NL8303978A - ENZYMATIC SYNTHESIS OF L-SERINE. - Google Patents
ENZYMATIC SYNTHESIS OF L-SERINE. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8303978A NL8303978A NL8303978A NL8303978A NL8303978A NL 8303978 A NL8303978 A NL 8303978A NL 8303978 A NL8303978 A NL 8303978A NL 8303978 A NL8303978 A NL 8303978A NL 8303978 A NL8303978 A NL 8303978A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- serine
- concentration
- enzyme
- hydroxymethyl transferase
- tetrahydrofolate
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1003—Transferases (2.) transferring one-carbon groups (2.1)
- C12N9/1014—Hydroxymethyl-, formyl-transferases (2.1.2)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
- -1- * VO 5235-1- * VO 5235
Enzymatische synthese van L-serine.Enzymatic synthesis of L-serine.
De uitvinding betreft een werkwijze voor het synthetiseren van het aminozuur L-serine. Het aminozuur L-serine is een waardevol handelsprodukt dat wordt gebruikt in hyperalimentatie en voedings-preparaten en tevens wordt gebruikt als tussenprodukt of uitgangs-5 materiaal voor diverse synthetische werkwijzen. Er bestaat dus vraag naar L-serine en diverse werkwijzen zijn ontwikkeld voor de produktie daarvan. Een aantal van deze werkwijzen omvat de produktie vein L-serine door een fermentatie. Zie bijvoorbeeld Agric. Biol. Chem. 45(6)1419-24 (1981); ibidem 45(6) 1425 - 1430 (1981) en Amerikaans octrooischrift 10 3.616.224; deze literatuurplaatsen beschrijven alle een werkwijze voor het bereiden van diverse aminozuren met inbegrip van serine, door fermentatie van diverse bacteriestammen, welke worden gekweekt op voedingsbodems die methanol als koolstofbron bevatten; zie eveneens Amerikaanse octrooischrift 3.943.038, dat een werkwijze beschrijft voor het berei-15 den van serine en andere aminozuren door het kweken van specifieke stammen van diverse bacteriën in een waterig medium en wel bij aanwezigheid van zuurstof, waterstof en kooldioxyde.The invention relates to a method for synthesizing the amino acid L-serine. The amino acid L-serine is a valuable commercial product that is used in hyperalimentation and nutritional preparations and is also used as an intermediate or starting material for various synthetic processes. Thus, there is a demand for L-serine and various methods have been developed for its production. Some of these methods involve the production of L-serine by fermentation. See, for example, Agric. Biol. Chem. 45 (6) 1419-24 (1981); ibidem 45 (6) 1425-1430 (1981) and U.S. Patent No. 3,616,224; these literature references all describe a method for preparing various amino acids, including serine, by fermentation of various bacterial strains grown on culture media containing methanol as a carbon source; see also U.S. Patent 3,943,038, which describes a method for preparing serine and other amino acids by culturing specific strains of various bacteria in an aqueous medium in the presence of oxygen, hydrogen and carbon dioxide.
Een algemeen gebrek bij de fermentatiemethoden volgens de stand van de techniek is dat de concentratie van het in de voedingsbodem ge-20 produceerde L-serine laag is en dus relatief weinig serine kan worden gewonnen, zelfs na een betrekkelijk lange fermentatie.A general shortcoming in the prior art fermentation methods is that the concentration of L-serine produced in the culture medium is low and thus relatively little serine can be recovered even after a relatively long fermentation.
Serine kan tevens langs chemische weg worden bereid, zie bijvoorbeeld Kanedo: Synthetic Production and Utilization of Amino Acids, Halsted Press Books (1974). vaak leveren deze chemische methoden serine 25 als een racemisch mengsel van de optische D-en L-isomeren of in de vorm van het minder gewenste D-isomeer. DL-mengsels moeten worden gescheiden met behulp van D-serine verbruikende bacteriën, serine-racemase, door L-aminozuur-acylase, fractionele kristallisatie van serine derivaten of overeenkomstige methoden, waardoor het produkt duurder wordt.Serine can also be prepared chemically, see, for example, Kanedo: Synthetic Production and Utilization of Amino Acids, Halsted Press Books (1974). often these chemical methods provide serine as a racemic mixture of the optical D and L isomers or in the form of the less desirable D isomer. DL mixtures must be separated using D-serine-consuming bacteria, serine racemase, by L-amino acid acylase, fractional crystallization of serine derivatives or similar methods, making the product more expensive.
30 Het is bekend, dat L-serine uit glycine kan worden verkregen.Een biologische produktie van L-serine uit glycine is bereikt met diverse micro-organismen, zie bijvoorbeeld J. Ferment. Technol. 59_ 447 (1981). Evenals bij de fermentatie-methoden is het nadeel van deze bekende methode , dat de opbrengst aan L-serine niet erg hoog is.It is known that L-serine can be obtained from glycine. An organic production of L-serine from glycine has been achieved with various microorganisms, see for instance J. Ferment. Technol. 59_ 447 (1981). As with the fermentation methods, the drawback of this known method is that the yield of L-serine is not very high.
35 Er bestaat dus behoefte aan een methode voor het synthetiseren 8303378Thus, there is a need for a method of synthesizing 8303378
* - V* - V
-2- van L-serine in hoge opbrengsten. De uitvinding betreft een werkwijze voor het synthetiseren van L-serine waarbij dit serine in hoge concentraties en in oplossing wordt gevormd, waaruit het op een effectieve wijze kan worden gewonnen.-2- of L-serine in high yields. The invention relates to a method of synthesizing L-serine in which this serine is formed in high concentrations and in solution, from which it can be effectively recovered.
5 Tevens betreft de uitvinding enzymmiddelen voor het produceren van L-serine, waarbij de reactie kan worden uitgevoerd als charge-gewijze werkend of geïmmobiliseerd systeem.The invention also relates to enzyme agents for producing L-serine, in which the reaction can be carried out as a batchwise or immobilized system.
Gevonden werd, dat L-serine effectief uit. glycine en formaldehyde kan worden gesynthetiseerd bij aanwezigheid van bio-katalytische 10 hoeveelheden van hetenzym serine-hydroxymethyltransferase en de co-factor tetrahydrofolaat onder serine-producerende voorwaarden. Het enzym kan aanwezig zijn in gehele cellen, als ruw extract of als gezuiverd enzym en kan al of niet in geïmmobiliseerde vorm optreden.L-serine has been found to be effective. glycine and formaldehyde can be synthesized in the presence of biocatalytic amounts of the enzyme serine hydroxymethyl transferase and the co-factor tetrahydrofolate under serine producing conditions. The enzyme may be present in whole cells, as a crude extract or as a purified enzyme, and may or may not be in immobilized form.
