NL8802008A - Farmaceutische preparaten voor de topische toepassing, alsmede werkwijze ter bereiding ervan. - Google Patents

Description

NO 35312 1 S--

Farmaceutische preparaten voor de topische toepassing, alsmede werk- * wijze ter bereiding ervan»____

De uitvinding heeft betrekking op nieuwe antimicrobieel werkzame farmaceutische preparaten voor de topische toepassing. Meer specifiek gezien heeft de uitvinding betrekking op antimicrobiële farmaceutische preparaten voor de topische toepassing op basis, dat als antimi-5 crobieel werkzame stof een verbinding uit de groep van werkzame stoffen, die in het molecule ervan een met een kleine alkylgroep gesubstitueerd imidazool bevatten, in combinatie met een of meer eventueel gesubstitueerde benzoëzuren wordt toegepast, waarbij de combinatie in een synergistische antimicrobiële werking resulteert.

10 EP-A-0.007.595 beschrijft farmaceutische preparaten, die de anti- mykotisch werkzame stof clotrimazol (l-[(2-chloorfenyl)difenylmethyl]-IH-imidazool), voor de uitwendige toepassing, in het bijzonder een deze werkzame stof bevattende nieuwe gel, creme of ook vloeibare preparaten, die crotamiton (N-crotonyl-N-ethyl-o-tolufdine) als oplosmiddel be-15 vatten.

Voorts beschrijft EP-A-0.070.525 farmaceutische preparaten, die antimykotisch werkzame stoffen, die een imdazoolring in het molecule bevatten, zoals b.v. miconazol, econazol of ook isoconazol bevatten, die in crotamiton, pepermuntolie of ook methylsalicylaat zijn opgelost, 20 waarbij laatstgenoemde ook farmaceutische werkingen als huidpreparaten bezitten, echter geen daarvan antimykotisch werkzaam is.

Als resultaat van verdere onderzoekingen, zoals ook later in nadere bijzonderheden beschreven, vond men verrassenderwijze en onverwacht, dat de combinatie, bestaande uit een antimicrobiële werkzame stof uit 25 de groep van werkzame stoffen, die in het molecule ervan een met een kleine alkylgroep gesubstitueerd imidazool bevatten, overeenkomstig een verbinding met de formule 1, waarin tenminste een van de substituenten Rl, R2 en R3 een halogeenatoom, en de andere waterstof voorstellen, zowel ook de farmaceutisch aanvaardbare zuur-additiezouten ervan 30 of overeenkomstig een verbinding met de formule 2, waarin R4 een halogeenatoom voorstelt, met een of meer eventueel gesubstitueerde benzoëzuren en eventueel gebruikelijke farmaceutische dragers en/of hulpstoffen in farmaceutische preparaten voor de topische toepassing, een buitengewone synergistische antimicrobiële werking bezit.

35 Eventueel gesubstitueerde benzoëzuren zijn zodanige, die een of meer halogeenatomen, hydroxyl- of ook klein alkoxygroepen als substituent op verschillende plaatsen van de benzeenring bevatten. De voorkeur <8802008 2 " verdienen eventueel monogesubstitueerde benzoëzuren, die de substitu- enten op de ortho-plaats ten opzichte van de carboxyl groep in de ben-zeenring dragen.

Van bijzonder belang in de bovengenoemde combinaties is de toepas -5 sing van o-hydroxybenzoëzuur, salicylzuur en/of het niet gesubstitueerde benzoëzuur.

Halogeen is broom, jood of fluor, in het bijzonder echter chloor.

Klein alko*y is ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, iso-butoxy, sec-butoxy of tert-butoxy, in het bijzonder methoxy.

10 De combinatie van de bovengenoemde werkzame stoffen bezit een onverwachte synergistische antimicrobiële werking van de afzonderlijke componenten.

De uitvinding heeft in het bijzonder betrekking op antimicrobië-le farmaceutische preparaten voor de topische toepassing, bestaande uit 15 de combinatie van een verbinding met de formule 1, waarin tenminste een van de substituenten R]_, Rg en R3 een chlooratoom en de overige waterstof voorstellen, alsook de farmaceutisch aanvaardbare zuur-addi-tiezouten ervan, zoals b.v. miconazol (Ri = Rg = Cl, R3 = H), econazol (R2 = Cl, R]_ = R3 = H) en isoconazol (Ri = R3 = Cl, 20 R2 - H) of een verbinding met de formule 2, waarin R4 een chlooratoom voorstelt, zoals b.v. clotrimazol en een of meer eventueel gesubstitueerde benzoëzuren en eventueel gebruikelijke farmaceutische dragers en/of hulpstoffen.

De uitvinding heeft in het bijzonder betrekking op die topisch 25 toepasbare farmaceutische preparaten, die op grond van het synergistische effect bijzonder werkzame antimicrobiële eigenschappen bezitten, bestaande uit de combinatie van miconazol als verbinding met de formule 1, waarin Rj en R2 een chlooratoom en R3 waterstof voorstellen en een farmaceutisch aanvaardbaar zuur-additiezout ervan of uit 30 een verbinding met de formule 2, waarin R4 een chlooratoom betekent, clotrimazol en salicylzuur en/of benzoëzuur en eventueel gebruikelijke farmaceutische dragers en/of eventueel hulpstoffen.

Bij voorkeur heeft de uitvinding betrekking op die bijzonder werkzame topisch toepasbare farmaceutische preparaten, die een combinatie 35 van miconazolnitraat of clotrimazol en salicylzuur en/of benzoëzuur en eventueel gebruikelijke farmaceutische dragers en/of hulpstoffen bevatten.

Voor de bereiding van de farmaceutisch aanvaardbare zuur-additie-zouten van de verbindingen met de formule 1 komen alle fysiologisch 40 verdraagzame zuren in aanmerking. Hiertoe zullen de volgende zuren als .8802008 3 voorbeelden worden vermeld: waterstofhalogeniden, zoals b.v. waterstof-chloride en waterstofbromide, in het bijzonder waterstofchloride, voorts zwavelzuur, fosforzuur, salpeterzuur, perchloorzuur, alifati-sche, alicyclische, aromatische of heterocyclische carbonzuren of sul-5 fonzuren, zoals b.v. mierezuur, azijnzuur, propionzuur, barnsteenzuur, glycolzuur, melkzuur, mal onzuur, wijnsteenzuur, citroenzuur, ascorbine-zuur, maleïnezuur, hydroxymalefnezuur, pyrodruivezuur, fenylazijn-zuur, benzoëzuur, p-aminobenzoëzuur, antranilzuur, p-hydroxybenzoëzuur, salicylzuur of ook p-aminosalicylzuur, embon-10 zuur, methaan-, ethaansulfonzuur, hydroxyethaansulfonzuur, ethyleensul-fonzuur, halogeenbenzeensulfonzuur, tolueensulfonzuur, 1,5-naftaleendi-sulfonzuur of sulfanilzuur, methionine, tryptofaan, lysine of ook arginine.

