NO144672B - BIOLOGICALLY ACTIVE MATERIAL AND PROCEDURE FOR ITS MANUFACTURING - Google Patents

BIOLOGICALLY ACTIVE MATERIAL AND PROCEDURE FOR ITS MANUFACTURING Download PDF

Info

Publication number
NO144672B
NO144672B NO751599A NO751599A NO144672B NO 144672 B NO144672 B NO 144672B NO 751599 A NO751599 A NO 751599A NO 751599 A NO751599 A NO 751599A NO 144672 B NO144672 B NO 144672B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
biologically active
polyhydroxymethylene
water
bound
carrier
Prior art date
Application number
NO751599A
Other languages
Norwegian (no)
Other versions
NO144672C (en
NO751599L (en
Inventor
Rudolf Schmidtberger
Heinrich Huemer
Original Assignee
Behringwerke Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE19742421789 external-priority patent/DE2421789C3/en
Application filed by Behringwerke Ag filed Critical Behringwerke Ag
Publication of NO751599L publication Critical patent/NO751599L/no
Publication of NO144672B publication Critical patent/NO144672B/en
Publication of NO144672C publication Critical patent/NO144672C/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Clostridium (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/089—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6429—Thrombin (3.4.21.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01018—Exo-alpha-sialidase (3.2.1.18), i.e. trans-sialidase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21005—Thrombin (3.4.21.5)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
  • Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)

Description

I de siste år har det mer og mer funnet an- . vendelse en ny teknikk innen de biokjemiske arbeidsmetoder, hvis primære trekk består i å anvende affiniteten av bærerbundne, biologisk aktive stoffer til reaksjoner som skal gjennomføres selektivt. In recent years, it has more and more found an- . turn a new technique within the biochemical working methods, whose primary feature consists in applying the affinity of carrier-bound, biologically active substances to reactions to be carried out selectively.

Over en spesifikk kompleksdannelse av det bærerbundne stoff med et annet som foreligger i en blanding, kan angjeldende stoff fjernes fra blandingen og eventuelt deretter isoleres ved desorbsjon. Upon a specific complex formation of the carrier-bound substance with another present in a mixture, the substance in question can be removed from the mixture and possibly then isolated by desorption.

Bærerbundne enzymer byr den fordel å gjennom-føre stoffomdannelser i preparative, kontinuerlige prosesser og å oppnå reaksjonsproduktene enzymfrie. I den biokjemiske enzymatiske analytikk står vannuoppløselige enzymer som flere ganger anvendbare reagenser til disposisjon. Carrier-bound enzymes offer the advantage of carrying out substance conversions in preparative, continuous processes and of obtaining enzyme-free reaction products. In biochemical enzymatic analysis, water-insoluble enzymes are available as repeatedly usable reagents.

På grunn av enzymenes egenskap til å ha affini-teter ikke bare overfor substratene, men også overfor de spesifikke inhibitorer har utvinningen av enzyminhibitorer ved hjelp av affinitetskromatografi på bærerbundne enzymer vist seg spesielt gunstige. På den annen side muliggjør bindingen av inhibitorer til vannoppløselige matriser den preparative utvinning av de tilsvarende enzymer.. Due to the enzymes' property of having affinities not only towards the substrates, but also towards the specific inhibitors, the recovery of enzyme inhibitors by means of affinity chromatography on carrier-bound enzymes has proven particularly beneficial. On the other hand, the binding of inhibitors to water-soluble matrices enables the preparative extraction of the corresponding enzymes.

Som såkalte immunadsorbentier bindes antigener eller antilegemer på vannuoppløselige matriser og muliggjør deretter isoleringen av de tilsvarende antilegemer resp. antigener. As so-called immunoadsorbents, antigens or antibodies are bound to water-insoluble matrices and then enable the isolation of the corresponding antibodies or antigens.

Som biologisk aktive stoffer forstås tilsvarende til de foregående anførsler in vivo og in vitro virksomme naturlige og kunstig fremstilte stoffer, som i videste betyd-ning kan betegnes som enzymer, aktivatorer, inhibitorer, antigener eller antilegemer, vitaminer og hormoner. Disse biologisk aktive stoffer kan nevnes effektorer, da de danner virkningsprinsippene i de vannuoppløselige systemer. As biologically active substances are understood corresponding to the previous statements in vivo and in vitro active natural and artificially produced substances, which in the broadest sense can be described as enzymes, activators, inhibitors, antigens or antibodies, vitamins and hormones. These biologically active substances can be called effectors, as they form the principles of action in the water-insoluble systems.

De fleste av de hittil omtalte bærerbundne effektorer er vesentlig mer stabile enn de tilsvarende stoffer i oppløsning. Most of the carrier-bound effectors mentioned so far are significantly more stable than the corresponding substances in solution.

Som bærermaterialer, såkalte matriser, er det fordelaktig bare å anvende slike stoffer som ved siden av uoppløseligheten i vandige systemer har lavest mulig uspesi-fikk adsorbsjon. Hertil må hydrofob, hydrofil og ionisk vekselvirkning mellom matrise og reaksjonsdeltageren .sterkt undertrykkes av effektoren. Med stoffer som ikke er reak-sjonsdeltagere av effektoren bør en binding være utelukket.-De hittil anvendte matriser som bærer for . biologisk aktive stoffer kan oppdeles i de som binder effektorene ved fysikalsk adsorbsjon, dertil hører aktivkull og glassperler og de som med effektoren over en kovalent binding er sammenknyttet med hverandre. Sistnevnte innbefatter vinylpolymere, f.eks. polyakrylsyre, polyakrylsyreamider og amino-, karboksy- eller suifonyl-substituert polystyren, videre cellulose og dens derivater og endelig naturlige og syntetiske polypeptider og proteiner. På grunn av den utlignede vekselvirkning mellom matrise og effektor har anvendelsen av kullhydrater, spesielt cellulose av dekstran, stivelse, agar resp. deres derivater funnet den høyeste ut-bredelse som matrise i vandige systemer, enskjønt også de i disse naturstoffer hyppig inneholder karboksylgrupper på grunn av deres uspesifikke reaksjon er funnet forstyrrende. Dessuten har disse stoffer en relativt liten termisk og kje-misk stabilitet. As carrier materials, so-called matrices, it is advantageous to only use such substances which, in addition to their insolubility in aqueous systems, have the lowest possible non-specific adsorption. To this end, hydrophobic, hydrophilic and ionic interactions between the matrix and the reaction participant must be strongly suppressed by the effector. With substances that are not reaction participants of the effector, a bond should be excluded.-The hitherto used matrices that carry for . biologically active substances can be divided into those that bind the effectors by physical adsorption, which include activated carbon and glass beads, and those that are connected to each other with the effector via a covalent bond. The latter includes vinyl polymers, e.g. polyacrylic acid, polyacrylic acid amides and amino-, carboxy- or suifonyl-substituted polystyrene, further cellulose and its derivatives and finally natural and synthetic polypeptides and proteins. Due to the balanced interaction between matrix and effector, the use of carbohydrates, especially cellulose of dextran, starch, agar resp. their derivatives found the highest prevalence as a matrix in aqueous systems, although even those in these natural substances frequently containing carboxyl groups due to their non-specific reaction have been found to be disruptive. Moreover, these substances have relatively little thermal and chemical stability.

Det er nå funnet at de ulemper som kullhydrat-derivatene har som matriser ved affinitetsavhengige reaksjoner kan overvinnes, når det som matrise anvendes polyhydroksymetylen. It has now been found that the disadvantages that the carbohydrate derivatives have as matrices for affinity-dependent reactions can be overcome when polyhydroxymethylene is used as the matrix.

