MXPA06015220A - Composiciones comprendiendo anfotericina b, metodos y sistemas. - Google Patents

Abstract

Una composicion comprendiendo particulas que contienen por lo menos cerca de 95% del peso de anfotericina B, en la que las particulas poseen un diametro medio de masa que varia de cerca de 1,1 im a cerca de 1,9 pm. Otra composicion incluyendo tambien particulas que contiene como minimo cerca de 95% del peso de anfotericina B, en la que como minimo cerca de 80% del peso de las particulas poseen un diametro geometrico que varia de cerca de 1,1 pm a cerca de 1,9 pm. Y tambien una otra composicion que incluye particulas con anfotericina B, en la que las particulas poseen un diametro medio de masa inferior a cerca de 1,9 pm y en la que la anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, como minimo, cerca de 20%. Formas de dosis unitarias, sistemas de suministro y metodos pueden involucrar composiciones semejantes.

Description

COMPOSICIONES COMPRENDIENDO ANFOTERICINA B, MÉTODOS Y SISTEMAS CAMPO DE LA INVENCIÓN Una o más concretizaciones de la presente invención incluye compuestos conteniendo anfotericina B, métodos para producción y uso de compuestos con anfotericina B y sistemas para uso de compuestos con anfotericina B. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Infecciones pulmonares por hongos, como la infección pulmonar fúngica invasiva filamentosa (IPFIF) , son las principales causas de morbilidad y mortalidad en pacientes con comprometimiento inmunológico. El sistema inmunológico de un individuo puede ser comprometido por algunas enfermedades, como el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) y/o puede ser deliberadamente comprometido por terapia inmunosupresora. La terapia inmunosupresora es frecuentemente administrada a pacientes sometidos a tratamientos contra el cáncer y/o pacientes sometidos a un procedimiento para transplantes. Pacientes con sistema inmunológico comprometido presentan un aumento en la susceptibilidad para infecciones pulmonares y/o nasales provocadas por hongos. Pacientes con comprometimiento grave del sistema inmunológico, como aquellos que sufren de neutropenia prolongada o pacientes que requieren tratamiento con prednisona por 21 o más días consecutivos, en dosis de, como mínimo, 1 mg/kg/día, en adición a otros inmunosupresores administrados, son particularmente susceptibles a infección pulmonar y/o nasal provocada por hongos. Entre pacientes inmunodeprimidos, la tasa global de infecciones fúngicas varía de 0,5 a 28%. En la autopsia de pacientes que habían se sometido a transplante de medula ósea con síndrome de neumonía idiopática (SPI) , en el Centro de Tratamiento de Cáncer Fred Hutchinson, 7,3% presentaban IPFIF. En otro estudio, realizado por Vogeser et al , fue encontrada una tasa de 4% de IPFIF en 1187 autopsias consecutivas realizadas en pacientes europeos, para cualquier causa de muerte, durante el período de 1993 a 1996. Una mayoría impresionante entre estos pacientes europeos había recibido (1) dosis alta de esteroides, (2) tratamiento para una malignidad, (3) un transplante de órgano sólido o (4) algún tipo de transplante de medula ósea. La infección pulmonar y/o nasal fúngica más común en pacientes inmunodeprimidos es aspergilosis pulmonar y/o nasal . La aspergilosis es una enfermedad provocada por hongos de la especie Aspergillus (Aspergillus spp.), que invaden el cuerpo primariamente a través de los pulmones . La incidencia de aspergilosis depende de la duración y gravedad de la neutropenia, factores individuales del paciente (por ejemplo, edad, uso de corticosteroides y enfermedad pulmonar y/o nasal anterior, niveles de contaminación ambiental, criterios diagnósticos y persistencia en la determinación de la causa de la enfermedad) . Otros hongos filamentosos y dimórficos pueden también llevar a infecciones pulmonares fúngicas. Estos otros hongos son generalmente endémicos y regionales y pueden incluir, por ejemplo, blastomicosis, candidiasis diseminada, coccidioidomicosis, criptococosis, histoplasmosis, mucormicosis y esporotricosis . Aunque no afecten típicamente al sistema pulmonar, infecciones causadas por Candida spp., que son generalmente sistémicas y en la mayoría de las veces resultantes de infecciones vía artefactos implantados o catéter IV, herida o contaminación de transplante de órgano sólido, son responsables de 50 a 67% de todas las infecciones fúngicas en pacientes inmunodeprimidos . La anfotericina B es el único compuesto fungicida aprobado utilizado actualmente para tratamiento de aspergilosis, siendo suministrada, de una manera general, por vía intravenosa. La anfotericina B es un macrólido poliénico anfotérico, obtenido a partir de una cepa de la Streptomyces nodosus . Ella puede ser encontrada comercialmente tanto bajo la forma amorfa como la cristalina. La fórmula de la anfotericina B con desoxicolato sódico fue el primer preparado original de anfotericina B a ser comercializado. Terapias intravenosas sistémicas son restringidas por toxicidades dosis-dependientes, como toxicidad renal y hepatotoxicidad, que perjudican la eficiencia del tratamiento y disminuyen la posibilidad deseada del uso profiláctico de anfotericina B. Mismo con la terapia aprobada, la incidencia de aspergilosis viene aumentando y con una estimación para provocar mortalidad en más de 50% de los infectados que reciben tratamiento. La necesidad en la ciencia para compuestos seguros y eficientes con anfotericina B, métodos para producción y uso de estos compuestos y sistemas para uso de los mismos permanece. Por ejemplo, permanece la necesidad de compuestos y métodos para el tratamiento seguro y eficaz de pacientes que desarrollaron una infección pulmonar y/o nasal fúngica y/o para profilaxis contra el surgimiento de una infección pulmonar y/o nasal fúngica. SUMARIO DE LA INVENCIÓN De esa forma, una o más concretizaciones de la presente invención incluye compuestos conteniendo anfotericina B, métodos para producción y uso de compuestos de la anfotericina B y sistemas para uso de compuestos conteniendo anfotericina B. Otros aspectos y ventajas de concretizaciones de la presente invención serán presentados en la descripción de la invención que se sigue, y en parte serán evidentes de la descripción o podrán ser conocidos por el uso práctico de la invención. Concretizaciones de la invención serán realizadas y obtenidas por las composiciones y métodos particularmente indicados en la descripción escrita y reivindicaciones del presente. En un aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un compuesto conteniendo partículas con como mínimo 95% del peso de anfotericina B.

Las partículas poseen un diámetro medio de masa que varía de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm. En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un compuesto que contiene partículas con como mínimo 95% del peso de anfotericina B. Por lo menos cerca de 80% del peso de las partículas poseen un diámetro geométrico que varía de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm. En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un compuesto que contiene partículas con anfotericina B. Las partículas poseen un diámetro medio de masa inferior a 1,9 µm y la anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, como mínimo, cerca de 20%.

En otro aspecto aún, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a una composición farmacéutica que contiene una cantidad eficaz de anfotericina B y excipiente farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica se hace a partir de partículas conteniendo anfotericina B con un diámetro medio de masa que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm. En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a una composición farmacéutica conteniendo una cantidad eficaz de anfotericina B y excipiente farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica se hace a partir de partículas conteniendo anfotericina B y como mínimo 80% del peso de las partículas conteniendo anfotericina B con un diámetro geométrico que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a una composición farmacéutica conteniendo una cantidad eficaz de anfotericina B y excipiente farmacéuticamente aceptable. La anfotericina B posee un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 20% a cerca de 99%. En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un polvo seco que contiene anfotericina B con un nivel de cristalinidad de, como mínimo, cerca de 20%. El polvo seco contiene partículas con un diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm. En un otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a una forma de dosificación unitaria que comprende un recipiente conteniendo una composición farmacéutica. La composición farmacéutica contiene una cantidad eficaz de anfotericina B y excipiente farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica se hace a partir de partículas conteniendo anfotericina B con un diámetro medio de masa inferior a cerca de 1,9 µm. En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a una forma de dosificación unitaria que comprende un recipiente conteniendo una composición farmacéutica. La composición farmacéutica contiene una cantidad eficaz de anfotericina B y excipiente farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica se hace a partir de partículas conteniendo anfotericina B y como mínimo cerca de 80% del peso de las partículas contienen anfotericina B con un diámetro geométrico inferior a cerca de 1,9 µm. En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a una forma de dosificación unitaria que comprende un recipiente conteniendo una composición farmacéutica. La composición farmacéutica contiene anfotericina B y excipiente farmacéuticamente aceptable. La anfotericina B posee un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 20% a cerca de 99%. En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un sistema para el suministro que comprende un inhalador y una composición farmacéutica. La composición farmacéutica contiene particulados con anfotericina B y excipiente farmacéuticamente aceptable. Los particulados son hechos a partir de partículas conteniendo anfotericina B con un diámetro medio de masa inferior a cerca de 1,9 µm. En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un sistema para suministro que comprende un inhalador y una composición farmacéutica. La composición farmacéutica contiene particulados con anfotericina B y excipiente farmacéuticamente aceptable. Los particulados son hechos a partir de partículas que contienen anfotericina B, en los que, como mínimo cerca de 80% del peso de las partículas poseen anfotericina B con un diámetro geométrico inferior a cerca de 1,9 µm. En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un sistema para suministro que comprende un inhalador y una composición farmacéutica. La composición farmacéutica contiene particulados con anfotericina B con un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 20% a cerca de 99% y excipiente farmacéuticamente aceptable. En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para caracterización de anfotericina B para producción de una composición farmacéutica. El método incluye la determinación del nivel de cristalinidad de un compuesto de la anfotericina B. El método incluye también la garantía de que el nivel de cristalinidad es superior a un nivel inicial predeterminado antes de la liberación del compuesto con anfotericina B para combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable para formar una composición farmacéutica. En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para caracterización de anfotericina B para producción de una composición farmacéutica. El método incluye la determinación de la amorficidad de una composición conteniendo anfotericina B. El método incluye también la garantía de que la amorficidad es inferior a un nivel predeterminado antes de la liberación de la composición con anfotericina B para combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable para formar la composición farmacéutica. En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para producción y caracterización de una composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco. El método incluye la combinación de una composición con anfotericina B con un excipiente farmacéuticamente aceptable para formar la composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco. El método incluye también la determinación de un diámetro aerodinámico medio de masa de la composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco. El método incluye además la garantía de que el diámetro aerodinámico medio de masa es inferior a un nivel predeterminado antes de la liberación de la composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco para administración a un paciente. En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para producción y caracterización de una composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco. El método incluye la combinación de una composición con anfotericina B con un excipiente farmacéuticamente aceptable para formar la composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco. El método incluye también la determinación de un grado de homogeneidad de la composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco. El método incluye además la garantía de que el nivel de homogeneidad está por encima de un nivel predeterminado antes de la liberación de la composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco para administración a un paciente. En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para producción de partículas secadas por aspersión. El método incluye la suspensión de partículas conteniendo anfotericina B en un líquido para formar una carga inyectable. Las partículas poseen un diámetro medio de masa inferior a cerca de 3 µm. El método incluye también el secado por aspersión de la carga inyectable para producción de partículas secadas por aspersión. En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para producción de partículas secadas por aspersión. El método incluye la suspensión de las partículas conteniendo anfotericina B en un líquido para formar una carga inyectable, en las que la anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, como mínimo, cerca de 20%. El método incluye también el secado por aspersión de la carga inyectable para producción de partículas secadas por aspersión.

En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para tratamiento y/o profilaxis contra infección fúngica. El método incluye la administración por inhalación de una cantidad eficaz de una composición conteniendo anfotericina B en un paciente que necesita la misma, en el que la composición se hace a partir de partículas conteniendo anfotericina B con un diámetro medio de masa que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm. En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para tratamiento y/o profilaxis contra infección fúngica. El método incluye administración por inhalación de una cantidad eficaz de una composición conteniendo anfotericina B en un paciente que necesita la misma, en el que la composición se hace a partir de partículas conteniendo anfotericina B y en la que como mínimo cerca de 80% del peso de las partículas conteniendo anfotericina B poseen un diámetro geométrico que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm. En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para tratamiento y/o profilaxis contra infección fúngica. El método incluye administración por inhalación de una cantidad eficaz de una composición conteniendo anfotericina B en un paciente que necesita la misma, en el que la anfotericina B posee un nivel de cristalinidad que es de, como mínimo, cerca de 20%. En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para tratamiento y/o profilaxis contra infección fúngica. El método incluye administración por inhalación de una cantidad eficaz de una composición conteniendo anfotericina B en un paciente que necesita la misma. La anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, como mínimo, cerca de 20% y la anfotericina B posee un tiempo de semivida en el tejido sólido pulmonar de, como mínimo, cerca de 1 semana, conforme a lo determinado por autopsia de tejido pulmonar.

En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para tratamiento y/o profilaxis contra infección fúngica. El método incluye administración por inhalación de una cantidad eficaz composición conteniendo anfotericina B en un paciente que necesita la misma. La anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, como mínimo, cerca de 20% y la anfotericina B posee un tiempo de semivida en el revestimiento epitelial pulmonar de, como mínimo, cerca de 10 horas, conforme a lo determinado por lavado broncoalveolar .

En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para tratamiento y/o profilaxis contra infección fúngica. El método incluye administración por inhalación de una composición conteniendo una cantidad de anfotericina B que varía de cerca de 0,01 mg/kg a 7,0 mg/kg en un paciente que necesita la misma. La anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, como mínimo, cerca de 20% y la concentración plasmática de anfotericina B permanece inferior a cerca de 1000 ng/ml. En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para tratamiento y/o profilaxis contra infección fúngica. El método incluye administración por inhalación de una composición conteniendo una cantidad de anfotericina B que varía de cerca de 0,01 mg/kg a 7,0 mg/kg en un paciente que necesita la misma. La anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, como mínimo, cerca de 20% y la concentración plasmática de anfotericina B permanece baja lo suficiente para evitar toxicidad renal y/o hepática. En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para tratamiento y/o profilaxis contra infección fúngica. El método incluye administración por inhalación de una composición conteniendo una cantidad de anfotericina B en un paciente que necesita la misma. La anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, como mínimo, cerca de 20% y la concentración pulmonar de anfotericina B alcanza como mínimo 5 veces la concentración mínima de inhibición por, por lo menos, un período del tiempo de tratamiento, conforme a lo determinado por lavado broncoalveolar. La concentración plasmática de anfotericina B permanece inferior a cerca de 1000 ng/ml. En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para tratamiento y/o profilaxis contra infección fúngica. El método incluye administración por inhalación de una composición conteniendo anfotericina B en un paciente que necesita la misma. La anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, como mínimo, cerca de 20%. Un período de tratamiento varía de cerca de 15 semanas a cerca de 20 semanas . La concentración pulmonar de anfotericina B alcanza como mínimo 5 veces la concentración mínima de inhibición por un período del tiempo de tratamiento, conforme a lo determinado por lavado broncoalveolar. En aún otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para tratamiento y/o profilaxis contra infección fúngica. El método incluye administración por inhalación de una composición conteniendo una cantidad de anfotericina B que varía de cerca de 2 mg a cerca de 50 mg, en un paciente que necesita la misma. La anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, como mínimo, cerca de 20%. La administración es conducida en menos que cerca de 5 minutos . En otro aspecto, una o más concretizaciones de la presente invención son dirigidas a un método para tratamiento y/o profilaxis contra infección fúngica. El método incluye administración por inhalación de una cantidad eficaz de polvo seco conteniendo anfotericina B en un paciente que necesita la misma. La anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, como mínimo, cerca de 20% y el polvo seco contiene partículas que poseen un diámetro aerodinámico medio de masa inferior a 10 µm. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS DISEÑOS Concretizaciones de la presente invención son descritas posteriormente en la descripción de la invención que se sigue, con referencia a la pluralidad observada de diseños no restrictivos, en los que: La Fig. 1 muestra la concentración prevista de anfotericina B en los pulmones después de la administración de una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención; La Fig. 2 muestra la concentración plasmática prevista de anfotericina B después de la administración de una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención; Las Fig. 3A-3E muestran esquemas de corte laterales mostrando cómo un inhalador de polvo seco puede ser utilizado para pulverizar composiciones farmacéuticas de la presente invención; La Fig. 4 es una representación mostrando un gráfico de dependencia del flujo de depósito en un Impactador en Cascada de Anderson (ACl) para anfotericina B en polvo de la presente invención; La Fig. 5 es una representación mostrando un gráfico de estabilidad de anfotericina B en polvo de la dosis emitida (DE) de la presente invención, utilizando el aparato de DPI (Reproducción de Imágenes de Subproductos) Turbospin® a 60 l/min; La Fig. 6 es una representación mostrando un gráfico de estabilidad de anfotericina B en polvo del desempeño de la presente invención bajo la forma de aerosol utilizando el aparato de DPI Turbospin ® a 28,3 l/min; La Fig. 7 es una representación mostrando un gráfico de desempeño de una composición farmacéutica bajo la forma de aerosol de la presente invención comprendiendo anfotericina B y varias fosfatidilcolinas; La Fig. 8 es una representación mostrando un gráfico de desempeño de una composición farmacéutica bajo la forma de aerosol de la presente invención comprendiendo 70% en peso de la anfotericina B utilizando diversos aparatos de DPI pasiva a 56,6 l/min; La Fig. 9 muestra la DE obtenida por colector de la presente invención en polvo; La Fig. 10 muestra la DE media por lote de la presente invención en polvo; La Fig. 11 muestra diámetros aerodinámicos medios de masa (DAMM) por colector de polvos de la presente invención; La Fig. 12 muestra dosis de partículas finas (%DPF < 3,3 µm) por colector de polvos de la presente invención; La Fig. 13 muestra la DE (mg/cápsula) por colector de polvos de la presente invención; La Fig. 14 muestra la DE por colector y por lote de polvos de la presente invención; La Fig. 15 muestra el DAMM por colector de polvos de la presente invención; La Fig. 16 muestra el %DPF < 3,3 µm por colector de polvos de la presente invención; La Fig. 17 muestra la DE (mg/cápsula) de dos polvos de la presente invención; La Fig. 18 es una representación gráfica mostrando las concentraciones de anfotericina B en varios locales en el cuerpo de un ratón, después de administración intratraqueal y administración intravenosa; La Fig. 19 muestra una representación gráfica mostrando los perfiles medios de concentración-tiempo de anfotericina B en los pulmones de perros después de 14 días de administración pulmonar; La Fig. 20 es una Curva de Supervivencia de Kaplan-Meier mostrando la eficacia de una forma de la presente invención; La Fig. 21 muestra la media de concentración de anfotericina B, en grupos, en tejido pulmonar, suministrada por inhalación para conejos; La Fig. 22 muestra la media de concentración de anfotericina B, en grupo, en tejido pulmonar, suministrada por inhalación para conejos; La Fig. 23 muestra una Curva de Supervivencia de Kaplan-Meier mostrando la eficacia de una forma de la presente invención; y La Fig. 24 es un gráfico comparando las distribuciones gravimétricas y de tamaño de partícula específico del fármaco de dos polvos de la presente invención.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Debe entenderse que, salvo si se indica de otra forma, la presente invención no está limitada a componentes específicos de la fórmula, sistemas de suministro del fármaco, técnicas de fabricación, etapas de administración, o factores semejantes, visto que los mismos pueden variar. A ese respecto, salvo si se declara de otra forma, una referencia a un compuesto o componente incluye el propio compuesto o componente, así como el compuesto en combinación con otros compuestos o componentes, como mezclas de compuestos. Antes de otras discusiones, una definición de los ítems siguientes auxiliará en la comprensión de las concretizaciones de la presente invención. Conforme utilizadas en el presente, las formas en singular "un", "una" y "el " y "la", incluyen la referencia en plural, salvo si el contexto indica claramente lo contrario. Por consiguiente, por ejemplo, referencia a "un fosfolípido" incluye un único fosfolípido y también dos o más fosfolípidos combinados o mezclados, salvo si el contexto indica claramente lo contrario. Conforme se utilizan en el presente, "particulados" se refiere a partículas que comprenden anfotericina B y, por lo menos, un excipiente farmacéuticamente aceptable. Los particulados pueden asumir varias formas y presentaciones, como microestructuras huecas y/o porosas. Las microestructuras huecas y/o porosas pueden exhibir, definir o comprender vacíos, poros, defectos, cavidades, espacios, espacios intersticiales, orificios, perforaciones o huecos y pueden ser partículas esféricas, colapsadas, deformadas o quebradas . Al ser referido un agente activo, el término engloba no sólo la entidad molecular especificada, pero también sus análogos farmacéuticamente aceptables y farmacológicamente activos, incluso, pero sin restricción, sales, esteres, amidas, hidrazidas, derivados N-alquil, derivados N-acil, profármacos, conjugados, metabolitos activos y otros de estos derivados, análogos y compuestos relacionados. Por consiguiente, el término "anfotericina B" se refiere a propia anfotericina B o derivados, análogos o compuestos relacionados observados arriba, desde que estos derivados, análogos o compuestos relacionados de la anfotericina B exhiban actividad antifúngica. Conforme se utilizan en el presente, los términos "tratar" y "tratamiento" se refieren a reducción de la gravedad y/o frecuencia de síntomas, eliminación de síntomas y/o de la causa subyacente, reducción en la probabilidad de la ocurrencia de síntomas y/o causa subyacente, y mejora o recuperación de lesiones. De esa forma, "tratar" un paciente con un agente activo, conforme a lo previsto en el presente, incluye la prevención de una condición, enfermedad o disturbio en particular en un individuo susceptible, así como tratamiento de un individuo clínicamente sintomático. Conforme se utiliza en el presente, "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad incluyendo cantidades eficaces, tanto en términos terapéuticos como en términos profilácticos . Conforme se utiliza en el presente, "cantidad eficaz en términos terapéuticos" se refiere a una cantidad que es eficaz para alcanzarse el resultado terapéutico deseado. Una cantidad eficaz en términos terapéuticos de un determinado agente activo variará en función de factores como el tipo y gravedad del disturbio o enfermedad que está siendo tratada y la edad, sexo y peso del paciente. Conforme se utiliza en el presente, "cantidad eficaz en términos profilácticos" se refiere a una cantidad eficaz para alcanzarse el efecto profiláctico deseado. Como una dosis profiláctica es administrada a pacientes antes del surgimiento de la enfermedad, la cantidad eficaz en términos profilácticos es típicamente inferior a la cantidad eficaz en términos terapéuticos. Conforme se utiliza en el presente, "diámetro medio de masa" o "DMM" se refiere al diámetro medio de diversas partículas, típicamente en una populación de partículas polidispersas, es decir, incluyendo un intervalo de tamaños de partículas. Los valores de DMM, conforme relatados en el presente, son determinados por difracción por láser (Sympatec Helos, Clausthal-Zellerfeld, Alemania) , salvo si el contexto indica de otra forma. Típicamente, muestras en polvo son añadidas directamente al embudo alimentador de la unidad de dispersión de polvo seco RODOS de Sympatec. Esa adición puede ser obtenida mecánicamente o por agitación mecánica de la parte terminal de un vibrador de alimentación VIBRI . Muestras son sometidas a la dispersión para formación de partículas primarias por medio de la aplicación de aire presurizado (2 a 3 bar) , con depresión de vacío (succión) maximizada para una determinada presión de dispersión. Las partículas en dispersión son sometidas a un haz de láser a 632,8 nm que cruza la trayectoria de las partículas dispersas en ángulos rectos. La imagen de la luz creada por el láser, diseminada por el conjunto de las partículas, es reproducida en un montaje concéntrico de elementos de detección fotomultiplicadores, utilizando un conjunto de lentes inversas de Fourier. La luz diseminada es obtenida en intervalos de tiempo de 5 mseg. Las distribuciones de tamaño de partículas son calculadas posteriormente a partir de la distribución del espacio/densidad de la luz diseminada, utilizando un algoritmo exclusivo.

Conforme a lo utilizado en el presente, "diámetro geométrico" se refiere al diámetro de una única partícula, conforme a lo determinado por microscopia, salvo si el contexto indica de otra forma. Conforme se utiliza en el presente, "diámetro aerodinámico medio de masa" o "DAJyiM" se refiere al tamaño aerodinámico medio de diversas partículas o particulados, típicamente en una populación polidispersa. El "diámetro aerodinámico" es el diámetro de una esfera de densidad unitaria que tenga la misma velocidad establecida, generalmente en el aire, bajo la forma de polvo y es, por consiguiente, una manera útil de caracterizar un polvo bajo la forma de aerosol u otra fórmula de partícula o particulado en dispersión, en términos de su comportamiento establecido. El diámetro aerodinámico engloba forma y densidad de partícula o particulado y tamaño físico de la partícula o particulado. Conforme se utiliza en el presente, DAMM se refiere a la media de la distribución aerodinámica de tamaño de partículas o particulados de un polvo bajo la forma de aerosol determinado por impactación en cascada, salvo si el contexto indica de otra forma. Conforme se utiliza en el presente, "nivel de cristalinidad" se refiere al porcentual de anfotericina B bajo la forma cristalina con relación a la cantidad total de anfotericina B. Salvo si el contexto indica de otra forma, niveles de cristalinidad en este documento son determinados por difracción de polvo por rayos-X en ángulo abierto. Los patrones de difracción de polvo por rayos-X fueron determinados con un medidor de difracción de rayos-X, modelo XRD-6000 de Shimadzu, con un tiempo de fijación de 2 segundos (investigación con tiempo fijado) , tamaño de la etapa de 0,02 °2?, un intervalo de investigación de 3-42°2?, hendidura de divergencia de 0,5°, hendidura de diseminación de 1° y hendidura de recepción de 0,3 mm, conforme a lo descrito más detalladamente en el Ejemplo 1.

