MXPA97004017A - Metodo y dispositivo para separar fibrina i del plasma sanguineo - Google Patents

Abstract

Un dispositivo para separar los componentes tal como monómero de fibrina de la sangre por centrifugación alrededor de un eje central, que comprende una primera cámara anular (70) definida por una pared cilíndrica exterior (72) y una pared cilíndrica interior (71) ambas paredes que se acomodan concéntricamente alrededor de un eje de rotación, y por una pared (73) de laparte superior y una pared (74) del fondo, donde la pared del fono se forma por un pistón (55) desplazable dentro de la primera. El dispositivo comprende además, una segunda cámara (75) por abajo de la primera cámara y que tiene comunicación con la primera cámara a través de un primer conducto (4) y que se define por otra pared cilíndrica (72), la pared del fondo (74) de la primera cámara y otra pared (76) del fondo. El dispositivo también comprende una cápsula (45) acomodada en la segunda cámara y que incluye una pluralidad de compartimientos para recibir las posiciones respectivas que promueven la separación.

Description

MÉTODO Y DISPOSITIVO PARA SEPARAR FIBRINA I DEL PLASMA SANGUÍNEO Campo Técnico La invención se refiere a un método para separar un componente, tal como monómero de fibrina del plasma, el método que comprende alimentar plasma a una segunda cámara definida por una pared, después una fracción con polímero de fibrina no reticulado se provoca que se separe mientras que se está adicionando una enzima adecuada.

Antecedentes de la Invención La EP-PS No. 592,242 describe métodos y composiciones para un sellador de fibrina completamente nuevo que comprende poner en contacto un sitio deseado con una composición que comprende el monómero de fibrina y convertir este monómero a un polímero de fibrina concurrentemente con el paso de contacto. El término "fibrina" se define como fibrina I, fibrina II, y/o áes-ßß- iibrina. Adicionalmente, se conoce un método a partir de la solicitud de Patente Norteamericana No. de Serie REF: 24854 0654669 para separar un componente, tal como el monómero de fibrina de la sangre. Este método para separar los componentes de un líquido que contiene varios componentes de pesos específicos variables comprende los pasos de la sangre que se colecta en una primer cámara de un dispositivo, esta cámara que se define por una pared externa e interna axialmente simétricas, de manera substancial. La sangre se somete a una centrifugación por medio de la rotación del dispositivo alrededor del eje de simetría de la cámara para establecer una entrecara concéntrica entre los componentes de la sangre. Al menos uno de los componentes de la sangre tal como el plasma se transfiere subsecuentemente a una segunda cámara en el dispositivo preferentemente por medio de la reducción del volumen de la primera cámara durante una centrifugación continua del dispositivo. La pared interna axialmente simétrica de manera substancial se proporciona en la primera cámara para asegurar que toda la sangre se someta a una rotación centrífuga necesaria para la separación. Esta pared interna es de un radio adaptado a la velocidad deseada de rotación tal que se proporcione suficiente fuerza centrifuga en todas las ubicaciones de la cámara para mantener la separación concéntrica.

En la segunda cámara, se separa del plasma una fracción con polímero de fibrina no reticulado, por medio de una enzima adecuada y se vuelve a disolver subsecuentemente en el monómero de fibrina y se transfiere a una jeringa a través de un filtro al reducir el volumen de la segunda cámara. Sin embargo, la salida en la separación de un componente, tal como monómero de fibrina de la sangre, solo por medio de la filtración en un dispositivo del tipo anterior no proporciona un resultado satisfactorio. Esto es debido principalmente al hecho que es difícil asegurar una separación satisfactoria de la fracción que contiene monómero de fibrina en la segunda cámara, y por consiguiente, se pierde una cantidad relativamente alta del contenido en la sangre de la fibrina I durante la segunda transferencia de una fracción de fluido de la segunda cámara a la primera cámara durante el paso siguiente del método. También, en el método anterior del monómero de fibrina, el tratamiento descrito anteriormente del fibrinógeno dentro del plasma con una enzima adecuada produjo el polímero de fibrina no reticulado en la forma de una masa en gel gruesa en el fondo de la segunda cámara. Para proporcionar la solución deseada dé monómero de fibrina, se requirió una cantidad significante de amortiguador de redisolución combinado con agitación substancial. Esto dio por resultado varias desventajas. Primero, los métodos preferidos de monómero de fibrina, por ejemplo, para el uso como un sellador de fibrina como en EP 592,242, requirió soluciones concentradas de monómero de fibrina, y la gran cantidad de amortiguador de redisolución o solvente requerido para disolver la masa de gel proporcionó soluciones diluidas que no trabajaron bien. Además, la agitación substancial requerida para disolver la masa de gel en la solución del monómero de fibrina puede provocar dañó al dispositivo y a la fibrina misma.

