NL8020195A

NL8020195A - Werkwijze ter bereiding van thymosine alfa1 en derivaten daarvan.

Info

Publication number: NL8020195A
Application number: NL8020195A
Authority: NL
Original assignee: Max Planck Gesellschaft
Priority date: 1979-05-15
Filing date: 1980-05-14
Publication date: 1981-02-27
Also published as: US4466918A; GB2065662A; EP0028627A1; GB2065662B; US4353821A; CH649089A5; EP0028627B1; JPH0135840B2; DE2919592C2; JPS56500655A; WO1980002560A1; DE2919592A1

Description

'/j 8020185 j

Werkwijze ter bereiding van thymosine-al en derivaten daarvan.

De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze ter bereiding van thymosine-al en zekere derivaten daarvan uit peptide-fragmenten.

Thymosine-al is een bijzonder zuur polypeptide van 5 de thymus-klier, dat de aminozuur-volgorde Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu- ]

Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn bezit en waarin aminozuur 1, serine, j | geacetyleerd aanwezig is. Bij thymosine-al werden belangwekkende | biologische eigenschappen gevonden, die de bruikbaarheid daarvan | 10 bij de kankerbestrijding en binnen het raam van de regulering | | van het immunologische afweerapparaat doen verwachten (Cancer |

Treatment Reports, é>2, Nr. 11 (1978)). Zo werd bijvoorbeeld ge- j

vonden dat de door bestraling binnen het raam van de kanker- I

therapie resulterende immuniteitsonderdrukking door behandeling 15 met thymosine-al kan worden verminderd.

Er bestaat daarom belangstelling voor een werkwijze voor de synthetische bereiding thymosine-al. ;

De totale chemische synthese van thymosine-al is reeds bekend uit J.A.C.S. 101, 1, 253-254 (1979). Bij deze werk-20 wijze worden volgens de tot nu toe gebruikelijke methodes van de peptide-synthese eerst meerdere verschillende peptide-fragmenten ; I gesynthetiseerd, die tenslotte volgens verschillende methodes, | in het bijzonder volgens de azide-methode, met elkaar worden ge- j condenseerd. De bekende werkwijze bezit echter het nadeel zeer : 25 omslachtig te zijn en niettemin slechts zeer geringe opbrengsten i op te leveren.

De uitvinding beoogt te voorzien in een werkwijze voor de synthese van thymosine-al, die deze nadelen niet vertoont en die via een eenvoudige reactie het gewenste produkt in een goedé 30 opbrengst verschaft. De werkwijze moet bovendien geschikt zijn om zonder essentiële wijzigingen ook de bereiding van biologisch belangwekkende derivaten en analogen van thymosine-al mogelijk te -------------makenv---------------—..........................................................................------------------------------------------------------------------------- 8 0 20 18 5 2--

Teneinde de bovengenoemde doeleinden te bereiken j voorziet de uitvinding in een werkwijze ter bereiding van thymosine-i al of een derivaat daarvan, waarbij tenminste één van de aminozuren! | 10, 15, 21, 25 en 28 als amide of alkylamide aanwezig is en/of de j 5 acetylgroep door een andere acylgroep is vervangen, door bereiding 1 van een reeks van beschermingsgroepen bevattende peptide-fragmenten, condensatie daarvan en daarnavolgende afsplitsing van de beschermingsgroepen, hierdoor gekenmerkt, dat men ! (a) het N-eindstandige onbeschermde, C-eindstandige 10 veresterde of aan een drager gebonden C-eindstandige peptide- j fragment in tenminste de 1,5-voudige stoechiometrische ondermaat I met het naburige N-eindstandige Ddz-beschermde, C-eindstandige on- .

