NO161078B - Testsett for bestemmelse av mikroorganismen streptococcusmutans i menneskesaliva. - Google Patents

Testsett for bestemmelse av mikroorganismen streptococcusmutans i menneskesaliva. Download PDF

Info

Publication number
NO161078B
NO161078B NO821376A NO821376A NO161078B NO 161078 B NO161078 B NO 161078B NO 821376 A NO821376 A NO 821376A NO 821376 A NO821376 A NO 821376A NO 161078 B NO161078 B NO 161078B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
substrate
bacitracin
test set
culture medium
msb
Prior art date
Application number
NO821376A
Other languages
English (en)
Other versions
NO821376L (no
NO161078C (no
Inventor
Takashi Matsukubo
Kosei Ohta
Mitsuharu Takeuchi
Ichiro Takazoe
Hitoshi Saito
Masayuki Tanimura
Kiyoyuki Matsumoto
Kuniaki Asami
Original Assignee
Showa Pharm Chem Ind
Ichiro Takazoe
Mitsuharu Takeuchi
Kosei Ohta
Takashi Matsukubo
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Showa Pharm Chem Ind, Ichiro Takazoe, Mitsuharu Takeuchi, Kosei Ohta, Takashi Matsukubo filed Critical Showa Pharm Chem Ind
Publication of NO821376L publication Critical patent/NO821376L/no
Publication of NO161078B publication Critical patent/NO161078B/no
Publication of NO161078C publication Critical patent/NO161078C/no

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/045Culture media therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