Oppfinnelsen vedrører biologisk aktivt materiale til anvendelse i affinitetsreaksjoner, idet materialet, er karakterisert ved at det består av The invention relates to biologically active material for use in affinity reactions, as the material is characterized by the fact that it consists of

A) en biologisk aktiv forbindelse som ved en kovalent binding eller over en bro dannet av en eller flere minst bifunksjonelle organiske forbindelser er bundet sammen med B) vannuoppløselig poly(hydroksymetylen). Polyhydroksymetylen er en syntetisk polymer med en gjennomgående karbonkjede. Hvert karbonatom har et hydrogenatom og en hydroksylgruppe. Dets fremstilling og dets egenskaper er blant annet omtalt av N.D. Field, J.R. Schaefgen, J. Polymer Sei., volum 58, 533-543 (1962) og G. Smets, K. Hayashi, J. Polymer Sei., volum 29, 257-274 (1958). Det er fremstillbart ved basisk eller sur hydrolyse av polyvinylenkarbonat. I videste forstand er polyhydroksymetylen å oppfatte som derivat av polyvinylenkarbonat. Bindingen av effektorene til polyhydroksymetylenet kan på den ene side oppnås ved forholdsregler som kommer til anvendelse ved den kovalente sammenknytning av effektorer med hydroksylgruppen, på den annen side ved omsetning av polyvinylenkarbonatet over den eventuelt kjente aminolytiske reaksjon av en cyklokarbonat-ring av polyvinylenkarbonatet med et primært amin, f.eks. ved hexametylendiamin til et over en uretanbinding med en "spacer" eller effektor substituert polyvinylenkarbonat, hvis resterende cyklokarbonatgrupper deretter forsåpes til hydroksylgrupper. A) a biologically active compound which, by means of a covalent bond or via a bridge formed by one or more at least bifunctional organic compounds, is bound together with B) water-insoluble poly(hydroxymethylene). Polyhydroxymethylene is a synthetic polymer with a continuous carbon chain. Each carbon atom has a hydrogen atom and a hydroxyl group. Its manufacture and its properties are, among other things, discussed by N.D. Field, J.R. Schaefgen, J. Polymer Sci., vol. 58, 533-543 (1962) and G. Smets, K. Hayashi, J. Polymer Sci., vol. 29, 257-274 (1958). It can be produced by basic or acidic hydrolysis of polyvinylene carbonate. In the broadest sense, polyhydroxymethylene is to be understood as a derivative of polyvinylene carbonate. The binding of the effectors to the polyhydroxymethylene can be achieved, on the one hand, by precautions that come into use in the covalent linking of effectors with the hydroxyl group, on the other hand, by reacting the polyvinylene carbonate via the optionally known aminolytic reaction of a cyclocarbonate ring of the polyvinylene carbonate with a primary amine, e.g. by hexamethylenediamine to a via a urethane bond with a "spacer" or effector substituted polyvinylene carbonate, whose remaining cyclocarbonate groups are then saponified to hydroxyl groups.

Det er for anvendelsen av produktene spesielt fordelaktig ikke å omsette de biologisk aktive effektorer direkte med polhydroksymetylen, men over en i affinitets-kromatografien som arm eller i engelsk sprog som "spacer" betegnet mellomledd å binde kovalent til matrisen. For the use of the products, it is particularly advantageous not to react the biologically active effectors directly with polyhydroxymethylene, but to covalently bond to the matrix via an intermediary termed in affinity chromatography as an arm or in English as a "spacer".

Spacer-stoffene er for det meste hydrokarbon-skjeletter av lengde rundt 1-2 nm. To funksjonelle ende-grupper av spaceren muliggjør omsetningen såvel med matrisen som også med effektoren, idet det ved omsetning med matrisen under egnede betingelser er anvendbart såvel polyhydroksymetylen som også polyvinylenkarbonat. The spacer substances are mostly hydrocarbon skeletons of around 1-2 nm in length. Two functional end groups of the spacer enable the reaction with the matrix as well as with the effector, as both polyhydroxymethylene and polyvinylene carbonate can be used when reacting with the matrix under suitable conditions.

Oppfinnelsen vedrører videre fremgangsmåter til fremstilling av det ovennevnte biologisk aktivt vannuoppløse-lige produkt, idet fremgangsmåten.er karakterisert ved: A) at poly(hydroksymetylen) bindes kovalent direkte eller over en eller- flere bifunksjonelle organiske forbindelser til et bioiogisk aktivt stoff, The invention further relates to methods for producing the above-mentioned biologically active water-insoluble product, the method being characterized by: A) that poly(hydroxymethylene) is covalently bound directly or via one or more bifunctional organic compounds to a biologically active substance,

eller or

B) at poly(vinylenkarbonat) omsettes med et biologisk aktivt stoff og de resterende cyklokarbonatgrupper hydrolyseres eller C) at poly(vinylenkarbonat) omsettes med en bi-funksjonell organisk forbindelse, de resterende cyklokarbonatgrupper hydrolyseres og at man til den polymere binder kovalent en biologisk aktiv forbindelse. B) that poly(vinylene carbonate) is reacted with a biologically active substance and the remaining cyclocarbonate groups are hydrolysed or C) that poly(vinylene carbonate) is reacted with a bi-functional organic compound, the remaining cyclocarbonate groups are hydrolysed and that a biologically active substance is covalently bound to the polymer connection.

Tilsvarende reaksjonsforløp er .eksempelvis å oppnå ved omsetning av hydroksylgruppene av bæreren med reaktive triaziner, idet en del av triazinets reaktive grupper trer i reaksjon med polyhydroksymetylenforbindelsen, en annen med effektorens aminogruppe. Corresponding reaction processes can, for example, be obtained by reacting the hydroxyl groups of the carrier with reactive triazines, with one part of the triazine's reactive groups reacting with the polyhydroxymethylene compound, another with the amino group of the effector.

Diazoterbare aromatiske aminer, som over en ytterligere reaktiv gruppe kan tre i forbindelse med hydroksylgruppen og bæreren på den ene side muliggjør på den annen side kobling med dertil egnede aktiverte aminosyrer, eksempelvis tyrosin eller histidinresten av proteineffektoren. Diazotizable aromatic amines, which via a further reactive group can come into contact with the hydroxyl group and the carrier on the one hand enable coupling with suitable activated amino acids, for example tyrosine or the histidine residue of the protein effector, on the other hand.

Arylaminogruppeholdige vinylsulfonderivater og svovelsyrehalvestere av 6-hvdroksyetylsulfoner kan bringes til reaksjon med hydroksylgruppen av bæreren. De muliggjør binding av effektoren etter den tidliqere omtalte diazote-ringsreaksjon. Arylamino group-containing vinyl sulfone derivatives and sulfuric acid half-esters of 6-hydroxyethyl sulfones can be reacted with the hydroxyl group of the support. They enable binding of the effector after the previously mentioned diazotization reaction.

En spesiell stabil eterbinding oppstår ved omsetning av polyhydroksymetylenets hydroksylgrupper med ikke ionedannende epoksyder, som minst inneholder 2 reaktive grupper, som epihalohydriner eller polyepoksyder, eksempelvis epiklorhydrin eller bisepoksyd. A special stable ether bond occurs when the hydroxyl groups of the polyhydroxymethylene react with non-ion-forming epoxides, which contain at least 2 reactive groups, such as epihalohydrins or polyepoxides, for example epichlorohydrin or bisepoxide.

Ved siden av de her eksempelvis anførte fremgangsmåter til fremstilling av den kovalente forbindelse mellom bærematriks og proteineffektoren eller andre effektorer lar det seg dessuten oppregnet ytterligere metoder som fører til reaksjon på den ene side av hydroksylgruppen av polyhydroksymetylenet, på den annen side bestemte grupperinger av effektoren oq derved danner den kovalente forbindelse mellom beg<q>e, således den kjente omsetning over kompleksdannende metallforbindelser, f.eks. titanforbindelser. In addition to the methods listed here for producing the covalent connection between the carrier matrix and the protein effector or other effectors, it is also possible to enumerate further methods which lead to reaction on the one hand of the hydroxyl group of the polyhydroxymethylene, on the other hand certain groupings of the effector oq thereby forming a covalent connection between beg<q>e, thus the known reaction over complex-forming metal compounds, e.g. titanium compounds.

