MXPA99012081A - Derivados de benzo(5,6)ciclohepta(1,2-b)piridina para la inhibicion de farnesil-proteina transferasa - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a compuestos novedosos corno los de las fórmulas (I), (II), (III), (IV), (V) y (VI):(Ver Fórmula) se describen también métodos para inhibir el crecimiento anormal de células, para inhibir farnesil-proteína transferasa y para tratar cánceres usando los compuestos novedosos.

Description

DERIVADOS DE BENZO(5,6)CICLOHEPTA(1 ,2-B)PIRIDINA PARA LA INHIBICIÓN DE FARNESIL-PROTEINA TRANSFERASA ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las publicaciones internacionales de PCT Nos. WO95/00497 y WO95/10516 describen la significatividad biológica del oncogen Ras y el papel tanto de Ras como de ia enzima conocida como farnesil transferasa en la conversión de células normales en células cancerosas. Cada una de esas publicaciones describe también una clase distinta de compuestos que inhiben la actividad de la enzima farnesil transferasa, y por consiguiente la farnesilación de la proteína Ras. La publicación internacional de PCT No. WO95/10516 se refiere a compuestos de amida y urea tricíclicos de la fórmula general (1.0) y su uso en un método para inhibir la función de Ras y el crecimiento anormal de células. Se describe un número de clases subgenéricas de compuestos de la fórmula (1.0), las cuales incluyen compuestos de las fórmulas (5.0c), (5.1c) Y (5.2a) así como el isómero 11-R y los isómeros 11-S de los compuestos (5.0c) y (5.1c). También se describe ahí un número de compuestos específicos dentro de cada subgénero, al igual que la actividad biológica de esos compuestos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención provee compuestos de amida tricíclicos novedosos seleccionados del grupo que consiste de: o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos. La rotación óptica de los compuestos ((+)- o (-)-) se mide en metanol o etanol a 25°C. Esta invención incluye los compuestos anteriores en el estado amorfo o en el estado cristalino. De esta manera, los compuestos de esta invención incluyen compuestos seleccionados del grupo que consiste de: compuestos 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 7.0 y 6.0, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde dichos compuestos son como se definió arriba. Los compuestos de esta invención también incluyen compuestos seleccionados del grupo que consiste de: compuestos 10.0, 1 1.0, 12.0, 13.0, 16.0, 17.0, 18.0, 19.0, 20.0, 21.0 y 22.0, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde dichos compuestos son como se definió arriba. Los compuestos de esta invención también incluyen compuestos seleccionados del grupo que consiste de: compuestos 8.0, 9.0, 14.0 y 15.0, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde dichos compuestos son como se definió arriba. Los compuestos de esta invención también incluyen compuestos seleccionados del grupo que consiste de: compuestos 23.0, 25.0, 26.0, 27.0, 28.0, 29.0, 30.0, 31.0, 32.0, 33.0, 34.0, 60.0, 61.0, 62.0, 63.0 y 64.0, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde dichos compuestos son como se definió arriba. Los compuestos de esta invención también incluyen compuestos seleccionados del grupo que consiste de: compuestos 23.0A, 24.0, 35.0, 36.0, 37.0, 38.0, 39.0, 40.0, 41.0, 42.0, 47.0, 48.0, 49.0, 50.0, 51.0, 52.0, 53.0, 54.0, 55.0, 56.0, 57.0, 58.0, 59.0 y 65.0, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde dichos compuestos son como se definió arriba. Los compuestos de esta invención también incluyen compuestos seleccionados del grupo que consiste de: compuestos 43.0, 44.0, 45.0 y 46.0, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde dichos compuestos son como se definió arriba. Los compuestos que se prefieren incluyen los compuestos 5.0, 7.0, 25.0, 27.0, 29.0 y 34.0.

Los compuestos que se prefieren también incluyen los compuestos 51.0 y 53.0. Los compuestos que se prefieren también incluyen los compuestos 40.0 y 42.0. Los compuestos que más se prefieren son los compuestos 25.0, 27.0, 51.0 y 53.0. Los expertos en la técnica apreciarán que el sistema de anillo tricíclico está enumerado: Los expertos en la técnica también apreciarán que la estereoquímica S y R en el enlace C-1 1 son: La inhibición de la farnesii-proteína transferasa por los compuestos tricíclicos de esta invención no ha sido reportada previamente. De esta manera, esta invención provee un método para inhibir la farnesii-proteína transferasa usando los compuestos tricíclicos de esta invención, los cuales: (i) inhiben en forma potente la farnesii-proteína transferasa, pero no la geranilgeranil-proteína transferasa I, in vitro; (ii) bloquean el cambio fenotípico inducido por una forma de transformar Ras que es un receptor de farnesilo pero no por una forma de transformar Ras diseñado para ser un receptor de geranilgeranilo; (iii) bloquean el procesamiento intracelular de Ras, el cual es un receptor de farnesilo pero no de Ras diseñado para ser un receptor de geranilgeranilo y (iv) bloquean el crecimiento anormal de células en cultivo inducido transformando Ras. Esta invención provee un método para inhibir o tratar el crecimiento anormal de células, incluyendo células transformadas, administrando una cantidad efectiva de un compuesto de esta invención. El crecimiento anormal de células se refiere al crecimiento de células independiente de mecanismos reguladores normales (por ejemplo, pérdida de la inhibición de contacto). Esto incluye el crecimiento anormal de: (1 ) células tumorales (tumores) que expresan un oncogen Ras activado; (2) células tumorales en las cuales la proteína Ras es activada como resultado de la mutación oncogénica en otro gen; y (3) células benignas y malignas de otras enfermedades proliferativas en las cuales ocurre la activación aberrante de Ras. Esta invención provee también un método para inhibir o tratar el crecimiento de tumores (cáncer) administrando una cantidad efectiva de los compuestos tricíclicos descritos aquí a un mamífero (por ejemplo, un humano) que requiera de dicho tratamiento. En particular, esta invención provee un método para inhibir o tratar el crecimiento de tumores que expresan un oncogen Ras activado mediante la administración de una cantidad efectiva de los compuestos descritos arriba. Ejemplos de tumores que pueden ser inhibidos o tratados incluyen, pero no están limitados a, cáncer de pulmón (por ejemplo, adenocarcinoma de pulmón), cánceres pancreáticos (por ejemplo, carcinoma pancreático tal como, por ejemplo, carcinoma pancreático exócrino), cánceres de colon (por ejemplo, carcinomas colorrectales, tales como, por ejemplo, adenocarcinoma de colon y adenoma de colon), leucemias mieloides (por ejemplo, leucemia mielógena aguda (AML)), cáncer folicular tiroideo, síndrome mielodisplástico (MDS), carcinoma de vejiga, carcinoma epidérmico, cánceres de mama y cánceres de próstata. Se cree que esta invención provee también un método para inhibir enfermedades proliferativas, tanto benignas como malignas, en donde las proteínas Ras son activadas en forma aberrante como resultado de la mutación oncogénica en otros genes -es decir, el propio gen Ras no es activado por la mutación a una forma oncogénica- dicha inhibición lográndose mediante la administración de una cantidad efectiva de los compuestos tricíclicos descritos en la presente, a un mamífero (por ejemplo, un humano) que requiera de dicho tratamiento. Por ejemplo, el trastorno proliferativo benigno neurof ibromatosis, o tumores en los cuales Ras es activado debido a la mutación o sobreesprexión de oncogenes de tirosina cinasa (por ejemplo, neu, sre, abl, Ick y fyn), puede ser inhibido por los compuestos tricíclicos descritos en la presente.

Los compuestos de esta invención inhiben la farnesii-proteína transferasa y la farnesilación de la proteína oncogénica Ras. Esta invención provee además un método para inhibir la farnesii-proteína transferasa de ras en mamíferos, especialmente humanos, mediante la administración de una cantidad efectiva de los compuestos tricíclicos descritos arriba. La administración de los compuestos de esta invención a pacientes para inhibir la farnesii-proteína transferasa, es útil en el tratamiento de los cánceres descritos arriba. Los compuestos tricíclicos útiles en los métodos de esta invención inhiben el crecimiento anormal de células. Sin desear ser limitados por teoría, se cree que estos compuestos podrían funcionar mediante la inhibición de la función de la proteína G, tal como ras p21 , bloqueando la isoprenilación de la proteína G, haciéndolos de esta manera útiles en el tratamiento de enfermedades proliferativas tales como crecimiento tumoral y cáncer. Sin desear ser limitados por teoría, se cree que estos compuestos inhiben la farnesii-proteína transferasa de ras, y de esta forma muestran actividad antiproliferativa contra células transformadas por ras.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Según se usan en la presente, los siguientes términos se usan como se define abajo, a menos que se indique lo contrario: M+- representa el ion molecular de la molécula en el espectro de masas; MH+- representa el ¡on molecular más hidrógeno de la molécula en el espectro de masas; Los N-óxidos de piridilo se representan aquí por el grupo Se hace referencia a los siguientes solventes y reactivos con las abreviaturas indicadas: tetrahidrofurano (THF); etanol (EtOH); metanol (MeOH); ácido acético (HOAc o AcOH); acetato de etilo (EtOAc); N,N-dimetilformamida (DMF); ácido trifluoroacético (TFA); anhídrido trifluoroacético (TFAA); 1-hidroxi-benzotriazol (HOBT); ácido m-cloroperbenzoico (MCPBA); trietilamina (Et3N); éter dietílico (Et2O); cloroformiato de etilo (CICO2Et); clorhidrato de 1-(3-dimetialminopropil)-3-etilcarbodiimida (DEC); hidruro de diisobutilaluminio (DIBAL); isopropanol (iPrOH); dimetilsulfóxido (DMSO). Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en diferentes formas isoméricas (por ejemplo, enantiómeros o diastereoisómeros), incluyendo atropisómeros (es decir, compuestos en los que el anillo de 7 miembros está en una conformación fija por lo que el átomo de carbono 1 1 está colocado sobre o debajo del plano de los anillos de benceno fusionados debido a la presencia de un sustituyente 10-bromo). La invención contempla todos esos isómeros tanto en forma pura como en mezcla, incluyendo mezclas racémicas. También se incluyen las formas enol. Ciertos compuestos tricíclicos básicos forman también sales farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, sales acidas de adición. Por ejemplo, los átomos de pirido-nitrógeno pueden formar sales con ácidos fuertes. Ejemplos de ácidos adecuados para la formación de sal son ácidos clorhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, cítrico, oxálico, malónico, salicílico, málico, fumárico, succínico, ascórbico, maleico, metansulfónico y otros ácidos minerales y carboxílicos bien conocidos por los expertos en la técnica. Las sales se preparan poniendo en contacto la forma de base libre con una cantidad suficiente del ácido deseado para producir una sal de la manera convencional. Las formas de base libre pueden ser regeneradas tratando la sal con una solución de base acuosa diluida tal como NaOH acuoso, carbonato de potasio, amoníaco y bicarbonato de sodio. Las formas de base libre son diferentes de sus formas de sal respectivas un poco en ciertas propiedades físicas, tales como solubilidad en solventes polares, pero las sales acidas y básicas son de otra manera equivalentes a sus formas de base libre respectivas para los propósitos de la invención. Todas esas sales están diseñadas para ser sales farmacéuticamente aceptables dentro del alcance de la invención, y todas se consideran equivalentes a las formas libres de los compuestos correspondientes para los propósitos de la invención.

Los compuestos de la presente invención pueden ser preparados mediante los procedimientos descritos a continuación.

Preparación de compuestos de piperidina Los compuestos de la invención que tienen un anillo de piperidina (Anillo IV): pueden ser preparados mediante técnicas bien conocidas en la técnica, a partir de los compuestos de piridilo no oxidados: De esta manera, los compuestos de la invención pueden prepararse a partir de: Los compuestos de piperidina (fórmula I) de la invención pueden prepararse a partir de los compuestos de piridilo anteriores mediante oxidación con ácido meta-cloroperoxibenzoico. Esta reacción es conducida en un solvente orgánico adecuado, por ejemplo, diclorometano (normalmente anhidro) o cloruro de metileno, a una temperatura adecuada, para producir los compuestos de la invención que tienen al sustituyente N-O en la posición 1 del anillo I del sistema de anillos tricíclico. En general, la solución de solvente orgánico del reactivo tricíclico de partida es enfriada a aproximadamente 0°C antes de que se añada el ácido m-cloro-peroxibenzoico. La reacción se deja después calentar a la temperatura ambiente durante el periodo de reacción. El producto deseado puede recuperarse mediante medios de separación normales. Por ejemplo, la mezcla de reacción puede ser lavada con una solución acuosa de una base adecuada, por ejemplo, bicarbonato de sodio saturado o NaOH (por ejemplo, NaOH 1 N), y después secarse sobre sulfato de magnesio anhidro. La solución que contiene el producto puede ser concentrada al vacío. El producto puede ser purificado mediante medios normales, por ejemplo, mediante cromatografía usando gel de sílice (por ejemplo, cromatografía en columna por vaporización). De manera alternativa, los compuestos de piperidina (fórmula I) de la invención pueden hacerse a partir de compuestos intermediarios de las fórmulas 1-1 a 65.1 usando el procedimiento de oxidación con ácido m-cloroperoxibenzoico. Los compuestos intermediarios oxidados se hacen reaccionar después para producir los compuestos de la invención mediante métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los compuestos 3,8-dihalógeno pueden producirse del intermediario: el cual se hace oxidando el compuesto de piridilo con ácido m-cloroperoxibenzoico.

Los compuestos 3,7,8-trihalógeno, compuestos 3,8,10-trihalógeno, compuestos 3,8-dihalógeno y los compuestos 3,10-dihalógeno pueden producirse a partir de los intermediarios: respectivamente. Los compuestos lll a VI pueden prepararse usando el procedimiento de oxidación anterior con ácido m-cloro-peroxibenzoico y los compuestos de piridilo respectivamente, para producir los compuestos: respectivamente. Los compuestos XI a XIV pueden convertirse después en los compuestos lll a VI, respectivamente, mediante métodos bien conocidos en la técnica. En los compuestos anteriores, la línea punteada ( — ) representa un enlace opcional, y X representa CH cuando el enlace opcional está ausente, y cuando el enlace opcional está presente X representa C. Los intermediarios N-O se hacen reaccionar después más para producir los compuestos de la invención. Los expertos en la técnica apreciarán que la reacción de oxidación puede ser conducida en mezclas racémicas, y que los isómeros pueden ser separados después mediante técnicas conocidas, o que los isómeros pueden ser separados primero y después oxidados al N-óxido correspondiente. Los expertos en la técnica apreciarán que es preferible evitar un exceso de ácido m-cloroperoxibenzoico cuando la reacción de oxidación se lleve a cabo en los compuestos que tengan un enlace doble C-1 1 al anillo de piperidina IV (por ejemplo, compuestos 5.1 , 6.1 , 9.1 y similares). En estas reacciones, un exceso de ácido m-cloro-peroxibenzoico puede causar la epoxidación del enlace doble C-1 1. Los compuestos intermediarios Vil, VIII, IX y X se preparan mediante métodos conocidos en la técnica, por ejemplo mediante métodos descritos en WO 95/10516, en E.U.A. 5,151 ,423 y aquellos descritos abajo.

