MXPA97006255A - Tioles para promover el crecimiento de celulas progenitoras hematopoyeticas - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona con métodos para estimular. el crecimiento de células progenitoras hematopoyéticas. En particular se relaciona con el uso de tioles y compuestos relacionados para la estimulación del crecimiento de células progenitoras hematopoyéticas in vitro e in vivo. Además la presente invención se relaciona con métodos para usar estos compuestos para el tratamiento de estados de falla de la médula o condiciones inmunodeficientes, incluyendo, pero no limitando a síndromes mielodisplásicos o síndrome de inmunodeficiencia adquirida. La figura describe un ensayo de formación de colonia de médulaósea.

Description

"TIPLES PARA PROMOVER EL CRECIMIENTO DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYETICAS" 1. INTRODUCCIÓN La presente invención se relaciona con métodos para estimular el crecimiento de células progenitoras hematopoyéticas. En particular, se relaciona con el uso de tioles y compuestos relacionados para estimular el crecimiento de las células progenitoras hematopoyéticas in vitro e in vivo. Además, la presente invención se relaciona con métodos para usar estos compuestos para el tratamiento de estados de falla de médula y .condiciones inmunodeficientes, incluyendo, pero no quedando limitadas a síndromes mielodisplásticos y el síndrome de inmunodeficiencia adquirida. 2. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Una variedad de enfermedades y trastornos, incluyendo pre-malignidad, sobremalignidad e inmunodeficiencia, están relacionadas con un malfuncionamiento dentro del sistema linfo-hematopoyético. Algunas de estas condiciones podrían aliviarse y/o curarse volviendo a poblar el sistema linfo-hematopoyético con las células progenitoras, que cuando se activan para diferenciar superarían la deficiencia del paciente. Por lo tanto, la capacidad para iniciar y regular la hematopoyesis, es de gran importancia (McCune y otros, 1988, Science 241:1632) . En seres humanos, una forma de terapia satisfactoria es el transplante de la médula ósea. Además del uso del transplante de la médula ósea del tratamiento de leucemia, ahora se está usando frecuentemente en otra neoplasia (Epstein y Slease, 1985, Surg. Ann. 17:125). Este tipo de terapia, sin embargo, es tanto dolorosa (para el donador como para el receptor) debido a la implicación de procedimientos invasivos y puede ocasionar complicaciones serias y aún fatales al receptor, particularmente con transplante alogeneico y resultados relacionados con Injerto Versus Enfermedad Huésped (GVHD) . Por lo tanto, el riesgo de GVHD restringe el uso de transplante de médula ósea a pacientes con enfermedades por lo demás fatales. Un enfoque alternativo a la terapia para trastornos hematopoyéticos es el uso de los factores de crecimiento o citocinas para estimular el desarrollo de la célula sanguínea en un receptor (Dexter, 1987, J. Cell Sci. 88:1; Moore, 1991, Annu. Rev. Immunol. 9:159). El proceso de la formación de la célula saguínea, mediante lo cual un número pequeño de hemocitoblastos auto-renovadores dan lugar a células progenitoras específicas de linaje que subsecuentemente experimentan proliferación y diferenciación para producir las células sanguíneas de circulación maduras, ha demostrado que por lo menos en parte se regula mediante hormonas específicas. Estas hormonas se conocen conjuntamente como factores de crecimiento hematopoyéticos, (Metcalf, 1985, Science 229:16; Dexter, 1987, J. Cell Sci. 88:1; Golde y Gasson, 1988, Scientific American, Julio: 62; Tubbara y Robinson, 1991, Anti-Cancer Res. 11:81; Ogawa, 1989, Environ. Health Presp. 80:199; Dexter, 1989, Br. Med. Bull . 45:337). Con el advenimiento de la tecnología de ADN recombinante, un número de estas moléculas ahora se han clonado y expresado en forma recombinante (Souza y otros, 1986, Science 232:61; Gough y otros, 1984, Nature 309:763; Yokota y otros, 1984, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 81:1070; Kawasaki y otros, 1985, Science 230:291). Estos factores de crecimiento se han estudiado en su estructura, biología y aún potencial terapéutico. Algunos de los factores más bien caracterizados incluyen eritropoyetina (EPO), factor de hemocitoblasto (SCF), factor estimulante de la colonia del macrófago de granulocito (GM-CSF) , factor estimulante de la colonia del macrófago (M-CSF) , factor estimulante de la colonia del granulocito (G-CSF), y las interleucinas. Estos factores actúan en tipos de células diferentes en etapas diferentes durante el desarrollo de las células sanguíneas, y sus usos potenciales en medicina incluyen disminuir la necesidad para transfusiones de sangre, acelerar la recuperación de la médula ósea después del transplante y terapia de cáncer citotóxico, corregir trastornos inmunosupresivos, cicatrización de heridas, y activación de la respuesta inmune. (Golde y Gasson, 1988, Scientific American, Julio: 62). Además de inducir la proliferación y diferenciación de las células progenitoras hematopoyéticas, estas citocinas también han demostrado que activan un número de funciones de células sanguíneas maduras (Stanley y otros, 1976, J. Exp. Med. 143:631; Schrader y otros, 1981, Proce. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 78:323; Moore y otros, 1980, J. Immunol. 125:1302; Kurland y otros, 1979, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 76:2326; Handman y Burgess, 1979, J. Immunol. 122:1134; Vadas y otros, 1983, Blood 61:1232; Vadas y otros, 1983, J. Immunol. 130:795), incluyendo influenciar la migración de células hematopoyéticas maduras ( ibert y otros, 1986, J. Immunol. 137:3584). Aún cuando estos factores de crecimiento han demostrado que poseen efectos proliferativos y/o diferenciativos en varios linajes de la célula hematopoyética, no han demostrado ser efectivos en muchos casos de enfermedades clínicas. Por ejemplo, los síndromes mielodisplásticos (MDS) comprenden un grupo diverso de trastornos de hemocitoblasto hematopoyético, caracterizados por producción inefectiva de la célula sanguínea, citopenias progresivas y un riesgo variable de progresión a leucemia aguda (List y otros, 1990, J. Clin. Oncol. 8:1424). Las pruebas clínicas de pacientes de MDS tratados con el factor estimulante de la colonia de granulocito-macrófago humano recombinante y el factor estimulante de la colonia de granulocito humano recombinante han demostrado que aún cuando estas citocinas pueden restablecer la granulocitopoyesis en pacientes tratados, la eficacia se restringe al linaje de granulocito/monocito con poca o ninguna mejora en las cuentas de hemoglobina y/o plaquetas (Schuster y otros, 1990, Bood 76 (Suppl.1) : 318a) . Cuando estos pacientes se trataron recientemente con la eritropoyetina humana recombinante, se logró una mejora sustentada en hemoglobina y/o una disminución en el requisito de transfusión en solamente menos del 25 por ciento de los pacientes (Besa y otros, 1990, 76 (Suppl.1) :133a; Hellstrom y otros, 1990, 76 (Suppl.1) :279a: Bowen y otros, 1991, Br. J. Haematol. 77:419). Por lo tanto, queda una necesidad para un agente efectivo para el tratamiento de estados de falla y de médula tales como MDS. Además, las citocinas son tanto difíciles como costosas de producir. Debido a que estos factores son proteínas, su producción no es susceptible a síntesis química directa. Además, sus bajos niveles de expresión endógena y el régimen de crecimiento limitado de células humanas hacen que al producción natural de estas proteínas sea extremadamente costosa. Su producción mediante métodos recombinantes también involucra grandes costos económicos y obstáculos técnicos. Por lo tanto, ninguna de estas moléculas dadas a conocer anteriormente proporciona tanto un estimulador biológicamente activo y fácilmente sintetizado de las células progenitoras hematopoyéticas para la administración in vivo. 3. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con el uso de tioles y compuestos relacionados con el estímulo de células progenitoras hematopoyéticas. Estos compuestos de tiol se sintetizan fácilmente usando las enseñanzas de la Patente Norteamericana Número 3,892,824. La invención se basa, en parte, en el descubrimiento de los Solicitantes de la eficacia anteriormente desconocida de un compuesto de tiol, la amifostina, en el estímulo de las células progenitoras hematopoyéticas. Las células progenitoras hematopoyéticas se pueden estimular cultivando las células y tratándolas con los compuestos de tiol in vitro. Alternativamente, los compuestos de tiol pueden administrarse directamente al paciente quien necesita un número más elevado de células sanguíneas. Por lo tanto, la invención proporciona métodos para tratar condiciones que requieren la proliferación de la célula progenitora hematopoyética incluyendo, pero no quedando limitados a estados de falla de médula tales como MDS e inmunodeficiencia. 4. DESCRPCION DE LAS FIGURAS Figura 1. Ensayo de formación de la colonia de la médula ósea. Las células de médula ósea aislado de cuatro pacientes con MDS se trataron con amifostina, se lavaron y se cultivaron en una lámina en metilcelulosa. Las muestras de control no se trataron con este compuesto. Cada muestra luego se ensayó para CFU-GEMN, BFU-E y formación de la colonia CFU-GM.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se basa en parte en el descubrimiento de los solicitantes que la amifostina estimula las células progenitoras hematopoyéticas in vitro.