Breve descripción de la Invención Por lo tanto, un objeto de la invención es proporcionar un método que permita una separación mejorada de un componente tal como monómero de fibrina de la sangre. Esta invención incluye un método que proporciona la separación de polímero de fibrina no reticulado de una fracción de plasma en una cámara cilindrica, esta separación que se lleva a cabo durante la centrifugación, por lo cual el polímero de fibrina no reticulado se deposita en la pared exterior de la cámara, posteriormente la fracción de fluido restante colectada en la cámara se remueve de la cámara, y en que la fracción con el polímero de fibrina no reticulado que permanece en la cámara depositado sustancialmente en la pared se hace que se disuelva por la adición de un solvente y por la agitación centrífuga. Puesto que el tratamiento del plasma con la enzima se lleva a cabo durante la centrifugación continua, la fuerza centrífuga en el polímero de fibrina no reticulado, resultante proporciona que se precipite como una película de gel delgada que se pega substancialmente a las paredes circunferenciales de la cámara. El líquido de plasma restante se deposita en el fondo de la cámara cuando separa la centrifugación y se puede remover por cualquier medio conveniente. La solución deseada de monómero de fibrina se proporciona posteriormente al introducir una solución amortiguadora, adecuada, de redisolución en la cámara y al someter el amortiguador en la cámara revestida con gel a la agitación centrífuga. Este método proporciona ventaja sobre los métodos anteriores. Primero, la redisolución del gel no reticulado por la solución amortiguadora es extremadamente eficiente debido en parte a la gran área superficial del mismo volumen del gel de fibrina comparada a la masa de gel de fibrina proporcionada en los métodos anteriores. Por consiguiente, el gel se puede disolver con pequeñas cantidades de amortiguador de redisolución dando por resultado una solución de monómero de fibrina adecuadamente concentrada. Además, la acción de la agitación centrífuga en la solución amortiguadora dentro de la cámara revestida con gel es un método completamente benigno que no provoca daño al equipo o al producto del monómero de fibrina. La solución de monómero de fibrina de alta concentración resultante está en el intervalo de 10-30 mg de monómero de fibrina por ml de solución y en forma preferente aproximadamente 25 mg/ml. Esta invención incluye un método que comprende alimentar sangre preferentemente en la presencia de un anticoagulante a una primera cámara anular en un dispositivo, donde la cámara anular se define por una pared exterior cilindrica y una pared interior cilindrica, ambas paredes que se extienden coaxialmente alrededor de un eje común, así como por una pared de la parte superior y una pared del fondo, donde la pared de la parte superior o la parte del fondo se forma por un cuerpo de pistón desplazable dentro de la primera cámara, método que comprende además una centrifugación del dispositivo alrededor del eje común para separar sustancialmente la sangre en una fracción celular en una fracción de plasma seguido por la fracción de plasma resultante que se transfiere mientras que se ve influenciada por el cuerpo del pistón a una segunda cámara definida por una pared cilindrica exterior, que se extiende coaxialmente con el eje común, con lo cual una fracción con el polímero de fibrina no reticulado se hace que se separe en la segunda cámara mientras que se está adicionando una enzima adecuada. De acuerdo con la invención, este método se caracteriza en que la fracción de plasma que contiene fibrinógeno se somete a la enzima durante la centrifugación, de modo que el polímero de fibrina no reticulado, resultante se deposita en la pared exterior cilindrica de la segunda cámara, posteriormente la fracción de fluido colectada de fondo de la segunda cámara se transfiere mientras que se ve influenciada por el cuerpo del pistón a la primera cámara, y en que la fracción con el polímero de fibrina no reticulado que permanece en la segunda cámara depositado sustancialmente en la pared cilindrica se hace que se disuelva por la adición de un solvente por la agitación centrifugación. Posteriormente se puede remover la enzima, si se desea, y la solución de monómero de fibrina, producida de esta manera se transfiere a cualquier recipiente receptor, deseado . Por consiguiente, se mantiene fácilmente una condición aséptica para colectar la solución. Después de que se ha redisuelto del monómero de fibrina, se puede transferir a un recipiente receptor, tal como una jeringa para el uso adicional como se describe en la técnica anterior. Antes de la transferencia, la enzima se puede remover por cualquier medio conveniente. Un dispositivo para separar componentes de un fluido por medio de la centrifugación alrededor de un eje central de rotación comprende una primera cámara anular definida por una pared cilindrica exterior y una pared cilindrica interior, ambas paredes que se acomodan concéntricamente alrededor del eje de rotación, así como por una pared de la parte superior y una pared del fondo, donde la pared del fondo se forma por un cuerpo de pistón desplazable dentro de la primera cámara. El dispositivo comprende además una segunda cámara que tiene comunicación con la primera cámara a través de un primer conducto donde la segunda cámara se define por una pared cilindrica exterior acomodada concéntricamente alrededor del eje de rotación y por el cuerpo de pistón y una pared del fondo, donde la segunda cámara se adapta para ser colocada por abajo de la primera cámara durante la centrifugación, y donde el dispositivo también comprende un medio de alimentación sanguínea para alimentar sangre a la primera cámara y un medio de alimentación de composición para alimentar la composición que promueve la separación así como un medio de recepción para la conexión de al menos un recipiente receptor de líquido, donde el medio receptor se comunica con la segunda cámara a través de un segundo conducto. En una modalidad preferida, la varilla de pistón comprende la pared inferior de la primera cámara. Este dispositivo inventivo para llevar a cabo el método de acuerdo con la invención se caracteriza en que el primer conducto comprende al menos un canal que se extiende entre una abertura en la pared de la parte superior de la primera cámara y una abertura en la pared del fondo de la segunda cámara. Como resultado, se proporciona un dispositivo que es relativamente simple y que independiente de la posición del pistón asegura una transferencia fácil y rápida de las fracciones en cuestión desde una cámara a la otra cámara, y especialmente desde la fracción de fluido desde la segunda cámara a la primera cámara después de la separación de la fracción que contiene fibrina I. Esto último es especialmente debido al hecho que el fluido se concentra automáticamente en el fondo de la segunda cámara cuando se para la centrifugación, con lo cual se puede transferir fácilmente a la primera cámara por el pistón que se mueve, por ejemplo, al comprimir el aire dentro de la segunda cámara para forzar el fluido hacia arriba hacia el canal de transferencia. De acuerdo con la invención, es particularmente preferido que el canal se extienda a través del interior de la pared cilindrica exterior tanto en la primera como la segunda cámara con el resultado que el dispositivo es particularmente simple y fácil de fabricar. De acuerdo con la invención, la abertura de uno o más canales en la pared del fondo de la segunda cámara se acomoda preferentemente céntricamente en la cámara en unión con una depresión formada por la pared del fondo. Como resultado, la fracción de fluido en cuestión se guía fácilmente y de manera rápida directamente a la abertura de entrada del canal. Además, se puede formar de manera alternativa de acuerdo con la invención cada canal por un tubo que se extiende rectilíneamente a través del cuerpo del pistón y que se asegura en los extremos en la pared de la parte superior de la primera cámara y la pared del fondo, respectivamente, de la segunda cámara donde se comunica con las porciones de canal que terminan en la cámara respectiva. De acuerdo con la invención, la primera y la segunda cámara pueden comprender de una manera relativamente simple una pared cilindrica exterior común formada por un cilindro exterior y un cilindro interior que se encajan herméticamente entre sí y que definen entre ellos un canal que se extiende axialmente, y los cilindros se pueden terminar en un extremo por una pared terminal que comprende una abertura que permite el paso de una varilla de pistón conectada al cuerpo de pistón, cuerpo de pistón que forma la pared del fondo de la primera cámara y separa la primera cámara de la segunda cámara, y donde el canal se extiende adyacente a las paredes terminales por extremo de los cilindros a una abertura inmediatamente adyacente, o cerca, de la varilla del pistón. Los métodos de la presente invención tratan de procesos mejorados para separar y aislar un componente sanguíneo individual o una solución que contiene este componente. Sin embargo, el presente método es adecuado para cualquier procedimiento adaptable a una centrífuga cilindrica, en donde se trata una primera solución con uno o más catalizadores o reactivos durante la centrifugación para depositar una forma intermedia del producto deseado sobre las paredes de la centrífuga, y en donde la forma intermedia se redisuelve posteriormente con una solución de redisolución apropiada en la presencia de agitación centrifuga para proporcionar una concentración deseada del producto deseado en esta solución de redisolución. Otros procedimientos sanguíneos que podrían beneficiarse de este método incluyen, pero no se limitan al aislamiento de cualquier componente sanguíneo, tal como plasma rico en plaquetas, concentrado de plaquetas, fibrinógeno crioprecipitado, otras proteínas dentro del plasma tal como trombina, fibronectina y similares. En forma preferente, la sangre es un donador individual y en la forma más preferente la sangre es de la misma persona a quien se administrará el componente sanguíneo. Mientras que los presentes métodos se describen posteriormente en la presente en términos de producir una solución del monómero de fibrina, el alcance de la invención como se apreciará por aquellos expertos en la técnica, no se debe limitar de este modo . Como se usa en la presente, el término "agitación centrífuga" se refiere al movimiento del dispositivo donde se introduce la solución amortiguadora de redisolución para redisolver el producto intermedio tal como el gel de polímero de fibrina no reticulado, de las paredes de la cámara exterior. Este movimiento o agitación centrífuga puede incluir centrifugación para asegurar que toda el área superficial expuesta del gel se someta a la solución de redisolución, e incluye preferentemente una centrifugación seguida por rotaciones de paro y arranque en la misma dirección y/o rotaciones de paro y arranque en direcciones opuestas. Las agitaciones centrífugas típicas incluyen, pero no se limitan a, vueltas de 5-30 segundos, preferentemente vueltas de 5-10 segundos, a 2,000-5,000 RPM en ciclos hacia adelante/hacia atrás, repetidos durante cualquier duración deseada de tiempo. En los presentes métodos, se prefieren vueltas de 5-10 segundos a aproximadamente 3,000 RPM en ciclos hacia adelante/hacia atrás, repetidos durante 1-2 minutos. Como se menciona anteriormente, esto se puede proseguir por un giro algo más largo, por ejemplo, 20 segundos o más para distribuir inicialmente el solvente. El término "fibrina" como se usa en la presente se refiere a fibrina I, fibrina II o des ßß fibrina. Como se discute anteriormente, el presente dispositivo incorpora al menos un canal capaz de transferir fluidos dése el fondo de la segunda cámara en un dispositivo como se define en la presente a la primera cámara. Esta característica ofrece una ventaja distinta al facilitar el método preferido de esta invención. El dispositivo descrito anteriormente y método requiere que en la formación de la masa de gel de polímero de fibrina no reticulado, el pistón se baje para forzar el plasma restante para que fluya a través del conducto que se extiende a través de la placa del pistón y hasta la primera cámara. El pistón necesita ponerse en contacto con el líquido en el método anterior. Puesto que el gel depositado en las paredes de la segunda cámara en el presente método, el pistón no se puede bajar suficientemente para hacer contacto con el fluido de plasma restante. Al proporcionar el canal que se extiende desde el fondo de la segunda cámara a la primera cámara y al proporcionar una entrada atmosférica hasta la segunda cámara, el pistón se puede bajar justo ligeramente y presurizar la segunda cámara suficientemente para forzar el fluido de plasma hacia arriba hacia el canal y hasta la primera cámara. Como se discute anteriormente, se puede proporcionar uno o una pluralidad de canales que pueden extenderse a través de las cámaras o a través de la pared exterior. Una manera preferida de proporcionar un canal en la pared exterior es formar el dispositivo de dos cilindros, uno que se encaja de una manera hermética dentro del otro. Al proporcionar una o más ranuras ya sea en el interior de un cilindro exterior o el exterior de un cilindro interior, se proporcionan uno o más canales. El presente dispositivo es un dispositivo automatizable, cerrado, individual, capaz de convertir la sangre completa o entera en los componentes sanguíneos derivados de si mismos, preferentemente componentes derivados de sí mismos, útiles por ejemplo como selladores de fibrina. El dispositivo se usa convenientemente dentro de una unidad de impulsión que puede asegurar y alinear el dispositivo, y hacer girar el dispositivo alrededor de su eje como se requiere y accionar los pistones y las varillas de empuje, lo cual se entenderá que facilita el movimiento del pistón, etc., desde la descripción en la presente.

Breve Descripción de los dibujos Las modalidades preferidas del presente dispositivo y métodos ahora se describirán con referencia a los dibujos, en los cuales La Figura 1 es una vista seccional, axial a través de una modalidad preferida de un dispositivo de acuerdo con la invención, y La Figura 2 ilustra una segunda modalidad del dispositivo de acuerdo con la invención.

La Figura 3 ilustra una tercera modalidad del dispositivo de acuerdo con la invención.