Por ejemplo, los compuestos Vil a X pueden prepararse haciendo reaccionar los compuestos: Respectivamente, con C2H5OCOCI y Et3N en un solvente inerte (por ejemplo, CH2CI2). Los compuestos intermediarios XV, XVI, XVII y XVIII en los que la posición C-3 del anillo de piridina en la estructura tricíclica es sustituida por bromo también pueden prepararse mediante un procedimiento que comprenda los siguientes pasos: (a) hacer reaccionar una amida de la fórmula en donde R11a es Br, R5a es hidrógeno y R6a es alquilo, arilo o heteroarilo de C?-C6; R5a es alquilo, arilo o heteroarilo de CrC6 y R6a es hidrógeno; R5a y R6a se seleccionan independientemente del grupo que consiste de alquilo y arilo de C-?-C6; o R5a y R6a, junto con el nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo que comprende 4 a 6 átomos de carbono o comprende 3 a 5 átomos de carbono y una porción heterogénea seleccionada del grupo que consiste de -O- y -NR9a-, en donde R9a es H, alquilo de C-t-C6 o fenilo; con un compuesto de la fórmula en donde R1a, R2a, R3a y R4a se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno y halógeno, y R7a es Cl o Br, en presencia de una base fuerte para obtener un compuesto de la fórmula (b) hacer reaccionar un compuesto del paso (a) con (i) POCI3 para obtener un compuesto ciano de la fórmula (ii) o DIBALH para obtener un aldehido de la fórmula (c) hacer reaccionar el compuesto ciano o el aldehido con un derivado de piperidina de la fórmula en donde L es un grupo saliente seleccionado del grupo que consiste de Cl y Br, para obtener un aldehido o un alcohol de la siguiente fórmula, respectivamente: (d)(¡) ciclizar la cetona con CF3SO3H para obtener un compuesto de la fórmula en donde la línea punteada representa un enlace doble; o (d)(i¡) ciclizar el alcohol con ácido polifosfórico para obtener un compuesto intermediario en donde la línea punteada represente un enlace individual. Los métodos para preparar los compuestos intermediarios descritos en WO 95/10516, E.U.A. 5,151 ,423 y descritos abajo emplean un intermediario de cetona cíclico. Dichos intermediarios de la fórmula en donde R11b, R1a, R2a, R3a y R4a se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno y halógeno, pueden prepararse mediante el siguiente procedimiento que comprende: (a) hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (i) con una amina de la fórmula NHR 5oaaDR6a , e _ _n d -J?o_ndJe_ D R5saa y R >6a son como se definió en el procedimiento anterior; en presencia de un catalizador de paladio y monóxido de carbono para obtener una amida de la fórmula: (ii) con un alcohol de la fórmula R10aOH, en donde R10a es alquilo inferior de C Cß o cicloalquilo de C3-C6, en presencia de un catalizador de paladio y monóxido de carbono para obtener el éster de la fórmula seguido por la reacción del éster con una amina de la fórmula NHR5aR6a para obtener la amida; (b) hacer reaccionar la amida con un compuesto de bencilo yodo-sustituido de la fórmula en donde R1a, R2a, R3a, R4a y R7a son como se definió arriba, en presencia de una base fuerte para obtener un compuesto de la fórmula (c) ciclizar un compuesto del paso (b) con un reactivo de la fórmula R8aMgL, en donde R8a es alquilo, arilo o heteroarilo de C C8, y L es Br o Cl, siempre y cuando antes de la ciclización, los compuestos en los que R5a 0 Rßa sea hidrógeno se hagan reaccionar con un grupo N-protector adecuado. Los isómeros (+) de los compuestos de la fórmula XVI H en donde X es CH pueden prepararse con alta enantioselectividad usando un procedimiento que comprenda transesterificación catalizada por enzima. De manera preferible, un compuesto racémico de la fórmula XVI, en donde X es C y el enlace doble está presente, se hace reaccionar con una enzima tal como Toyobo LIP-300 y un agente acilante tal como isobutirato de trifluoroetilo; la amida (+) resultante se hidroliza después, por ejemplo mediante reflujo con un ácido tal como H2SO , para obtener el isómero (+) ópticamente enriquecido correspondiente, en donde X es CH. De manera alternativa, un compuesto racémico de la fórmula XVI, en donde X es C y el enlace doble está presente, se reduce primero al compuesto racémico correspondiente de la fórmula XVI en donde X es CH y después se trata con la enzima (Toyobo LIP-300) y agente acilante como se describió arriba para obtener la amida (+), la cual se hidroliza para obtener el isómero (+) ópticamente enriquecido. El compuesto del ejemplo de preparación 21 se obtiene en el estado cristalino. Los expertos en la técnica apreciarán que los compuestos obtenidos en el estado amorfo pueden obtenerse en el estado cristalino cristalizando los materiales amorfos a partir de solventes o mezclas de solventes tales como acetona, éter dietílico, acetato de etilo, etanol, 2-propanol, éter ter-butílico, agua y similares de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la técnica. Los expertos en la técnica apreciarán también que la mezcla racémica del compuesto 1 1.0 puede hacerse de acuerdo con los procedimientos descritos abajo. Por ejemplo, el intermediario del ejemplo de preparación 6 puede usarse para preparar el compuesto 11.0.

Preparación de los compuestos de piperazina Los compuestos de la invención que tienen un anillo de piperazina pueden prepararse a partir de la cetona tricíclica: La cetona XX puede prepararse mediante la oxidación del compuesto de piridilo correspondiente: con ácido m-cloroperoxibenzoico.

La cetona XX puede convertirse en el compuesto hidroxi C-11 correspondiente que a su vez puede ser convertido en el compuesto de cloro C-11 correspondiente.

El compuesto XXIII puede hacerse reaccionar después con piperazina para producir el intermediario: El intermediario XXIV puede hacerse reaccionar después con los reactivos que proveerán el producto final deseado. Las reacciones anteriores se conocen bien en la técnica y se ilustran en los siguientes ejemplos.

Los siguientes ejemplos están diseñados para ejemplificar la presente invención, y dichos ejemplos no deberán considerarse como limitantes de la descripción o de la presente invención.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 1 Paso A: Se combinan 10 g (60.5 mmoles) de 4-piridilacetato de etilo y 120 mL de CH2CI2 seco a -20°C, se añaden 10.45 g (60.5 mmoles) de MCPBA y se agita a -20°C durante 1 hora y después a 25°C durante 67 horas. Se añaden 3.48 g (20.2 mmoles) adicionales de MCPBA y se agita a 25°C durante 24 horas. Se diluye con CH2CI2 y se lava con NaHCO3 (acuoso) saturado y después agua. Se seca sobre MgSO , se concentra al vacío hasta un residuo y se somete a cromatografía (gel de sílice, 2%-5-5% (10% de NH4OH en MeOH)/CH2CI2) para dar 8.12 g del compuesto del producto. Espectro de masas: MH+ = 182.15.

Paso B Se combinan 3.5 g (19.3 mmoles) del producto del paso A, 17.5 mL de EtOH y 96.6 mL de NaOH al 10% (acuoso) y la mezcla se calienta a 67°C durante 2 horas. Se añade HCl a 2N (acuoso) para ajustar a pH = 2.37 y se concentra al vacío hasta un residuo. Se añaden 200 mL de EtOH seco, se filtra a través de Celite® y se lava la torta del filtro con EtOH seco (2X50 mi). Los materiales filtrados combinados se concentran al vacío para dar 2.43 g del compuesto del título.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 2 El compuesto del título se prepara mediante el procedimiento descrito en la publicación internacional de PCT No. WO 95/10516.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 3 Paso A Se combinan 14.95 g (39 mmoles) de 8-cloro-11-(1-etoxicarbonil-4-piperidin¡l)-11H-benzo[5,6]ciclohepta[1,2-b]-piridina y 150 mL de CH2CI2, después se añaden 13.07 g (42.9 mmoles) de (nBu)4NNO3 y la mezcla se enfría a 0°C. se añade lentamente (por goteo) una solución de 6.09 mL (42.9 mmoles) de TFAA en 20 mL de CH2CI2 durante 1.5 horas. La mezcla se mantiene a 0°C durante la noche, después se lava sucesivamente con NaHCO3 (acuoso) saturado, agua y salmuera. La solución orgánica se seca sobre Na2SO , se concentra al vacío hasta un residuo y se cromatografía el residuo (gel de sílice, gradiente de EtOAc/hexano) para dar 4.32 y 1 .90 g de los dos compuestos del producto 3A(i) y 3A(ii), respectivamente. Espectro de masas para el compuesto 3A(i): MH+ = 428.2. Espectro de masas para el compuesto 3A(i¡): MH+ = 428.3.

PasoJB Se combinan 22.0 g (51 .4 mmoles) del producto 3A(¡) del paso A, 150 mL de EtOH al 85% (acuoso), 25.85 g (0.463 moles) de Fe en polvo y 2.42 g (21.8 mmoles) de CaCI2, y se calienta a reflujo durante la noche. Se añaden 12.4 g (0.222 moles) de Fe en polvo y 1.2 g (10.8 mmoles) de CaCI2 y se calienta a reflujo durante 2 horas. Se añaden otros 12.4 g (0.222 moles) de Fe en polvo y 1.2 g (10.8 mmoles) de CaCI2 y se calienta a reflujo durante 2 horas más. La mezcla caliente se mezcla a través de Celite®, se lava el Celite® con 50 mL de EtOH caliente y se concentra el material filtrado al vacíio hasta dar un residuo. Se añaden 100 mL de EtOH anhidro, se concentra hasta un residuo y el residuo se somete a cromatografía (gel de sílice, gradiente de MeOH/CH2CI2) para dar 16.47 g del compuesto del producto. MH+ = 398.

Paso C Se combinan 16.47 g (41.4 mmoles) del producto del paso B y 150 mL de HBr al 48% (acuoso) y se enfría a -3°C. Se añade lentamente (por goteo) 18 mL de bromo, después se añade lentamente (por goteo) una solución de 8.55 g (0.124 moles) de NaNO en 85 mL de agua. Se agita durante 45 minutos a -3°-0°C, después se ajusta a pH = 10 añadiendo NaOH al 50% (acuoso). Se extrae con EtOAc, se lavan los extractos con salmuera y se secan los extractos sobre Na2SO4. Se concentra hasta un residuo y se somete a cromatografía (gel de sílice, gradiente de EtOAc/hexano) para dar 10.6 g y 3.28 g de los dos compuestos del producto 3C(i) y 3C(ii), respectivamente. Espectro de masas para el compuesto 3C(i): MH+ = 461.2. Espectro de masas para el compuesto 3C(ii): MH+ = 539.

Paso D Se hidroliza el producto 3C(i) del paso C disolviendo en HCl concentrado y calentando a aproximadamente 100°C durante 16 horas. La mezcla se enfría, después se neutraliza con NaOH 1M (acuoso). Se extrae con CH2CI2, se secan los extractos sobre MgSO4, se filtran y se concentran al vacío para dar el compuesto del título.

+ Espectro de masas: MH = 466.9.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 4 Paso A Se combinan 25.86 g (55.9 mmoles) de éster etílico de ácido 4-(8-cloro-3-bromo-5,6-dihidro-11 H-benzo[5,6]ciclohepta[1 ,2-b]piridin-11-iliden)-1-piperidino-1 -carboxílico y 250 mL de H2SO concentrado a -5°C, después se añaden 4.8 g (56.4 mmoles) de NaN?3 y se agita durante 2 horas. La mezcla se vierte en 600 g de hielo y se hace básica con NH4OH (acuoso) concentrado. La mezcla se filtra, se lava con 300 mL de agua y después se extrae con 500 mL de CH2CI2. El extracto se lava con 200 mL de agua, se seca sobre MgSO4, después se filtra y se concentra al vacío hasta un residuo. El residuo se somete a cromatografía (gel de sílice, 10% de EtOAc/CH2CI2) para dar 24.4 g (86% de rendimiento) del producto. P.f. = 165-167°C, espectro de masas: MH+ = 506 (Cl). Análisis elemental: calculado - C, 52.13; H, 4.17; N, 8.29; encontrado - C, 52.18; H, 4.51 ; N, 8.16.