beschermde peptide-fragment in een watervrij organisch oplosmiddel | met dicyclohexylcarbodiïmide en 1-hydroxybenzotriazool (DCC/l-j 15 HOBt) condenseert, \ (b) door toevoeging van trifluorazijnzuur in een j geringe stoechiometrische overmaat de Ddz-groep van het gecondenseerde fragment afsplitst, j (c) de overmaat zuur met een organische base neu- ! | 20 traliseert en j (d) het aldus verkregen N-eindstandige onbeschermde verlengde C-eindstandige fragment met het telkens volgende N-eind- j | standige Ddz-beschermde fragment onder herhaling van de trappen I (a), (b) en (c) zo dikwijls condenseert, tot de peptide-keten j 25 voltooid is en tenslotte de achtergebleven beschermingsgroepen op ' | gebruikelijke wijze afsplitst, waarbij als zijbeschermingsgroepen i voor Asp en Glu t-butylestergroepen, voor Ser en Thr tert.-butyl- j ! groepen, voor Lys benzyloxycarbonylgroepen en voor Asn 4.4'-di-methoxybenzhydrylgroepen worden gebruikt, en men eventueel de 30 N-eindstandige acetylgroep tegen een andere acylgroep uitwisselt.

De hier gebruikte afkortingen komen overeen met de IUPAG-IUB-voorstellen (J. Biol. Chem. 247, 977-983 (1972)).

Ddz betekent a.a-dimethyl-3.5-dimethoxybenzyloxycarbonyl, Z bete- kent benzyloxycarbonyl, Ac betekent acetyl, OBut betekent t-butyl-35 ester en Mbh betekent 4.4'-dimethyloxybenzhydryl. Als alkylgroepen komen rechte of vertakte resten met 1-6 koolstofatomen en bij voor- i 8020 19 5 3 keur 1-4 koolstofatomen in aanmerking. Als dragers worden de aan deskundigen bekende dragermaterialen, die voor de immobilisering van peptiden en proteïnen geschikt zijn, gebruikt.

Bij de werkwijze volgens de uitvinding is het essen- : 5 tieel de fragmenten, die het N-eindstandige eindstuk van het thymo- ; sine-αΐ-molecuul vertegenwoordigen, in een tenminste 1,5-voudige en bij voorkeur 2- tot 2,5-voudige stoechiometrische overmaat te

; I

gebruiken. Daar bij de condensatie van twee fragmenten telkens een nieuw groter C-eindstandig fragment met een N-eindstandige Ddz-I 10 beschermingsgroep ontstaat en deze laatste voor de volgende conden- satietrap met een zeer kleine hoeveelheid zuur reeds kan worden af- j gesplitst is ook voor de neutralisatie slechts een kleine hoeveelheid base nodig. Daarmee worden de bij de tot nu toe bekende werkwijzen gebruikelijke vele afzonderlijke trappen en tussentijdse 15 opwerkingen dermate vereenvoudigd, dat voor de isolering van het ! telkens verkregen reactieprodukt een eenmalige chromatografische : scheiding van het reactiemengsel via een kolom kan worden toegepast.;

Bij voorkeur gebruikt men Sephadex LH20 in een oplosmiddel, methanol en 2.2.2-trifluorethanol. In het geval van de aan een drager 20 gebonden fragment-condensatie is ook de laatstgenoemde chromatogra-fische tussenprodukt-isolering overbodig. j

Daar volgens de uitvinding in een watervrij organisch oplosmiddel wordt gewerkt worden bijzondere droogtrappen voor de verwijdering van het water overbodig. Ook de doelmatig door chroma-j 25 tografie uitgevoerde zuivering van het volledig beschermde eindprodukt kan in hetzelfde watervrije organische oplosmiddel worden ! uitgevoerd. j

Voor trap (a) wordt als oplosmiddel bij voorkeur dimethylformamide gebruikt. Andere geschikte oplosmiddelen zijn j j 30 N-methylpyrrolidon en mengsels van deze beide zowel als dimethyl- j | aceetamide. j

In trap (b) geniet als oplosmiddel voor het zuur dichloormethaan de voorkeur. Andere geschikte oplosmiddelen zijn chloroform, tetrahydrofuran en dioxan.