De farmaceutische preparaten volgens de onderhavige uitvinding be-15 zitten antimicrobiële, in het bijzonder antimykotische en antibacte-riële eigenschappen. Zo zijn zijn b.v. werkzaam tegen die micro-orga-nismen, die bij huidletsels en -beschadigingen optreden, zoals b.v. Trichophyton-soorten, bijvoorbeeld Trichophyton mentagrophytes, Epider-maphyton, bijvoorbeeld Epidermaphyton floccosum, Microsporon, bijvoor-20 beeld Microsporon felineum, Aspergillus-soorten, zoals b.v. Aspergillus niger en Aspergillus funigatus, gistschimmels, zoals Pytyrosporum-soor-ten, Candida-soorten, bijvoorbeeld Candida albicans en gram-positieve bacteriën, zoals b.v. Staphylococcus-soorten, bijvoorbeeld Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Propioni bacterium en 25 Coryne bacterium acnes. De opsomming van deze micro-organismen stelt geenszins een beperking van de bestrijdbare kiemen voor, maar heeft slechts toelichtend karakter.

De volgens de uitvinding bereidbare farmaceutische preparaten kunnen als antimykotisch werkzame middelen voor de behandeling van door 30 dermatofyten en spruitvormige schimmels bepaalde infecties van de huid, zoals b.v. dermatomykosen en systeemmykosen of ook als antibacterieel werkzaam middel, voor de behandeling van acne, roos en andere huidaandoeningen. Voorts bezitten de volgens de uitvinding bereidbare combinaties ook anti-pruritische eigenschappen en kunnen voor de behandeling 35 van pruritus-ziekten worden toegepast.

De farmaceutische preparaten volgens de uitvinding voor de topi-sche toepassing bevatten naast de combinaties van een verbinding met de formule 1 resp. 2 en een of meer eventueel gesubstitueerde benzoëzu-ren ook farmaceutisch aanvaardbare dragers of hulpstoffen. De dagelijk-40 se dosis van de actieve werkzame stoffen richt zich naar de leeftijd of . 88 0 2008.

4 » - overige individuele omstandigheden van de patient en ook naar de aard van de formulering.

Als concentraties van de gecombineerde werkzame stoffen in de geformuleerde preparaten, die de voorkeur verdienen, geldt het traject 5 van 0,01-10% (gewicht) van de met klein alkyl gesubstitueerde imidazo-len met de formule 1 of 2, bij voorkeur 0,1-2% (gewicht) en 0,5-25% (gewicht) voor de een of meer eventueel gesubstitueerde benzoëzuren, bij voorkeur echter 1-15% (gewicht).

Geschikte farmaceutische preparaten voor de topische toepassing 10 zijn in de eerste plaats cremes, zalven en gelen, voorts poeders, pasta's, lotions, tincturen, schuimen, sprays, aerosolen, oplossingen en balsems.

Cremes of lotions zijn olie-in-water-emulsies, die meer dan 50% water bevatten. Als oliehoudende basis past men in de eerste plaats 15 vetalcoholen, b.v. lauryl-, cetyl- of stearylalcohol, vetzuren, b.v. palmitine- of stearinezuur, vloeibare tot vaste wassen, b.v. isopropyl-myristaat, wolwas of bijenwas, en/of koolwaterstoffen, b.v. vaseline (petrolatum) of paraffineolie toe. Als emul'gatoren komen oppervlakte -actieve stoffen met overwegend hydrofiele eigenschappen in aanmerking, 20 zoals geschikte niet-ionogene emulgatoren, b.v. vetzuuresters van poly-alcoholen en ethyleenoxideaddukten ervan, zoals polyglycerolvetzuuresters of polyoxyethyleensorbitanvetzuuresters (Tweens), voorts polyoxy-ethyleenvetalcohol ethers of -vetzuuresters, of geschikte ionogene emulgatoren, zoals al kalimetaalzouten van vetalcoholsulfaten, b.v. natrium-25 laurylsulfaat, natriumcetylsulfaat of natriumstearylsulfaat, die men gewoonlijk bij aanwezigheid van vetalcoholen, b.v. cetylalcohol of ste-arylalcohol, toepast. Toevoegsels aan de waterfase zijn o.a. middelen, die de uitdroging van de cremes verhinderen, b.v. polyalcoholen, zoals glycerol, sorbitol, propyleenglycol en/of polyethyleenglycolen, voorts 30 conserveringsmiddelen, reukstoffen, enz.

Zalven of lotions zijn water-in-olie-emulsies, die tot 70%, bij voorkeur echter van ongeveer 20% tot ongeveer 50% water of waterige fase bevatten. Als vetfase komen in de eerste plaats koolwaterstoffen, b.v. vaseline, paraffineolie en/of harde paraffinen in aanmerking, die 35 ter verbetering van het vermogen tot binding van water bij voorkeur geschikte hydroxyl verbindingen, zoals vetalcoholen of esters daarvan, b.v. cetylalcohol of wolwasalcohol en resp. wolwas, bevatten. Emulgatoren zijn geschikte lipofiele stoffen, zoals sorbitanvetzuuresters (Spans), b.v. sorbitanoleaat en/of sorbitanisostearaat. Toevoegsels aan 40 de waterfase zijn o.a. middelen voor het vasthouden van vocht, zoals . 8802.008 5 polyalcoholen, b.v. glycerol, propyleenglycol, sorbitol en/of polyethy-leenglycol, alsmede conserveringsmiddelen, reukstoffen, enz.

Micro-emulsies zijn isotrope systemen, waarvan de basis uit de volgende vier componenten bestaat: water, een emulgator, zoals een ten-5 side, b.v. eumulgine, een lipide, zoals een niet polaire olie, b.v. pa-raffineolie, en een alcohol met een lipofiele groep, b.v. 2-octyldode-canol. Desgewenst kunnen aan de micro-emulsies andere toevoegsels worden toegevoegd.

Vetzalven zijn watervrij en bevatten als basis in het bijzonder 10 koolwaterstoffen, b.v. paraffine, vaseline en/of vloeibare paraffinen, voorts natuurlijk of partieel synthetisch vet, b.v. kokosvetzuurtrigly-ceride, of bij voorkeur geharde oliën, b.v. gehydrogeneerde aardno-ten- of ricinusolie, voorts partiële vetzuuresters van glycerol, b.v. glycerolmono- en -distearaat, alsmede b.v. de in samenhang met de zal-15 ven vermelde, het vermogen tot opnemen van water verhogende vetalcoho-len, emulgatoren en/of andere toevoegsels.