Paso B Se combinan 20 g (40.5 mmoles) del producto del paso A y 200 mL de H2SO4 concentrado a 20°C, después se enfría la mezcla a 0°C. Se añaden 7.12 g (24.89 mmoles) de 1 ,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoina a la mezcla y se agita durante 3 horas a 20°C. Se enfría a 0°C, se añade 1.0 g (3.5 mmoles) adicionales de la dibromohidantoina y se agita a 20°C durante 2 horas. La mezcla se vierte en 400 g de hielo, se hace básica con NH OH (acuoso) concentrado a 0°C, y se recoge el sólido resultante mediante filtración. El sólido se lava con 300 mL de agua, se hace suspensión en 200 mL de acetona y se filtra para proveer 19.79 g (85.6% de rendimiento) del producto, p.f. = 236.237°C, Espectro de masas: MH+ = 584 (Cl). Análisis elemental: Calculado- C, 45.11 ; H, 3.44; N, 7.17 Encontrado- C, 44.95; H, 3.57; N, 7.16 Paso C Se combinan 25 g (447 mmoles) de rellenos de Fe, 10 g (90 mmoles) de CaC^ y una suspensión de 20 g (34.19 mmoles) del producto del paso B en 700 mL de 90:10 de EtOH/agua a 50°C. La mezcla se calienta a reflujo durante la noche, se filtra a través de Celite® y se lava la torta del filtro con 2 x 200 mL de EtOH caliente. El material filtrado se combina y se lava, y se concentra al vacío hasta dar un residuo. El residuo se extrae con 600 mL de CH2CI2, se lava con 300 mL de agua y se seca sobre MgSO4. Se filtra y se concentra al vacío hasta dar un residuo, después se somete a cromatografía (gel de sílice, 30% de EtOAc/CH2CI2) para dar 11.4 g (60% de rendimiento) del producto. P.f. = 211-212°C, Espectro de masas: MH+ = 554 (Cl). Análisis elemental: Calculado- C, 47.55; H, 3.99; N, 7.56 Encontrado- C, 47.45; H, 4.31 ; N, 7.49 Paso D Se añade lentamente (en porciones) 20 g (35.9 mmoles) del producto del paso C a una solución de 8 g (116 mmoles) de NaNO2 en 120 mL de HCl concentrado (acuoso) a -10°C. La mezcla resultante se agita a 0°C durante 2 horas, después se añaden lentamente (por goteo) 150 mL (1.44 moles) de H3PO2 al 50% a 0°C durante un periodo de 1 hora. Se agita a 0°C durante 3 horas, después se vierte en 600 g de hielo y se hace básico con NH OH concentrado (acuoso). Se extrae con 2 x 300 mL de CH2CI2, y los extractos se secan sobre MgSO , después se filtran y se concentran al vacío hasta un residuo. El residuo se somete a cromatografía (gel de sílice, 25% de EtOAc/hexanos) para dar 13.67 g (70% de rendimiento) del producto. P.f. = 163-165°C, Espectro de masas: MH+ = 5391 (Cl). Análisis elemental: Calculado - C, 48.97; H, 4.05; N, 5.22 Encontrado - C, 48.86; H, 3.91 ; N, 5.18 Paso E Se combinan 6.8 g (12.59 mmoles) del producto del paso D y 100 mL de HCl (acuoso) concentrado y se agita a 85°C durante la noche. La mezcla se enfría, se vierte en 300 g de hielo y se hace básica con NH4OH (acuoso) concentrado. Se extrae con 2 x 300 mL de CH2CI2l y después se secan los extractos sobre MgSO . Se filtra, se concentra al vacío hasta dar un residuo y después se somete a cromatografía (gel de sílice, 10% de MeOH/EtOAc + 2% de NH4OH (ac.)) para dar 5.4 g (92% de rendimiento) del compuesto del título. P.f. = 172-174°C, Espectro de masas: MH+ = 467. Análisis elemental: Calculado - C, 48.69; H, 3.65; N, 5.97 Encontrado - C, 48.83; H, 3.80; N, 5.97 EJEMPLO DE PREPARACIÓN 5 Paso A Se hidrolizan 2.42 g de éster etílico de ácido 4-(8-cloro-3-bromo-5,6-dihidro-11 H-benzo[5,6]ciclohepta[1 ,2-b]piridin-11 -iliden)-1 -piperidino-1 -carboxílico sustancialmente por medio del mismo procedimiento que el descrito en el ejemplo de preparación 3, paso D, para dar 1.39 g (69% de rendimiento) del producto. MH+ = 389.

Paso B Se combinan 1 g (2.48 mmoles) del producto del paso A y 25 mL de tolueno seco, se añaden 2.5 mL de DIBAL a 1 M en tolueno y se calienta la mezcla a reflujo. Después de 0.5 horas se añaden otros 2.5 mL de DIBAL 1 M en tolueno y se calienta a reflujo durante 1 hora. (La reacción se monitorea mediante CCD usando MeOH al 50%/CH2CI2+NH OH (acuoso)). La mezcla se enfría a la temperatura ambiente, se añaden 50 mL de HCL 1 N (acuoso) y se agita durante 5 minutos. Se añaden 100 mL de NaOH 1 N (acuoso), después se extrae con EtOAc (3 x 150 mL). Los extractos se secan sobre MgSO4, se filtran y se concentran al vacío para dar 1.1 g del compuesto del título. MH+ = 391.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 6 Se combinan 16.6 g (0.03 moles) del producto del ejemplo de preparación 4, paso D, con una solución 3:1 de CH3CN y agua (212.65 mL de CH3CN y 70.8 mL de agua) y se agita la suspensión resultante durante la noche a temperatura ambiente. Se añaden 32.833 g (0.153 moles) de NalO y después 0.31 g (2.30 mmoles) de RuO2 y se agita a temperatura ambiente (la adición de RuO es acompañada por una reacción exotérmica y la temperatura sube de 20° a 30°C). La mezcla se agita durante 1.3 horas (la temperatura regresa a 25°C después de aproximadamente 30 minutos), después se filtra para remover los sólidos y se lavan los sólidos con CH2CI2. El material filtrado se concentra al vacío hasta dar un residuo y se disuelve el residuo en CH2CI2. Se filtra para remover los sólidos insolubles y se lavan los sólidos con CH2CI2. El material filtrado se lava con agua, se concentra hasta un volumen de aproximadamente 200 mL y se lava con blanqueador, después con agua. Se extrae con HCl a 6N (acuoso). El extracto acuoso se enfría a 0°C y se añade lentamente NaOH al 50% (acuoso) para ajustar a pH = 4, manteniendo la temperatura <30°C. Se extrae dos veces con CH2CI2, se seca sobre MgSO y se concentra al vacío hasta dar un residuo. El residuo se hace suspensión en 20 mL de EtOH y se enfría a 0°C. Se recogen los sólidos resultantes mediante filtración y se secan los sólidos al vacío para dar 7.95 g del producto. 1H RMN (CDCI3, 200 MHz): 8.7 (s, 1 H); 7.85 (m, 6H); 7.5 (d, 2H); 3.45 (m, 2H); 3.15 (m, 2H).

Se combinan 15 g (38.5 mmoles) de éster etílico de ácido de 4- (8-cloro-3-bromo-5,6-dihidro-11 H-benzo[5,6]ciclopehta[1 ,2-b]piridin-1 1-iliden)- 1 -piperidino-1 -carboxílico y 150 mL de H2SO4 concentrado a -5°C, después se añade 3.89 g (38.5 mmoles) de KNO3 y se agita durante 4 horas. La mezcla se vierte en 3 L de hielo y se hace básica con NaOH al 50% (acuoso). Se extrae con CH2CI2, se seca sobre MgSO4, después se filtra y se concentra al vacío hasta dar un residuo. La recristalización del residuo a partir de acetona da 6.69 g del producto. 1 H RMN (CDCI3, 200 MHz): 8.5 (s, 1 H); 7.75 (s, 1 H); 7.6 (s, 1 H); 7.35 (s, 1 H); 4.15 (q, 2H); 3.8 (m, 2H); 3.5-3.1 (m, 4H); 3.0-2.8 (m, 2H); 2.6-2.2 (m, 4H); 1.25 (t, 3H). MH+ = 506.

Paso B Se combina 6.69 g (13.1 mmoles) del producto del paso A y 100 mL de EtOH al 85%/agua, se añade 0.66 g (5.9 mmoles) de CaCI2 y 6.56 g (1 17.9 mmoles) de Fe y se calienta la mezcla a reflujo durante la noche. La mezcla de reacción caliente se filtra a través de Celite® y se enjuaga la torta del filtro con EtOH caliente. El material filtrado se concentra al vacío para dar 7.72 g del producto. Espectro de masas: MH+ = 476.0 Paso C Se combinan 7.70 g del producto del paso B y 35 mL de HOAc, después se añaden 45 mL de una solución de Br2 en HOAc y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante la noche. Se añaden 300 mL de NaOH 1 N (acuoso), después 75 mL de NaOH al 50% (acuoso) y se extrae con EtOAc. El extracto se seca sobre MgSO y se concentra al vacío hasta dar un residuo. La cromatografía del residuo (gel de sílice, 20%-30% de EtOAc/hexano) dio 3.47 g del producto (junto con otros 1.28 g de un producto parcialmente purificado). Espectro de masas: MH+ = 554. 1H RMN (CDCI3, 300 MHz): 8.5 (s, 1 H); 7.5 (s, 1 H); 7.15 (s, 1 H); 4.5 (s, 2H); 4.15 (m, 3H); 3.8 (br s, 2H); 3.4-3.1 (m, 4H); 9-2.75 (m, 1 H); 2.7-2.5 (m, 2H); 2.4-2.2 (m, 2H); 1.25 (m, 3H).

Paso D Se combinan 0.557 g (5.4 mmoles) de t-butilnitrito y 3 mL de DMF, y se calienta la mezcla a 60°-70°C. Se añade lentamente (por goteo) una mezcla de 2.00 g (3.6 mmoles) del producto del paso C y 4 mL de DMF, después se enfría la mezcla a la temperatura ambiente. Se añaden otros 0.64 mL de t-butil nitrito a 40°C y la mezcla se vuelve a calentar a 60°-70°C durante 0.5 horas. Se enfría a la temperatura ambiente y se vierte la mezcla en 150 mL de agua. Se extrae con CH2CI2, el extracto se seca sobre MgSO y se concentra al vacío hasta dar un residuo. La cromatografía del residuo (gel de sílice, 10%-20% de EtOAc/hexano) dio 0.74 g del producto. Espectro de Masas: MH+ = 539.0. 1H RMN (CDCI3, 200 MHz): 8.52 (s, 1 H); 7.5 (d, 2H); 7.2 (s, 1 H); 4.15 (q, 2H); 3.9-3.7 (m, 2H); 3.5-3.1 (m, 4H); 3.0-2.5 (m, 2H); 2.4-2.2 (m, 2H); 2.1-1.9 (m, 2H); 1.26 (t, 3H).

Paso E Se combinan 0.70 g (1.4 mmoles) del producto del paso D y 8 mL de HCl concentrado (acuoso) y la mezcla se calienta a reflujo durante la noche. Se añaden 30 mL de NaOH 1 N (acuoso), después 5 mL de NaOH al 50% (acuoso) y se extrae con CH2CI2. El extracto se seca sobre MgSO y se concentra al vacío para dar 0.59 g del compuesto del título. Espectro de masas: M+ = 467, p.f. = 123.9°-124.2°C.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 8 [racémico, así como isómeros (+) y (-)] Paso A Se prepara una solución de 8.1 g del compuesto del título a partir del ejemplo de preparación 7 en tolueno, y se añaden 17.3 mL de una solución a DIBAL 1 M en tolueno. Se calienta la mezcla a reflujo y lentamente se añaden (por goteo) otros 21 mL de solución de DIBAL 1 M/toIueno durante un periodo de 40 minutos. La mezcla de reacción se enfría a aproximadamente 0°C y se añaden 700 mL de HCl 1 M (acuoso). La fase orgánica se separa y se descarta. La fase acuosa se lava con CH2CI2, se descarta el extracto y se hace básica añadiendo NaOH al 50% (acuoso). Se extrae con CH2CI2, se seca el extracto sobre MgSO y se concentra al vacío para dar 7.30 g del compuesto del título, el cual es una mezcla racémica de enantiómeros. MH+= 469.

Paso B - Separación de enantiómeros El compuesto del título racémico del paso A se separa mediante cromatografía quiral preparativa (columna Chiralpack AD, 5 cm x 50 cm, usando 20% de ¡PrOH/hexano + 0.2% de dietilamina), para dar el enantiómero (+) y el enantiómero (-) del compuesto del título. Datos fisicoquímicos para el enantiómero (+): p.f. = 148.8°C; Espectro de masas: MH+ = 469; [a]= +65.6° (mg/2mL de MeOH). Datos fisicoquímicos para el enantiómero (-): p.f. = 1 12°C; Espectro de masas: MH+ = 469; [a]=-65.2° (mg/2mL de MeOH).

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 9 Paso A Se combinan 40.0 g (0.124 moles) de la cetona de partida y 200 mL de H2SO4 y se enfrían a 0°C. Se añade lentamente 13.78 g (0.136 moles) de KNO3 durante un período de 1.5 horas, después se calienta a la temperatura ambiente y se agita durante la noche. El tratamiento de la reacción usando sustancialmente el mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 4, paso A. La cromatografía (gel de sílice, 20%, 30%, 40%, 50% de EtOAc/hexano, después 100% de EtOAc) dio 28 g del producto 9-nitro, junto con una cantidad más pequeña del producto 7-nitro y 19 g de una mezcla de los compuestos 7-nitro y 9-nitro. MH+ (9-nitro) = 367.

Paso B Se hacen reaccionar 28 g (76.2 mmoles) del producto 9-nitro del paso A, 400 mL de EtOH al 85%/agua, 3.8 g (34.3 mmoles) de CaCI2 y 38.28 g (0.685 mol) de Fe usando sustancialmente el mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 4, paso C, para dar 24 g del producto.

MH+ = 337.

Paso C Se combinan 13 g (38.5 mmoles) del producto del paso B, 140 mL de HOAc y lentamente se añade una solución de 2.95 mL (57.8 mmoles) de Br2 en 10 mL de HOAc durante un período de 20 minutos. La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente y después se concentra al vacío hasta dar un residuo. Se añade CH2CL2 y agua, después se ajusta a pH = 8.9 con NaOH al 50% (acuoso). La fase orgánica se lava con agua, después salmuera y se seca sobre Na2SO4. Se concentra al vacío para dar 1 1.3 g del producto. RMN 1H (200 MHZ, CDCI3): 8.73 (d, 1 H); 7.74 (d, 1 H); 7.14 (s, 1 H); 4.63 (s, 2H); 3.23-3.15 (m, 2H) y 3.07-2.98 (m, 2H).

Paso D Se enfrían 100 mL de HCl concentrado (acuoso) a 0°C, después se añaden 5.61 g (81.4 mmoles) de NaNO2 y se agita durante 10 minutos. Se añaden lentamente (en porciones) 1 1.3 g (27.1 mmoles) del producto del paso C y se agita la mezcla a 0-3°C durante 2.25 horas. Se añaden lentamente (por goteo) 180 mL de H3PO2 al 50% (acuoso) y se deja que la mezcla repose a 0°C durante la noche. Se añade lentamente (por goteo) 150 mL de NaOH al 50% durante 30 minutos, para ajustar a pH = 9, después se extrae con CH2CI2. El extracto se lava con agua, después salmuera y se seca sobre Na2SO4. Se concentra al vacío hasta dar un residuo y se somete a cromatografía (gel de sílice, 2% de E.OAC/CH2CI2) para dar 8.6 g del producto. RMN 1H (200 MHZ, CDCI3): 8.75 (d, 1 H); 7.77 (d, 1 H); 7.56 (d, 1 H); 7.21 (d, 1 H) y 3.3-3.0 (m, 4H).