35 De toepassing van een 1 %'s tot ongeveer 5 %'s ____trifluorazijnzuuroplossing in dichloormethaan geniet in het bijzon- 80 2 0 19 5 4 der de voorkeur. Een bijzonder voordeel van het trifluorazijnzuur bestaat hierin, dat dit ook in het raam van de afsluitende af^Lit- j sing van de tert.-butylester-beschermingsgroepen en de 4.4’-di- j j methoxybenzhydryl-beschermingsgroep kan worden gebruikt, waarbij ! j : i 5 uitsluitend de concentratie daarvan wordt verhoogd.

| 1 I Voor de neutralisatie kunnen in principe alle in i j j een organisch oplosmiddel oplosbare of aan een drager gebonden, i organische tertiaire aminen worden gebruikt. In het bijzonder de i | voorkeur geniet N-methylmorfoline, omdat het racemiseringen onder- 10 drukt en daardoor de optische zuiverheid van het produkt verbetert.

|

Na de beëindiging van trap (a) dampt men het ορίσει middel doelmatig in vacuo af en zuivert men het residu chromato- grafisch, bijvoorbeeld over een moleculair zeefmateriaal, zoals verknoopt dextran, polystyreen of dergelijke. De chromatografie 15 geschiedt in een geschikt watervrij oplosmiddel, zoals een alkanol, ; een halogeenkoolwaterstof, etc. De voorkeur geniet methanol. In I het geval van de drager-gebonden fragment-condensatie wordt uit sluitend met dimethylformamide en dichloormethaan van de polymere drager gewassen.

20 De als uitgangsprodukten voor de werkwijze volgens | de uitvinding gebruikte peptide-fragmenten kunnen onder toepassing ! j van bij de peptide-synthese op zichzelf bekende methodes worden bereid. Bij voorkeur geschiedt de synthese daarvan eveneens onder i S 1 I toepassing van DdZ-beschermingsgroepen. Daarbij worden gemengde ! 25 anhydriden van de DdZ-aminozuren met isobutyloxycarbonylchloride/ N-methylmorfoline door N-eindstandige trapsgewijze reeksverlenging opgebouwd. Volgens een procedure, die in het bijzonder de voorkeur ; geniet, worden 1,5-2 equivalenten van de telkens gebruikte DdZ- aminozuren, N-methylmorfoline en sec.-butyloxycarbonylchloride in 30 dichloormethaan opgelost en bij ongeveer -10 tot -20°C gemengd met j

een oplossing, die men door omzetting van een equivalent DdZ-amino-J

zuur-tert.-butylester respectievelijk DdZ-oligopeptide-tert.-butyl-! ester in dichloormethaan, dat 1-5 % trifluorazijnzuur bevat en j ongeveer 15 tot 30 minuten op een normale temperatuur gehouden en 35 vervolgens met N-methylmorfoline geneutraliseerd wordt, verkrijgt, j

De gemengde oplossingen laat men vervolgens gedurende ongeveer j 80 20 19 5 .... 5 30 minuten tot 2 uren bij kamertemperatuur reageren. Het reactie- j | mengsel wordt in vacuo drooggedampt en chromatografisch over een geschikt chromatografie-materiaal, bijvoorbeeld verknoopt dextran, zoals Sephadex LH20, in een oplosmiddel, zoals methanol, gezuiverd.

5 Na de verwijdering van dit oplosmiddel kan direct de volgende con-densatietrap op de beschreven wijze worden uitgevoerd totdat het telkens gewenste peptide-fragment is verkregen. In het geval van de l ; | drager-gebonden fragment-condensatie wordt na de voltooiing van de reactie met dimethylformamide en dichloormethaan van de polymere ; ! I 10 drager gewassen. j

De opbouw van thymosine-αΐ uit de aldus verkregen | fragmenten wordt door de bijgaande tekening verder geïllustreerd.

| Men ziet dat vijf fragmenten worden bereid, die uit de aminozuren | 1-6 (fragment I), 7-12 (fragment II), 13-19 (fragment III), 20-24 j 15 (fragment IV) zowel als 25-28 (fragment V) bestaan. Fragment V als i C-eindstandig fragment wordt daarna volgens de uitvinding met j fragment IV omgezet, waarbij men het verlengde C-eindstandige frag-' | ment VI verkrijgt. Op dezelfde wijze wordt fragment VI weer met | fragment III omgezet, waarbij fragment VII als nieuw C-eindstandig-:

I 20 fragment ontstaat. Dit laatste wordt met fragment II onder vorming I

van fragment VIII en dit tenslotte met fragment I onder vorming ! van de gerede peptide-keten IX omgezet, waaruit uitsluitend nog de beschermingsgroep wordt afgesplitst. Wanneer eventueel de ace- tylgroep tegen een andere acylgroep moet worden uitgewisseld dan