Polyhydroksymetylenet utmerker seg ved siden av den nevnte kjemiske og termiske stabilitet ved fordelaktige forarbeidelsestekniske egenskaper oq fører dermed til en overlegenhet i forhold til de hittil som optimalt ansette bærematrikser på basis av naturlige kullhvdrafcer. Polyhydrok-symetylener er f.eks. fremstillbare i form av fibre, tråder,' folier eller sfæriske partikler eller fortrinnsvis som pul-verisert materiale, således at det alt etter anvendelsesfor-målet av effektoren som skal 'bindes dertil kan velges den mest egnede form. In addition to the aforementioned chemical and thermal stability, the polyhydroxymethylene is distinguished by advantageous processing technical properties and thus leads to a superiority in relation to the hitherto optimally employed carrier matrices based on natural coal hydrocarbons. Polyhydroxymethylenes are e.g. can be produced in the form of fibres, threads, foils or spherical particles or preferably as powdered material, so that depending on the intended use of the effector to be bound thereto, the most suitable form can be chosen.

Ved den produksjonstekniske styrbare størrelse At the production-technical controllable size

av den for binding av effektoren resp. spaceren tilgjengelige overflate viste det seg et ytterligere fortrinn av polyhydroksymetylenet i forhold til bærematerialene ifølge teknikkens stand. of it for binding the effector resp. surface available to the spacer, the polyhydroxymethylene showed a further advantage compared to the carrier materials according to the state of the art.

Etter de analoge reaksjonsmekanismer slik de er omtalt ror binding av effektoren med polyhydroksymetylen-matriksen lar også spacer-stoffet seg binde til matriksen, når f.eks. spaceren, som en av de funksjonelle grupper har en aminogruppe. Innføring av en spacer byr imidlertid også Following the analogous reaction mechanisms as discussed, binding of the effector with the polyhydroxymethylene matrix also allows the spacer substance to bind to the matrix, when e.g. the spacer, as one of the functional groups has an amino group. The introduction of a spacer also offers, however

den mulighet for effektorens binding i tillegg å innføre reak-sjonsmuligheter. I tilfellet at den til matriksen bundne spacer har en fri karboksylgruppe er denne karboksylgruppe eksempelvis aktiverbar ved karbodiimid-forbindelser, som deretter formår å inngå en amidbinding med aminogruppen hos effektoren. Karboksylgruppene tillater videre dannelsen av amidbindinger ved hjelp av de av Woodward innførte isoksazo-liumsalter. the possibility for the effector's binding in addition to introducing reaction possibilities. In the event that the spacer bound to the matrix has a free carboxyl group, this carboxyl group can for example be activated by carbodiimide compounds, which then manage to form an amide bond with the amino group of the effector. The carboxyl groups further allow the formation of amide bonds using the isoxazolium salts introduced by Woodward.

Har den til matriksen bundne spacer en disponer-bar, fri aminogruppe, så er det med arylaminogruppeholdige vinylsulfonderivater eller svovelsyreestere av Ø-hydroksy-etylsulfoner mulig innføring av arylaminogrupper i forlengel-sen av spaceren som deretter diazoteres etter kjente metoder og endelig forbindes med tilsvarende reaktive grupper av effektoren: f.eks. If the spacer bound to the matrix has a disposable, free amino group, then with arylamino group-containing vinylsulfone derivatives or sulfuric acid esters of Ø-hydroxyethylsulfones it is possible to introduce arylamino groups into the extension of the spacer, which are then diazotized according to known methods and finally connected with correspondingly reactive groups of the effector: e.g.

De ifølge oppfinnelsen biologisk aktive forbindelser egner seg for de fleste anvendelsesfremgangsmåter som tidligere var kjent for andre til hydrofile, vannuoppløselige bærere bundne effektorer. Følgelig kan enzymer gjøres vann-uoppløselige. De uoppløselige enzymer anvendes i økende grad til bestemmelse av substrater i analyseautomater og som såkalte enzymelektroder. På grunn av den økende stabilitet egner en rekke av bærerbundne enzymer seg for gjennomføring av teknisk enzymatisk omsetning. The biologically active compounds according to the invention are suitable for most methods of application that were previously known for other effectors bound to hydrophilic, water-insoluble carriers. Accordingly, enzymes can be made water-insoluble. The insoluble enzymes are increasingly used for the determination of substrates in automatic analyzers and as so-called enzyme electrodes. Due to the increased stability, a number of carrier-bound enzymes are suitable for carrying out technical enzymatic reactions.

Bærerbundne biologisk aktive stoffer har på grunn av deres egenskaper som spesifikke adsorbentier funnet en bred anvendelse i affinitetskromatografi. Med hjelp av bærerbundne, naturlige eller syntetiske enzyminhibitorer lykkes høyrensning av enzymer, mens enzymene ble funnet godt egnet som effektorer, spesielt til utvinning av naturlige enzyminhibitorer fra råekstrakter. Bærerbundne vannuoppløse-lige antigener anvendes til isolering av de tilhørende antilegemer som.på denne måte fåes fritt for andre serumbestand-deler og fritt for andre antigener. Affinitetskromatografisk kan det heller ikke isoleres utfellbare antilegemer samt slike som på grunn av deres lave konsentrasjon ikke er utfellbare 1 serum og heller ikke bestemmes kvantitativt. Carrier-bound biologically active substances have, due to their properties as specific adsorbents, found a wide application in affinity chromatography. With the help of carrier-bound, natural or synthetic enzyme inhibitors, high purification of enzymes is successful, while the enzymes were found to be well suited as effectors, especially for the extraction of natural enzyme inhibitors from crude extracts. Carrier-bound water-insoluble antigens are used to isolate the associated antibodies, which in this way are obtained free of other serum constituents and free of other antigens. Affinity chromatography also cannot isolate precipitable antibodies and those which, due to their low concentration, are not precipitable in serum and cannot be determined quantitatively.

I de for nærmere forklaring av oppfinnelsen nedenfor oppførte eksempler er det påvist at en etter en eneste fremgangsmåte fremstilt bærer egner seg for binding av de forskjelligste effektorer og at grunnlegemet polyhydroksymetylen kan gjøres egnet ved egnet substitusjon til binding av enhver ønsket effektor. In the examples listed below for further explanation of the invention, it has been demonstrated that a carrier produced by a single method is suitable for binding the most diverse effectors and that the basic body polyhydroxymethylene can be made suitable by suitable substitution for binding any desired effector.

Videre vises det eksempelvis hvorledes det kan anvendes matriksbundne effektorer. Furthermore, it is shown, for example, how matrix-bound effectors can be used.

Eksempel 1 Example 1

Polyhydroksymetylen- tetanustoksoid- forbindelse. Polyhydroxymethylene tetanus toxoid compound.

Fremstilling av matriks av ( ai- amino- n- hexyl)- substituert polyhydroksymetylen. 20 g polyhydroksymetylen, suspendert i 9 00 ml vann blandes med en oppløsning av 20 g BrCN i 50 ml dimetyl-formamid og holdes under omrøring ved langsom tildrypning av 2 N natronlut ved en indre temperatur på 15°C i 6 minutter ved en pH-verdi på 11,5. Deretter frasuges med en gang, vaskes godt med isvann og avpresses. Det således, aktiverte, ennu vannfuktige polyhydroksymetylen settes til en godt om-rørt, ved værelsetemperatur holdt, med konsentrert HC1 på Preparation of a matrix of (α-amino-n-hexyl)-substituted polyhydroxymethylene. 20 g of polyhydroxymethylene, suspended in 900 ml of water is mixed with a solution of 20 g of BrCN in 50 ml of dimethylformamide and kept under stirring by slowly adding 2 N caustic soda dropwise at an internal temperature of 15°C for 6 minutes at a pH value of 11.5. Then drain immediately, wash well with ice water and wring out. The thus activated, still water-moist polyhydroxymethylene is added to a well-stirred, kept at room temperature, with concentrated HC1 on

pH 8,5 innstilt oppløsning av 20 g hexametylehdiamin i 500 ml ^0, oppfylles med vann til et samlet volum på 1 liter, pH-verdien innreguleres stadig mellom 8,5-9,0 og omrøres ennu pH 8.5 adjusted solution of 20 g hexamethylehdiamine in 500 ml ^0, filled with water to a total volume of 1 liter, the pH value is constantly adjusted between 8.5-9.0 and stirred again

5 timer ved værelsetemperatur. Deretter frasuges og utvaskes godt med vann. En tørket prøve av det med (w-amino-n-hexyl)-grupper substituert polyhydroksymetylen hadde et nitrogeninnhold på 1,9%. Med Sangers reagens til påvisning av primære frie aminogrupper fremkom intenst gulfarvede produkter. 5 hours at room temperature. Then suction off and rinse well with water. A dried sample of the polyhydroxymethylene substituted with (w-amino-n-hexyl) groups had a nitrogen content of 1.9%. With Sanger's reagent for the detection of primary free amino groups, intensely yellow colored products appeared.