Sobre esta base, la presente invención abarca el uso de tioles y poliaminas y sus derivados funcionales o análogos en métodos para tratar cualesquiera de las condiciones que requieran crecimiento de la célula hematopoyética. .1. COMPUESTOS El estímulo de las células progenitoras hematopoyéticas de conformidad con la invención, se puede lograr mediante tratamiento con compuestos de tiol que son apropiados para uso humano con toxicidad mínima. En particular, la presente invención se relaciona con aminotioles que tienen la fórmula RNH(CnH2n)NH(CnH2n)SP?3H2 en donde R es hidrógeno, un arilo, un acilo o un grupo de alquilo que contiene de 1 a 7 átomos de carbono y cada n tiene un valor de 2 a 6; o hidratos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos tales como sales de halógeno y/o sales de metal alcalino. Estos compuestos y su síntesis se describen detalladamente en la Patente Norteamericana concedida a Piper y Johnston, Número 3,892,824, que se incorpora en la presente por referencia en su totalidad. Estos compuestos incluyen pero no se limitan a amifostina, glutationa, cisteina de N-acetilo, tiosulfato de sodio, y semejantes, y se pueden preparar mediante métodos bien conocidos por aquellas personas expertas en la técnica, véase por ejemplo de F. Córtese, "Organic Syntheses", Coil. bol. II, A.H. Blatt, Editor, John Wiley and sons, Inc., Nueva York, N.Y. 1943, páginas 91 a 93; S. Akerfeldt, Acta Chem Scand., 1960, 14: 1980; y J. R. Piper y otros, Chem. Ind. (Londres), 1966, página 2010. La preparación del compuesto preferido fue, Monohidrato de Fosforotioato de Dihidrógeno H2 (CH2)3NHCH2CH2SP?3H2.H20 de S-2-(3-aminopropilamino) etilo (amifostina o WR 2721) también se ha descrito en detalle en la Patente Norteamericana de Piper y Johnston Número 3,892,824, que se incorpora en la presente por referencia en su totalidad. La forma desfosforilada de este compuesto es su metabolito activo de tiol libre (WR 1065) . Además, se ha también sintetizado la forma de trihidrato estable a temperatura ambiente. Para administración oral, el compuesto preferido es fosforotiorato de l-propanotiol-3- [ [3- (metilamino) propil] amino] -dihidrógeno) que se ilustra de la siguiente manera : CH3NH(CH2)3NH(CH2)3SP?3H2 . El WR 151327 es un agente reductor de tiofosfato con capacidad depuradora del radical exento de oxígeno (Grdina y otros, 1991, supra) que ejerce su actividad contra VHI sin matar células ni inhibir su crecimiento. WR 151326 es el tiol libre desfosforilado. Puesto que estos compuestos son capaces de inhibir la actividad del VHI, pueden ser particularmente útiles para tratar pacientes de HIV para lograr tanto efectos estimulatorios de la célula contra-VHI como hematopoyéticas . .2 USOS DE LOS COMPUESTOS Los compuestos de la presente invención pueden administrarse directamente a pacientes para el tratamiento de cualesquiera de las condiciones que manifiesten números reducidos de células sanguíneas de circulación, incluyendo pero no quedando limitadas a anemia, leucopenia, trombocitopenia individualmente o como pancitopenia y las distintas formas de estados inmunodeficientes. Alternativamente, los compuestos se pueden usar para expandir los números de células progenitoras hematopoyéticas en el cultivo, y las células luego se suministran por infusión intravenosamente en el paciente. Para la incubación in vitro o ex vivo de las células de médula ósea o hemocitoblasto de sangre periférica con tioles, una escala de dosis preferida entre 0.1 µM - 5mM. Los métodos de la invención pueden ser útiles para tratar cualesquiera de las condiciones asociadas con números de células sanguíneas reducidas, incluyendo pero no quedando limitados a los estados de falla de médula adquiridos congénitos y síndromes de inmunodeficiencia tales como la anemia Fanconi, neutropenia congenital y MDS, y terapia de cáncer citotóxica.