Descripción de la modalidades preferidas de la presente invención El dispositivo de la Figura 1 de acuerdo con la invención está constituido de partes que presentan substancialmente una simetría de rotación y que implican que el dispositivo se puede colocar en un aparato de centrifugación de una manera fácil conocida per se para ser centrifugado alrededor de un eje central 1. En esta Figura 1, una modalidad preferida del dispositivo comprende un recipiente exterior 2 y un recipiente interior 3 que son tal que se encajan completamente entre sí y colindan donde quiera cercanamente entre sí desde la porción donde se proporciona un canal 4 intermedio que se extiende axialmente. El canal 4 se proporciona por una ranura formada en el recipiente interior 3. Los dos recipientes 2 y 3 comprenden sus porciones 5 y 6 de la parte superior, respectivas, respectivamente, que definen una abertura 7 central que permite el paso de una varilla 8 de pistón. Alrededor de la abertura 7, los dos recipientes comprenden las partes 9 y 10, que se extienden axialmente, respectivamente, que se extienden cercanas a la varilla 8 de pistón, hueca en una dirección lejos del interior de los recipientes. El recipiente exterior 2 colinda con la varilla del pistón hueca a lo largo de un reborde 11 que se extiende radialmente, corto proporcionado con una depresión 12 que recibe un anillo 13 de sello. Como se ilustra en la Figura 1, el canal 4 continua entre el recipiente interior y el recipiente exterior toda la vía desde las paredes cilindricas exteriores del recipiente interior y el recipiente exterior a lo largo de las porciones 5 y 6 de la parte superior y las partes 9 y 10 axiales a la abertura inmediatamente por abajo del anillo 13 de sello en la abertura 7. La parte axial 10 del recipiente 3 interior que colinda con la abertura 7 se dimensiona de modo que exista un paso estrecho, pero libre hacia el interior de los repientes 2 y 3 alrededor de la varilla 8 de pistón, hueca. El recipiente exterior 2 comprende una parte cilindrica de un diámetro uniforme, comparar Figura 1. Hacia abajo, cuando se ve con relación al dibujo, esta parte continua hasta una parte cilindrica 14 de un diámetro ligeramente mayor a través de una parte 15 de transición, corta que forma una superficie 16 interior, frustocónica. El recipiente interior 3 termina en la ubicación donde la parte 15 de transición el recipiente exterior 2 continua hasta la parte 14 cilindrica de un diámetro mayor. El extremo inferior de recipiente interior 3 comprende una superficie exterior 17 de una forma frustocónica que iguala la forma de la superficie 16 frustocónica en el lado interior del recipiente exterior 2. Se proporcionan un disco 19 y 20, exterior e interior, anulares, respectivamente, inmediatamente por abajo del extremo inferior del recipiente interior 3, que termina en la superficie radial 18. Estos discos colindan cercanamente entre sí, aparte del hecho que definen entre ellos un canal 21 que se extiende en un plano axial desde una abertura central 22 y hacia el lado interior del recipiente exterior 2, donde el canal 21 se comunica con el canal 4 entre el recipiente exterior 2 y el recipiente interior 3 a través de la parte 23 que se extiende axialmente. El canal 21 y la parte 23 de canal axial se proporcionan adecuadamente por medio de una ranura en el lado del disco interior 20 que da al disco exterior 19. Los dos discos 19 y 20 se forman con este curso oblicuo que comprenden sustancialmente superficies frutocónicas interior y exterior, comparar Figura 1, y se inclinan de este modo hacia abajo hacia la abertura central 22. La Figura 1 también muestra que el disco interior 20 comprende una superficie radial 24 que colinda con la superficie radial 18, adyacente, en el recipiente interior 3. La superficie radial 24 del disco 20 interior se proporciona con una depresión 25 para recibir un anillo 26 de sello. Los dos discos 19 y 20 se mantienen en su posición en unión a tope contra la superficie radial 18 del recipiente interior 3 por medio de una cubierta 27 que cierra el recipiente exterior en una dirección hacia abajo. Esta cubierta 27 cubre una parte 28 en forma de manguito, circunferencial adaptada para colindar cercanamente con el lado interior del recipiente exterior 2, al cual se asegura de una manera adecuada, tal como por medio de una acción de cierre de broche por el acoplamiento entre una costilla 29 circunferencial en el lado exterior del manguito 28 y una ranura circunferencial 30, correspondiente en el lado interior del recipiente exterior 2. Se asegura una conexión del sello por medio de un anillo 31 de sello en una depresión 32 circunferencial en la periferia exterior del disco exterior 19. La cubierta 27 comprende además una pared 32 relativamente delgada, adaptada para formar el fondo inferior del dispositivo en la posición mostrada en la Figura 1. Esta pared 32 se extiende a lo largo sustancialmente de un curso paralelo al disco 19 y 20, exterior e interior, de una manera tal que la pared 32 se extiende desde el lado interior del manguito 28 en una porción adyacente de los discos 19 y 20 y hacia abajo hacia una porción sustancialmente en un nivel con la orilla 33 inferior del recipiente exterior 2. A fin de reforzar esta pared 32 relativamente delgada, se proporciona una costilla 34, radial, de refuerzo a intervalos regulares, solo una de las costillas que aparece en la Figura 1. Esta costilla 34 se forma parcialmente con una porción colocada fuera de la pared 32 y parcialmente con una porción colocada dentro de la pared 32, comparar Figura 1. Esta última porción se designa, con el número de referencia 35 y s forma tal que colinda con el lado del fondo del disco exterior 19 con el resultado que ayuda en el mantenimiento de los discos 19 y 20 en una posición confiable. Un medio 36 de división se aprieta entre el disco exterior 19 y la cubierta 27. Este medio 36 de división comprende un tramo 37 de tubo central. Este tramo de tubo se monta en una espiga 38 que se proyecta axialmente hacia adentro y que se forma integral con la pared 32 de la cubierta 27. Este tramo 37 de tubo se forma integral con un disco 39 de pared circunferencial que se extiende hacia afuera desde el tramo 37 de tubo de una manera tal que se inclina inicialmente hacia abajo ligeramente hacia la pared 32 de la cubierta 27, después de lo cual se extiende a lo largo de un curso axial corto para continuar en un curso que se extiende substancialmente paralelo a la pared 32 de la cubierta. El disco 39 de pared termina en una periferia 40 que se extiende radialmente, corta, que descansa en un resalto 41 en porciones 35 de costilla en la cubierta 27. Se aplica una unidad 42 de filtro anular entre la periferia 40 exterior del disco 39 de pared y el lado de fondo del disco 19 exterior. Esta unidad 42 de filtro anular colinda con una superficie 43 formada radialmente, de manera substancial en el lado exterior, adyacente del disco exterior 19. Un dispositivo y método que emplean este filtro anular son el objeto de una solicitud copendiente presentada concurrentemente con la presente titulada "Centrige with Annular Filter . A fin de asegurar una estabilidad en el medio 36 de división, se acomodan adicionalmente entre el tramo 37 de tubo y el disco 39 de pared. El sistema de distribución de reactivos de la presente invención comprende una cápsula designada por el número de referencia general 45, que se asegura en el extremo opuesta de la cubierta 27 del tramo 37 de tubo del medio 36 de división. Esta cápsula es adecuada para librar selectivamente agentes en la segunda cámara 75. Esta cápsula comprende un tramo 46 de tubo alargado formado integral con un anillo 47 radial y que lleva dos anillos 48 y 49 radiales, adicionales. Estos anillos 48 y 49 radiales se aseguran por medio de un ajuste de interferencia en su lado respectivo del anillo 47 fijo. Los anillos 48 y 49 sueltos se acomodan en su distancia respectiva del anillo 47 fijo por medio de resaltos 50 y 51 circunferenciales, respectivamente, en el tramo 46 de tubo. Los tres discos 47, 48 y 49 son todos del mismo diámetro exterior y llevan a lo largo de sus periferias respectivas un manguito 52 montado de manera desplazable, circunferencial. Como se ilustra en el dibujo, el disco 49 inferior colinda con el extremo superior del tramo 37 de tubo del medio 