NL8202062A - Werkwijze voor het bepalen van cytoplasmatische en mitochondriele isoenzymen van glutaminisch oxaalacetisch transaminase in serum of plasma van de mens. - Google Patents
Werkwijze voor het bepalen van cytoplasmatische en mitochondriele isoenzymen van glutaminisch oxaalacetisch transaminase in serum of plasma van de mens. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8202062A NL8202062A NL8202062A NL8202062A NL8202062A NL 8202062 A NL8202062 A NL 8202062A NL 8202062 A NL8202062 A NL 8202062A NL 8202062 A NL8202062 A NL 8202062A NL 8202062 A NL8202062 A NL 8202062A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- cytoplasmic
- mitochondrial
- activity
- serum
- plasma
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
- C12Q1/52—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase involving transaminase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
50 629 -1- i
Werkwijze voor het bepalen van cytoplasmatische en mito-chondriele isoenzymen van g^ttaminisch .oxaalacetlöQh " transaminase in serum of plasma van de mens.
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een werkwijze ter bepaling van transaminasen ten gebruike in het vakgebied van clinische diagnoses.
De glutaminische oxaalacetische transaminasen 5 (L-aspartaat ketoglutaraat amino transferase, EC 2.6.1.1.) genaamd GOT, AST of AAT, bestaat in twee vormen die elek-troforetisch worden onderscheiden met verschillende sub-cellulaire ligging: 1) Een cationisch isoenzyme verbonden met myto-10 chondrium (m-GOT)? 2) Een anionisch isoenzyme aanwezig in cytoplasma (s-GOT).
De mate van totale activiteit van GOT in plasma wordt op ruime schaal gebruikt voor diagnose van myocardiale 15 infarctie, en zijn activiteitsniveau in fysiologische vloeistoffen is ook gebruikt voor diagnose van andere pathologische vormen in het bijzonder in de lever of skeletspierniveau.
De bepalingsmethoden die in werkelijkheid worden 20 gebruikt in de klinische praktijk maakt het mogelijk, aan biologische monsters metingen te verrichten van de totale activiteit van het enzyme, som van de twee isoenzymen.
Het is belangrijk de relatieve activiteit te onderscheiden van de twee isoenzymatische vormen van glutami-25 nisch oxaalacetisch transaminase teneinde een geraffineerder middel te verkrijgen om nasporingen te verrichten met betrekking tot de toestand van weefselnecrose.
Voor andere enzymen, bijvoorbeeld lactisch dehydrogenase (LDH) en creatine kinase, werd opgemerkt, dat de 30 geschikte bepaling van de activiteit met betrekking tot de verschillende isoenzymatische vormen een hoger onderscheidend vermogen bij diagnostische toepassing mogelijk maakt.
De werkwijze voor dosering die in werkelijkheid bestaan voor de twee enzymatische vormen cytoplasmatische 35 en mitochondriële, van de glutaminische oxaalacetische- transaminasen zijn gebaseerd op elektroforetische, chroma- 8202062 • * -2- tografische of immunologische methoden waar de voorafgaande scheiding van het ene isoenzyme van het andere noodzakelijk is.
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een 5 nieuwe doseringswerkwijze die de individuele bepaling mogelijk maakt van de activiteit van de twee isoenzymen in serum of plasmamonsters zonder dat scheiding van de twee isoenzymen noodzakelijk is.
De werkwijze berust in wezen op de bekende reactie 10 van L-serine-O-sulfaat met de porcine, cytoplasmatische glutaminisch-oxaalacetische transaminase die, na verschillende perioden van incubatie, wordt gedeactiveerd door de vorming van een covalente binding tussen een derivaat van het substraat en èen reactive groep voor de active plaats 15 van het enzyme (R.A. John, P. Fasella: "The reaction of L-serine-O-sulphate with Aspartate Aminotransferase", Biochemistry, Vol. 8. η.11, Nov. 1969).
Tijdens het verloop van de experimenten werd gevonden, in tegenstelling tot wat men vernachtte, dat de 20 omstandigheden van incubatie voor de deactivering van mens-cytoplasmatisch isoenzyme in de aanwezigheid van mitochon-drieel, geen enkel activiteitsverlies in deze laatste bepaald .