25 geschiedt dit bij de opbouw van fragment I. De fragmenten I en V

worden bij voorkeur als benzylester, V eventueel drager-gebonden j en II, III en IV als methylester bereid. De vrijmaking van de j carboxyl-eindgroep uit de ester geschiedt doelmatig door alkali- j sche verzeping, in het geval van de methylester in waterige dioxan - 30 en in het geval van de benzylester in tetrahydrofuran/methanol. j

De condensatiereactie zelf wordt bij voorkeur in dimethylformamide als oplosmiddel uitgevoerd. De opbrengsten bij de afzonderlijke condensatie-trappen zijn daarbij uitstekend en bereiken een waarde tot 90 %. Bij fragment I wordt de benzylester- j 35 groep doelmatig door hydrering verwijderd. Een geschikt oplosmiddel is een mengsel van propanol en ijsazijn zowel als 2.2.2-trifluor- 80 2 0 195 6

ethanol. Als katalysator wordt doelmatig palladium-op-kool, I

palladium-op- of platina-zwart gebruikt.

Zoals reeds werd vermeld maakt de werkwijze volgens de uitvinding ook de synthese van zekere thymosine-αΐ-derivaten 5 mogelijk en wel van die derivaten, waarbij de aminozuren 10 (Glu), 15 (Asp), 21 (Glu), 25 (glu) en 28 (Asn) in plaats van een carboxylgroep een amide- of alkylamide-groep bezitten. In dit ge-| val worden bij de overeenkomstige synthese-trap van het fragment in plaats van de in natuurlijk thymosine-αΐ aanwezige aminozuren 10 de reeds in het amide of alkylamide omgezette derivaten van deze ; aminozuren gebruikt. Bij Asn wordt daarbij het overeenkomstige diamide gebruikt omdat Asn op zichzelf reeds een amide is.

De genoemde derivaten bezitten bijzondere therapeutische eigenschappen en vertonen een ten opzichte van thymosine- j 15 al gewijzigde werking. Als nieuwe verbindingen vallen deze analo- i gen eveneens binnen het raam van de uitvinding. j | Ook de N-eindstandige acetylgroep kan ter veran- j i dering van de werking respectievelijk de werkingssterkte tegen

| een andere acylgroep worden uitgewisseld. Bij voorkeur wordt daar- I

i . . . . i ! 20 bij in plaats van de acetylrest een acylglycme-rest ingevoerd.

| De uitvinding wordt verder toegelicht maar niet j beperkt door het volgende voorbeeld, dat gelezen moet worden aan | de hand van de bijgaande tekening. j i i j Voorbeeld ! 25 Bereiding van thymosine-al.

! - j De fragmenten I (1-6), II (7-12), III (13-19), IV (20-24) en V (25-28) werden in oplossing onder toepassing van j een overmaat van gemengde anhydriden van de DdZ-aminozuren met j isobutyloxycarbonylchloride/N-methylmorfoline door N-eindstandige, j 30 trapsgewijze reeksverlenging onder alzijdige bescherming opgebouwd.:

Daarna verkreeg men de fragmenten I en V als benzylesters en de fragmenten II, III en IV als methylesters in de volgende, over alle trappen berekende opbrengsten: I (67 %), II (20 %), III (31 %), IV (56 %) en V (39 %).

35 Na de alkalische verzeping in waterige dioxan werd fragment IV in dimethylformamide met V gecondenseerd, nadat uit dit 8020 19 5 7 I laatste van te voren de DdZ-groep met 1 %'s trifluorazijnzuur in I dichloormethaan (v/v) was afgesplitst. De condensatie geschiedde ! met dicyclohexylcarbodiïmide/l-hydroxybenzotriazool (DCC/HOBt) ge- i ! j durende 24 uren bij 20°C, waarbij een opbrengst van 70 % werd ver-

5 kregen. Men verkrijgt aldus fragment VI. I

Fragment III wordt na de alkalische verzeping in waterig tetrahydrofuran/methanol met fragment VI onder de hierboven beschreven omstandigheden in dimethylformamide bij kamertemperatuur in 66 uren verknoopt. Men verkrijgt fragment VII in een I 10 opbrengst van 60 %.