Fremstilling av den bærerbundne effektor Preparation of the carrier-bound effector

Effektor: Tetanus-antigen. Effector: Tetanus antigen.

10 g av bæreren ifølge Eks. 1 suspenderes i 200 ml av en 0,5 molar natriumfosfatoppløsning av pH 10. Suspensjonen oppvarmes under omrøring til 50°C og blandes med 5 g l-aminobenzen-4-f3-hydroksyetylsulf onsvovelsyrehalvester. Etter korreksjon av pH-verdien til 10 med 2 molar NaOH om-røres blandingen en time ved 50°C. Deretter frafUtreres over en nutsch og vaskes med 2 liter vann, 2 liter aceton og 2 liter 0,2 molar HC1. For diazoterin av de i polyhydroksymetylenet innførte arylaminogrupper suspenderes filterresiduet i 200 ml 0,2 molar HC1, avkjøles til 2°C og blandes under omrøring så lenge med 1 molar NaN02, inntil det med KJ-stivelsespapir er å fastslå et lite nitritoverskudd. Etter 10 10 g of the carrier according to Ex. 1 is suspended in 200 ml of a 0.5 molar sodium phosphate solution of pH 10. The suspension is heated with stirring to 50°C and mixed with 5 g of 1-aminobenzene-4-f3-hydroxyethylsulfonic acid half-ester. After correction of the pH value to 10 with 2 molar NaOH, the mixture is stirred for one hour at 50°C. It is then filtered over a nutsch and washed with 2 liters of water, 2 liters of acetone and 2 liters of 0.2 molar HC1. For diazoterine of the arylamino groups introduced in the polyhydroxymethylene, the filter residue is suspended in 200 ml of 0.2 molar HC1, cooled to 2°C and mixed with stirring for a long time with 1 molar NaN02, until a small excess of nitrite can be determined with KJ starch paper. After 10

minutter frafiltreres over en nutsch og filterresiduet vaskes med 1 liter av en vandig 0,01 molar amidosulfonsyre av 2°C og deretter med 200 ml 0,2 molar natriumfosfat pH 7,5 av 2°C. Til kobling suspenderes det diazoniumgruppeholdige produkt i minutes is filtered off over a Nutsch and the filter residue is washed with 1 liter of an aqueous 0.01 molar amidosulfonic acid at 2°C and then with 200 ml of 0.2 molar sodium phosphate pH 7.5 at 2°C. For coupling, the diazonium group-containing product is suspended in

150 ml av en oppløsning av 2 g tetanus-toksoid med 1260 Lf/mg N i 0,2 molar natriumfosfat pH 7,5 og 2°C og omrøres 20 timer ved 5°C. Ikke-bundne deler av toksoidet utvaskes med 1 liter 1 molar NaCl-oppløsning på en nutsch. 150 ml of a solution of 2 g of tetanus toxoid with 1260 Lf/mg N in 0.2 molar sodium phosphate pH 7.5 and 2°C and stirred for 20 hours at 5°C. Unbound parts of the toxoid are washed out with 1 liter of 1 molar NaCl solution on a Nutsch.

Anvendelse av forbindelsen polyhydroksymetylen- tetanustoksoid. Utvinning av tetanus- antitoksin. Application of the compound polyhydroxymethylene-tetanus toxoid. Extraction of tetanus antitoxin.

10 g av produktet ifølge Eks. 1 suspenderes i 10 g of the product according to Ex. 1 is suspended in

150 ml 0,15 molar NaCl-oppløsning med en tilsetning av M/15 natriumfosfat ("PBS") pH 7,2 og overføres i en søyle av 3 cm diameter og 10 cm høyde. 20 ml tetanus-hesteserum med 1650. IE tetanus-antitoksin/ml påføres på søylen, som deretter vaskes med 500 ml PBS pH 7,2. Elueringen av antilegemet foregår med 0,5 molar glycin/HCl-puffer pH 2,5. Eluatet inneholder etter nøytralisering med 2 molar NaOH og etterfølgende 150 ml of 0.15 molar NaCl solution with an addition of M/15 sodium phosphate ("PBS") pH 7.2 and transferred in a column of 3 cm diameter and 10 cm height. 20 ml of tetanus horse serum with 1650 IU tetanus antitoxin/ml is applied to the column, which is then washed with 500 ml of PBS pH 7.2. The elution of the antibody takes place with 0.5 molar glycine/HCl buffer pH 2.5. The eluate contains after neutralization with 2 molar NaOH and subsequently

sentrifugering tilsammen 240 mg protein, og slik det ble fast-slått på beskyttelsesforsøk på mus, 12.300 IE tetanus-antitoksin. centrifugation altogether 240 mg of protein, and as it was established in protection experiments on mice, 12,300 IU tetanus antitoxin.

Produktet anvendes til reaksjon med tetanus-antilegemer. The product is used for reaction with tetanus antibodies.

Eksempel 2 Example 2

Polyhydroksymetylen- aminobenzamidin- forbindelse Polyhydroxymethylene-aminobenzamidine compound

Fremstilling av matriksen av ( gj- karboksy- n- pentyl)- substituert polyhydroksymetylen. 20 g polyhydroksymetylen, aktivert ifølge eks. 1 med BrCN, has til en med fortynnet natronlut på pH 8,5 innstilt og til et samlet volum på 1 liter oppfylt, vandig opp-løsning av 25 g e-aminokapronsyre. Det omrøres ennu i 5 timer ved værelsetemperatur og pH 8,5 og frasuges og utvaskes godt med vann. En tørket prøve av det med (w-karboksy-n-pentyl)-grupper substituerte polyhydroksymetylen hadde et nitrogeninnhold på 0,86%. Preparation of the matrix of (gj-carboxy-n-pentyl)-substituted polyhydroxymethylene. 20 g of polyhydroxymethylene, activated according to ex. 1 with BrCN, adjusted to a pH of 8.5 with diluted caustic soda and filled with an aqueous solution of 25 g of ε-aminocaproic acid to a total volume of 1 litre. It is stirred for a further 5 hours at room temperature and pH 8.5 and suctioned off and washed out well with water. A dried sample of the polyhydroxymethylene substituted with (w-carboxy-n-pentyl) groups had a nitrogen content of 0.86%.

Fremstilling av den bærerbundne effektor Preparation of the carrier-bound effector

Effektor: Aminobenzamidin. Effector: Aminobenzamidine.

2 g av et polyhydroksymetylenderivat fremstilt ifølge eks. 2, suspenderes i 25 ml 0,1 molar morfolinetansul-fonsyre og blandes med 1 g l-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimid . HC1. Ved tilsetning av 2 molar HC1 under pH-kontroll innstilles pH-verdien på 4,8. Under omrøring settes til blandingen 1 g m-aminobenzamidin. Suspensjonen omrøres under pH-korreksjon i 1 time og adsorbenset overføres deretter i en kromatografisøyle med 1 cm diameter. Adsorbenset spyles med 200 ml 0,0 5 molar trishydroksymetylaminometan-HCl-puffer, pH 8,0 med en tilsetning av 0,5 molar KC1 (tris-KCl). 2 g of a polyhydroxymethylene derivative prepared according to ex. 2, is suspended in 25 ml of 0.1 molar morpholine ethanesulfonic acid and mixed with 1 g of 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimide. HC1. By adding 2 molar HC1 under pH control, the pH value is set to 4.8. While stirring, 1 g of m-aminobenzamidine is added to the mixture. The suspension is stirred under pH correction for 1 hour and the adsorbent is then transferred into a chromatography column with a diameter of 1 cm. The adsorbent is flushed with 200 ml of 0.05 molar trishydroxymethylaminomethane-HCl buffer, pH 8.0 with the addition of 0.5 molar KCl (tris-KCl).