36 de división, con lo cual se determina la colocación de la cápsula 45 en la dirección axial. Esta posición o colocación se determina adicionalmente de una manera tal que cuando se desplaza en la dirección axial, el manguito 52 desplazable de la cápsula entra en un acoplamiento de sello por su extremo inferior, comparar el dibujo, con el borde 53 más interior del disco 19 exterior en la abertura central 22. En esta posición o colocación del manguito 52, existe aún una comunicación entre el espacio del disco interior 20 que circunda el manguito 52 y la abertura de entrada al canal 21 entre el disco exterior 19 y el disco interior 20. La longitud axial del manguito 52 desplazable se adapta tal que el acoplamiento con el disco exterior 20 ocurra antes del extremo superior, comparar el dibujo, del manguito 52 desacopla el anillo 47 fijo durante el desplazamiento hacia abajo, axial del manguito 52. El diámetro interior del manguito 52 también se adapta al diámetro exterior de la parte que se extiende axialmente del disco 39 de pared del medio 36 de división de una manera tal que un desplazamiento hacia abajo, continuo del manguito 52 hacia la cubierta 27 provoca que el manguito 52 se acople de manera fija al medio 36 de división una vez que se ha desacoplado el disco 19 exterior. La longitud de la parte axial del medio 36 de división corresponde también a la longitud axial del manguito 52 de una manera tal que el manguito 52 en la posición o colocación más inferior se recibe sustancialmente de manera completa por el medio 36 de división. Como se ilustra en el dibujo, la varilla 8 de pistón, hueca comprende un pistón 55 circunferencial dentro del recipiente exterior 2 y el recipiente interior 3, el pistón 55 que acopla herméticamente el lado interior del recipiente interior 3 a través de un anillo 56 de sello. Se forma un acoplamiento Luer 57 dentro de la varilla hueca del pistón para recibir una jeringa 58 convencional con un tapó 59 de acción de pistón para actuar en el contenido de la jeringa 58. El acoplamiento 57 se forma substancialmente como una longitud o tramo que comunica con una abertura central 61 en el pistón 55 a través de una porción 60 frustocónica. El tramo del tubo 57 se proporciona con una tela 62 que se proyecta radialmente hacia adentro para dirigir el fluido que deja la jeringa 58 lejos de una ruta axial y rodear de este modo la longitud del tubo 46 por abajo del mismo dentro de la cápsula 45. Este último tramo de tubo 46 es de una longitud tal y dimensiones tales que se puede acoplar herméticamente con la longitud o tramo del tubo 57 dentro de la varilla 8 de pistón, hueca cuando el pistón 55 está en su posición más inferior cerca de la cubierta 27. A fin de promover la conexión hermética anterior, el lado interior del tramo del tubo 57 se forma con un diámetro que disminuye gradualmente en el extremo adyacente al pistón 55. Se forma una pestaña 63 que se proyecta axialmente integral con el pistón 55 alrededor de la abertura central 61 del pistón. La pestaña 63 se forma con un diámetro tal de una longitud tal que por un desplazamiento adecuado del pistón 55 puede activar el desplazamiento anterior del manguito 52 desplazable de la cápsula 45 en las posiciones en las cuales se acopla la orilla 53 interior de la abertura central 22 a través de los dos anillos 19 y 20 seguido por un acoplamiento del medio 36 de división. Un medio 64 de sello de labio, anular, resiliente se asegura como se indica alrededor del pistón hueco en la parte superior dentro de los recipientes 2 y 3, comparar Figura 1. Este medio 64 de sello de labio se adapta para prevenir un paso indeseado del fluido desde el interior de los recipientes 2 y 3 hacia el canal 4, pero permite el paso del fluido cuando se aplica una fuerza a través del pistón 55. Como se indica en la parte superior de la Figura 1, se proporciona una conexión a una manguera 65 a través de una abertura 66 en el recipiente exterior e interior 2 y 3, respectivamente. Esta conexión se no conoce y por lo tanto no se muestra en mayor detalle, pero permite una interrupción de la conexión a la manguera cuando se desee. Además, se proporcionar una abertura de escape de aire con un filtro adecuado de una manera convencional y por lo tanto ni se muestra ni se describe en mayor detalle. Se proporciona un pasaje o paso 69 desde el área entre el medio 36 de división y la cubierta 27 y toda la vía hacia arriba a través del interior de la longitud del tubo 37 del medio 36 de división y a través del interior de la longitud del tubo 46 de la cápsula 45. Este pasaje o paso 69 permite una transferencia del fluido hacia la jeringa 58 desde el área donde esta última longitud del tubo 46 se acopla a la longitud del tubo 57 en el interior de la varilla 8 de pistón. El pasaje o paso 66 se proporciona en la porción más inferior de la espiga 38 en la cubierta 27 por la espiga 38 que se forma con una superficie axial, plana, la espiga que es de una sección transversal sustancialmente circular. Como resultado, se proporciona un espacio entre la espiga y la porción adyacente del lado interior de la longitud del tubo 37. Se proporciona un área 67 e inmediatamente por arriba de la espiga 38 donde el medio de división 36 presenta un diámetro interior ligeramente reducido. De esta manera, es posible colocar un pequeño filtro 68 inmediatamente por arriba de esta área, comparar Figura 1, con lo cual el fluido debe pasar el filtro antes de que entre a la longitud del tubo 46 de la cápsula 45. El dispositivo descrito comprende una primera cámara 70 anular definida hacia adentro por el pistón 8 hueco que forma una pared 71 interna, cilindrica, y hacia afuera por una pared 72 exterior, cilindrica formada por el recipiente exterior 2 y el recipiente interior 3. Cuando está en la posición de uso convencional, comparar Figura 1, la cámara anular 70 se define hacia arriba por una pared 73 de la parte superior formada por el fondo 5 y 6, respectivamente, del recipiente exterior 2 y el recipiente interior 3. Hacia abajo, la cámara anular 70 se define por una pared 74 del fondo formada por el pistón 55. Se define una segunda cámara 75 por abajo del pistón 55, la segunda cámara hacia abajo que se define por la misma pared 72 exterior, cilindrica como la primera cámara 70. Hacia abajo, la segunda cámara 75 se define por una segunda pared 76 del fondo formada por el disco exterior 19 y el disco interior 20. La cápsula 45 se acomoda centralmente en el interior de la segunda cámara 75. Se proporciona una tercera cámara 77 por abajo de la segunda pared 76 del fondo, y esta tercera cámara 77 se define por el medio 36 de división y la unidad 42 de filtro anular. Además, esta tercera cámara 77 se comunica con la segunda cámara 75 a través del pasaje o paso formado por la abertura central 22 en el disco exterior 19 y el disco interior 20. Finalmente, una cuarta cámara 78 se proporciona por abajo del medio 36 de división, esta cuarta cámara 78 que se define hacia abajo por la pared 32 de la cubierta 27 y adicionalmente por porciones del manguito 28 de la cubierta 27 y el lado del fondo del disco exterior 19. Como se describe anteriormente, el dispositivo descrito es principalmente adecuado para la separación de un componente, tal como monómero de fibrina a partir de la sangre, y para este propósito, la segunda cámara, 75, y preferentemente la cámara superior 80 de la cápsula 46, se rellena por adelantado con una enzima adecuada, tal como batroxobina. Como se entiende a partir de EP-PS No. 595,242, se puede ampliar cualquier enzima similar a trombina. Estas enzimas incluyen trombina en sí mismas o cualquier otro material con una actividad similar, tal como Ancrod, Acutina, Veniimina, Asperasa, Botropasa, Crotabasa, Flavorxobina, Gabonasa, y la preferida Batroxobina. La batroxobina se puede enlazar químicamente a la biotina, que es una sustancia sintética que permite que la batroxobina se capture de una manera convencionalmente conocida por medio de la avidina en una composición de avidina-agarosa. Por consiguiente, se encuentra avidina-agarosa en la cámara 81 más inferior de la cápsula. Tanto la composición de biotina-batroxobina y la composición de avidina-agarosa son relativamente fáciles de rellenar en las cámaras 80 y 81 respectivas dentro de la cápsula 45 antes de que la cápsula se coloque dentro del dispositivo.