Conforme se utiliza en el presente, "amorficidad" se refiere al porcentual de anfotericina B, bajo la forma amorfa, con relación a la cantidad total de anfotericina B.

Salvo si el contexto indica de otra forma, niveles de amorficidad en este documento son determinados por difracción de polvo por rayos-X en ángulo abierto. Conforme se utiliza en el presente, el término "dosis emitida" o "DE" se refiere a una indicación del suministro de polvo seco a partir de un inhalador después de un depósito o unidad de un polvo haber sido activado o disperso. DE es definida como la tasa de la dosis suministrada por un inhalador con relación a la dosis nominal (es decir, la masa del polvo por dosis unitaria colocada en un inhalador adecuado antes de ser utilizado) . La DE es una cantidad determinada experimentalmente y puede ser determinada utilizado un aparato in vi tro montado que simula la dosificación de pacientes. Para determinar un valor de DE, Conforme se utiliza en el presente, una dosis nominal de polvo seco (conforme a lo definido arriba) es colocada en un aparato de DPI Turbospin® (PH&T, Italia) , descrito en las Patentes Estadounidenses n° 4.069.819 y 4.995.385, que son totalmente incorporadas al presente por referencia. El DPI Turbospun es activado, dispersando el polvo. La nube resultante de aerosol es, enseguida, retirada del aparato por vacío (30 l/min) durante 2,5 segundos después de la activación, siendo la misma capturada en un filtro de fibra de vidrio graduado (Gelman, diámetro de 47 mm) sujetado a la salida del aparato. La cantidad de polvo que llega al filtro constituye la dosis suministrada. Por ejemplo, para una cápsula conteniendo 5 mg del polvo seco colocada en un inhalador, si la dispersión del polvo resultar en la recuperación de 4 mg del polvo en un filtro graduado , conforme a lo descrito arriba, entonces la DE para la composición del polvo seco es de 80% [= 4 mg (dosis suministrada) /5 mg (dosis nominal) ] . Conforme se utiliza en el presente, "inhalador pasivo de polvo seco" se refiere a un aparato de inhalación que se basa en el esfuerzo inspiratorio de un paciente para dispersar y nebulizar una composición farmacéutica contenida dentro del aparato en un depósito o en una forma de dosis unitaria y no incluye inhaladores que contengan un medio para suministro de energía, como gas presurizado o elementos de vibración o rotación, para dispersar y nebulizar la composición del fármaco. [079] Conforme se utiliza en el presente, "inhalador activo de polvo seco" se refiere a un aparato de inhalación que no se basa exclusivamente en el esfuerzo inspiratorio de un paciente para dispersar y nebulizar una composición farmacéutica contenida dentro del aparato en un depósito o en una forma de dosis unitaria e incluye inhaladores que contienen un medio para suministro de energía para dispersión y nebulización de la composición del fármaco, como gas presurizado y elementos de vibración o rotación. Una visión general de diversas concretizaciones de la presente invención es presentada en el Resumen de la Invención de este documento. Con vistas a la brevedad, esta visión general es totalmente incorporada al presente por referencia. Una o más concretizaciones de la presente invención se relacionan a la sorprendente e inesperada descubierta de que ciertas composiciones con anfotericina B redujeron la toxicidad. Aunque no se desee estar preso a la teoría, diversos factores parecen afectar a la toxicidad de la anfotericina B. Estos factores incluyen, pero sin restricción, el nivel de cristalinidad de la anfotericina B, tamaño de las partículas de anfotericina B, la homogeneidad de particulados comprendidos en las partículas de anfotericina B y el tamaño de particulados comprendidos en las partículas de anfotericina B. Dependiendo de las circunstancias, uno o más de estos factores parecen afectar a la toxicidad. En una o más concretizaciones de la invención, una composición comprende anfotericina B. La anfotericina B es un macrólido heptaénico que contiene siete enlaces dobles conjugados en la posición trans y una mitad 3-amino-3,6-dideoximanosa (micosamina) conectada al anillo principal por un enlace glucosídico. El principio activo a granel de anfotericina B puede ser obtenido de Alpharma en Copenhague, Dinamarca o Chemwerth, oodbridge, Connecticut.

En una o más concretizaciones de la invención, una composición comprende un derivado de la anfotericina B con actividad antifúngica. El derivado de la anfotericina B puede ser un éster, una amida, hidrazida, N-alquil y/o N- amino acil. Ejemplos de derivados esteres de anfotericina B incluyen, pero sin restricción, metil esteres, esteres de la colina y dimetila inopropil esteres. Ejemplos de derivados de amida de la anfotericina B incluyen, pero sin restricción, amidas primarias, secundarias y terciarias de anfotericina B. Ejemplos de derivados hidrazidas de la anfotericina B incluyen, pero sin restricción, hidrazidas de N-metilpiperazina. Ejemplos de derivados N-alquil de la anfotericina B incluyen, pero sin restricción, N'JN'J 1-trimetil y N' -N' -dimetilamino propil succininimidil derivados del éster metílico de anfotericina B. Ejemplos de derivados N-aminoacil de la anfotericina B incluyen, pero sin restricción, N-ornitil, N-lisil, N-hexametilisil y N-piperdina-propionil o N' ,N' -metil-1-piperazina-propionil-anfotericina B metil éster. Composiciones incluyendo anfotericina B pueden incluir diversos tenores de anfotericina B. Por ejemplo, el tenor de anfotericina B puede variar de por lo menos cerca de 0,01% del peso, como por lo menos cerca de 1% del peso, por lo menos cerca de 10% del peso, por lo menos cerca de 50% del peso, por lo menos cerca de 90% del peso, por lo menos cerca de 95% del peso o por lo menos cerca de 98% del peso.

Conforme a lo observado arriba, el nivel de cristalinidad de la anfotericina B parece ser un factor en la reducción de toxicidad. Por ejemplo, cuando administradas a los pulmones, formas más cristalinas de anfotericina B aparentemente disuelven más lentamente y poseen una semivida más larga que formas más amorfas de anfotericina B. Aunque no se desee estar preso a la teoría, la disolución lenta y semivida más larga parece reducir la toxicidad. Por otro lado, aunque no se desee estar preso a la teoría, se cree que esos principios no están restringidos a los pulmones . El nivel deseado de cristalinidad de anfotericina B dependerá de factores como dosificación y régimen de tratamiento. El nivel de cristalinidad de la anfotericina B puede ser de por lo menos cerca de 10%, por lo menos cerca de 20%, por lo menos cerca de 30%, por lo menos cerca de 40%, por lo menos cerca de 50%, por lo menos cerca de 60%, por lo menos cerca de 70%, como por lo menos cerca de 80%, por lo menos cerca de 90%, por lo menos cerca de 95% o por lo menos cerca de 99%. De esa forma, el nivel de cristalinidad puede variar de cerca de 10% a 100%, como cerca de 20% a cerca de 99%, cerca de 50% a cerca de 99%, cerca de 70% a cerca de 99%, cerca de 70% a cerca de 98%, cerca de 80% a cerca de 98% o cerca de 90% a cerca de 97%.

El nivel de cristalinidad puede ser determinado por cualesquiera de las diversas técnicas conocidas . Por ejemplo, el nivel de cristalinidad puede ser determinado por difracción por rayos-X, espectroscopia Raman y/o por infrarrojo, absorción dinámica de vapor, calentamiento de solución calorimétrica o microcalorimetría isotérmica. Conforme a lo observado arriba, salvo si el contexto indica de otra forma, niveles de cristalinidad en este documento son determinados por difracción por rayos-X, utilizando el método descrito en el Ejemplo 1. En algunos casos, son utilizadas partículas de anfotericina B que poseen diámetros pequeños . En una versión, las partículas de anfotericina B poseen un diámetro medio de masa inferior a cerca de 3 µm, como inferior a cerca de 2,5 µm, inferior a cerca de 2 µm, inferior a cerca de 1,9 µm o inferior a cerca de 1,5 µm. Por ejemplo, las partículas de anfotericina B pueden poseer un diámetro medio de masa que varía de cerca de 0,5 µm a cerca de 3 µm, como de cerca de 0,5 µm a cerca de 1,8 µm, cerca de 0,8 µm a cerca de 2,5 µm, cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm, cerca de 1,2 µm a cerca de 1,8 µm o cerca de 1 µm a cerca de 2 µm. En algunas versiones, por lo menos cerca de 20% de las partículas de anfotericina B poseen un tamaño inferior a cerca de 3 µm, como por lo menos cerca de 50% son inferiores a cerca de 3 µm, por lo menos cerca de 90% son inferiores a cerca de 3 µm o por lo menos cerca de 95% son inferiores a 3 µm de diámetro. Por ejemplo, 60% del peso, 70% del peso, 80% del peso o 90% del peso de las partículas pueden poseer un diámetro medio de masa de cerca de 1,1 µm a 1,9 µm. En algunas versiones, la anfotericina B posee un nivel alto de cristalinidad y el tamaño de partícula de la anfotericina B es pequeño. El nivel de cristalinidad puede ser cualquier uno de los discutidos arriba y el tamaño de partícula puede ser cualquier uno de aquellos discutidos arriba. Por ejemplo, en una versión, el nivel de cristalinidad es de por lo menos cerca de 50% y el diámetro medio de masa es inferior a cerca de 3 µm. En otra versión, el nivel de cristalinidad es de por lo menos cerca de 70% y el diámetro medio de masa es inferior a cerca de 2,8 µm. En aún otra versión, el nivel de cristalinidad es por lo menos cerca de 80% y el diámetro medio de masa es inferior a cerca de 2,6 µm. En otra aún versión, el nivel de cristalinidad es de por lo menos cerca de 90% y el diámetro medio de masa es inferior a cerca de 2,4 µm. El nivel de cristalinidad puede ser los discutidos arriba y el tamaño de partícula de anfotericina B puede ser mayor que los tamaños discutidos arriba. Por ejemplo, el nivel de cristalinidad puede ser por lo menos cerca de 50% y el diámetro medio de masa puede ser mayor que cerca de 3 µm. Por otro lado, el tamaño de partícula de anfotericina B puede estar incluido en los tamaños discutidos arriba y el nivel de cristalinidad puede estar fuera de los niveles discutidos arriba. Por ejemplo, el diámetro medio de masa puede ser inferior a cerca de 3 µm y el nivel de cristalinidad puede ser inferior a cerca de 50%.

La composición farmacéutica, según una o más concretizaciones de la invención puede comprender anfotericina B y, opcionalmente, uno o más ingredientes activos y/o excipientes farmacéuticamente aceptables. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede comprender partículas puras de anfotericina B, puede comprender partículas puras de anfotericina B junto con otras partículas y/o puede comprender particulados comprendiendo anfotericina B y uno o más ingredientes activos y/o uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. De esa forma, la composición farmacéutica, según una o más concretizaciones de la invención puede, si deseado, contener una combinación de anfotericina B y uno o más ingredientes activos. Ejemplos de otros ingredientes activos incluyen, pero sin restricción, agentes que pueden ser suministrados a través de pasajes pulmonares o nasales. Por ejemplo, el (los) otro(s) agente (s) activo (s) puede (n) ser agente (s) de actuación prolongada y/o agentes activos que son activos contra infecciones pulmonares y/o nasales, como antivirales, antifúngicos y/o antibióticos. Ejemplos de antivirales incluyen, pero sin restricción, aciclovir, ganciclovir, azidotimidina, citidina- arabinósido, ribavirina, rifampicina, amantadina, iododeoxiuridina, foscarnet y trifluridina.

Ejemplos de antifúngicos incluyen, pero sin restricción, azoles (por ejemplo, imidazoles, itraconazol, posaconazol) , micafungina, caspafungina, ácido salicílico, oxiconazol, nitrato, . ciclopirox olamina, cetoconazol, nitrato de miconazol y nitrato de butoconazol. Ejemplos de antibióticos incluyen, pero sin restricción, penicilina y fármacos de la familia de la penicilina de medicamentos antimicrobianos, incluyendo, pero sin restricción, penicilina-G, penicilina-V, feneticilina, ampicilina, amoxicilina, ciclacilina, bacampicilina, hetacilina, cloxacilina, dicloxacilina, meticilina, nafcilina, oxacilina, azlocilina, carbenicilina, mezlocilina, piperacilina, ticarcilina e imipenem; cefalosporina y fármacos de la familia de la cefalosporina, incluyendo, pero sin restricción, cefadroxil, cefazolina, cafalexina, cefalotina, cefapirina, cefradina, cefaclor, cefamandol, cefonicida, cefotetan, cefmetazol, cefoperazona, cefotaxima, ceftizoxima, ceftizona, moxalactam, ceftazidima y cefixima; fármacos aminoglucosídicos y fármacos de la familia de aminoglucósidos, incluyendo, pero sin restricción, estreptomicina, neomicina, canamicina, gentamicina, trobramicina, amicacina y netilmicina; macrólidos y fármacos de la familia de los macrólidos, ejemplificados por la azitromicina, claritromicina, roxitromicina, eritromicina, lincomicina y clindamicina; tetraciclina y fármacos de la familia de la tetraciclina, por ejemplo, tetraciclina, oxitetraciclina, demeclociclina, metaciclina, doxiciclina y minociclina; quinolina y fármacos semejantes a la quinolina, como, por ejemplo, ácido nalidíxico, cinoxacina, norfloxacina, ciprofloxacina, ofloxacina, enoxacino y pefloxacina; péptidos antimicrobianos incluyendo, pero sin restricción, polimixina B, colistina y bacitracina, así como otros péptidos antimicrobianos como defensinas, magaininas, cecropinas y otros, desde que ocurran naturalmente o si resultantes de ingeniería para tornar estos péptidos resistentes a la acción de proteasas patogénicas específicas y otras enzimas de desactivación; otros fármacos antimicrobianos, incluyendo cloranfenicol, vancomicina, rifampicina, metronidazol, voriconazol, fluconazol, etambutol, pirazinamida, sulfonamidas, isoniazida y eritromicina. Cuando una combinación de agentes activos es utilizada, los agentes pueden ser suministrados en combinación en una única especie de composición farmacéutica o, individualmente, en especies diferentes de composiciones farmacéuticas. Además, en la composición farmacéutica puede estar combinado uno o más agentes activos o bioactivos que suministran el equilibrio de dispersión o la capacidad de dispersión del polvo deseado.

La cantidad de agente (s) activo(s), por ejemplo, de anfotericina B, en la composición farmacéutica puede variar. El tenor de agente (s) activo (s) es típicamente por lo menos cerca de 5% del peso, como por lo menos cerca de 10% del peso, por lo menos cerca de 20% del peso, por lo menos cerca de 30% del peso, por lo menos cerca de 40% del peso, por lo menos cerca de 50% del peso, por lo menos cerca de 60% del peso, por lo menos cerca de 70% del peso o por lo menos cerca de 80% del peso, de la cantidad total de la composición farmacéutica. La cantidad de agente (s) activo (s) varía, de una manera general, entre cerca de 0,1% del peso a 100% del peso, como cerca de 5% del peso a 95% del peso, cerca de 10% del peso a cerca de 90% del peso, cerca de 30% del peso a cerca de 80% del peso, cerca de 40% del peso a cerca de 70% o cerca de 50% del peso a cerca de 60% del peso. Como observado arriba, la composición farmacéutica puede incluir uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen, pero sin restricción, lípidos, iones de metales, surfactantes, aminoácidos, carbohidratos, buffers, sales, polímeros y sustancias semejantes, además de combinaciones de los mismos. Ejemplos de lípidos incluyen, pero sin restricción, fosfolípidos, glucolípidos, gangliósidos GMl, esfingomielina, ácido fosfatídico, cardiolipina; lípidos exhibiendo cadenas de polímeros como polietileno glicol, quitina, ácido hialurónico o polivinilpirrolidona; lípidos exhibiendo mono, di y polisacáridosulfonatos; ácidos grasos como ácido palmítico, ácido esteárico y ácido oleico; esteres de colesterol y hemisuccinato de colesterol. En una o más concretizaciones, los fosfolípidos comprenden un fosfolípido saturado, como una o más fosfatidilcolinas. Ejemplos de largos de cadena acil son 16:0 y 18:0 (es decir, palmitoil y estearoil) . El tenor de fosfolípidos puede ser determinado por la actividad del agente activo, el modo de suministro y por otros factores.

Pueden ser utilizados fosfolípidos tanto de origen natural como sintética, en cantidades variadas. Cuando fosfolípidos están presentes, la cantidad es típicamente suficiente para revestir el (los) agente (s) activo (s) con por lo menos una única capa molecular de fosfolípido. De una manera general, el tenor de fosfolípidos varía de cerca de 5% del peso a cerca de 99,9% del peso, como de cerca de 20% del peso a cerca de 80% del peso. Generalmente, fosfolípidos compatibles comprenden aquellos que poseen una transición de fase de gel para cristal líquido superior a cerca de 40 °C, como superior a cerca de 60 °C, o superior a cerca de 80 °C. Los fosfolípidos integrados pueden ser lípidos saturados de cadenas relativamente largas (por ejemplo, C16 - C22) . Ejemplos de fosfolípidos útiles en los preparados estabilizados revelados incluyen, pero sin restricción, fosfoglicéridos, como dipalmitoilfosfatidilcolina, diestearoilfosfatidilcolina, diaraquidoilfosfatidilcolina, dibenzoilfosfaditilcolina, difosfatidil gliceroles, fosfatidilcolinas de cadenas cortas, fosfatidilcolina hidrogenada, Y-100-3 (disponible de Lipoid KG, Ludwigshafen, Alemania) , fosfatidiletanolaminas saturadas de cadenas largas, fosfatidilinositoles saturados de cadena larga, ácido fosfatídico, fosfatidilinositol y esfingomielina . Ejemplos de iones de metales incluyen, pero sin restricción, cationes divalentes, entre eles, calcio, magnesio, zinc, hierro y semejantes. Por ejemplo, cuando fosfolípidos son utilizados, la composición farmacéutica puede comprender también un catión polivalente, como revelado en WO 01/85136 y WO 01/85137, que son incorporadas al presente por referencia en su totalidad. El catión polivalente puede estar presente en una cantidad que efectivamente aumenta la temperatura de fusión (Tm) del fosfolípido, de forma que la composición farmacéutica presente una Tm superior a la temperatura de almacenamiento (Ts) , en por lo menos cerca de 20 °C, como por lo menos cerca de 40 °C. El índice molar del catión polivalente con relación al fosfolípido puede ser de por lo menos cerca de 0,05:1, como de cerca de 0,05:1 a cerca de 2,0:1 o cerca de 0,25:1 a cerca de 1,0:1. Un ejemplo de índice molar de catión polivalente: fosfolípido es de cerca de 0,50:1. Cuando el catión polivalente es el calcio, él puede estar bajo la forma de cloruro de calcio. Aunque el ion de metal, como calcio, sea muchas veces incluido con el fosfolípido, ninguno de ellos es necesario. Como observado arriba, la composición farmacéutica puede incluir uno o más surfactantes. Por ejemplo, uno o más surfactantes pueden estar en la fase líquida, con uno o más asociados a partículas sólidas o a particulados de la composición. "Asociados a" significa que las composiciones farmacéuticas pueden incorporar, absorber, adsorber, ser revestida o ser formada por el surfactante. Surfactantes incluyen, pero sin restricción, compuestos fluorados y no fluorados, como lípidos saturados y no saturados, detergentes no iónicos, bloques de copolímeros no iónicos, surfactantes iónicos y combinaciones de los mismos. Debe ser realzado que, además de los surfactantes antes mencionados, surfactantes fluorados adecuados son comparables a las enseñanzas en el presente y pueden ser utilizados para suministrar los preparados deseados. Ejemplos de detergentes no iónicos incluyen, pero sin restricción, esteres de sorbitan, incluyendo el trioleato de sorbitan (Span™ 85) , sesquioleato de sorbitan, monooleato de sorbitan, monolaurato de sorbitan, monolaurato de polioxietileno (20) sorbitan y monooleato de polioxietileno (20) sorbitan, polioxietileno (2) oleil éter, polioxietileno (2) estearil éter, polioxietileno (4) lauril éter, esteres de glicerol y esteres de sacarosa. Otros detergentes no iónicos adecuados pueden ser fácilmente identificados utilizando la publicación "Emulsifiers and Detergents" de McCutcheon (McPublishing Co., Glen Rock, Nueva Jersey), que es incorporada por referencia al presente en su totalidad. Ejemplos de bloques de copolímeros incluyen, pero sin restricción, copolímeros dibloques y tribloques de polioxietileno y polioxipropileno, incluyendo el poloxámero 188 (Pluronic™ F-68), poloxámero 407 (Pluronic ™ F-127) y poloxámero 338. Ejemplos de surfactantes iónicos incluyen, pero sin restricción, sulfosuccinato de sodio y jabones de ácidos grasos. Ejemplos de aminoácidos incluyen, pero sin restricción, aminoácidos hidrofóbicos. El uso de aminoácidos como excipientes farmacéuticamente aceptables es conocido en el oficio, conforme a lo revelado en WO 95/31479, WO 96/32096 y WO 96/32149, que son incorporadas al presente por referencia.