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 10 [racémico, así como enantiómeros (+) y (-)] Paso A Se combinan 13 g (33.3 mmoles) del compuesto del título del ejemplo de preparación 4, paso D, y 300 mL de tolueno a 20°C, después se añade 32.5 mL (32.5 mmoles) de una solución a DIBAL 1 M en tolueno. La mezcla se calienta a reflujo durante 1 hora, se enfría a 20°C, se añaden otros 32.5 mL de solución de DIBAL 1 M y se calienta a reflujo durante 1 hora. La mezcla se enfría a 20°C y se vierte en una mezcla de 400 g de hielo, 500 mL de EtOAc y 300 mL de NaOH al 10% (acuoso). La capa acuosa se extrae con CH2CI2 (3 x 200 mL), se secan las capas orgánicas sobre MgSO4, después se concentran al vacío hasta dar un residuo. La cromatografía (gel de sílice, 12% de MeOH/CH2CI2 + 4% de NH4OH) dio 10.4 g del compuesto del título como un racemato. Espectro de masas: MH+ = 469 (FAB). 1H RMN parcial (CDCI3, 400 MHz): 8.38 (s, 1 H); 7.57 8s, 1 H); 7.27 (d, 1 H); 7.06 (d, 1 H); 3.95 (d, 1 H).

Paso B - Separación de enantiómeros El compuesto del título racémico del paso A se separa mediante cromatografía quiral preparativa (columna Chiralpack AD, 5 cm x 50 cm, usando 5% de iPrOH/hexano + 0.2% de dietilamina), para dar el enantiómero (+) y el enantiómero (-) del compuesto del título. Datos fisicoquímicos para el enantiómero (+): Espectro de masas: MH+ = 469 (FABS); [a]0 +43.5° (C=0.402, EtOH); 1H RMN parcial (CDCI3, 400 MHz): 8.38 (s, 1 H); 7.57 (s, 1 H); 7.27 (d, 1 H); 7.05 (d, 1 H); 3.95 (d, 1 H). 20 Datos fisicoquímicos para el enantiómero (-): Espectro de masas: MH+ = 469 (FAB); [a]= -41.8° (c=0.328 EtOH); 1H RMN parcial (CDCI3, 400 MHz): 8.38 (s, 1 H); 7.57 (s, 1 H); 7.27 (d, 1 H); 7.05 (d, 1 H); 3.95 (d, 1 H).

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 11 Paso A Se disuelven 1.160 g (2.98 mmoles) del compuesto del título del ejemplo de preparación 3 en 20 mL de DMF, se agita a temperatura ambiente y se añade 0.3914 g (3.87 mmoles) de 4-metil-morfolina, 0.7418 g (3.87 mmoles) de DEC, 0.5229 g (3.87 mmoles) de HOBT y 0.8795 g (3.87 mmoles) de ácido 1-N-butoxicarbonilpiperidinil-4-acético. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 2 días, después se concentra al vacío hasta dar un residuo y se separa el residuo entre CH CI2 y agua. La fase orgánica se lava sucesivamente con NaHCO3 saturado (acuoso), NaH2PO al 10% (acuoso) y salmuera. La fase orgánica se seca sobre MgSO , se filtra y se concentra al vacío hasta un residuo. Se cromatografía el residuo (gel de sílice, 2% de MeOH/CH2C|2 + NH3) para dar 1.72 g del producto. P.f. = 94.0-94.5°C, Espectro de masas: MH+ = 614. Análisis elemental: Calculado - C, 60.54; H, 6.06; N, 6.83 Encontrado - C, 59.93; H, 6.62; N, 7.45.

Paso B Se combina 1.67 g (2.7 mmoles) del producto del paso A y 20 mL de CH2CI2 y se agitan a 0°C. Se añaden 20 mL de TFA, se agita la mezcla durante 2 horas y después se hace básica la mezcla con NaOH 1 N (acuoso). Se extrae con CH2CI2, se seca la fase orgánica sobre MgSO4, se filtra y se concentra al vacío para dar 1.16 g del producto. P.f. = 140.2-140.8°C, espectro de masas: MH+ = 514.

Paso C Se combinan 0.50 g del producto del paso B, 20 mL de CH2CI2 y 4.5 equivalentes de (CH3)3SiNCO y se agita a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla se extrae con NaHCO3 saturado (acuoso) y la fase orgánica se seca sobre MgSO4. Se filtra y se concentra al vacío para dar 0.8 g del producto crudo. El producto crudo se somete a cromatografía (gel de sílice, 5% de MeOH/CH2CI2 + NH3) para dar 0.26 g del producto. P.f. = 170.2-170.5°C, espectro de masas: MH+ = 557.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 12 Se combinan 0.5 g (1.06 mmoles) del compuesto del título del ejemplo de preparación 4, 0.4 g (2.61 mmoles) del compuesto del título del ejemplo de preparación 1 , 5 mL de DMF seca y 0.5 mL (4.53 mmoles) de 4-metilmorfolina, a 0°C, después se añaden 0.6 g (3.12 mmoles) de DEC y 0.4 g (2.96 mmoles) de HOBT y se agita la mezcla durante la noche a 20°C. Se concentra al vacío hasta dar un residuo y se extrae el residuo con CH CI2 (2 x 50 mL). Los extractos se lavan con 25 mL de agua, se secan sobre MgSO4, después se concentran al vacío hasta dar un residuo y se cromatografían (gel de sílice, 10% de MeOH/EtOAc + 2% de NH4OH (acuoso)) para dar 0.6 g (93.7% de rendimiento) del compuesto del título. Espectro de masas: MH+ = 602 (FABS); 1H RMN parcial (CDCI3, 300 MHz): 8.48 (s, 1 H); 8.16 (d, 2H); 7.61 (s, 1 H); 7.29 (m, 1 H); 7.18 (d, 2H); 7.04 (d, 1 H); 3.71 (s, 2H). Análisis elemental: calculado - C, 48.81 ; H. 4.10; N, 6.57 encontrado - C, 49.10; H, 3.79; N, 6.74.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 13 Se disuelven 5.9 g (9.78 mmoles) del compuesto del título del ejemplo de preparación 12 en 300 mL de 1 :5 C^C^/EtOAc a 0°C. Se añaden lentamente (por goteo) 3 mL de HCl a 4N (acuoso) y se agita la mezcla a 0°C durante 5 minutos. Se añaden 200 mL de E_2?, se recogen los sólidos resultantes mediante filtración y los sólidos se lavan con 50 mL de Et2O. Los sólidos se secan a 20°C y 0.2 mm de Hg para dar 5.9 g (96% de rendimiento) del compuesto del título. Espectro de masas: MH+ = 602 (FAB). 1H RMN parcial (DMSO-d6, 300 MHz): d 8.66 (d, 2H); 8.51 (s, 1 H); 7.95 (s, 1 H), 7.67 (d, 2H), 7.47 (m, 1 H); 7.15 (m, 1 H); 3.99 (s, 2H). Análisis elemental: calculado - C, 48.77; H, 3.62; N, 6.56 encontrado - C, 48.34; H, 3.95; N, 6.84.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 14 Paso A Se combinan 0.501 g (1.28 mmoles) del compuesto del título del ejemplo de preparación 5 y 20 mL de DMF seca, después se añade 0.405 g (1.664 mmoles) de ácido 1-N-t-butox¡carbon¡lpiperidinil-4-acético, 0.319 g (1.664 mmoles) de DEC, 0.225 g (1.664 mmoles) de HOBT y 0.168 g (1.664 mmoles) de 4-metilmorfolina y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se concentra al vacío hasta dar un residuo, después se separa el residuo entre 150 mL de CH2CI2 y 150 mL de NaHC?3 saturado (acuoso). La fase acuosa se extrae con otros 150 mL de CH2CI2. La fase orgánica se seca sobre MgSO4, y se concentra al vacío hasta dar un residuo. El residuo se somete a cromatografía (gel de sílice, 500 mL de hexano, 1 L de 2% de MeOH/CH2CI2 + 0.1 % de NH4OH (acuoso)) para dar 0.575 g del producto, p.f. = 1 150-°15°C, espectro de masas: MH+ = 616.

Paso B Se combinan 0.555 g (0.9 mmoles) del producto del paso A y 15 mL de CH CI y la mezcla se enfría a 0°C. Se añaden 15 mL de TFA y se agita a 0°C durante 2 horas. Se concentra al vacío a 40-45°C hasta dar un residuo, después se separa el residuo entre 150 mL de CH2CI2 y 100 mL de NaHC?3 saturado (acuoso). La capa acuosa se extrae con 100 mL de CH2CI2, se combinan los extractos y se secan sobre MgSO4. Se concentra al vacío para dar 0.47 g del producto, p.f. = 140°-150°C; espectro de masas: MH+ 516.

Paso C Se combinan 0.449 g (0.87 mmoles) del producto del paso B, 20 mL de CH2CI2 y 0.501 g (0.59 mmoies) de (CH3)3SiNCO y se agitan a temperatura ambiente durante la noche. Se añaden 50-75 mL de NaHCO3 saturado (acuoso) y se agita durante 0.5 horas. Se diluye con CH2CI2, las capas se separan y se extrae la capa acuosa con 2 x 100 mL de CH2CI2. Los extractos de CH2CI2 combinados se secan sobre MgSO4 y se concentran al vacío hasta dar un residuo. La cromatografía del residuo (gel de sílice, 500 mL de CH2CI2; 1 L de 1 % de MeOH/CH2CI2 + 0.1 % de NH4OH; 1 L de 2% de MeOH/CH2CI2 + 0.2% de NH4OH; después con 3% de MeOH/CH2CI2 + 0.3% de NH4OH) dio 0.33 g del compuesto del título. P.f. = 145°-155°C; espectro de masas: MH+ = 559.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 15 Se hace reaccionar el compuesto del título del ejemplo de preparación 7 y el compuesto del título del ejemplo de preparación 1 usando sustancialmente el mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 12, para dar 0.25 g del compuesto del título, el cual es una mezcla racémica de atropisómeros. Espectro de masas: MH+ = 692, p.f. = 167.2° - 167.8°C. La sal HCl del compuesto del título del ejemplo de preparación se prepara agitando durante 1 hora con HCI/CH2CI2, y después concentrando al vacío para dar la sal.

EJEMPLOS DE PREPARACIÓN 16A Y 16B Ejemplo de preparación 16A Ejemplo de preparación 16B El compuesto del título del ejemplo 15 es una mezcla racémica de atropisómeros. Estos atropisómeros se preparan mediante cromatografía preparativa (CLAR), usando una columna Chiralpack AD (5 cm x 50 cm) y 40% de i-PrOH/hexano + 0.2% de dietilamina como la fase móvil para dar los enantiómeros (+) y (-), ejemplos 16B y 16A, respectivamente. Datos fisicoquímicos para el enantiómero (-), ejemplo 16A: p.f. = 114.2°-1 14.8°C; [ ]25 D = -154.6° (8.73 mg/2 mL, MeOH). Datos fisicoquímicos para el enantiómero (+), ejemplo 16B: p.f. = 1 12.6°-113.5°C; [ ]25 D = 159.7° (10.33 mg/2 mL, MeOH).

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 17 Paso A Se hacen reaccionar 6.0 g (12.8 mmoles) del compuesto del título del ejemplo de preparación 7 y 3.78 g (16.6 mmoles) de ácido 1-N-t-butoxicarbonilpiperidiniI-4-acético, usando sustancialmente los mismos procedimientos que los descritos para el ejemplo de preparación 14, paso A, para dar 8.52 g del producto. Espectro de masas: MH+ = 692 (FAB). 1H RMN (CDCI3, 200 MHz) 8.5 (d, 1 H); 7.5 (d, 2H); 7.2 (d, 1 H); 4.15-3.9 (m, 3H), 3.8- 3.6 (m, 1 H); 3.5-3.15 (m, 3H); 2.9 (d, 2H); 2.8-2.5 (m, 4H); 2.4-1.8 (m, 6H); 1.8-1.6 (br d, 2H); 1.4 (s, 9H); 1.25-1.0 (m, 2H).

Paso B Se combinan 8.50 g del producto del paso A y 60 mL de CH CI2. después se enfría a 0°C y se añaden 55 mL de TFA. La mezcla se agita durante 3 horas a 0°C, después se añaden 500 mL de NaOH 1 N (acuoso) seguidos por 30 mL de NaOH al 50% (acuoso). Se extrae con CH CI2, se seca sobre MgSO y se concentra al vacío para dar 7.86 g del producto. Espectro de masas: MH+ = 592 (FAB). 1H RMN (CDCI3, 200 MHZ): 8.51 (d, 1 H); 7.52 (d de d, 2H); 7.20 (d, 1 H); 4.1-3.95 (m, 2H); 3.8-3.65 (m, 2H); 3.5-3.05 (m, 5H); 3.0-2.5 (m, 6H); 2.45-1.6 (m, 6H); 1.4-1.1 (m, 2H).

Paso C Se tratan 7.80 g (13.1 mmoles) del producto del paso B con 12.1 g (105 mmoles) de (CH3)3SiNCO usando sustancialmente el mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 14, paso C, para dar 5.50 g del compuesto del título, el cual es una mezcla racémica de atropisómeros. P.f. = 163.6°-164.0°C. Espectro de masas: MH+ = 635 (FAB). 1H RMN (CDCI3, 200 MHz): 8.5 (d, 1 H); 7.52 (d, 1 H); 7.48 (d, 1 H), 7.21 (d, 1 H); 4.54 (s, 2H); 4.1-3.6 (m, 4H); 3.45-3.15 (m, 4H); 3.0-2.5 (m, 5H); 2.45-1.6 (m, 7H); 1.4-1.0, (m, 2H).

EJEMPLOS DE PREPARACIÓN 18A Y 18B Ejemplo de preparación 18A Ejemplo de preparación 18B El compuesto del título del ejemplo de preparación 17 es una mezcla racémica de atropisómeros. Esos atropisómeros se separan mediante cromatografía preparativa (CLAR), usando una columna Chiralpack AD (5 cm x 50 cm) 20% de i-PrOH/hexano + 0.2% de dietilamina como la fase móvil, a una velocidad de flujo de 100 mL/min, para dar los enantiómeros (+) y (-), ejemplos 18B y 18A, respectivamente. Datos fisicoquímicos para el enantiómero (-), ejemplo 18A: p.f. = 142.9°-143.5°C; [a]25 D = -151.7° (1 1.06 mg/2 mL, MeOH). Datos fisicoquímicos para el enantiómero (+), ejemplo 18B: p.f. = 126.51-127.0°C; [a]25 D = +145.6° (8.38 mg/2 mL, MeOH).