Bij de gelen wordt onderscheid gemaakt tussen waterige, watervrije of waterarme gelen, die uit opzwel bare, gel vormende materialen bestaan. In de eerste plaats worden transparante hydrogelen op basis van anorga-20 nische of organische macromoleculen toegepast. Grootmoleculige anorganische componenten met gel vormende eigenschappen zijn overwegend water bevattende silicaten, zoals aluminiumsilicaten, b.v. bentoniet, magne-sium-aluminium-silicaten, b.v. veegum, of collofdaal kiezel zuur, b.v. aerosil. Als grootmoleculige organische stoffen worden bijvoorbeeld na-25 tuurlijke, halfsynthetische of synthetische macromoleculen toegepast. Natuurlijk en halfsynthetische polymeren zijn bijvoorbeeld afgeleid van polysacchariden met de meest verschillende bouwstenen van koolhydraten, zoals cellulosen, zetmelen, tragant, arabische gom, agar-agar, gelatine, alginezuur en zouten ervan, b.v. natriumalginaat, en derivaten er-30 van, zoals klein alkylcellui osen, b.v. methyl - of ethyl celluiosen, car-bo*y- of hydroxy-klein alkylcellulose, b.v. carboxymethyl- of hydroxy-ethylcellulosen. De bouwstenen van synthetische gel vormende macromoleculen zijn bijvoorbeeld geschikt gesubstitueerde onverzadigde al ifaten, zoals vinyl alcohol, vinyl pyrrolidon, acryl- of methacrylzuur. Als voor-35 beelden van dergelijke polymeren kunnen polyvinyl alcohol derivaten, zoals polyviol, polyvinylpyrrolidinen, zoals collidon, polyacrylaten resp. polymethacrylaten, zoals Rohagit S of Eudispert, worden genoemd. Aan de gelen kunnen gebruikelijke toevoegsels, zoals conserveringsmiddelen of reukstoffen, worden toegevoegd.

40 Pasta's zijn cremes en zalven met secreet absorberende poederbe- > 8802008 6 standdelen, zoals metaal oxiden, b.v. titaanoxi.de of zinkoxide, voorts talk en/of aluminiumsilicaten, die het doel hebben, aanwezig vocht of secreten te binden.

Schuimen worden b.v. uit drukreservoirs toegediend en zijn in 5 aerosolvorm verkerende vloeibare olie-in-water-emulsies, waarbij geha-logeneerde koolwaterstoffen, zoals chloorfluor-klein alkanen, b.v. di-chloordifluormethaan en dichloortetrafluorethaan, als stuwmiddel worden toegepast. Als oliefase past men o.a. koolwaterstoffen, b.v. paraffine-olie, vetalcoholen, b.v. cetylalcohol, vetzuuresters, b.v. isopropyl-10 myristaat, en/of andere wassen toe. Als emulgatoren past men o.a. mengsels van zodanige met overwegend hydrofiele eigenschappen, zoals poly-oxyethyleensorbitan-vetzuuresters (Tweens), en zodanige met overwegend lipofiele eigenschappen, zoals sorbitanvetzuuresters (Spans) toe. Daarbij komen de gebruikelijke toevoegsels, zoals conserveringsmiddelen, 15 enz.

Tincturen en oplossingen bevatten meestal een ethanolische basis, waaraan eventueel water wordt toegevoegd en waaraan o.a. polyalcoholen, b.v. glycerol, glycolen en/of polyethyleenglycol, als middelen voor het vasthouden van vocht ter verlaging van de verdamping, en terugvettende 20 stoffen, zoals vetzuuresters met kleinmoleculige polyethyleenglycolen, d.w.z. in het waterige mengsel oplosbare, lipofiele stoffen als vervanging voor de aan de huid met het ethanol onttrokken vetstoffen, en, indien noodzakelijk, andere hulpmiddelen en toevoegsels zijn toegevoegd.

25 De bereiding van de topisch toepasbare farmaceutische preparaten heeft volgens op zichzelf bekende wijze plaats, b.v. door oplossen of suspenderen van de werkzame stof in de basis of in een deel daarvan, indien noodzakelijk. Bij toediening van de werkzame stof als oplossing wordt deze in de regel voor de emulgering in een van de beide fasen op-30 gelost; bij verwerking als suspensie wordt de werkzame stof na de emulgering met een deel van de basis gemengd en vervolgens aan de rest van de formulering toegevoegd.

De superioriteit van de volgens de uitvinding bereidbare en geformuleerde farmaceutische preparaten van de genoemde combinatie aan werk-35 zame stoffen berust op de synergistische antimicrobiële werking van de afzonderlijke werkzame stoffen.

Synergi sme

In het geval, dat verschillende actieve werkzame stoffen worden samengevoegd, kunnen de eigenschappen ervan tegenwerkend, additief of 40 ook synergistisch werkzaam zijn. Het synergistische effect is ogen- ‘8802008 7 schijn!ijk het meest wenselijke effects omdat dit enerzijds kleine doseringen en anderzijds een verbetering van de activiteit boven die van de afzonderlijke componenten toelaat. Met de toegepaste antimicrobië-le, in het bijzonder de antinykotisch werkzame verbindingen of combina-5 ties daarvan wordt het vermogen van de remming van de kiemgroei door meten van de MIC (minimum inhibitory concentration) en het dodingsper-centage aan de hand van de meting van de remmingszones vastgesteld.

Wanneer de uitdrukking "Fractional Inhibitory Concentration (FIC)“ (partiële remmingsconcentratie) als breuk 10

Minimale remmingsconcentratie (minimum inhibitory concentration = MIC) van de actieve componenten in het combinatieprodukt (de proef wordt met 2 of 3 actieve componenten in oplossing gelijktijdig uitgevoerd) 15 FIC ---

Minimale remmingsconcentratie (MIC) van de afzonderlijke actieve componenten (de proef wordt slechts met een van de actieve componenten in oplossing uitgevoerd) 20 wordt gedefinieerd, dan moet SFIC aan de som van de vastgestelde FIC-waarden worden gelijkgesteld, wanneer geen wisselwerking van de afzonderlijke componenten plaats heeft. Anders gezegd, is een synergisme aanwezig, dan is de som van de vastgestelde FIC-waarden van de afzonderlijke componenten kleiner dan de vastgestelde grootheid SFIC voor de 25 combinatie van de werkzame stoffen. De vastgestelde grootheid zFIC geeft informatie over de sterkte van de wisselwerking van de afzonderlijke componenten van een combinatie.

De minimale remmingsconcentratie (minimum inhibitory concentration = MIC) 30 De minimale remmingsconcentratie (MIC) in /ug/ml voor Micona-zol (Miconazol wordt als nitraat toegepast), salicylzuur, benzoëzuur alleen of in combinatie wordt in de volgende tabel A weergegeven, terwijl de tot de resultaten leidende methoden verder hieronder worden beschreven.