Finalmente, se arregla una jeringa 58, la jeringa que contiene un amortiguador de pH 4 preparado a partir de un acetato diluido con ácido acético. La jeringa 58 se usa más tarde para recibir la solución de monómero de fibrina deseada. También se puede usar cualquier amortiguador conocido de la técnica anterior. El agente amortiguador de redisolución puede ser cualquier solución amortiguadora acida preferentemente aquellas que tienen un pH entre 1 y 5. Los ejemplos adecuados incluyen ácido acético, acidó succínico, ácido gluconórico, ácido cistéico, ácido crotónico, ácido itacónico, ácido glutónico, ácido fórmico, ácido aspártico, ácido adípico, y sales de cualquiera de éstos. El ácido succínico, ácido aspártico, ácido adípico y sales de ácido acético, por ejemplo, acetato de sodio se prefieren. También, la solubilización se puede llevar a cabo en un pH neutral por medio de un agente cautrópico. Los agentes adecuados incluyen urea, bromuro de sodio, clorhidrato de guanidina, KCNS, yoduro de potasio y bromuro de potasio. Las concentraciones y volúmenes de estos amortiguadores ácidos o ese agente caotrópico son como se describen en EP-PS No. 592,242.

Durante o inmediatamente después del suministro de la sangre, la varilla 8 del pistón se empuja hacia el interior del dispositivo por lo cual el manguito 52 desplazable de la cápsula 45 se mueve hacia abajo en un acoplamiento de sello en el pasaje de paso a través de la pared 76 del fondo y hacia la segunda cámara 77. Como resultado, se abre simultáneamente el acceso a la composición de biotina-batroxobina dentro de la cámara 80 más superior de la cápsula. Alternativamente, la cámara 80 más superior se puede abrir después que la fracción de plasma se ha transferido a la segunda cámara. Cuando el dispositivo está listo para el uso, se alimenta una muestra de sangre en una primera cámara a través de una aguja no mostrada y la manguera 65 de una manera convencional, la muestra de sangre que se mezcla con un anticoagulante también de una manera convencional. Durante la limitación de la sangre a través de la manguera 65 y la abertura 66 en el interior en la primera cámara 70, se remueve el aire de la cámara de una manera convencional. Después de la alimentación de la sangre, se remueve la manguera 65, y la abertura 66 se cierra herméticamente. Subsecuentemente, el dispositivo con la sangre se coloca en una centrífuga que ayuda inter alia en la compresión hermética de las varias partes. La centrífuga provoca que el dispositivo gire alrededor del eje de rotación 1. Como resultado de la centrifugación, la sangre se separa en la primera cámara 70 en una fracción de plasma que se asienta radialmente dentro de la porción restante de la sangre, esta porción restante que contiene las células sanguíneas rojas y las células sanguíneas blancas. Como se describe en EP-PS No. 592,242, las plaquetas pueden estar presentes en cualquier fracción, como se desee, al variar la velocidad y tiempo de centrifugación. Las velocidades de centrifugación que usan el presente dispositivo están típicamente en el intervalo de 2,000-10,000 RPM y se pueden variar como se requiera en diferentes puntos dentro del proceso y como se describe en la presente y en EP 654 669. Cuando la entrecara entre el plasma y la porción restante de la sangre se ha estabilizado, es decir, cuando se termina la separación, se inicia una reducción del volumen de la primera cámara 70 por la varilla 8 del pistón y en consecuencia el pistón 55 se jala. Como resultado, primero pasa una posible capa interior de aire a través de los canales 4 y 21 hacia la segunda cámara 75, y un movimiento adicional del pistón 55 implica que también el plasma pasa a la segunda cámara 75. El movimiento del pistón 55 se para cuando la capa completa de plasma se ha forzado hasta la segunda cámara 75, es decir, cuando la entre cara entre la fracción de plasma y la porción restante de la sangre ha alcanzado la pared interior 71 de la primera cámara 70. Si la cámara más superior 80 no se ha abierto ya, esto debe ser llevado a cabo ahora, de modo que se libere la batroxima. En la segunda cámara 75, la fracción de plasma llega a estar en contacto con la enzima bactroxobina con el resultado de que el monómero de fibrina, que polimeriza inmediatamente a un monómero de fibrina no reticulado, se libera de la fracción de plasma. Este proceso se realiza mientras que el dispositivo se está centrifugando continuamente con el resultado que el polímero de fibrina se separa eficientemente de la porción resultante de la fracción de plasma, este polímero de fibrina que se forma por la reacción de la composición de biotina-batroxobina y que se asienta como una capa viscosa a lo largo de la pared 72 cilindrica exterior. Cuando esta separación se ha terminado, separa la centrifugación, con lo cual la porción restante relativamente fluida de la fracción de plasma se puede presionar fácilmente de regreso hasta la primera cámara 70 por el pistón 55 que se levanta para transferir el aire desde la primera cámara 70 a la segunda cámara 75 seguido por el pistón 55 que se presiona hacia abajo. El polímero de fibrina puede permanecer en la pared exterior o puede empezar a deslizarse completamente pero en este caso el polímero se desliza hacia abajo mucho más lentamente que el líquido en exceso. Así, esta transferencia de líquido se puede realizar relativamente fácil y rápidamente antes de que la capa viscosa con el polímero de fibrina alcance la abertura hacia el canal 21. Opcionalmente, se pueden tomar medidas adicionales a fin de prevenir que la capa viscosa alcance la entrada del canal 21 demasiado rápidamente, tal que al proporcionar un anillo de dientes 82 que se proyectan hacia arriba mostrados por las líneas discontinuas en el fondo 76. Este procedimiento de centrifugado/llenado se pueden llevar a cabo dos o más veces, como pueda ser requerido, para obtener tanto fluidos de plasma del polímero de fibrina como sea posible. Una vez que la porción restante de la fracción de plasma se ha expulsado de la segunda cámara 75, el manguito 52 desplazáble de la cápsula 45 se desplaza además hacia abajo de una manera tal que se permite el acceso a la cámara 81 más inferior. Al mismo tiempo, o en unión con el último desplazamiento del manguito, el tapón 59 de la jeringa 58 se presiona completamente hacia abajo por medio de un husillo que actúa desde el exterior de una manera tal que el amortiguador de pH 4 se transfiere a la segunda cámara 75, lo cual se puede hacer mientras que se inicia una agitación centrífuga. La adición del amortiguador de pH 4 es a condición de que el polímero de fibrina se disuelva en el mismo, y la presencia de la composición de avidina-agarosa en la cámara inferior 81 dentro de la cápsula 45 es a condición de que la composición de biotidina-batroxobina se una de una manera convencional por la avidina. Un desplazamiento continuo del pistón 55 provoca que el manguito 52 desplazable en la cápsula 45 acople el medio 36 de división y a un desacoplamiento de la pared 76 el fondo con el resultado que se proporciona un acceso libre a la tercera cámara 77. Como resultado, los contenidos de la segunda cámara 75 pueden fluir libremente hacia abajo hasta la tercera cámara 77. En forma preferente, al redisolución se lleva a cabo durante la agitación centrífuga que comprende la centrifugación y una serie de paros e inicios de movimientos de agitación hacia adelante/hacia atrás como se define anteriormente. Una centrifugación continua es a condición que la solución de monómero de fibrina se pueda separar en la tercera cámara a través de la unidad 42 de filtro anular que retiene las partículas relativamente grandes de agarosa y la batroxobina unida a la misma vía el sistema de captura de biotina-avidina. Cuando la solución del monómero de fibrina ha pasado hasta la cuarta cámara 78 más inferior como resultado de la anterior centrifugación, se para la centrifugación y la solución de fibrina I se transfiere fácilmente a la jeringa 58 por una retroacción renovada del tapón 59, el extremo más superior de la longitud o tramo 46 de la cápsula 45 que acopla la longitud del tubo 47 que forma la conexión con la jeringa 58. Puesto que se separa el polímero de fibrina de la fracción de plasma en la segunda cámara 75, durante una centrifugación continua y conforme se separa 1 solución de monómero de fibrina en la tercera cámara 77, al centrifugarla es posible lograr un rendimiento relativamente' alto de monómero de fibrina de la muestra de sangre en cuestión. La invención se ha descrito con referencia a una modalidad preferida. Sin embargo, se pueden realizar muchas modificaciones sin que de este modo se separen del alcance de la invención. La Figura 2 ilustra ejemplos de estas modificaciones, como la Figura 2 ilustra una segunda modalidad de la invención que corresponde más o menos a la modalidad de la invención mostrada en la Figura 1. La modalidad de la Figura 2 comprende una primera cámara 90 y una segunda cámara 91 separada por un pistón 92, que comprende una varilla 93 de pistón hueco que define la primera cámara hacia adentro. Hacia afuera, las dos cámaras se definen por una porción de un miembro 94 sustancialmente tubular que forma y la pared 95 cilindrica exterior para las dos cámaras 90 y 91. Hacia arriba, la primera cámara 90 se define por una pared 85 de la parte superior que a su vez se forma por una cubierta de la parte superior asegurada al miembro tubular 94 por medio de un anillo 96 atornillado