Het is bekend, dat het enzym serine-hydroxymethyltransferase 15 (hieronder aangeduid als SHMT)de splitsing van serine tot glycine katalyseert in een reactie die afhankelijk is van de co-factoren pyridoxal-5'-fosfaat en tetrahydrofolaat. Deze reactie levert glycine en methyleen-tetrahydrofolaat op. (zie Advances in Enzymology 53_, 83 (1982). Er werd nu gevonden,dat het SHMT enzym effectief kan worden 20 gebruikt als een bio-katalysator voor de praduktie van L-serine uit glycine en formaldehyde. De reactie vindt plaats bij aanwezigheid van de co-factor tetrahydrofolaat (THF). De THF-bron kan dezelfde bron zijn als die voor het SHMT, omdat THF ook in micro-organismen wordt gevonden die SHMT bevatten, maar het THF kan ook uit andere bron af-25 komstig zijn. Een voordeel van deze methode is dat slechts het optische L-serine isomeer wordt geproduceerd. Een verder voordeel is, dat na afloop van de reactie de afvoer van de reactor slechts glycine en L-serine bevat en geen complex mengsel zoals men mag verwachten bij een · fermentatie-vloeistof of als gevolg van een chemische synthese.It is known that the enzyme serine hydroxymethyl transferase 15 (referred to below as SHMT) catalyzes the cleavage of serine to glycine in a reaction dependent on the cofactors pyridoxal-5'-phosphate and tetrahydrofolate. This reaction yields glycine and methylene tetrahydrofolate. (See Advances in Enzymology 53_, 83 (1982). It has now been found that the SHMT enzyme can be effectively used as a biocatalyst for the production of L-serine from glycine and formaldehyde. The reaction takes place in the presence of the co-factor tetrahydrofolate (THF) The THF source may be the same source as that for SHMT, since THF is also found in microorganisms containing SHMT, but the THF may also come from other sources. An advantage of this method is that only the optical L-serine isomer is produced, a further advantage is that at the end of the reaction the reactor effluent contains only glycine and L-serine and not a complex mixture as one would expect at a Fermentation liquor or as a result of chemical synthesis.
30 Het was verrassend, dat L-serine uit glycine en formaldehyde kon worden gesynthetiseerd want van formaldehyde is bekend, dat het chemisch met eiwitten reageert en enzymen inactiveert, Advances in Protein Chemistry .2,277-335 (1945) . In werkelijkheid wordt SHMT ook snel door formaldehyde geïnactiveerd, maar gevonden werd, dat het enzym kan 35 worden beschermd door toevoeging van een overmaat tetrahydrofolaat aan het reactiemengsel. Dit THF reageert met het formaldehyde, waardoor het enzym wordt beschermd.It was surprising that L-serine could be synthesized from glycine and formaldehyde because formaldehyde is known to react chemically with proteins and inactivate enzymes, Advances in Protein Chemistry, 2,277-335 (1945). In reality, SHMT is also rapidly inactivated by formaldehyde, but it has been found that the enzyme can be protected by adding an excess of tetrahydrofolate to the reaction mixture. This THF reacts with the formaldehyde, protecting the enzyme.
< 83 0 3 9 7 8 f. ƒ 1^* -3-<83 0 3 9 7 8 f. ƒ 1 ^ * -3-
Chemische modificatie van SHMT levert eveneens stabiliteit en bescherming tegen formaldehyde -inactivering op. Bijvoorbeeld werd gevonden, dat een reactie van imidoësters met amino-groepen (Chemical Modification of Proteins, Holden-Day, Ine., 1971) op het enzymoppervlak 5 het mogelijk maakt dat het enzym bij aanwezigheid van hogere concentraties aan formaldehyde kan functioneren, dan een niet-gemodificeerd enzym.Chemical modification of SHMT also provides stability and protection against formaldehyde inactivation. For example, it has been found that a reaction of imido esters with amino groups (Chemical Modification of Proteins, Holden-Day, Ine., 1971) on the enzyme surface 5 allows the enzyme to function in the presence of higher concentrations of formaldehyde than a unmodified enzyme.
De enzymatische weg die naar alle waarschijnlijkheid leidt tot het onderhavige L-serine luidt aldus:The enzymatic pathway which in all probability leads to the present L-serine is thus:
10 formaldehyde + THF ^ ^ methyleen-THFFormaldehyde + THF ^ ^ methylene-THF
SHMT -ΛSHMT -Λ
methyleen THF + glycine ^- L-serine + THFmethylene THF + glycine ^ - L-serine + THF
Bij voorkeur wordt de reactie uitgevoerd onder anaerobe voor-15 waarden, bij voorbeeld een stikstofatmosfeer om een oxydatie van THF tegen te gaan.Preferably, the reaction is carried out under anaerobic conditions, for example a nitrogen atmosphere, to prevent oxidation of THF.
De substr'aten, het SHMT, en de co-factor, THF, kunnen op verschillende wijze tezamen reageren. Hoewel de volgorde waarin reactanten . . en katalysatoren worden toegevoerd niet kritisch is, worden bij voor-The substrates, the SHMT, and the co-factor, THF, can react together in different ways. Although the order in which reactants. . and catalysts are fed is not critical, are preferably
20. keur glycine en formaldehyde langzaam aan SHMT bij aanwezigheid van THF toegevoegd. De reactie wordt uitgevoerd onder L-serine producerende voorwaarden. Wanneer het E.coli SHMT gen (glyA) als bron voor SHMT wordt gebruikt, omvatten deze voorwaarden gewoonlijk een reactietemperatuur tussen 4 en 60°C en een pH tussen 4 en 11. De voorkeursreactie-voor-25 waarden omvatten een uitvoering van de reactie bij 20 - 45°C en een pH20. Add glycine and formaldehyde slowly to SHMT in the presence of THF. The reaction is performed under L-serine producing conditions. When the E.coli SHMT gene (glyA) is used as a source of SHMT, these conditions usually include a reaction temperature between 4 and 60 ° C and a pH between 4 and 11. The preferred reaction conditions include an implementation of the reaction at 20 - 45 ° C and a pH
van 6 - 8,5. Indien de temperatuur beneden 4°C is gelegen, verloopt de o re’actie zeer langzaam en indien de temperatuur boven 60 C komt kan het enzym worden gedenatureerd. Zo ook zal een pH beneden 4 of boven 11 het enzym inactiveren. SHMT is een enzym dat centraal staat in het metabo-30 lisme van micro en hogere organismen; er bestaan dus diverse mogelijke bronnen voor dit enzym. De voorwaarden-trajecten waaronder de reactie L-serine produceert, hangen van de enzymbron af. Bij voorbeeld kunnen enzymen uit thermofiele micro-organismen bij hogere temperaturen worden gebruikt dan indien de bron E.coli is.from 6 - 8.5. If the temperature is below 4 ° C, the reaction proceeds very slowly and if the temperature exceeds 60 ° C, the enzyme can be denatured. Likewise, a pH below 4 or above 11 will inactivate the enzyme. SHMT is an enzyme that is central to the metabolism of micro and higher organisms; there are therefore several possible sources for this enzyme. The conditions ranges under which the reaction produces L-serine depend on the enzyme source. For example, enzymes from thermophilic microorganisms can be used at higher temperatures than if the source is E. coli.