.8802008 8

Tabel A

^emen ^ ί/ug/ml) Fractional Som

5 Miconazol $ b inhibitory FIC

n1traat conc. (FIC) (partiële remmings- ______concentratie)_ 10 C. albicans 4-8 1365 680 0,25 200 - 0,0625 + 0,146 = 0,2 °>5 - 200 0,125 + 0,294 = 0,389 15 °>25 100 100 0,063+0,07+0,15 = 0,28 T. mentagrophytes 1 - 670 310 20 0,5 200 - 0,5 + 0,3 = 0,8 0,06 - 200 0,06 + 0,65 » 0,71 0,06 25 200 0,06+0,04+0,65 = 0,75 0,25 200 50 0,25 + 0,3 + 0,16 = 0,71 25 S. aureus 4 - S = salicylzuur, B = benzoëzuur

De MIC-waarden komen met de verwachtingen overeen. De waarden voor 30 Miconazol laten een goede werking zien, terwijl voor benzoëzuur resp. salicylzuur hoge concentraties, tot aan de grens van de oplosbaarheid, vereist zijn, om een MIC-waarde te bereiken. Subcultures uit verdiepingen (wells), die geen (microben)groei vertonen, laten zien, dat een concentratie van benzoëzuur bij of in de buurt van de MIC ook micro-35 bicide werkten, terwijl de werking van Miconazol voornamelijk statisch was, waarbij nieuwgroei van microben op de subcultures plaats had.

De vastgestelde MIC-waarden van combinaties van Miconazol met salicylzuur of benzoëzuur of beide laten hogere dan alleen additieve * waarden aan antimicrobiële werking zien. De werking bij de kiem Can-40 dida albicans was voor de combinatie van de werkzame stoffen veel beter I8802008 9 dan men door optelling van de gefractioneerde remmingsconcentraties (FIC) zou hebben verwacht.

Er werd daarbij waargenomen, dat concentraties, die aanzienlijk onder de MIC-waarden liggen een significante werking op de groei heb-5 ben. De hierbij gedane waarnemingen, dat de afzonderlijke componenten alle aan de antimicrobiële werking bijdragen is voor het geformuleerde produkt van betekenis, waarbij de diffusie van de afzonderlijke componenten op zichzelf beperkt is.

De methode voor de bepaling van de vitro-activiteiten voor Micona-10 zol, salicylzuur en benzoëzuur bij de kiemen Candida albicans,

Trichophyton mentagraphytes en Staphylococcus aureus wordt zoals onder volgt, beschreven.

De minimale remmingsconcentratie (minimum inhibitory concentration = MIC) 15 1. Inoculum C. albicans N.C.Y.C. 610, T. mentagrophytes N.C.P.F. 80 en S, aureus N.C.T.C. 8532 worden als kiemen toegepast. C. albicans kiemen worden een nacht in SLM (vloeibaar milieu van Sabouraud) bij een temperatuur van 32° gekweekt en het verkregen inoculum wordt tot ongeveer 20 2 x IQ5 kiemen verdund, op basis van een totale telling van de kiemen. T. mentagrophytes microconidiënkiemen worden aan een 12 dagen oude kweek, die op SDA (Sabouraud dextrose-agar) bij een temperatuur van 32° worden gekweekt, onttrokken en een gewassen waterige suspensie wordt in bevroren toestand bewaard.

25 Het onderzoek in-vitro wordt in geschikte verdunning in SLM

(vloeibaar milieu van Sabouraud), als voedingsmilieu met kiem-inoeula van 2 x 105 kiemen/ml substraat uitgevoerd, op basis van een totale telling van de kiemen. Een bij een temperatuur van 37° (een nacht) gekweekte kweek S. aureus in "Isotonic Sensittest-Broth" (ISB) als voe-30 dingsmilieu wordt in een verhouding 1:500 met ISB verdund. Daarop heeft een bepaling van de levende kiemen door telling plaats.

2. Oplossingen

Door verdunning tot het dubbele worden oplossingen van Micona-zol, salicylzuur en/of benzoëzuur in vleesbouillon bereid. Bij hogere 35 concentratie van salicylzuur en benzoëzuur wordt de concentratie aan werkzame stof in oplossing onderzocht, waarin men een verzadigde oplossing bereidt, die (foor een membraanfilter van 0,45 /um wordt gefiltreerd. Het verkregen filtraat, dat wordt toegepast, om een verdunning tot het dubbele voor de MIC-bepaling te bereiken, wordt door middel van 40 HPLC (high pressure liquid chromatography = vloeistofchromatografie bij >8802008, 10 hoge druk) geanalyseerd. DMF (0,5¾) wordt als oplosmiddel voor Micona-zol toegepast en was in deze concentratie in alle milieus aanwezig.

3. Onderzoekmethode in-vitro

De MIC-waarden van de afzonderlijke werkzame stoffen worden be-5 paald, doordat 100 /ul aan volume grote verdiepingen (wells) in een microtiterplaat worden geoculeerd. Een gelijk volume aan inoculum wordt toegevoegd en de platen worden bij een temperatuur van 32° bij beide schimmel kiemen en bij een temperatuur van 37° bij S. aureus bebroed. Voor de MIC-waarden worden combinaties van telkens twee verbindingen 10 bereid en daaruit telkens drie verschillende vereiste concentraties oplossingen en vervolgens wordt 75 /ul van elke verbinding en van elk inoculum aan de verdiepingen (wells) van de microtiterplaat toegevoerd en, zoals beschreven, bebroed. Een uit drie componenten bestaand systeem wordt ook onderzocht, waarbij 50 /ul volume voor het enten van 15 de platen wordt toegepast.

Resultaten

De resultaten worden 24 uur na het bebroeden (incubatie) voor C. albicans en S. aureus en 6-7 dagen voor T. mentagraphytes afgelezen. De eindpunten worden visueel en door meting van de "optische dichtheid" 20 bepaald, waarbij een vertikale rasterfotometer bij 450 nm wordt toegepast. In het bijzonder maakt de aflezing van de optische dichtheid het mogelijk de werking van de beneden de MIC-waarden liggende concentraties op de groei te onderzoeken.

De antimicrobiële werking van verschillende creme-formuleringen 25 worden onderzocht, doordat men de remmingszones volgens de volgende methoden schat.

Meting van de remmingszones (spread plate)

Ongeveer 1 x 104 kiemen/ml van elke te onderzoeken kiem worden op het oppervlak van een agarplaat (SDA voor gist- en schimmel kiemen en 30 TSA voor bacteriën) geïnoculeerd (geënt) en 30 minuten lang gedroogd. Verdiepingen (wells) worden in de agar van de plaat met een kurkboor nummer 3 gemaakt en deze worden met ongeveer 100 mg creme gevuld. De platen worden een nacht (bij schimmel kiemen langer) bij een temperatuur van 32° bebroed en de diameter van de remmingszones wordt 35 gemeten (zie tabel).

Toegepaste kiemen:

Candida albicans, Trichophyton mentagrophytes, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa.

Een vergelijking van alle agar-diffusieproeven laat zien, dat de 40 combinatie MSB (Miconazol + salicylzuur + benzoëzuur) belangrijk I8802008 11 werkzamer is dan de andere, namelijk Miconazol alleen of de combinatie SB (salicylzuur + benzoëzuur).

Samengevatte resultaten van de creme-formuleringen MSB = creme, die Miconazol, salicylzuur en benzoëzuur bevat 5 SB = creme, die salicylzuur en benzoëzuur bevat D = Daktarirfè* (2¾ Miconazol) (creme bereid door de fa. Janssen Pharmaceuticals, België) M = Miconazol 2¾.

