstrom, G., Tarnvik, A., Wolf-Warz, H., og Lofgren, S.: Antigen from Francisella tularensis: Nonidentity between determinants participating in cell-mediated and humoral reactions. Infect. Immun. 7:101-106
(1984), brukt som et immunogen er med hell blitt brukt i rør-ELISA (Sandstrom, G., og Wolf-Watz, H.: Duct-ELISA. A manner to identify low contents Francisella tularensis. FOA rapport C 40202-B3 (1984). Det er ganske sannsynlig at det er mulig
å identifisere bakterier på et nivå med den laveste infeksjons-dose med disse forbedringer.
Identifikasjon av Shiqella dysenteria i kontaminerte vannprøver
Når prøver tas av vann med forskjellige kvaliteter, kan problemer med kontaminanter også oppstå. Det er blitt vist at rør-ELISA kan brukes til å overvinne disse problemer (Sandstrom, G., og Wolf-Watz, H.: Duct-ELISA. A manner to identify low contents Francisella tularensis. FOA rapport C 40202-B3.
Når vannprøver ble kontaminert med P_;_ aeruginosa, E. coli og
S. typhimurium og identifikasjon av S^ dysenteriae ble foretatt med mikrotiterplate ELISA og rør-ELISA, viste det seg å være fordelaktig å bruke rør-ELISA (fig. 9). Også i dette hen-seende kunne en selektiv anrikning av bakterier i rør-ELISA systemet registreres.
Identifikasjon av Salmonella typhimurium
For å vise muligheten til å identifisere andre bakterier
i vann ble S_. typhimurium prøvet. Det var mulig å anrike og identifisere mer enn 10 ganger lavere nivåer ved rør-ELISA sammenlignet med mikrotiterplate ELISA (figur 10).
Claims (11)
1. Fremgangsmåte for å konsentrere og påvise biologiske substanser med affinitetsegenskaper, karakterisert ved at en flytende prove inneholdende substansen som skal påvises, hvilken substans viser affinitet overfor en annen substans, i en strøm passerer en fast overflate til hvilken overflate den andre substans, til hvilken den første substans som skal påvises viser affinitet, er bundet, slik at den oppnås en anrikning av substansen som skal påvises, og i forhold til væskevolumet i kontakt med den aktive overflate passerer et mange ganger større væskevolum overflaten, hvoretter det dannede komplekset, på nevnte faste overflate, av den første substansen som skal påvises og substansen hvortil den første substansen har affinitet, markeres og avleses.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at substansen som skal påvises og substansen til hvilken den første substans viser affinitet, består av antigen-antistoff, DNA-DNA, DNA-RNA, RNA-RNA, lektinreseptor og andre ligand-reseptorkombinasjoner.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at strømmen frembringes av en pumpe.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at strømmen uten å resirkuleres passerer den faste, aktive overflate.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at strømmen resirkuleres.
6. Fremgangsmåte ifølge et av kravene 1 til 5, karakterisert ved at strømningshastigheten fastlegges under hensyntagen til størrelsen av molekylet som skal påvises.
7. Anordning for påvisning av biologiske substanser med affinitetsegenskaper,
karakterisert ved en strøm over en fast overflate av en væskeprøve inneholdende substansen som skal påvises, hvilken viser affinitet overfor en annen substans, hvilken sistnevnte er bundet til den faste overflate, hvorved substansen som skal påvises anrikes.
8. Anordning ifølge krav 7,
karakterisert ved at den faste overflate er hydrofob.
9. Anordning ifølge krav 7,
karakterisert ved at strømmen er frembragt av en pumpe.
10. Anordning ifølge krav 7 og 8, karakterisert ved at den faste overflate består av et polymert materiale, f.eks. glass, plastmateriale, metall eller silikon.