35 Het serine-hvdroxymethyltransferase kan de vorm hebben van gehele cellen, ruw extract of een gezuiverd enzym. Het enzym kan worden toege- 8303378 . -4- ♦ % past in een geïmmobiliseerde of niet-geimmobiliseerde vorm. Het enzym wordt toegepast in hoeveelheden die voldoende zijn voor een goede katalyse van de reactie.The serine hydroxymethyl transferase may be in the form of whole cells, crude extract or a purified enzyme. The enzyme can be added 8303378. -4- ♦% fits in an immobilized or non-immobilized form. The enzyme is used in amounts sufficient for proper catalysis of the reaction.
Het enzym kan worden verkregen uit micro-organismen die op ge-5 bruikelijke wijze wat betreft genetisch behandelen zijn gemodificeerd voor het produceren van hoge opbrengsten; zie Gene 15,63-72 (1981).The enzyme can be obtained from microorganisms which have been conventionally modified in genetic treatment to produce high yields; see Gene 15.63-72 (1981).
Het SHMT gen (glyA) kan worden geïsoleerd en gekloond in een plasmide dat vervolgens kan worden gebruikt voor een passende transformatie van gastheercellen resulterend in een hoog niveau aan SHMT. Mutant 10 micro-organismen die zijn gemodificeerd wat betreft hun methionine metabolisme zullen eveneens het SHMT overproduceren(Genetics 88, 221 (1978) en J. Bacteriol. 129 , 740 (1977)) Onder toepassing van de gen-kloon technieken is de enzymactiviteit tot twintig-voudig verhoogd en deze activiteit kan overeenkomen met meer dan tien procent van 15 het oplosbare eiwit in de cellen. Een E,coli-stam (Gxl703) getransformeerd met een dergelijk plasmide, m.n. een derivaat van pBR322 waarin het glyA-gen was gekloond, pGxl22, is gedeponeerd bij het NREL te Peoria, Illinois onder No. B-15215. Een Klebsiella aerogenes-stam (Gxl704) getransformeerd met een overeenkomstig maar kleiner plasmide met een 20 verandering die een hoog copie-nuramer veroorzaakt, pGXl39, is gedepo- . neerd bij het ATCC in Rockville, Maryland onder No. 39214 en een Salmonella typhimurium-stam (Gxl682) getransformeerd met pGxl39 is gedeponeerd als ATCC 39215.The SHMT gene (glyA) can be isolated and cloned into a plasmid which can then be used for an appropriate transformation of host cells resulting in a high level of SHMT. Mutant 10 microorganisms modified in their methionine metabolism will also over-produce SHMT (Genetics 88, 221 (1978) and J. Bacteriol. 129, 740 (1977)) Using the gene cloning techniques, the enzyme activity is up to increased twenty-fold and this activity may correspond to more than ten percent of the soluble protein in the cells. An E. coli strain (Gxl703) transformed with such a plasmid, i.e. a derivative of pBR322 into which the glyA gene had been cloned, pGxl22, has been deposited with NREL of Peoria, Illinois under No. B-15215. A Klebsiella aerogenes strain (Gxl704) transformed with a corresponding but smaller plasmid with a change causing a high copyuramer, pGXl39, has been deposited. filed with the ATCC in Rockville, Maryland under No. 39214 and a Salmonella typhimurium strain (Gxl682) transformed with pGxl39 has been deposited as ATCC 39215.
Wanneer voorts - het gen wordt genomen uit een monster zoals i 25 E.coli kan het 'worden gemodificeerd door een willekeurige of plaats- gerichte mutagenese ter produktie van een enzym met verbeterde stabiliteit. Ook kan het gen volledig chemisch worden gesynthetiseerd met diverse wijzigingen ter verbetering van de enzymstabiliteit tijdens het onderhavige procédé.Furthermore, when the gene is taken from a sample such as E. coli, it can be modified by random or site-directed mutagenesis to produce an enzyme of improved stability. Also, the gene can be fully chemically synthesized with various modifications to improve enzyme stability during the present process.
30 Bij toepassing van gehele cellen kunnen deze tevens een bron vormen voor THF. Desgewenst kan extra THF worden toegevoegd voor het bereiken van verzadigingsniveaus, die afhankelijk zijn van pH en temperatuur. Bijvoorbeeld bij een pH van 7,5 en een reactietemperatuur van circa 37°C kan in een waterige oplossing THF worden toegevoegd tot 35 een concentratie die duidelijk hoger is dan 50 mM. De pH moet worden geregeld terwijl het THF in oplossing gaat. Indien het SHMT als ruw extract of als gezuiverd enzym wordt toegevoegd is een onafhankelijke 8303978 . * -* -5- THF bron nodig. De hoeveelheid THF die kan worden toegevoegd varieert met de temperatuur, oplosvoorwaarden en de pE waarbij de reactie verloopt.When whole cells are used, they can also be a source of THF. If desired, additional THF can be added to achieve saturation levels, which depend on pH and temperature. For example, at a pH of 7.5 and a reaction temperature of about 37 ° C, THF can be added in an aqueous solution to a concentration well above 50 mM. The pH must be controlled while the THF goes into solution. If the SHMT is added as a crude extract or as a purified enzyme, an independent 8303978 is. * - * -5- THF source required. The amount of THF that can be added varies with the temperature, dissolution conditions and the pE at which the reaction proceeds.