Het is daarom mogelijk via een bepaling van GOT 25 activiteit, aanwezig in het plasma of serum, voor en na incubatie met L-serine-O-sulfaat, in het eerste geval de totale activiteitssom te schatten van de twee isoenzymen, en in het tweede geval (na incubatie met serine-O-sulfaat) de activiteit van alleen het mitochondriële isoenzyme.
30 Door middel van een eenvoudige aftrekking wordt de waarde van de activiteit van het cytoplasmatische isoenzyme verkregen.
De experimentele omstandigheden van analyse ter bepaling van de activiteit van de twee, mitochondriële en 35 cytoplasmatische isoenzymen van GOT, worden als volgt toegelicht.
Ter bepaling in het serum of plasma heeft het de voorkeur te werk te gaan onder gebruikmaking van twee identieke delen van hetzelfde monster, waarvan één wordt 40 gebruikt ter bepaling van de totale activiteit (som van de 8202062 -3- twee isoenzymen)-, terwijl uit de andere, voorafgaande incubatie met serine-O-sulfaat, die vooraf is verricht, de waarde van alleen het mitochondriële enzyme wordt verkregen .
5 Aan hetzelfde monster van serum of plasma, wordt 0,5 ml onttrokken en geplaatst in twee verschillende test-buizen. In de eerste testbuis (A), wordt 25 microliter van een 2M oplossing van serine-O-sulfaat in I^O toegevoegd, zodat een eindconcentratie bij benadering van serie-O-sulfaat 10 van ongeveer 50 mM wordt verkregen zonder een overmatige verdunning van het monster. In de tweede testbuis (B) wordt 25 microliter H20 toegevoegd teneinde dezelfde verdunning te verkrijgen die verkregen werd door toevoeging van het serine-O-sulfaat van de testbuis (A).
15 30 min. lang in incubatie laten bij kamertempera tuur, of 20 min. lang bij 30°C. Aan het eind van deze periode is de reactie volledig, dat wil zeggen in testbuis (A) heeft een verbinding, die is afgeleid van serine-O-sulfaat (aminoacrylzuur) een covalente binding gevormd met een groep 20 die aanwezig is op de actieve plaats van het cytoplasmatische isoenzyme, die het volledig en irreversibel inactiveert, terwijl deze incubatieperiode niet een analoge belemmering toelaat van mitochondrieel isoenzyme.
Daarom wordt de activiteit in de twee testbuizen 25 bepaald door gebruik te maken van Karmen's methode, dat wil zeggen het verbruik wordt gevolgd van de gereduceerde vorm van nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) in de gekoppelde reactie van het glutaminisch oxaalacetisch transaminase met het van appelzuur afgeleide (malie) dehydro-30 genase.
Uit het verschil van optische dichtheden bij 340 nm per minuut worden de waarden verkregen van enzymatische eenheden per liter serum of plasma, als volgt:
Testbuis (B)= totale eenheden/liter (cytoplasma-35 tisch isoenzyme + mitochondrieel isoenzyme)
Testbuis (A)= eenheden/liter van alleen het mitochondriële enzyme.
Uit het verschil: eenheid/liter (B) - eenheid/-liter (A), wordt de waarde van eenheid/liter van het cyto-40 plasmatische isoenzyme dat volledige is geïnactiveerd in 8202062 -4- testbuis (A) verkregen.
Voorbeeld
Teneinde de deugdelijkheid van de werkwijze aan 5 te tonen en zijn toepassing toe te lichten werden 5 baden van serum van de mens die verschillende hoeveelheden van de twee isoenzymen bevatten, bereid. De matrix van de 5 baden bestond uit serum van de mens met laagste endogene activiteit 5 U/l). Aan dit serum werden verschillende 10 hoeveelheden van de twee isoenzymen, gezuiverd onder toepassing van de werkwijze volgens E.J. Sampson en andere (Clin. Chem. 24, 1805, 1978) toegevoegd.
Aan het eind waren de 5 baden als volgt samengesteld: 15 bad n.1-120 U/l van alleen cytoplasmatisch dsoenzyme bad n.2-112, 5 U/l waarvan 90 U/l cytoplasmatisch isoenzyme 22,5 U/l mitochondrieel isoenzyme bad n.3-105 U/l waarvan 60 U/l cytoplasmatisch isoenzyme 45 U/l mitochondrieel isoenzyme 20 bad n.4-97,5 U/l waarvan 30 U/l cytoplasmatisch isoenzyme 67,5 U/l mitochondrieel isoenzyme bad n.5-90 U/l van alleen mitoch-ondrieel isoenzyme.