Anvendelse av forbindelsen polyhydroksymetylen- aminobenzamidin. Utvinning av trombin. Application of the compound polyhydroxymethylene-aminobenzamidine. Recovery of thrombin.

100 mg rå-trombin fra storfe oppløses i 5 ml Dissolve 100 mg of crude bovine thrombin in 5 ml

0,05 molar tris, 0,5 molar KC1 pH 8,0 påføres på søylen prepa- 0.05 M Tris, 0.5 M KC1 pH 8.0 is applied to the column prepa-

rert som ovenfor. Søylen spyles deretter med 200 ml tris-KCl-puffer. Det til det uoppløseliggjorte m-aminobenzamidin bundne trombin avspaltes fra dette med 100 ml av en oppløsning av 0,05 molar m-aminobenzamidin i tris-KCl-puffer. De proteinholdige fraksjoner forenes og påføres over en 1 x 30 cm søyle "Sephadex" G-25 i tris-KCl-puffer. I den første proteinholdige topp av søyleeluatet kunne det ved bestemmelse av aktiviteten ifølge Chase og Shaw, Biochem. 8, 1969, side 2212, finnes 78% av utgangsaktiviteten. just as above. The column is then flushed with 200 ml of tris-KCl buffer. The thrombin bound to the insolubilized m-aminobenzamidine is cleaved from this with 100 ml of a solution of 0.05 molar m-aminobenzamidine in tris-KCl buffer. The proteinaceous fractions are combined and applied over a 1 x 30 cm column of "Sephadex" G-25 in tris-KCl buffer. In the first proteinaceous peak of the column eluate, by determining the activity according to Chase and Shaw, Biochem. 8, 1969, page 2212, 78% of the output activity is found.

Produktet anvendes til adsorbsjon av trombin. The product is used for adsorption of thrombin.

Eksempel 3 Example 3

Polyhydroksymetylen- pepsin- forbindelse. Polyhydroxymethylene pepsin compound.

Fremstilling av matriksen av ( cj- amino- n- hexyl)- substituert polyhydroksymetylen. Preparation of the matrix of (cj-amino-n-hexyl)-substituted polyhydroxymethylene.

8,0 g fra dimetylformamid/metanol gjenutfelt polyvinylenkarbonat, fremstilt ifølge N.D. Field, J.R. Schaefgen, J. Polymer, Sei., volum 58, side 534 (1962), suspenderes ved værelsetemperatur i en oppløsning av 7,5 g hexametylendiamin 1 180 ml metanol og omrøres 48 timer ved værelsetemperatur, frasuges, utvakses med metanol og suspenderes i en oppløsning av 10 g natriummetylat i 300 ml 96%-ig metanol i 4 dager ved værelsetemperatur, utvaskes med metanol og deretter meget godt med vann. En tørket prøve av det over en spacer av 6 CI^-grupper med primære aminogrupper substituerte polyhydroksy-metylenadsorbens hadde et nitrogeninnhold på 5,7%. 8.0 g from dimethylformamide/methanol reprecipitated polyvinylene carbonate, prepared according to N.D. Field, J.R. Schaefgen, J. Polymer, Sei., volume 58, page 534 (1962), suspended at room temperature in a solution of 7.5 g of hexamethylenediamine 1 180 ml of methanol and stirred for 48 hours at room temperature, aspirated off, waxed with methanol and suspended in a solution of 10 g of sodium methylate in 300 ml of 96% methanol for 4 days at room temperature, washed out with methanol and then very well with water. A dried sample of the polyhydroxy-methylene adsorbent substituted over a spacer of 6 Cl^ groups with primary amino groups had a nitrogen content of 5.7%.

Fremstilling av den bærerbundne effektor Preparation of the carrier-bound effector

Effektor: Pepsin. Effector: Pepsin.

20 g (io-amino-n-hexyl)-substituert polyhydroksymetylen, fremstilt ifølge eks. 3, suspenderes i 400 ml 0,2 molar natriumfosfat pH 10. Til suspensjonen settes under om-røring 40 ml av en 25%-ig glutardialdehydoppløsning. Etter 2 timers omrøring ved værelsetemperatur frafiltreres over en nutsch og filterresiduet vaskes med 4 liter 0,2 molar natrium-acetatpuffer pH 4,0. Deretter has reaksjonsproduktet i 500 ml av en oppløsning av 5 g pepsin med tilsammen 500.000 enheter, bestemt ifølge Anson, i 0,2 molar natriumacetat pH 4,0 og omrøres 15 timer ved 6°C. Det deretter dannede produkt utvaskes på en nutsch med 5 liter 0,1 molar natriumacetat/eddiksyre pH 4,0 og en tilsetning av 1 molar NaCl. 20 g of (io-amino-n-hexyl)-substituted polyhydroxymethylene, prepared according to ex. 3, is suspended in 400 ml of 0.2 molar sodium phosphate pH 10. 40 ml of a 25% glutardialdehyde solution is added to the suspension while stirring. After stirring for 2 hours at room temperature, filter off over a nutsch and the filter residue is washed with 4 liters of 0.2 molar sodium acetate buffer pH 4.0. The reaction product is then placed in 500 ml of a solution of 5 g of pepsin with a total of 500,000 units, determined according to Anson, in 0.2 molar sodium acetate pH 4.0 and stirred for 15 hours at 6°C. The product then formed is washed out on a Nutsch with 5 liters of 0.1 molar sodium acetate/acetic acid pH 4.0 and an addition of 1 molar NaCl.

Anvendelse av forbindelsen polyhydroksymetylen- pepsin. Proteolytisk spaltning av immunglobuliner. Application of the compound polyhydroxymethylene pepsin. Proteolytic cleavage of immunoglobulins.

Adsorbenset ifølge foreliggende eksempel suspenderes i 0,1 molar acetatpuffer pH 4,0 og herav gjennomføres en aktivitetsbestemmelse ifølge Anson. Suspensjonen inneholder tilsammen 21.000 enheter pepsin i bundet, og med denne prøve påvisbar form. Til proteolytisk spaltning av human-immunglobulin G frafiltreres pepsinadsorbenset og residuet suspenderes i en 2,5%-ig oppløsning av 30 g human IgG i fysio-logisk NaCl-oppløsning pH 4,1. Spalteblandingen omrøres 24 timer ved 37°C. Etter frafiltrering av det bærerbundne pepsin blandes filtratet med 1250 ml mettet ammoniumsulfat-oppløsning. Den derved dannede utfelling frasentrifugeres; det inneholder F(ab)2-fragmentet av immunglobulin med dets antilegemeaktivitet. Avstøpet kasseres. The adsorbent according to the present example is suspended in 0.1 molar acetate buffer pH 4.0 and an activity determination according to Anson is carried out from this. The suspension contains a total of 21,000 units of pepsin in bound, and with this sample detectable form. For proteolytic cleavage of human immunoglobulin G, the pepsin adsorbent is filtered off and the residue is suspended in a 2.5% solution of 30 g of human IgG in physiological NaCl solution pH 4.1. The cleavage mixture is stirred for 24 hours at 37°C. After filtering off the carrier-bound pepsin, the filtrate is mixed with 1250 ml of saturated ammonium sulphate solution. The resulting precipitate is centrifuged off; it contains the F(ab)2 fragment of immunoglobulin with its antibody activity. The casting is discarded.

Produktet anvendes til proteolytisk spaltning av immunglobuliner. The product is used for proteolytic cleavage of immunoglobulins.