Ejemplos de carbohidratos incluyen, pero sin restricción, monosacáridos, disacáridos y polisacáridos. Por ejemplo, monosacáridos como dextrosa (anhidro y monohidratada) , galactosa, manitol, D-manosa, sorbitol, sorbosa y semejantes; disacáridos como lactosa, maltosa, sacarosa, trealosa y semejantes; trisacarídeos como rafinosa y semejantes; y otros carbohidratos como almidones (hidroxietilamido) , ciclodextrinas y maltodextrinas. Ejemplos de buffers incluyen, pero sin restricción, tris o citrato. Ejemplos de ácidos incluyen, pero sin restricción, ácidos carboxílicos. Ejemplos de sales incluyen, pero sin restricción, cloruro de sodio, sales de ácidos carboxílicos (por ejemplo, citrato de sodio, ascorbato de sodio, gluconato de magnesio, gluconato de sodio, clorhidrato de trometamina, etc.), carbonato de amonio, acetato de amonio, cloruro de amonio y semejantes. Ejemplos de sólidos orgánicos incluyen, pero sin restricción, alcanfor y semejantes. La composición farmacéutica de una o más concretizaciones de la presente invención pueden incluir también un polímero biocompatible, como polímero biodegradable, copolímero o mezcla u otra combinación de los mismos. A ese respecto, polímeros útiles comprenden poliláctidos, poliláctido-glucólidos, ciclodextrinas, poliacrilatos, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, polivinil alcoholes, polianhidridos, polilactámicos, polivinil pirrolidonas, polisacáridos (dextrans, almidones, quitina, quitosano, etc.), ácido hialurónico, proteínas (albúmina, colágeno, gelatina, etc.). Aquellos con pericia en el oficio evaluarán que, al seleccionar los polímeros apropiados, la eficiencia del suministro de la composición y/o la estabilidad de las dispersiones podrán ser talladas de forma a optimizar la eficacia del (de los) agente (s) activo (s) . Además de los excipientes farmacéuticamente aceptables antes mencionados, puede ser conveniente agregar otros excipientes farmacéuticamente aceptables a la composición farmacéutica para mejorar la rigidez de particulados, el resultado de la producción, la dosis emitida y depósito, la semivida y la aceptación del paciente. Estos excipientes farmacéuticamente aceptables alternativos incluyen, pero sin restricción: colorantes, aromatizantes, buffers, agentes higroscópicos, antioxidantes y estabilizadores químicos. Además, diversos excipientes farmacéuticamente aceptables pueden ser utilizados para estructurar y formar las composiciones de particulados (por ejemplo, partículas de látex) . A ese respecto, será evaluado que componentes que endurecen la composición pueden ser retirados utilizando una técnica polvos-producción como extracción selectiva de solventes. Las composiciones farmacéuticas pueden incluir también mezclas de excipientes farmacéuticamente aceptables. Por ejemplo, mezclas de carbohidratos y aminoácidos están incluidas en el alcance de la presente invención. Las composiciones de una o más concretizaciones de la presente invención pueden asumir formas diferentes, como polvo seco, cápsulas, comprimidos, polvo reconstituido, suspensiones o dispersiones comprendiendo una fase no líquida, como propelentes (por ejemplo, clorofluocarbono, hidrofluoroalcano) . El tenor de humedad del polvo seco puede ser inferior a cerca de 15% del peso, como inferior a cerca de 10% del peso, inferior a cerca de 5% del peso, inferior a cerca de 2% del peso, inferior a cerca de 1% del peso o inferior a cerca de 0,5% del peso. Estos polvos están descritos en WO 95/24183, WO 96/32149, WO 99/16419, WO 99/16420 y WO 99/16422, que son incorporadas al presente por referencia, en su totalidad. Una o más concretizaciones de la invención involucra composiciones homogéneas de anfotericina B, incorporada a un material de matriz con pocas, si existentes, partículas de anfotericina B no incorporadas. Por ejemplo, por lo menos cerca de 40% del peso, por lo menos cerca de 50% del peso, por lo menos cerca de 60% del peso, por lo menos cerca de 70% del peso, por lo menos cerca de 80% del peso, por lo menos cerca de 90% del peso, por lo menos cerca de 95% del peso o por lo menos cerca de 99% del peso de la composición puede comprender particulados incluyendo tanto la anfotericina B como el material de matriz . Sin embargo, en algunos casos, una composición heterogénea puede ser conveniente de forma a suministrar un perfil farmacocínético deseado de la anfotericina B a ser administrada y, en estos casos, una partícula grande de anfotericina B (por ejemplo, diámetro medio de masa de cerca de 3 µm a cerca de 10 µm) puede ser utilizada. Composiciones homogéneas pueden comprender partículas pequeñas de anfotericina B. Partículas de anfotericina B que tengan un diámetro de media inferior a cerca de 3 µm, conforme a lo discutido arriba, pueden ser dispersables y pueden facilitar la producción de composiciones homogéneas de anfotericina B incorporadas al material de la matriz . Fue descubierto que si el diámetro medio de masa de la anfotericina B es por encima de cerca de 3µm, el resultado puede ser una composición heterogénea comprendiendo anfotericina B incorporada al material de la matriz y partículas comprendiendo anfotericina B sin cualquier material de matriz. Estas composiciones heterogéneas exhiben frecuentemente un flujo deficiente del polvo y de dispersibilidad, lo que puede resultar en la variación de dosis. Composiciones hechas de partículas mayores de anfotericina B resultaron también en toxicidad en ratones. Debe ser observado, sin embargo, que distribuciones heterogéneas pueden ser mejoradas a través de procesos de atomización, que pueden conferir una distribución homogénea para partículas mayores de anfotericina B. Considerando lo descrito arriba, en algunas versiones, la composición farmacéutica tiene una alta homogeneidad, la anfotericina B tiene un alto nivel de cristalinidad y el tamaño de - partículas de anfotericina B formando la composición es pequeño. El grado de homogeneidad, el nivel de cristalinidad y el tamaño de partícula pueden ser cualquier uno de los discutidos arriba. Por ejemplo, en una versión, el nivel de cristalinidad es de por lo menos cerca de 50% y el diámetro medio de masa es inferior a cerca de 3 µm. En otra versión, el nivel de cristalinidad es de por lo menos cerca de 70% y el diámetro medio de masa es inferior a cerca de 2,8 µm. En aún otra versión, el nivel de cristalinidad es de por lo menos cerca de 80% y el diámetro medio de masa es inferior a cerca de 2,6 µm. En otra versión aún, el nivel de cristalinidad es de por lo menos cerca de 90% y el diámetro medio de masa es inferior a cerca de 2,4 µm. En algunos casos, sin embargo, el grado de homogeneidad es alto y uno o más de los niveles de cristalinidad y de anfotericina B están fuera de los intervalos discutidos arriba. Por otro lado, en algunos casos, el grado de homogeneidad es bajo y uno o más de los niveles de cristalinidad y de anfotericina B están dentro de los intervalos discutidos arriba. En una versión, la composición farmacéutica comprende anfotericina B incorporada a una matriz de fosfolípidos. La composición farmacéutica puede comprender matrices de fosfolípidos que incorporan el agente activo y que están bajo la forma de particulados con microestructuras huecas y/o porosas, conforme a lo descrito en WO 99/16419, WO 99/16420/, WO 99/16422 antes mencionados y en WO 01/85136 y WO 01/85137, que son incorporadas al presente por referencia, en su totalidad. Las microestructuras huecas y/o porosas son útiles en el suministro de la anfotericina B a los pulmones a causa de la densidad, tamaño y calidades aerodinámicas de las microestructuras huecas y/o porosas que facilitan el transporte profundo en los pulmones durante la inhalación del usuario. Además, microestructuras huecas y/o porosas de fosfolípidos reducen las fuerzas de atracción entre particulados, haciendo más fácil la separación de los aglomerados de la composición farmacéutica durante la aerosolización y mejorando las propiedades de flujo de la composición farmacéutica facilitando el procesamiento.

En una versión, la composición farmacéutica es compuesta de microestructuras huecas y/o porosas que posee una densidad aparente inferior a cerca de 1,0 g/cm , inferior a cerca de 0,5 g/cm3, inferior a cerca de 0,3 g/cm3, inferior a cerca de 0,2 g/cm3 o inferior a cerca de 0,lg/cm3. Al suministrar partículas o particulados con baja densidad aparente, la masa mínima de polvo a ser envasada en un recipiente de dosis unitaria es reducida, eliminando la necesidad de partículas transportadoras. Es decir, la densidad relativamente baja de los polvos de una o más concretizaciones de la presente invención prevé la administración reproducible de dosis relativamente bajas de compuestos farmacéuticos. Además, la eliminación de partículas transportadoras reducirá potencialmente la deposición en la garganta y cualquier efecto "reflejo de defensa" o tose, una vez que partículas transportadoras grandes, por ejemplo, partículas de lactosa, comprimirán la garganta y las vías aéreas superiores en consecuencia de su tamaño. En una versión, la composición farmacéutica está bajo la forma de polvo seco, estando contenida en un recipiente de dosis unitaria que puede ser insertado dentro o cerca del aparato de aerosolización para hacer que la dosis unitaria de la composición farmacéutica sea suministrada bajo la forma de aerosol. Esta versión es útil porque la forma bajo polvo seco puede ser almacenada en estabilidad en su recipiente de dosis unitaria por un largo período de tiempo. En algunos ejemplos, composiciones farmacéuticas de una o más concretizaciones de la presente invención permanecieron estables por lo menos cerca de dos años. En algunas versiones, no fue necesaria refrigeración para obtenerse la estabilidad. En otras versiones, temperaturas reducidas, por ejemplo, de 2 - 8 °C, pueden ser utilizadas para prolongar el almacenamiento en estabilidad. En muchas versiones, la estabilidad de almacenamiento permite aerosolización con una fuente externa de energía. Será evaluado que las composiciones farmacéuticas reveladas en el presente pueden comprender una matriz estructural que exhibe, define o comprende vacíos, poros, defectos, cavidades, espacios, espacios intersticiales, orificios, perforaciones o huecos. La forma absoluta (al contrario de la morfología) de la microestructura perforada no es generalmente fundamental y cualquier configuración general que suministre las características deseadas es considerada como estando dentro del alcance de la invención. De esa forma, algunas concretizaciones comprenden aproximadamente formas esféricas. Sin embargo, particulados colapsados, deformados o fragmentados son también compatibles.

En una versión, la anfotericina B es incorporada a una matriz que forma un particulado distinto y la composición farmacéutica comprende una diversidad de los particulados distintos. El tamaño de los particulados distintos puede ser moldeado de forma que puedan ser administrados eficientemente y/o para que estén disponibles cuando sean necesarios. Por ejemplo, para una composición farmacéutica bajo la forma de aerosol, los particulados deben tener un tamaño que permita que sean transformados en aerosol y suministrados para el tracto respiratorio de usuarios durante su inhalación. En algunas versiones, la composición farmacéutica comprende particulados que poseen un diámetro medio de masa inferior a cerca de 20µm, como inferior a cerca de 10 µm, inferior a cerca de 7 µm o inferior a cerca de 5 µm. Los particulados pueden tener un diámetro aerodinámico medio de masa que varíe de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm, como cerca de 1,5 µm a cerca de 5 µm o cerca de 2 µm a cerca de 4 µm. Fue observada toxicidad en ratones cuando los particulados eran muy grandes. Si los particulados son muy pequeños, un porcentual mayor de los particulados podrá ser exhalado. Considerando lo descrito arriba, en algunas versiones, la composición farmacéutica comprende particulados con un diámetro aerodinámico medio de masa pequeño, la composición farmacéutica tiene alta homogeneidad, la anfotericina B tiene un alto nivel de cristalinidad y el tamaño de las partículas de anfotericina B que forman la composición farmacéutica es menor. El diámetro aerodinámico medio de masa, grado de homogeneidad, nivel de cristalinidad y tamaño de partícula de anfotericina B pueden ser cualquier uno de los discutidos arriba. Por ejemplo, en una versión, el diámetro aerodinámico medio de masa es inferior a cerca de 20 µm, por lo menos cerca de 60% del peso de la composición farmacéutica comprende tanto anfotericina B como material de matriz, el nivel de cristalinidad es de por lo menos cerca de 50% y el diámetro medio de masa es inferior a cerca de 3 µm. En otra versión, el diámetro aerodinámico medio de masa es inferior a cerca de 10 µm, por lo menos cerca de 70% del peso de la composición farmacéutica comprende tanto anfotericina B como matriz del material, el nivel de cristalinidad es por lo menos cerca de 70% y el diámetro medio de masa es inferior a cerca de 2,8 µm. En aún otra versión, el diámetro aerodinámico medio de masa es inferior a cerca de 7 µm, por lo menos cerca de 80% del peso de la composición farmacéutica comprende tanto anfotericina B como material de matriz, el nivel de cristalinidad es por lo menos cerca de 80% y el diámetro medio de masa es inferior a cerca de 2,6 µm. En otra versión aún, el diámetro aerodinámico medio de masa es inferior a cerca de 7µm, por lo menos cerca de 90% del peso de la composición farmacéutica comprende tanto anfotericina B como material de matriz, el nivel de cristalinidad es por lo menos cerca de 90% y el diámetro medio de masa es inferior a cerca de 2,4 µm. En algunos casos, sin embargo, el diámetro aerodinámico medio de masa es pequeño y un o más de la homogeneidad, nivel de cristalinidad y tamaño de partícula de anfotericina B están fuera de los intervalos discutidos arriba. De la misma forma, en otros casos, el diámetro aerodinámico medio de masa es grande y un o más de la homogeneidad, nivel de cristalinidad y tamaño de partícula de anfotericina B están dentro de los intervalos discutidos arriba. Considerando lo discutido arriba, la toxicidad de particulados o partículas de anfotericina B inhalados en ratones es dependiente de varios factores . Aunque no se desee estar preso a la teoría, estos factores parecen incluir, pero sin restricción, el nivel de cristalinidad de la anfotericina B, el tamaño de partícula de anfotericina B utilizado para hacer partículas o particulados inhalados , homogeneidad de particulados inhalados y tamaño de partículas o particulados inhalados . El material de matriz puede comprender un material hidrofóbico o parcialmente hidrofóbico. Por ejemplo, el material de matriz puede comprender un lipidio, como un fosfolípido y/o un aminoácido hidrofóbico, como leucina o tri-leucina. Ejemplos de matrices de fosfolípidos están descritos en WO 99/1619, WO 99/16420, WO 99/16422, WO 01/85136 y WO 01/85137 y en las Patentes Estadounidenses n° 5.874.064; 5.855.913; 5.985.309 y 6.503.480 y en el Requerimiento Estadounidense, co-pendiente y co-perteneciente, n° 10/750.934, protocolizado el 31 de diciembre de 2003, todos incorporados al presente por referencia, en su totalidad. Ejemplos de matrices de aminoácidos hidrofóbicos están descritos en las Patentes Estadounidenses n° 6.372.258 y 6.358.530, y en el Requerimiento Estadounidense n° 10/032.239, protocolizado el 21 de diciembre de 2001, incorporado al presente por referencia, en su totalidad. Cuando fosfolípidos son utilizados como material de matriz, la composición farmacéutica puede comprender también un catión polivalente, conforme a lo revelado en WO 01/85136 y WO 01/85137, incorporadas al presente por referencia en su totalidad. De acuerdo con otra concretización, la cinética de liberación del (de los) agente (s) activo (s) contenidos en la composición es controlada. De acuerdo con una o más concretizaciones, las composiciones de la presente invención suministran liberación inmediata del (de los) agente (s) activo(s). Alternativamente, la composición de otras concretizaciones de la presente invención puede ser suministrada como mezclas no homogéneas del agente activo incorporado a un material de matriz y agente activo no incorporado de forma a suministrar las tasas deseadas de liberación de agente antifúngico. De acuerdo con esta concretización, fórmulas de agentes antifúngicos utilizando proceso de fabricación basado en emulsión, de una o más concretizaciones de la presente invención, tienen la utilidad de aplicaciones de liberación inmediata cuando administradas al tracto respiratorio. La liberación rápida es facilitada por: (a) el área de superficie altamente específica de los polvos con poros de baja densidad, (b) el tamaño pequeño de cristales del fármaco que están incorporados a los mismos y (c) la baja energía de superficie de los particulados. Alternativamente, puede ser deseable construir la matriz del particulado de forma que la liberación prolongada del (de los) agente (s) activo (s) sea afectada. Eso puede ser particularmente deseable cuando el (los) agente (s) activo (s) es rápidamente depurado de los pulmones o cuando se desea una liberación sustentada. Por ejemplo, la naturaleza del comportamiento de fases de moléculas de fosfolípidos es influenciada por la naturaleza de sus estructuras químicas y/o métodos de preparación en la carga inyectable en el secado por aspersión y por las condiciones de secado y por otros componentes de la composición utilizados. En el caso de secado por aspersión de agente (s) activo (s) solubilizados en una vesícula unilamelar pequeña (SUV) o vesícula multilamelar grande (MLV) , el (los) agente (s) activo (s) son encapsulados dentro de múltiples capas dobles y son liberados en el decorrer de un tiempo prolongado . Por otro lado, secado por aspersión de una carga inyectable que comprende gotas emulsionadas y dispersas o agente (s) activo (s), de acuerdo con las enseñanzas en el presente, lleva a una matriz de fosfolípidos con una orden inferior de intervalo, facilitando, de esa forma, una liberación rápida. Aunque no esté vinculado a cualquier teoría en particular, se cree que eso sea debido en parte al hecho de que el (los) agente (s) activo (s) nunca está formalmente encapsulado en el fosfolípido y el hecho de que el fosfolípido está inicialmente presente en la superficie de las gotas emulsionadas bajo la forma de una monocapa (no una bicapa como en el caso de liposomas) . Los particulados secados por aspersión por el proceso de fabricación basado en emulsión de una o más concretizaciones de la presente invención muchas veces poseen un alto grado de desorden.

Además de eso, los particulados secados por aspersión poseen típicamente energías bajas de superficie, donde valores tan bajos cuanto 20 mN/m fueron observados para particulados secados por aspersión de DSPC (determinado por cromatografía gaseosa reversa) . Estudios de diseminación de rayos-X en ángulos pequeños (SAXS) conducidos con particulados secados por aspersión de fosfolípidos mostraron también un alto grado de desorden para el lipidio, con imagen de los picos de diseminación esparcida y escalas de largo que se extendía, en algunos casos, solamente más allá de unas pocas vecinas más cercas. Debe observarse que una matriz que tenga una temperatura alta de transición de fase de gel para cristal líquido no es suficiente, por sí misma, para alcanzar liberación sustentada del (de los) agente (s) activo (s). Tener una orden suficiente para las estructuras de capas dobles es importante también para alcanzar liberación sustentada. Para facilitar una liberación rápida, un sistema de emulsión de alta porosidad (área de superficie alta) , e interacción mínima entre el ingrediente activo y fosfolípido, puede ser utilizado. Un proceso de formación de la composición farmacéutica puede incluir también adiciones de otros componentes de la composición (por ejemplo, polímeros pequeños como Pluronic F-68, carbohidratos, sales, hidrotrópicos) para romper la estructura de bicapa, son también considerados.

Para alcanzar una liberación sustentada, puede ser utilizada la incorporación del fosfolípido en la forma de bicapa, especialmente si el agente activo está encapsulado en la misma. En ese caso, el aumento de la Tm del fosfolípido puede ser ventajoso por la incorporación de iones contrarios divalentes o colesterol. Además de eso, el aumento de la interacción entre el fosfolípido y el ingrediente activo, por la formación de pares de iones (activo con carga negativa + estearilamina, activo con carga positiva + fosfatidilglicerol) tenderían a disminuir la tasa de disolución. Si el activo es anfifílico, interacciones surfactante/surfactante pueden también retardar la disolución del agente activo. La adición de iones contrarios divalentes (por ejemplo, iones de calcio o magnesio) a fosfatidilcolinas saturadas de cadena larga resulta en una interacción entre la parte fosfato con carga negativa del grupo principal zwitteriónico y el ion del metal con carga positiva. Eso resulta en un desplazamiento de agua de hidratación y una condensación del paquete del grupo principal lipídico del fosfolípido y cadenas acil. Además, eso resulta en un aumento en la Tm del fosfolípido. La disminución en la hidratación del grupo principal puede ejercer efectos profundos sobre las propiedades de diseminación de los particulados secados por aspersión de fosfolípidos en contacto con agua. Una molécula completamente hidratada de fosfatidilcolina tendrá una difusión mucho lenta hasta un cristal disperso, vía difusión molecular a través de la fase líquida. El proceso es extremadamente lento porque la solubilidad del fosfolípido en agua es mucho baja (cerca de 10"10 mol/l para DPPC) . Tentativas técnicas anteriores para superar ese fenómeno incluyen homogeneización de los cristales en la presencia del fosfolípido. En ese caso, el alto grado de corte y radio de curvatura de los cristales homogeneizados facilita el revestimiento de los fosfolípidos sobre los cristales. Por otro lado, polvos "secos" de fosfolípidos, de acuerdo con una o más concretizaciones de esta invención, pueden esparcirse rápidamente cuando en contacto con fase líquida, a través de la cual cristales dispersos son revestidos sin necesidad de aplicación de altas energías. Por ejemplo, en la reconstitución, la tensión de superficie de mezclas secadas por aspersión de DSPC/Ca en la interfaz aire/agua diminuye hasta valores de equilibrio (cerca de 20 mN/m) tan rápido cuanto una determinación puede ser hecha. Por otro lado, liposomas de DSPC diminuyen mucho poco la tensión de superficie (cerca de 50 mN/m) a lo largo de un período de horas y es probable que esa reducción sea proveniente de la presencia de productos de degradación de la hidrólisis, como ácidos grasos libres, en el fosfolípido. Ácidos grasos con extremidad única pueden difundir mucho más rápidamente, en la interfaz aire/agua, que el compuesto original hidrofóbico. Por consiguiente, la adición de iones de calcio a fosfatidilcolinas puede facilitar el rápido encapsulado de fármacos cristalinos y con menor energía aplicada. En otra versión, la composición farmacéutica comprende particulados de baja densidad, obtenidos por aspersión y secado simultáneos de nanocristales con una emulsión de perfluorocarbono en agua. Los nanocristales pueden ser formados por fabricación y pueden, por ejemplo, variar en tamaño de cerca de 45 µm a cerca de 80 µm. Ejemplos de perfluorocarbonos incluyen, pero sin restricción, perfluorohexano, perfluorooctil etano, perfluorodecalin, perfluorobutil etano. De acuerdo con las enseñanzas en el presente, las composiciones de particulados serán, de preferencia, suministrados en estado "seco". Es decir, en una o más concretizaciones, los particulados poseerán un tenor de humedad que permita al polvo permanecer química y físicamente estable durante almacenamiento en temperatura ambiente o reducida y que permanezcan dispersables. A ese respecto, existe poco o ningún cambio en el tamaño primario del particulado, tenor, pureza y distribución aerodinámica del tamaño del particulado.

Por lo tanto, el tenor de humedad de los particulados es típicamente inferior a cerca de 10% del peso, como inferior a cerca de 6% del peso, inferior a cerca de 3% del peso o inferior a cerca de 1% del peso. El tenor de humedad es, por lo menos en parte, dictado por la composición y es controlado por las condiciones del proceso empleado, es decir, temperatura de entrada, concentración de alimentación, tasa de bombeo y tipo de agente y concentración de inyección y post-secado. La reducción de agua vecina lleva a mejoras significativas en la dispersibilidad y capacidad de flujo de polvos a base de fosfolípidos, llevando al potencial para suministro extremadamente eficiente de surfactantes en polvo para pulmones o de composición de particulados que comprenda agente activo disperso en el fosfolípido. La mejora de la dispersibilidad permite el uso de instrumentos pasivos de DPI para el suministro eficiente de estos polvos. Aún otra versión de la composición farmacéutica incluye composiciones de particulados que pueden comprender, o ser parcial o completamente revestidos, especies con cargas que prolongan el tiempo de residencia en el punto de contacto o mejorar la penetración a través de mucosas. Por ejemplo, cargas aniónicas son conocidas por favorecer la muco adhesión mientras cargas catiónicas pueden ser utilizadas para asociar el particulado formado con agentes bioactivos con carga negativa, como materiales genéticos. Las cargas pueden ser divididas a través de la asociación o incorporación de materiales polianiónicos o policatiónicos, como ácidos poliacrílicos, polilisina, ácido poliláctico y quitosano. Estas composiciones de dosis unitaria pueden estar contenidas en un recipiente. Ejemplos de recipientes incluyen, pero sin restricción, cápsulas, cartuchos, frascos, ampollas o sistemas de sellado de recipientes hechos de metal, polímero (por ejemplo, plástico, elastómero), vidrio o semejantes. El recipiente puede estar insertado en un instrumento de aerosolización. El recipiente puede tener una forma, tamaño y material adecuado para contener la composición farmacéutica y para suministrar la composición farmacéutica de forma que pueda ser utilizada. Por ejemplo, la cápsula o cartucho puede comprender una pared con un material que no reaccione desfavorablemente con la composición farmacéutica. Además de eso, la pared puede contener un material que permita que la cápsula sea abierta de forma a permitir que la composición farmacéutica quede bajo la forma de aerosol. En una versión, la pared comprende uno o más de gelatina, hidroxipropil metilcelulosa (HPMC) , complejo de polietilenoglicol y HPMC, hidroxipropilcelulosa, agar, hoja de aluminio o semejantes.