10 Tabel B

Organismen (kiemen) Creme-formu1erΐngen

Remmingszones (diameter, mm)

_MSB SB_M_D

15 C. albicans (NCYC610) (1) 27 17,7 9,2 17,2 (2) 33,7 24,7 16,7 39,8 (3) 29,3 * 11,3 24,0 T. mentagrophytes 55 38 30,5 43 20 NC0F80, voorgekiemd T. mentagrophytes (1) 54,3 52,5 37,8 43 NCPF80, microconidia (2) 49,0 55,3 45,3 40,8 (3) >80 * 43,5 54 25 T. mentagrophytes 52,3 50,3 41,8 37 ATCC 18748 (spread plate resultaten) 30 T. mentagrophytes 56 54,6 28 * C. albicans 24 20 15,6 * 35 T. mentagrophytes 44,6 34,9 * 30,9 MSB v D en M is significant bij 0,05¾ (niveau) MSB V SB is significant bij 2,5¾ (niveau) * = niet gemeten 40 t 8802008 12 ' Diffusiestudies

De meeste farmaceutische preparaten bestaan uit de actieve werkzame stof en de hulpstoffen en het is daardoor uiterst belangrijk, de activiteit van de verbinding (werkzame stof) in de gekozen formulering 5 te onderzoeken. Voor de topische toepasbaarheid dient de diffusie van de werkzame stof resp. werkzame stoffen uit de formulering vastgesteld te worden en tot dit doel past men de plaatdiffusieproef toe, om de toepasbaarheid van het produkt te onderzoeken. De resultaten worden in tabel C weergegeven. De formuleringen 1 tot 7 bevatten alle 10 dezelfde basissamenstelling, de werkzame stoffen zijn echter verschillend. De toegepaste afkortingen zijn op zichzelf vanzelfsprekend, bijvoorbeeld staat M2S3 voor 2% Miconazol en_3% salicylzuur. DJ staat voor DaktarirJ§>Janssen, AJ staat voor Acnidazil® Janssen. Bij het doornemen van de gegevens merkt men op, dat bij de toegepaste micro-orga-15 nismen (kiemen) gemiddeld de combinatie van Miconazol, benzoëzuur en salicylzuur het meest geschikt is. Opgemerkt wordt, dat de vergelijkingen van alle formuleringen op dezelfde tijd zijn uitgevoerd, omdat vergelijkingen op verschillende dagen niet dezelfde resultaten leveren. De relatieve rangorde blijft op zichzelf gelijk.

t 8802008 13

Bepaling van de antinricrobiële activiteit van een creme-formulering onder toepassing van een keur van kiemen

5 Tabel C

Kiemen Remmingszones (diameters mm = van de creme-formulering) _1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

M2S3 M2 S3B6 S3 B6 M2B6 M2S3B6 DJ AJ 10 (C. albicans) 15,3 9,2 17,7 0 11,2 23 27 17,2 * (N.C.Y.C.610) T. mentagrophytes (N.C.P.F.80) 34 30,5 38 27,3 37,3 47,5 55 43 * 15 voorgekiemd T. mentagrophytes (N.C.P.F.80) 31,5 37,8 52,5 22,5 42 51,3 54,3 43 * microconidia 20 S. aureus 49,3 24,5 42,8 43,2 34,2 36 48,9 30,2 20,3 (N.C.T.C.6749 S.D.A.platen)

Ps. aeruginosa 11,8 0 21,3 14,3 14,8 16,7 20,8 12,7 0 25 (N.C.T.C.10332 S.D.A.platen) C. albicans 33,3 16,7 24,7 11,2 21,5 33,3 33,7 39,8 20,3 (N.C.Y.C.610) 30 T. mentagrophytes 50,5 41,8 50,3 28,3 47,8 54,2 52,3 37 32 (A.T.C.C.18748) T. mentagrophytes 61,8 45,3 55,3 36,8 45,8 60,3 49,0 40,8 33 (N.C.P.F.80) 35 * = niet gemeten M = Miconazol (%), B = benzoëzuur (%) S = salicylzuur (%), DS = DaktarirÊ)(Janssen), AJ = Acnidazol© (Janssen) 40 i8802008 14

Onderzochte creme-formuleringen (bereid en beschreven in de voorbeelden IV-VI)

Creme 1

Samenstel 1i ng % 5 zachte paraffine (wit) 23,75 propyleenglycol 11,40 cetostearylalcohol 23,75 cetrimide 0,95 methylparaben 0,025 10 propylparaben 0,015 water 35,15

Miconazolnitraat 2,00 salicylzuur 3,00 benzoëzuur 0,00 15

Creme 2

Samenstelling % zachte paraffine (wit) 24,50 propyleenglycol 11,75 20 cetostearylalcohol 24,50 cetrimide 0,98 methylparaben 0,025 propylparaben 0,015 water 36,25 25 Miconazolnitraat 2,00 salicylzuur 0 benzoëzuur 0

Creme 3 30 Samenstel 1i ng % zachte paraffine (wit) 22,75 propyleenglycol 10,92 cetostearylalcohol 22,75 cetrimide 0,91 35 methylparaben 0,025 propylparaben 0,015 water 33,67

Miconazolnitraat 0,00 salicylzuur 3,00 40 benzoëzuur 6,00 i8802008 15

Creme 4

Samenstelling % zachte paraffine (wit) 24,25 propyleenglycol 11,64 5 cetostearylalcohol 24,25 eetrimide 0,97 methylparaben 0,025 propylparaben 0,015 water 35,89 10 Miconazolnitraat 0,00 salicylzuur 3,00 benzoëzuur 0,00

Creme 5 15 Samenstelling % zachte paraffine (wit) 23,50 propyleenglycol 11,28 cetostearylalcohol 23,50 eetrimi de 0,94 20 methylparaben 0,025 propylparaben 0,015 water 34,78

Miconazolnitraat 0,00 salicylzuur 0,00 25 benzoëzuur 6,00

Creme 6

Samenstelling % zachte paraffine (wit) 23,00 30 propyleenglycol 11,04 cetostearylalcohol 23,00 eetrimide 0,92 methylparaben 0,025 propylparaben 0,015 35 water 34,04

Miconazolnitraat 2,00 salicylzuur 0,00 benzoëzuur 6,00 . 8802 008.

16

V

Creme 7

Samenstel1 i ng % zachte paraffine (wit) 22,25 propyleenglycol 10,68 5 cetostearylalcohol 22,25 cetrimide 0,89 methylparaben 0,025 propylparaben 0,015 water 32,93 10 Miconazolnitraat 2,00 1) salicylzuur 3,00 benzoëzuur 6,00

Creme 8 DaktariilD(Janssen) 2 gew.% Miconazolnitraat.

15

Creme 9 Acnidazill) (Janssen) 2 gew.% Miconazolnitraat en 5 gew.% benzoyl peroxide.