Eksempel 4 Example 4

Fremstilling av forbindelsen polyhydroksymetylen- oksaminsyre. 10 g polyhydroksymetylen aktiveres som omtalt i eks. 1 med BrCN og omsettes med 5 g tyramin, oppløst i 150 ml 0,1 molar natriumhydrogenkarbonat ved 5°C ved 60 minutters lang omrøring. Den ikke bundne mengde av tyraminet frafiltreres på en nutsch og filterresiduet utvaskes.med 1 liter 0,1 molar natriumfosfatpuffer pH 7,0 og 5°C. Filterresiduet suspenderes i 150 ml av en til 5°C avkjølet oppløsning av 1,0 g diazotert p-aminofenyloksaminsyre og omrøres 15 timer ved 5°C. Adsorbenset vaskes på en nutsch med 1 liter 0,05 molar natriumacetat-eddiksyre-puffer pH 5,5 med en tilsetning av 2 mM CaCl2 og 0,2 mM EDTA. Preparation of the compound polyhydroxymethylene-oxamic acid. 10 g of polyhydroxymethylene is activated as described in ex. 1 with BrCN and reacted with 5 g of tyramine, dissolved in 150 ml of 0.1 molar sodium bicarbonate at 5°C with 60 minutes of stirring. The unbound amount of the tyramine is filtered off on a Nutsch and the filter residue is washed out with 1 liter of 0.1 molar sodium phosphate buffer pH 7.0 and 5°C. The filter residue is suspended in 150 ml of a solution of 1.0 g of diazotized p-aminophenyloxamic acid cooled to 5°C and stirred for 15 hours at 5°C. The adsorbent is washed on a Nutsch with 1 liter of 0.05 molar sodium acetate-acetic acid buffer pH 5.5 with an addition of 2 mM CaCl2 and 0.2 mM EDTA.

Anvendelsen av forbindelsen polyhydroksymetylen- oksaminsyre. Utvinning av neuraminidase. The use of the compound polyhydroxymethylene-oxamic acid. Extraction of neuraminidase.

Adsorbenset ifølge Eks. 4 resuspenderes i ovennevnte acetatpuffer og overføres til en kromatografisøyle av 2 cm diameter. Gjennom denne søyle føres 1 liter av et kulturfiltrat av Vibrio Cholerae med 800 IE neuraminidase/ml, som på forhånd med "2 molar eddiksyre var innstilt på 5,5 og som var blitt blandes med CaC^ og EDTA til en konsentrasjon på 2 mM resp. 0,2 mM. De ikke bundne proteiner utvaskes med 500 ml acetatpuffer. The adsorbent according to Ex. 4 is resuspended in the above-mentioned acetate buffer and transferred to a chromatography column of 2 cm diameter. Through this column is passed 1 liter of a culture filtrate of Vibrio Cholerae with 800 IU neuraminidase/ml, which had previously been adjusted to 5.5 with 2 molar acetic acid and which had been mixed with CaC^ and EDTA to a concentration of 2 mM resp. 0.2 mM The unbound proteins are washed out with 500 ml of acetate buffer.

Elueringen av den på den bærerbundne inhibitor adsorberte neuraminidase foregår ved vasking av søylen med 0,1 molar natriumhydrogenkarbonat-oppløsning og oppsamling av de aktive neuraminidaseholdige fraksjoner. De inneholder 86% av den anvendte aktivitet. The elution of the neuraminidase adsorbed on the carrier-bound inhibitor takes place by washing the column with 0.1 molar sodium bicarbonate solution and collecting the active neuraminidase-containing fractions. They contain 86% of the applied activity.

Eksempel 5 Example 5

a) Omsetning av polyhydroksymetylen med epiklorhydrin. a) Reaction of polyhydroxymethylene with epichlorohydrin.

50 g polyhydroksymetylen suspenderes i 1 liter 50 g of polyhydroxymethylene is suspended in 1 litre

2 N NaOH, blandes med 250 ml epiklorhydrin og omrøres i 2 timer ved 55-60°C. Suspensjonens pH-verdi synker etter kort tid til 10-11. Ved tilsetning av NaOH holdes ennu denne pH-verdi i 1 time. Etter 2 timers reaksjonstid frasuges faststoffet, vaskes med vann, aceton og til slutt igjen med vann. b) 50 g hexametylendiamin oppløses i 1,5 liter vann og blandes med HCl til pH 10. Til oppløsningen has det under punkt 5a) aktiverte polyhydroksymetylen og omrøres i 6 timer ved 50-55°C. Deretter frasuges produktet og vaskes med vann, fritt for hexametylendiamin. c) Det under eks. 5b) dannede produkt omrøres med 50 g l-aminobenzen-4-Ø-hydroksyetylsulfonsvovelsyreester ved 55°C og pH 10 en time. Deretter frafiltreres det faste stoff, vaskes med vann, aceton og igjen med vann. d) 10 g av det under punkt 5c) dannede produkt vaskes på en nutsch med 200 ml 0,1 N HCl og suspenderes deretter i 300 ml 0,5 N HCl. Suspensjonen blandes under omrørings med 0,1 N NaNC^-oppløsning ved 0-4°C, inntil diazotering er det med KJ-stivelsespapir å fastslå et lite nitrit-overskudd. Etter 10 minutter frafiltreres over en nutsch og residuet vaskes med isvann og deretter med 0,15 molar natriumfosfatpuffer pH 7,5 av 0-4°C. 2 N NaOH, mixed with 250 ml of epichlorohydrin and stirred for 2 hours at 55-60°C. The suspension's pH value drops after a short time to 10-11. By adding NaOH, this pH value is maintained for 1 hour. After a 2-hour reaction time, the solid is sucked off, washed with water, acetone and finally again with water. b) Dissolve 50 g of hexamethylenediamine in 1.5 liters of water and mix with HCl to pH 10. The polyhydroxymethylene activated under point 5a) is added to the solution and stirred for 6 hours at 50-55°C. The product is then suctioned off and washed with water, free of hexamethylenediamine. c) That under ex. 5b) product formed is stirred with 50 g of 1-aminobenzene-4-0-hydroxyethylsulfonic acid ester at 55°C and pH 10 for one hour. The solid is then filtered off, washed with water, acetone and again with water. d) 10 g of the product formed under point 5c) is washed on a Nutsch with 200 ml of 0.1 N HCl and then suspended in 300 ml of 0.5 N HCl. The suspension is mixed with stirring with 0.1 N NaNC^ solution at 0-4°C, until diazotization, a small excess of nitrite can be determined with KJ starch paper. After 10 minutes, filter off over a nutsch and the residue is washed with ice water and then with 0.15 molar sodium phosphate buffer pH 7.5 of 0-4°C.

e) 0,75 g albumin oppløses i 250 ml fosfatpuffer pH 7,5, avkjøles til 4°C og tilsettes det under punkt-5d) e) 0.75 g albumin is dissolved in 250 ml phosphate buffer pH 7.5, cooled to 4°C and added under point-5d)

fremstilte produkt. Suspensjonen omrøres deretter i 20 timer ved 4°C, filtreres deretter og faststoffet vaskes med 1 molar NaCl og fosfatpufret koksaltoppløsning (PBS) (vandig 0,9%-ig NaCl-oppløsning med et innhold av 1/15 mol N<a>2HPO^-K<H>2P<0>4<->puffer av pH 7,2). manufactured product. The suspension is then stirred for 20 hours at 4°C, then filtered and the solid is washed with 1 molar NaCl and phosphate-buffered saline (PBS) (aqueous 0.9% NaCl solution with a content of 1/15 mol N<a>2HPO ^-K<H>2P<0>4<->buffer of pH 7.2).

Filtrat og vaskelut undersøkes etter metoden radial immundiffusjon på albumin. Det bindes 75 mg albumin til 1 g av den således fremstilte bærer. Filtrate and washing liquor are examined according to the radial immunodiffusion method on albumin. 75 mg of albumin is bound to 1 g of the thus prepared carrier.

f) 2,4 g IgM oppløses i 250 ml fosfatpuffer pH 7,5 og avkjøles til 4°C. 10 g av det ifølge punkt 5d) diazoterte f) Dissolve 2.4 g of IgM in 250 ml of phosphate buffer pH 7.5 and cool to 4°C. 10 g of the diazotized according to point 5d).

produkt tilsettes og suspensjonen omrøres i 20 timer ved 4°C. Etter filtrering vaskes det faste stoff med 1 molar NaCl-oppløsning og med PBS. 1 g av den ifølge punkt 5f) fremstilte bærer binder 240 ml IgM. product is added and the suspension is stirred for 20 hours at 4°C. After filtration, the solid is washed with 1 molar NaCl solution and with PBS. 1 g of the carrier prepared according to point 5f) binds 240 ml of IgM.