Administración in vivo de los compuestos dados a conocer en la Sección 5.1. supra se puede llevar a cabo de la siguiente manera. Los grupos de pacientes con falla de médula ósea primero pueden recibir la infusión intravenosa de dosis graduadas de los compuestos a 100 miligramos por metro cuadrado, 200 miligramos por metro cuadrado, 400 miligramos por • metro cuadrado o 740 miligramos por metro cuadrado, a fin de determinar una dosis tolerada máxima. Luego, los pacientes pueden tratarse con la dosis predeterminada tres veces por semana durante tres semanas. Después de un período de descanso de catorce días, los pacientes de pueden evaluar para la respuesta hematológica mediante recuento de células y formación de colonias. Los pacientes que responden pueden continuar el tratamiento hasta que los recuentos de la célula periférica regresen a niveles normales. .3. FORMULACIONES FARMACÉUTICAS Y VÍAS DE ADMINISTRACIÓN Los compuestos identificados se pueden administrar a un paciente humano, por sí, o en composiciones farmacéuticas en donde se mezcla con portadores o excipienes apropiados a dosis para tratar o aliviar una variedad de trastornos, incluyendo, pero no quedando limitados a MDS. Una dosis terapéuticamente efectiva se refiere además a aquella cantidad del compuesto, suficiente para dar por resultado un aumento del recuento de la célula sanguínea en comparación con la condición pre-tratamiento. Las técnicas para la formulación de administración de los compuestos de la solicitud presente se pueden encontrar en "Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., de Easton, PA, última edición. .3.1 VÍAS DE ADMINISTRACIÓN Las líneas de administración apropiadas, por ejemplo, pueden incluir administración oral, rectal, transmucosal, transcutánea o intestinal; suministro parenteral incluyendo inyecciones intramusculares, subcutáneas, intramedulares, así como inyecciones intratecales, intraventriculares directas, intravenosas, intraperitoneales, intranasales o intraoculares. Alternativamente, se puede administrar el compuesto de una manera local en vez de sistemática, por ejemplo a través de la inyección del compuesto directamente en la médula ósea, frrecuentemente, en un depósito o formulación de liberación sustentada. Además, se puede administrar el compuesto en un sistema de suministro de droga enfocado, por ejemplo, en una liposoma y/o conjugado con un anticuerpo específico de la célula. La liposoma y el anticuerpo específico de la célula se enfocará hacia y será absorbido selectivamente mediante las células de la médula ósea. .3.2. COMPOSICION/FORMULACION Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden fabricar de una manera que se conoce por sí, v.gr.,: por medio de procesos convencionales de mezclado, disolución, granulación, preparación de grageas, levigación, emulsionamiento, encapsulación, atrapamiento o liofilización. Las composiciones farmacéuticas para usarse de conformidad con la presente invención por lo tanto pueden formularse de una manera convencional, usando uno o más portadores fisiológicamente aceptables que comprenden excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos, en preparaciones que se pueden usar farmacéuticamente. La formulación apropiada depende de la vía de administración seleccionada. Para inyección, el compuesto de la invención puede formaularse en soluciones acuosas apropiadas tales como estabilizadores fisiológicamente compatibles, por ejemplo la solución de Hanks, solución de ringer, o un estabilizador salino fisiológico. Para administración transmucosal y transcutánea, los agentes de penetración apropiados a la barrera que va a ser penetrada se usan en la formulación. Estos agentes de penetración por lo general se conocen en la técnica. Para la administración oral, los compuestos se pueden formular fácilmente combinando los compuestos activos con los portadores farmacéuticamente aceptables bien conocidos en la técnica. Estos portadores permiten que los compuestos de la invención se formulen como pastillas, pildoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, suspensiones espesas, suspensiones y semejantes para ingerencia oral por un paciente que va a tratarse. Las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden obtenerse en un excipiente sólido moliendo opcionalmente una mezcla resultante y procesando la mezcla de granulos, añadiendo después auxiliares apropiados, si se desea para obtener núcleos de pastillas o grageas. Los excipientes apropiados son en particular materiales de relleno o carga tales como azúcares, incluyendo lactosa, sucrosa, manitol o sorbitol; preparaciones de celulosa tales como, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de papa, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, y/o pirrolidona de polivinilo (PVP) . Si se desea, pueden añadirse agentes de desintegración tales como, pirrolidona de polivinilo reticulada, agar, o ácido algínico o una sal del mismo como alginato de sodio. Se proporcionan núcleos de grageas con recubrimiento apropiados. Para este objeto, pueden usarse soluciones de azúcar concentradas que pueden contener opcionalmente goma arábiga, talco, pirrolidona de polivinilo, gel de carbopol, polietilenglicol, y/o dióxido de titanio, soluciones de laca, y solventes orgánicos apropiados o mezclas de solvente. Las materias colorantes o pigmentos se pueden añadir a los recubrimientos de las pastilas o grageas para identificación o para caracterizar combinaciones diferentes de dosis del compuesto activo. Las preparaciones farmacéuticas que pueden usarse oralmente, incluyen cápsulas de ajuste a presión preparadas de gelagina, así como cápsulas suaves selladas, fabricadas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste a presión pueden contener los ingredientes activos mezclados con un material de relleno