j In de volgende trap wordt fragment VII na een op de-j I zelfde wijze als bij V uitgevoerde DdZ-afsplitsing in dimethyl- j formamide N-eihdstandig met fragment II verknoopt, dat van te vo- ! ren in dioxan/water (volumeverhouding 8:2) was verzeept. De conden-j15 satie werd gedurende 18 uren bij 0°C en gedurende 10 uren bij 20°C uitgevoerd. De opbrengst aan fragment VIII bedroeg 67 %. '

Voor de laatste condensatie werd uit het N-eind-standige acetylfragment I de benzylestergroep hydrogenolytisch in j propanol-ijsazijn afgesplitst. Het vrije zuur van I werd in N-me- j 20 thylpyrrolidon-dimethylformamide (volumeverhouding 2:1) in 24 uren met VIII na een voorafgaande DdZ-afsplitsing omgezet. De opbrengst aan produkt IX bedroeg 52 %. j IX werd in 2.2.2-trifluorethanol over Sephadex 1 . . ; LH20 chromatografisch gezuiverd. Aminozuren-analyse (berekende j 25 waarden tussen haakjes: 6N. HC1, 110°C, 24 uren): j

Asp 4,11 (4); Thr (2,64(3); Ser 2,38(3); Glu 6,80(6); I

Lys 4,59(4); Ile 1,13(1); Leu 1,23(1); Ala 2,51(3); Val 2,41(3). 1

Bij drie afsluitende reactietrappen werd IX van alle beschermingsgroepen bevrijd. Door hydrogenolyse in 2.2.2-tri-30 fluorethanol met Pd/C konden alle benzyloxycarbonyl-beschermings-groepen en de C-eindstandige benzylester worden verwijderd (opbrengst 96 %). Door inwerking gedurende 30 minuten van trifluor-azijnzuur/dichloormethaan (volumeverhouding 1:1) in tegenwoordigheid van 10 vol.% anisool werden hoofdzakelijk de tertiaire butyl-35 estergroepen afgesplitst. Na de afdamping van de vluchtige bestanddelen bij kamertemperatuur in vacuo bedeelde men het polypep- 80 2 0 19 5 8 I tide/anisool/residu met zuiver trifluorazijnzuur teneinde de 4.4'- ; I dimethoxybenzhydryl-beschermingsgroep en de achtergebleven tert.- | butylresten af te splitsen (120 minuten, ongeveer 20°C). Na de I precipitatie en wassing met ether werd het synthetische thymosine- , j 5 al chromatografisch gezuiverd. Hiertoe werd aan een kolom (0,6 x : 240 cm), die Bio-Gel P6 bevatte, in 1 % azijnzuur (10 % aan tri- fluorethanol) eerst het retentie-volume voor de geoxydeerde insu-line-B-keten (Molecuulgewicht: 3495) bepaald en vervolgens het i synthetische thymosine-αΐ gechromatografeerd. Dit trad met het met i | 10 zijn molecuulgewicht (3107) overeenkomend elutie-volume uit de ! zuil (opbrengst 90 %, gebaseerd op IX). Aminozuren-analyse (be- ! * O ; | rekende waarden tussen haakjes: 6N. HC1/110 C/24, 48, 96 uren): I Asp 4,11(4), Thr 2,86(3); Ser 2,70(3); Glu 5,89(6); Lys 3,98(4); j Ile 0,97(1); Leu 1,00(1); Ala 3,05(3); Val 2,97(3). Dunnelaagchro- ; I 15 matogram (kiezelgel Merck 60 F-254; 0,25 mm). Rf = 0,16 (n-butanol/; j pyridine/ijsazijn/water 5:5:1:4 (V/V), uniform.

| laJ\5 ; “96° <579 ™)· j -201,7° (435 nm), -242,5° (408 nm), -338,5° (365 nu), -587,0° (313 nm); c = 0,083 in water. j 20 Het synthetische thymosine-αΐ bleek biologisch ac- j tief bij de proef op de lymfocyten-stimulering, bij de E-rosetten- |