11. Anordning ifølge et av kravene 7, 8 og 9, karakterisert ved at den faste overflate består av et fleksibelt plastrør.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8400374A SE446229B (sv) | 1984-01-25 | 1984-01-25 | Sett och anordning for detektering av en analyt i ett prov som bringas att passera en yta till vilken bundits ett emne med specifik affinitet till analyten |
| PCT/SE1985/000026 WO1985003355A1 (en) | 1984-01-25 | 1985-01-23 | A method of concentrating and detecting biomolecules and -cells and a means therefore |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO853749L NO853749L (no) | 1985-09-24 |
| NO166258B true NO166258B (no) | 1991-03-11 |
| NO166258C NO166258C (no) | 1991-06-19 |
Family
ID=20354456
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO85853749A NO166258C (no) | 1984-01-25 | 1985-09-24 | Fremgangsmaate for konsentrering og paavisning av biomolekyler og -celler og en anordning for dette. |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4822732A (no) |
| EP (1) | EP0153283B1 (no) |
| JP (1) | JPS61501226A (no) |
| AT (1) | ATE53912T1 (no) |
| AU (1) | AU589890B2 (no) |
| CA (1) | CA1254132A (no) |
| DE (1) | DE3577478D1 (no) |
| DK (1) | DK432485A (no) |
| ES (1) | ES8607555A1 (no) |
| FI (1) | FI82986C (no) |
| IL (1) | IL74144A (no) |
| NO (1) | NO166258C (no) |
| SE (1) | SE446229B (no) |
| WO (1) | WO1985003355A1 (no) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5003988A (en) * | 1989-06-21 | 1991-04-02 | La Mina Ltd. | Modular multiple fluid sample preparation assembly |
| AU6847890A (en) * | 1990-01-19 | 1991-07-25 | Promega Corporation | Immunospecific and bioluminescent assay of cellular atp |
| US5679535A (en) * | 1992-03-05 | 1997-10-21 | University Collge Dublin | Apparatus, kit and method for the collection and determination of environmental antigens |
| ATE123151T1 (de) * | 1992-10-21 | 1995-06-15 | Edith Dr Dr Huland | Verfahren zur quantitativen bestimmung von krankheitsspezifischen antigenen und vorrichtung zur durchführung des verfahrens. |
| US5731157A (en) * | 1993-12-30 | 1998-03-24 | The Procter And Gamble Company | Two-site allergen immunoassay |
| US6194222B1 (en) * | 1998-01-05 | 2001-02-27 | Biosite Diagnostics, Inc. | Methods for monitoring the status of assays and immunoassays |
| US7713703B1 (en) | 2000-11-13 | 2010-05-11 | Biosite, Inc. | Methods for monitoring the status of assays and immunoassays |
| DE202004008808U1 (de) * | 2003-06-04 | 2004-09-09 | Inverness Medical Switzerland Gmbh | Flussabtasten zur Bestimmung von Assayergebnissen |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB157264A (en) * | 1915-03-11 | 1922-07-10 | Hermann Plauson | Improvements in the conversions of atmospheric electric energy |
| US3896217A (en) * | 1973-03-19 | 1975-07-22 | Summa Corp | Method and apparatus for radioimmunoassay with regeneration of immunoadsorbent |
| US3950134A (en) * | 1974-09-20 | 1976-04-13 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Assay machine and method |
| US4036946A (en) * | 1975-10-20 | 1977-07-19 | Marcos Kleinerman | Immunofluorometric method for measuring minute quantities of antigens, antibodies and other substances |
| DE2755689A1 (de) * | 1976-12-16 | 1978-06-22 | Millipore Corp | Verfahren zur bestimmung der anwesenheit einer komponente einer immunchemischen reaktion und diagnostisches immunchemisches testmaterial zur durchfuehrung des verfahrens |
| FR2389134A1 (fr) * | 1977-04-29 | 1978-11-24 | Seroa | Procede pour la mise en oeuvre de reactions et analyses chimiques |
| JPS56145222A (en) * | 1980-04-28 | 1981-11-11 | Toshiyuki Hamaoka | Improved antibody and its preparation |
| US4366241A (en) * | 1980-08-07 | 1982-12-28 | Syva Company | Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays |
| FR2498331A1 (fr) * | 1981-01-20 | 1982-07-23 | Kadouche Jean | Recipient reactif pour analyse notamment immunologique |
| SE430900B (sv) * | 1981-06-04 | 1983-12-19 | Bo Gustav Mattiasson | Forfarande for bestemning av biokemiska data for mikroorganismer eller encelliga organismer |
| NZ201901A (en) * | 1981-09-25 | 1986-11-12 | Commw Serum Lab Commission | An apparatus suitable for performing automated heterogeneous immunoassays in a plurality of samples |
| DE3145007A1 (de) * | 1981-11-12 | 1983-05-19 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V., 3400 Göttingen | Immobilisierte biologisch aktive substanzen und ihre verwendung |
