NO137969B - Fremgangsm}te for isolering og rensning av antifungalt aktive forbindelser - Google Patents
Fremgangsm}te for isolering og rensning av antifungalt aktive forbindelser Download PDFInfo
- Publication number
- NO137969B NO137969B NO95573A NO95573A NO137969B NO 137969 B NO137969 B NO 137969B NO 95573 A NO95573 A NO 95573A NO 95573 A NO95573 A NO 95573A NO 137969 B NO137969 B NO 137969B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- acids
- solvent
- ethyl acetate
- polar solvent
- esters
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title description 4
- 238000009413 insulation Methods 0.000 title description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 title 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 32
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 21
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 14
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 12
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 12
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 12
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 6
- HCWCAKKEBCNQJP-UHFFFAOYSA-N magnesium orthosilicate Chemical class [Mg+2].[Mg+2].[O-][Si]([O-])([O-])[O-] HCWCAKKEBCNQJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 4
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 4
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000862997 Sorangium cellulosum Species 0.000 claims description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 2
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 2
- 235000020573 organic concentrate Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims 1
- 241000228404 Histoplasma capsulatum Species 0.000 claims 1
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 claims 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 claims 1
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 claims 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 claims 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 claims 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 claims 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N Diazomethane Chemical compound C=[N+]=[N-] YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- FKHIFSZMMVMEQY-UHFFFAOYSA-N talc Chemical compound [Mg+2].[O-][Si]([O-])=O FKHIFSZMMVMEQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Denne oppfinnelse angår en fremgangsmåte for isolering
og rensning av antifungalt aktive forbindelser fremstilt ved dyrkning av mikroorganismen Polyangium cellulosum var. fulvum (ATCC nr. 25532).
Det er angitt i US-patent 3.651.216 at nevnte organisme produserer antifungalt aktive forbindelser ved gjæring i et egnet kulturmedium.
Det er et formål med foreliggende oppfinnelse å tilveie-bringe en ny fremgangsmåte ved hvilken alle de antifungalt aktive forbindelser som fremstilles i mediet, utvinnes, separeres og renses, slik at de kan anvendes i passende doseringsformer.
Dyrkningsbetingelsene for organismen og gjæringen for dannelse av de antibiotiske stoffer er beskrevet i nevnte US-patent 3.651.216.
Vi har nå funnet at gjæringsvæsken efter dyrking av organismen inneholder fire kjemisk forskjellige antifungalt aktive komponenter. Disse komponenter er betegnet "Syre F", "Syre S", "Komponent B" og "Komponent C".
Syrene F og S er hovedkomponenter som bidrar med 70-90%
av den antibiotiske aktivitet, avhengig av gjæringsbetingelsene.
I henhold til oppfinnelsen tilveiebringes en fremgangsmåte for isolering og rensing av de antifungalt aktive syrer "F" og "S" fra gjæringsvæsken erholdt ved dyrkning av Polyangium cellulosum var. fulvum (ATCC nr. 25532). Fremgangsmåten karakteriseres ved følgende i og for seg kjente trinn:
(a) filtrering av gjæringsvæsken,
(b) ekstrahering av filtratet fra trinn (a) med et oppløsningsmiddel, (c) konsentrering av de organiske ekstrakter fra trinn (b),
(d) surgjøring av residuet fra trinn (c) med en svak syre,
(e) ekstrahering av det surgjorte residuum fra trinn (d) med
et oppløsningsmiddel,
(f) konsentrering av de organiske ekstrakter fra trinn (e),
(g) adsorbering av de organiske konsentrater fra trinn (f) på
en kolonne av et aktivert magnesiumsilikat,
(h) eluering av kolonnen fra trinn (g) med et ikke-polart
oppløsningsmiddel,
(i) eluering av kolonnen fra trinn (h) med et polart oppløsnings-middel,
(j) inndampning av eluatet fra trinn (i),
(k) oppløsning av residuet fra trinn (j) i et etylacetat:2-propanol:
vann (85:10:5) oppløsningsmiddelsystem,
(1) adsorbering av oppløsningen fra trinn (k) på silikagel,
(m) eluering av kolonnen fra trinn (1) med et etylacetat:2-propanol:
vann (85:10:5) oppløsningsmiddelsystem, og
(n) utvinning av de antifungalt aktive syrer "F" og "S" ved
inndampning av eluatene fra trinn (m); eller
forestring av syrene "F" og "S" i en av de delvis rensede ekstrakter og separering av de erholdte estere av syrene "F" og "S" ved kromatografering på silikagel, eventuelt fulgt av gjenvinning av syrene "F" og "S".