Produktet benyttes til antilegeme-antigen-reaksjoner . The product is used for antibody-antigen reactions.

Eksempel 6 Example 6

a) 10 g polyhydroksymetylen aktiveres som omtalt i eks. 5a) og b) med epiklorhydrin, omsettes med hexametylendiamin og opparbeides. b) 10 g av den således fremstilte bærer succinoy-leres 4 timer ved 10°C og pH 6 med 5 g ravsyreanhydrid, som a) 10 g of polyhydroxymethylene is activated as described in ex. 5a) and b) with epichlorohydrin, reacted with hexamethylenediamine and worked up. b) 10 g of the carrier thus prepared is succinoylated for 4 hours at 10°C and pH 6 with 5 g of succinic anhydride, which

er suspendert i 20 0 ml vann. pH-verdien innreguleres med 2N NaOH. Etter vasking av det faste stoff med vann omrøres produktet med 2,5 g N-cyklohexyl-N'-(-(N-metylmorfolino)-etyl)-karbodiimid-p-toluen-sulfonat ved pH 5 og 5°C i 30 minutter, frafiltreres og vaskes hurtig med isvann. is suspended in 20 0 ml of water. The pH value is adjusted with 2N NaOH. After washing the solid with water, the product is stirred with 2.5 g of N-cyclohexyl-N'-(-(N-methylmorpholino)-ethyl)-carbodiimide-p-toluene-sulfonate at pH 5 and 5°C for 30 minutes , is filtered off and washed quickly with ice water.

c) lg IgG oppløses i 250 ml fosfat-puffer pH 7,5 c) lg IgG is dissolved in 250 ml phosphate buffer pH 7.5

og omrøres med dén under punkt 6f) fremstilte bærer i 24 timer and stirred with the carrier prepared under point 6f) for 24 hours

ved 4°C. Etter filtrering vaskes produktet med 1 molar koksalt og med PBS. at 4°C. After filtration, the product is washed with 1 molar sodium chloride and with PBS.

På 1 g av bæreren bindes 85 mg IgG kovalent. 85 mg of IgG is covalently bound to 1 g of the carrier.

Produktet benyttes til antilegeme-antigen-reaksjoner . The product is used for antibody-antigen reactions.

Eksempel 7 Example 7

a) 20 g av det under punkt 5a) fremstilte produkt omrøres med 20 g aminokapronsyre ved pH 10 og 50-55°C i a) 20 g of the product prepared under point 5a) is stirred with 20 g of aminocaproic acid at pH 10 and 50-55°C in

6 timer. Deretter suges det fra og vaskes med vann. 6 hours. It is then sucked off and washed with water.

b) 10 g av det under punkt 7a) fremstilte produkt blandes med 2,5 g N-cyklohexyl-N'- ((N-metylmorfolino)-etyl)-karbodiimid-p-toluen-sulfonat og hertil has etter 5 minutter 2 g N-hydroksysukksinimid ved pH 5. Etter 5 timers omrøring ved 24°C frafiltreres det faste stoff og vaskes med vann. c) 0,5 g albumin oppløses i 200 ml fosfatpuffer og omrøres med den under punkt 7b) fremstilte aktiverte bærer i 24 timer ved 4°C. Etter filtrering vaskes produktet med 1 molar kokesalt og med PBS. b) 10 g of the product prepared under point 7a) is mixed with 2.5 g of N-cyclohexyl-N'-((N-methylmorpholino)-ethyl)-carbodiimide-p-toluene-sulfonate and, after 5 minutes, 2 g N-hydroxysuccinimide at pH 5. After 5 hours of stirring at 24°C, the solid is filtered off and washed with water. c) 0.5 g of albumin is dissolved in 200 ml of phosphate buffer and stirred with the activated carrier prepared under point 7b) for 24 hours at 4°C. After filtration, the product is washed with 1 molar sodium chloride and with PBS.

Til 1 g av bæreren bindes 50 mg albumin kovalent. Produktet benyttes til antilegeme-antigen reaksjoner. 50 mg of albumin is covalently bound to 1 g of the carrier. The product is used for antibody-antigen reactions.

Eksempel 8 Example 8

10 g polyhydroksymetylen aktiveres som i Eks. 5a) og b) med epiklorhydrin, omsettes med hexametylendiamin og opparbeides. a) 10 g av den således fremstilte bærer suspenderes i 100 ml vann og omsettes med 500 ml 25%-ig glutardialdehyd. 10 g of polyhydroxymethylene is activated as in Ex. 5a) and b) with epichlorohydrin, reacted with hexamethylenediamine and worked up. a) 10 g of the thus prepared carrier are suspended in 100 ml of water and reacted with 500 ml of 25% glutardialdehyde.

Etter 1 times omrøring frafiltreres det faste stoff og vaskes med vann resp. PBS. After stirring for 1 hour, the solid material is filtered off and washed with water or PBS.

b) 0,5 g albumin oppløses i 200 ml fosfat-puffer og omrøres med den under punkt 8a) fremstilte bærer i 20 timer b) 0.5 g of albumin is dissolved in 200 ml of phosphate buffer and stirred with the carrier prepared under point 8a) for 20 hours

ved 4°C. Etter filtrering vaskes produktet med 1 molar koksalt og med PBS. at 4°C. After filtration, the product is washed with 1 molar sodium chloride and with PBS.

Produktet benyttes til antilegeme-antigen-reaksjoner. The product is used for antibody-antigen reactions.

Eksempel 9 Example 9

Direkte omsetning av med epiklorhydrin aktivert polyhydroksymetylen. Direct conversion of polyhydroxymethylene activated with epichlorohydrin.

a) 10 g polyhydroksymetylen aktiveres med 50 ml epiklorhydrin som omtalt i Eks. 5a). Etter filterering a) 10 g of polyhydroxymethylene is activated with 50 ml of epichlorohydrin as discussed in Ex. 5a). After filtering

vaskes produktet hurtig med vann, aceton, vann og til slutt med PBS. b) 0,5 g albumin oppløses i 200 ml PBS og omrøres med det under punkt 9a) fremstilte produkt i 60 timer ved 4°C. wash the product quickly with water, acetone, water and finally with PBS. b) 0.5 g of albumin is dissolved in 200 ml of PBS and stirred with the product prepared under point 9a) for 60 hours at 4°C.

Etter filtrering vaskes det bærerbundne protein med 1 molar koksalt og med PBS. 1 g av den således fremstilte bærer binder 4 5 mg albumin. After filtration, the carrier-bound protein is washed with 1 molar sodium chloride and with PBS. 1 g of the thus prepared carrier binds 45 mg of albumin.

Produktet benyttes til antilegeme-antigen-reaksjoner. The product is used for antibody-antigen reactions.

Eksempel 10 Example 10

10 g vannuoppløselig polyhydroksymetylen omrøres ved pH 9,5 (0,15 m Na-bikarbonat/NaOH-puffer) i 3 dager ved 25°G med 30 g dietylenglykoldiglycidyleter, produktet frasuges, vaskes godt og has til 0,5 g humanalbumin i 200 ml 0,15 molar fosfatpuffer pH 8 og omrøres 60 timer ved 10°C. Etter filtrering vaskes det bærerbundne protein med 1 molar koksaltoppløsning og PBS. 10 g of water-insoluble polyhydroxymethylene is stirred at pH 9.5 (0.15 m Na-bicarbonate/NaOH buffer) for 3 days at 25°G with 30 g of diethylene glycol diglycidyl ether, the product is suctioned off, washed well and diluted to 0.5 g of human albumin in 200 ml 0.15 molar phosphate buffer pH 8 and stirred for 60 hours at 10°C. After filtration, the carrier-bound protein is washed with 1 molar sodium chloride solution and PBS.