En una versión, la cápsula puede comprender secciones unidas telescópicamente, conforme a lo descrito en la Patente Estadounidense n° 4.247.066, incorporada al presente por referencia, en su totalidad. El tamaño de la cápsula puede ser elegido para contener adecuadamente la dosis de la composición farmacéutica. Los tamaños varían generalmente del tamaño 5 al tamaño 000, con diámetros externos variando de cerca de 4,91 mm a 9,97 mm, Las alturas variando de cerca de 11,10 mm a cerca de 26,14 mm y los volúmenes variando de cerca de 0,13mml a cerca de 1,37 ml, respectivamente. Cápsulas adecuadas están disponibles en el mercado, suministradas, por ejemplo, por Shionogi, Qualicaps Co. en Nara, Japón, y Capsugel en Greenwood, Carolina del Sur. Después del envase, una parte superior puede ser colocada sobre la parte inferior para obtenerse la forma de la cápsula y para contener el polvo dentro de la cápsula, conforme a lo descrito en las Patentes Estadounidenses n° 4.846.876 y 6.357.490, y en WO/007572, incorporados al presente por referencia, en su totalidad. Después de la parte superior haber sido colocada sobre la parte inferior, la cápsula puede recibir, opcionalmente, una banda . En una versión, la composición farmacéutica comprendiendo anfotericina B cristalina puede ser aerosolizada de forma que pueda ser suministrada a los pulmones de un paciente durante la inhalación del paciente. De esa manera, la anfotericina B, presente en la composición farmacéutica, es suministrada directamente al local de la infección. Esa es una ventaja sobre administración sistémica. Como el (los) agente (s) activo (s) frecuentemente posee toxicidad renal u otro tipo de toxicidad, minimizar la exposición sistémica es típicamente preferible. Por consiguiente, la cantidad de agente (s) activo (s) que puede ser suministrada para los pulmones es, de preferencia, limitada a la dosis mínima farmacológicamente eficaz. Al administrarse el (los) agente (s) activo (s) directamente en los pulmones, una cantidad mayor puede ser suministrada al local que necesita la terapia a la vez que la exposición sistémica es significativamente reducida. Además de eso, por el suministro predominante de anfotericina B bajo su forma cristalina, la concentración deseada de anfotericina B puede ser mantenida en el local de infecciones en el decorrer de un período de tiempo con posibilidad reducida de la generación de un efecto tóxico dentro de los pulmones . Las composiciones farmacéuticas de una o más concretizaciones de la presente invención no tienen sabor. A ese respecto, aunque aromatizantes sean incluidos, opcionalmente, en la composición, las composiciones frecuentemente no tienen sabor incluso sin un aromatizante. Las partículas, los particulados y composiciones de una o más concretizaciones de la presente invención pueden se hechas por cualquier uno de los diversos métodos y técnicas conocidas y disponibles para aquellos con pericia en el oficio. Como observado arriba, el nivel de cristalinidad de la anfotericina B afecta la actuación. Un técnico experimentado seria capaz de ajustar el nivel de cristalinidad de la anfotericina B por el ajuste de las condiciones para cristalización. Por ejemplo, el nivel de cristalinidad puede ser ajustado variando el solvente, la concentración de anfotericina B, pH, tasa de ajuste de pH, nivel de pureza, temperatura, velocidad de enfriamiento /calentamiento, tiempo de re-cocción, uso de cristales de semillas, velocidad de adición de solventes, velocidad de agitación, concentración/tipo de co-solventes y período de espera durante cristalización. Alternativamente, el nivel de cristalinidad puede ser ajustado por recristalización. Las técnicas de recristalización son conocidas en la técnica. Ejemplos de técnicas de recristalización son descritos a continuación. Durante el proceso de recristalización, la anfotericina B es, de preferencia, protegida de la luz, pudiendo ser disuelta en un solvente, cuyos ejemplos incluyen sistemas de solventes como un comprendiendo metanol, dimetilformamida y ácido cítrico monohidratado. Una vez esencialmente disueltos los sólidos, la solución es opcionalmente filtrada. Después del filtrado, un solvente adicional, por ejemplo, cloruro de metileno, puede ser acrecentado al filtrado. Agua enfriada puede entonces ser añadida, con agitación. La precipitación de la anfotericina B puede ser obtenida ajustando el pH de la solución, por ejemplo, para pH ~7, adicionando una base como la trietanolamina. Aunque no se desee estar preso a la teoría, la tasa de precipitación afecta el nivel de cristalinidad. Una precipitación más lenta resulta generalmente en mayor cristalinidad. De esa forma, para obtener más anfotericina B amorfa, la base puede ser añadida rápidamente, por ejemplo, de una única vez, mezclando. La anfotericina B relativamente amorfa resultante puede entonces ser aislada. Por ejemplo, anfotericina B amorfa puede ser aislada por centrifugación de la mezcla seguida por decantación del sobrenadante. El producto puede ser lavado por resuspensión del bollo en, por ejemplo, metanol enfriado, seguida por centrifugación y decantación. El proceso de lavado puede ser repetido o puede involucrar etapas adicionales de lavado, por ejemplo, utilizando acetona en temperatura ambiente. Para obtener más anfotericina B cristalina, la base puede ser añadida lentamente, por ejemplo, en gotas, mezclando. La mezcla resultante puede entonces ser calentada, por ejemplo, a 44-46 °C por 90 minutos, seguido por enfriamiento, por ejemplo, a temperatura ambiente por 30 minutos y, enseguida, a 2-8 °C por 60 minutos. La forma cristalina puede entonces estar lista para ser aislada. Por ejemplo, la forma cristalina de la anfotericina B puede ser capturada por filtrado al vacío. El producto debe ser lavado, por ejemplo, utilizando metanol a 40% enfriado, seguido por acetona en temperatura ambiente . Una vez aislada y lavada, la anfotericina B puede, enseguida, ser secada. Por ejemplo, la anfotericina B puede ser secada al vacío, por ejemplo, por 1 a 3 días en temperatura ambiente con el producto protegido de la luz . Opcionalmente, durante el proceso de secado, agregados mayores pueden ser rotos, por ejemplo, utilizando una espátula, para facilitar la evaporación de solventes residuales . Como observado arriba, tamaños de partículas menores de anfotericina B son frecuentemente deseados . En muchos casos, la anfotericina B a granel posee un diámetro medio de masa mayor que cerca de 3 , 0 µm, y en muchos casos mayor que cerca de 10 µm. De esa forma, en una o más concretizaciones de la invención, la anfotericina B a granel es sometida a un proceso de reducción de tamaño para reducir el diámetro medio de masa para abajo de 3 µm, antes de ser utilizada. Procesos adecuados para reducción de diámetros son conocidos en el oficio e incluye métodos de procesamiento de fluido supercrítico, conforme revelados en WO 95/01221, WO 96/00610 y WO 98/36825, incorporadas al presente por referencia, en su totalidad; métodos de molienda criogénica, molienda húmeda, ultrasonido, homogeneización por alta presión, microfluidificación, cristalización y, en procesos revelados en la Patente Estadounidense n° 5.858,410, incorporada al presente por referencia, en su totalidad. En una o más concretizaciones de la invención, un método para producir una composición farmacéutica comprende el suministro de partículas de anfotericina como material inicial, en el que por lo menos cerca de 50% de la anfotericina B está bajo la forma cristalina. En otras versiones, por lo menos cerca de 60%, por lo menos cerca de 70%, por lo menos cerca de 80%, por lo menos cerca de 90%, por lo menos cerca de 95% o por lo menos cerca de 99% de la anfotericina B está bajo la forma cristalina. Partículas de anfotericina B del material inicial pueden estar suspendidas en una carga inyectable líquida, comprendiendo uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. La carga inyectable en suspensión es, enseguida, secada, como por secado por aspersión, de forma a producir particulados que comprenden anfotericina B cristalina y uno o más de los excipientes farmacéuticamente aceptables. En una versión, en los particulados producidos comprendiendo anfotericina B, por lo menos cerca de 70%, por lo menos cerca de 80%, por lo menos cerca de 85%, por lo menos cerca de 90%, por lo menos cerca de 95% o por lo menos cerca de 99% de la anfotericina B, en los particulados producidos, está bajo la forma de cristales. En una versión, el nivel de cristalinidad del material inicial de las partículas de anfotericina B es determinado. Por ejemplo, antes de la introducción de la carga inyectable, el patrón de difracción por rayos-X del polvo puede ser determinado. Alternativamente, puede ser utilizado para determinación del nivel de cristalinidad la espectroscopia Raman , sorción dinámica de vapor, el calor de la calorimetría de solución o microcalorimetría isotérmica, como reconocido por aquellos peritos en el oficio. Si el nivel de cristalinidad está por encima de un valor predeterminado, como los porcentuales arriba, entonces el material inicial es utilizado. Si el nivel de cristalinidad está abajo del valor predeterminado, el material inicial puede, por ejemplo, ser descartado o sufrir nuevo proceso de cristalización. En otras versiones, la amorficidad de la anfotericina B es determinada. Luego, en una versión, un método para producción de una composición farmacéutica comprende el suministro de partículas de anfotericina como material inicial, en las que menos de cerca de 50% de la anfotericina B está bajo la forma amorfa. En otras versiones, menos de cerca de 40%, menos de cerca de 30%, menos de cerca de 20%, menos de cerca de 10%, menos de cerca de 5% o menos de cerca de 1% de la anfotericina B está bajo la forma amorfa. Partículas de anfotericina B del material inicial pueden estar suspendidas en una carga inyectable líquida que comprende, opcionalmente, uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. La carga inyectable en suspensión es, enseguida, secada, como por secado por aspersión, de forma a producir particulados que comprendan anfotericina B y uno o más de los excipientes farmacéuticamente aceptables. En una versión, en las partículas producidas comprendiendo anfotericina B, por lo menos cerca de 70% de la anfotericina B en los particulados producidos está bajo la forma de cristales. En otras versiones, por lo menos cerca de 80%, por lo menos cerca de 85%, por lo menos cerca de 90%, por lo menos cerca de 95% o por lo menos cerca de 99% de la anfotericina B en los particulados producidos está bajo la forma de cristales. La amorficidad puede ser determinada utilizando técnicas conocidas. Por ejemplo, la amorficidad puede ser determinada utilizando espectroscopia por infrarrojo, espectroscopia Raman, sorción dinámica de vapor, investigación de la calorimetría diferencial y técnicas semejantes. Si la amorficidad está abajo de un valor predeterminado, como los porcentuales arriba, entonces el material inicial es utilizado. Si la amorficidad está por encima del valor predeterminado, el material inicial puede ser descartado o sufrir nuevo proceso de cristalización. En aún otra versión, puede ser conducido un nuevo proceso de cristalización como parte del proceso de preparación, en lugar o además de la determinación del nivel de cristalinidad. El nuevo proceso de cristalización puede ser conducido por la disolución de la anfotericina B en un solvente adecuado, como etanol u otro solvente polar, siendo la solución lentamente deshidratada de forma a generar cristales de anfotericina B o hacer que ocurra la precipitación de cristales de anfotericina B de la solución. En una versión, puede ser utilizado un fluido supercrítico para dispersar y extraer simultáneamente el material cristalino, conforme a lo revelado en WO 95/01221, WO 96/00610 y WO 98/36825, incorporadas al presente por referencia en su totalidad. En otra versión, puede ser utilizado un proceso de secado por aspersión multizonal, conforme a lo revelado en WO 01/00312, incorporada al presente por referencia en su totalidad, para formar cristales de la anfotericina B. Otra versión involucra la determinación del nivel de cristalinidad de las partículas o particulados producidos, que pueden comprender anfotericina B cristalina y, opcionalmente, excipiente farmacéuticamente aceptable y/o otro(s) ingrediente (s) activo (s). Si el nivel de cristalinidad de las partículas o particulados producidos está por encima de un porcentual predeterminado, como por encima de cerca de 70%, por encima de cerca de 80%, por encima de cerca de 90% o por encima de cerca de 99%, entonces las partículas o particulados producidos pueden ser liberados para administración a un paciente. Si el nivel de cristalinidad está abajo del valor predeterminado, entonces las partículas o particulados producidos pueden ser descartados o reformulados . La composición farmacéutica puede ser producida utilizando diversas técnicas conocidas. Por ejemplo, la composición puede ser formada por secado por aspersión, liofilización, molienda (por ejemplo, molienda húmida o a seco) y técnicas semejantes.

En el secado por aspersión, el preparado a ser secado por aspersión o la carga inyectable puede ser cualquier solución, suspensión grosera, mezcla, dispersión coloidal o pasta que puede ser atomizada utilizando el aparato elegido para secado por aspersión. En el caso de agentes insolubles, la carga inyectable puede comprender una suspensión conforme a la descrita arriba. Alternativamente, puede ser utilizada una solución diluida y/o uno o más solventes en la carga inyectable . En una o más concretizaciones, la carga inyectable comprenderá un sistema coloidal como una emulsión, emulsión reversa, microemulsión, emulsión múltiple, dispersión de partícula o mezcla. En una versión, la anfotericina B y el material de la matriz fueron añadidos a una carga inyectable líquida para producir una solución, suspensión o emulsión de carga inyectable. La carga inyectable fue, enseguida, secada por aspersión de forma a producir particulados secos comprendiendo el material de la matriz y la anfotericina B cristalina. Procesos adecuados de secado por aspersión son conocidos en el oficio, por ejemplo, conforme a lo revelado en WO 99/16419 y en las Patentes Estadounidenses n° 6.077.543, 6.051.256, 6.001.336, 5.985.248 y 5.976.574, incorporadas al presente por referencia en su totalidad.

Independiente de los componentes seleccionados, la primera etapa en la producción de particulados comprende, típicamente, la preparación de la carga inyectable. Si es pretendido que un particulado a base de fosfolípidos actúe como vehículo de la anfotericina B, el (los) agente (s) activo (s) seleccionado (s) puede (n) ser introducido (s) en un líquido, como agua, de forma a producir una suspensión concentrada. La concentración de anfotericina B y agentes activos opcionales depende típicamente de la cantidad de agente necesaria presente en el polvo final y la actuación del instrumento de suministro empleado (por ejemplo, la dosis de partículas finas para un inhalador dosimetrado (MDI) o un inhalador de polvo seco (DPI) ) . Cualquier (Cualesquiera) agente (s) activo (s) adicional (les) puede ser incorporado a un único preparado de carga inyectable y secado por aspersión de forma a suministrar una única especie de composición farmacéutica comprendiendo una diversidad de agentes activos. Por otro lado, agentes activos aislados pueden ser añadidos a existencias en separado y secados por aspersión en separado para suministrar una diversidad de especies de composición farmacéutica, con composiciones diferentes. Estas especies aisladas pueden ser añadidas al medio de suspensión o polvo seco, con una dispensación en compartimentos en cualquier proporción deseada, siendo colocados en el sistema de suministro en aerosol conforme a lo descrito abajo. Catión polivalente puede ser combinado con la suspensión de anfotericina B combinada con la emulsión de fosfolípidos, o combinada con una emulsión de aceite en agua formada en un recipiente en separado. La anfotericina B puede también sufrir dispersión directamente en la emulsión. Por ejemplo, catión polivalente y fosfolípido pueden ser homogeneizados en agua caliente destilada (por ejemplo, 70 °C) , utilizando un mezclador-triturador mecánico adecuado (por ejemplo, mezclador modelo T-25 Ultra-Turrax) , en la velocidad de 8000 rpm por 2 a 5 min. Típicamente, 5 a 25 g de fluorocarbono es añadido, gota a gota, a la solución surfactante en dispersión, mientras ocurre la mezcla. El perfluorocarbono, conteniendo catión resultante en la emulsión en agua puede ser entonces procesado utilizando un homogeneizador de alta presión para reducir el tamaño de las partículas. Típicamente, la emulsión es procesada en cinco pasajes distintos de 12.000 a 18.000 PSI y mantenida en cerca de 50 °C a cerca de 80 °C. Cuando el catión polivalente es combinado con una emulsión de aceite en agua, la estabilidad de dispersión y dispersibilidad de la composición farmacéutica secada por aspersión pueden ser mejoradas utilizando un agente de expansión, conforme a lo descrito en WO 99/16419, incorporada al presente por referencia, en su totalidad. Ese proceso forma una emulsión, opcionalmente estabilizada por la incorporación de un surfactante, que comprende típicamente gotas , con tamaño submicra , de agente de expansión inmiscibles en agua, dispersas en una fase líquida permanente. El agente de expansión puede ser un compuesto fluorinado (por ejemplo, perfluorohexano, bromuro de perfluorooctil, perfluorooctil etano, perfluorodecalin, perfluorobutil etano) , que evapora durante el proceso de secado por aspersión, dejando hacia atrás particulados leves, de una manera general, aerodinámicamente huecos y porosos. Otros agentes líquidos de expansión adecuados incluyen aceites no fluorinados, cloroformo, fluorocarbonos Freon®, etil acetato, alcoholes, nitrógeno y gases de dióxido de carbono. El agente de expansión puede ser emulsificado con un fosfolípido. Aunque las composiciones farmacéuticas puedan ser formadas utilizando un agente de expansión conforme a lo descrito arriba, será apreciado, que, en algunas circunstancias, no es necesario agente de expansión y la dispersión en medio líquido de la anfotericina B y/o de excipientes farmacéuticamente activos y surfactante (s) son secados por aspersión directamente. En esos casos, la composición farmacéutica puede poseer ciertas propiedades fisicoquímicas (por ejemplo, alta cristalinidad, temperatura elevada de fusión, actividad de superficie, etc.) que torna particularmente adecuado su uso en estas técnicas . Cuando sea necesario, co-surfactantes, como poloxámero 188 o span 80, pueden ser dispersos en esa solución anexa. Adicionalmente, excipientes farmacéuticamente aceptables, como azúcares y almidones, pueden también ser añadidos. La(s) carga (s) inyectable (s) pueden entonces ser alimentada en un aparato de secado por aspersión.

Típicamente, la carga inyectable es aspergida en una corriente de aire caliente filtrado que hace que el solvente se evapore y conduce el producto secado para un colector. El aire utilizado es, enseguida, expulsado, por agotamiento, junto con el solvente. Desecadores por aspersión fabricados comercialmente por Büchi Ltd. o Niro Corp. pueden tener su uso modificado de forma a producir la composición farmacéutica. Ejemplos de métodos y sistemas adecuados de secado por aspersión para producción del polvo seco de una o más concretizaciones de la presente invención son revelados en las Patentes Estadounidenses n° 6.077.540, 6.851,256, 6.081,336, 5.985.248 y 5.976.574, incorporadas al presente por referencia, en su totalidad. Las condiciones operacionales del aparato de secado por aspersión, como temperatura de entrada y salida, velocidad de alimentación, presión de atomización, flujo del aire de secado y configuración de la abertura pueden ser ajustadas para producir el tamaño de partícula necesario y el resultado de producción de los particulados secos resultantes. La selección de aparatos adecuados y de condiciones de procesamiento está al alcance de un técnico habilidoso considerando las enseñanzas en el presente y pueden ser obtenidas sin experiencia excesiva. Composiciones ejemplares son: temperatura de entrada de aire entre cerca de 60 °C y cerca de 170 °C; entrada de aire entre cerca de 40 °C y cerca de 120 °C; velocidad de alimentación entre cerca de 3 ml/min y cerca de 15 ml/min; flujo de aire de aspiración de cerca de 300 l/min y flujo de aire de atomización entre cerca de 25 l/min y cerca de 50 l/min. Las composiciones variarán, evidentemente, en función del tipo de equipo utilizado. De todas formas, el uso de estos métodos y de semejantes permite la formación de particulados aerodinámicamente leves con diámetros apropiados para depósito de aerosoles en el pulmón. Microestructuras huecas y/o porosas pueden ser formadas por secado por aspersión, conforme a lo revelado en WO/16419, incorporada al presente por referencia. El proceso de secado por aspersión puede llevar a la formación de una composición farmacéutica que comprenda particulados con una pared porosa relativamente fina, definiendo un espacio interno grande. El proceso de secado por aspersión es frecuentemente más ventajoso con relación a otros procesos visto que los particulados formados presentan una probabilidad menor de romperse durante el procesamiento o durante la desaglomeración. Composiciones farmacéuticas útiles en una o más concretizaciones de la presente invención pueden ser formadas, alternativamente, por liofilización. La liofilización es un proceso de secado por congelamiento, en la que el agua es sublimada de la composición después de haber sido congelada. El proceso de liofilización es frecuentemente utilizado porque sustancias biológicas o farmacéuticas, relativamente instables en soluciones líquidas, pueden ser secadas sin la exposición a temperaturas elevadas y, enseguida, almacenadas secadas, lo que ofrece menos problemas de estabilidad. Con relación a una o más concretizaciones de esta invención, estas técnicas son particularmente compatibles con la incorporación de péptidos, proteínas, material genético y otras macromoléculas naturales y sintéticas en composiciones farmacéuticas, sin comprometimiento de la actividad fisiológica. El bollo liofilizado, conteniendo una estructura fina semejante a espuma, puede ser micronizado utilizando técnicas conocidas en el oficio de forma a suministrar particulados del tamaño deseado.

Las composiciones de una o más concretizaciones de la presente invención pueden ser administradas por técnicas conocidas, como inhalación, administración oral, intramuscular, intravenosa, intratraqueal, intraperitoneal, subcutánea e intradérmica. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas de una o más concretizaciones de la invención son eficaces en el tratamiento, incluso tratamiento coadyuvante, de infecciones pulmonares y/o nasales por hongos . La anfotericina B actúa como agente antifúngico en el tratamiento de infección pulmonar y/o nasal por hongos y/o para impedir el surgimiento de una infección pulmonar y/o nasal por hongos . Se cree que la anfotericina B actúe retardando el crecimiento y multiplicación de hongos susceptibles. Si las concentraciones de anfotericina B son suficientemente altas, ella puede también destruir los hongos. La actuación de la anfotericina B parece ocurrir en la membrana celular del hongo, alterando la integridad de la membrana celular. En una versión, las composiciones, cuando inhaladas, penetran en las cavidades nasales y/o vías aéreas de los pulmones, para alcanzar concentraciones eficaces de anfotericina B, como en las secreciones infectadas y en el tejido pulmonar, incluyendo en el líquido del revestimiento epitelial, macrófagos alveolares y neutrófilos. Además, las dosis de las composiciones inhaladas son típicamente más pequeñas que aquellas administradas por otras vías y necesarias para obtener efectos antifúngicos semejantes, en virtud del direccionamiento eficiente de la composición inhalada directamente en el local de la infección fúngica.

En una o más concretizaciones de la invención, una composición farmacéutica comprendiendo anfotericina B, en la que una cantidad predominante de la anfotericina B está bajo la forma cristalina, es administrada a los pulmones de un paciente que necesita la misma. Por ejemplo, el paciente puede haber recibido el diagnóstico de infección pulmonar y/o nasal por hongos o puede haber sido determinado que el paciente es susceptible a una infección pulmonar y/o nasal por hongos. Ejemplos de infecciones pulmonares y/o nasales por hongos incluyen aspergilosis , blastomicosis, candidiasis diseminada, coccidioidomicosis , criptococosis, histoplasmosis, mucormicosis, esporotricosis , algunas infecciones causadas por Candida spp y otras conocidas en el oficio. De esa forma, las composiciones farmacéuticas de una o más concretizaciones de la presente invención pueden ser utilizadas para tratar y/o para la profilaxis de una amplia gama de pacientes. Un paciente para el que es adecuado el tratamiento y/o profilaxis conforme a lo descrito en el presente es cualquier paciente mamífero, en necesidad del mismo, de preferencia, si este mamífero es un humano. Ejemplos de pacientes incluyen, pero sin restricción, pacientes pediátricos, pacientes adultos y pacientes geriátricos. Los pacientes están, típicamente, en riesgo de adquirir una infección fúngica. En una versión, las composiciones farmacéuticas de una o más concretizaciones de la presente invención son útiles en la profilaxis de infecciones pulmonares y/o nasales por hongos, como para pacientes inmunodeprimidos, por ejemplo, individuos que se someten a quimioterapia o radioterapia para cáncer, receptores de transplantes de órganos, pacientes que sufren de condiciones que afectan adversamente el sistema inmunológico, como HIV o cualquier otra condición que predisponga un paciente a infecciones pulmonares y/o nasales por hongos. Las composiciones farmacéuticas pueden ser utilizadas también en el tratamiento de infecciones pulmonares y/o nasales en actividad, como aspergilosis (más frecuentemente causada por Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus nidulans y Aspergillus terreus) , coccidioidomicosis , histoplasmosis, blastomicosis y por otros hongos patogénicos . En una versión, una composición farmacéutica adecuada para forma aerosolizada, comprendiendo anfotericina B, es administrada hasta la cavidad pulmonar y/o nasal de un paciente, de forma a resultar en una concentración de anfotericina B más alta que una concentración mínima inhibitoria (MIC) del hongo. La MIC es definida como la concentración más baja de anfotericina B que inhibe el crecimiento de hongos. La MIC puede estar expresa en un valor específico de concentración o como un intervalo de concentraciones. Un método de acuerdo con una o más concretizaciones de la presente invención administra una cantidad suficiente de la composición farmacéutica con vistas a obtener una concentración pulmonar de anfotericina B que esté encuadrada en el intervalo de MIC o que esté por encima de un valor específico de la MIC. En otra versión, la concentración pulmonar pretendida de anfotericina B excede el intervalo de MIC. En otra versión, la concentración pulmonar pretendida de anfotericina B excede el valor más bajo en un intervalo de MIC. En otra versión, la concentración pretendida de anfotericina B es una concentración que exceda el intervalo de MIC y que sea, por lo menos, cerca de 2 veces, como por lo menos cerca de 3 veces, por lo menos cerca de 4 veces o por lo menos cerca de 5 veces el mayor valor del intervalo de la MIC. En una versión, el intervalo de concentración pulmonar pretendida de anfotericina B fluctúa por encima y abajo de un valor que va de cerca de 2 a cerca de 0,20 veces el valor de la mitad del intervalo de la MIC, como el que va de cerca de 3 a 10 veces el valor de la mitad del intervalo de la MIC o cerca de 5 veces el valor de la mitad del intervalo. En una versión, las concentraciones de anfotericina B y las determinaciones de MIC tienen como base las concentraciones en el líquido del revestimiento epitelial. En otra versión, las concentraciones de anfotericina B y las determinaciones de MIC tienen como base las concentraciones en el tejido sólido pulmonar. Como utilizado en el presente, salvo si se especifica de otra forma, el valor de MIC será considerado con relación al valor específico, cuando un valor específico de MIC es determinado, y será considerado con relación a un valor en la mitad del intervalo cuando un intervalo de valores de MIC es determinado. Determinaciones de MIC pueden ser efectuadas de acuerdo con procesos conocidos en el oficio. En una versión, la composición farmacéutica comprendiendo anfotericina B es administrada de forma que una concentración pretendida sea mantenida a lo largo de un período de tiempo deseado. Por ejemplo, fue determinado que una rutina de administración que mantenga una concentración pretendida de anfotericina B, es decir, de por lo menos cerca de 2 veces, como por lo menos cerca de 3 veces, el valor determinado de MIC, sea eficiente para el tratamiento y/o profilaxis contra infecciones pulmonares y/o nasales por hongos. Fue determinado también que, por el mantenimiento de la concentración de anfotericina en la concentración pulmonar pretendida por un período de, como mínimo, cerca de 1 semana, como por lo menos cerca de 2 semanas o por lo menos cerca de 3 semanas, una infección pulmonar y/o nasal por hongos puede ser efectivamente tratada en algunos pacientes. Adicional o alternativamente, por el mantenimiento de la concentración pulmonar de anfotericina B en la concentración pretendida durante los períodos arriba, en pacientes con inmunodepresión, la probabilidad del paciente desarrollar una infección pulmonar y/o nasal por hongos puede ser reducida. En muchos casos, el período de tratamiento y/o el período de profilaxis puede ser extendido para ser mayor que cerca de 1 mes, mayor que cerca de 2 meses, mayor que cerca de 3 meses (por ejemplo, 17 semanas) , mayor que cerca de 4 meses o período más largo. En una versión, el método de administración de la anfotericina B cristalina es favorecido por las propiedades de retención pulmonar de la composición farmacéutica, que comprende anfotericina B. A ese respecto, una o más concretizaciones de la presente invención involucra la descubierta de que la anfotericina B de la composición farmacéutica tiene una semivida de residencia en el pulmón de (1) por lo menos cerca de 10 horas, como por lo menos cerca de 15 horas o por lo menos cerca de 20 horas en el líquido epitelial pulmonar, conforme a lo determinado por lavado broncoalveolar y/o (2) por lo menos cerca de 1 semana, como por lo menos cerca de 2 semanas, en el tejido pulmonar, conforme a lo determinado por homogeneización de tejido pulmonar. Como la anfotericina B posee un tiempo de semivida pulmonar largo y como dosis bajas pueden ser utilizadas en una o más concretizaciones, la exposición sistémica (concentraciones sanguínea/plasmática de anfotericina B) permanece baja lo suficiente para evitar toxicidad renal y/o hepática. Por ejemplo, después de una dosis de 5 mg de anfotericina B inhalada, el nivel sanguíneo de la anfotericina B puede permanecer inferior a cerca de 1000 ng/ml, como inferior a cerca de 750 ng/ml, inferior a cerca de 500 ng/ml, inferior a cerca de 250 ng/ml, inferior a cerca de 100 ng/ml, inferior a cerca de 80 ng/ml, inferior a cerca de 60 ng/ml o inferior a cerca de 40 ng/ml. Considerando el tiempo de semivida largo, una vez alcanzada la concentración pretendida de anfotericina B en el tejido pulmonar, es necesario limitar la dosificación para mantener la concentración de la anfotericina B en el tejido pulmonar. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede ser administrada una vez por semana de modo que mantenga la concentración pulmonar de anfotericina B dentro de lo pretendido.