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan utføres som følger: Gjæringsvæsken erholdes ved dyrkning av den ovennevnte organisme i henhold til de betingelser som er angitt i nevnte patent. Gjæringsvæsken filtreres og ekstraheres med et oppløsnings-middel så som etylacetat, kloroform, butanol eller metylenklorid. Generelt anvendes et forhold på 1 del oppløsningsmiddel til 5 deler gjæringsvæske for å ekstrahere gjæringsvæsken inntil til-nærmet alle komponentene F og S er fjernet. Typisk fjernes syrene F og S efter tre separate ekstraksjoner.
Ekstrakten konsentreres under redusert trykk ved en temperatur ikke over 45°C til ca. 1% av sitt volum. Konsentratet får stå
ved ca. 4°C i 24 timer og bringes til klarhet ved filtrering.
Filtratet inndampes til tørrhet, 2% eddiksyre tilsettes inntil man når en sur pH, f.eks. pH 3-4, og blandingen ekstraheres med kloroform. Ekstrakten tørres over Na2S0^ og konsentreres til et lite volum. Selv om sistnevnte operasjon er nyttig for frigjøring av syrene fra deres salter, er den valgfri og ikke nødvendig for det neste trinn.
Det antibiotiske konsentrat adsorberes på en aktivert magnesiumsilikatkolonne ("Florisil") i et forhold på 1:10 til 1:20 (efter vekt). Kolonnen utvikles med et ikke-polart oppløsnings-middel så som etylacetat. Dette fjerner hovedmengde av inaktive materialer. De aktive komponenter som holdes' fast av det aktiverte magnesiumsilikat, utvinnes ved eluering med et polart oppløsnings-middel så som metanol. Metanoleluatene inndampes til tørrhet for å gi den urensede, antibiotiske blanding inneholdende 20-30% aktivt stoff.
Ytterligere rensing oppnås ved kolonnekromatografi på silikagel under anvendelse av et forhold på 1 g av den ovennevnte urensede blanding til ca. 100 g silikagel. Kolonnen utvikles med etylacetat:isopropanol:vann-system i forholdet 85:10:5. Eluatene kontrolleres ved tynnskiktkromatografi (silikagel, Quantum Industries) under anvendelse av det samme system som anvendt i kolonnen. R^-verdiene er som følger: Syre F, R f = 0,68, og Syre S, Rf = 0,56.
Ved anvendelse av den ovenstående fremgangsmåte separeres syrene F og S fra komponentene B og C og annet inaktivt materiale.
De således fremstilte syrer F og S har de følgende fysikalske egenskaper: Syre F : Empirisk formel C28H42°6' MV 474' infrarødt spektrum v 870, 965, 1063, 1255, 1388, 1453, 1663, 1710, 2950 og 3400 cm"1, omtrentlig [a]^<5> = +74° (kloroform, c=0,8), Rf=0,68 (silikagel, etylacetat:isopropanol:vann (85:10:5)).
Syre S: Empirisk formel C28H42°6' MV 474' infrarØdt spektrum v 870, 965, 1063, 1255, 1388, 1453, 1663, 1710, 2950 og 3400 cm"<1>, omtrentlig ta]^<5> = +36° (kloroform, c = 0,7), Rf = 0,56 (silikagel, etylacetat:isopropanol:vann (85:10:5)).