o carga tal como lactosa, aglutinantes tales como almidones, y/o lubricantes, tales como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizadores. En las cápsulas suaves, los compuestos activos se pueden disolver o suspender en líquidos apropiados tales como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicoles líquidos. Además, pueden añadirse estabilizadores. Todas las formulaciones para administración oral deben estar en dosificaciones apropiadas para esta administración. Para administración bucal, las composiciones pueden adoptar la forma de pastillas o comprimidos formulados de una manera convencional1. Para administración mediante inhalación, los compuestos para usarse de conformidad con la presente invención se suministran convenientemente en la forma de una presentación de rociadura de aerosol de paquetes presionizados o un nebulizador, con el uso de un impelente apropiado, v.gr., diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dioxido de carbono u otro gas apropiado. En el caso de un aerosol presionizado, la unidad de dosificación se puede determinar proporcionando una válvula para suministrar una cantidad de suministro regulado. Las cápsulas y cartuchos, v.gr., de gelatina para usarse en un inhalador o un insuflador se pueden formular conteniendo una mezcla de polvo del compuesto, y una base de polvo apropiada tal como lactosa o almidón. Los compuestos se pueden formular para administración parenteral mediante inyección, v.gr., inyección de pildora gruesa o infusión continua. Las formulaciones para inyección se pueden presentar en forma de dosificación unitaria, v.gr., en ampolletas o en envases de dosis múltiples, con un agente de conservación añadido. Las composiciones pueden adaptar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. Las ; formulaciones farmacéuticas para adminsitración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua. Además, las suspensiones de los compuestos activos se pueden preparar como suspensiones para inyección aceitosa apropiadas. Los solventes lipofílicos apropiados o vehículos incluyen aceites grasos tales como aceites de ajonjolí, o esteres de ácido graso sintéticos, tales como oleato de etilo o triglicéridos o liposomás. Las suspensiones para inyección acuosas pueden contener substancias que aumentan la viscosidad de la suspensión tales como carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspensión puede contener estabilizadores o agentes apropiados que aumentan la estabilidad de los compuestos para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para constitución con un vehículo apropiado, v.gr., agua exenta de pirógeno estéril, antes de usarse. Los compuestos también pueden formularse en composiciones rectales tales como supositorios o enemas de retención, v.gr., que contienen bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos. Además de las formulaciones anteriormente descritas, los compuestos también pueden formularse como una preparación de depósito. Estas formulaciones de accionamiento prolongado pueden administrarse mediante implantación (por ejemplo subcutánea o intramuscularmente) o mediante inyección intramuscular. De esta manera, por ejemplo, los compuestos se pueden formular con materiales poliméricos o hidrofóbicos apropiados (por ejemplo como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio de iones, o como derivados difícilmente solubles, por ejemplo, como la sal difícilmente soluble. Un portador farmacéutico para los compuestos hidrofóbicos de la invención es un sistema co-solvente que comprende alcohol bencílico, un agente tensioactivo no polar, un polímero orgánico miscible en agua, y una fase acuosa. El sistema de co-solvente puede ser un sistema de co-solvente de VPD. El VPD es una solución de 3 por ciento en peso-volumen de alcohol bencílico, 8 por ciento en peso/volumen del polisorbato 80 del agente tensioactivo no polar, y 65 por ciento en peso/volumen de polietilenglicol 300, que se constituye hasta su volumen en etanol absoluto. El sistema de co-solvente VPD (VPD:5W) consiste de VPD diluido al 1:1 con 5 por ciento de dextrosa en una solución de agua. Este sistema de co-solvente disuelve también los compuestos hidrofóbicos, y por sí produce baja toxicidad durante la administración sistemática. Naturalmente, las proporciones de un sistema de co-solvente se pueden variar considerablemente sin destruir su solubilidad y características de toxicidad. Además, la identidad de los componentes del co-solvente se puede variar: por ejemplo, pueden usarse otros agentes tensioactivos no polares de baja toxicidad en vez del polisorbato 80; el tamaño de la fracción de polietilenglicol se puede variar; otros polímeros biocompatibles pueden reemplazar el polietilenglicol, v.gr., pirrolidona de polivinilo; y otros azúcares o polisacáridos se pueden substituir por dextrosa. Alternativamente, pueden emplearse otros sistemas de suministro para los compuestos farmacéuticos hidrofóbicos. Las liposomas y emulsiones son ejemplos bien conocidos de suministro de vehículos o portadores para drogas hidrofóbicas. Pueden también emplearse ciertos solventes orgánicos tales como dimetilsulfóxido, aún cuando usualmente a un costo de mayor toxicidad. Además, los compuestos se pueden suministrar usando un sistema de liberación sustentada tal como matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen el agente terapéutico. Se han establecido y son bien conocidos varios materiales de liberación sustentada por aquellas personas expertas en la técnica. Las cápsulas de liberación sustentada, dependiendo de su naturaleza química, pueden liberar los compuestos durante unas cuantas semanas hasta más de 100 días. Dependiendo de la naturaleza química y la estabilidad biológica del reactivo terapéutico, pueden emplearse estrategias adicionales para la