Toen men overging töt de bepaling van isoenzyma-25 tische activiteiten volgens de beschreven werkwijze werden de resultaten die in de tabel zijn weergegeven, verkregen als het gemiddelde van 6 verschillende bepalingen (in de tabel is het cytoplasmatisch isoenzyme aangegeven als s-GOT en het mitochondriële als m-GOT).
30
Tabel 8202062 -5-
Tabel 5 theoretische waarde experimentele _ gegevens U/l bad N.l totale activiteit 120 118/5 s-GOT 120 118/5
m-GOT
10 bad N.2 totale activiteit 112,5 114,7 s-GOT 90 91,2 m-GOT 22,5 23,4 bad N.3 totale activiteit 105 103,1 s-GOT 60 57,3 15 m-GOT 45 47,1 bad N.4 totale activiteit 97,5 101,3 s-GOT 30 31,3 m-GOT 67,5 67,9 bad N.5 totale activiteit 90 88,4
20 s-GOT
m-GOT 90 88,4
Uit vergelijking van de aldus verkregen experimen- / 25 tele gegevens is ten opzichte van de theoretische gegevens met betrekking tot de isoenzymatische samenstelling zowel de deugdelijkheid van de werkwijze als zijn precisering duidelijk.
-conclusies- 30 8202062
Claims (6)
1. Werkwijze ter bepaling van afzonderlijke enzymatische activiteiten van de cytoplasmatische en mitochon-driële isoenzymen van glutaminisch oxaalacetisch transaminase (GOT) in monsters van serum of plasma, met 5 het kenmerk, dat de in serum of plasma aanwezige GOT activiteit wordt bepaald vöör en na incubatie met L-serine-O-sulfaat teneinde in het eerste geval een enzymatische activiteitswaarde in overeenstemming met de totale som van activiteit van de twee isoenzymen te verkrijgen, 10 en in het tweede geval een waarde van enzymatische activiteit in overeenstemming met de activiteit van alleen het mitochondriële enzyme te verkrijgen, waarbij de activiteit van cytoplasmatisch isoenzyme· wordt verkregen uit het verschil van de twee hierboven vermelde waarden. 15
2. Werkwijze volgens conclusie 1, m e t he t k e n me r k, dat de bepaling wordt uitgevoerd bij twee identieke delen van eenzelfde monster van serum of plasma. 20
3.Werkwijze volgens conclusie 1 en 2, m e t het kenmerk, dat de bepaling van enzymatische activiteiten wordt uitgevoerd door het verbruik te volgen van de gereduceerde vorm van nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) in de gekoppelde reactie van GOT met malisch 25 dehydrogenase.
4. Werkwijze volgens conclusie l,met het kenmerk, dat de inactivering van cytoplasmatisch isoenzyme met L-serine-O-sulfaat wordt verkregen door 30 30 minuten lang bij kamertemperatuur te incuberen.
5. Werkwijze volgens conclusie 1, m e t het kenmerk, dat de inactivering van cytoplasmatisch isoenzyme met L-serine-O-sulfaat wordt verkregen door 20 8202062 -7- minuten lang bij 30°C te .iricuberen.