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 19 Se combinan 3.32 g del enantiómero (+) del compuesto del título del ejemplo de preparación 8, paso B, 2.38 g del compuesto del título del ejemplo de preparación 1 , 1.92 g de HOBT, 2.70 g de DEC, 1.56 mL de N- metilmorfolina y 50 mL de DMF seca, y se agita a 25°C durante 24 horas. Se concentra al vacío y después se diluye el residuo con CH2CI2. Se lava con NaOH a 1 HN (acuoso), después con NaH2PO4 saturado (acuoso) y se seca sobre MgSO . Se concentra al vacío hasta dar un residuo y se somete a cromatografía (gel de sílice, 2% de MeOH/CH2CI2 + NH4OH) para dar 3.82 g del compuesto del título. Espectro de masa: MH+ = 604 (FAB). La sal clorhidrato se preparó mediante la disolución del compuesto del título del ejemplo de preparación 19 en diclorometano saturado con cloruro de hidrógeno. La concentración al vacío proveyó el compuesto del título del ejemplo de preparación 19 como la sal HCl. P.f. = 166.5°C; [a]D22 = 70.8° (9.9 mg/2 mL, MeOH).

EJEMPLOS DE PREPARACIÓN 20A Y 20B Ejemplo de preparación 20A Ejemplo de preparación 20B El enantiómero (-) del compuesto del título del ejemplo de preparación 8, paso B, (3.38 g) se hace reaccionar con 2.20 g del compuesto del título del ejemplo de preparación 1 , sustancialmente mediante el mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 19, para dar 3.58 g del compuesto del título del ejemplo de preparación 20A. La sal HCl del compuesto del título del ejemplo de preparación 20A se prepara disolviendo el compuesto del título en CH2CI2, añadiendo HCl a 6M (g) en CH2CI2 y después concentrando al vacío para dar la sal. P.f. = 129°C; [ ]D25 = -72.3° (3.32 mg/2 mL, MeOH). El compuesto del título racémico del ejemplo de preparación 8, paso A, se hace reaccionar con el compuesto del título del ejemplo de preparación 1 , sustancialmente por medio del mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 20A para dar el compuesto del título del ejemplo de preparación 20B. P.f. = 145.0°C.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 21 Paso A Se hace reaccionar 1.33 g del enantiómero (+) del compuesto del título del ejemplo de preparación 8, paso B, con 1.37 g de ácido 1-N-t-butoxicarbonilpiperidinil-4-acético usando sustancialmente el mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 14, paso A, para dar 2.78 g del producto. Espectro de masas: MH+ = 694.0 (FAB); [a]25 D = -34.1° (5.45 mg/2 mL, MeOH).

Paso B Se tratan 2.78 g del producto del paso A sustancialmente por medio del mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 17, paso B, para dar 1.72 g del producto. P.f. = 104.1°C; Espectro de masas: MH+ = 594; [a] 25 D = +53.4° (11.42 mg/2 mL, MeOH).

Paso C Se tratan 1.58 g del producto del paso B con 6 mL de (CH3)3SiNCO usando sustancialmente el mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 14, paso C, para dar 1.40 g del compuesto del título. P.f. = 140°C; espectro de masas: MH+ = 637; [ ]25 D = +49.1° (4.24 mg/2 mL, MeOH). La recristalización a partir de acetona proveyó el compuesto del título como un sólido. P.f. = 214.5-215.9°C.

EJEMPLOS DE PREPARACIÓN 22A Y 22B Ejemplo de preparación 22A Ejemplo de preparación 22B El enantiómero (-) del compuesto del título del ejemplo de preparación 8, paso B, (3.38 g) se convierte en el compuesto del título (ejemplo de preparación 22A) sustancialmente mediante el mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 21 , pasos A-C, para dar el compuesto del título del ejemplo de preparación 22A. P.f. = 152°C; espectro de masas: MH+ = 637; [ ]25 D = 62.5° (1.12 mg/2 mL, MeOH). El compuesto del título racémico del ejemplo de preparación 8, paso A, se convierte en el compuesto del título (ejemplo de preparación 22B) sustancialmente por medio del mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 10, pasos A-C, para dar el compuesto del título del ejemplo de preparación 22B. P.f. = 1 1 1.2°C (des).

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 23 Paso A Se hace reaccionar 1.35 g del enantiómero (-) del compuesto del título del ejemplo de preparación 10, paso B, con 1.4 de ácido 1-N-t-butoxicarbonilpiperidinil-4-acético siguiendo sustancialmente el mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 14, paso A, para dar 2.0 g del producto. Espectro de masas: MH+ = 694 (FAB). 1H RMN parcial (CDCI3> 300 MHz): 8.38 (s,1 H); 7.60 (s, 1 H); 7.25 (d, 1 H), 7.05 (m, 1 H); 1.45 (s, 9H).

Paso B Se trata 1.95 g del producto del paso A sustancialmente por medio del mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 17, paso B, para dar 1.63 g del producto. Espectro de masas: MH+ = 594 (FAB). 1H RMN parcial (CDCI3,300 MHz): 8.38 (s, 1 H), 7.60 (s, 1 H); 7.25 (d, 1 H), 7.03 (m, 1 H); 4.64 (d, 1 H); 3.90 (m, 2H).

Paso C Se trata 1.6 g del producto del paso B con 1.3 mL de (CH3)3S¡NCO usando sustancialmente el mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 14, paso C, para dar 1.27 g del compuesto del título. Espectro de masas: MH+: = 637 (FABS); [a]25 D = -33.1° (c=0.58, EtOH). 1H RMN parcial (CDCI3, 400 MHz) 8.38 (s, 1 H); 7.59 (s, 1 H); 7.25 (d, 1 H); 7.04 (m, 1 H); 4.60 (d, 1 H); 4.41 (s, 2H): EJEMPLOS DE PREPARACIÓN 24A Y 24B Ejemplo de preparación 24A Ejemplo de preparación 24B El enantiómero (+) del compuesto del título del ejemplo de preparación 10, paso B, (2.1 g) se convierte en el compuesto del título sustancialmente por medio del mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 21 , pasos A-C, para dar el compuesto del título del ejemplo de preparación 24A. Espectro de masas: MH+ = 637 (FABS); [a]25 D = +32.4° (c=0.57, EtOH). 1H RMN parcial (CDCI3, 400 MHz): 8.39 (s, 1 H); 7.59 (s, 1 H); 7.25 (d, 1 H), 7.04 (m, 1 H); 4.60 (d, 1 H); 4.41 (s, 2H). 1H RMN parcial (DMSO-de, 400 MHz): 8.42 (s, 1 H); 7.88 (s, 1 H); 7.41 (d, 1 H); 7.29 (m, 1 H); 5.85 (s, 2H); 4.20 (d, 1 H).

El compuesto del título racémico del ejemplo de preparación 10, paso A, se convierte en el compuesto del título racémico del ejemplo de preparación 24B de manera análoga. 1H RMN parcial (CDCI3, 400 MHz): 8.38 (s, 1 H); 7.59 (s, 1 H); 7.25 (d, 1 H), 7.04 (m, 1 H); 4.60 (d, 1 H); 4.41 (s, 2H). 1H RMN parcial (DMSO-d6, 400 MHz): 8.42 (s, 1 H); 7.88 (s, 1 H); 7.41 (d, 1 H); 7.29 (m, 1 H); 5.85 (s, 2H); 4.20 (d, 1 H).

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 25 Se hacen reaccionar 2.6 g del enantiómero (+) del compuesto del compuesto del ejemplo de preparación 10, paso B, y 1.68 g del compuesto del título del ejemplo de preparación 1 siguiendo sustancialmente el mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 19, para dar 2.10 g del compuesto del título. Espectro de masas: MH+ = 604 (FAB); [a]25 D = +34.1° (10.98 mg/2 mL, EtOH). 1H RMN parcial (CDCI3) 400 MHz): 8.38 (s, 1 H); 8.15 (d, 2H), 7.58 (s, 1 H); 7.26 (d, 1 H); 7.15 (d, 2H), 7.03 (d, 1 H); 4.57 (d, 1 H): Para preparar la sal HCl del compuesto del título del ejemplo de preparación 25, se disuelven 700 mg del compuesto del título en 4 mL de CH2CI2, seañaden 4 mL de Et2?, se enfría a 0°C y lentamente se añade (por goteo) 1 mL de HCl (g) en dioxano. Se añaden 2 mL de Et2O y se agita a 0°C durante 7 minutos. Se diluye con 30 mL de Et2O, se filtra para recoger el producto y se lava con 30 mL de Et2O. Los sólidos se secan al vacío para dar 0.836 g de la sai HCl del ejemplo 14. [a]25 D = +64.8° (9.94 mg/2 mL, EtOH).

EJEMPLOS DE PREPARACIÓN 26A Y 26B Ejemplo de preparación 26A Ejemplo de preparación 26B El enantiómero (-) del compuesto del título del ejemplo de preparación 10, paso B, (0.60 g) se hace reaccionar con 0.39 g del compuesto del título del ejemplo de preparación 1 , sustancialmente por medio del mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 19, para dar 0.705 g del compuesto del título. Espectro de masas: MH+ = 604 (FABS); [a]25 D = -41.8° (EtOH). 1H RMN parcial (CDCI3, 300 MHz): 8.38 (s, 1 H); 8.15 (d, 2H); 7.58 (s, 1 H); 7.26 (d, 1 H); 7.15 (d, 2H); 7.03 (d, 1 H), 4.57 (d, 1 H): La sal HCl del compuesto del título del ejemplo de preparación 26A se prepara sustancialmente por medio del mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 25. [a]25 D = -63.2° (EtOH). El compuesto del título racémico del ejemplo de preparación 10, paso A, se convierte en el compuesto del título racémico del ejemplo de preparación 26B siguiendo sustancialmente el mismo procedimiento que el descrito para el ejemplo de preparación 19. 1H RMN parcial (CDCI3, 400 MHz) 8.38 (s, 1 H); 8.15 (d, 2H); 7.58 (s, 1 H); 7.26 (d, 1 H); 7.15 (d, 2H); 7.03 (d, 1 H) 4.57 (d, 1 H); 1H RMN parcial (DMSO-d6, 400 MHz): 8.77 (d, 2H); 8.47 (s, 1 H) 7.95 (s, 1 H); 7.74 (d, 2H); 7.43 (m, 1 H), 7.27 (d, 1 H); 4.35 (d, 1 H).

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 27 El compuesto del título del ejemplo de preparación 4 se hace reaccionar sustancialmente mediante los mismos métodos que los descritos para el ejemplo de preparación 17, pasos A-C, para dar el compuesto del título, el cual es un racemato. Espectro de masas: MH+ = 635 (FAB), 1H RMN parcial (CDCI3): 8.45 (s, 1 H); 7.60 (s, 1 H); 7.35 (d, 1 H); 7.05 (d, 1 H), 4.45 (s, 1 H).

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 28 Paso A Se disuelve 9.90 g (18.9 mmoles) del producto del ejemplo de preparación 7, paso B, en 150 mL de CH2CI2 y 200 mL de CH3NH y se calienta a 60°C. Se añaden 2.77 g (20.8 mmoles) de N-clorosuccinimida y se calienta a reflujo durante 3 horas, monitoreando la reacción mediante CCD (EtOAc al 30%/H2O). Se añaden 2.35 g (10.4 mmoles) adicionales de N-clorosuccinimida y se llevan a reflujo 45 minutos más. La mezcla de reacción se enfría a la temperatura ambiente y se extrae con NaOH 1 N y CH2C_2. La capa de CH2CI2 se seca sobre MgSO4, se filtra y se purifica mediante cromatografía por vaporización (1200 mL de gel de sílice de fase normal, eluyendo con EtOAc/30% de H O) para obtener 6.24 g del producto deseado. P.f. 193-195.4°C. MH+ = 510.

Paso B A 160 mL de HCl concentrado a -10°C se le añaden 2.07 g (30.1 mmoles) de NaNÜ2 y se agita durante 10 minutos. Se añaden 5.18 g (10.1 mmoles) del producto del paso A y se calienta la mezcla de reacción de -10°C a 0°C durante 2 horas. La reacción se enfría a -10°C, se añaden 100 mL de H3PO2 y se deja reposar durante la noche. Para extraer la mezcla de reacción se vierte sobre hielo triturado y se hace básica con NaOH al 50%/CH Cl2. La capa orgánica se seca sobre MgSO4, se filtra y se concentra hasta la sequedad. La purificación mediante cromatografía por vaporización (600 mL de gel de sílice de fase normal, eluyendo con 20% de EtOAc/hexano) dio 3.98 g del producto. Espectro de masas: MH+ = 495.

Paso C Se disuelven 3.9 g del producto del paso B en 100 mL de HCl concentrado y se llevan a reflujo durante la noche. La mezcla se enfría, se hace básica con 50% p/p de NaOH y se extrae la mezcla resultante con CH2CI2. La capa de CH2CI2 se seca sobre MgSO4, se evapora el solvente y se seca al vacío para obtener 3.09 g del producto deseado. Espectro de masas: MH+ = 423.

Paso D Usando un procedimiento similar al descrito en el ejemplo de preparación 8, se obtiene 1.73 g del producto deseado, p.f. 169.6-170.1°C; [c-]25 D =+48.2° (c=1 , MeOH). MH+ = 425.

Paso E Se obtuvo el compuesto del título usando un procedimiento similar al descrito en el ejemplo de preparación 14, con el producto del paso D como el material de partida. P.f. 152.3-153.3°C; [a]25 D =+53.0° (c=1 , MeOH). MH+ = 593.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 29 Paso A Se tratan 15.0 g (44.4 mmoles) del producto del ejemplo de preparación 9, paso B, con 6.52 g (48.9 mmoles) de N-clorosuccinimida de una manera similar a la descrita en el ejemplo de preparación 28, paso A, y se extrae como se describió para obtener 16.56 g del producto deseado. P.f. 234.7-235.0°C. MH+ = 370.