Den humane tannråte er en såkalt flerfaktorsykdom som bevirkes av mange faktorer som er sammenkoblet på en komplisert måte. En av hovedfaktorene er at dentalt plakk dannes fra spytt og sucrose som tas av streptococgi som all-tid er til stede i munnen og tannråte bevirkes lett av dette dentale plakk. Som de streptococci som syntetiserer dette dentale plakker det kjent Streptococcus sanguis, Streptococcus mutans og Streptococcus salivarius. Blant disse streptococci er det Streptococcus mutans som syntetiserer vann-uløselige polysaccharider og danner dentalt plakk som frem-kaller dental karies. For å forhindre dental karies er det følgelig viktig å kjenne til betingelsene i munnen, spesielt mengden av Streptococcus mutans tilstedeværende i munnen.
For dette formål har det tidligere vært utviklet og foreslått en metode for måling av den dentale kariesaktivitet (se japansk ålment tilgjengelig patentsøknad 55260/1980).
"MSB" betyr "Mitis Salivarius-buljong ikke inneholdende bacitracin", og uttrykkene "MSB-buljong (MSBB)" betyr "Mitis Salivarius-buljong inneholdende bacitracin". MSBB har samme sammensetning som MSB-agar (Mitis Salivarius Bacitracin Agar) (MSBA) bortsett fra utelukkelsen av agar. MSBA er beskrevet i Gold et al., Arch Oral Biol. 18, 1357-1364, 1973. MSB-buljongen som anvendes ved denne konvensjonelle metode
har imidlertid flere mangler som beskrevet i det etter-følgende. Nærmere bestemt er det funnet at sammensetningen av MSB-buljongen forandres med tiden etter fremstilling av MSB-buljongen og formeringen av Streptococcus mutans (heretter angitt som "dental karies patogen") og inhiberingen av veksten av andre bakterier blir usikker. Det har blitt an-slått at denne mangel er basert på sammensetningen av MSB-bul jongen og er derfor uunngåelig. Grunnen er at det er umulig å lagre en antibiotisk substans slik som bacitracin ved normale temperaturer i dyrkningsmediet i lang tid uten reduksjon av den antibiotiske aktivitet. Det er kjent innen faget at da MSB-buljong inneholder bacitracin, må buljongen anvendes innen en uke selv om den lagres ved 4°C etter at den er fremstilt [T. Matsukubo et al., Caries Research, 15,
40-45 (1981); O.G. Gold et al., Archs oral Biol., 18, 1357-1364 (1973)]. Følgelig fremstilles frisk MSB-buljong når testen;utføres. I klinisk undersøkelse er det derfor prak-tisk tålt umulig for en tannlege å anvende den ovenfor angitte metode under anvendelse av denne MSB-buljong for diag-nose,
Foreliggende oppfinnelse angår et testsett for bestemmelse av innholdet av mikroorganismen Streptococcus mutans i menneskesaliva, hvilket testsett er kjennetegnet ved at det inneholder
a) et gjennomsiktig kar i hvilket er forseglet hoved-
i
næringskildene i MBS-ekstrakt, hvilket er et væskeformig dyrkningsmedium for mikroorganismen Streptococcus mutans, hvorved hovednæringskildene er i og for seg kjente og omfatter 10 g tryptose, 10 g pepton, 1 g glucose, 200 g saccharose, 4 g dikaliumfosfat og 1000 ml vann; og
b) et underlag for bacitracin samt et underlag for tilsetningsreagens, hvilke underlag er av papir eller plast
og på hvilke er anbragt på forhånd bestemte mengder av bacitracin og tilsetningsreagenser i tørr tilstand, hvorved
underlaget for tilsetningsreagens utgjøres av en kombinasjon av underlag inneholdende' pr. 1000 ml dyrkningsmedium, 0,01 g kaliumtelluritt, 0,0008 g av fargeindikatoren krystallfiolett og 0,075 g av.fargeindikatoren trypanblå, og hvor underlaget for bacitracin inneholder 200 U bacitracin.
Man har foretatt forsøk i den hensikt å tilveiebringe en forbedret enkel MSB-buljong med samme kapasitet som den opprinnelige MSB-buljong, som kan hensiktsmessig anvendes av en praktiserende tannlege i en vanlig klinisk under-søkelse og som kan fremstilles til en lav kostnad. Sammensetningen av MSB-buljongen og dyrkningsmediet er angitt i etterfølgende tabell 1.
Man har omhyggelig undersøkt gjensidige virkninger av de respektive bestanddeler i MSB-buljongen, og man har som et resultat av dette tilveiebragt et testsett.
Et væskeformig basalmedium med en sammensetning hvor bacitracin (heretter angitt som "BA"), kaliumtelluritt (heretter angitt som "TE") og trypanblått (heretter angitt som "TB") og/eller krystallfiolett er blitt fjernet, fremstilles, og dette væskeformige basalmedium steriliseres og lagres aseptisk. Separat fremstilles BA, TE og TB uavhengig som additivreagenser i tørr tilstand på en egnet bærer,
og den additivreagensrholdige bærer steriliseres og lagres aseptisk. Når testen skal utføres, oppløser tannlegen tilleggsreagensene i det væskeformige basalmedium sterilt under dannelse av en MSB-buljong. I dette tilfelle oppløses
TB, et farvestoff som er inneholdt i bæreren i det væskeformige basalmedium for å; farve mediet. Ved denne farving kan den 'fullstendige oppløsning av de andre bestanddeler fastslås;. Fra resultatene av utførte forsøk er det funnet at det ovenfor angitte testsett er sammenlignbar med konven-sjonell MSB-buljong som et klinisk medium for selektiv dyrkning av dental kariespatogen i spytt (se tabell 2), og selv når dette underkastes en 6 måneders halverings-tidstest, var kapasiteten! ikke nedsatt (se tabell 3) .
i
Merk
Angivelsen "-" indikerer ingen formering av det dentale kariespatogen, og hver av angivelsene "+" til "+++" indikerer graden av formering av det dentale kariespatogen, i relasjon til antall celler av bakterier i spytt. Testmetode:
0,1 ml av hvert av de spytt som ble oppsamlet fra 10 friske voksne personer, ble tilsatt til 2 ml av den van-lige MSB-buljong og til |en prøve av dyrkningsmediet beskrevet i eksempel 2 og dyrket ved 37°C i 24 timer etter rutineprosedyrer. Graden av formering ble bestemt ved visuell undersøkelse ifølge standardpraksis innen området.
Testmetode:
Dyrkningsmedium: Prøveprodukt nr. 5402 fremstilt som be skrevet i eksempel 1.
Holdbarhetstest: Prøveprodukt nr. 5402 ble lagret i en inkubator opprettholdt ved 40°C. En del av produktet ble tatt ut etter et intervall på 2 måneder, og umiddelbart lagret i en fryser opprettholdt ved en temperatur under
-5°C.
Kontroll: Prøveprodukt nr. 5402 ble lagret i en fryser opprettholdt ved en temperatur på under t5°C direkte uten holdbarhetstesten.
Prøve (friskt
spytt): Spytt fra en 23 år gammel frisk mann hvor høy grad av kariesaktivitet var blitt funnet ved en preliminær test.
Prosedyre: 0,1 ml av prøven ble tilsatt til dyrkningsmediet (kontrolldyrkningsmedium eller dyrkningsmedium underkastet holdbarhetstesten) , og ble dyrket ved 37°C i 24 timer etter rutineprosedyrer.
Ved utøvelse av oppfinnelsen virker karet hvori det væskeformige basalmedium er inneholdt, også som en dyrk-ningsanordning, og derfor kan et farveløst transparent glass-kår med en indre diameter på ca. 10 mm, f.eks. en ampulle,
en rørformet flaske eller et testrør, med fordel anvendes. Tilleggsreagensene, dvs. BA, TE og TB, frysetørres uavhengig eller sprees på et papir slik som et filterpapir. I hvert tilfelle elimineres løsningsmiddel så meget som mulig for å
oppnå et produkt ifølge oppfinnelsen.
Oppfinnelsen vil bli beskrevet nærmere detaljert i de etterfølgende eksempler., Det væskeformige basalmedium Vist i tabell 1, ble anvendt i disse eksempler.
Eksempel 1
(A) En farveløs transparent glassampulle med en indre diameter på 12 mm og en diameter på 8 mm i umiddelbar nærhet av åpningen ble fylt med 2 ml av det væskeformige basalmedium, og glassampullen ble forseglet med en gummipropp. Steriliseringen ble utført<.>ved 115°C i 15 minutter. (B) Et sirkulært filterpapir med en tykkelse på 0,8 mm og en diameter på 8 mm ble anvendt som bærer for tilleggsreagensene. Tilleggsreagehsene BA, TE og TB ble uavhengig <p>ppløst og innbefattet i bæreren som beskrevet i det etter-følgende, og bæreren ble tørket under redusert trykk og forseglet i et kar. 1) BA;
En løsning av 0,4 U bacitracin i ca. 0,002 ml vann ble helt på bæreren under anvendelse av en mikropipette.
2) TE:
En løsning av 0,4 mg kaliumtelluritt i ca. 0,002 ml vann ble helt på en forskjellig bærer ved anvendelse av en mikropipette.
3) TB:
En løsning av 0,15 mg trypanblått i ca. 0,002 ml vann ble helt på en forskjellig bærer ved anvendelse av en
• mikropipette.
Når testsettet :skulle anvendes,
ble gummiproppen tatt ut fra karet inneholdende basalmedium som var inneholdt i (A),.og de reagens-holdige bærere erholdt i (B-l), (B-2) og (B-3) ble anbrakt i basalmediet (A). Etter 30 sekunder ble bærerne tatt ut, og 0,1 ml spytt fra pasienten ble tilsatt til dyrkningsmediet. Deretter ble karet forseglet igjen med gummiproppen, og dyrkningen ble utført ved 37°C i 24 timer.
i
Eksempel 2
(A) En 3 ml ampulle med en indre diameter på ca. 9,5 mm og en åpningsdiameter på 4 mm (diameteren av den brutte
flate av den tubulære topp når ampullen ble brutt) ble til-ført 2 ml av det væskeformige basalmedium, og toppen av ampullen ble smelteforseglet, og sterilisering ble utført ved 115°C i 1.5 minutter.
(B) Et kvadratisk filterpapir med en tykkelse på 0,5 mm og sider på 3,5 mm ble anvendt som bærer. Løsninger av
tilleggsreagenser BA, TE og TB ble uavhengig helt på bærerne på samme måte som beskrevet i (B) i eksempel 1 under dannelse av et produkt.
Når tectsettet skulle anvendes,
ble ampullen (A) brutt, og de reagensholdige papirbærere (B-l), (B-2) og (B-3) ble tilsatt til basalmediet (A) på samme måte som beskrevet i eksempel 1. Deretter ble 0,1 ml spytt fra pasienten tilsatt til mediet, og åpningen ble dekket med en sterilisert aluminiumshatt. Dyrkningen ble utført ved 37°C
i 24 timer.
Eksempel 3
(A) Et basalmedium ble fremstilt på samme måte som beskrevet i (A) i eksempel 1 med det unntak at krystallfiolett
ikke ble-tilsatt. Deretter ble 2 ml av basalmediet innført i et lite glassrør med en indre diameter på ca. 10 mm og en lengde på 60 mm, og åpningen ble dekket med en tett tilpasset polypropylenpropp. Sterilisering ble utført ved 115°C i 15 minutter. (B) 3 tilleggsreagens-holdige kvadratiske filterpapir-bærere med en tykkelse på 0,5 mm og sider på 3,5 mm ble fremstilt på samme måte som beskrevet i eksempel 2, og disse ble festet på linje på et transparent plastikkark med en vidde på 3,5 mm, en lengde på 50 mm og en tykkelse på 0,3 mm under anvendelse av et egnet klebemiddel. I< dette tilfelle var de tre bærere ikke adskilt fra hverandre, men kunne kombineres, og kunne derfor håndteres meget enkelt.
BA- og TE-bærerne ble fremstilt på samme måte som beskrevet i eksempel 2, men TB-bæreren ble fremstilt som beskrevet i 3) i det etterfølgende.
3) TB:
En blandet farvematerialløsning av 0,15 mg trypanblått og 0,0016 mg krystallfiolett i ca. 0,002 ml vann ble helt på bæreren (filterpapir) ved anvendelse av en mikropipette .