Tevens is ontdekt, dat THF zijn activiteit jegens SHMT bij 5 immobilisatie behoudt. Immobilisatie van THF door het te hechten op een drager, die in een bioreactor voor het uitvoeren van de reactie % wordt aangebracht is gunstig, want hierdoor kan de co-factor vele malen herhaald worden gebruikt nadat de synthese van L-serine volledig is. Bijvoorbeeld kan THF worden geïmmobiliseerd met oplosbare polymeren, 10 zoals dextran, polyethyleen glycol of polyethyleenimine. Immobilisatie vindt plaats met behulp van een covalente hechting in de eerste twee gevallen en door een ionische interactie in het derde geval. Covalente aanhechting geschiedt gewoonlijk via de carboxylgroepen van het THF met een aminogroep van de drager. Ook kan onder toepassing van overeen-15 komstige aanhechtingsmethoden het THF op een onoplosbare drager worden gehecht. Ook is het mogelijk, indien serine chargegewijs wordt bereid het THF te recirculeren. Bijvoorbeeld kan na vorming van het L-serine de reactie-oplossing door geactiveerde kool worden geleid of door een ionen-uitwisselaar, die het THF vasthoudt en scheidt van de 20 L-serine-produkt-oplossing. Het THF kan vervolgens weer worden vrijgesteld en geneutraliseerd. OOk kan het THF door covalente aanhechting aan een klein molecule, zoals een glucosamine worden gemodificeerd om het terugwinnen van de co-f actor te vergemakkelijken. Nadat het L-serine is gevormd wordt de reactie-oplossing over een boraatkolom ge-25 leid- Dit boraat bindt slechts het THF-glucosamine, en het gemodificeerde THF kan worden vrijgesteld en gerecirculeerd.It has also been discovered that THF retains its activity towards SHMT at 5 immobilization. Immobilization of THF by adhering it to a support which is placed in a bioreactor to carry out the reaction% is beneficial, because it allows the co-factor to be used many times after the synthesis of L-serine is complete. For example, THF can be immobilized with soluble polymers, such as dextran, polyethylene glycol or polyethyleneimine. Immobilization is by covalent attachment in the first two cases and by ionic interaction in the third. Covalent attachment usually occurs through the carboxyl groups of the THF with an amino group of the support. Also, using corresponding attachment methods, the THF can be attached on an insoluble support. It is also possible if serine is prepared batch-wise to recycle the THF. For example, after formation of the L-serine, the reaction solution can be passed through activated carbon or through an ion exchanger, which retains the THF and separates it from the L-serine product solution. The THF can then be released and neutralized again. Also, the THF can be modified by covalent attachment to a small molecule, such as a glucosamine, to facilitate co-factor recovery. After the L-serine is formed, the reaction solution is passed over a borate column. This borate binds only the THF-glucosamine, and the modified THF can be released and recycled.
Glycine en formaldehyde worden bij voorkeur aan het tetrahydro-folaat-SHMT mengsel toegevoegd. De hoeveelheid glycine die kan worden toegevoegd varieert met de pH, de temperatuur , de oplosvoorwaarden 30 bij de reactie maar over het algemeen kan het worden toegevoegd tot het verzadigingsniveau is bereikt.Glycine and formaldehyde are preferably added to the tetrahydrofolate-SHMT mixture. The amount of glycine that can be added varies with the pH, temperature, dissolution conditions in the reaction, but generally it can be added until the saturation level is reached.
Als eerder gezegd kan formaldehyde zeer giftig zijn voor SHMT.As mentioned earlier, formaldehyde can be very toxic to SHMT.
Het formaldehyde wordt daarom gewoonlijk langzaam aan de andere compo-< nenten toegevoegd en deze toevoeging geregeld. Het formaldehyde wordt 35 toegevoegd in een hoeveelheid die voldoende is om de enzymatische activiteit te behouden, gewoonlijk tot het handhaven van een concentratie van ten hoogste 10 mM hoger dan de gebruikte THF-concentratie, S3C3978 -6- hoewel het formaldehyde kan worden toegevoegd tot een concentratie die 50 mM hoger is dan de gebruikte THF concentratie. Hoe groter de THF-concentratie in het systeem, des te hoger kan de formaldehyde-concentratie worden gehouden, want het THF reageert in gunstige zin 5 met het formaldehyde, waardoor het SHMI-enzym wordt beschermd. Het mechanisme van de reactie van THF met formaldehyde is beschreven in J. Biol. Chem. 241 (24), 5851-63 (1966). Hoe hoger de enzym-activiteit in de reactor, des te sneller kan het formaldehyde worden toegevoegd voor het handhaven van de gewenste concentratie.The formaldehyde is therefore usually added slowly to the other components and this addition is controlled. The formaldehyde is added in an amount sufficient to maintain the enzymatic activity, usually to maintain a concentration of up to 10 mM higher than the THF concentration used, S3C3978-6- although the formaldehyde can be added to a concentration that is 50 mM higher than the THF concentration used. The greater the THF concentration in the system, the higher the formaldehyde concentration can be kept, because the THF reacts favorably with the formaldehyde, thereby protecting the SHMI enzyme. The mechanism of the reaction of THF with formaldehyde is described in J. Biol. Chem. 241 (24), 5851-63 (1966). The higher the enzyme activity in the reactor, the faster the formaldehyde can be added to maintain the desired concentration.
10 Tevens is ontdekt dat het gunstig kan zijn een tweede SEMI! co- factor toe te voegen, te weten pyridoxal-5'-fosfaat. Dit pyridoxal-51' fosfaat wordt hecht aan het enzym gebonden. Indien L-serine in een reactor gedurende een lange tijd wordt gevormd, kan het pyridoxalfosfaat te loor gaan of worden geïnactiveerd, in welk geval verder pyridoxal-15 fosfaat kan worden toegevoegd. Verlies aan co-factor tijdens de synthese wordt aangegeven door het verloren gaan van de gele kleur van de reactie-oplossing en verlies aan activiteit door het serine-hydroxy-methyltransferase. De concentratie aan pyridoxalfosfaat toegevoegd aan de reactie kan variëren van 0 tot circa 20 mM, naar behoefte en ligt 20 bij voorkeur tussen 0,1 mM en 1 mM.10 It has also been discovered that a second SEMI can be beneficial! factor, namely pyridoxal-5'-phosphate. This pyridoxal-51 'phosphate is bound tightly to the enzyme. If L-serine is formed in a reactor for a long time, the pyridoxal phosphate can be lost or inactivated, in which case further pyridoxal-15 phosphate can be added. Loss of cofactor during synthesis is indicated by loss of the yellow color of the reaction solution and loss of activity by the serine hydroxy methyl transferase. The concentration of pyridoxal phosphate added to the reaction can range from 0 to about 20 mM, as needed, and is preferably between 0.1 mM and 1 mM.