Paso B Se tratan 16.95 g (45.6 mmoles) del producto del paso A de la manera descrita en el ejemplo de preparación 28, paso B, para obtener 13.07 g del producto deseado, p.f. 191.7-192.1 °C. MH+ = 356.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 30 Se calientan 200 mg del material de partida ciano en 17 g de ácido polifosfórico a 190-200°C durante 45 minutos. La mezcla resultante se vierte en hielo, se añade HCl al 30% y se agita durante 30 minutos. Se extrae con CH2CI2, se lava con salmuera, se seca sobre Na2SO4, se filtra y se concentra. Se purifica mediante CCD preparativa, eluyendo con EtOAc/hexano, para obtener 21 mg del producto deseado (también se obtuvieron 59 mg del producto 10-cloro).

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 31 Paso A Se disuelven 10.0 g (29.6 mmoles) del producto del ejemplo de preparación 9, paso B, en 150 mL de CH2CI2 y 200 mL de CH3CN a temperatura ambiente. La mezcla se calienta a 60°C, se añaden 10.45 g (32.6 mmoles) de bis-(tetrafluoroborato) de 1-fluoro-4-hidroxi-1 ,4-diazoniabiciclo-[2,2,2]octano y se calienta a reflujo durante 4 horas. La mezcla se enfría a la temperatura ambiente, se extrae con CH CI2 y NaOH 1 N. La capa de CH2CI2 se seca sobre MgSO4, se filtra y se concentra hasta la sequedad. El residuo resultante se purifica mediante cromatografía por vaporización usando 1400 mL de gel de sílice de fase normal eluída con 10% de EtOAc-CH2CI2 + 2 gotas de NH4OH para obtener 2.00 g del producto, p.f. 103-2-103.5°C. MH+ = 355.

Paso B Usando un procedimiento sustancialmente como el descrito en el ejemplo de preparación 9, paso D, se trata 1.80 g (5.1 mmoles) del producto del paso A. El producto crudo se purifica mediante cromatografía por vaporización usando 200 mL de gel de sílice de fase normal eluída con 20% de EtOAc/hexano. Espectro de masas: MH+ = 339.

EJEMPLO DE PREPARACIÓN 32 Usando los materiales de partida adecuados y los procedimientos como los descritos arriba, se pueden fabricar los siguientes compuestos: EJEMPLO DE PREPARACIÓN 33 Paso A A una solución de 3-bromo-8-cloro-5,6-dihidro-1 1 H-benzo[5,6]ciclohepta[1 ,2-b]piridin-11-ona (2g) (6.2 mmoles) en diclorometano anhidro (14 mL) a 0°C y bajo una atmósfera de argón, se le añadió una solución de ácido 3-cloroperbenzoico (1.76 g) (10.4 mmoles) en diclorometano anhidro (35 mL) por goteo durante un periodo de 30 minutos. La mezcla se dejó calentar a la temperatura ambiente y después de 18 horas se añadió ácido 3-cloroperbenzoico adicional (0.88 g) (5.2 mmoles) en diclorometano anhidro (25 mL) y la mezcla se agitó durante un total de 42 horas. La mezcla se diluyó con diclorometano y se lavó con NaOH 1 N (200 mL). La capa acuosa se extrajo con diclorometano adicional (2X200 mL) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron hasta la sequedad. El producto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 0.25%-0.5%-1 % (10% de NH4OH conc. en metanol) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 1.386 g, 66%): ESIMS; m/z 338.1 (MH+); dc (CDCI3) CH2: 30.5, 34.0; CH: 126.9, 127.6, 130.3, 132.5, 140.4; C: 121 .0, 135.1 , 138.3, 139.7, 141.6, 145.3, 188.0 ppm.

Paso B El compuesto del título del ejemplo de preparación 33A (1.3422 g) (3.96 mmoles) se disolvió en metanol (18 mL) y diclorometano (20 mL) y se añadió borohidruro de sodio (0.219 g) (5.79 mmoles). La mezcla se agitó bajo argón a 0°C durante 1 hora y después se dejó calentar a 25°C durante un periodo de 1 hora. La mezcla se diluyó con diclorometano (800 mL) y se lavó con NaOH 1 N (150 mL). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2X100 mL) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron hasta la sequedad. El producto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 1 % (10% de NH4OH conc. en metanol) diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 1.24 g, 92%): ESIMS; m/z 340.1 (MH+); dc (CDCI3) CH2: 31.2, 32.0; CH: 69.1 , 126.8, 131.7, 131.7, 136.7; C: 1 18.3, 134.7, 135.2, 139.7, 141.0, 148.9 ppm.

Paso C El compuesto del título del ejemplo de preparación 33B (1.19 g) (3.49 mmoles) se disolvió en tolueno anhidro (22.5 mL) y la solución se enfrió a 0°C bajo argón. Se añadió cloruro de tionilo (0.472 mL) (6.46 mmoles) en tolueno anhidro (5 mL) y la mezcla se agitó a 0°C durante 1 hora. La mezcla se dejó calentar a 25°C durante un periodo de 2.5 horas. La solución se vertió en una solución al 20% de acetato de etilo en diclorometano (800 mL) y la mezcla se lavó con NaOH 1 N. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2X200 mL) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron para dar el producto que se usó sin purificación adicional.

Paso D El compuesto del título del ejemplo de preparación 33C (3.49 mmoles) se disolvió en THF anhidro (10 mL), se añadió una solución de piperazina (1.505 g) (17.47 mmoles) en THF anhidro (20 mL) y la mezcla se agitó bajo argón a 25°C durante 69 horas. La mezcla se vertió en diclorometano (800 mL) y se lavó con NaOH 1 N (125 mL). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2X200 mL) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron hasta la sequedad. El producto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 5% (10% de NH4OH conc. en metanol) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 1.2772 g, 89%): FABMS; m/z 408 (MH+); dc (CDCI3) CH2: 30.1 , 30.4, 46.2, 52.3; CH: 64.6, 126.3, 130.3, 130.6, 133.6, 138.5; C: 1 18.0, 133.9, 134.5, 139.8, 140.8, 148.8 ppm.

Paso E El compuesto del título racémico del paso D anterior (1 g) se separó en una columna de CLAR Chiralpak AD (5 cm DI y 50 cm de largo; tamaño de partícula 20µ) usando 2-propanol:hexano:dietilamina, 30:70:0.2 subidos a 40:60:0.2 después del paso de 2 L, como el eluyente para dar el enantiómero R(+) como la primera fracción eluyente (0.486 g): FABMS; m/z 408 (MH+); dc (CDCI3) CH2: 30.1 , 30.4, 46.3, 46.3, 52.5, 52.5; CH: 64.7, 126.2, 130.4, 130.6, 133.6, 138.5; C: 1 18.0, 133.9, 134.4, 139.8, 140.8, 148.9; [a]D23°c + 90.9° (10.34 mg/2 mL, MeOH), seguido por el enantiómero S(-) como la segunda fracción eluyente (0.460 g): FABMS; m/z 408.1 (MH+); dc (CDCI3) CH2: 30.1 , 30.4, 46.2, 46.2, 52.4, 52.4; CH: 64.6, 126.3, 130.4, 130.6, 133.6, 138.5; C: 1 18.1 , 133.9, 134.4, 139.8, 140.8, 148.8; [a]D23°c - 85.9° (8.61 mg/2 mL, MeOH).

EJEMPLO 1 El compuesto del título del ejemplo de preparación 33D (0.4 g) (0.979 mmoles), N1-óxido de ácido 4-piridilacético (0.1948 g) (1 .27 mmoles), clorhidrato de 1 -(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0.244 g) (1.27 mmoles), 1-hidroxibenzotriazol (0.172 g) (1.27 mmoles) y 4-metilmorfolina (0.14 mL) (1.27 mmoles) se disolvieron en DMF anhidra (15 mL) y la mezcla se agitó a 25°C durante 18 horas. La solución se vertió en diclorometano (800 mL) y se lavó con NaOH 1 N. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2X200 mL) y las capas orgánicas combinadas se evaporaron hasta la sequedad. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 3.5% (10% de NH4OH conc. en metanol) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 0.4806 g, 90%): LSIMS; m/z 543 (MH+); dc (CDCI3) CH2: 30.1 , 30.5, 38.4, 42.1 , 45.9, 50.4, 50.6; CH: 63.8, 126.5, 126.8, 126.8, 130.4, 130.5, 133.4, 138.4, 139.0, 139.0; C: 1 18.4, 133.4, 133.9, 134.8, 139.8, 141.0, 148.8, 167.0 ppm. Datos de RMP: dH (CDCI3): 5.78 (s.l H.Hn), 7.14 (d,2H,Ar-H), 7.15 (s,2H,Ar-H), 7.20 (d,1 H,Ar-H), 7.22 (d,1 H,Ar- H), 8.16 (d,2H,Ar-H), 8.29 (s,1 H,Ar-H).

EJEMPLO 2 A una solución de diclorometano (50 mL) del producto del ejemplo de preparación 21 , paso C, (1.06 g, 1.65 mmoles) se le añadió ácido metacloropebenzoico (0.5 g de 57-86% de pureza, 1 eq). Después de agitar a temperatura ambiente durante 5 horas se añadieron 0.23 g adicionales de ácido metacloroperbenzoico y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se lavó con una solución acuosa concentrada de bicarbonato de sodio, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró al vacío para dar una espuma amarillo claro. La purificación mediante cromatografía en columna por vaporización (gel de sílice) usando 5% de metanol-diclorometano saturado con hidróxido de amonio proveyó el compuesto del título (0.60 g, 56% de rendimiento, pf 170.5 - 175°C). [ ]D2 c = + 1 16.2° (c = 0.1 13, metanol).

EJEMPLO 3 El procedimiento del ejemplo 2, con la excepción de que se usó el producto del ejemplo de preparación 19 en lugar del producto de ejemplo de preparación 21 , paso C, dio el producto como un sólido blanco, p.f. = 174.2°C.

EJEMPLO 4 Se añadió ácido m-cloroperbenzoico (50%, 1.5 g, 4.36 mmoles) a una solución del ejemplo de preparación 32, paso C, (1.0 g, 1.48 mmoles) en cloruro de metileno (15 mL) a 0°C, después se agitó a 0°C durante 5 horas y a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron agua (50 mL), hidróxido de amonio (10 mL, conc.) y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno (2X200 mL). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el solvente se evaporó produciendo un sólido, el cual se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con 10% p/p de metanol:cloruro de metileno que contenía 2% de hidróxido de amonio, produciendo el compuesto del título como un sólido blanco (700 mg, 70%) ND24°C = -68.9° (c = 0.352, etanol).

EM (FAB, MH, 653) HRMS Cale. (C27H32N4O3BrCI(81)Br) 655.0509. Midió 655.0518. RMN 1H (CDCI3) d 8.31 (s,1H), 7.28 (s,1H), 7.19(d, 1H), 7.11(d, 1H), 5.37 (m, 1H), 4.60 (d, 1H), 4.42 (s, 2H), 3.86 (m, 3H), 3.41 (m, 3H), 2.89 (m, 4H), 2.42 (m, 1H), 2.20 (m, 3H), 2.04 (m, 1H), 1.78 (m, 2H), 1.66 (m, 1H), 1.48 (m,2H), 1.16 (m,3H).

EJEMPLO 5 Se obtuvo el producto del título como un sólido blanco siguiendo el mismo procedimiento del ejemplo 4, excepto que se usó una cantidad equivalente del producto del ejemplo de preparación 26A en lugar del producto del ejemplo de preparación 23, paso C. (73% de rendimiento). [ ]D24°c = -76.6° (c = 0.197, etanol). EM (FAB, MH 620) HRMS Cale. (C26H25N3O3BrCI(81)Br (621.9931 ). Midió 621.9942.

RMN 1H (CDCI3) d 8.32 (s, 1 H), 8.22 (d, 2H), 7.29 (s, 1 H), 7.19 (d, 1 H), 7.18 (d, 2H), 7.10 (d, 1 H), 5.37 (m, 1 H), 4.58 (d, 1 H), 3.78 (d, 1 H), 3.66 (d, 2H), 3.41 (s, 2H), 3.38 (m, 1 H), 2.95 (m, 3H), 2.50 (m, 1 H), 2.28 (m, 1 H), 1.63 (m, 1 H), 1.45 (m, 2H).

EJEMPLO 6 racémico racemico Se obtuvo el reactivo de partida siguiendo el procedimiento del ejemplo de preparación 12, excepto que se usó el producto del ejemplo de preparación 3, paso D, en lugar del compuesto del ejemplo de preparación 4. El procedimiento el ejemplo 4, con excepción de que se usó el reactivo anterior en lugar del producto del ejemplo de preparación 23, paso C, produjo el compuesto del título como un sólido blanco. (100%). EM (FAB, MH 540) HRMS Cale. (C26H24N3O3BrCI (540.0690). Midió (540.0691 ).

RMN 1H (CDCI3) d 8.45 (s, 1 H), 8.14 (d, 2H), 7.26-7.34 (m, 3H), 7.1 1 (d, 2H), 7.03 (d, 1 H), 6.73 (d, 1 H), 5.55 (d, 1 H), 4.40 (m, 1 H), 3.70 (m, 2H), 3.59 (s, 2H), 2.85 (m, 1 H), 2.45 (m, 1 H), 2.15 (m, 1 H), 1.35 (m, 1 H), 1.15 (m, 3H).

EJEMPLO 7 El compuesto del título del ejemplo de preparación 33, paso E, enantiómero R(+) (360.4 mg, 0.882 mmoles), N1 -óxido de ácido 4-piridilacético (175.5 mg, 1.146 mmoles), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (220 mg, 1.146 mmoles), 1-hidroxibenzotriazol (155 mg, 1.146 mmoles) y 4-metilmorfolina (0.126 mL, 1.146 mmoles) se disolvieron en DMF anhidra (1 1 mL) y la mezcla se agitó a 25°C durante 18 horas. La solución se trató como se describe en el ejemplo 1 y el producto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 4% (10% de NH OH conc. en metanol) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 441.1 mg, 92%): LCMS; m/z 543.1 (MH+); dc (CDCI3) CH2: 30.1 , 30.6, 38.5, 42.1 , 46.0, 50.5, 50.9; CH: 63.9, 126.5, 126.9, 126.9, 130.5, 130.6, 133.5, 138.5, 139.0, 139.0; C: 1 18.4, 134.0, 134.0, 134.9, 139.9, 141.0, 147.8, 167.1 ; dH (CDCI3): 5.74 (s.l H.Hn), 7.12 (d,2H,Ar-H), 7.13 (s,2H,Ar-H), 7.19 (d,1 H,Ar-H), 7.21 (d,1 H,Ar-H), 8.14 (d,2H,Ar-H), 8.27 (s,1 H,Ar-H); [a]D23°c + 69.2° (10 mg/2 mL, MeOH).