Claims (2)

1. Testsett for bestemmelse av innholdet av mikroorganismen Streptococcus mutans i menneskesaliva, karakterisert ved at det inneholder a) ét gjennomsiktig kar i hvilket er forseglet hovednæringskildene i MSB-ekstrakt, hvilket er et væskeformig dyrkningsmedium for mikroorganismen Streptococcus mutans, hvorved hovednæringskildene er i og for seg kjente og omfatter 10 g tryptose, 10 g pepton, 1 g glucose, 200 g saccharose, 4 g dikaliumfosfat og 1000 ml vann; og b) et underlag for bacitracin samt et underlag for tilsetningsreagens, hvilke underlag er av papir eller plast og på hvilke er anbragt på forhånd bestemte mengder av bacitracin og tilsetningsreagenser i tørr tilstand, hvorved underlaget for tilsetningsreagens utgjøres av en kombinasjon av underlag inneholdende pr. 1000 ml dyrkningsmedium, 0,01 g kaliumtelluritt, 0,00.05 g av f argeindikatoren krystallf iolett og 0,075 g av fargeindikatoren trypanblå, og hvor underlaget for bacitracin inneholder 200 U bacitracin.
2. Testsett ifølge krav 1, karakterisert ved at underlaget for tilsetningsreagens utgjøres av en plate, folie, stav, kule eller kubus som består av papir, papirmasse, syntetiske fibre, glassfiber, tekstil eller en vannabsorberende plast.
NO821376A 1981-05-15 1982-04-27 Testsett for bestemmelse av mikroorganismen streptococcusmutans i menneskesaliva. NO161078C (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP56072920A JPS57189695A (en) 1981-05-15 1981-05-15 Culture medium composition

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO821376L NO821376L (no) 1982-11-16
NO161078B true NO161078B (no) 1989-03-20
NO161078C NO161078C (no) 1989-06-28

Family

ID=13503264

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO821376A NO161078C (no) 1981-05-15 1982-04-27 Testsett for bestemmelse av mikroorganismen streptococcusmutans i menneskesaliva.

Country Status (6)