La dosificación necesaria y su frecuencia para mantenimiento de la concentración de anfotericina B dentro de la concentración pretendida dependen de la composición y de la concentración de la anfotericina dentro de la composición. En cada uno de los regímenes de administración, la dosificación y frecuencia son determinadas para una dada concentración pulmonar de anfotericina B, mantenida dentro de un cierto intervalo pretendido. En una versión, la anfotericina B puede ser administrada semanalmente. En esta versión, la dosificación semanal de anfotericina B varía de cerca de 2 mg a cerca de 75 mg, como de cerca de 2 mg a cerca de 50 mg, cerca de 4 mg a cerca de 25 mg, cerca de 5 mg a cerca de 20 mg y cerca de 7 mg a cerca de 10 mg. La dosis puede ser administrada durante una única inhalación o puede ser administrada durante varias inhalaciones. Las fluctuaciones de concentración pulmonar de anfotericina B pueden ser reducidas por la administración de la composición farmacéutica con más frecuencia o puede ser aumentada por la administración de la composición farmacéutica menos frecuentemente. Por consiguiente, la composición farmacéutica de una o más concretizaciones de la presente invención puede ser administrada de cerca de tres veces al día a cerca de una vez al mes, como de cerca de una vez al día a cerca de una vez cada dos meses, cerca de una vez cada dos días a cerca de una vez por semana y cerca de una vez por semana.

[0192] En una versión, la composición farmacéutica es administrada profilácticamente a un paciente que posiblemente tendrá su sistema inmunológico deprimido. Por ejemplo, un paciente que se someterá a terapia con medicación inmunosupresora, como un paciente aguardando un transplante de medula ósea, puede ser tratado profilácticamente con una composición farmacéutica comprendiendo anfotericina B cristalina, con vistas a reducir la probabilidad de desarrollo de infección fúngica durante el período de riesgo de depresión inmunológica. En esta versión, la administración de anfotericina B es iniciada con un tiempo suficiente antes del paciente tener su sistema inmunológico deprimido de forma a permitir que la concentración pulmonar de anfotericina B alcance la concentración pretendida antes o durante el período de depresión inmunológica. Cuando una dosis es administrada una vez por semana, el período de profilaxis puede variar de cerca de 1 semana a cerca de 20 semanas, en función de la composición y dosificación. Sin embargo, en una o más concretizaciones de la invención, el tiempo para concentraciones eficientes de anfotericina B, en términos de profilaxis, es disminuido ya sea por el suministro de altas dosis de anfotericina B durante el período inicial de profilaxis y/o por la administración de dosis más frecuentemente durante el período inicial de profilaxis (por ejemplo, dosis de ataque) . En esta versión, dosis adicionales son administradas durante la primera semana de terapia. Por ejemplo, dosis pueden ser administradas en el 1°, 2 A 3o y 4o día (o 4 dosis en el Io día) y, enseguida, cada siete días después del mismo. Esa carga inicial permite que las concentraciones pulmonares pretendidas de anfotericina B sean alcanzadas en menos tiempo. De esa forma, el tiempo para obtenerse una profilaxis efectiva es reducido y un paciente puede iniciar su período de depresión inmunológica en menos tempo. En algunos ejemplos, un paciente puede tornarse inmunodeprimido después de 1-4 días, con reducción significante de la probabilidad de desarrollar una infección pulmonar y/o nasal por hongos. Adicional o alternativamente, la dosificación administrada durante el período antes de la supresión inmunológica puede ser más alta que la dosificación para mantenerse la concentración pulmonar pretendida de anfotericina B (por ejemplo, dosis de ataque) . Por ejemplo, en una versión, la dosis inicial puede ser por lo menos cerca de dos veces la dosis de equilibrio, una vez que la concentración pulmonar pretendida de anfotericina B haya sido alcanzada. De esa forma, en una versión, la anfotericina B es administrada como dosis de ataque, seguida por dosis de mantenimiento. La dosis de ataque de anfotericina puede variar, por ejemplo, de cerca de 5 mg a cerca de 75 mg, como de cerca de 10 mg a cerca de 50 mg, de cerca de 15 mg a cerca de 40 mg o de cerca de 20 mg a cerca de 30 mg, como a cerca de 25 mg. Las dosis de mantenimiento pueden ser administradas regularmente, por ejemplo, semanalmente después de la dosis de ataque. La dosis de mantenimiento varía típicamente de cerca de 2 mg a cerca de 20 mg, como de cerca de 3 mg a cerca de 15 mg o de cerca de 4 mg a cerca de 10 mg, como cerca de 5 mg. El ataque precoz puede también ser conveniente cuando se trata un paciente que haya sido diagnosticado con infección pulmonar y/o nasal por hongos . Por el ataque precoz, la concentración pulmonar pretendida de anfotericina B es alcanzada en menos tempo que cuando ningún ataque precoz es administrado. Por consiguiente, el tratamiento de la infección pulmonar y/o nasal por hongos puede ser más rápidamente iniciado o suministrado. En un método terapéutico específico, la profilaxis de infecciones fúngicas pulmonares y/o nasales es efectuada en pacientes que se someten a terapia inmunosupresora. De acuerdo con esa versión, el paciente recibe la administración de por lo menos cerca de 5 mg, como de cerca de 5 mg a cerca de 10 mg de anfotericina B en aerosol durante la inhalación del paciente, por lo menos cerca de dos veces por semana durante un período inicial . La anfotericina B en aerosol puede ser administrada por lo menos tres veces por semana durante el período inicial . En una versión, el período inicial puede durar de por lo menos cerca de una semana a cerca de tres semanas . Después del período inicial, es administrada al paciente la misma dosificación, pero menos frecuentemente. Por ejemplo, la anfotericina B en aerosol puede ser administrada una vez cada dos semanas y, de preferencia, una vez por semana. Después del período inicial, o cerca de su término, la terapia inmunosupresora puede ser iniciada. El segundo período de administración es continuado de forma que la concentración pulmonar pretendida de anfotericina B sea mantenida, por lo menos, durante el período de riesgo de la inmunodepresión, y por más tiempo si es necesario, o si hay el desarrollo de una infección fúngica pulmonar y/o nasal . Adicional o alternativamente, la dosificación administrada durante el primer período puede ser mayor que la dosificación administrada durante el segundo período. Por ejemplo, durante el primer período, puede ser administrada de cerca de 10 mg a cerca de 20 mg de anfotericina B y una cantidad menor, como de cerca de 5 mg a cerca de 10 mg, es administrada durante el segundo período. Opcionalmente, un tercer período de dosificación puede ser suministrado, en el que la dosis es administrada con menos frecuencia y/o en menor cantidad que en el segundo período. El tercer período de dosificación puede ser iniciado cerca del final de un período de inmunodepresión, como ser iniciado cuando la terapia inmunosupresora es finalizada o reducida, en términos de gravedad. En una versión, la concentración de anfotericina B es mantenida por un período de tiempo con una concentración por encima de una concentración mínima inhibitoria determinada, como descrito en el Requerimiento Estadounidense n° 10/751.342, protocolizado el 31 de diciembre de 2003, incorporado al presente, por referencia, en su totalidad. La concentración pulmonar de anfotericina B puede ser o la concentración en el revestimiento epitelial o la concentración de anfotericina B en el tejido pulmonar sólido, siendo la última la de preferencia. En algunas versiones, la concentración en el tejido pulmonar sólido es de por lo menos cerca de 4 µg/g, como por lo menos de cerca de 9 µg/g, y puede variar de cerca de 4,5 µg/g a cerca de 20 µg/g, como de cerca de 9 µg/g a cerca de 15 µg/g. Para profilaxis, la cantidad de anfotericina B por dosis puede ser la eficiente para impedir infección pulmonar y/o nasal por hongos y varía, de una manera general, de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 5,0 mg/kg, como de cerca de 0,4 mg/kg a cerca de 4,0 mg/kg o de cerca de 0,7 mg/kg a cerca de 3,0 mg/kg. La composición farmacéutica puede ser administrada a un paciente en cualquier régimen que sea eficiente para impedir infección pulmonar por hongos . Regímenes ilustrativos de profilaxis incluyen la administración de un polvo seco antifúngico, conforme a lo descrito en el presente, de 1 a 21 veces por semana a lo largo de 1 a seis semanas, seguido, si es necesario, por administración posterior de una a dos veces por semana. En la Figura 1 es mostrado un ejemplo de una concretización de la presente invención para administración de anfotericina B, predominantemente en aerosol, en la que es exhibida una carga profiláctica. El valor de MIC para anfotericina B, en esa versión, fue determinado como variando de cerca de 0,5 µg/g a cerca de 4 µg/g, conforme a lo mostrado por el bloque 300. El valor de la mitad del intervalo de MIC del 300 es de cerca de 2,25 µg. La curva 301 muestra la previsión de una concentración pulmonar de anfotericina B de acuerdo con un determinado régimen de administración. Conforme se puede observar, la concentración de anfotericina B alcanza una concentración pulmonar anticipada de anfotericina B en el intervalo 302, que está por encima del intervalo 300 de MIC y es por lo menos dos veces mayor que el valor de la mitad del intervalo de MIC del 300. La concentración pulmonar pretendida de anfotericina B del intervalo 302 puede, en esta versión, variar de 4 µg/g a 50 µg/g, de preferencia de 4,5 µg/g a 20 µg/g. En la versión específica, la concentración pulmonar pretendida de anfotericina B del intervalo 302 es un intervalo de 9 µg/g a 15 µg/g y fluctúa alrededor del valor de una concentración que es de cerca de cinco veces el valor de la mitad del 300 del intervalo 300 de MIC. El mantenimiento de la concentración pulmonar de anfotericina B dentro de un intervalo pretendido de concentración de anfotericina B, de acuerdo con una o más concretizacíones de la presente invención, es ventajoso, en términos de eficacia en el tratamiento y profilaxis contra infecciones fúngicas, además de ser más seguro que el tratamiento convencional . La Figura 2 muestra el resultado previsto de la concentración plasmática 400 de anfotericina B durante administración de anfotericina B de acuerdo con una o más concretizaciones de la invención. Conforme se puede observar, las concentraciones de anfotericina B son significativamente inferiores a las concentraciones 401 de concentración mínima de toxicidad, aumentando de esa forma la seguridad de la administración. Para tratamiento de un paciente con infección fúngica pulmonar y/o nasal, la cantidad por dosis de anfotericina B administrada puede ser una cantidad que sea eficiente para el tratamiento de la infección. La cantidad de anfotericina para el tratamiento de infecciones será, de una manera general, mayor que aquella utilizada para prevención y variará, típicamente, de cerca de 0,01 mg/kg a 7,0 mg/kg, como de cerca de 0,2 mg/kg a cerca de 6 , 0 mg/kg o de cerca de 0,8 mg/kg a cerca de 5,0 mg/kg. En un régimen de tratamiento ejemplar, un polvo antifúngico, de acuerdo con una o más concretizaciones de la invención, puede ser administrado de cerca de 1 a cerca de 8 veces por día, de preferencia de cerca de 2 a cerca de 6 veces por día, durante un período de cerca de 7 a cerca de 28 días. En el tratamiento de esas condiciones respiratorias por hongos, las composiciones farmacéuticas son típicamente administradas en dosis que son de cerca de 3 a cerca de 10 o más veces a MIC de los hongos patogénicos causadores. De una manera general, la dosis de anfotericina suministrada a un paciente variará de cerca de 2 mg a cerca de 400 mg diarias, como de cerca de 10 mg a 200 mg diarias, en función de la condición que está siendo tratada, de la edad y del peso del paciente y de factores semejantes. Aunque no se desee estar preso a la teoría, el suministro de la anfotericina B de acuerdo con una o más concretizaciones de la invención, la toxicidad local de la anfotericina B puede ser reducida por la disminución de la tasa de disolución de la anfotericina B y/o por el aumento del depósito hasta el pulmón, evitando la toxicidad local en el pulmón superior. Luego, se cree que la administración de anfotericina B cristalina es más segura que la administración de la anfotericina B predominantemente bajo forma amorfa. Además, la administración de particulados inhaladores menores, formados a partir de partículas menores de anfotericina B, tiende a mejorar la seguridad. Cuando dosis mayores son administradas, la seguridad se transforma en una cuestión más importante. De esa forma, se sugiere que anfotericina B con nivel más alto de cristalinidad, tamaño menor de partículas y tamaños menores de partículas o particulados inhalados sean utilizados para dosis más altas. Por ejemplo, para una dosis superior a 50 mg, un profesional experto podrá desear utilizar una composición en la que el nivel de cristalinidad de la anfotericina B sea por lo menos de cerca de 90%, el diámetro medio de masa de la anfotericina B sea inferior a cerca de 2,8 µm y la partícula o particulado inhalado tenga un DAMM inferior a cerca de 2,8 µm. Cuando partículas o particulados sólidos, comprendiendo anfotericina B, son administrados a los pulmones, fue determinado que es conveniente que la tasa de disolución de las partículas o particulados sólidos dentro de los pulmones sea controlada. Cuando la tasa de disolución es inconvenientemente alta, agregados solubles súpermoleculares se forman en locales dentro de los pulmones. Estos agregados solubles pueden, en algunos casos, ser tóxicos para el tejido pulmonar. Sin embargo, cuando la tasa de disolución es suficientemente baja, existe una probabilidad menor de que se formen estos agregados solubles tóxicos. Aunque no se desee estar preso a la teoría, se cree que el suministro de partículas o particulados sólidos, comprendiendo anfotericina B cristalina, diminuye la tasa de disolución cuando comparado a la anfotericina B en su forma amorfa. Además, se descubrió que las concentraciones pulmonares de anfotericina B en su forma cristalina pueden ser mantenidas en concentraciones suficientemente altas de forma a suministrar un efecto terapéutico contra infecciones fúngicas pulmonares y/o nasales, a la vez que disminuye o impide el desarrollo de agregados solubles tóxicos. Luego, en una versión, la composición farmacéutica puede ser suministrada a los pulmones de un paciente en la forma de polvo seco. De esa forma, la composición farmacéutica comprende un polvo seco que puede ser eficientemente suministrado a las regiones profundas del pulmón o para otro local pretendido. Esta composición farmacéutica está bajo la forma de polvo seco comprendiendo partículas o particulados con un tamaño seleccionado para permitir la penetración en los alvéolos de los pulmones. En algunos casos, es conveniente suministrar una dosis unitaria, como dosis de 5 mg o 10 mg, o más altas, de anfotericina B para el pulmón en una única inhalación. Los particulados del polvo seco hueco o poroso de fosfolípidos descritos arriba permite que dosis de cerca de 5 mg o más altas, frecuentemente por encima de cerca de 10 mg, y algunas veces por encima de cerca de 25 mg sean suministradas en una única inhalación y de forma ventajosa. Alternativamente, una dosificación puede ser suministrada a lo largo de dos o más inhalaciones. Por ejemplo, una dosificación de 10 mg puede ser suministrada por medio de dos dosis unitarias de 5 mg cada y las dos dosis unitarias pueden ser inhaladas en separado. Las dispersiones de las composiciones farmacéuticas en polvo pueden ser administradas utilizando un aparato de aerosolización. El aparato de aerosolización puede ser un nebulizador, un inhalador dosimetrado, un aparato de instilación de dosis líquida o un inhalador de polvo seco. La composición farmacéutica en polvo puede ser suministrada por un nebulizador conforme a lo descrito en WO 99/16420, por un inhalador dosimetrado conforme a lo descrito en WO 99/16422, por un aparato de instilación de dosis líquida conforme a lo descrito en la WO 99/16421 y por un inhalador de polvo seco conforme a lo descrito en el Requerimiento de Patente Estadounidense n° 09/6888.311, protocolizado el 22 de junio de 2001 y en WO 99/16419, en WO 02/83220, en Patente Estadounidense n° 6.546.929 y en el Requerimiento de Patente Estadounidense n° 10/616.448, protocolizado el 08 de julio de 2003, incorporados al presente, por referencia, en su totalidad. De esa forma, un inhalador puede comprender un depósito conteniendo las partículas o particulados y propelente, en el que el inhalador comprende una válvula de medición que se comunica con el interior del depósito. El propelente puede ser un hidrofluoroalcano. La composición farmacéutica de una o más concretizaciones de la presente invención mejoró típicamente la eficiencia de la dosis emitida. De esa forma, dosis altas de la composición farmacéutica pueden ser suministradas utilizando una variedad de aparatos y técnicas de aerosolización. La dosis emitida (DE) de esos polvos puede ser superior a cerca de 30%, como superior a cerca de 40%, superior a cerca de 50%, superior a cerca de 60% o superior a cerca de 70%. Un ejemplo de aparato de aerosolización de polvo seco, particularmente útil en la aerosolización de una composición farmacéutica 100, de acuerdo con una o más concretizaciones de la presente invención, es mostrado esquemáticamente en la Figura 3A. El aparato de aerosolización 200 comprende una caja 205, que define una cámara 210 que tiene una o más entradas de aire 215 y una o más salidas de aire 220. El tamaño de la cámara 210 es ajustado para contener una cápsula 225 que contiene una composición farmacéutica que puede transformarse en aerosol, comprendiendo anfotericina B cristalina. Un mecanismo de perforación 230 comprende un elemento para perforación 235, que puede moverse dentro de la cámara 210. Cerca o vecina a la salida 220, existe una sección terminal 240 que puede tener el tamaño ajustado y hecha para encajarse en la boca o nariz del usuario de forma que él pueda inhalar a través de una abertura 245 en la sección terminal 240, que se comunica con la salida 220. El aparato de aerosolización de polvo seco 200 utiliza la corriente de aire a través de la cámara 210 para transformar la composición farmacéutica en aerosol en la cápsula 225. Por ejemplo, la Figura 3A-3E ilustra la operación de una versión de un aparato de aerosolización 200, en el que la corriente de aire a través de la entrada 215 es utilizada para transformar la composición farmacéutica en aerosol, y esta, bajo la forma de aerosol circula a través de la salida 220 de forma que pueda ser suministrada al usuario a través de la abertura 245 en la sección terminal 240. El aparato de aerosolización del polvo 200 es mostrado en su condición inicial en la Figura 3A. La cápsula 225 es posicionada dentro de la cámara 210 y la composición farmacéutica es contenida dentro de la cápsula 225. Para que el aparato de aerosolización 200 sea utilizado, la composición farmacéutica en la cápsula 225 es expuesta para permitir que sea transformada en aerosol . En la versión de las Figuras 3A-3E, el mecanismo para perforación 230 es empurrado hacia adentro de la cámara 210, por una fuerza aplicada 250 al mecanismo para perforación 230. Por ejemplo, un usuario puede hacer una presión contra la superficie 255 del mecanismo para perforación 230 de forma a hacer que el mecanismo para perforación 230 desplace dentro de la caja 205 y para que el elemento de perforación 235 entre en contacto con la cápsula 225 en la cámara 210, conforme a lo mostrado en la Figura 3B. Continuando a aplicar la fuerza 250, el elemento de perforación 235 es empurrado hacia adentro y a través de la pared de la cápsula 225, conforme a lo mostrado en la Figura 3C. El elemento de perforación puede comprender una o más puntas agudas 252 para facilitar la entrada a través de la pared de la cápsula 225. El mecanismo para perforación 230 es, enseguida, retraído para la posición mostrada en la Figura 3D, dejando una abertura 260 a través de la pared de la cápsula 225 para exponer la composición farmacéutica en la cápsula 225. Enseguida, aire u otro gas circula a través de una entrada 215, conforme a lo mostrado por las flechas 265 en la Figura 3E. La corriente de aire hace que la composición farmacéutica se transforme en aerosol. Cuando el usuario hace una inhalación 270 a través de la sección terminal 240, la composición farmacéutica en aerosol es suministrada al tracto respiratorio del usuario. En una versión, la corriente de aire 265 puede ser provocada por la inhalación del usuario 270. En otra versión, aire comprimido u otro gas puede ser eyectado en la entrada 215 haciendo que circule aire para la aerosolización 265. Una versión específica del aparato de aerosolización de polvo seco 200 es descrita en las Patentes Estadounidenses n° 4.069.819 y 4.995.385, incorporadas al presente, por referencia, en su totalidad. En ese montaje, la cámara 210 comprende un eje longitudinal que reposa, de una manera general, en la dirección de la inhalación y la cápsula 225 es insertada longitudinalmente dentro de la cámara 210 de forma que el eje longitudinal de la cápsula pueda ser paralelo al eje longitudinal de la cámara 210. Las entradas 215 comprenden una diversidad de huecos con dirección tangencial . Cuando un usuario hace una inhalación a través de la pieza final, hace que el aire externo atraviese los espacios tangenciales. Esa corriente de aire circula dentro de la cámara 210 de manera a hacer que la composición farmacéutica deje la cápsula 225 y se mezcle a la corriente de aire circulante. Esta versión es particularmente eficiente para transformar en aerosol dosis altas de la composición farmacéutica. En una versión, la cápsula 225 gira dentro de la cámara 210 de manera que el eje longitudinal de la cápsula permanezca en un ángulo inferior a 80 grados, y de preferencia inferior a 45 grados, con el eje longitudinal de la cámara. El movimiento de la cápsula 225 en la cámara 210 puede ser causado por el hecho de que el ancho de la cámara 210 sea inferior al largo de la cápsula 225. En una versión específica, la cámara 210 comprende una sección cerrada que termina en una extremidad. Durante la corriente del aire circulante en la cámara 210, la extremidad anterior de la cápsula 225 entra en contacto y se apoya en la división y una pared lateral de la cápsula 225 entra en contacto con la extremidad y desplaza y/o gira a lo largo de la extremidad. Ese movimiento de la cápsula es particularmente eficiente para forzar una cantidad grande de la composición farmacéutica a través de una o más aberturas 260 en la parte posterior de la cápsula 225. En otra versión pasiva de inhalador de polvo seco, el aparato de aerosolización de polvo seco 200 puede ser configurado de manera diferente de la mostrada en las Figuras 3A-3E. Por ejemplo, la cámara 210 puede tener el tamaño y la forma ajustados para recibir la cápsula 225 de forma que esta sea ortogonal a la dirección de la inhalación, conforme a lo descrito en la Patente Estadounidense n° 3.991.761, incorporada al presente, por referencia, en su totalidad. También conforme a lo descrito en la Patente Estadounidense n° 3.991.761, el mecanismo para perforación 230 puede perforar ambas extremidades de la cápsula 225, de manera que el aire circule a través de la cápsula conforme a lo descrito, por ejemplo, en las Patentes Estadounidenses n° 4.338.931 y 5.619.985. En otra versión, la aerosolización de la composición farmacéutica puede ser obtenida por gas presurizado circulando a través de las entradas, conforme a lo descrito, por ejemplo, en las Patentes Estadounidenses n° 5.458.135, 5.785.049 y 6.257.233, o propelente, conforme a lo descrito en WO 00/72904 y Patente Estadounidense n°4.114.615, incorporadas al presente, por referencia, en su totalidad. Esos tipos de inhaladores de polvo seco son, de una manera general, referidos como inhaladores activos de polvo seco. La composición farmacéutica revelada en el presente puede ser administrada también a los pasajes aéreos pulmonares y/o nasales de un paciente por medio de aerosolización, como con un inhalador dosimetrado. El uso de esos preparados estabilizados suministra una reproducibilidad superior y un depósito mejorado en el pulmón, conforme a lo revelado en WO 99/16422, incorporada al presente, por referencia, en su totalidad. MID son muy conocidos en la técnica y pueden ser empleados también para administración de anfotericina B. MDI activados por la respiración, así como aquellos que comprenden otros tipos de mejorías que fueron, o serán, desarrollados, son compatibles también con la composición farmacéutica de una o más concretizaciones de la presente invención. Nebulizadores son conocidos en la técnica y pueden ser empleados fácilmente para la administración de las dispersiones reivindicadas sin experiencias excesivas. Nebulizadores activados por la respiración, así como aquellos que comprenden otros tipos de mejorías que fueron, o serán, desarrolladas son compatibles también con las dispersiones estabilizadas, contempladas como estando en el alcance de una o más concretizaciones de la presente invención. Junto con las concretizaciones antes mencionadas, las dispersiones estabilizadas de una o más concretizaciones de la presente invención pueden ser utilizadas también junto con nebulizadores, conforme a lo revelado en WO 99/16420, incorporada al presente, por referencia, en su totalidad, de forma a suministrar un medicamento bajo la forma de aerosol que puede ser administrado a los pasajes aéreos pulmonares y/o nasales de un paciente en necesidad del mismo. Junto con DPI, MDI y nebulizadores, será apreciado que las dispersiones estabilizadas de una o más concretizaciones de la presente invención pueden ser utilizadas junto con instilación de dosis líquida o técnicas de LDI, conforme reveladas, por ejemplo, en WO 99/16421, incorporada al presente, por referencia, en su totalidad. La instilación de dosis líquida involucra la administración directa de una dispersión estabilizada al pulmón. A ese respecto, administración pulmonar y/o nasal directa de compuestos bioactivos es particularmente eficiente en el tratamiento de disturbios, especialmente en aquellos con circulación vascular deficiente de partes afectadas de un pulmón que reduce la eficiencia del suministro intravenoso del fármaco. Con relación a LDI, las dispersiones estabilizadas son utilizadas, de preferencia, junto con ventilación líquida parcial o ventilación líquida total. Además, una o más concretizaciones de la presente invención puede comprender también la introducción de cantidad terapéuticamente benéfica de un gas fisiológicamente aceptable (como óxido nítrico u oxígeno) en la microdispersión farmacéutica antes, durante o después de la administración.