EJEMPLO 8 El compuesto del título del ejemplo de preparación 33, paso E, enantiómero S(-) (374.8 mg, 0.917 mmoles), N1 -óxido de ácido 4-piridilacético (182.6 mg, 1.192 mmoles), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (229 mg, 1.192 mmoles), 1-hidroxibenzotriazol (161 mg, 1.192 mmoles) y 4-metilmorfolina (0.131 mL, 1.192 mmoles) se disolvieron en DMF anhidra (1 1 mL) y la mezcla se agitó a 25°C durante 18 horas. La solución se trató como se describe en el ejemplo 1 y el producto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 4% (10% de NH4OH conc. en metanol) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 467.3 mg, 94%): LCMS; m/z 543.1 (MH+); dc (CDCI3) CH2: 30.0, 30.5, 38.4, 42.0, 45.9, 50.4, 50.8; CH: 63.8, 126.5, 126.8, 126.8, 130.4, 130.6, 133.4, 138.4, 138.9, 138.9; C: 118.4, 134.0, 134.0, 134.8, 139.8, 140.9, 147.7, 167.0; dH (CDCI3): 5.76 (s,1 H,Hn), 7.13 (d,2H,Ar-H), 7.15 (s,2H,Ar-H), 7.21 (d,1 H,Ar-H), 7.23 (d,1 H,Ar-H), 8.16 (d,2H,Ar-H), 8.29 (s,1 H,Ar-H); [ ]D234°C -65.5° (10.4 mg/2 mL, MeOH).

EJEMPLO 9 Paso A El compuesto del título del ejemplo de preparación 33, paso D, (±) (789.1 mg, 1.93 mmoles), ácido 1-ter-butox¡carbonil-4-piperidin¡lacét¡co (610.6 mg, 2.51 mmoles), clorhidrato de 1 -(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (481.2 mg, 2.51 mmoles), 1-hidroxibenzotriazol (339.2 mg, 2.51 mmoles) y 4-metilmorfolina (0.276 mL, 2.51 mmoles) se disolvieron en DMF anhidra (30 mL) y la mezcla se agitó a 25°C durante 21 horas. La solución se trató como se describe en el ejemplo 1 y el producto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 0.5%-1 % (10% de NH4OH conc. en metanol) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 1.22 mg, 100%): FABMS; m/z 633.3 (MH+); dc (CDCI3) CH3: 28.5, 28.5, 28.5; CH2: 30.2, 30.5, 32.2, 32.2, 39.5, 41.7, 43.8, 43.8, 45.8, 50.8, 51.2; CH: 33.3, 64.0, 126.5, 130.6, 130.6, 133.5, 138.5; C: 79.3, 1 18.3, 133.6, 134.8, 139.9, 140.9, 148.1 , 154.8, 170.0; dH (CDCI3): 1.46 (s,9H,-CMe3), 5.75 (s,1 H,Hn), 7.13 (d,1 H,Ar-H), 7.16 (s,1 H,Ar-H), 7.19 (s,1 H,Ar-H), 7.23 (cl.1 H.Ar-H), 8.29 (s,1 H,Ar-H).

Paso B El compuesto del título del paso A anterior (1.21 g, 1 .91 mmoles) se disolvió en metanol (10.6 mL) y 10% (p/p) de H2SO conc. en dioxano (26 mL) y la mezcla se agitó bajo argón a 25°C durante 1.5 horas. La solución se concentró y se diluyó con CH2CI y se hizo básica con NaOH 1 N acuoso. El extracto de CH2CI2, que contenía sólo parte del producto debido a su solubilidad en agua, se secó (MgSO ), se filtró y se evaporó hasta la sequedad. El producto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 10% (10% de NH4OH conc. en MeOH) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 87.7 mg, 10%): FABMS; m/z 533.1 (MH+); dc (CDCI3): CH2: 30.2, 30.4, 32.4, 32.4, 39.6, 41.6, 45.7, 45.9, 45.9, 50.7, 51.2; CH: 32.7, 64.0, 126.5, 130.6, 130.6, 133.5, 138.5; C: 118.3, 133.5, 134.7, 139.9, 140.9, 148.1 , 169.8; dH (CDCI3): 5.73 (s.l H.Hn), 7.12 (d,1 H,Ar-H), 7.15 (s,1 H,Ar-H), 7.18 (s,1 H,Ar-H), 7.21 (d,1 H,Ar-H), 8.28 (s,1 H,Ar-H).

Paso C El compuesto del título del paso B anterior (99.1 mg, 0.189 mmoles) e isocianato de trimetilsililo (0.384 mL, 2.83 mmoles) se disolvieron en diclorometano anhidro (3 mL) y la mezcla se agitó a 25°C bajo argón durante 20 horas. Se añade isocianato de trimetilsililo adicional (0.0768 mL, 0.567 mmoles) y la reacción se deja proceder durante 5 horas adicionales. La mezcla se diluye con diclorometano y se lava con NaHCO3 acuoso saturado, se seca (MgSO4), se filtra y se evapora hasta la sequedad. El producto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 3.5% (10% de NH4OH conc. en MeOH) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 80.4 mg, 81 %): FABMS; m/z 576.1 (MH+); dc (CDCI3): CH2: 30.1 , 30.4, 32.0, 32.0, 39.2, 41.6, 44.4, 44.3, 45.7, 50.7, 51.1 ; CH: 32.9, 63.9, 126.4, 130.5, 130.6, 133.4, 138.4; C: 1 18.3, 133.5, 134.7, 139.8, 140.9, 148.0, 169.7; dH (CDCI3): 5.74 (s,1 H,Hn), 7.12 (d,1 H,Ar-H), 7.15 (s,1 H,Ar-H), 7.19 (s,1 H,Ar-H), 7.22 (d,1 H,Ar-H), 8.28 (s,1 H,Ar-H).

EJEMPLO 10 Paso A El compuesto del título del ejemplo de preparación 33, paso E, enantiómero R(+) (1 g, 2.45 mmoles), ácido 1-ter-butoxicarbonil-4-piperidinilacético (487 mg, 3.181 mmoles), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropiI)-3-etilcarbodiimida (610 mg, 3.181 mmoles), 1-hidroxibenzotriazol (430 mg, 3.181 mmoles) y 4-metilmorfolina (0.35 mL, 3.181 mmoles) se disolvieron en DMF anhidra (30.5 mL) y la mezcla se agitó a 25°C durante 66 horas. La solución se trató como se describe en el ejemplo 1 y el producto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 1 % (10% de NH4OH conc. en metanol) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 1.25 g, 81 %): LCMS; m/z 633.1 (MH+); dc (CDCI3) CH3: 28.5, 28.5, 28.5; CH2: 30.2, 30.5, 32.2, 32.2, 39.4, 41.7, 43.6, 43.6, 45.8, 50.7, 51.2; CH: 33.3, 64.0, 126.5, 130.6, 130.6, 133.5, 138.5; C: 79.3, 118.3, 133.6, 134.8, 139.9, 140.9, 148.1 , 154.9, 170.0; dH (CDCI3): 1 -46 (s,9H,-CMe3), 5.74 (s.l H.Hn), 7.12 (d,1 H,Ar-H), 7.16 (s,1 H,Ar-H), 7.19 (s,1 H,Ar-H), 7.23 (d,1 H,Ar-H), 8.29 (s,1 H,Ar-H); [a]D23 4°c +56.4° (9.05 mg/2 mL, MeOH). Paso B El compuesto del título del paso A anterior (1.149 g, 1.812 mmoles) se disolvió en metanol (9.5 mL) y 10% (p/p) de H2SO conc. en dioxano (24.7 mL) y la mezcla se agitó bajo argón a 25°C durante 1.5 horas. La mezcla se pasó sobre un lecho de resina de intercambio iónico BioRad AG1-X8 (forma OH) y la resina se lavó con metanol. Los eluatos combinados se evaporaron hasta la sequedad y el producto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 10% (10% de NH OH conc. en MeOH) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 762.9 mg, 79%): LSIMS; m/z 533 (MH+); dc (CDCI3): CH2: 30.2, 30.5, 33.2, 33.2, 40.1, 41.7, 45.9, 46.4, 46.4, 50.8, 51.2; CH: 33.4, 64.0, 126.5, 130.6, 130.6, 133.6, 138.6; C: 1 18.4, 133.6, 134.8, 139.9, 140.9, 148.2, 170.2; dH (CDCI3): 5.73 (s,1 H,Hn), 7.11 (d,1 H,Ar-H), 7.14 (s,1 H,Ar-H), 7.19 (s,1 H,Ar-H), 7.22 (d,1 H,Ar-H), 8.28 (s,1 H,Ar-H); [a]D23 2°c +66.4° (10.90 mg/2 mL, MeOH).

Paso C El compuesto del título del paso B anterior (550 mg, 1.03 mmoles) e isocianato de trimetilsililo (2.092 mL, 15.45 mmoles) se disolvieron en diclorometano anhidro (16.4 mL) y la mezcla se agitó a 25°C bajo argón durante 18 horas. La mezcla se diluye con diclorometano y se lava con NaHCO3 acuoso saturado, se seca (MgSO4), se filtra y se evapora hasta la sequedad. El producto se somete a cromatografía sobre gel de sílice usando 3.5% (10% de NH OH conc. en MeOH) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 570.3 mg, 99%): FABMS; m/z 576.3 (MH+); dc (CDCI3): CH2: 30.2, 30.5, 32.1 , 32.1 , 39.3, 41.7, 44.4, 44.5, 45.8, 50.8, 51.2; CH: 33.0, 64.0, 126.5, 130.6, 130.6, 133.5, 138.6; C: 1 18.4, 133.5, 134.8, 139.9, 141.0, 148.1 , 157.9, 169.8; dH (CDCI3): 5.73 (s.l H.Hn), 7.12 (d,1 H,Ar-H), 7.14 (s,1 H,Ar-H), 7.19 (s,1 H,Ar-H), 7.21 (d,1 H,Ar-H), 8.28 (s,1 H,Ar-H); [a]D23-4°c +60.2° (10.28 mg/2 mL, MeOH).

EJEMPLO 11 Paso A El compuesto del título del ejemplo de preparación 33, paso E, enantiómero S(-) (1 g, 2.45 mmoles), ácido 1-ter-butoxicarbonil-4-piperidinilacético (487 mg, 3.181 mmoles), clorhidrato de 1-(3-dimet¡lam¡nopropil)-3-etilcarbodiimida (610 mg, 3.181 mmoles), 1-h id roxi benzotriazol (430 mg, 3.181 mmoles) y 4-metilmorfolina (0.35 mL, 3.181 mmoles) se disolvieron en DMF anhidra (30.5 mL) y la mezcla se agitó a 25°C durante 66 horas. La solución se trató como se describe en el ejemplo 1 y el producto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 1 % (10% de NH4OH conc. en metanol) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 1.204 g, 78%): LSIMS; m/z 633.5 (MH+); dc (CDCI3) CH3: 28.5, 28.5, 28.5; CH2: 30.2, 30.5, 32.2, 32.2, 39.4, 41.7, 43.6, 43.6, 45.8, 50.7, 51.2; CH: 33.3, 64.0, 126.5, 130.5, 130.5, 133.6, 138.5; C: 79.3, 118.3, 133.6, 134.8, 139.9, 140.9, 148.1 , 154.8, 170.0; dH (CDCI3): 1.46 (s,9H,-CMe3), 5.74 (s,1 H,Hn), 7.12 (d,1 H,Ar-H), 7.15 (s,1 H,Ar-H), 7.19 (s,1 H,Ar-H), 7.22 (d,1 H,Ar-H), 8.28 (s,1 H,Ar-H); [a]D23 c -57.2° (9.09 mg/2 mL, MeOH).

Paso B El compuesto del título del paso A anterior (1.104 g, 1 .741 mmoles) se disolvió en metanol (9.13 mL) y 10% (p/p) de H2SO4 conc. en dioxano (23.75 mL) y la mezcla se agitó bajo argón a 25°C durante 1 horas.

La mezcla se pasó sobre un lecho de resina de intercambio iónico BioRad AG1-X8 (forma OH) y la resina se lavó con metanol. Los eluatos combinados se evaporaron hasta la sequedad y el producto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando 10% (10% de NH OH conc. en MeOH) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 771.6 mg, 83%): LSIMS; m/z 533 (MH+); dc (CDCI3): CH2: 30.3, 30.5, 33.0, 33.0, 40.0, 41.7, 45.8, 46.2, 46.2, 50.8, 51.2; CH: 33.3, 64.0, 126.5, 130.6, 130.6, 133.6, 138.6; C: 1 18.4, 133.6, 134.8, 139.9, 140.9, 148.2, 170.1 ; dH (CDCI3): 5.73 (s,1 H,Hn), 7.12 (d,1 H,Ar-H), 7.14 (s,1 H,Ar-H), 7.19 (s,1 H,Ar-H), 7.22 (d,1 H,Ar-H), 8.28 (s,1 H,Ar-H); [a]D23 c -66.9° (10.29 mg/2 mL, MeOH).

Paso C El compuesto del título del paso B anterior (550 mg, 1.03 mmoles) e isocianato de trimetilsililo (2.092 mL, 15.45 mmoles) se disolvieron en diclorometano anhidro (16.4 mL) y la mezcla se agitó a 25°C bajo argón durante 18 horas. La mezcla se diluye con diclorometano y se lava con NaHCO3 acuoso saturado, se seca (MgSO4), se filtra y se evapora hasta la sequedad. El producto se somete a cromatografía sobre gel de sílice usando 3.5% (10% de NH4OH conc. en MeOH) de diclorometano como el eluyente para dar el compuesto del título (rendimiento: 571.5 mg, 99%): FABMS; m/z 576.3 (MH+); dc (CDCI3): CH2: 30.2, 30.5, 32.0, 32.0, 39.3, 41.7, 44.4, 44.5, 45.7, 50.7, 51.2; CH: 33.0, 64.0, 126.5, 130.6, 130.6, 133.5, 138.6; C: 118.4, 133.6, 134.8, 139.9, 141.0, 148.1 , 157.9, 169.8; dH (CDCI3): 5.73 (s.l H.Hn), 7.12 (d,1 H,Ar-H), 7.15 (s,1 H,Ar-H), 7.20 (s,1 H,Ar-H), 7.22 (d,1 H,Ar-H), 8.28 (s,1H,Ar-H); [a]D23 c-62.5° (9.54 mg/2 mL, MeOH).