1 g av den således fremstilte bærer inneholder 1 g of the thus prepared carrier contains

35 mg bundet albumin. 35 mg bound albumin.

Eksempel 11 Example 11

10 g polyhydroksymetylen omsettes som angitt i Eks. 10 med 30 g glycidyltris-(glycidyleter), has til 0,5 g immunglobulin g (IgG) i 200 ml 0,15 molar fosfatpuffer pH 7,5 og omrøres 60 timer ved 4°C. Etter filtrering vaskes produktet med 1 molar koksaltoppløsning og med PBS. 1 g av den således fremstilte proteinharpiks inneholder 50 mg bundet IgG. 10 g of polyhydroxymethylene is reacted as indicated in Ex. 10 with 30 g of glycidyl tris-(glycidyl ether), added to 0.5 g of immunoglobulin g (IgG) in 200 ml of 0.15 molar phosphate buffer pH 7.5 and stirred for 60 hours at 4°C. After filtration, the product is washed with 1 molar sodium chloride solution and with PBS. 1 g of the protein resin produced in this way contains 50 mg of bound IgG.

Claims (2)

1. Biologisk aktivt materiale til anvendelse i affinitetsreaksjoner, karakterisert ved at det består av: A) en biologisk aktiv forbindelse som ved en kovalent binding eller over en bro dannet av en eller flere minst bifunksjonelle organiske forbindelser er bundet sammen med B) vannuoppløselig poly(hydroksymetylen).1. Biologically active material for use in affinity reactions, characterized in that it consists of: A) a biologically active compound which, by a covalent bond or via a bridge formed by one or more at least bifunctional organic compounds, is bound together with B) water-insoluble poly( hydroxymethylene). 2. Fremgangsmåte til fremstilling av et biologisk aktivt vannoppløselig materiale ifølge krav 1, karakterisert vedA) at poly(hydroksymetylen) bindes kovalent direkte eller over en eller flere bifunksjonelle organiske forbindelser til et biologisk aktivt stoff eller B) at poly(vinylenkarbonat) omsettes med et biologisk aktivt stoff og de resterende cyklokarbonatgrupper hydrolyseres eller C) at poly(vinylenkarbonat) omsettes med en bi-funks jonell organisk forbindelse, de resterende cyklokarbonatgrupper hydrolyseres og at man til den polymere binder kovalent en biologisk aktiv forbindelse.2. Method for producing a biologically active water-soluble material according to claim 1, characterized by A) that poly(hydroxymethylene) is covalently bonded directly or via one or more bifunctional organic compounds to a biologically active substance or B) that poly(vinylene carbonate) is reacted with a biologically active substance and the remaining cyclocarbonate groups are hydrolysed or C) that poly(vinylene carbonate) is reacted with a bi-functional organic compound, the remaining cyclocarbonate groups are hydrolysed and that a biologically active compound is covalently bound to the polymer.
NO751599A 1974-05-06 1975-05-05 BIOLOGICALLY ACTIVE MATERIAL AND PROCEDURE FOR ITS MANUFACTURING. NO144672C (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19742421789 DE2421789C3 (en) 1974-05-06 Biologically active products and processes for their manufacture

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO751599L NO751599L (en) 1975-11-07
NO144672B true NO144672B (en) 1981-07-06
NO144672C NO144672C (en) 1981-10-14

Family

ID=5914739

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO751599A NO144672C (en) 1974-05-06 1975-05-05 BIOLOGICALLY ACTIVE MATERIAL AND PROCEDURE FOR ITS MANUFACTURING.

Country Status (16)

Country Link
JP (1) JPS599153B2 (en)
AT (1) AT338417B (en)
BE (1) BE828776A (en)
CA (1) CA1063049A (en)
CH (1) CH630410A5 (en)
DK (1) DK196175A (en)
ES (1) ES437153A1 (en)
FI (1) FI60216C (en)
FR (1) FR2270266B1 (en)
GB (1) GB1512651A (en)
IE (1) IE41040B1 (en)
IT (1) IT1054620B (en)
LU (1) LU72407A1 (en)
NL (1) NL181782C (en)
NO (1) NO144672C (en)
SE (2) SE427086B (en)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2552510C3 (en) * 1975-11-22 1981-02-19 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Biologically active compounds and processes for their preparation
EP1585817B1 (en) 2002-02-20 2009-09-02 The General Hospital Corporation Conjugates comprising a biodegradable polymer and uses therefor
JP6476934B2 (en) * 2015-02-02 2019-03-06 東ソー株式会社 Novel polymer and cell culture substrate having the same

Also Published As

Publication number Publication date
IE41040B1 (en) 1979-10-10
NL7505152A (en) 1975-11-10
JPS50155679A (en) 1975-12-16
NO144672C (en) 1981-10-14
NL181782B (en) 1987-06-01
SE427086B (en) 1983-03-07
FI60216C (en) 1981-12-10
DK196175A (en) 1975-11-07
CH630410A5 (en) 1982-06-15
FR2270266B1 (en) 1979-03-16
BE828776A (en) 1975-11-06
NL181782C (en) 1987-11-02
SE7505275L (en) 1975-11-07
NO751599L (en) 1975-11-07
FI751299A (en) 1975-11-07
AT338417B (en) 1977-08-25
IT1054620B (en) 1981-11-30
AU8081875A (en) 1976-11-11
GB1512651A (en) 1978-06-01
ES437153A1 (en) 1977-04-16
LU72407A1 (en) 1977-02-09
CA1063049A (en) 1979-09-25
IE41040L (en) 1975-11-06
JPS599153B2 (en) 1984-02-29
FR2270266A1 (en) 1975-12-05
ATA342275A (en) 1976-12-15
DE2421789B2 (en) 1976-10-07
SE444947B (en) 1986-05-20
DE2421789A1 (en) 1975-11-13
FI60216B (en) 1981-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2175261C2 (en) Novel affine ligands and their application
Cuatrecasas et al. [31] Affinity chromatography
US5153166A (en) Chromatographic stationary supports
CA1334042C (en) Process for the preparation of a material for affinity chromatography
US4822681A (en) Activated polymer solid bodies and processes for the production thereof
US4722906A (en) Binding reagents and methods
US5092992A (en) Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography
NO783154L (en) NEW MATERIAL FOR REVERSIBLE FIXING OF BIOLOGICAL MACROMOLECULES AND THEIR PREPARATION AND USE
JP2008101023A (en) IgG SEPARATION MEDIUM AND NOVEL PROTEIN A VARIANT
IE43952B1 (en) Compositions having affinity for hepatitis virus and method for hepatitis virus removal
CA2058019C (en) Use of pairs of peptides with extremely high specific affinity for one another in the area of in vitro diagnosis
JP2010133734A (en) Carboxylation carrier for affinity chromatography, and separating agent for affinity chromatography using the same
US5085779A (en) Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography
NO144672B (en) BIOLOGICALLY ACTIVE MATERIAL AND PROCEDURE FOR ITS MANUFACTURING
WO1988002776A1 (en) A novel immunoaffinity purification system
Peng et al. Stability of antibody attachment in immunosorbent chromatography
JP2011132140A (en) Immobilized protein
EP0186347A2 (en) Method for producing high-active biologically efficient compounds immobilized on a carrier
CN117571983B (en) Alkaline phosphatase rapid labeling kit and method
FI61811C (en) ANALYSIS OF A BIOLOGICALLY ACTIVE PRODUCT BESTAOENDE AV EN I ATTEN OLOESLIG BAERARE OCH ETT BIOLOGISKT AKTIVT AEMNE SA OSM ADSORPTIONSMEDEL FOER AFFINITETSKROMATOGRAFI
DE2421789C3 (en) Biologically active products and processes for their manufacture
RU2071058C1 (en) Method of preparing affine sorbent for c-reactive protein isolation
JPH05261281A (en) Carrier for immobilizing bioactive substance and its production
Costa-Silva et al. 12 Affinity Chromatography
JPH05345022A (en) Physiologically active substance immobilized carrier and its preparation