El tiempo para dosificación es típicamente corto. Para una única cápsula (por ejemplo, dosis de 5 mg) , el tiempo total de dosificación es normalmente inferior a cerca de 1 minuto. Una dosis con 2 cápsulas (por ejemplo, 10 mg) generalmente lleva cerca de 1 minuto. Una dosis con 5 cápsulas (por ejemplo, 25 mg) puede llevar cerca de 3,5 minutos para ser administrada. Luego, el tiempo para dosificación puede ser inferior a cerca de 5 minutos, como inferior a cerca de 4 minutos, inferior a cerca de 3 minutos, inferior a cerca de 2 minutos o inferior a cerca de 1 minuto. La descripción arriba dispuesta será más plenamente entendida, usando como referencia los siguientes Ejemplos. Estos Ejemplos son, sin embargo, meramente representativos de métodos para prácticas de una o más concretizaciones de la presente invención y su lectura no debe limitar el alcance de la invención.

Ejemplo 1 Variabilidad en términos de Nivel de Cristalinidad de Anfotericina B entre Lotes Diferentes Este Ejemplo involucró la determinación de valores porcentuales de cristalinidad de diversos lotes de anfotericina B por difracción cuantitativa de rayos-X del polvo. Este Ejemplo muestra el intervalo del nivel de cristalinidad para lotes diferentes de anfotericina B. Equipo y materiales Equipo Recipiente de muestra Aparato de difracción de rayos-X, modelo XRD-6000 de Shimadzu Materiales Patrón de referencia de silicona, NIST (National Institute of Standards and Technology) , 640c. Fluoruro de litio, tamaño de partícula < 5 µm. Patrón de anfotericina B cristalina, tamizado para fracción < 48 µm Anfotericina B "amorfa", tamizada para fracción < 48 µm Vehículo en polvo (DSPC/CaCl2, en un índice molar de 2:1) . Método Fue efectuada la verificación de la alineación del aparato de difracción de rayos-X, modelo XRD-6000 de la Shimadzu, con el patrón de referencia de silicona. Durante la verificación de la alineación, la hendidura de divergencia fue establecida en Io, la hendidura de esparcido fue establecida en 1,0° y la hendidura de recepción fue establecida en 0,15 mm.

Después del aparato de difracción haber sido calibrado, fueron obtenidos datos de difracción de rayos-X de polvo en patrones de calibración y lotes de cristalinidad desconocida (tamaño de muestra de cerca de 60 mg) . Fueron utilizados los siguientes montajes para obtención de estos datos: Tiempo de permanencia: 2 segundos (barrido con tiempo fijado) Tamaño de paso: 0,02°2? Intervalo de barrido: 3-42 °2? Hendiduras : hendidura de divergencia igual a 0,5°, hendidura de esparcido igual a Io y hendidura de recepción igual a 0,3 mm. Para preparar puntos de calibración para determinar la cristalinidad de la anfotericina B en muestras, fue utilizado un método de patrón interno. El patrón interno fue LiF. Fueron preparadas mezclas físicas de los patrones de cristalina y de amorfa con ángulo abierto de haces de rayos-X. En lo adelante, en este Ejemplo, el patrón de amorfa con ángulo abierto de haces de rayos-X será referido como "amorfo" . Esas mezclas físicas fueron, enseguida, fijadas con LIF a 20% del peso. El patrón de cristalino fue seleccionado entre diversos lotes de anfotericina B altamente cristalina. Con base en una comparación cualitativa de patrones de difracción de rayos-X de polvo, el material con el menor fondo amorfo fue seleccionado. Un patrón de amorfo fue preparado por molienda criogénica del material cristalino (es decir, el mismo lote de anfotericina B fue utilizado tanto para los patrones de amorfo como para de cristalina de anfotericina B) . Ambos patrones fueron tamizados para fracciones inferiores a 48 µm, antes de la preparación de mezclas físicas. Las mezclas físicas fueron preparadas en 40±5% UR (20-25 °C) . Todo el pesaje fue efectuado en una balanza analítica con una resolución de, como mínimo, 0,01 mg. Análisis de Datos El índice de las intensidades integradas de picos de difracción de anfotericina B cristalina con relación a un pico de LiF fue calculado a partir del patrón de difracción de cada mezcla física fijada con LiF. El índice integrado de intensidad integrada, IIR, es suministrado por la ecuación: I LiF donde, I AmB,cr e ILiF son las intensidades integradas de los picos de referencia seleccionados de Anfotericina B y de LiF, respectivamente. Un único pico de difracción (38 a 39,5°2? fue elegido para LiF y un intervalo angular estrecho fue elegido para anfotericina B (12, 75-16 , 2.5°2?) . Solo una pareja de picos de anfotericina B fue utilizada porque eliminó la necesidad de diseñar/interpolar una curva basal y estos picos eran sensibles a cristalinidad incipiente. Los picos fueron integrados utilizando el programa Jade (MDI Inc.), versión 7.1.2. Resultados y Discusión La Tabla 1 muestra los resultados de cristalinidad de diversos lotes de anfotericina B. La variancia máxima del método del ingrediente activo fue de cerca de ±10% de cristalina, siendo dependiente del porcentual de cristalinidad. Aunque no se desee estar preso a la teoría, debido a las densidades aparentes extremadamente diferentes de los patrones seleccionados, la incertidumbre en los resultados proviene de la variabilidad en la compresión utilizada para llenar el recipiente de muestras. Una mejora en la precisión puede ser posiblemente obtenida utilizando una masa menor de muestra (resultando en menor necesidad para compresión de muestra) .

Tabla 1 Ejemplo 2 Preparación de Particulados de Anfotericina B Secados por Aspersión Los particulados de anfotericina B fueron preparados por un proceso en dos etapas. En la primera etapa, 10,52g de anfotericina B (Alpharma, Copenhague, Dinamarca), 10,12 g de diestearoil fosfatidilcolina (DSPC) (Genzyme, Cambridge, MA) y 0,84 g de cloruro de calcio (JT Baker, Phillipsburg, NJ) fueron dispersos en 1045 g de agua desionizada caliente (T = 70 °C) , utilizando un mezclador Ultra-Turrax (modelo T-25) a una velocidad de 10.000 rpm por 2 a 5 minutos. La mezcla continuó hasta que el DSPC y la anfotericina B, visualmente, parecieran estar dispersos. 381 g de perfluorooctil etano (PFOE) fueron, enseguida, añadidos lentamente, cerca de 50 - 60 ml/min, durante la mezcla. Después de haber sido concluida la adición, la dispersión de la emulsión/fármaco fue mezclada por un período adicional de por lo menos 5 minutos, a 12.000 rpm. La emulsión grosera fue, enseguida, pasada a través de un homogeneizador de alta presión (Avestin, Ottawa, Canadá) a 12.000 - 18.000 psi para 3 pasos, seguidos por 2 pasos a 20.000 - 23.000 psi. La emulsión fina resultante fue utilizada como carga inyectable en la segunda etapa, es decir, secado por aspersión en un aparato Niro Mobile Minor. Fueron utilizadas las siguientes condiciones de aspersión: Flujo total = 70 SCFM, temperatura de entrada = 110 °C, temperatura de salida = 57 °C, bomba de alimentación = 38 ml/min, presión del atomizador = 105 psig, flujo del atomizador = 12 SCFM. Un polvo amarillento circulante fue colectado utilizando un separador de ciclón. La eficiencia de la colecta fue del 60%. El diámetro geométrico de los particulados de anfotericina B fue confirmado por difracción por láser (Sympatec Helos, Clausthal-Zellerfeld, Alemania) , en la que un diámetro medio volumétrico (VMD) de 2,44 µm fue encontrado. El análisis de microscopia electrónica de barrido (SEM) mostró que los polvos eran formados por particulados pequeños porosos con superficie extremadamente áspera. No hubo evidencias de cristales de anfotericina B no incorporados en las 5 imágenes de SEM del polvo de cada colector. Análisis de calorimetría diferencial de barrido de los particulados secos revelaron que la Tm del diestearoil fosfatidilcolina, presente en el polvo, era de 78 °C, semejante a lo observado para diestearoil fosfatidilcolina limpio cuando secado por aspersión. Ejemplo 3 Aerosolización de los Particulados de Anfotericina B secados por Aspersión Los particulados de anfotericina B secos resultantes, preparados en el Ejemplo 2, fueron colocados manualmente en cápsulas #2 de HPMC (Shionogi, Japón) que fueron dejadas en reposo para equilibrarse en 15-20% UR, por la noche, en temperatura ambiente. Para el llenado fue utilizada una masa de cerca de 10 mg, que representaba cerca de ^ del volumen de llenado de la cápsula #2 de HPMC. Las distribuciones de tamaño aerodinámico de particulados fueron determinadas gravimétricamente en un impactador en cascada Andersen (ACl) . Las distribuciones de tamaño de particulados fueron medidas en flujos de 28,3 l/min (es decir , un esfuerzo de inhalación confortable) y 56,6 l/min (es decir , esfuerzo de inhalación forzado), utilizando el dispositivo de DPI Turbospin®, descrito en las Patentes Estadounidenses en los 4.069.819 y 4.995.385, incorporadas en el presente, por referencia, en la totalidad. Un volumen total de 2 litros fue retirado a través del dispositivo. En flujos más altos, dos ACl fueron utilizados, en paralelo, con un flujo calibrado de 28,3 l/min y un flujo total a través del dispositivo de 56,6 l/min. En ambos casos, el montaje representa condiciones en las que las placas del impactador ACl son calibradas. Fueron observadas características excelentes de aerosoles, conforme comprobadas por un DAMM inferior a 2,6 µm y FPF <3,3µm , superior a 72%. El efecto del flujo sobre el desempeño fue evaluado también (Figura 4) utilizando el dispositivo de DPI Turbospin® (PH&T, Italia) , operado a 56,6 l/min en los 2 ACl, usados en paralelo. Ninguna diferencia expresiva, con relación al perfil de depósito, fue observada en flujos más altos, demostrando una dependencia mínima en el flujo. Este ejemplo antes mencionado ilustra que la presente aerosolización de polvo es independiente de flujo, lo que llevaría a una dosificación más reproducible en el paciente. Ejemplo 4 Efecto de Almacenamiento sobre Aerosolización de Particulados de Anfotericina B Los particulados de anfotericina B secos resultantes, preparados en el Ejemplo 2, fueron colocados manualmente en cápsulas #2 de HPMC (Shionogi, Japón) que fueron dejadas en reposo para equilibrarse en 15-20% UR, por la noche, en temperatura ambiente. Para el llenado fue utilizada una masa de cerca de 10 mg, que representaba cerca de % del volumen de llenado de la cápsula #2 de HPMC. Las cápsulas llenas fueron colocadas en frascos de vidrio identificados individualmente que fueron embalados en una bolsa aluminizada lacrada y almacenados, subsecuentemente a 25 °C/60%UR o 40 °C/75%UR. Fueron efectuadas mediciones de dosis emitida (DE) , utilizando el dispositivo de DPI Turbospin®, descrito en las Patentes Estadounidenses en- los 4.069.819 y 4.995.385, operado en el flujo ideal de muestreo de 60 l/min y utilizando un volumen total de 2 litros. Fue determinado un total de 10 mediciones para cada variante de almacenamiento . Las distribuciones de tamaño aerodinámico de particulados fueron determinadas, gravimétricamente, en un impactador en cascada Andersen (ACl) . Las distribuciones de tamaño de particulados fueron medidas en flujos de 28,3 l/min, utilizando el dispositivo de DPI Turbospin®,y un volumen total de 2 litros. Fueron observadas características excelentes de aerosoles, conforme comprobadas por una DE media de 93% ± 5,3%, DAMM = 2,6 µm y FPF <3,3µm = 72% (Figuras 5 y 6) . Ningún cambio expresivo en la aerosolización (DE, DAMM o FPF) fue observado después de almacenamiento en temperatura y humedad elevadas, demostrando excelentes características de estabilidad. Los requisitos actuales de la USP para desempeño de DE estipulan que > 90% de las dosis suministradas deben estar incluidas en ±25% del declarado en el rótulo, con menos de 10% de las dosis por encima de ±25%, pero incluidas en ±35%. Una minuta reciente de orientación publicada por el FDA propone que los limites sean disminuidos, de forma que >90% de las dosis suministradas estén incluidas en ±20% de lo declarado en el rótulo, con ninguna de ellas fuera de ±25%. En términos estadísticos, un DPR de 6% seria necesario para atender las especificaciones propuestas del FDA. No sólo los resultados del ejemplo arriba dispuesto se encuentran dentro de las directrices actuales, sino también están dentro de los límites de las directrices propuestas. De esa forma, la composición posee buena dispersibilidad, características de aerosol y estabilidad. Ejemplo 5 Particulados de Anfotericina B secados por Aspersión utilizando Diversas Fosfatidilcolinas Particulados secos por aspersión comprendiendo cerca de 50% del peso de anfotericina B fueron preparados utilizando diversas fosfatidilcolinas (PC) como surfactante, siguiendo el proceso de dos etapas, descrito en el Ejemplo 2. Las composiciones fueron preparadas utilizando dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) (Genzyme, Cambridge, MA) , diestearoil fosfatidilcolina (DSPC) (Genzyme, Cambridge, MA) y SPC-3 (Lipoid KG, Ludwigshafen, Alemania) . La solución de alimentación fue preparada utilizando el equipo y condiciones idénticos a los descritos en el mismo. La composición de anfotericina con 50% del peso es la siguiente: Anfotericina B 0,733 g PC 0,714 g CaCl2 60 mg PFOB 32 g Agua DI 75 g La emulsión resultante multiparticulada fue utilizada como carga inyectable para la segunda etapa, es decir, secado por aspersión en un Desecador por Aspersión Mini B-191 (Büchi, Flawil, Suiza) . Fueron empleadas las siguientes condiciones nominales de aspersión: aspiración = 100%, temperatura de entrada = 85 °C, temperatura de salida = 60 °C, bomba de alimentación = 1,9 ml/min, presión del atomizador = 60-65 psig, flujo del atomizador = 30-35 cm. La corriente de aspiración (69-75%) fue ajustada para mantener una presión de agotamiento en la bolsa de 30 - 31 mbar. Polvos amarillos circulando libremente fueron colectados utilizando un separador patrón de ciclón. El diámetro geométrico de los particulados de anfotericina B fue medido por difracción por láser (Sympatec Helos, Clausthal-Zellerfeld, Alemania) , en la que el diámetro medio volumétrico (VMD) varió de 2,65 a 2,75 µm. El análisis de microscopia electrónica de barrido (SEM) mostró que los polvos eran formados por particulados pequeños porosos con superficie extremadamente áspera.

Distribuciones de tamaño aerodinámico de particulados fueron determinadas gravimétricamente, utilizando un impactador en cascada Andersen (ACl), vea Figura 7. Distribuciones de tamaño de particulados fueron medidas en flujos de 56,6 l/min (es decir, esfuerzo de inhalación forzado), utilizando el dispositivo de DPI Turbospin®. Un volumen total de 2 litros fue retirado a través del dispositivo. Dos ACl fueron utilizados, en paralelo, con un flujo calibrado de 28,3 l/min y un flujo total a través de los dispositivos de 56,6 l/min. Características semejantes de aerosol fueron observadas en la anfotericina B producida con los 3 tipos de fosfatidilcolinas, con DAMM inferiores a 2,5 µm y FPF <3,3µm superior a 72%. Este ejemplo mencionado arriba ilustra la flexibilidad de la técnica usada para la composición, de forma que produzca polvos de anfotericina B, independiente del tipo de fosfatidilcolina utilizada. Ejemplo 6 Preparación de particulados de Anfotericina B secados por Aspersión con 70% del peso Particulados de anfotericina fueron preparados siguiendo el proceso de dos etapas, descrito en el Ejemplo 2. La solución de alimentación fue preparada utilizando el equipo y condiciones idénticos a los descritos en el mismo. La composición de anfotericina con 70% del peso es la siguiente: Anfotericina B 0,70 g DSPC 0,265 g CaCl2 24 mg PFOB 12 g Agua DI 35 g La emulsión resultante multiparticulada fue utilizada como carga inyectable para la segunda etapa, es decir, secado por aspersión en un Desecador por Aspersión Mini B-191 (Büchi, Flawil, Suiza) . Fueron empleadas las siguientes condiciones de aspersión: aspiración = 100%, temperatura de entrada = 85 °C, temperatura de salida = 60 °C, bomba de alimentación = 1,9 ml/min"1, presión del atomizador = 60-65 psig, flujo del atomizador = 30-35 cm. La corriente de aspiración (69-75%) fue ajustada para mantener una presión de agotamiento en la bolsa de 30 - 31 mbar. Fue colectado un polvo amarillo circulando libremente utilizando un separador patrón de ciclón. El diámetro geométrico de los particulados de anfotericina B fue medido por difracción por láser (Sympatec Helos, Clausthal-Zellerfeld, Alemania) , en la que el diámetro medio volumétrico (VMD) de 2,96 µm fue determinado. El análisis de microscopia electrónica de barrido (SEM) mostró que los polvos eran formados por particulados pequeños porosos con superficie extremadamente áspera. Este ejemplo mencionado arriba ilustra la flexibilidad de la técnica para fabricación de este polvo para producir un tenor alto de anfotericina B, utilizando el abordaje de Mult . -particulado descrito en el presente. Ejemplo 7 Aerosolización de los Particulados de Anfotericina B secados por Aspersión Los particulados de anfotericina B secos resultantes, preparados en el Ejemplo 6, fueron colocados manualmente en cápsulas #2 de HPMC (Shionogi, Japón) , o #3 de HPMC (Capsugel, Greenwood, SC) , y dejadas en reposo para equilibrarse en 15-20% UR, por la noche, en temperatura ambiente. Para el llenado fue utilizada una masa de cerca de 10 mg, que representaba cerca de la mitad del volumen de llenado para una cápsula #2 de HPMC o 5/8 para una cápsula #3 de HPMC. Las características de los aerosoles fueron examinadas utilizando dispositivos de DPI Turbospin® (PH&T, Italia) , Eclipse® (Aventis) y Cyclohaler® (Novartis, Suiza) . El Cyclohaler® utiliza una cápsula #3 de HPMC, mientras que los dispositivos Turbospin® y Cyclo haler® utilizan el tamaño #2 de cápsulas de HPMC. Las distribuciones de tamaño aerodinámico de particulados fueron determinadas gravimétricamente en un impactador en cascada Andersen (ACl), vea Figura 8. Las distribuciones de tamaño de particulados fueron medidas en flujos de 56,6 l/min, que representa un esfuerzo de inhalación forzado, para ambos dispositivos de DPI, el Turbospin® y el Eclipse® y, confortable, para dispositivos Cyclohaler®. Un volumen total de 2 litros fue retirado a través del dispositivo. Dos ACl fueron utilizados en paralelo, con un flujo calibrado de 28,3 l/min y un flujo total, a través de los dispositivos, de 56,6 l/min. Características semejantes de aerosol fueron observadas en todos los dispositivos, conforme comprobadas por un DAMM inferior a 2,5 µm y FPF <3,3µm, superior a 71%. Este ejemplo mencionado arriba ilustra que la aerosolización de este polvo es independiente del tamaño de cápsula, lo que demuestra la dispersibilidad del polvo probado de anfotericina B. Ejemplo 8 Aerosolización de los Particulados de Anfotericina B secados por Aspersión Este Ejemplo examina también la aerosolización de lotes de desarrollo de particulados de anfotericina B. Los particulados de anfotericina B siguientes fueron formados utilizando el proceso del Ejemplo 2, en el que la anfotericina B fue obtenida de Alpharma. • 4000T • 4001T Las Figuras 9 y 10 muestran la dosis emitida (DE) (mg/cápsula) y la DE media por colector y por lote, respectivamente. Para determinar la DE, un dispositivo de inhalación, conforme a lo mostrado en el Requerimiento Estadounidense n° 10/298.177, incorporado al presente, por referencia, en su totalidad, fue utilizado. Las Figuras 11 y 12 muestran el diámetro aerodinámico medio de masa (DAMM) y la dosis de partícula fina (%FDP < 3,3µm), por colector, respectivamente. Los particulados de anfotericina B a continuación fueron formados, utilizando el proceso del Ejemplo 2, en el que la anfotericina B fue obtenida de Chemwerth. • 4024T 4025T 4026T 4027T 4028T • 4029T 4030T Las Figuras 13 y 14 muestran la dosis emitida (DE) (mg/cápsula) y DE media por colector y por lote, respectivamente . Las Figuras 15 y 16 muestran el diámetro aerodinámico medio de masa (DAMM) y el %FPD <3,3 µm, por colector, respectivamente .

Conforme a lo descrito con más detalles abajo, los siguientes particulados de anfotericina B fueron formados utilizando la anfotericina B procesada: • N020226 (a partir de API altamente cristalina) • N020227 (a partir de API altamente amorfa) . Estos particulados de anfotericina B fueron formados utilizando una variación del proceso del Ejemplo 2, en el que la anfotericina B fue originalmente fabricada por Alpharma. Antes del secado por aspersión, sin embargo, la anfotericina B fue procesada para obtenerse lotes de API o (i) altamente cristalinos o (ii) altamente amorfos (conforme determinados por difracción de rayos-X de polvo) .