De toevoeging van overmaat pyridoxalfosfaat kan nog een verdere functie hebben. Gevonden is namelijk, dat in sommige micro-organismen die door plasmiden met glyA-gen zijn getransformeerd en hogeae niveaus aan SHMT bezitten, de toevoeging van pyridoxal-51-fosfaat nodig is om 25 het aanwezige SHMT te verzadigen en de waargenomen enzymactiviteit te verhogen. Een dergelijk micro-organisme is Klebsiella aerogenes met het plasmide pGxl39 dat hierboven reeds is genoemd.The addition of excess pyridoxal phosphate can serve a still further function. Namely, it has been found that in some microorganisms transformed by plasmids with glyA gene and having high levels of SHMT, the addition of pyridoxal-51-phosphate is necessary to saturate the SHMT present and increase the observed enzyme activity. One such microorganism is Klebsiella aerogenes with the plasmid pGxl39 already mentioned above.
De vormingsreactie kan worden uitgevoerd bij aanwezigheid van ieder niet-schadelijk oplosmiddel. Voorbeelden van dit soort op-30 losmiddelen zijn ethanol, methanol, isopropanol en dioxan.The forming reaction can be carried out in the presence of any non-harmful solvent. Examples of these kinds of solvents are ethanol, methanol, isopropanol and dioxane.
De volgende voorbeelden lichten de uitvinding nader toe.The following examples further illustrate the invention.
Voorbeeld I.Example I.
Bacteriestammen met en zonder plasmide pGxl39 werden gekweekt in een LB-medium (10 g/liter bacto _trvpton, 5 g/liter gistextract, 5 g/liter 35 NaCl) of een minimum medium (10,5 g/liter K^HPO^, 4,5 g/liter KH^PO^, 1,0 g/liter ammoniumsulfaat en 0,5 g/liter natriumcitraat. 2Η^Ο), 8303978 ^ Λ -7- aangevuld met 0,4 % glucose of lactose. Aminozuren werden toegevoegd tot 3 3 20 ug/cm en vitaminen tot 1 ug/cm waar aangegeven. De specifieke activiteit van de serine hydroxymethyltransferase is uitgedrukt in nmol g.-rfenylserine omgezet in benzaldehyde en glycine per minuut per 5 mg extraheefbaar eiwit na een sonificatie van de cellen. De analyses werden uitgevoerd in 50 mM fosfaatbuffer met pH 7,3 met 0,1 mM pyridoxalfosfaat en bij 35 mM 6-fenylserine bij 20eC. Het verschijnen van benzaldehyde werd met een spectrofotometer met recorder bij 279 nM nagegaan.Bacterial strains with and without plasmid pGxl39 were grown in an LB medium (10 g / liter bacto-trvpton, 5 g / liter yeast extract, 5 g / liter 35 NaCl) or a minimum medium (10.5 g / liter K ^ HPO ^, 4.5 g / liter KH ^ PO ^, 1.0 g / liter ammonium sulfate and 0.5 g / liter sodium citrate. 2Η ^ Ο), 8303978 ^ Λ -7- supplemented with 0.4% glucose or lactose. Amino acids were added up to 3 µg / cm and vitamins up to 1 µg / cm where indicated. The specific activity of the serine hydroxymethyl transferase is expressed in nmol g-rphenylserine converted to benzaldehyde and glycine per minute per 5 mg extractable protein after sonication of the cells. The analyzes were performed in 50 mM phosphate buffer at pH 7.3 with 0.1 mM pyridoxal phosphate and at 35 mM 6-phenylserine at 20 ° C. The appearance of benzaldehyde was monitored with a spectrophotometer and recorder at 279 nM.
8303978 -8-8303978 -8-
SHMTSHMT
Specifieke Activiteit (nmol/min/mg)Specific Activity (nmol / min / mg)
MinimumMinimum
St-am Plasmide LB-medium Medium Toeslagstoffen 5 EoCOli GX1698 - 39 N.D.* GX1671 pGxl39 221 N.D.St-am Plasmid LB medium Medium Additives 5 EoCOli GX1698 - 39 N.D. * GX1671 pGxl39 221 N.D.
GX1703 pGxl39 141 533 glucose, 10 fenylalanine, thiamine GX1703 pGxl22 218 682 glucose, f-enylalanine, thiamine 15 Salmonella typhimurium LT2 GX1682 - 28 10 glucose trypto fan 17 lactose, tryptc.fan 20 GX1682 pGxl39 152 133 glucose, trypto fan 306 lactose, tryptofan >GX1703 pGxl39 141 533 glucose, 10 phenylalanine, thiamine GX1703 pGxl22 218 682 glucose, f-enylalanine, thiamine 15 Salmonella typhimurium LT2 GX1682 - 28 10 glucose trypto fan 17 lactose, tryptc.fan 20 GX1682 pGxlo 152 133 glucose, lactpt tryptophan>
Klebsiella aerogenes 25 GX1704 - 36 N.D.Klebsiella aerogenes 25 GX1704 - 36 N.D.
GX1704 pGxl39 590 114 glucose 223 108 lactose - a*™ . Genotype 30 E .coli GX1698 trpEA , tna2, serB , laclq ts 402 GX1671 thi, ara, strR, glyA, [serB trpR] , laclql, lacZ:: tn5GX1704 pGxl39 590 114 glucose 223 108 lactose - a * ™. Genotype 30 E .coli GX1698 trpEA, tna2, serB, laclq ts 402 GX1671 thi, ara, strR, glyA, [serB trpR], laclql, lacZ :: tn5
35 GX1703 ^ glyA, pheA, thi, lac , ara, strRGX1703, glyA, pheA, thi, lac, ara, strR
8303978 -9-8303978 -9-
Salmonella typhimurium LT 2 <3X1682 trpBEDC43 F" laclq ts 420 proSalmonella typhimurium LT 2 <3X1682 trpBEDC43 F "laclq ts 420 pro
Klebsiella aerogenes GX1704 lsd (L-serine deaminase mutant) 5 * niet bepaald.Klebsiella aerogenes GX1704 lsd (L-serine deaminase mutant) 5 * not determined.