en el miembro 94 tubular. La pared 85 de la parte superior define una abertura de paso para el paso de la varilla 93 de pistón hueco. Hacia bajo, la segunda cámara 91 se define por una pared 96 del fondo formada por un reborde interno circunferencial en el miembro tubular 94. En el lado adyacente a la segunda cámara 91, el miembro tubular 94 comprende una superficie 97 frustocónica que se inclina lejos del pistón 92 hacia el centro de la segunda cámara 91. La pared 96 de fondo define un pasaje 98 central de paso hacia una tercera cámara 99. La tercera cámara) 99 se define por un medio 100 de separación y una unidad 101 de filtro anular insertada entre la pared 96 del fondo y el medio 100 de división y que conduce a la cuarta cámara 102 anular. La cuarta cámara 102 define entre una cubierta 103 en forma de copa asegurada al miembro tubular 94 por roscas. La cubierta 103 se retiene a través de las costillas intermedias 103 al medio 100 de división en su posición centralmente dentro del miembro tubular 94 mientras que aprieta la unidad 101 de filtro anular. Se asegura una cápsula 105 en una espiga 104 saliente centralmente y hacia arriba en el medio 100 de división. La cápsula 105 comprende una porción 106 tubular con los anillos 107, 108 en forma de disco unidos flojamente a la misma y que definen cámara para estas enzimas indicadas por las letras BB y AA, respectivamente, por medio de un manguito desplazablemente arreglado. Los anillos en forma de disco se aseguran en distancias mutuas deseadas en la longitud del tubo 106 por medio de resaltos formados en los mismos por la periferia exterior del miembro 106 tubular que es un diámetro descendiente desde abajo y hacia arriba. Los canales 115 y 116 de paso se proporcionan desde la parte superior del la primera cámara 90 al fondo de la segunda cámara 91. Estos canales se proporcionan por medio de su longitud fija respectiva del tubo 117 y 118, respectivamente, que se extienden paralelos al eje de rotación del dispositivo y que se asegura de los extremos en aberturas asociadas en la pared 95 de la parte superior y la pared 96 del fondo. La conexión de los canales entre estas longitudes del tubo y las cámaras, respectivamente, se proporciona por agujeros adecuados y tapones asegurados en los mismos. Las longitudes del tubo 117 y 118 se extienden a través de sus aberturas respectivas en el pistón 92. Se proporcionan anillos de sello donde sea para prevenir la fuga. Se asegura un acoplamiento 120 centralmente dentro del pistón 92 para el acoplamiento a una jeringa 121 dentro de la varilla 93 de pistón hueco y al extremo superior de la longitud 106 del tubo de la cápsula 105. El acoplamiento 120 lleva una pestaña 122 y se proyecta hacia la segunda cámara 91 y que influye la manguito 110 desplazable en la cápsula 105. Como se ilustra, el diámetro exterior del manguito 110 se adapta al diámetro del pasaje 98 de paso hacia abajo hacia la tercera cámara 99 de una manera tal que el manguito 110 se guía y detiene por la pared 96 del fondo en cualquier posición y en consecuencia también en una posición más inferior en la cual el manguito 105 no acopla el anillo 109 en forma de disco, más inferior-en la cápsula y permite el paso de flujo desde la segunda cámara 91 hacia la tercera cámara 99. Un canal 123 se extiende desde la cuarta cámara 102 y pasa centralmente hacia arriba a través de la espiga 104 en el medio 100 de división y hacia arriba adicionalmente a través del miembro 106 tubular de la cápsula 105, se permite que el fluido entre a la jeringa 121 desde la misma . El dispositivo de la Figura 2 se usa de una manera completamente igual como el dispositivo de la Figura 1, con lo cual también se proporcionan medios, por supuesto, para acoplar una manguera al mismo para la alimentación de sangre. Se muestra otra modalidad en la Figura 3 que tiene los mismos elementos básicos como las Figuras 1 y 2. El canal 4 de transferencia de fluidos se forma preferentemente por una ranura que se forma dentro de ya sea el recipiente 2, 3 interior y exterior con encaje uno entre otro. Como se muestra en la Figura 3, el canal 4 se extiende hacia arriba entre las porciones 5 y 6 de la parte superior, respectivas y se abre en un área 300 de resalto y no prosigue entre las partes 9 y 10 que se extienden axialmente (como en la Figura 1). El miembro 64 de sello de tapa, resciliente está adyacente directamente al área 300 con la condición de que el fluido deseado (por ejemplo, plasma) se transfiera más allá del miembro 64 de sello de tapa vaya directamente en la abertura del canal 4 entre las porciones 5 y 4 de la parte superior sin que tenga que viajar entre el árbol 8 de la porción y la parte 10 que se extiende axialmente, interna. En otra modificación representada en la Figura 3, los dientes 82 mostrados en la Figura 1 se han reemplazado con un "disco de fibrina" 310 que es un conjunto de dientes o puntas arregladas de una manera circular (por ejemplo, en una estructura o anillo circular) alrededor de la cápsula 45 cerca del fondo de la segunda cámara 70. El filtro 310 está conectado en una o más ubicaciones a la pared 76 del fondo pero está sustancialmente abierto cerca de la pared del fondo 76 tal que el líquido en exceso se puede drenar más eficientemente. Este arreglo ayuda a aliviar las situaciones que usan el dispositivo de la Figura 1, cuando se retiene el polímero de fibrina, como se desea, por los dientes 82 pero donde el exceso de líquido se puede atrapar detrás del polímero de fibrina. Se ilustran modificaciones adicionales en la Figura 3, en particular con respecto a la jeringa 50, donde se ve que un portador 320 protector circunda sustancialmente la jeringa 58. El portador 320 es preferentemente cilindrico o corresponde en general a la forma de la jeringa 58. Un tapa 322 del portador se une de manera liberable de la jeringa 58 a la parte superior del portador 320 proporciona un mango para remover convenientemente la jeringa 58 y el portador 320 del dispositivo después del procesamiento, para proporcionar el producto deseado (por ejemplo, solución de monómero de fibrina) dentro de la jeringa está completo. El portador 320 se puede hacer de un material polimérico plástico o rígido para proteger la jeringa 58 durante el manejo. Además, puesto que la jeringa no se toca directamente por el operador, se pueden transferir a una estación adicional para el uso sin contaminación. Una tapa de fondo removible (no mostrada) para el portador 320 también se puede utilizar, especialmente donde la jeringa 58 pre-esterilizada con el portador 320 que contiene las solución de amortiguador ácido, requerida se proporciona como un componente de un equipo para el dispositivo presente. En la Figura 3, un acoplador 324 de jeringa también se muestra que se puede deslizar axialmente dentro de la tapa 322 bajo la acción de, por ejemplo, una varilla que se mueve hacia arriba y hacia abajo (no mostrada), que puede ser parte de una unidad impulsora para el dispositivo. El tapón 59 se adapta par recibir el acoplador 324 tanto de una manera fija como no fija. Esto se puede lograr, por ejemplo, al proporcionar una depresión 326 más allá de una porción 328 receptora, nivelada, dentro del interior del tapón 59 y una protuberancia 330 correspondiente en el árbol del acoplador 324. Los tamaños y formas de estos elementos . se seleccionan tal que el acoplador 324 se puede empujar hacia abajo con una mínima fuerza para mover el tapón 59 hacia abajo sin forzar la protuberancia 330 más allá de la porción 320 nivelada. De esta manera, el acoplador 324 se puede mover hacia atrás sin que cambie la posición del tapón 59. Si se ejerce una fuerza hacia abajo ligeramente mayor en el acoplador 324 cuando acopla el tapón 59, la protuberancia 330 se asegurará en la depresión 326 condicionando que el tapón 59 ahora se moverá en su posición con el acoplador 324. También en la Figura 3, la pestaña 63 que se proyecta axialmente se muestra que es un componente distinto encajado herméticamente dentro del fondo del pistón 55. Las partes descritas que forman parte de los varios dispositivos se fabrican fácilmente a partir de materiales plásticos adecuados por medio de moldeo por inyección, y los dispositivos en cuestión por lo tanto son relativamente baratos y adecuados para el uso desechable. Por consiguiente, se puede usar cualquier material deseado. En forma preferente, los polímeros estables a la irradicación gamma como se conocen en la industria de los dispositivos médicos se emplean. En una modalidad preferible, el recipiente exterior y el pistón son de policarbonato, el portador de la jeringa y las tapas y el tapón son de polipropileno, el filtro es de polietileno, la jeringa es de vidrio, los anillos en forma de O son de silicona y las otras partes son de acrilonitrilo. de estireno. La invención se ha descrito con referencia a las modalidades preferidas del dispositivo. Sin embargo, el método de acuerdo con la invención se puede llevar a cabo fácilmente en un laboratorio bajo condiciones asépticas por medio de una capa que se cierra por un labio. El plasma y la enzima se 'rellenan en la copa y al mezclar y seguir la centrifugación, se separa el polímero de fibrina no reticulado en el fondo o en la pared de la copa como se describe anteriormente. Después de la remoción de la fracción de plasma restante, el polímero de fibrina no reticulado se redisuelve por la adición de un solvente y por medio de la agitación centrífuga como se describe anteriormente también.