estabilización de la proteína. Las composiciones farmacéuticas también comprenden portadores de fase sólida o de gel apropiados o excipientes. Los ejemplos de estos portadores o excipientes incluyen pero no se limitan a carbonato de calcio, fosfato de calcio, distintos azúcares, almidones, derivados de celulosa, gelatina y polímeros tales como polietilenglicoles. Muchos de los compuestos estimulantes de la célula progenitora hematopoyética de la invención se pueden proporcionar como sales con contraiones farmacéuticamente . compatibles. Las sales farmacéuticamente compatibles se pueden formar con muchos ácidos, incluyendo pero no quedando limitados a los ácidos clorhídrico, sulfúrico, acético, láctico, tartático, málico, succínico, etc. Las sales tienden a ser más solubles en los solventes acuosos u otros solventes protónicos que son las formas de base libres correspondientes . -3.3 DOSIFICACIÓN EFECTIVA Las composiciones farmacéuticas apropiadas para usarse en la presente invención incluyen composiciones en donde los ingredientes activos están contenidos en una cantidad efectiva para lograr su objeto a que se destinan. De manera más específica, una cantidad terapéuticamente efectiva significa una cantidad efectiva para impedir el desarrollo o para aliviar los síntomas existentes del paciente que se está tratando. La determinación de las cantidades efectivas queda dentro de la capacidad de aquellas personas expertas en la técnica, especialmente en vista de la exposición detallada que se proporciona en la presente. Para cualquier compuesto usado en el método de la invención, la dosis terapéuticamente efectiva puede calcularse inicialmente de los ensayos de cultivo de células. Por ejemplo, se puede formular una dosis en modelos de animal para lograr una escala de concentración circulante que incluye EC50 (dosis efectiva para aumento del 50 por ciento) como se determina en el cultivo de células, es decir, la concentración del compuesto de prueba que logra un estímulo medio-máximo de la duplicación de la célula progenitora de médula como se ensaya mediante la formación de BFU-E, CFU-GEMM, CFU-GM, etc. Esta información se puede usar para determinar de manera más precisa las dosis útiles en seres humanos. Una dosis terapéuticamente efectiva se refiere a aquellas cantidad del compuesto que da por resultado la disminución de síntomas relacionados con el aumento en los números de la célula sanguínea o una prolongación de sobrevivencia en un paciente. La toxicidad y la eficacia terapéutica de estos compuestos se pueden determinar mediante procedimientos farmacéuticos normales en cultivos de células o animales experimentales, v.gr, para determinar la LD50 (la dosis letal hasta 50 por ciento de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en 50 por ciento de la población) . La relación de ls dosis entre los efectos tóxico y terapéutico es el índice terapéutico y se puede expresar como la relación entre LD50 y ED50. Se prefieren los compuestos que exhiben altos índices terapéuticos. Los datos obtenidos de estos ensayos de cultivo de células y estudios animales se pueden usar para formular una escala de dosificación para - usarse en seres humanos. La dosificación de estos compuestos de preferencia queda dentro de una escala de concentraciones de circulación que incluyen la ED50 con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de esta escala dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. La formulación exacta, la vía de administración y la dosificación se pueden seleccionar por el médico individual en vista de la condición del paciente. (Véase v.gr, Fingí y otros, 1975, en "The Pharmacological Basis of Therapeutics", capítulo 1, página 1) . La cantidad de dosificación y el intervalo se pueden ajustar individualmente para proporcionar niveles de plasma del residuo activo que son suficientes para mantener los efectos estimulatorios de la célula progenitora. Las dosificaciones de paciente usuales para administración sistemática varían de 100 a 2000 miligramos por día. Manifestado en términos de áreas superficiales del cuerpo del paciente, las dosificaciones usuales varían de 50 a 910 miligramos por metro cuadrado por día. Los niveles de plasma promedio usuales deben mantenerse dentro de 0.1 a 1000 µM. En casos de administración local o absorción selectiva, la concentración local efectiva de la droga - - puede no estar relacionada con la concentración del plasma. La cantidad de la composición adminsitrada desde luego dependerá del paciente que se está tratando, o del área superficial del cuerpo del paciente, la seriedad del padecimiento, la manera de administración y el juicio del médico que receta. .3.4. EMPAQUETADURA Las composiciones, si se dése, pueden presentarse en un paquete o dispositivo distribuidor, que puede contener una o más formas de dosificación unitarias que contienen el ingrediente activo. El paquete por ejemplo puede comprender una hoja delgada de metal o de plástico, tal como un paquete de ampollas. El paquete o dispositivo distribuidor puede estar acompañado por instrucciones para administración. Las composiciones que comprenden un compuesto de la invención que se formula en un portador farmacéutico compatible también se pueden preparar, colocarse en un envase apropiado, y marcarse para tratamiento de una condición indicada. Las condiciones apropiadas indicada en la etiqueta pueden incluir el tratamiento de la inmunodeficiencia. - 6. EJEMPLO: AMIFOSTINA ES UN ESTIMULADOR DE LAS CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYETICAS Los estudios anteriores han dado a conocer varios compuestos de sulfhidrilo como teniendo efectos estimulatorios in vitro en las células hematopoyéticas (Helgestad, y otros, 1986, blut 52: 1-8; Ash y otros, 1981, Blood, 58: 309-316; Toohey, 1975, Proc. Nati. Acad. Sci.