De ovenstående syrer F og S kan eventuelt omdannes til sine respektive estere. Typisk utføres denne omdannelse ved anvendelse av den følgende metode: Den urensede etylacetatekstrakt, efter delvis rensing på en aktivert magnesiumsilikat-kolonne, behandles med et overskudd av etanolisk-eterisk diazometanoppløsning ved romtemperatur i en periode på 15 min. Dette fører til omdannelse av syrene F og S til deres metylestere. Estrene separeres ved kromatografi på silikagel under anvendelse av etylacetat:cykloheksan (4:1) system som mobil fase.
Claims (6)
- Disse estrene av syrene F og S har de følgende fysikalskeegenskaper: Ester F: Empirisk formel <C>29H44°6' Mv 488, infrarødt spektrum v 860, 965, 1060, 1165, 1255, 1370, 1430, 1515, 1660, 1730, 2900 og 3350 cm ^, R f = 0,78 (silikagel, etylacetat:cykloheksan (4:1)). Ester S: Empirisk formel <-29H44^6' MV 488, infrarødt spektrum v 860, 965, 1060, 1200, 1250, 1370, 1440, 1518, 1658, 1725, 2900 og 3400cm R^ = 0,56 (silikagel, etylacetat:cykloheksan (4:1)). Syrene F og S kan gjenvinnes fra estrene i ren form vedtilbakeløpsbehandling ,av estrene i 1 time i IN NaOH. For å oppnå en fullstendig isolering av syrene F og Sforetrekkes 1. at det som oppløsningsmiddel i trinn (b) anvendes etylacetat, 2. at det som svak syre i trinn (d) anvendes eddiksyre, 3. at det som oppløsningsmiddel i trinn (e) anvendes kloroform, 4. at det som ikke-polart oppløsningsmiddel i trinn (h) anvendes etylacetat, og/eller 5. at det som polart oppløsningsmiddel anvendes metanol. Disse syrer og estere oppviser antifungal aktivitet motslike sopper som Histoplasma capsulatum, Candida albicans oglignende. For å anvende disse produkter blandes f.eks. 0,1 vekt% av syren eller esteren med et dermatologisk godtagbart bæremiddel så som talk eller petrolatum og anvendes lokalt. 1. Fremgangsmåte for isolering og rensning av de antifungalt aktive syrer "F" og "S" fra gjæringsvæsken erholdt ved dyrkning av Polyangium cellulosum var. fulvum (ATCC nr. 25532), karakterisert ved følgende trinn: (a) filtrering av gjæringsvæsken, (b) ekstrahering av filtratet fra trinn (a) med etoppløsningsmiddel, (c) konsentrering av de organiske ekstrakter fra trinn (b), (d) surgjøring av residuet fra trinn (c) med en svak syre, (e) ekstrahering av det surgjorte residuum fra trinn (d) med et oppløsningsmiddel, (f) konsentrering av de organiske ekstrakter fra trinn (e), (g) adsorbering av de organiske konsentrater fra trinn (f) på en kolonne av et aktivert magnesiumsilikat, (h) eluering av kolonnen fra trinn (g) med et ikke-polart oppløsningsmiddel, (i) eluering av kolonnen fra trinn (h) med et polart opp-løsningsmiddel , (j) inndampning av eluatet fra trinn (i), (k) oppløsning av residuet fra trinn (j) i et etylacetat:2-propanol:vann (85:10:5) oppløsningsmiddelsystem, (1) adsorbering av oppløsningen fra trinn (k) på silikagel, (m) eluering av kolonnen fra trinn (1) med et etylacetat:2-propanol:vann (85:10:5) oppløsningsmiddelsystem, og (n) utvinning av de antifungalt aktive syrer "F" og "S" vedinndampning av eluatene fra trinn (m); eller forestring av syrene "F" og "S" i en av de delvis rensede ekstrakter og separering av de erholdte estere av syrene "F" og "S" ved kromatografering på silikagel, eventuelt fulgt av gjenvinning av syrene "F" og "S".