| US4693985A (en) * | 1984-08-21 | 1987-09-15 | Pall Corporation | Methods of concentrating ligands and active membranes used therefor |
| DE10154186C1 (de) * | 2001-11-05 | 2003-06-12 | Schukra Europa Gmbh | Vorrichtung zur Verstellung einer Sitzkomponente |
-
1984
- 1984-01-25 SE SE8400374A patent/SE446229B/sv not_active IP Right Cessation
-
1985
- 1985-01-16 AT AT85850016T patent/ATE53912T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-01-16 EP EP85850016A patent/EP0153283B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-01-16 DE DE8585850016T patent/DE3577478D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-01-23 IL IL74144A patent/IL74144A/xx unknown
- 1985-01-23 JP JP60500491A patent/JPS61501226A/ja active Pending
- 1985-01-23 AU AU38825/85A patent/AU589890B2/en not_active Ceased
- 1985-01-23 WO PCT/SE1985/000026 patent/WO1985003355A1/en active IP Right Grant
- 1985-01-23 US US06/779,775 patent/US4822732A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-01-24 CA CA000472727A patent/CA1254132A/en not_active Expired
- 1985-01-24 ES ES539813A patent/ES8607555A1/es not_active Expired
- 1985-09-24 NO NO85853749A patent/NO166258C/no unknown
- 1985-09-24 DK DK432485A patent/DK432485A/da not_active Application Discontinuation
-
1986
- 1986-03-21 FI FI861205A patent/FI82986C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE8400374D0 (sv) | 1984-01-25 |
| DK432485D0 (da) | 1985-09-24 |
| ES539813A0 (es) | 1986-05-16 |
| EP0153283B1 (en) | 1990-05-02 |
| JPS61501226A (ja) | 1986-06-19 |
| US4822732A (en) | 1989-04-18 |
| FI861205A (fi) | 1986-03-21 |
| FI82986C (fi) | 1991-05-10 |
| FI82986B (fi) | 1991-01-31 |
| DE3577478D1 (de) | 1990-06-07 |
| AU3882585A (en) | 1985-08-09 |
| SE8400374L (sv) | 1985-07-26 |
| DK432485A (da) | 1985-09-24 |
| ES8607555A1 (es) | 1986-05-16 |
| SE446229B (sv) | 1986-08-18 |
| IL74144A0 (en) | 1985-04-30 |
| NO853749L (no) | 1985-09-24 |
| CA1254132A (en) | 1989-05-16 |
| EP0153283A1 (en) | 1985-08-28 |
| ATE53912T1 (de) | 1990-06-15 |
| NO166258C (no) | 1991-06-19 |
| WO1985003355A1 (en) | 1985-08-01 |
| FI861205A0 (fi) | 1986-03-21 |
| IL74144A (en) | 1989-08-15 |
| AU589890B2 (en) | 1989-10-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4294817A (en) | Method of fluoro immunoassay | |
| Abdillahi et al. | Whole-cell ELISA for typing Neisseria meningitidis with monoclonal antibodies | |
| US6916626B1 (en) | Detection of Candida | |
| EP0281327B1 (en) | Immunoreactive reagent, method of preparation and its use to determine an immunoreactive species | |
| AU2002248996A1 (en) | Detection of candida | |
| US5393658A (en) | Immunoassay method for the rapid identification of detergent treated antigens | |
| Honda et al. | Enzyme-linked immunosorbent assays for detection of thermostable direct hemolysin of Vibrio parahaemolyticus | |
| Tang et al. | Broad-spectrum enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Legionella soluble antigens | |
| Libby et al. | Detection of Neisseria meningitidis and Yersinia pestis with a novel silicon-based sensor | |
| CA2060232A1 (en) | Assay for lyme disease | |
| CN1313771A (zh) | 使用纯化的抗原特异性抗体检测军团菌属细菌的方法 | |
| Herbrink et al. | Human serum antibody response in Campylobacter jejuni enteritis as measured by enzyme-linked immunosorbent assay | |
| NO166258B (no) | Fremgangsmaate for konsentrering og paavisning av biomolekyler og -celler og en anordning for dette. | |
| Van Aert et al. | A comparative study of ELISA and other methods for the detection of Brucella antibodies in bovine sera | |
| US10288610B2 (en) | Vitro assays for detecting Salmonella enterica serotype typhi | |
| US4178359A (en) | Immunoassay method | |
| US4677080A (en) | Rapid particle agglutination test for enterotoxigenic bacteria | |
| Ziola et al. | Porcine C1q and the solid-phase immunoassay of human immune complexes | |
| Katz | A&A, this volume | |
| CA1291032C (en) | Method of detecting urinary tract infection or inflammation | |
| EP0134868A1 (en) | Unicellular organisms activated by glutaraldehyde as solid carriers for sensitizing agents and uses of sensitized unicellular organisms | |
| Sandström et al. | Duct ELISA for detection of bacteria in fluid samples | |
| Olsvik et al. | A sensitive ELISA method for protein A detection | |
| Sippel et al. | Detection of Neisseria meningitidis cell envelope antigen by enzyme-linked immunosorbent assay in patients with meningococcal disease | |
| JP2004521325A (ja) | 標識されたレクチンを使用する炭水化物のための貫流膜アッセイ |