! proef en bij de mitogeen-proef. I

25 1 8020 19 5 i i ! j

Claims

1. Werkwijze ter bereiding van thymosine-αΐ of een derivaat daarvan, waarbij' tenminste één van de aminozuren 10, 15, 21, 25 en 28 als amide of alkylamide aanwezig is en/of de acetyl- | 5 groep door een andere acylgroep is vervangen, door bereiding van ! ; ! een reeks van beschermingsgroepen-bevattende peptide-fragmenten, condensatie daarvan en daarnavolgende afsplitsing van de bescher- | ! 1 i mingsgroepen, met het kenmerk, dat men j (a) het N-eindstandig onbeschermde, C-eindstandig veresterde of 10 drager-gebonden, C-eindstandige peptide-fragment in tenminste een 1,5-voudige stoechiometrische ondermaat met het naburige N-eind- j standig Ddz-beschermde, C-eindstandig onbeschermde peptide-fragment ! in een watervrij organisch oplosmiddel met dicyclohexylcarbodi- imide en 1-hydroxybenzotriazool condenseert, ! 15 (b) door toevoeging van trifluorazijnzuur in een geringe stoechio- i . | metrische overmaat de Ddz-groep van het gecondenseerde fragment j afsplitst, (c) de overmaat zuur met een organische base neutraliseert en (d) het aldus verkregen N-eindstandig onbeschermde verlengde C- j 20 eindstandige fragment met het telkens volgende N-eindstandig Ddz- beschermde fragment onder herhaling van de trappen (a), (b) en (c) zo dikwijls condenseert tot de peptide-keten voltooid is en tenslotte de achtergebleven beschermingsgroepen op gebruikelijke wijze | afsplitst, waarbij als zijbeschermingsgroepen voor Asp en Glu j 25 t-butylestergroepen, voor Ser en Thr tert.-butylgroepen, voor Lys benzjfoxycarbonylgroepen en voor Asn 4.4’-dimethoxybenzhydryl-groepen worden gebruikt, en eventueel de N-eindstandige acetyl- ; groep tegen een andere acylgroep uitwisselt. !

2. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, j 30 dat men peptide-fragmenten gebruikt, die tenminste één van de glu- j taminezuurresten 10, 21, 25 en/of de asparaginezuurrest 15 en/of de ; i asparaginerest 28 in de vorm van het amide of alkylamide respec- J tievelijk in het geval van het asparagine 28 van het diamide bevatten.

3. Werkwijze volgens condbsies 1 of 2, met het kenmerk, dat men als oplosmiddel in trap (a) dimethylformamide ge- 80 2 0 19 5 % I bruikt. I i , . j

4. Werkwijze volgens conclusies 1-3, met het ken- , I merk, dat in trap (b) trifluorazijnzuur in dichloormethaan wordt i s toegevoegd. j

5. Werkwijze volgens conclusie 4, met het ken- ' | merk, dat men een 1-5 %’s oplossing van trifluorazijnzuur gebruikt.

6. Werkwijze volgens een of meer der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de condensatie van trap (a) bij j een temperatuur tussen 0 en 30°C wordt uitgevoerd. j | 10

7. Werkwijze volgens een of meer der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de benzyloxycarbonyl-beschermings-groepen en een C-eindstandige benzylestergroep door hydrogenolyse i in trifluorethanol worden afgesplitst.

8. Werkwijze volgens een of meer der voorgaande : 15 conclusies, met het kenmerk, dat tert.-butylestergroepen met j 40-60 %'s trifluorazijnzuur in dichloormethaan in tegenwoordigheid van anisool worden afgesplitst.

9. Werkwijze volgens een of meer der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de 4.4'-dimethylbenzhydryl-be- 20 schermingsgroep in zuiver trifluorazijnzuur wordt afgesplitst. j J

10. Werkwijze volgens een of meer der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat in trap (b) de neutralisatie wordt uitgevoerd met N-methylmorfoline. i

11. Werkwij ze volgens een of meer der voorgaande ! 25 conclusies, met het kenmerk, dat de trappen (a), (b) en (c) aan j de drager-gebonden fragmenten V, VI, VII, VIII en IX worden uitge- i voerd.

12. Polypeptiden met de volgorde Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-

30 Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn, mét hét kenmerk, dat tenminste éên van de aminozuren 10, 15, 21, 25 en/of 28 als amide of alkylamide aanwezig is en/of aminozuur 1 een van acetyl verschillende acyl-groep met tot 6 koolstofatomen, in het bijzonder een acylglycine-rest, draagt.