Específicamente, el procedimiento para el reprocesamiento de la anfotericina B es suministrado abajo. Como mostrado en el cronograma de flujo abajo y en la descripción siguiente, tanto las formas cristalinas como amorfas fueron producidas a partir del mismo material inicial .

Solubilización y Filtrado • Añadir API de anfotericina B a metanol • Añadir, mezclando, dimetilformamida a ácido cítrico monohidratado • Filtrar para remover sólidos no disueltos Ajuste de pH • Añadir cloruro de metileno • Añadir agua fría (2-8 °C) • Ajustar el filtrado para pH - 7, por la adición de trietanolamina (TEA) a 40%, conforme a lo descrito abajo.

Cristalización Precipitación • Añadir • Añadir TEA a 40%, gota a TEA a 40% de una gota, durante 30 única vez . minutos . • Proseguir • Calentar inmediatamente la pasta hasta para la etapa de 44-46 °C por 90 aislamiento. minutos. • Enfriar la pasta hasta la temperatura ambiente por 30 minutos . • Enfriar la pasta hasta 2-8 °C por 60 minutos .

Colecta de Forma Cristalina • Verter la pasta sobre filtro de papel • Filtrar al vacío Lavado Lavado • Enjuagar • Añadir con metanol a 40% metanol a 40% helado (2-8 °C) helado (2-8 °C) , • Enjuagar centrifugar, con acetona decantar el sobrenadante • Añadir acetona, decantar el sobrenadante Secado Secado • Colocar • Colocar el papel de papel de filtro filtro conteniendo los conteniendo los sólidos en una sólidos en una bandeja de acero bandeja de acero inoxidable inoxidable • Secar • Secar en en cámara de cámara de vacío a vacío a temperatura temperatura ambiente. ambiente Descripción del Procedimiento para reprocesamiento de la Sustancia Activa de Anfotericina B (API) Solubilización y Filtrado Cerca de 20 g de anfotericina B fueron añadidos, mezclando, a 1130 ml de metanol en temperatura ambiente. Cerca de 450 ml de dimetilformamida, seguidos por 39 g de ácido cítrico monohidratado, fueron añadidos a la suspensión de Anfotericina B con mezcla continua. Cuando todos los sólidos estaban esencialmente disueltos, la solución fue clarificada por filtrado. Cerca de 280 ml de cloruro de metileno fueron añadidos al filtrado. El recipiente conteniendo el producto fue protegido de la luz durante todo el período de reprocesamiento. Cerca de 450 ml de agua fría (2-8 °C) fueron añadidos y la solución fue mezclada por 15 minutos. Ajuste de pH y Precipitación/Cristalización La precipitación de la Anfotericina B fue obtenida a través del ajuste de la solución para un pH ~7, utilizando trietanolamina (-140 ml) . Para la forma amorfa, la base fue añadida de una sola vez, con mezcla. La forma amorfa está lista, enseguida, para el aislamiento, conforme a lo descrito abajo. Para la forma cristalina, la base fue añadida, gota a gota, durante 30 minutos, con mezcla. La pasta fue, enseguida, calentada hasta 44-46 °C por 90 minutos, seguido por enfriamiento hasta la temperatura ambiente durante 30 minutos. Finalmente, la pasta fue enfriada hasta 2-8 °C por 60 minutos. La forma cristalina estaba, enseguida, lista para el aislamiento. Colecta y Lavado de la Forma Cristalina La forma cristalina de la anfotericina B fue capturada por filtrado al vacío, utilizando un embudo grande de acero inoxidable de Buchner con un papel de filtro. El producto fue lavado utilizando 170 ml de metanol a 40% frío (2-8 °C) , seguido por 100 ml de acetona (temperatura ambiente) .

Colecta y Lavado de la Forma Amorfa La forma amorfa de la anfotericina B fue capturada a través de centrifugación de la pasta, seguida por decantación del sobrenadante. El producto fue lavado por la resuspensión del bollo en 600 ml de metanol a 40% frío (2-8 °C) , seguido por centrifugación y decantación. El proceso de lavado fue repetido utilizando 600 ml de acetona (temperatura ambiente) . Secado de las Formas Cristalina y Amorfa Papel de filtro conteniendo la anfotericina B cristalina lavada fue colocado en una bandeja de acero inoxidable dentro de una cámara de vacío. De la misma forma, la anfotericina B amorfa lavada fue retirada de los frascos de centrifugación y esparcida en un filtro de papel dispuesto en una bandeja de acero inoxidable dentro de la cámara. El proceso de secado prosiguió por 1 a 3 días, en temperatura ambiente, con el producto protegido de la luz. Ocasionalmente, durante el proceso de secado, partículas mayores eran quebradas utilizando una espátula para facilitar la evaporación de solventes residuales . El producto final de anfotericina B fue transferido para jarras de vidrio de ámbar para ser almacenados a 2-8 °C. Como observado arriba, los particulados de anfotericina B fueron formados enseguida, utilizando el proceso del Ejemplo 2. La Figura 17 muestra la Dosis Emitida (DE) (mg/cápsula) tanto para el N020226 y N020227.

Fue encontrado el diámetro aerodinámico medio de masa (DAMM), para el N020226 y N020227, de 2,4 µm y 2,6 µm, respectivamente. El %FPD < 3,3 µm, para N020226 y N020227, fue constatado ser de 55% y 47%, respectivamente. Ejemplo 9 y Ejemplo Comparativo 1 Comparación de Administración Intratraqueal e intravenosa Este ejemplo involucra la determinación de las concentraciones de anfotericina B en el plasma, en el lavado pulmonar y tejido pulmonar, después de administración intratraqueal de una solución de anfotericina B o administración intravenosa de una solución comercial de anfotericina B desoxicolato.

Materiales y Métodos Ratones Sprague-Dawley (Hilltop Lab Animáis Inc., Scottdale, PA) suministrados con introducción previa de cánulas (cánula de vena yugular [JVC] ) y pesando entre 334-366 gramas fueron utilizados en este Ejemplo. Anfotericina B fue administrada por instilación intratraqueal o inyección intravenosa. El modelo del estudio es presentado en la Tabla 2.

Tabla 2 10 LBA = lavado broncoalveolar M = macho 15 La solución de anfotericina B para instilación intratraqueal fue preparada en solución salina con buffer fosfato (PBS), en una concentración de 13,3 mg de anfotericina B/ml . La fórmula intravenosa de anfotericina B desoxicolato fue suministrada como un bollo liofilizado de 50 mg de anfotericina B, reconstituido para una solución conteniendo 1 mg/ml . Los parámetros finales y procedimientos del estudio incluyeron peso corporal antes de la administración de la dosis, colecta de sangre, LBA y de tejido para análisis de concentración del fármaco y observaciones macroscópicas de necropsia. Muestras de sangre, LBA y de tejido pulmonar fueron colectadas en la 12° hora y en el 1°, 2°, 4°, 6°, 8o, 11° y 14° día después de la dosificación. En cada tiempo de colecta de muestra, cuatro (4) animales del grupo de IT y tres (3) animales del grupo de IV eran sacrificados y muestras de sangre, de lavado pulmonar y de tejido pulmonar eran colectadas . Las muestras de plasma y de lavado fueron analizadas para concentraciones de anfotericina B por el MDS Pharma Services, Montreal, Canadá. Muestras de tejido pulmonar fueron analizadas para concentraciones de anfotericina B por el MedTox Laboratories, St. Paul, Minnesota. Resultados Observaciones Macroscópicas de Necropsia Ratones en los que fue administrada anfotericina B por instilación intratraqueal exhibieron señales macroscópicas de toxicidad pulmonar. Las observaciones incluyeron edema pulmonar, hemorragia en el pulmón y decoloración del tejido pulmonar . Concentraciones de anfotericina B en LBA, tejido pulmonar y Plasma Las concentraciones plasmáticas, del LBA y tejido pulmonar, y las concentraciones estimadas del ELF (fluido de revestimiento epitelial) de anfotericina B después del suministro de anfotericina B por vía intratraqueal 100 e intravenosa 200, son mostradas en la Figura 18. Como puede ser observado, cuando administrada al tracto respiratorio, existe poca anfotericina B sistémica. Por otro lado, concentraciones altas de anfotericina B estaban presentes en la sangre por hasta cuatro días después de la administración intravenosa. Como demostrado también en la Figura 18, las concentraciones pulmonares de anfotericina B fueron más altas en la administración intratraqueal 100 que en la administración intravenosa 200. En la experiencia conducida, las concentraciones de anfotericina B en los pulmones fueron mucho más altas en la administración intratraqueal que en la administración intravenosa, mientras que las concentraciones plasmáticas de anfotericina B fueron más bajas en la administración intratraqueal . Conclusiones y discusión Ratones en los que fue administrada anfotericina B por instilación líquida intratraqueal exhibieron señales macroscópicas de toxicidad. Las observaciones incluyeron edema pulmonar, sangrado en el pulmón y decoloración de tejido pulmonar. La anfotericina B no fue mensurable en cualesquiera de las muestras plasmáticas colectadas de animales que recibieron el artículo de la prueba vía administración intratraqueal . Concentraciones mensurables fueron constatadas en el LBA y tejido pulmonar de animales en los que fue administrada anfotericina B por instilación intratraqueal. El fármaco fue medido en el LBA de todos animales, en el 2° día después de la dosificación IT y en 1 de 4 animales, 8 días después de la dosificación. El fármaco fue medido, en el tejido pulmonar para todos los animales, en el 14° día después de la dosificación IT. En animales que recibieron anfotericina B por vía intravenosa, el fármaco fue medido en hasta dos días después de la dosificación en el plasma, pero los animales no presentaron fármaco mensurable en el pulmón en cualesquiera de los parámetros de tiempo y solamente 1 animal presentó concentraciones mensurables de anfotericina B, en el LBA, 12 horas después de la dosis. En conclusión, el suministro intratraqueal de 11 mg/kg de anfotericina B en solución a una concentración de 13,3 mg/ml resultó en toxicidad pulmonar local. La administración intratraqueal resultó también en concentraciones por encima del límite de cuantificación en el 14° día después de la administración de la dosis. Por otro lado, la concentración de anfotericina B fue abajo del límite de cuantificación en el tejido pulmonar en animales en los que fue administrada anfotericina B por vía intravenosa. Ejemplo 10 y Ejemplo Comparativo 2 Comparación de Administración en aerosol e intravenosa Anfotericina B en polvo para aerosol fue administrada en el pulmón de perros por 14 días . La anfotericina fue suministrada en dosis diarias de hasta 11,5 mg/kg. La dosis de anfotericina B en polvo fue suministrada a perros conscientes utilizando una máscara que contenía una válvula de una única vía para agotamiento del aire exhalado y una línea de inhalación conectada a una cámara central conteniendo el polvo en aerosol . Un aerosol del polvo seco que podía ser respirado del polvo con la anfotericina B formulada fue creado usando el polvo, por dispersión generada por un cepillo rotatorio y suministrado a la cámara central para la exposición de inhalación por 30 minutos . La Figura 19 muestra perfiles de concentración media pulmonar de anfotericina B-tiempo en perros 101 después de la administración. Como puede ser observado, la anfotericina B permaneció en los pulmones por diversos días después de la administración con una semivida observada de cerca de 19 días. Por otro lado, la administración intravenosa 201 no fue muy retenida, teniendo una semivida observada de cerca de 28 horas. Ejemplo 11 Aumento de Tasa de Supervivencia con Administración Profiláctica Resumen Este Ejemplo involucró la determinación de si anfotericina B administrada profilácticamente vía inhalación era eficaz contra Aspergillus fumigatus en un modelo de conejo inmunodeprimido. El objetivo de este estudio fue determinar si una administración aislada de anfotericina B por inhalación antes de la inoculación de Aspergillus fumigatus aumentaría el tiempo de supervivencia y /o reduciría la mortalidad total . Este estudio tuvo tres grupos, con 10 animales cada.

El Grupo 1 recibió el régimen inmunosupresor de citarabina intravenosa y metilprednisolona y una inoculación falsa con solución salina. El Grupo 2 recibió el régimen inmunosupresor y 5 x 107 conidios de A. fumigatus . El Grupo 3 recibió el régimen inmunosupresor y una dosis estimada de anfotericina B de 1,5 mg/kg vía inhalación un día antes de una inoculación de 5 x 107 conidios de A. fumigatus . La fórmula de anfotericina B en polvo seco y el A. fumigatus fueron administrados a conejos anestesiados vía un tubo endotraqueal . Los agentes inmunosupresor es fueron administrados por inyección intravenosa. Fueron administrados antibióticos para prevenir infecciones bacterianas, por inyección intravenosa o en el agua utilizada para beber. Evaluaciones conducidas en este estudio incluyeron mortalidad y morbilidad, observaciones clínicas diarias, pesos corporales, patología clínica (hematología y bioquímica clínica) , necropsia macroscópica, peso de pulmones, conteo de infartos pulmonares visibles y determinaciones de las unidades de colonias de hongos formadas (CFU) en muestras de LBA, sangre y de tejido pulmonar, además de evaluación histopatológica del tejido pulmonar . El porcentual de animales que supervivieron a la conclusión planificada del estudio en el 14° día fue el siguiente: 60% en el Grupo 1, 20% en el Grupo 2 y 70% en el Grupo 3. El tiempo medio de supervivencia para animales en los Grupos 1 y 3 fue de 13 días y el día medio de muerte o sacrificio, para ambos los grupos, fue el 14° día. Por otro lado, la supervivencia media para animales en el Grupo 2 fue de 10 días y el día medio de muerte o sacrificio fue el 10° día. El análisis de Kaplan-Meier (KM) mostró un aumento significante (p<0,05) en la supervivencia de animales en los que fue administrada anfotericina B antes de la inoculación con A . fumigatus (Grupo 3) , comparada a animales en los que solamente fue administrado A. fumigatus (Grupo 2) . La supervivencia de animales del Grupo 1 (control) aumentó también significativamente cuando comparada al Grupo 2. No hubo diferencia expresiva cuando los Grupos 1 y 3 fueron comparados . Señales clínicas de efectos respiratorios, incluso respiración jadeante, chirridos o estertores fueron observadas en los animales del Grupo 2 y 3. Estas señales no fueron observadas en animales del Grupo 1. En el Grupo 2, siete del grupo de animales exhibieron respiración jadeante, chirrido o estertores que se inician en el 7° día del estudio. Todos los animales en el Grupo 2 que exhibieron señales de efectos respiratorios fueron encontrados muertos o moribundos en el plazo de hasta un día a partir del surgimiento de las señales. En el Grupo 3, fue observado en cinco de los animales chirridos, respiración jadeante o estertores. Sin embargo, aunque la incidencia inicial de señales respiratorias haya sido también en el 7° día, solamente dos de los animales que exhibieron señales de efectos respiratorios quedaron moribundos . Los otros 3 animales supervivieron hasta a la necropsia programada con dos de los tres (ambos que habían presentando estertores) dejando de exhibir señales de efectos respiratorios en el 14° día, Efectos sobre pesos corporales fueron observados en todos los grupos. El peso corporal diminuyó en todos los grupos cerca del 8° día. Todos los grupos exhibieron una disminución de cerca de 6% en el 8° día. Después de la caída inicial, los pesos corporales de los demás animales en el Grupo 1 y 2 permaneció estable durante todo el estudio. Por otro lado, la media de peso corporal del grupo de los animales en el Grupo 3 continuó a disminuir y en el 14° día era 18% abajo del peso inicial y 10% abajo de la media de peso corporal del Grupo 1. Fueron observados efectos en los parámetros medidos de hematología y bioquímica clínica en todos los grupos. El efecto primario observado en los parámetros hematológicos fue una reducción del nivel de glóbulos blancos (WBC) , incluso disminución de neutrófilos segmentados (ANS) y de plaquetas (PLC) . Estos efectos fueron observados en todos los grupos .

Fueron observados efectos adicionales en los niveles de hematíes, hemoglobina, hematocrito, proteínas totales, albúmina, aspartato aminotransferasa, alanina aminotransferasa, bilirrubinas totales, bilirrubina directa, colesterol, globulina y triglicéridos en los Grupos 2 y 3. Los niveles disminuidos de hematíes (RBC), hemoglobina (HGB) y hematocrito (HCT) , observados en los grupos 2 y 3, son indicativos de anemia y son compatibles con las hemorragias observadas, microscópicamente, en el tejido pulmonar. Los niveles disminuidos de proteínas totales (TPR) , albúmina (ALB) , junto con aumento de aspartato aminotransferasa (AST) , alanina aminotransferasa (ALT) , bilirrubinas totales (TBI) y colesterol (CHO) , observados en los Grupos 2 y 3, son compatibles con efectos hepáticos. El aumento de globulina (GLO) es posiblemente el resultado de una respuesta a la infección fúngica y/o inflamación que fue observada microscópicamente en el pulmón. El aumento de los niveles de triglicéridos (TRl) es compatible con movilización de grasas, observada con la disminución del consumo alimentario y del peso corporal constatado en este estudio.

[0292] Fue efectuada necropsia macroscópica en los animales que todavía vivían en el 14° día, así como en animales que habían sido sacrificados después de haberse tornado moribundos . El número de infartos por animal fue contado durante la necropsia macroscópica. No hubo infartos visibles en el Grupo l. Siete de ocho (88%) animales en el Grupo 2, disponibles para necropsia, presentaron infartos pulmonares visibles y de estos animales, 6 de los 8 (75%) presentaron más de 20 infartos visibles macroscópicamente. En el Grupo 3, ocho de diez animales (80%) presentaron infarto pulmonar visible, sin embargo, diferente del Grupo 2, solamente dos de los 10 (20%) presentaron más de 20 infartos pulmonares macroscópicamente. Fue efectuada una evaluación microbiológica de muestras del lavado broncoalveolar, de la sangre y tejido pulmonar, colectadas en la necropsia. No fueron detectadas unidades de colonias formadas (CFU) en cualesquiera de las muestras del Grupo 1. Para el Grupo 2, muestras para cultura fueron obtenidas de 8 de los 10 animales. No hubo muestras disponibles de los 2 animales encontrados muertos. Seis de los animales evaluados (75%) presentaron 1 o más tejidos positivos para hongos. Para el Grupo 3, muestras para cultura fueron obtenidas de 9 de 10 animales, con 4 de los animales (44%) teniendo uno o más tejidos positivos para hongos . Pesos absolutos de pulmón, así como peso de pulmón con relación al peso corporal disminuyeron en los Grupos 2 y 3 cuando comparados al Grupo 1.

Las evaluaciones histopatológicas del pulmón mostraron que no había hifas micóticas presentes en cualquier uno de los tejidos pulmonares evaluados de conejos de control. Hifas micóticas estaban presentes en 44% de los animales del Grupo 2 evaluados y en 50% de los animales del Grupo 3. No hubo diferencias microscópicas entre los tejidos de cualquier uno de estos Grupos . Cortes de tej ido pulmonar de conejos que presentaron infección micótica fueron asociadas a cambios secundarios que incluyeron edema, necrosis, hemorragia, proliferación alveolar de macrófagos, inflamación intersticial y/o inflamación perivascular . Los cambios presentes fueron semejantes en términos de gravedad y prevalencia. La evaluación microscópica de los cortes de tejido consiguió verificar infección fúngica en cerca de mitad de los animales evaluados. No hubo diferencias microscópicas entre los tejidos o hifas micóticas en los Grupos 2 o 3. En conclusión, con base en los datos de mortalidad junto con las observaciones de soporte clínico, datos microbiológicos e infarto pulmonar, la anfotericina B suministró un efecto profiláctico contra la mortalidad inducida por A fumigatus en el modelo de conejo inmunodeprimido utilizado para este estudio.

Modelo de estudio Hubo tres grupos de estudio con 10 animales en cada grupo en esta experiencia. El Grupo 1 recibió el régimen inmunosupresor de citarabina intravenosa y metilprednisolona y una inoculación falsa con solución salina. El Grupo 2 recibió el régimen inmunosupresor y 5 x 107 conidios de A. fumigatus . El Grupo 3 recibió el régimen ínmunosupresor y una dosis estimada de anfotericina B pulmonar de 1,5 mg/kg, un día antes de una inoculación de 5 x 107 conidios de A . fumigatus . El modelo general es suministrado en la Tabla 3, abajo.

Tabla 3 aInoculado con diluente (Tween 20 a 0,025% en cloruro de sodio a 0, 9%) bTratado con anfotericina B en el día -1.

Sistema de Prueba con Mamífero y Cultivo Animal Fueron utilizadas conejas Blancas de Nueva Zelanda del linaje SPF (libres de agentes patogénicos específicos) en las que fueron implantados catéteres dobles con puertas de acceso vascular (VAP) y pesando entre 2,5 a 4,0 kg, en el inicio del estudio. Las conejas fueron distribuidas al azar para grupos de tratamiento, utilizando un procedimiento por computadora para estratificación por peso corporal. Número/sexo por Grupo 10/ hembras por grupo; 3 grupos Inmunosupresión y Neutropenia La Inmunosupresión fue inducida en las conejas para simular la condición de pacientes humanos, conforme a lo mostrado en la Tabla 4, abajo.

Tabla 4 10 ív = intravenosa sid = dosis única diaria bid = dosis doble diaria qod = cada dos días 15 Determinación in Vitro de Eficiencia de Suministro de Sistema de Suministro en aerosol para Animales pequeños Fue suministrada anfotericina B en polvo seco para conejas anestesiadas a través de la vía de inhalación (IH) , utilizando un tubo endotraqueal, conectado a un sistema para suministro de aerosol a animales pequeños, que involucraba un dispositivo para suministro de aerosol, conforme a lo revelado en la Patente Estadounidense n°6.257.233, incorporada al presente, por referencia, en su totalidad, conectado a un ventilador para animal pequeño. A ese respecto, el polvo de un embalaje tipo blister fue activado del inhalador para una cámara. El ventilador para animal pequeño tiraba el polvo disperso en el tubo endotraqueal. La eficiencia del suministro fue determinada por la medición de la masa gravimétrica del polvo colectada en un filtro conectado en la extremidad del tubo endotraqueal . La masa colectada en el filtro fue normalizada para el peso efectivo de envase del embalaje tipo blister. La eficiencia del suministro fue utilizada para calcular la dosis estimada (mg) para las experiencias in vivo. Grupos de Tratamiento La Tabla 5 abajo resume el régimen de tratamiento.

Tabla 5 10 La Figura 20 muestra curvas de supervivencia de Kaplan-Meier de las conejas con neutropenia. De las conejas que tuvieron el sistema inmunológico deprimido y que fueron activamente expuestas a Aspergillus fumigatus 600, solamente 50% supervivieron más que nueve días. Por otro lado, de las conejas que tuvieron el sistema inmunológico deprimido, expuestas a Aspergillus fumigatus y en las que fue administrada anfotericina B 601, 100% supervivieron más que nueve días. La curva 602 muestra un grupo de control de conejas que sólo fueron inmunodeprimidas . A largo plazo, menos de 25% de las conejas expuestas no tratadas 600 supervivió más que 14 días mientras que cerca de 70% de las conejas tratadas y expuestas 602 supervivieron más que 14 días. Ejemplo 12 Farmacocinética de la Anfotericina B suministrada por inhalación en Conejos Este Ejemplo involucra la determinación de las concentraciones de anfotericina B en el plasma, lavado broncoalveolar (LBA) y tejido pulmonar de conejos después de una única administración de anfotericina B en polvo por inhalación. Este Ejemplo describe solamente resultados obtenidos en el plasma y tejido pulmonar. Materiales y Métodos Anfotericina A fue formulada bajo la forma de polvo para inhalación conteniendo 50% del peso de sustancia activa, utilizando el proceso descrito en el Ejemplo 2. El número del lote de la fórmula fue el N020042. El polvo de prueba fue envasado manualmente en embalajes tipo blister, que fueron sellados, por contacto, a 340 °F por 1,0 segundo con un peso aproximado de envase de 1,5 mg por embalaje tipo blister. El artículo de prueba fue suministrado a conejos anestesiados a través de la vía de inhalación (IH) , utilizando un tubo endotraqueal, conectado a un sistema para suministro de aerosol a animales pequeños, que involucraba un dispositivo para suministro de aerosol, conforme a lo revelado en la Patente Estadounidense n°6.257.233, incorporada al presente, por referencia, en su totalidad, conectado a un ventilador para animal pequeño. La inhalación de prueba fue administrada en una única exposición por inhalación. El estudio incluyó dos grupos, cada uno comprendiendo 48 conejos. Los Grupos 1 y 2 recibieron, respectivamente, una dosis meta de 0,25 y 1,5 mg/kg de anfotericina B IH. Cuatro animales fueron sacrificados en cada uno de los siguientes parámetros de tiempo, después de la dosificación: 0,16; 0,3; 1; 1,3; 2; 3; 4; 5; 14; 21; 28 y 45 días. Fueron colectados plasma y tejido pulmonar, y el tenor de anfotericina B fue analizado utilizando LC/MS (cromatografía líquida/espectrometría de masa) . Los límites de cuantificación (LOQ) de los ensayos fueron de 5 ng/ml, en el plasma, y 20 ng/g en el tejido pulmonar. Discusión y Conclusiones El objetivo de este Ejemplo fue determinar las concentraciones de anfotericina B en el plasma, en el fluido del LAB y en el tejido pulmonar de conejos después de una única administración de anfotericina B en polvo, por inhalación. Dos dosis meta, para pulmón, 0,25 y 1,5 mg/kg, fueron examinadas. Este Ejemplo describe solamente resultados obtenidos en el plasma y en el tejido pulmonar.