E.coli stam GX1671 met daarin het plasmide pGxl39, is een representatieve verdere stam die gebruikt is als SHMT-bron bij de uitvinding. Voorbeeld II.E.coli strain GX1671 containing the plasmid pGxl39 is a representative further strain used as an SHMT source in the invention. Example II.
Een kolonie van Escherichia coli stam GX 1703 (met pGxl22), 10 gedeponeerd bij het NRRL onder B.15215 werd geënt op 100 cm^ voedingsbodem I , die hieronder is beschreven en vervolgens een nacht bij 37°C geschud.A colony of Escherichia coli strain GX 1703 (with pGxl22) deposited at the NRRL under B.15215 was seeded on 100 cm culture medium I described below and then shaken overnight at 37 ° C.
Voedingsbodem I: 15 K2EP04 10,5 g/1 KH2P04 4,5 g/1 (nh4)2so4 1 g/1 natriumcitraat - 2H20 0,5 g/1 fenylalanine 20 ug/ml 20 vitamine B^ 1 ug/ml ampicilline 100 ug/mlCulture medium I: 15 K2EP04 10.5 g / 1 KH2P04 4.5 g / 1 (nh4) 2so4 1 g / 1 sodium citrate - 2H20 0.5 g / 1 phenylalanine 20 µg / ml 20 vitamin B ^ 1 µg / ml ampicillin 100 µg / ml
MgS04 2 mMMgSO 2 2 mM
FeS04 5 mg/ml 25 De cellen werden door centrifugeren gewonnen en als enzym bron gebruikt. Glycine (12mM, uiteindelijke concentratie) werd gemengd met tetrahydrofolaat (5 mM, uiteindelijke concentratie), pyridoxalfosfaat vimM), en formaldenyde (10 mM, uiteindelijke concentratie) onder een stikstof afdekking. De pH werd met 0,1 M kaliumfosfaatbuffer op pH 7,6 30 gehouden en het uiteindelijke volume van het reactiemengsel bedroeg 100 cm^. De reactie werd op gang gebracht door de bovengenoemde reactie- o oplossing en de cellen bij 37 C te mengen en vervolgens te schudden.FeSO 4 5 mg / ml. The cells were collected by centrifugation and used as an enzyme source. Glycine (12mM, final concentration) was mixed with tetrahydrofolate (5mM, final concentration), pyridoxal phosphate vimM), and formaldenyde (10mM, final concentration) under a nitrogen cover. The pH was kept at pH 7.6 with 0.1 M potassium phosphate buffer and the final volume of the reaction mixture was 100 cm 2. The reaction was started by mixing the above reaction solution and the cells at 37 ° C and then shaking.
Na 8 uren was 5 mM serine geproduceerd (de opbrengst bedroeg 45 % berekend cp het glycine) .Alle enzymactiviteit was behouden gebleven.After 8 hours, 5 mM serine had been produced (yield was 45% based on the glycine). All enzyme activity was retained.
35 Glycine en serine-concentraties werden bepaald onder toepassing van vloeistof chromatografie.Glycine and serine concentrations were determined by liquid chromatography.
§303978 -10-§303978 -10-
Voorbeeld III.Example III.
Een kolonie van Klebsiella aerogenes stam GX1704 (met pGxl39), gedeponeerd bij het ATCC onder No, 39214, werd geënt in 100 cm^ voedingsbodem II die hieronder is beschreven en een nacht bij 30°C geschud.A colony of Klebsiella aerogenes strain GX1704 (with pGxl39) deposited with the ATCC under No, 39214 was seeded in 100 ml culture medium II described below and shaken overnight at 30 ° C.
55
Voedingsbodem II.Culture medium II.
Trypton 10 g/1Trypton 10 g / 1
NaCl 10 g/1NaCl 10 g / 1
Gistextract 5 g/1 10 Glucose 10 g/1Yeast extract 5 g / 1 10 Glucose 10 g / 1
De cellen werden door centrifugeren gewonnen en als enzymbron gebruikt.The cells were collected by centrifugation and used as an enzyme source.
De procedure van voorbeeld I voor het produceren van het serine 15 werd gevolgd met dit verschil dat Klebsielle aerogenes in plaats van E. coli werd gebruikt. Na 8 uren bleek 7 mM serine te zijn geproduceerd (deze opbrengst bedroeg 64 % berekend op glycine). Alle enzymactiviteit bleef behouden.The procedure of Example I for producing the serine 15 was followed with the difference that Klebsielle aerogenes was used instead of E. coli. After 8 hours, 7 mM serine was shown to have been produced (this yield was 64% based on glycine). All enzyme activity was retained.
Voorbeeld IV.Example IV.
20 Voorbeeld I werd herhaald met dit verschil, dat een gedeeltelijk gezuiverde serine—hydroxymethyltransferase uit E.coli (stam GX1703) werd toegepast. De cellen werden verbroken door sonificeren bij 4°C. De bovenstaande vloeistof na centrifugeren werd gemengd met ammonium-sulfaat (50 % verzadiging) bij 4°C en pH 7,5. Na verwijdering van het vaste mate-25 riaal door centrifugeren werd het enzym uit de oplossing gehaald door het ammonium-sulfaat-gehalte tot 100 % verzadiging te verhogen. Het enzym werd hierna opgevangen door centrifugeren en vervolgens gedialyseerd.Example I was repeated with the difference that a partially purified serine hydroxymethyl transferase from E. coli (strain GX1703) was used. The cells were disrupted by sonication at 4 ° C. The supernatant after centrifugation was mixed with ammonium sulfate (50% saturation) at 4 ° C and pH 7.5. After removing the solid material by centrifugation, the enzyme was removed from the solution by increasing the ammonium sulfate content to 100% saturation. The enzyme was then collected by centrifugation and then dialyzed.
10 mM serine werd na 4 uur reageren hiermee geproduceerd. De opbrengst bedroeg 90 % berekend op glycine. Alle enzymactiviteit bleef behouden.10 mM serine was produced after 4 hours of reaction. The yield was 90% based on glycine. All enzyme activity was retained.
30 Voorbeeld V.30 Example V.
Voorbeeld III werd herhaald met dit verschil, dat de aanvankelijke glycine concentratie 340 mM bedroeg en het formaldehyde (oorspronkelijke 3 concentratie 2M) met een snelheid van 1 cm per uur werd ingeleid. Na 12 uren was 119 mM serine geproduceerd.Example III was repeated with the difference that the initial glycine concentration was 340 mM and the formaldehyde (original 3 concentration 2M) was introduced at a rate of 1 cm per hour. After 12 hours, 119 mM serine was produced.