13. Thymosine-al-fragment I met de formule 8020 19 5 * % I................................1..........................2 ............3......4 5 6 Ac-Ser(But)-Asp(OBut)-Ala-Ala-Val-Asp(OH) (OBu1") , | waarbij het fragment in plaats van de acetylgroep een andere acylgrqep, I in het bijzonder een acylglycinegroep, kan dragen, zowel als de ί I | 5 benzylesters daarvan. i . i

14. Thymosine-αΐ fragment II met de formule | 7 8 9 10 11 12 I Ddz-Thr(But)-Ser(But)-Ser(But)-Glu(OBut)-Ile-Thr(OH) (Bufc), ! waarbij de glutaminezuurrest 10 als amide of alkylamide aanwezig 10 kan zijn, zowel als de methylester daarvan.

15. Thymosine-al-fragment III met de formule j i Ddz-Thr(But)-Lys(Z)-Asp(OBut)-Leu-Lys(Z)-Gl§(OBut)-Lys(OH) (Z), | waarbij de asparaginezuurrest 15 als amide of alkylamide aanwezig j kan zijn, zowel als de methylesters daarvan. i !

16. Thymosine-al-fragment IV met de formule j 20 21 22 23 24 ! f- *. \ Ddz-Lys(Z)-Glu(OBu )-Val-Val-Glu(OH) (OBu ), waarbij de glutaminezuurrest 21 als amide of alkylamide aanwezig j kan zijn, zowel als de methylesters daarvan. j

17. Thymosine-al-fragment V met de formule 25 t 26 27 t 28 Ddz-Glu(OBu )-Ala-Glu(Obu )-Asn(Mbh) (OBzl) waarbij de glutaminezuurrest 25 als amide of alkylamide en de aspa- j | raginerest 28 als diamide of dialkylamide aanwezig kan zijn, zowel | als de benzylesters daarvan. ; |25 18. Thymosine-al-fragment VI met de formule 20 21 22 23 24 25 26 27 Ddz-Lys (Z) -Glu (OBu11) -Val-Val-Glu (OBu^ -Glu (OBu11) -Ala-Glu (OBu1) -28 | Asn(Mbh) (OBzl), 30 waarbij de glutaminezuurresten 21 en 25 en/of de asparaginerest 28 als amide of alkylamide respectievelijk als diamide of als dialkylamide aanwezig kunnen zijn.

19. Thymosine-al-fragment VII met de formule 13 14 15 16 17 18 19 20

35 Ddz-Thr (Bu1") -Lys (Z) -Asp (OBu1") -Leu-Lys (Z) -Glu (OBu1") -Lys (Z) -Lys (Z) - 80 20 19 5 , - 12 - X 21 22 23 24 25 26 27 28 Glu (OBu1) -Val-7al-Glu(OBut) -GluCOBu*1) -Ala-GluCOBu^ -Asn(Mbh) (OBzl), | waarbij de glutaminezuurresten 21 en 25, de asparaginezuurrest 15 en/of de asparaginerest 28 als amide of alkylamide respectie-5 velijk als diamide of als dialkylamide aanwezig kunnen zijn.

20. Thymosine-al-fragment VIII met de formule 7 8 9 10 11 12 13 Ddz-Thr(but)-Ser(Bu11)- Ser(Bu*)-GluiOBu*)-Ile-Thr(Bufc)-Thr(Bufc)-14 15 16 17 18 19 20 21

10 Lys (Z) -Asp (0But) -Leu-Lys (Z) -Glu(OBvf) -Lys (Z) -Lys (Z) -Glu (OBu^ - 22 23 24 25 26 27 28 Val-Val-Glu(QBut)-Glu(0But)-Ala-Glu(0But)-Asn(Mbh)(OBzl), waarbij de glutaminezuurresten 10, 21 en 25, de asparaginezuurrest 15 en/of de asparaginerest 28 als amide of alkylamide res-15 pectievelijk als diamide of als dialkylamide aanwezig kunnen zijn. j i · ! i i j i i ! ! i ί i ! 8020 19 5