1) De concentratie werd tot 0,1¾ verminderd, waarbij geen verlies 20 van de werking is vast te stellen.

Fungicide werkzaamheid van Miconazol met salicylzuur en/of benzoëzuur Subcultures van uitgevoerde MIC-proeven voor de bepaling van de MBC (minimum bactericidal concentration = minimale bactericide concen-25 tratie) doen herkennen, dat benzoëzuur en salicylzuur een fungicide werkzaamheid bij concentraties bezitten, die slechts enigszins hoger liggen dan de concentraties van de vastgestelde MIC-waarden. De micro-bicide werkzaamheid van actieve bestanddelen werd door middel van mi-croconidia als kiemen onderzocht, waarbij de werkwijze voor de bepaling 30 van het dodingspercentage werd toegepast.

Concentraties van è 20 /ug/ml aan Miconazol waren binnen 24 uur fungicide werkzaam en benzoëzuur en salicylzuur bij concentraties van 400-600 /ug/ml.

Een combinatie van verdere lagere concentraties over een proefpe-35 riode van 6 uur laat zien, dat salicylzuur telkens de fungicide waardering van Miconazol bij een concentratie van 20 of ook 10 /ug/ml verhoogt. De combinatie van benzoëzuur en salicylzuur geeft wederom een verbeterde fungicide werking.

De activiteit tegenover sporen kan zowel als remmend alsook als d-40 odend worden geklassificeerd. Het bewijs wordt geleverd, doordat men . 8802008 17 bij aanwezigheid, resp. na het verwijderen van de actieve werkzame stoffen, door meting van het vermogen koloniën te vormen, de activiteit bepaalt.

Miconazol (10 /ug/ml) en salicylzuur (200 /ug/ml) alleen of 5 combinaties van beide werken remmend, omdat de kieming wordt geremd, echter enkele kiemen overleven.

Werkzaamheid van salicylzuur en Miconazol door aantonen van de levensvatbaarheid en het kiemvermogen (%) aan T. mentagrophytes microconidia 10

Tabel D

Combinatie Levensvat- (cfu/ml) % kiemver- pH

baarheid mogen op 15 op tijdstip (h) tijdstip (h) _6_24 _6 24_ controle 3,5 x 105 2,4 x 105 12 65 M10 5,9 x 105 7,0 x 104 9 11 5,88 M10/S 200 8,3 x 10* 2,3 x 10^ 6 16 5,41 20 M10/S 400 0 0 4 13 5,06 M20 3,3 x 1Q5 4,6 x 105 7 5 5,84 M20/S 200 2,2 x 104 5,3 x 103 8 13 5,41 M20/S 400 0 0 9 12 5,07 S 200 4,8 x 105 1,2 x 105 12 41 5,43 25 S 400_0_0_14 14 5,08 M = Miconazol, S = salicylzuur

Begintelling bij T0 geeft 7,9 x 105 cfu/ml. Verschillende concentraties van Miconazol in de creme-formuleringen worden bij T. menta-30 grophytes (tabel E) onderzocht. De formuleringen, die MSB bevatten, zijn significant beter dan die, die SB bevatten. De 2% MSB bevattende creme-förmulering was significant beter dan de andere onderzochte, waartegenover diegene, die 0,1-1% Miconazol bevatten niet significant van elkaar verschillend zijn, in het bijzonder echter significant beter 35 dan formuleringen, die SB bevatten, of commerciële produkten, die slechts 2% Miconazol (Daktarir®) bevatten.

v 8802008 4 18

Werking van de concentratie van Miconazol in creme-formuleringen, die salicylzuur (3%) en benzoëzuur (6%) bevatten tegen T. mentagrophytes

5 Tabel E

Creme Diameter remmingszones (mm) _1_2_3_4_5 gemidd. St.afw.

1. Miconazol 2% 46 44 45,5 45 42,5 44,6 1,39 10 2. Miconazol 1% 40 40,5 43 44,5 43,44 42,2 1,89 3. Miconazol 0,5¾ 40,5 40,5 40,5 44 42 41,8 1,44 4. Miconazol 0,25% 42,5 40,5 40 42 39 40,8 1,44 5. Miconazol 0,1% 42,5 40,5 40,5 40 42,5 41,2 1,20 6. Miconazol 0% 34 36 35,5 35 34 34,9 0,89 15 7. Miconazol 2% 33,5 30 31 29 NT 30,9 1,93 (Daktarin)_ T. mentagrophytes 7,5 x 104 Significantie (0,05%) 20 Multiple-Range-Test (Neuman Keuls) voor de significantie (0,05%) 1 vs 2,3,4,5,6,7 significante verschillen 2 vs 3,4,5 geert significante verschillen 2 vs 6,7 significante verschillen 25 3 vs 4,5 geen significante verschillen 3 vs 6,7 significante verschillen 4 vs 5 geen significante verschillen 4 vs 6,7 significante verschillen 5 vs 6,7 significante verschillen 30 6 vs 7 significante verschillen

Tabel E laat zien, dat het synergistische effect over een grote breedte aan verschillende concentraties van Miconazol te verkrijgen is.

35 2. Een verder bewijs voor het synergisme kan aan de hand van de kinetische gegevens in tabel F worden geleverd.

Het dodingspercentage aan T. mentagrophytes microconidia bij toepassing van Miconazol (M) alleen of in combinatie met benzoëzuur (B) en salicylzuur (S) wordt bepaald.

.8802008 19

Tabel F

Tijd M20 M20+S 200 M20+B 200 M10 M10+S 200 M10+B 200 5 jh)_ 1 1 xl05 1,1x105 6,7x104 2,0x105 1s3x105 1,2x105 2 3,3x104 1,2x104 2,3x104 9,2x104 5,8x104 4,2x104 10 4 2,2x10-4 Ι,δχΙΟ3 1,9x104 Ι,βχΙΟ3 1,5x10* 2,5xl04 6 1,4x104 5,0x102 1,2x1<)4 7,5x104 8,3xl03 2,6χΠ)4 24 8,3x102 o 4,2x102 2,3x10* 153x102 1,7x10* pH-waarden vooraf 5,98 5,57 5,50 5,94 5,54 5,49 achteraf 5,95_5,54_5,50_5,93_5,53_5,48 20 S = salicylzuur, B = benzoëzuur

Begintelling bij T0 geeft 5,9 x 103 efu/ml.

Alle oplossingen worden in SLM* (SLM + 0,5% DMF) op de voorgaande dag uitgevoerd om een volledige oplossing te garanderen.

25 Aan 0,1 ml Trichophyton mentagrophytes microconidia wordt 9,9 ml van een monster (geschat T. ment. bij 1 x 108 cfu/ml) toegevoegd. Het tellen van de levensvatbare kiemen heeft uit een kiemoplossing plaats. De onttrokken volumina van 0,1 ml worden met een pipet van 100 /ul uitgevoerd.