USA 72: 73-77; y Hankins y Krantz, 1979, J. Biol. Chem. 254: 5701-5707). Estos compuestos, sin embargo, no se ha demostrado que posean un efecto proveedor de crecimiento in vivo y de hecho, algunos de estos compuestos no son apropiados para la administración in vivo debido a su toxicidad. Además, también se ha sugerido que estos compuestos funcionan neutralizando los inhibidores endógenos en el factor de crecimiento que contienen medios acondicionados debido a su actividad anti-oxidante. En contraste, la amifostina se demuestra aquí que estimula el crecimiento de la célula progenitora. Su actividad para proveer el crecimiento de la célula se encontró que era mayor que aquella de las distintas citocinas recombinantes. Asimismo, a diferencia de la glutationa, la amifostina no era tóxica para las células progenitoras de la médula aún a concentración muy elevadas. La amifostina se desarrolló originalmente como un agente citoprotector contra radiación de ionización. Aún cuando se ha demostrado que protege los - - tejidos normales de la citotoxidad de la radiación, de agentes de alquilación y análogos de platina, no se probó como un agente proveedor de crecimiento de células antes de la presente invención. 6.1 MATERIALES Y MÉTODOS Se obtuvieron especímenes de médula ósea mediante aspiración de médula de individuos normales o pacientes con MDS. Las fracciones de la célula mononuclear se aislaron de las muestras de médula heparinizada mediante centrifugación de densidad de Ficoll Hypaque. Las células mononucleares de médula ósea de 2 x 106 se incubaron con WR1065 (el metabolito activo de tiol libre de amifostina) , o amifostina (WR 2721) a distintas concentraciones. La incubación fue durante 15 minutos y luego las células se granularon, se lavaron dos veces en 10 mililitros de un medio de cultivo y se colocaron en placas en metilcelulosa para formación de colonia. Pares fines de comparación, las células también se incubaron con glutationa (GSH) , interleucina-1 (IL-1), interleucina-3 (IL-3) y el factor de crecimiento de mastocitos (MGF) . El crecimiento de colonias de CFU-GM, BFU-E y CFU-GEMM de las células mononucleares de médula se determinó usando una modificación de las técnicas anteriormente descritas (Pike y Robinson, 1970, J. Cell. Physiol. 76: 77-84). Después de la exposición a la droga, - - 1 mililitro de las suspensiones de las células mononucleares en Medio de Dulbecco Modificado con Iscove, 0.8 por ciento de metilcelulosa, 30 por ciento de suero de ternera fetal, eritropoyetina, y 5 por ciento de medio acondicionado con leucocito estimulado con fitohemaglutinina (PHA-LCM) o suero de ternera fetal se colocaron en placas en triplicado en vasijas de Petri de capacidad de 35 mililitros y se incubaron en una atmósfera humedecida con 5 por ciento de CO2 a 37°c Las colonias de granulocito/macrófago (CFU-GM) que contienen 40 células y agrupaciones (de 3 a 40 células) se anotaron después de 7 días usando un microscopio invertido y los resultados expresados como el número de colonia medio por 2 x 106 células se colocaron en placas. Los BFU-E y CFU-GEMM se anotaron después de 14 días de incubación. El número de colonia medio se comparó en presencia o ausencia de amifostina o WR-1065 y se expresó como un porcentaje de control . 6.2 RESULTADOS W2721 y WR1065 (3 miligramos/mililitro) aumentaron la recuperación de CFU-GEMM y BFU-E en la médula normal hasta 7 veces (3 veces mediano) , en donde el estímulo pequeño de CFU-GM se observó (escala: 1.5 a 3 veces) . El estímulo que depende de la dosis del crecimiento de la célula progenitora ocurrió con cada tiol a través de una concentración de 0.1 a 1000 µM; aún cuando GSH era citotóxico a concentraciones más elevadas. Ampliando la exposición de tiol hasta 24 horas, no ridió una mejora adicional de la recuperación de las células progenitoras. En comparación con MGF, y IL-3 (100 unidades por mililitro), la pre-incubación con WR2721 (lOµM) o WR1065 (l.OµM) a concentraciones bajas fisiológicas rindió hasta una recuperación mayor de 3 veces de BFU-E y de CFU-GEMM. Estos descubrimientos indican que WR2721 y WR1065 son estimulantes potentes del crecimiento de célula progenitora hematopoyética, excediendo en potencia las citocinas recombinantes probadas. Los resultados del tratamiento de la médula ósea de cuatro pacientes con MDS se presentan en la Figura 1. Las suspensiones de médula se expusieron ya sea a 100 o 500 micrómetros de amifostina y luego se colocaron en placas. El estímulo del crecimiento de la célula progenitora de médula fue el siguiente: el crecimiento de la colonia deC FU-GEMM se aumentó en aproximadamente 225 por ciento del control en 2 de 4 pacientes; el crecimiento de la colonia de BFU-E se aumentó mediante de 300 a 650 por ciento del control en de 3 de 4 pacientes; el CFEU-GM se aumentó en de 150 a 350 por ciento de control en de 2 a 4 pacientes. De esta manera, los tioles dados a conocer en la presente estimulan el crecimiento de la célula hematopoyética tanto en médula ósea normal como enferma. La presente invención no se limita en alcance mediante las modalidades ejemplificadas, que se destina como ilustracioens de los aspectos individuales de la invención. Desde luego, varias modificaciones para la invención además de aquellas que se han mostrado y descrito en la presente se harán evidentes para aquellas personas expertas en la técnica de la descripción que antecede y los dibujos que se acompañan. Estas modificaciones se destinan a quedar dentro del alcance de las reivindicaciones anexas. Todas las publicaciones citadas en la presente se incorporan mediante referencia en su totalidad.