35 Voorbeeld VI.Example VI.
Voorbeeld III werd herhaald met dit verschil, dat het glycine (oorspronkelijke concentratie 2M) en het formaldehyde (oorspronkelijke 8303978 -11- concentratie 2M) met dezelfde snelheid van 1 cm^ per uur werden toegeleid. Na 5 uren was 57 mM serine bereid.Example III was repeated with the difference that the glycine (original concentration 2M) and formaldehyde (original 8303978-11 concentration 2M) were fed at the same rate of 1 cm / h. After 5 hours, 57 mM serine was prepared.
Voorbeeld VII.Example VII.
Voorbeeld III werd herhaald met dit verschil, dat de THF werd 5 gemodificeerd. 5 g dextran, Pharmacia T40 werd opgelost in water tot een uiteindelijke concentratie van 5 %. Deze dextran-oplossing werd geoxydeerd met 0,1 M NalO^ en wel gedurende 1 uur bij kamertemperatuur. Het geoxideerde dextran werd neergeslagen door ethanol toe te voegen tot 60 volume %. Deze trap werd tweemaal herhaald. Het geoxydeerde 10 dextran werd opgelost in 110 cm^ 0,2 Μ 1,6-hexaandiamine (HMD) bij pH 9,0. 0,2 g natrium-boorhydride werd respectievelijk na 30 en 60 minuten toegevoegd. HMD-dextran werd een nacht tegen water gedialyseerd en vervolgens gelyofiliseerd. 5 mM THF werd gemengd met 10 mM l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyD-carbodiimide en 0,5 % HMD-dextran bij pH 7,0 onder 15 stikstof atmosfeer. Het gevormde neef slag werd af gecentrifugeerd en twee maal .met 0,5 M NaCl-oplossing gewassen. Het vaste THF werd met het reactiemengsel gemengd, zoals is beschreven in voorbeeld III. Na 3 uren reageren was 7 mM serine geproduceerd.Example III was repeated with the difference that the THF was modified. 5 g of dextran, Pharmacia T40 was dissolved in water to a final concentration of 5%. This dextran solution was oxidized with 0.1 M NalO2 for 1 hour at room temperature. The oxidized dextran was precipitated by adding ethanol to 60 volume%. This step was repeated twice. The oxidized dextran was dissolved in 110 cm @ 0.2 Μ 1,6-hexanediamine (HMD) at pH 9.0. 0.2 g of sodium borohydride was added after 30 and 60 minutes, respectively. HMD-dextran was dialyzed overnight against water and then lyophilized. 5 mM THF was mixed with 10 mM 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyD-carbodiimide and 0.5% HMD-dextran at pH 7.0 under a nitrogen atmosphere. The precipitate formed was centrifuged and twice with 0.5 M NaCl solution washed The solid THF was mixed with the reaction mixture as described in Example 3. After reacting for 3 hours, 7 mM serine was produced.
83039788303978
Claims (30)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US44296282A | 1982-11-19 | 1982-11-19 | |
| US44296282 | 1982-11-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8303978A true NL8303978A (en) | 1984-06-18 |
Family
ID=23758887
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8303978A NL8303978A (en) | 1982-11-19 | 1983-11-18 | ENZYMATIC SYNTHESIS OF L-SERINE. |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59109187A (en) |
| AU (1) | AU2149383A (en) |
| BE (1) | BE898261A (en) |
| BR (1) | BR8306301A (en) |
| CA (1) | CA1217158A (en) |
| CH (1) | CH657373A5 (en) |
| DE (1) | DE3341763A1 (en) |
| DK (1) | DK529583A (en) |
| ES (1) | ES527388A0 (en) |
| FI (1) | FI834231A (en) |
| FR (1) | FR2536415B1 (en) |
| GB (1) | GB2130216B (en) |
| GR (1) | GR79037B (en) |
| IL (1) | IL70271A0 (en) |
| IT (1) | IT8368213A0 (en) |
| LU (1) | LU85096A1 (en) |
| NL (1) | NL8303978A (en) |
| PL (1) | PL244608A1 (en) |
| SE (1) | SE8306351L (en) |
| ZA (1) | ZA838642B (en) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4782021A (en) * | 1984-02-17 | 1988-11-01 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Method of producing L-serine |
| JPS60172293A (en) * | 1984-02-17 | 1985-09-05 | Mitsui Toatsu Chem Inc | Preparation of l-serine |
| EP0165044A3 (en) * | 1984-06-11 | 1987-09-30 | Genex Corporation | Method of reacting an aldehyde- containing compound with a nucleophilic compound |
| JPS6181775A (en) * | 1984-08-30 | 1986-04-25 | Rikagaku Kenkyusho | Cultivation of microorganism |
| EP0185824A1 (en) * | 1984-12-28 | 1986-07-02 | Genex Corporation | Stabilization of tetrahydrofolic acid and serine hydroxymethyltransferase in reaction mixtures for the enzymatic cynthesis of L-serine |
| JPS62502934A (en) * | 1985-03-18 | 1987-11-26 | ジエネツクス コ−ポレ−シヨン | Synthesis of L-tryptophan from glycine, formaldehyde and indole in the presence of serine hydroxymethyltransferase, tetrahydrofolate and tryptophan synthetase or tryptophanase |
| US4810817A (en) * | 1985-10-21 | 1989-03-07 | W. R. Grace & Co. | Aspartyl-beta substituted phenylalanine dipeptides |
| US4873359A (en) * | 1985-10-21 | 1989-10-10 | W. R. Grace & Co. - Conn. | Process for preparing as partyl-phenylalanine dipeptides |
| US5102792A (en) * | 1987-08-13 | 1992-04-07 | W. R. Grace & Co.-Conn. | Selective production of L-serine derivative isomers |
| NZ238342A (en) * | 1990-06-04 | 1993-10-26 | Univ Notre Dame Du Lac | Preparation of beta-hydroxy-alphaamino acids useful as intermediates in the preparation of beta-lactam antibiotics |
| US5266468A (en) * | 1990-06-04 | 1993-11-30 | University Of Notre Dame Du Lac | Process for preparing β-hydroxy-α amino acids |
| EP0628634A3 (en) * | 1993-05-25 | 1995-09-06 | Lilly Co Eli | Process for preparing serine hydroxymethyltransferase. |