30 De monsters worden zonder uitzondering op een temperatuur van 32°C gehouden.

1 ml wordt na 1, 2, 4, 6, 24 uur verwijderd en het tellen van de levensvatbare kiemen wordt uitgevoerd.

De verdunningen in reeksen hebben in 0,1% pepton-water plaats en 35 worden op platen verdeeld onder toepassing van de methode van Miles en Migra op SDA (dextrose-agar van Sabouraud). De platen worden na 6 en 14 dagen afgelezen.

.8802008 t 20

Monster Concentratie 1 M 20 /ug/ml 2 M20 + S 200 /ug/ml 53 M 20 + B 200 /ug/ml 4 M 10 /ug/ml 5 M 10 + S 200 /ug/ml 6 M 10 + B 200 /ug/ml 10 S = salicylzuur B = benzoëzuur MIC-waarden worden eveneens in (SLM*) voor Miconazol uitgevoerd.

De concentraties aan Miconazol zijn: 4, 2, 1, 0,5, 0,25, 0,125 /ug/ml (duplicaten).

15 0,1 ml T. microconidia wordt toegevoegd om een eindconcentratie van ongeveer 1 x K)5 cfu/ml (hetzelfde kiembegin zoals hierboven) te verkrijgen.

De uitvinding wordt door de volgende voorbeelden toegelicht, echter niet beperkt.

20 Voorbeeld I

Een poeder, dat 2% Miconazolnitraat, 2% salicylzuur en 3% benzoëzuur bevat, wordt op de volgende wijze bereid:

Samenstel 1i ng 25 Miconazolnitraat 2 ,% salicylzuur 2 % benzoëzuur 3 % amorf silicumdioxide 0,1 % talk, gezuiverd en fijngemalen ad 100 % 30

Miconazolnitraat, salicylzuur en benzoëzuur worden bij aanwezigheid van amorf siliciumdioxide fijngemalen. Het microfijne mengsel wordt vervolgens in kleine hoeveelheden aan de steriele, fijngemalen en gezuiverde talk toegevoegd. Het mengen wordt zo lang voortgezet tot een 35 homogeen produkt wordt verkregen.

Voorbeeld II

Een aerosol formulering, die 3% Miconazolnitraat, 3% salicylzuur en 6% benzoëzuur bevat, wordt als volgt bereid: . 8802008 21

Samenstelling

Mi conazolnitraat 3 % salicylzuur 5 % 5 benzoëzuur 6 %

Tween 80 0,1 % amorf silicumdioxide 0,1 % gedeodoriseerde koolwaterstof s.q.

10 Een fijngemalen mengsel van Miconazolnitraat, salicylzuur, benzoëzuur en amorf siliciumdioxide wordt (zoals hierboven bij de poe-derbereiding beschreven) bereid. Tween 80 wordt vervolgens als alcoholische oplossing met intervallen erop gesproeid om een verdampen van het dragermateriaal en een gelijkmatige verdeling te waarborgen. Het 15 met Tween 80 beklede poeder wordt vervolgens in de gedeodoriseerde koolwaterstof gesuspendeerd en vervolgens onder normale standaardtechnieken verpakt. Als koolwaterstof wordt een niet ontvlambare met geschikte eigenschappen gekozen.

Voorbeeld III

20 Een lotionformulering, die 1% Miconazolnitraat, 3% salicylzuur en 6% benzoëzuur bevat, wordt als volgt bereid:

Samenstelling

Miconazolnitraat 1 % 25 salicylzuur 3 % benzoëzuur 6 % butylhydroxytolueen 2 % diethyltoluamide 2 % polyethyleenglycol 400 ad 100 % 30

Miconazolnitraat, salicylzuur en benzoëzuur worden in de helft van de in totaal toegepaste hoeveelheid polyethyleenglycol 400 opgelost en butylhydroxytolueen en diethyltoluamide worden toegevoegd tot een heldere oplossing verkregen wordt. Het resterende polyethyleenglycol 35 400 wordt vervolgens ter opvulling toegevoegd.

Voorbeeld IV

Een creme, die 2% Miconazolnitraat, 3¾ salicylzuur en 6% benzoëzuur bevat, wordt als volgt bereid: . 8802008 o 22

Samenstel1i ng zachte paraffine (wit) 22,25 % proplyleenglycol 10,68 % 5 cetostearylalcohol 22,25 % cetrimide 0,89 % methyl paraben 0,025 % propylparaben 0,015 % water 32,93 % 10 Miconazolnitraat 2,00 % salicylzuur 3,00 % benzoëzuur 6,00 %

Men kan voor de bereiding een smelt- of een dispersietechniek toe-15 passen. Het witte zachte paraffine, propyleenglycol en de cetostearyl-alcohol worden gemengd en verhit tot een gelijkmatige viskeuze vloeistof wordt verkregen. Miconazolnitraat, salicylzuur en benzoëzuur worden in deze vloeistof met paraben opgelost. Het cetrimide wordt in water bij 60° opgelost en onder voortdurend roeren aan de oliefase toe-20 gevoegd. Men verkrijgt een homogene creme. Het resterende water wordt toegevoegd en het mengsel wordt verder gehomogeniseerd.

Voorbeeld V

Een cremeformulering, die 2% Miconazolnitraat en 3% salicylzuur bevat, wordt zoals bij voorbeeld IV beschreven, bereid: 25

Samenstelling zachte paraffine (wit) 23,75 % propyleenglycol 11,40 % cetostearylalcohol 23,75 % 30 cetrimide 0,95 % methylparaben 0,025 % propylparaben 0,015 % water 35,15 %

Miconazolnitraat 2,00 % 35 salicylzuur 3,00 %

Voorbeeld VI

Een cremeformulering, die 2% Miconazolnitraat en 6% benzoëzuur bevat, wordt zoals bij voorbeeld IV beschreven, bereid: .8802008 23

Samenstelling zachte paraffine (wit) 23,00 % proplyleenglycol 11,04 % 5 cetostearylalcohol 23,00 % cetrimide 0,92 % methylparaben 0,025 % propylparaben 0,015 % water 34,04 % 10 Miconazolnitraat 2,00 % salicylzuur 0,00 % benzoëzuur 6,00 %

Voorbeeld VII

15 Een creme, die 2% CTotrimazol, 3% salicylzuur en 6% benzoëzuur bevat, wordt als volgt bereid:

Samenstelling zachte paraffine (wit) 22,25 % 20 propyleenglycol 10,68 % cetostearylalcohol 22,25 % cetrimide 0,89 % methylparaben 0,025 % propylparaben 0,015 % 25 water 32,93 % CTotrimazol 2,00 % salicylzuur 3,00 % benzoëzuur 6,00 % 30 Analoog aan voorbeeld IV kan men voor de bereiding een smelt- of een dispersietechniek toepassen. Het witte zachte paraffine, propyleen-glycol en de cetostearylalcohol worden gemengd en verhit tot een gelijkmatige viskeuze vloeistof wordt verkregen. CTotrimazol, salicylzuur en benzoëzuur worden in deze vloeistof met paraben opgelost en onder 35 voortdurend roeren aan de oliefase toegevoegd. Men verkrijgt een homogene creme. Het resterende water wordt toegevoegd en het mengsel wordt verder gehomogeniseerd.