- 2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at det som ikke-polart oppløsningsmiddel i trinn (b) anvendes etylacetat.
- 3. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at det som svak syre i trinn (d) anvendes eddiksyre.
- 4. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at det som oppløsningsmiddel i trinn (e) anvendes kloroform.
- 5. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at det som ikke-polart oppløsningsmiddel i trinn (h) anvendes etylacetat.
- 6. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at det som polart oppløsningsmiddel anvendes metanol.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO95573A NO137969C (no) | 1973-03-09 | 1973-03-09 | Fremgangsmaate for isolering og rensning av antifungalt aktive forbindelser |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO95573A NO137969C (no) | 1973-03-09 | 1973-03-09 | Fremgangsmaate for isolering og rensning av antifungalt aktive forbindelser |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO137969B true NO137969B (no) | 1978-02-20 |
| NO137969C NO137969C (no) | 1978-05-31 |
Family
ID=19877891
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO95573A NO137969C (no) | 1973-03-09 | 1973-03-09 | Fremgangsmaate for isolering og rensning av antifungalt aktive forbindelser |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| NO (1) | NO137969C (no) |
-
1973
- 1973-03-09 NO NO95573A patent/NO137969C/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO137969C (no) | 1978-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU648117A3 (ru) | Способ получени антибактериального вещества | |
| WO1998013375A1 (de) | Verbindungen mit antimykotischer und cytostatischer wirkung, herstellungsverfahren, mittel und dsm 11 092 | |
| KR970701786A (ko) | 스트렙토마이세스 sp. P 6621 FERM P 2804의 발효액으로부터 클라불란산과 제약학적으로 허용가능한 이들의 염을 단리하는 신규한 방법(NOVEL PROCESS FOR THE ISOLATION OF CLAVULANIC ACID AND OF PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALTS THEREOF FROM THE FERMENTATION BROTH OF STREPTOMYCES SP. P 6621 FERM P 2804) | |
| JPS6240292A (ja) | 抗生物質ゾフイマリン | |
| WO2023020501A1 (zh) | 一种从伯克霍尔德菌发酵液提取fr901464的方法 | |
| NO122741B (no) | ||
| CN104844620B (zh) | 一种雷帕霉素的分离纯化方法 | |
| SI9800046A (sl) | Postopek za pridobivanje inhibitorjev HMG-CoA reduktaze visoke čistosti | |
| KR20070057910A (ko) | 결정질 타크롤리무스의 분리 방법 | |
| US3804948A (en) | Antifungal substances from polyangium cellulosum var.fulvum | |
| DE69628002T2 (de) | Herstellung von clavunalat-salzen | |
| EP0318849A2 (de) | Manumycin-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung | |
| CN110042132A (zh) | 一种治疗和预防糖尿病的化合物及其制备方法 | |
| Asnaashari et al. | Optimization of penicillin G production by Penicillium chrysogenum | |
| Jaroszewski et al. | Cyanogenesis of Adenia volkensii Harms and Tetrapathaea tetrandra Cheeseman (Passifloraceae) revisited: tetraphyllin B and volkenin. Optical rotatory power of cyclopentenoid cyanohydrin glucosides | |
| NO137969B (no) | Fremgangsm}te for isolering og rensning av antifungalt aktive forbindelser | |
| JPH01112989A (ja) | Ａｂ−００６抗生物質及びその製造方法 | |
| US20080269479A1 (en) | Process for Isolation of Macrolide Compounds | |
| CN112390817B (zh) | 一种盐析萃取他克莫司发酵液的方法 | |
| RU2270201C1 (ru) | Способ получения бетулина | |
| Mori | Studies on nematocidal antibiotics. I Screening and isolation of nematocidal substances produced by actinomycetes | |
| WO1999047523A1 (de) | Apicularen a und b | |
| US3907764A (en) | Pepsinostrepins, novel protease inhibitors from streptomyces | |
| US20050261493A1 (en) | Methods for the isolation and purification of ansamitocins | |
| US3305554A (en) | Streptovitacins |