EJEMPLO 12 El reactivo de partida (0.1 g, 0.18 mmoles), se disolvió en CH2CI2 (5 mL) y después se enfrió a -18°C. Después se añadió ácido m-cloroperbenzoico (0.18 g, 1.07 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se separó entre CH2CI2 y NaHCO3 saturado (acuoso). La fase acuosa se extrajo más con CH2CI2, las fracciones de CH2CI2 combinadas se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vacío para dar un residuo que se sometió a cromatografía sobre una placa de sílice eluyendo con 10% de MeOH (NH3 saturado)-CH2Cl2 como el eluyente para dar el compuesto del título como un sólido blanco (0.013 g, 13% de rendimiento, p.f. = 146.8-147.4°C, MH+ = 577). El reactivo de partida se obtiene mediante el procedimiento del ejemplo de preparación 14, y los procedimientos de separación por cromatografía quiral descritos arriba.

EJEMPLO 13 El compuesto del título se preparó esencialmente mediante el mismo procedimiento que el descrito en el ejemplo 12 (p.f. = 120-121 °C, MH+ = 577).

EJEMPLO 14 Siguiendo esencialmente el mismo procedimiento de oxidación que el del ejemplo 12, el reactivo de partida se oxida con ácido m-cloroperbenzoico para producir el compuesto del título (p.f. = 109-1 10°C, MH+ = 542). El reactivo de partida se obtiene haciendo reaccionar el isómero S(-) del compuesto del título del ejemplo de preparación 3 con el compuesto del título del ejemplo de preparación 1 , esencialmente mediante el mismo procedimiento que el descrito en el ejemplo de preparación 12. El isómero S(-) del racemato del ejemplo de preparación 3 se obtiene mediante los procedimientos de separación por cromatografía quiral descritos arriba.

EJEMPLO 15 El compuesto del título se preparó esencialmente mediante el mismo procedimiento que el descrito en el ejemplo 14 (p.f. = 125.5-126.3°C, MH+ = 542).

Pruebas Se determinó FPT IC50 (prueba de enzima in vitro de inhibición de farnesii-proteína transferasa) siguiendo los procedimientos de prueba descritos en WO 95/10516, publicada el 20 de abril de 1995. GGPT IC50 (prueba de enzima in vitro de inhibición de geranilgeranil-proteína transferasa), IC50 de Células COS (prueba a base de células), prueba de Estera de Células y actividad antitumoral (estudios antitumorales in vivó) se pudieron determinar mediante los procedimientos de prueba descritos en WO 95/10516. La descripción de WO 95/10516 se incorpora en la presente a manera de referencia a la misma.

Pueden llevarse a cabo pruebas adicionales siguiendo esencialmente el mismo procedimiento que el descrito arriba, pero con la sustitución de líneas de células tumorales indicadoras alternativas en lugar de células T24-BAG. Las pruebas pueden llevarse a cabo usando células de carcinoma de colon humano DLD-1-BAG que expresen un gen K-ras o células de carcinoma de colon humano SW620-BAG que expresen un gen K-ras activado. La actividad de los compuestos de esta invención contra otros tipos de células cancerosas puede demostrarse usando otras líneas de células tumorales conocidas en la técnica.

Prueba de agar suave El crecimiento independiente de anclaje es una característica de Isa líneas de células tumorígenas. Células tumorales humanas se suspenden en medio de crecimiento que contiene agarosa al 0.3% y una concentración indicada de un inhibidor de farnesil transferasa. La solución se coloca sobre el medio de crecimiento solidificado con agarosa al 0.6% que contiene la misma concentración de inhibidor de farnesil transferasa que la capa superior. Después de que la capa superior se solidifica, las placas se incuban durante 10-16 días a 37°C bajo CO2 al 5% para permitir el crecimiento de colonias. Después de la incubación, las colonias se tiñen colocando sobre el agar una solución de MTT (bromuro de (S-^.d-dimetiltiazol^-i ^.d-difeniltetrazolio, azul de tiazolilo) (1 mg/mL en PBS). Se cuentan las colonias y se determinan los IC50.

Prueba de FPT pM I Csn La reacción enzimática se lleva a cabo en Tris a 50 mM, 5 µM de ZnC , MgCI2 a 5 mM, Tritón X-100 ai 0.01 %, 5 mM de ditioltreitol (DTT), pH 7.7 (regulador de pH R) a 37°C durante 1 hora. La FPT humana purificada (> 95% pura) se derivó de un sistema de expresión de baculovirus/Sf-9. El substrato de péptido usado fue biotina-CVLS (SynPep Corp., Dublin, CA) y se obtuvo (1-3H)-FPP (21.5 Ci/mmol) de New England Nuclear Life Science Products (Boston, MA). Los compuestos se disolvieron inicialmente hasta una concentración final de 4 mg/ml en DMSO al 100% y después a 0.25 µg/ml en DMSO al 100%. Las diluciones subsecuentes del compuesto se llevaron a cabo en el regulador de pH R. La reacción enzimática se lleva a cabo en un volumen final de 100 µl. Las reacciones se llevan a cabo en un formato de placa con 96 cavidades. Las concentraciones finales de FPT, FPP humanas y biotina-CVLS son 30 pM, 176 nM y 100 nM, respectivamente, en un volumen de 100 µl. Una reacción típica incluye el preequilibrio de FPT y FPP en 40 µl a temperatura ambiente durante 15 minutos seguido por la adición de 40 µl de una solución que contiene el compuesto de prueba. Esto se equilibra más durante 15 minutos a temperatura ambiente. La reacción enzimática es iniciada añadiendo 20 µl del substrato de péptido de biotina-CVLS y se deja proceder a 37°C durante 1 hora. La reacción se detiene usando 150 µl de la solución de paro que consiste de 1.3 mg/ml de esferas de escintilación (esferas de proximidad de escintilación recubiertas con estreptavidina de Amersham (Arlington Heights, IL), 250 mM de EDTA, pH 8.0 y BSA al 0.5%. la radioactividad se mide después de 20 minutos a temperatura ambiente. Se evalúa la capacidad de los compuestos para inhibir la reacción midiendo el porcentaje de inhibición dependiente de concentración de la reacción. Se diluyen cantidades de compuesto a 0.25 µg/ml (DMSO) en el regulador de pH R y después en la mezcla de reacción como se describió arriba para dar una concentración final de 0.01 , 0.003, 0.001 , 0.0003, 0.0001 y 0.00003 µg/ml en la mezcla de reacción. La actividad enzimática se registró midiendo la CPM/cavidad usando un contador de escintilación líquida Wallac 1204 Betaplate BS. Los experimentos de control se llevaron a cabo sin inhibidores para proveer un valor CPM para la reacción no inhibida. Además, las reacciones se llevaron a cabo sin biotina-CVLS para proveer una señal para valores de CPM antecedentes. Después de corregir las señales para antecedente, la inhibición porcentual sería calculada para cada concentración de inhibidor y un valor IC5o sería interpolado desde por lo menos análisis cuadrados de los datos en la región lineal de inhibición. Los compuestos de los ejemplos 1-15 y el compuesto 54.0 tuvieron un FPT IC5o en la escala de 0.7 nM a >174 nM. El compuesto del ejemplo 7 tuvo un FPT pM IC50 de 0.44 nM y el compuesto del ejemplo 10 tuvo un FPT pM IC50 de 0.41 nM. Los compuestos de los ejemplos 2,3 y 7 tuvieron IC50 de célula COS en la escala de 9 nM a 85 nM, y un IC50 de agar suave en la escala de 25 nM a 183 nM.

Para preparar composiciones farmacéuticas a partir de los compuestos descritos por esta invención, los vehículos inertes y farmacéuticamente aceptables pueden ser sólidos o líquidos. Las preparaciones en forma sólida incluyen polvos, tabletas, granulos dispersables, cápsulas, pastillas y supositorios. Los polvos y tabletas pueden comprender alrededor de 5 a aproximadamente 70% de ingrediente activo. Los vehículos sólidos adecuados se conocen en la técnica, por ejemplo, carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar, lactosa. Las tabletas, polvos, pastillas y cápsulas pueden usarse como formas de dosis sólidas adecuadas para la administración oral. Para preparar supositorios, se derrite primero una cera de baja fusión, tal como una mezcla de glicéridos de ácido graso o manteca de cacao, y el ingrediente activo se dispersa de manera homogénea en la misma mediante agitación. La mezcla homogénea fundida es después vertida en moldes de tamaño conveniente, se deja enfriar y después solidificar. Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Como un ejemplo pueden mencionarse agua o soluciones de agua-propilenglicol para inyección parenteral. Las preparaciones en forma líquida también pueden incluir soluciones para administración intranasal. Las preparaciones en aerosol adecuadas para inhalación pueden incluir soluciones y sólidos en forma de polvo, los cuales pueden estar en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como un gas inerte comprimido. También se incluyen las formas de preparación sólidas las cuales están diseñadas para ser convertidas, justo antes de usarse, en preparaciones en forma líquida para administración oral o parenteral. Dichas formas líquidas incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Los compuestos de la invención también pueden suministrarse transdérmicamente. Las composiciones transdérmicas pueden tener forma de cremas, lociones, aerosoles y/o emulsiones, y pueden incluirse en un parche transdérmico tipo matriz o receptáculo, que son convencionales en la técnica para este propósito. Preferiblemente, el compuesto se administra oralmente. En forma preferible, la preparación farmacéutica está en forma de dosis unitaria. En tal forma, la preparación es subdividida en dosis unitarias que contienen cantidades adecuadas del componente activo, por ejemplo, una cantidad efectiva para lograr el propósito deseado. La cantidad de compuesto activo en una dosis unitaria de preparación puede ser variada o ajustada de aproximadamente 0.1 mg a 1000 mg, muy preferiblemente alrededor de 1 mg a 300 mg, de acuerdo con la aplicación particular. La dosis actual empleada puede variar dependiendo de los requerimientos del paciente y de la severidad de la condición que esté siendo tratada. La determinación de la dosificación adecuada para una situación particular está dentro de las habilidades de un experto en la técnica. En general, el tratamiento se inicia con dosis más pequeñas que son inferiores a la dosis óptima del compuesto. Posteriormente, la dosis se aumenta en incrementos pequeños hasta que se alcance el efecto óptimo bajo las circunstancias. Por motivos de conveniencia, la dosis diaria total puede dividirse y administrarse en porciones durante el día si se desea. La cantidad y frecuencia de administración de los compuestos de la invención y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos serán reguladas de acuerdo con el juicio del médico que atienda, considerando factores tales como edad, condición y talla del paciente, así como la severidad de los síntomas que se estén tratando. Un régimen de dosificación típico que se recomienda es la administración oral de 10 mg a 2000 mg/día, preferiblemente 10 a 1000 mg/día, en dos a cuatro dosis divididas para bloquear el crecimiento de tumores. Los compuestos no son tóxicos cuando se administran en este régimen de dosificación. Los siguientes son ejemplos de formas de dosis farmacéuticas que contienen un compuesto de la invención. El alcance de la invención en este aspecto de composición farmacéutica no deberá ser limitado por los ejemplos provistos.

EJEMPLOS DE FORMA DE DOSIS FARMACÉUTICA EJEMPLO A Tabletas Método de fabricación Se mezclan los ingredientes 1 y 2 en un mezclador adecuado durante 10-15 minutos. La mezcla se granula con el ingrediente 3. Los granulos húmedos se muelen a través de un tamiz grueso (por ejemplo, 0.63 cm) si es necesario. Los granulos húmedos se secan. Se tamizan los granulos secos si es necesario y se mezclan con el ingrediente 4 y se mezcla durante 10-15 minutos. Se añade el ingrediente 5 y se mezcla durante 1-3 minutos. La mezcla se comprime a un tamaño adecuado y se pesa sobre una máquina para tabletas adecuada.

EJEMPLO B Cápsulas Método de fabricación Se mezclan los ingredientes 1 , 2 y 3 en un mezclador adecuado durante 10-15 minutos. Se añade el ingrediente 4 y se mezcla durante 1-3 minutos. La mezcla se rellena en cápsulas de gelatina dura de dos piezas adecuadas en una máquina encapsuladora adecuada. Aunque la presente invención se ha descrito en conjunto con las modalidades específicas descritas arriba, serán aparentes muchas alternativas, modificaciones y variaciones de la misma para los expertos en la técnica. Se intenta que todas esas alternativas, modificaciones y variaciones caigan dentro del espíritu y alcance de la presente invención.

Claims (14)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1.- Un compuesto seleccionado de: 20 o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo.
2. 2.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , seleccionado de:
3. 3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , seleccionado de:
4. 4.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , que tiene la fórmula:
5. 5.- El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para inhibir el crecimiento anormal de células.
6. 6.- El uso de conformidad con la reivindicación 5, en donde las células inhibidas son células tumorales que expresan un oncogen ras activado. 7 - El uso de conformidad con la reivindicación 5, en donde la inhibición del crecimiento anormal de células ocurre mediante la inhibición de farnesii-proteína transferasa. 8.- El uso de conformidad con la reivindicación 5, en donde la inhibición es de células tumorales en las que la proteína Ras es activada como resultado de la mutación oncogénica en genes que no son el gen Ras. 9.- El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para inhibir farnesii-proteína transferasa en un paciente. 10.- El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 3 en la fabricación de un medicamento para inhibir farnesil-proteína transferasa en un paciente. 1 1.- El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para tratar cáncer pancreático, cáncer de pulmón, leucemia mieloide, cáncer folicular tiroideo, síndrome mielodisplástico, carcinoma epidérmico, carcinoma de vejiga, cáncer de colon, cáncer de mama o cáncer de próstata en un paciente. • 12.- El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 3 en la fabricación de un medicamento para tratar cáncer pancreático, cáncer de pulmón, leucemia mieloide, cáncer folicular tiroideo, síndrome mielodisplástico, carcinoma epidérmico, carcinoma de vejiga, cáncer de colon, cáncer de mama o cáncer de próstata en un paciente. 13.- Una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable. 14.- Una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 3, en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable. RESUMEN DE LA INVENCIÓN Se describen compuestos novedosos como los de las fórmulas (I), (II), (lll), (IV), (V) y (Vi): se describen también métodos para inhibir el crecimiento anormal de células, para inhibir farnesii-proteína transferasa y para tratar cánceres usando los compuestos novedosos. JN P99/1714F