Voorbeeld VIII

Een cremeformulering, die 2% Clotrimazol en 3% salicylzuur be-40 vat, wordt zoals bij voorbeeld VII beschreven, bereid: > 8802008

V

\ 24

Samenstelling zachte paraffine (wit) 23,75 % proplyleenglycol 11,40 % 5 cetostearylalcohol 23,75 % eetrimi de 0,95 % methyl paraben 0,025 % propylparaben 0,015 % water 35,15 % 10 Clotrimazol 2,00 % salicylzuur 3,00 %

Voorbeeld IX

Een cremeformulering, die 2% Clotrimazol en 6% benzoëzuur 15 bevat, wordt zoals bij voorbeeld VII beschreven, bereid:

Samenstelling zachte paraffine (wit) 23,00 % propyleenglycol 11,04 % 20 cetostearylalcohol 23,00 % eetrimi de 0,92 % methylparaben 0,025 % propylparaben ' 0,015 % water 34,04 % 25 Clotrimazol 2,00 % salicylzuur 0,00 % benzoëzuur 6,00 % 8802008

Claims (11)

1. Antimicrobiële farmaceutische preparaten voor de topische toepassing, gekenmerkt door de combinatie, die bestaat uit een antimi-crobiële werkzame stof uit de groep van werkzame stoffen, die in het molecule ervan een met een klein alkyl gesubstitueerd imidazool bevat- 5 ten, overeenkomende met een verbinding met formule 1, waarin ten minste een van de substituenten Rj, R2 en R3 een halogeenatoom en de andere waterstof voorstellen, alsmede ook de farmaceutisch aanvaardbare zuur-additiezouten ervan of overeenkomende met een verbinding met formule 2, waarin R4 een halogeenatoom voorstelt, met een of meer even-10 tueel gesubstitueerde benzoëzuren en eventueel gebruikelijke farmaceutische dragers en/of hulpstoffen.

2. Antimicrobiële farmaceutische preparaten voor de topische toepassing volgens conclusie 1, gekenmerkt door de combinatie, die bestaat uit een verbinding met de formule 1, waarin ten minste een van de 15 substituenten Rj, R£ en R3 een chlooratoom en de overige waterstof voorstellen, alsmede ook de farmaceutisch aanvaardbare zuur-additiezouten ervan, zoals b.v. Miconazol (Ri = R2 = Cl, R3 = H), Econazol (R3 = Cl, Ri = R3 = H) en Isoconazol (Ri = R3 = Cl, R2 = H) of uit een verbinding met de formule 2, waarin R4 een 20 chlooratoom betekent, zoals b.v. Clotrimazol en een of meer eventueel gesubstitueerde benzoëzuren en eventueel gebruikelijke farmaceutische dragers en/of hulpstoffen.

3. Antimicrobiële farmaceutische preparaten voor de topische toepassing volgens conclusie 1 of 2, gekenmerkt door de combinatie, die 25 bestaat uit Miconazol als verbinding met de formule 1, waarin Rj en R2 een chlooratoom en R3 waterstof voorstellen of van een farmaceutisch aanvaardbaar zuur-additiezoirt ervan of uit een verbinding met de formule 2, waarin R4 een chlooratoom betekent, Clotrimazol en sali-cylzuur en/of benzoëzuur en eventueel gebruikelijke farmaceutische 30 dragers en/of hulpstoffen.

4. Antimicrobiële farmaceutische preparaten voor de topische toepassing volgens een der voorgaande conclusies, gekenmerkt door de combinatie, die bestaat uit Miconazolnitraat en salicylzuur en/of benzoëzuur en eventueel gebruikelijke farmaceutische dragers en/of hulp- 35 stoffen.

5. Antimicrobiële farmaceutische preparaten voor de topische toepassing volgens een der voorgaande conclusies, gekenmerkt door de combinatie, die bestaat uit Clotrimazol en salicylzuur en/of benzoëzuur en eventueel gebruikelijke farmaceutische dragers en/of hulpstoffen. <. 8802008 V

6. Antimicrobiële farmaceutische preparaten voor de topische toepassing volgens een der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de preparaten 0,01-10 gew.% van een met een kleine alkyl groep gesubstitueerd imidazool met de formule 1 of 2 en 0,5-25 gew.% van een of meer eventueel 5 gesubstitueerde benzoëzuren tezamen met gebruikelijke dragers en/of hulpstoffen voor de topische toepassing bevatten.

7. Antimicrobiële farmaceutische preparaten voor de topische toepassing volgends een der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de preparaten 0,1-2,0 gew.% van een met een kleine alkylgroep gesubsti- 10 tueerd imidazool met de formule 1 of 2 en 1,0-15,0 gew.% van een of meer eventueel gesubstitueerde benzoëzuren tezamen met gebruikelijke dragers en/of hulpstoffen voor de topische toepassing bevatten.

8. Antimicrobiële farmaceutische preparaten voor de topische toepassing volgens een der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat 15 de preparaten een synergistisch werkzame hoeveelheid van een met een kleine alkylgroep gesubstitueerd imidazool met de formule 1 of 2 en een of meer eventueel gesubstitueerde benzoëzuren tezamen met gebruikelijke dragers en/of hulpstoffen voor de topische toepassing bevatten.

9. Antimicrobiële farmaceutische preparaten voor de topische 20 toepassing volgens een der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de preparaten in de vorm van een gel, een creme, een zalf, pasta, een poeder, een oplossing, tinctuur, een schuim, een spray, aerosol, collodion of lotion verkeren.

10. Werkwijze ter bereiding van een antimicrobieel farmaceutisch 25 preparaat voor de topische toepassing, met het kenmerk, dat men een antimicrobieel werkzame stof uit de groep van werkzame stoffen, die in het molecule ervan een met een klein alkyl gesubstitueerd imidazool bevatten, hetzij van een verbinding met de formule 1, waarin ten minste een van de substituenten Rj_, R2 en R3 een hal ogeenatoom en de an- 30 dere waterstof voorstellen, alsmede ook de farmaceutisch aanvaardbare zuur-additiezouten ervan, hetzij overeenkomende met een verbinding met formule 2, waarin R4 een halogeenatoom betekent, met een of meer eventueel gesubstitueerde benzoëzuren en eventueel gebruikelijke farmaceutische dragers en/of hulpstoffen mengt.

11. Toepassing van een antimicrobieel farmaceutisch preparaat vol gens een van de conclusies 1-9 als antimykotisch werkzaam middel voor de behandeling van door dermatofyten en spruitschimmels veroorzaakte infecties van de huid, als antibacterieel werkzaam middel voor de behandeling van acne, roos en andere huidziekten en als anti-pruritisch 40 werkzaam middel voor de behandeling van pruritusziekten. +++++++ v 8802008