Ejemplo Se introdujeron 140 ml de sangre entera y 20 ml de anticoagulante de nitrato de sodio (USP) en la primera cámara 70 del dispositivo descrito anteriormente. Esta combinación se centrifugó durante 2 minutos a aproximadamente 6,000 RPM para proporcionar una separación de plasma y células de sangre. Mientras que se continua la centrifugación para principalmente la separación, el pistón se levanta para la transferencia a la fase más interior, es decir, el plasma, en la segunda cámara 75. Se transfirieron aproximadamente 60 ml de plasma. Esto se trató con 30 unidades de batoxobina biotenilada que se introdujo en la segunda cámara 75 vía, la cámara 80 de la cápsula 45 como se describe previamente. El plasma y la batoxobina se mezclaron a una velocidad lenta, es por ejemplo, aproximadamente 2,000 a 3,000 RPM y posteriormente se centrifugación durante 9 minutos a 9, 000 RPM.

El gel de polímero de fibrina no reticulado se precipitó como una capa de gel delgada sobre las paredes del cilindro y se cesó la rotación. El fluido de plasma restante (suero) luego se transfirió de regreso hasta la primera cámara 70. Esto se siguió por dos centrifugaciones adicionales de un minuto a 9, 000 RPM para remover tanto suero del gel como sea posible. Después de cada centrifugación de 1 minuto, se transfirió el suero en exceso a la primera cámara 70. Posteriormente, se introdujo de la segunda cámara 75 vía la jeringa 58 una solución amortiguadora que comprende 3.5 ml de acetato de sodio 0.2 M (pH 4) que contiene cloruro de calcio 24 mM. Al mismo tiempo, una agitación centrífuga que comprende vueltas de 5-10 segundos a aproximadamente 3,000 RPM cada una en ciclos repetidos hacia adelante/hacia atrás se llevó a cabo durante 2 minutos para disolver el gel de polímero de fibrina y proporcionar una solución que contiene monómero de fibrina. A la solución separada se adicionó avidina-agarosa vía la cámara 71 inferior de la cápsula 45. Esto se siguió por una agitación centrífuga adicional que consiste de vueltas de 5-10 segundos a aproximadamente 3,000 RPM en ciclos repetidos hacia adelante/hacia atrás durante 5 minutos.

La solución resultante con tubo monómero de fibrina más un complejo de avidina-agarosa: biotina-batroxobina. Esta solución se transfirió hasta la tercera cámara 77 y se filtró con centrifugación a través de un filtro Porex anular, de 20 µm durante 1 minuto a 9,000 RPM. La solución resultante del monómero de fibrina se colectó en la jeringa 58 como se describe previamente. La solución de monómero de fibrina formada de esta manera (fibrina I en este caso) se volvió a polimerizar en un sellador de fibrina por la coadministración a un sitio en necesidad de este sellador con un amortiguador de carbonato de sodio/bicarbonato 0.75 M a una relación de fibrina I: amortiguador de 5:1. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la presente invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención. Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes:

Claims (50)

REIVINDICACIONES

1. Un proceso para separar fibrina de plasma, caracterizado porque comprende los pasos de: alimentar el plasma en una cámara de reacción definida por una pared exterior, y una pared del fondo; poner en contacto el fibrinógeno con el plasma con un agente capaz de convertir el fibrinógeno en un polímero de fibrina no reticulado; someter la cámara de reacción, plasma y agente a centrifugación suficiente durante el paso de contacto para separar el plasma, y el depósito, el polímero de fibrina no reticulado, en la pared exterior como una película de gel delgada.

2. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, para separar el monómero de fibrina del plasma, caracterizado porque además comprende el paso de disolver el polímero de fibrina no reticulado al adicionar un solvente a la cámara de reacción con el gel de polímero no reticulado en la pared exterior tal que se proporciona una solución de monómero de fibrina.

3. El proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque cualquier plasma restante en la cámara de reacción después de los pasos de contacto y centrifugación se remueve de la cámara de reacción antes de la disolución del polímero de fibrina no reticulado.

4. El proceso de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el plasma se remueve sin perturbar el polímero de fibrina no reticulado depositado en la pared exterior.

5. El proceso de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el plasma se remueve vía un canal de transferencia que tiene una abertura en el fondo de la cámara de reacción.

6. El proceso de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el aire dentro de la cámara de reacción se presuriza suficientemente para forzar el plasma hacia afuera de la cámara y a través de un canal de transferencia durante el paso de remoción .

7. El proceso de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque comprende los pasos de: proporcionar una pared de la parte superior, móvil en la cámara de reacción; y mover la pared de la parte superior hacia abajo para reducir el volumen dentro de la cámara de reacción para presurizar el aire dentro de la cámara de reacción de una manera suficiente para forzar el plasma hacia afuera de la cámara de reacción y a través del canal de transferencia.

8. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la fibrina es fibrina I, fibrina II o des-ßß-fibrina.

9. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente es una enzima similar a trobmina seleccionada a partir del grupo que consiste de trombina, Ancrod, Acutina, Veniime, asperasa, Botropasa, Crotabase, Flavorxobina y Gabonasa .

10. El proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el solvente es una solución amortiguadora acida.

11. El proceso de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la solución amortiguadora acida tiene un pH de entre 1 y 5.

12. El proceso de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la solución amortiguadora acida se selecciona a partir del grupo que consiste de ácido acético, ácido succínico, ácido glutónico, ácido cistéico, ácido crotónico, ácido titacónico, ácido glutónico, ácido fórmico, ácido aspártico, ácido adípico o sales de cualquiera de éstas .

13. El proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el solvente es un agente caotrópico de pH neutral seleccionado a partir del grupo que consiste de urea, cromo de sodio, clorhidrato de guanidina, KDNS, yoduro de potasio y bromuro de potasio.

14. El proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la cámara de reacción, el polímero de fibrina no reticulado y el solvente se someten a la agitación centrífuga.

15. El proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la solución de monómero de fibrina tiene una concentración de entre 10 y 30 mg/ml de monómero de fibrina.

16. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque además comprende los pasos de: alimentar sangre en la cámara de separación; someter la cámara de separación a una fuerza centrífuga suficiente para proporcionar la separación concéntrica de una fase celular sanguínea más densa y una fase de plasma menos densa; y mantener la fuerza centrífuga mientras que se alimenta el plasma en la cámara de reacción.

17. El proceso de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la cámara de separación tiene un material anticoagulante en la misma.

18. El proceso de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la cámara de separación y la cámara de reacción se alinean alrededor de un eje .común en un dispositivo unitario.

19. El proceso de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el pistón móvil separa las cámaras y constituye una pared de la parte superior de la cámara de reacción y una pared del fondo de la cámara de separación.

20. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente está presente en la cámara de reacción antes de la alimentación del plasma.

21. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente se introduce en la cámara de reacción después de la alimentación del plasma.

22. El proceso de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el fluido de plasma restante o remanente de una cámara de reacción después de la formación del polímero de fibrina no reticulado se transfiere a la cámara de separación antes de la disolución del polímero de fibrina no reticulado con el solvente.

23. El proceso de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el fluido de plasma remanente en la cámara de reacción después de la formación del polímero de fibrina no reticulado se transfiere a la cámara de separación vía una o más canales de transferencia que se extienden desde el fondo de la cámara de reacción hasta la cámara de separación.

24. El proceso de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque uno o más canales de transferencia se extienden desde el fondo de la cámara de reacción hasta la parte superior de la cámara de separación.

25. Un proceso para separar una solución del monómero de fibrina a partir de la sangre, caracterizado porque comprende los pasos de: alimentar sangre en una cámara de separación cilindrica definida por una pared exterior, una pared de la parte superior y un pistón móvil como la pared del fondo; hacer girar la cámara de separación alrededor de su eje longitudinal para proporcionar una fuerza centrífuga suficiente para provocar la separación concéntrica de una fracción de plasma y una fracción celular; alimentar el plasma separado así a través de un canal de transferencia, mientras que se continua la rotación, hasta una cámara de reacción cilindrica alineada a lo largo del mismo eje como la cámara de separación, la cámara de reacción definida además por una pared del fondo, una pared exterior común con la cámara de separación y el pistón como la pared de la parte superior, el canal de transferencia que se extiende desde el fondo de la cámara de reacción hasta la cámara de separación, alimentación que se proporciona por un movimiento hacia arriba del pistón que reduce el volumen de la cámara de separación, forzando de este modo el plasma a través del canal de transferencia; poner en contacto el plasma con el agente 5 capaz de convertir el fibrinógeno dentro del plasma en un polímero de fibrina no reticulado, el contacto se debe llevar a cabo durante la rotación continua para depositar el polímero de fibrina no reticulado en la pared 10 exterior de la cámara de reacción; parar la rotación, de modo que el fluido de plasma remanente se drene al fondo de la cámara de reacción; presurizar el aire dentro de la cámara de 15 reacción de una manera suficiente y mover el pistón ligeramente hacia abajo de modo que el fluido de plasma remanente se fuerce de regreso hasta el tubo de transferencia y hasta la cámara de separación, con lo cual el 20 polímero de fibrina no reticulado está sustancialmente sin perturbar por el movimiento ligero del pistón; introducir un solvente en la cámara de reacción; y agitar la cámara de reacción, de modo que el solvente disuelva el polímero de fibrina no reticulado para proporcionar una solución que comprende monómero de fibrina y el solvente.

26. Un dispositivo para separar fibrina del plasma, caracterizado porque comprende: una cámara de reacción definida por una pared exterior y una pared del fondo adaptada para recibir, y para la centrifugación de, el plasma; un medio para introducir en la cámara de reacción un reactivo capaz de convertir el fibrinógeno dentro del plasma hasta un polímero de fibrina no reticulado; un medio para centrifugar la cámara de reacción, con el plasma y el agente en la misma de una manera suficiente para separar el polímero de fibrina no reticulado del plasma y depositar el polímero de fibrina no reticulado en la pared exterior de la cámara de reacción.

27. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque comprende un medio para introducir un solvente en la cámara de reacción suficiente para disolver el polímero de fibrina no reticulado depositado en la pared exterior para proporcionar una solución de monómero de fibrina que comprende el monómero de fibrina en el solvente.

28. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque además comprende un medio para transferir desde la cámara de reacción cualquier fluido de plasma remanente después de la formación del polímero de fibrina no reticulado.

29. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el medio de transferencia de fluido comprende uno o más canales de transferencia cada uno de los cuales tiene una abertura en el fondo de la cámara de reacción.

30. Un dispositivo para separar fibrina de la sangre, caracterizado porque comprende un medio de alimentación de sangre para alimentar sangre en una cámara de separación; una cámara de separación cilindrica definida por una pared de la parte superior, una pared exterior y un pistón móvil como una pared del fondo; una cámara de reacción cilindrica, por abajo de la cámara de separación que tiene un eje común con éste y que tiene una pared exterior común y en donde el pistón móvil es la parte 5 superior de la cámara de reacción; un medio para introducir en la cámara de reacción un reactivo capaz de convertir fibrinógeno en un polímero de fibrina no reticulado; 10 un medio de canal de transferencia que se extiende desde el fondo de la cámara de reacción en la cámara de separación para proporcionar la transferencia de líquidos entre las dos cámaras por la acción del 15 pistón; y un medio para hacer girar el dispositivo alrededor de el eje suficiente para proporcionar la separación centrífuga concéntrica del plasma en la sangre dentro de 20 la cámara de separación y posteriormente suficiente para proporcionar que el polímero de fibrina no reticulado formado en la cámara de reacción se deposite en la pared exterior de la cámara de reacción. 25

31. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque además comprende un medio para introducir un solvente en la cámara de reacción.

32. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el canal de transferencia se extiende a la pared de la parte superior de la cámara de separación.

33. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el medio de transferencia comprende uno o más canales que se extienden a través de las paredes exteriores de las dos cámaras.

34. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 30, capa orgánica el medio de transferencia comprende uno o más canales tubulares que se extienden rectilíneamente a través de las cámaras.

35. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque el dispositivo comprende un recipiente cilindrico interior que se encaja seguidamente dentro de un recipiente cilindrico exterior y donde una ranura en uno o ambos de los recipientes forma el canal de transferencia dentro de la pared exterior.

36. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque un disco se coloca seguidamente dentro del recipiente exterior contra una pared del fondo del recipiente interior, disco que contiene una ranura para proporcionar una extensión del canal de transferencia desde la pared exterior de la cámara de reacción a una ubicación o cerca del centro de la pared del fondo de la cámara de reacción.

37. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el pistón comprende además un árbol de pistón integral con el pistón que se extiende hacia arriba a través del centro de la cámara de operación y a través de una abertura dentro de la pared de la parte superior de la cámara de separación tal que la cámara de separación es anular en su forma.

38. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque el árbol del pistón es hueco y contiene un medio para distribuir un solvente y además en donde el pistón, el árbol y el medio de distribución se adaptan para distribuir el solvente en la cámara de reacción.

39. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque el medio de distribución es un cartucho de jeringa en conexión para fluidos con un segundo medio de transferencia de fluidos dentro del pistón.

40. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el medio de distribución se adapta además para recibir y colectar una solución de monómero de fibrina que resulta de la disolución del polímero de fibrina no reticulado con el solvente.

41. Un método para separar un componente, tal como monómero de fibrina del plasma, el método que comprende alimentar el plasma a una cámara definida por una pared, posteriormente una fracción con polímero de fibrina no reticulado se provoca que se separe mientras que se está adicionando una enzima adecuada, caracterizado en que la separación del polímero de fibrina no reticulado de la fracción de plasma en la cámara se lleva a cabo durante la centrifugación, con lo cual el polímero de fibrina no reticulado se deposita en la pared exterior de la cámara, posteriormente, la fracción de fluido remanente o restante colectada en la cámara se remueve de la cámara y en que la fracción con el polímero de fibrina no reticulado que permanece en la cámara, depositado sustancialmente en la pared se provoca que se disuelva por la adición de un solvente y la agitación centrifuga.

42. Un método de conformidad con la reivindicación 41, que comprende alimentar sangre preferentemente en la presencia de un anticoagulante a una primera cámara anular en un dispositivo, donde la cámara anular se define por una pared exterior cilindrica y una pared interior cilindrica, ambas paredes que se extienden coaxialmente alrededor de un eje común, así como por una pared de la parte superior y una pared del fondo, donde la pared de la parte superior o la pared del fondo se forma por un cuerpo de pistón desplazable dentro de la primera cámara, el método que comprende además una centrifugación del dispositivo alrededor del eje común para separar sustancialmente la sangre en una fracción celular y una fracción de plasma seguido por la fracción de plasma resultante que se transfiere mientras que se ve influencia por el cuerpo de pistón hacia una segunda cámara definida por una pared cilindrica exterior, que se extiende coaxialmente con el eje común, con lo cual una fracción con el polímero de fibrina no reticulado se provoca que se separe en la segunda cámara mientras que se está adicionando la enzima adecuada, caracterizado en que la fracción de plasma que contiene fibrinógeno se somete a la enzima durante la centrifugación, de modo que el polímero de fibrina no reticulado resultante deposita en la pared exterior cilindrica de la segunda cámara, posteriormente la fracción fluido colectada en el fondo de la segunda cámara se transfiere mientras que se influencia por el cuerpo de pistón hacia la primera cámara, y en que la fracción con el polímero de fibrina no reticulado que permanece en la segunda cámara, depositada sustancialmente en la pared cilindrica se provoca que se disuelva por la adición de un solvente y por la agitación centrífuga.

43. Un dispositivo para separar componentes y un líquido por medio de la centrifugación alrededor de un eje central de rotación y comprende una primera cámara anular definida por una pared cilindrica exterior y una pared cilindrica interior, ambas paredes que se acomodan concéntricamente alrededor del eje de rotación, así como por una pared de la parte superior del fondo, donde la pared del fondo se forma por un cuerpo de pistón desplazable dentro de la primera cámara, el dispositivo que comprende además una segunda cámara que tiene comunicación con la primera cámara a través de un primer conducto en donde la segunda cámara se define por una pared cilindrica exterior acomodada concéntricamente alrededor del eje de concentración y por el cuerpo del pistón y una pared del fondo, donde la segunda cámara se adapta para ser colocada por abajo de la primera cámara durante la centrifugación, y en donde el dispositivo también comprende un medio de alimentación de sangre para alimentar sangre a la primera cámara y un medio de alimentación de composición para alimentar la composición que promueve la separación así como un medio de recepción para la conexión de al menos un recipiente receptor de líquido, donde el medio de recepción se comunica con la segunda cámara a través de un segundo conducto, caracterizado en que el primer conducto comprende al menos un canal que se extiende entre una abertura en la pared de la parte superior de la primera cámara y una abertura en la pared del fondo de la segunda cámara.

44. Un dispositivo de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque al menos un canal se extiende a través del interior de la pared cilindrica exterior tanto en la primera como en la segunda cámara.

45. Un dispositivo de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque la abertura de al menos un canal en la pared del fondo de la segunda cámara se acomoda céntricamente en la cámara en unión con un hueco formado con la pared de fondo.

46. Un dispositivo de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque cada canal se forma por un tubo que se extiende rectilíneamente a través el cuerpo del pistón y que se asegura en los extremos en la pared superior de la primera cámara y la pared de fondo, respectivamente, de la segunda cámara donde se comunica con las porciones de canal que terminan en la cámara respectiva.

47. Un dispositivo de conformidad con la reivindicación 44 ó 45, caracterizado porque la primer y la segunda cámara comprenden una pared cilindrica exterior común formada por un cilindro exterior y un cilindro interior que se encajan herméticamente entre sí y que definen entre ellos un canal que se extiende axialmente, en que los cilindros se terminan en un extremo por una pared terminal que comprende una abertura que permite el paso de una varilla de pistón conectada al cuerpo del pistón, el cuerpo de pistón que forma la pared del fondo de la primera cámara y que separa la primera cámara de la segunda cámara, y en donde los canales se extienden entre las paredes terminales de los cilindros a una abertura inmediatamente adyacente a la varilla del pistón.

48. Un dispositivo de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque la pared del fondo de la segunda cámara se forma por dos partes de pared que colindan herméticamente, que definen entre ellas un canal con un extremo que se comunica con el canal en la pared cilindrica exterior y en el extremo opuesto abre en la segunda cámara inmediatamente adyacente a la porción central de la pared del fondo.

49. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 y 6, para separar cualquier componente polimerizable o precipitable desde dentro de la sanrgre o plasma, caracterizado porque el agente es capaz de convertir una sustancia dentro de la sangre o plasma en el componente.

50. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 y 6, caracterizado porque el solvente es capaz de disolver el componente para proporcionar una solución de los mismos.