Country Link
EP (1) EP0065137B1 (no)
JP (1) JPS57189695A (no)
DE (1) DE3266322D1 (no)
DK (1) DK206482A (no)
FI (1) FI69315C (no)
NO (1) NO161078C (no)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH683616A5 (de) * 1984-06-18 1994-04-15 Univ Michigan Diagnostisches Testverfahren zum Nachweis von oralen pathogenen Bakteriengemischen.
US4692407A (en) * 1985-01-31 1987-09-08 Forsyth Dental Infirmary For Children Method for the determination of Streptococcus mutans
US4976951A (en) * 1985-08-28 1990-12-11 Melvyn Rosenberg Dental caries diagnostic and localization technique
FR2708286B1 (fr) * 1993-07-28 1995-10-20 Rambach Alain Procédé d'identification de microorganismes avec au moins deux chromogènes.
FR2708285B1 (fr) * 1993-07-28 1995-10-20 Rambach Alain Procédé d'identification de microorganismes avec un milieu supplémenté en hydrate de carbone.
DE19647545A1 (de) * 1996-11-16 1998-05-20 M & M Dental Medizin Gmbh Verwendung zum Bestimmen des Kariesrisikos und dazu besonders geeignete Testeinrichtung
US6246553B1 (en) 1998-12-02 2001-06-12 International Business Machines Corporation Shielded magnetoresistive head with charge clamp

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA955163A (en) * 1971-03-16 1974-09-24 Miles Laboratories, Inc. Testing device for microorganisms
US3902969A (en) * 1973-07-16 1975-09-02 Forsyth Dental Infirmary Method for the identification of {i streptococcus mutans
JPS54132292A (en) * 1978-03-31 1979-10-15 Eiken Kizai Kk Bacteria distinguishing sheet and use
JPS5581593A (en) * 1978-10-18 1980-06-19 American Home Prod Rapid assay method of microorganism and reagent and apparatus
JPS56120623A (en) * 1979-05-21 1981-09-22 Sunstar Inc Composition for testing caries activity of teeth
JPS5635995A (en) * 1979-08-31 1981-04-08 Sankin Kogyo Kk Composition for testing activity of dental caries

Also Published As

Publication number Publication date
JPS57189695A (en) 1982-11-22
FI69315B (fi) 1985-09-30
FI69315C (fi) 1986-01-10
DK206482A (da) 1982-11-16
NO821376L (no) 1982-11-16
FI821676A0 (fi) 1982-05-12
NO161078C (no) 1989-06-28
DE3266322D1 (en) 1985-10-24
EP0065137B1 (en) 1985-09-18
JPH036798B2 (no) 1991-01-30
EP0065137A1 (en) 1982-11-24
FI821676L (fi) 1982-10-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Magnusson et al. Preparation of purified tuberculin RT 23
JPS5832879B2 (ja) コウセイブツシツノ ソンザイノ ソクテイホウ
EP0190893A2 (en) Test kit and method for the determination of streptococcus mutans
Olczak et al. Evaluation of the sealing ability of three obturation techniques using a glucose leakage test
NO161078B (no) Testsett for bestemmelse av mikroorganismen streptococcusmutans i menneskesaliva.
Knox et al. Bacterial tetrathionase: adaptation without demonstrable cell growth: A report to the medical research council
Fildes Tetanus.—VIII. The Positive Limit of Oxidation-Reduction Potential Required for the Germination of Spores of B. tetani in vitro
US9410179B2 (en) Diagnostic method for the determination of Helicobacter pylori
Barron The effect of anaerobiosis on the eggs and sperm of sea urchin, starfish and Nereis and fertilization under anaerobic conditions
US20070042454A1 (en) Device and method of detecting streptococcal mutans
Sternberg A text-book of bacteriology
JP3459877B2 (ja) 培 地
Hewlett A Manual of bacteriology
Biswas Chemical nature of nucleic acids in Cyanophyceae
Hormaeche et al. Laboratory diagnosis of Shigella and Salmonella infections
Harris et al. Diagnostic Procedures and Reagents: Technics for the Laboratory Diagnosis and Control of the Communicable Diseases
SU1440925A1 (ru) Устройство дл бактериологического анализа крови
Appleton et al. A Laboratory Guide in Bacteriology Particularly for Students in Dentistry
Kelser Manual of veterinary bacteriology
RU2041947C1 (ru) Питательная среда для выделения дифтерийного микроба
Jenkins Notes on cultivation of the gonococcus
Hewlett A Manual of Bacteriology, Clinical and Applied
Corper et al. Submerged Suspended Liquid Culture of M. Tuberculosis and Other Acid-Fast Bacilli Under the Influence of Physical and Chemical Factors
Moore et al. Laboratory manual in general and pathogenic bacteriology and immunity
RU2027994C1 (ru) Способ диагностики бактериального сепсиса у детей