Claims (16)

REIVINDICACIONES :

1. Un método para estimular las células progenitoras hematopoyéticas que comprende exponer las células hematopoyéticas a una cantidad efectiva de un compuesto de tiol in vitro. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde el compuesto de tiol es una aminotiol que tiene una fórmula

RNH (CnH2n) NH (CnH2n) SPO3H2 en donde R es hidrógeno, un arilo, un acilo o un grupo de alquilo, que contiene de 1 a 7 átomos de carbono y cada n tiene un valor de 2 a 6; o hidratos, sales de metal alcalino y/o sales de halógeno del mismo.

3. El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde el compuesto de aminotiol es Monohidrato de Fosforotioato de Dihidrógeno H2N(CH2)3NHCH2CH2SP?3H2?2? de S-2- (3-aminopropilamino) etilo.

4. El método de conformidad con la reivindicación 2, en donde el compuesto de aminotiol es Trihidrato de Fosforotioato de Dihidrógeno de S-2- (3-aminopropilamino) etilo.

5. El método de conformidad con la reivindicación 1, 2, 3 o 4, en donde el compuesto es un tiol exento desfosforilado o su metabolito.

6. Un método para estimular las células progenitoras hematopoyéticas que comprende administrar a un individuo una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de tiol.

7. El método de conformidad con la reivindicación 6, en donde el compuesto de tiol es un aminotiol que tiene una fórmula RNH (CnH2n) NH (CnH2n) SP03H2 en donde R es hidrógeno, un grupo de arilo, un grupo de acilo o un grupo de alquilo que contiene de 1 a 7 átomos de carbono y cada n tiene un valor de 2 a 6; o hidratos, sales de metal alcalino y/o sales de halógeno de metal alcalino del mismo.

8. El método de conformidad con la reivindicación 7, en donde el compuesto de aminotiol es Monohidrato de Fosforotioato de Dihidrógeno H2N(CH2)3NHCH2CH2SP?3H2 • H20 de S-2- (3-aminopropilamino) etilo.

9. El método de conformidad con la reividicación 7, en donde el compuesto de aminotiol es Trihidrato de Fosforotioato de Dihidrógeno de S-2- (3-aminopropilamino) etilo.

10. El método de conformidad con la reivindicación 6, 7 8 o 9 en donde el compuesto es tiol libre desfosforilado o su metabolito.

11. Un método para tratar el estado de falla de la médula que . comprende administrar a un individuo una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de tiol.

12. El método de conformidad con la reivindicación 11, en donde el compuesto de tiol es un aminotiol que tiene una fórmula RNH (CnH2n) NH (CnH2n) SP03H2 en donde R es hidrógeno, un grupo de arilo, un grupo de acilo o un grupo de alquilo que contiene de 1 a 7 átomos de carbono y cada n tiene un valor de 2 a 6; o hidratos, sales de metal alcalino y/o sales de halógeno del mismo.

13. El método de conformidad con la reivindicación 12, en donde el compuesto de aminotiol es Monohidrato de Fosforotioato de Dihidrógeno H2N(CH2)3NHCH2CH2SP03H2 • H20 de S-2- (3-aminopropilamino) etilo.

14. El método de conformidad con la reivindicación 12, en donde el compuesto de aminotiol es Trihidrato de Fosforotioato de Dihidrógeno de S-2- (3-aminopropilamino) etilo.

15. El método de conformidad con la reivindicación 11, 12, 13 o 14, en donde el compuesto es un tiol libre desfosforilado o su metabolito.

16. El método de conformidad con la reivindicación 11, en donde el estado de falla de la médula es el síndrome mielodisplastico.