6.Diagnostische kuip ter bepaling van afzonderlijke enzymatische activiteiten van cytoplasmatische en mitochon-5 driële enzymen van GOT door toepassing van de werkwijze volgens conclusie 1-5, gekenmerkt doordat hij als één van zijn componenten L-serine-O-sulfaat insluit. 3.0 -------------- 8202062
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT48565/81A IT1171257B (it) | 1981-05-28 | 1981-05-28 | Metodo per la determinazione della attivita' degli isoenzimi citoplasmatico e mitocondriale della glutammico ossalacetico transaminasi nel siero o plasma umano |
| IT4856581 | 1981-05-28 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8202062A true NL8202062A (nl) | 1982-12-16 |
| NL186915B NL186915B (nl) | 1990-11-01 |
| NL186915C NL186915C (nl) | 1991-04-02 |
Family
ID=11267352
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NLAANVRAGE8202062,A NL186915C (nl) | 1981-05-28 | 1982-05-19 | Werkwijze voor het bepalen van de afzonderlijke enzymatische aktiviteiten van de cytoplasmatische en de mitochondriele isoenzymen van aspartaat aminotransferase in serum of plasma van de mens. |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4477566A (nl) |
| JP (1) | JPS5832000A (nl) |
| AT (1) | AT381326B (nl) |
| AU (1) | AU593762B2 (nl) |
| BE (1) | BE893362A (nl) |
| CA (1) | CA1186604A (nl) |
| CH (1) | CH653135A5 (nl) |
| DE (1) | DE3220331A1 (nl) |
| ES (1) | ES8306184A1 (nl) |
| FR (1) | FR2512833B1 (nl) |
| GB (1) | GB2099580B (nl) |
| IL (1) | IL65804A (nl) |
| IT (1) | IT1171257B (nl) |
| NL (1) | NL186915C (nl) |
| SE (1) | SE448884B (nl) |
| ZA (1) | ZA823398B (nl) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60149382A (ja) * | 1984-01-12 | 1985-08-06 | Sawao Murao | アスパラギン酸アミノトランスフエラ−ゼアイソザイム阻害活性を有するプロテア−ゼの製造法 |
| JPS60149399A (ja) * | 1984-01-12 | 1985-08-06 | Sawao Murao | アスパラギン酸アミノトランスフエラ−ゼアイソザイムの測定法 |
| JPH0644879B2 (ja) * | 1986-09-04 | 1994-06-15 | 栄研化学株式会社 | ヒト血清中のグルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナ−ゼアイソザイムの測定法 |
| US5200322A (en) * | 1986-09-19 | 1993-04-06 | Nippon Zoki Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for assaying protein C and measuring kit for the same |
| JP2768117B2 (ja) * | 1992-03-17 | 1998-06-25 | 日本鋼管株式会社 | 汚泥改質方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE786291A (fr) * | 1971-07-20 | 1973-01-15 | Technicon Instr | Compositions de diagnostic pour determination de la glutamate-oxalate-transaminase (got) et de la glutamate-pyruvate-transaminase (gpt) |
| JPS5631957B2 (nl) * | 1973-10-09 | 1981-07-24 | ||
| JPS5299212A (en) * | 1976-02-16 | 1977-08-19 | Eiken Chemical | Fractionally quantitative measurement for glutamic acid * oxaloacetic acid and transferaminaseisozyme |
| IT1162349B (it) * | 1979-07-17 | 1987-03-25 | Biodata Spa | Metodo per la determinazione delle transaminasi e relativo kit diagnostico |
| EP0044388A2 (de) * | 1980-07-21 | 1982-01-27 | F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft | Verfahren zur Bestimmung von einem oder mehreren Parametern in Proben |
-
1981
- 1981-05-28 IT IT48565/81A patent/IT1171257B/it active
-
1982
- 1982-05-17 ZA ZA823398A patent/ZA823398B/xx unknown
- 1982-05-17 IL IL65804A patent/IL65804A/xx not_active IP Right Cessation
- 1982-05-19 NL NLAANVRAGE8202062,A patent/NL186915C/nl not_active IP Right Cessation
- 1982-05-24 SE SE8203207A patent/SE448884B/sv not_active IP Right Cessation
- 1982-05-25 CH CH3236/82A patent/CH653135A5/it not_active IP Right Cessation
- 1982-05-25 CA CA000403632A patent/CA1186604A/en not_active Expired
- 1982-05-25 US US06/381,777 patent/US4477566A/en not_active Expired - Fee Related
- 1982-05-27 GB GB8215555A patent/GB2099580B/en not_active Expired
- 1982-05-27 ES ES512600A patent/ES8306184A1/es not_active Expired
- 1982-05-27 AT AT0209382A patent/AT381326B/de not_active IP Right Cessation
- 1982-05-28 FR FR8209345A patent/FR2512833B1/fr not_active Expired
