NL2030305B1 - Labeling Method for Improving Signal Intensity of Time-Resolved Fluorescence and Application Thereof - Google Patents

Claims (3)

CONCLUSIES

1. Een markeringsmethode voor het verbeteren van de signaalintensiteit van tijdsopgeloste fluorescentie, gekenmerkt door de volgende stappen te omvatten: (1) oplossen van 5 tot 8 mg 2-S-(4-aminofent)-1,4,7,10-tetraazacyclononaan-1,4,7,10-tetraazijnzuur (p-NH2-Bn-DOTA, hierin DOTA genoemd) in 2 mL van een 0,01 mol L-1 4-{2-hydroxyethyl}-1-piperazineethaansulfonzuur (HEPES)-oplossing bij pH 7,4 om een DOTA-chelaatvormeroplossing te verkrijgen, waarbij de verkregen oplossing oplossing A is; (2) het toevoegen van 500 tot 700 pL van een 20 mmol-L-1 glutaaraldehyde-oplossing aan oplossing A, een nacht laten reageren bij kamertemperatuur en beschermen tegen licht, waardoor een oplossing B wordt verkregen; (3) het wegen van 20 tot 30 mg van een gelyofiliseerd poeder van een gezuiverd monoklonaal antilichaam, dit oplossen in 3 mL van een HEPES-oplossing {0,01 mol-L-1, pH 7,4) en goed mengen door magnetisch roeren bij kamertemperatuur, waardoor een oplossing C wordt verkregen; (4} het toevoegen, druppelsgewijs, van oplossing B aan oplossing C, vervolgens de pH instellen op 9,0, roeren om te reageren gedurende 4 tot 6 uur bij 4°C en beschermen tegen licht, waardoor een oplossing D wordt verkregen; (5) oplossing D in een 8-kDa MWCO (molecular weight cutoff) dialysemembraan plaatsen en dit dialyseren met een 0,01 mol-L-1 HEPES-bufferoplossing bij pH 7,4, waarbij om de 4 uur vloeistof wordt verwisseld voor van in totaal 4 tot 5 keer verwisselen, en vervolgens een reactieoplossing in het dialysemembraan pipetteren, waardoor een oplossing E wordt verkregen; (6) het wegen van 0,11 tot 0,15 g EuCI3-6H20 en het bereiden van een EuCl3-oplossing met 5 mi ultrapuur water, waardoor een oplossing F wordt verkregen; (7) het toevoegen van 200 tot 400 ub van oplossing F aan oplossing E, gedurende 4 tot 6 uur reageren bij kamertemperatuur en beschermen tegen licht, en vervolgens dialyseren in een 8-kDa MWCO (molecular weight cutoff) dialysemembraan, waarbij om de 4 uur vloeistof wordt verwisseld voor van in totaal 4 tot 5 keer verwisselen, daarna centrifugeren gedurende 3-5 keer met een 30-kDa centrifugale ultrafiltratiebuis bij 7000 tot 9000 rpm, opnieuw oplossen met 5 tot 10 mL van 0,01 mol-L-1 HEPES-oplossing bij pH 7,4, waarbij de bereide reactieoplossing een olaquindox tijdsopgeloste fluorescentie immunolabeling antilichaamcomplex is.

2. Een markeringsmethode voor het verbeteren van de signaalintensiteit van tijdsopgeloste fluorescentie volgens conclusie 1, met het kenmerk dat, het monoklonale antilichaam een olaguindox monoklonaal antilichaam of een garamycine monoklonaal antilichaam is.

3. Een toepassing van 2-S-(4-aminophenl)-1,4,7,10-teraazacyclononaan-1,4,7,10-tetraazijnzuur bij het verbeteren van de signaalintensiteit van tijdsopgeloste fluorescentie.