| DE10106461A1 (en) * | 2001-02-13 | 2002-08-14 | Degussa | Process for the fermentative production of D-pantothenic acid and / or its salts |
| CN104946695B (en) * | 2015-06-03 | 2018-07-24 | 武汉轻工大学 | A kind of preparation method of Serine |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS582677B2 (en) * | 1976-02-12 | 1983-01-18 | 田辺製薬株式会社 | Production method of L-serine |
| GB2084155B (en) * | 1980-09-17 | 1984-01-11 | Grace W R & Co | Process for production of l-amino acids using immobilized microorganisms |
-
1983
- 1983-11-16 GR GR72996A patent/GR79037B/el unknown
- 1983-11-16 JP JP58214222A patent/JPS59109187A/en active Pending
- 1983-11-16 LU LU85096A patent/LU85096A1/en unknown
- 1983-11-17 BR BR8306301A patent/BR8306301A/en unknown
- 1983-11-17 PL PL24460883A patent/PL244608A1/en unknown
- 1983-11-17 SE SE8306351A patent/SE8306351L/en not_active Application Discontinuation
- 1983-11-18 FI FI834231A patent/FI834231A/en not_active Application Discontinuation
- 1983-11-18 FR FR8318369A patent/FR2536415B1/en not_active Expired
- 1983-11-18 GB GB08330859A patent/GB2130216B/en not_active Expired
- 1983-11-18 IT IT8368213A patent/IT8368213A0/en unknown
- 1983-11-18 CA CA000441483A patent/CA1217158A/en not_active Expired
- 1983-11-18 NL NL8303978A patent/NL8303978A/en not_active Application Discontinuation
- 1983-11-18 BE BE0/211898A patent/BE898261A/en not_active IP Right Cessation
- 1983-11-18 DE DE19833341763 patent/DE3341763A1/en not_active Ceased
- 1983-11-18 ZA ZA838642A patent/ZA838642B/en unknown
- 1983-11-18 ES ES527388A patent/ES527388A0/en active Granted
- 1983-11-18 AU AU21493/83A patent/AU2149383A/en not_active Abandoned
- 1983-11-18 IL IL70271A patent/IL70271A0/en unknown
- 1983-11-18 CH CH6225/83A patent/CH657373A5/en not_active IP Right Cessation
- 1983-11-18 DK DK529583A patent/DK529583A/en not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK529583A (en) | 1984-05-20 |
| BE898261A (en) | 1984-03-16 |
| AU2149383A (en) | 1984-05-24 |
| FI834231A (en) | 1984-05-20 |
| IT8368213A0 (en) | 1983-11-18 |
| DK529583D0 (en) | 1983-11-18 |
| GB8330859D0 (en) | 1983-12-29 |
| LU85096A1 (en) | 1984-04-02 |
| SE8306351D0 (en) | 1983-11-17 |
| PL244608A1 (en) | 1984-09-24 |
| GB2130216A (en) | 1984-05-31 |
| DE3341763A1 (en) | 1984-10-04 |
| IL70271A0 (en) | 1984-02-29 |
| CA1217158A (en) | 1987-01-27 |
| FR2536415B1 (en) | 1987-06-26 |
| ES8602128A1 (en) | 1985-04-16 |
| CH657373A5 (en) | 1986-08-29 |
| JPS59109187A (en) | 1984-06-23 |
| SE8306351L (en) | 1984-05-20 |
| FI834231A0 (en) | 1983-11-18 |
| GR79037B (en) | 1984-10-02 |
| GB2130216B (en) | 1986-04-16 |
| ES527388A0 (en) | 1985-04-16 |
| FR2536415A1 (en) | 1984-05-25 |
| BR8306301A (en) | 1984-07-03 |
| ZA838642B (en) | 1984-07-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hummel et al. | Isolation of L-phenylalanine dehydrogenase from Rhodococcus sp. M4 and its application for the production of L-phenylalanine | |
| FR2680178A1 (en) | Process for producing L-glutamic acid by fermentation | |
| NL8303978A (en) | ENZYMATIC SYNTHESIS OF L-SERINE. | |
| FR2480307A1 (en) | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF L-PROLINE BY FERMENTATION | |
| US5932457A (en) | Process for producing D-pantoic acid and D-pantothenic acid or salts thereof | |
| FR2480306A1 (en) | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF L-METHIONINE BY FERMENTATION | |
| US8460902B1 (en) | DNA encoding hydantoinase, DNA encoding N-carbamyl-L-amino acid hydrolase, recombinant DNA, transformed cell, method of producing protein, and method of producing optically active amino acid | |
| WO1986007386A1 (en) | Process for preparing optically active, organic compounds | |
| KR100511734B1 (en) | Method for producing optically active compound | |
| US5866379A (en) | Enzymatic conversion of α-hydroxynitriles to the corresponding .alpha. | |
| FR2701489A1 (en) | Process for the production of L-glutamic acid by fermentation | |
| JP4272312B2 (en) | Novel nitrilase and method for producing 2-hydroxy-4-methylthiobutyric acid | |
| Takahashi et al. | D-Lysine production from L-lysine by successive chemical racemization and microbial asymmetric degradation | |
| JPH0499495A (en) | Production of r(-)-mandelic acid | |
| EP0775748B1 (en) | Preparation of D-alpha-amino acids, using bacteria transformed with the carbamoylase-hydantoinase operon | |
| JP4502295B2 (en) | Thermostable D-aminoacylase | |
| Yamanaka et al. | Efficient preparation of optically active p-trimethylsilylphenylalanine by using cell-free extract of Blastobacter sp. A17p-4 | |
| JP3737157B2 (en) | Process for producing optically active γ-hydroxy-L-glutamic acid | |
| US5036004A (en) | Process for producing L-serine | |
| EP0352846B1 (en) | Process for the preparation of biocatalysts with previously absent stereoselective enzyme activity | |
| EP0295622B1 (en) | Process for producing l-tryptophan | |
| JP2674078B2 (en) | Process for producing D-α-amino acid | |
| JP2674076B2 (en) | Method for producing D-α-amino acid | |
| US20080261268A1 (en) | 5-Substituted Hydantoin Racemase, Dna Encoding the Same, Recombinant Dna, Transformed Cell, and Process for Production of Optically Active N-Carbamylamino Acid or Optically Active Amino Acid | |
| KR920008383B1 (en) | Method for producing l-lysine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| BV | The patent application has lapsed |