- 1982-05-28 JP JP57090036A patent/JPS5832000A/ja active Granted
- 1982-05-28 BE BE0/208229A patent/BE893362A/fr not_active IP Right Cessation
- 1982-05-28 AU AU84255/82A patent/AU593762B2/en not_active Ceased
- 1982-05-28 DE DE19823220331 patent/DE3220331A1/de active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2512833A1 (fr) | 1983-03-18 |
| CH653135A5 (it) | 1985-12-13 |
| CA1186604A (en) | 1985-05-07 |
| GB2099580B (en) | 1984-08-01 |
| NL186915C (nl) | 1991-04-02 |
| IT1171257B (it) | 1987-06-10 |
| AT381326B (de) | 1986-09-25 |
| ES512600A0 (es) | 1983-06-01 |
| ES8306184A1 (es) | 1983-06-01 |
| SE8203207L (sv) | 1982-11-29 |
| JPH031960B2 (nl) | 1991-01-11 |
| IL65804A0 (en) | 1982-08-31 |
| SE448884B (sv) | 1987-03-23 |
| IL65804A (en) | 1985-11-29 |
| US4477566A (en) | 1984-10-16 |
| AU593762B2 (en) | 1990-02-22 |
| NL186915B (nl) | 1990-11-01 |
| ZA823398B (en) | 1983-03-30 |
| DE3220331C2 (nl) | 1990-08-09 |
| IT8148565A0 (it) | 1981-05-28 |
| FR2512833B1 (fr) | 1985-08-16 |
| ATA209382A (de) | 1986-02-15 |
| JPS5832000A (ja) | 1983-02-24 |
| AU8425582A (en) | 1982-12-02 |
| BE893362A (fr) | 1982-09-16 |
| GB2099580A (en) | 1982-12-08 |
| DE3220331A1 (de) | 1983-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Williamson | L-Alanine determination with alanine dehydrogenase | |
| Nachlas et al. | Macroscopic identification of early myocardial infarcts by alterations in dehydrogenase activity | |
| CA1125151A (en) | Triglycerides assay and reagents therefor | |
| Dupourque et al. | Purification and properties of D-serine dehydrase from Escherichia coli | |
| US3929581A (en) | Quantitative determination of blood ammonia | |
| EP0116307A2 (en) | Composition, analytical element and method for the quantification of creatine kinase | |
| NL8202062A (nl) | Werkwijze voor het bepalen van cytoplasmatische en mitochondriele isoenzymen van glutaminisch oxaalacetisch transaminase in serum of plasma van de mens. | |
| Shimizu et al. | Purification and properties of pantothenate kinase from Brevibacterium ammoniagenes IFO 12071 | |
| RU2184778C2 (ru) | Система восстановления конфермента, набор для ферментативного определения концентрации анализируемого вещества и ферментативный способ определения концентрации анализируемого вещества | |
| McQueen | Optimal assay of LDH and α-HBD at 37° C | |
| WO1997024456A1 (fr) | Procede de dosage d'echantillon vital | |
| JP2711721B2 (ja) | グルコースを含有する試料中の１，５―アンヒドログルシトールの定量法 | |
| US4329425A (en) | Method for determination of transaminases and relative diagnostic kit | |
| Gonzalez-Cerezo et al. | [57] l-α-Glycerophosphate dehydrogenase from beef liver | |
| US4086142A (en) | Decarboxylation of endogenous serum glutamate in transaminase assays | |
| Ho et al. | Phosphofructokinase in rat jejunal mucosa subcellular distribution, isolation, and characterization | |
| US5834227A (en) | Kit for assaying creatine kinase | |
| US5869276A (en) | Method for determination of direct bilirubin and reagent therefor | |
| Tosi et al. | Effect of trypsin on DNA methylation in isolated nuclei from developing sea urchin embryos | |
| HU181684B (en) | Process and reagent for the determination of creatine kynase mb | |
| EP0266905B1 (en) | Reagents for assay of gamma-glutamyl-transpeptidase | |
| EP0071087B1 (en) | Improved determination of creatine phosphokinase in body fluids | |
| JP3161316B2 (ja) | クレアチンキナーゼ活性測定用液状試薬 | |
| EP0387697A2 (en) | Determination of aminotranferases | |
| GB2057684A (en) | Method and Kit for Determination of Transaminases |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1A | A request for search or an international-type search has been filed | ||
| BB | A search report has been drawn up | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| V1 | Lapsed because of non-payment of the annual fee |
Effective date: 19951201 |