El límite de cuantificación (LOQ) en el plasma fue de 5 ng/ml. Las concentraciones plasmáticas de anfotericina B de todos los animales, en todos los parámetros de tiempo, y en ambas dosis probadas fueron abajo del LOQ. De esa forma, hubo una exposición sistémica pequeña después de la administración por IH de anfotericina B. Sin embargo, la administración por IH de anfotericina B resultó en concentraciones persistentemente altas del fármaco en el pulmón. Concentraciones del fármaco fueron alcanzadas rápidamente. Concentraciones medias de grupos de 4,2 y 24,2 µg/g fueron alcanzadas en el primer parámetro de tiempo de colecta de muestras de 4 horas. El Tmax fue observado en la 32a y 24a hora, para los Grupos 1 y 2, respectivamente, después de la administración para las dosis de 0,25 y 1,5 mg/kg. Los valores de Cmax medio de los grupos fueron 8,0 y 46,6 µg, para las dosis de 0,25 y 1,5 mg/kg, respectivamente. Los valores de Cmax son proporcionales a las dosis. Las concentraciones del fármaco fueron mantenidas por diversas semanas después de administración por IH. Como mostrado en las Figuras 21 y 22, concentraciones medias de grupos de anfotericina B también fueron elevadas en el último parámetro de tiempo de colecta de muestras, es decir, 45 días después de la administración. La semivida (t?/2) para eliminación de anfotericina B de los pulmones fue de 292 horas, para la dosis de 0,25 mg/kg, y 254 horas para la dosis de 1,5 mg/kg. Los resultados de este Ejemplo demuestran que la administración por IH de anfotericina B en conejos llevó a concentraciones plasmáticas de anfotericina B consistentemente abajo del LOQ (<5 ng/ml) . Ellos mostraron también que concentraciones altas y persistentes de anfotericina B son alcanzadas en el tejido pulmonar. Ejemplo 13 Eficacia de Anfotericina B Inhalada para Profilaxis en Conejos Este Ejemplo involucra: (1) la determinación si concentraciones de anfotericina B (AmB) en el fluido de revestimiento epitelial (ELF) o parénquima pulmonar son más relevantes, en términos de protección, contra morbilidad causada por el A . fumigatus y (2) el establecimiento de la dosis profiláctica eficaz. Materiales y Métodos Fue utilizada la anfotericina B bajo la forma de polvo para inhalación del Ejemplo 14, número de lote N020042. El polvo de prueba fue envasado manualmente en embalajes del tipo blister, sellados en contacto a 340 °F por 1,0 segundo con peso aproximado de envase de cerca de 1,5 mg por embalaje del tipo blister. El artículo de prueba fue suministrado a conejos anestesiados a través de la vía de inhalación (IH) , utilizando un tubo endotraqueal, conectado a un sistema para suministro de aerosol a animales pequeños, que involucraba un dispositivo para suministro de aerosol, conforme a lo revelado en la Patente Estadounidense n°6.257.233, incorporada al presente, por referencia, en su totalidad, conectado a un ventilador para animal pequeño. La inhalación de prueba fue administrada en una única exposición por inhalación. Conejos blancos de Nueva Zelanda SPF, con implantación doble de catéteres con Puertas de acceso Vascular a venas femorales, pesando -2,5 a 4,0 Kg en el inicio del estudio, fueron obtenidos de Covance Research Products, Denver PA.

Aspergillus fumigatus, cepa 4215 del NIH, fue obtenido de American Type Culture Collection (ATCC) . El inoculo de A . fumigatus fue preparado en frascos de dextrosa Sabouraud. Los conidios fueron cultivados con una solución de Tween 20 a 0,025% en cloruro de sodio a 0,9%, trasladados a un tubo cónico, enseguida, lavados y contados. La concentración fue ajustada con la misma solución para obtenerse 5 x 107 conidios en 300 µl . Animales en grupos probados fueron inoculados con el mismo volumen. Fue efectuada la inoculación en los conejos anestesiados. Los conejos fueron intubados con un tubo endotraqueal y el inoculo fue administrado enseguida, vía intratraqueal, con una jeringa de tuberculina sujetada a un catéter introducido a través del tubo endotraqueal . El estudio incluyó 6 grupos, cada uno comprendiendo 10 conejos. Estos grupos están descritos en la Tabla 6 abajo. Todos los grupos fueron inmunosuprimidos y tratados con antibióticos para prevenir infecciones bacterianas . La Inmunosupresión y el régimen de cobertura con antibióticos son detallados en la Tabla 7 abajo. El Grupo 1 no fue ni probado con el A . fumitados ni tratado con anfotericina B y sirve como control para el régimen inmunosupresor. El Grupo 2 fue probado con A . fumigatus, pero no tratado con anfotericina B. El Grupo 3 fue tratado con 1,5 mg de anfotericina B/Kg 12 días antes de la prueba con A . fumigatus . El Grupo 4 fue tratado con 0,15 mg de anfotericina B/Kg 1 día antes de la prueba con A. fumigatus . El Grupo 5 fue tratado con 0,5 mg de anfotericina B/kg 1 día antes de la prueba con A . fumigatus . El Grupo 6 fue tratado con 1,5 mg de anfotericina B/Kg 1 día antes de la prueba con A. fumigaturs .

Tabla 6 10 *NA = No Aplicable 15 Tabla 7 10 15 A: mg/litro de agua de bebedero B: día 1 del estudio = día de inoculación con A . fumigatus Resultados Los datos de supervivencia son presentados en la Figura 23. El Grupo 1 fue inmunosuprimido, pero no fue tratado con anfotericina B ni probado con A. fumigatus . Todos, con excepción de un conejo en este grupo supervivieron a la conclusión del estudio en el 14° día, suministrando una tasa de supervivencia de 90%. El Grupo 2 fue inmunosuprimido, no tratado con anfotericina B, pero probado con A. fumigatus. Todos los conejos en este grupo murieron, suministrando una tasa de supervivencia de 0%. El tiempo medio de supervivencia fue de 6 días . El Grupo 3 fue inmunosuprimido, tratado en el día -12 con 1,5 mg de anfotericina B/kg y probado con A. fumigatus .

Todos los conejos en este grupo murieron, suministrando una tasa de supervivencia de 0%. El tiempo medio de supervivencia fue de 10 días. El Grupo 4 fue inmunosuprimido, tratado en el día -1 con 0,15 mg de anfotericina B/kg y probado con A. fumigatus . Nueve conejos en este grupo murieron, suministrando una tasa de supervivencia de 10%. El tiempo medio de supervivencia f e de 9 días . El Grupo 5 fue inmunosuprimido, tratado en el día -1 con 0,5 mg de anfotericina B y probado con A . fumigatus .

Una vez más, 9 conejos murieron en este grupo, suministrando una tasa de supervivencia de 10%. El tiempo medio de supervivencia fue de 10,5 días. El Grupo 6 fue inmunosuprimido, tratado en el día -1 con 1,5 mg/kg de anfotericina B y probado con A. f migatus .

Nueve conejos en este grupo murieron, suministrando una tasa de supervivencia de 10%. El tiempo medio de supervivencia fue de 10 días. Comparaciones estadísticas pareadas de Grupos 2 versus 3, 2 versus 4, 2 versus 5 y 2 versus 6, utilizando la prueba de Log-rank indican que anfotericina B inhalada confiere protección significante (P<0,001) en la prueba con A . fumigatus . Comparación pareada de los Grupos 3, 4, 5 y 6, utilizando la misma prueba, no revela diferencias en las curvas de supervivencia resultantes de los tratamientos diferentes. Discusión y Conclusiones Este Ejemplo examinó el efecto protector de anfotericina B inhalada en conejos inmunosuprimidos inoculados con esporos de A . fumigatus . La comparación de curvas de supervivencia del Grupo 2, inoculado con A . fumigatus, pero no tratado, con cualquier uno de los grupos tratados, indica que el tratamiento con anfotericina B por inhalación protegió los conejos inmunosuprimidos. Eso es verdadero en todas las dosis probadas (0,15; 0,5 y 1,5 mg/kg) . También es verdadero independiente si los conejos fueron tratados 1 o 12 días antes de la prueba con A. fumigatus . Ejemplo 14 Estudio de Un Mes de Toxicidad por inhalación en Ratones Este Ejemplo involucró la evaluación de la toxicidad de una fórmula de anfotericina B bajo la forma de polvo seco, en ratones después de la administración por inhalación y evaluación de la reversibilidad de cualesquier efectos después de un período aproximado de recuperación de un mes. Este Ejemplo involucró la observación de toxicidad local inducida en el tracto respiratorio y toxicidad sistémica. Anfotericina B en polvo conteniendo 50% del peso de sustancia activa fue formulada utilizando el proceso descrito en el Ejemplo 2. El polvo resultante tenía las características mostradas en la Tabla 8 abajo.

Tabla 8 5 Los ratones (198 M y 198 F) fueron distribuidos en 6 grupos de dosis y tratados conforme a lo mostrado en la Tabla 9 abajo.

Tabla 9 10 15 Tabla 9 (continuación) C 10 *Fórmula en polvo seco conteniendo cerca de 50% del peso de anfotericina B 15 Animales de recuperación fueron mantenidos por un período aproximado de recuperación de un mes después de la dosis . El animal 410M murió prematuramente en el día -1 y fue sustituido por el 701M. Después de exámenes oftalmoscopios antes de la experiencia, los animales 345F, 436F y 541F fueron sustituidos por los 711F, 712F y 713F, respectivamente . Los animales recibieron las dosis utilizando una técnica de exposición única en el hocino por cerca de 60 minutos en 5 ocasiones en intervalos semanales . Los animales de recuperación fueron mantenidos por un período aproximado de recuperación de un mes . Fueron efectuadas las siguientes investigaciones: observaciones clínicas, peso corporal, consumo de alimentos, examen oftalmológico, hematológico, de bioquímica clínica, de orina, histopatológicos y de toxicocinética . La concentración global media del grupo de exposición de cámara de la fórmula vehiculada en aerosol fue de 2,35 mg/l. Las concentraciones globales medias del grupo de exposición de cámara de la fórmula con anfotericina B fueron de 0,06; 0,39 y 0,91 mg/l en el día 1 y de 0,02; 0,06 y 0,16 mg/l en los días subsecuentes, para los Grupos 3, 4 y 5, respectivamente. Las concentraciones globales medias del grupo de exposición de cámara de anfotericina B aislada (determinada analíticamente) fueron de 0,0290; 0,152 y 0,389 mg/l en el día 1 y 0,00847; 0,0214 y 0,0519 en los días subsecuentes, para los Grupos 3, 4 y 5, respectivamente. Para el Grupo 6, la concentración global media del grupo de exposición de cámara, para fórmula con anfotericina B, fue de 2,22 mg/l o 0,694 mg/l, para anfotericina B aislada. La media global del grupo (con ambos sexos) de dosis estimada alcanzada de fórmula vehiculada fue de 73,56 mg/kg/dosis. Las medias globales de grupos (con ambos sexos) de dosis estimadas alcanzadas de fórmula con anfotericina B fueron de 1,89; 12,27 y 28,45 mg/kg en el día 1 y de 0,528; 1,74 y 4,87 mg/kg/día en los días subsecuentes, para los Grupos 3, 4 y 5, respectivamente. Las medias globales de grupos (con ambos sexos) de dosis estimadas alcanzadas de anfotericina B aislada (determinada analíticamente) fueron de 0,914; 4,78 y 12,36 mg/kg en el día 1 y 0,256; 0,646 y 1,58 mg/kg en los días subsecuentes para los Grupos 3, 4 y 5, respectivamente. Para el Grupo 6, la media global del grupo (con ambos sexos) de dosis estimada alcanzada de la fórmula con anfotericina B fue de 68,24 mg/kg/dosis o 21,64 mg/kg/dosis para anfotericina aislada.

Los datos de distribución de tamaño de partículas indicaran que 64,7% de las partículas vehiculadas en aerosol tenían menos de 3,5 µm, con un diámetro aerodinámico medio de masa (DAMM) (± desviación estándar geométrica (DPG)) de 1,61 µm (3,244), 81,2%, 60,6% y 70,7% de los particulados de la fórmula de anfotericina B tenían menos de 3,5 µm en el día 1 y 68,2%, 59,0% y 83,6% tenían menos de 3,5 µm en los días subsecuentes con DAMMs y (DPGs) de 1,35 µm (2,382), 1,46 µm (4,508) y 1,43 µm (2,560) en el día 1 y 1,42 µm (3,572), 1,89 µm (2,710) y 0,81 µm (4,329) en los días subsecuentes para los Grupos 3, 4 y 5, respectivamente . Para anfotericina B aislada (determinada analíticamente), 68,1%, 58,1% y 68,6% de los particulados tenían menos de 3,5 µm en el día 1 y 66,2%, 55,6% y 71,1% tenían menos de 3,5 µm en los días subsecuentes con DAMMs y (DPGs) de 1,69 µm (2,755), 1,71 µm (3,351) y 1,55 µm (2,652) en el día 1 y 1,47 µm (3,599), 2,29 µm (2,525) y 1,06 µm (6,077) en los días subsecuentes para los Grupos 3, 4 y 5, respectivamente. Para el Grupo 6, los datos de tamaño de partículas indicaran que 57,8% de la fórmula con anfotericina B tenían menos de 3,5 µm con un DAMM (± DPG) de 2,11 µm (3,089). Para anfotericina B aislada (determinada analíticamente), 54,3% de los particulados tenían menos de 3,5 µm con un DAMM (± DPG) de 2,29 µm (2,966) . Los particulados fueron considerados respirables para las especies de la prueba. No hubo efectos adversos en el peso corporal, consumo de alimentos, en la oftalmología, hematología, bioquímica clínica o pesos de órganos. Hubo 181 muertes durante el estudio, la mayoría de ellas relacionadas a señales clínicas indicativas de comprometimiento respiratorio, que incluyeron chirridos, estertores y respiración jadeante, y fueron observadas entre animales de todos los grupos tratados con anfotericina B. Una muerte ocurrió antes y, por lo tanto, no fue considerada como estando relacionada al tratamiento.

[0340] Hallazgos de necropsia en los pulmones, relacionados a la administración de anfotericina B, incluyeron presencia de masas, adherencias, contenidos anormales, elevación de áreas/focos, áreas enfocadas descoloradas, así como áreas enfocadas oscurecidas y pulmones oscurecidos, descolorados o esponjosos. Contenidos anormales fueron observados en la traquea o bronquio de dos animales del Grupo 6 (dosis alta) . Después de un período aproximado de un mes de recuperación, había adherencias pulmonares en una hembra del Grupo 3 (dosis baja) .

Microscópicamente, encontrados en los pulmones de animales que recibieron anfotericina B incluyeron neumonía, pleuritis, colapso de lóbulos, exudado luminar en los bronquios/bronquíolos, hipertrofia de la mucosa bronquial, aumento de infiltrado inflamatorio en las células, inflamación alveolar e infiltración de eosinófilos, así como congestión/hemorragia. Neumonía/pleuritis, colapso o inflamación alveolar fueron constatados en 17/110 animales de los Grupos 3 al 6 en el estudio Principal. Hubo correlaciones entre hallazgos de necropsia y histológicos en los pulmones, principalmente entre adherencias y pleuritis y entre presencia de masa, consolidación, elevación de área/focos o contenido anormal y neumonía. Secundarios a la neumonía, otros hallazgos incluyeron necrosis con inflamación en el bazo e hígado, aumento de la granulopoiesis en el esternón y fémur, atrofia de tejidos linfáticos, vacuolación de hepatocitos periféricos e hipertrofia difusa de la célula cortical de las adrenales. No hubo diferencias acentuadas en la incidencia o gravedad de estos hallazgos entre cualquier uno de los grupos tratados con anfotericina B. Después de un período de recuperación de cerca de un mes, había también presente hipertrofia mínima o discreta de la mucosa traqueal en algunos animales que recibieron anfotericina B. Fue observado inflamación crónica y pleuritis en los pulmones del animal 344, uno de los 18 animales de los Grupos 3 y 4 en el estudio de Recuperación. La inflamación era caracterizada por focos linfocíticos y acumulaciones de macrófagos pigmentados . Análisis de toxicocinética revelaron que las concentraciones plasmáticas máximas aumentaron, de una manera general, con la dosis y fueron alcanzadas, de una manera general, hasta 4 horas después de la interrupción de la dosis. No fueron detectados niveles cuantificables de anfotericina B en las muestras de Control de Aire y de Vehículo. En conclusión, la administración solamente por el hocino de anfotericina B en dosificaciones de hasta 21,64 mg/kg/dosis resultó en señales clínicas graves, indicativas de comprometimiento respiratorio y de la extinción prematura de muchos animales de todos los grupos tratados con anfotericina B, incluso todos los animales de los Grupos 5 y 6. La administración por inhalación de anfotericina B en todas las dosis fue asociada a hipertrofia de la mucosa traqueal asociada a exudado luminar y /o infiltración difusa de célula inflamatoria; y en los pulmones, con neumonía, pleuritis, colapso de lóbulos, exudado luminar en los bronquios/bronquíolos, hipertrofia de mucosa bronquial y aumento de infiltración de célula inflamatoria, inflamación alveolar e infiltración de eosinófilos, así como congestión/hemorragia. Después de un período de cerca de un mes de recuperación, hubo reducciones en la incidencia y gravedad de la hipertrofia de la mucosa traqueal e inflamación pulmonar. Ejemplo 15 Estudio de Toxicología de Polvo Seco en Ratones con Dosis diarias o Semanales Este Ejemplo involucró la determinación de la toxicidad de dos lotes diferentes de anfotericina B en polvo seco en ratones, después de administración por inhalación, utilizando dos regímenes diferentes de dosificaciones. Las informaciones obtenidas fueron utilizadas para seleccionar niveles y /o regímenes de dosis para estudios subsecuentes de toxicidad. Anfotericina B en polvo conteniendo 50% del peso de sustancia activa fue formulada utilizando el proceso descrito en el Ejemplo 2. Los polvos resultantes tenían las características mostradas en la Tabla 10 abajo. Además, conforme a lo mostrado en la Figura 24, los polvos no eran homogéneos conforme metidos por el tamaño de partícula de aerosol específico del fármaco con relación al análisis gravimétrico de tamaño de partículas, utilizando un dispositivo para inhalación conforme a lo mostrado en el Requerimiento Estadounidense n° 10/298.177, incorporado al presente, por referencia, en la totalidad.

Tabla 10 10 NA = no disponible 15 Noventa ratones fueron distribuidos en 10 grupos de dosis y tratados conforme a lo mostrado en la Tabla 11 abajo .

Tabla 11 Niveles Niveles Niveles de dosis de dosis de dosis de la de la de la Número Grupo de fórmula fórmula Fórmula de dosis/Tratamiento de los de los meta del animales días 2 y días 8 y día 1 3 15 (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) 1. Control de 80 80 N/A 1-9 vehículo 2. Dosis bajaA 30* N/A 10-18 3. Dosis alta 80* 80* N/A 19-27 4. Dosis baja 2 30* N/A 28-36 5. Dosis alta 2 80* 80* N/A 37-45 6. Control de 80 N/A 80 46-54 vehículo 2 7. Dosis baja 3 30* N/A 55-63 8. Dosis alta 3 80* N/A 80* 64-71,91 9. Dosis baja 4 30* N/A 73-81 10. Dosis alta 4 80* N/A 80* 82-90 * = Formula en polvo seco conteniendo 50% del peso de anfotericina B A = Dosis utilizando el Lote 4001T de anfotericina B B = Dosis utilizando el Lote 4019T de anfotericina B N/A = No aolicable El animal 72 (Grupo 9) fue sustituido por el animal 91 antes del inicio de la dosificación. Los animales recibieron las dosis utilizando una técnica de exposición solamente del hocino, una vez al día durante 1 hora, de acuerdo con la Tabla 11 arriba. Fueron efectuadas las siguientes investigaciones: observaciones clínicas, peso corporal, hematología, bioquímica clínica, peso de órganos, histopatología, toxicocinética y bioquímica bioanalítica. La concentración global media del grupo de exposición de cámara de la fórmula vehiculada en aerosol fue de 2,23 mg/l y 2,11 mg/l para los Grupos 1 y 6, respectivamente. Las concentraciones globales medias del grupo de exposición de cámara de la fórmula con anfotericina B fueron de 1,01; 0,88; 1,01 y 0,88 mg/l en el día 1 y de 0,18; 0,17; 0,17 y 0,18 mg/l en los días subsecuentes, para los Grupos 2, 4, 7 y 9, respectivamente. Las concentraciones globales medias del grupo de exposición de cámara de la fórmula con anfotericina B fueron de 2,25; 2,33; 2,51 y 2,41 mg/l para los Grupos 3, 5, 8 y 10, respectivamente. Las concentraciones globales medias del grupo de exposición de cámara de anfotericina B aislada (determinada analíticamente) fueron de 0,353; 0,306; 0,353 y 0,306 mg/l en el día 1 y 0,0684; 0,0598, 0,0615 y 0,0783 en los días subsecuentes, para los Grupos 2, 4, 7 y 9, respectivamente.

Las concentraciones globales medias del grupo de exposición de cámara de anfotericina B aislada (determinada analíticamente) fueron de 0,856; 0,927; 0,963 y 0,987 para los Grupos 3, 5, 8 y 10, respectivamente La media global del grupo de dosis estimada alcanzada de fórmula vehiculada fue de 72,79 y 66,34 mg/kg/dosis para los Grupos 1 y 6, respectivamente. Las medias globales de grupos de dosis estimadas alcanzadas de fórmula con anfotericina B fueron de 33,44; 29,14; 33,44 y 28,95 mg/kg en el día 1 y de 2,25; 5,55; 5,22 y 5,49 mg/kg/día en los días subsecuentes, para los Grupos 2, 4,7 y 9, respectivamente. Las medias globales de grupos de dosis estimadas alcanzadas de fórmula con anfotericina B fueron de 74,85; 75,00; 77,81 y 77,41 mg/kg para los Grupos 3, 5, 8 y 10, respectivamente. Las medias globales de grupos de dosis estimadas alcanzadas de anfotericina B aislada (determinada analíticamente) fueron de 11,69; 10,13; 11,69 y 10,07 mg/kg en el día 1 y 2,25; 1,96; 1,89 y 2,38 mg/kg en los días subsecuentes para los Grupos 2, 4, 7 y 9, respectivamente. Las medias globales de grupos de dosis estimadas alcanzadas de anfotericina B aislada (determinada analíticamente) fueron de 24,45; 29,97; 29,91 y 30,60 para los Grupos 3, 5, 8 y 10, respectivamente.

Los datos de distribución de tamaño de partículas indicaron que 69,7% de las partículas vehiculadas en aerosol tenían menos de 3,5 µm, con un diámetro aerodinámico medio de masa (DAMM) (± desviación estándar geométrica (DPG)) de 1,38 µm (2,880) y 1,43 (2,281) para los Grupos 1 y 6, respectivamente. 63,0%, 69,2%, 63,0% y 69,2% de los particulados de la fórmula de anfotericina B tenían menos de 3,5 µm, con DAMMs y (DPGs) de 1,36 µm (4,603), 1,54 µm (2,502), 1,36 µm (4,603) y 1,54 µm (2,502) en el Día 1, para los Grupos 2, 4, 7 y 9, respectivamente. En los días subsecuentes, 77,2%, 69,8%, 71,3% y 61,3% de los particulados de la fórmula con anfotericina B tenían menos de 3,5 µm con DAMMs (DPGs) de 0,79 µm (4,541), 1,75 µm (2,455), 1,56 µm (3,618), para los Grupos 2, 4, 7 y 9, respectivamente. 69,2%, 63,4%, 64,7% y 61,8% de los pfjacur.tLiicDuuliaddUoüss eenn lxa ftóorrmmuulxaa ccoonn aannfrootteerriicciinnaa Bts tceenñííaann mmeenios de 3,5 µm, con DAMMs y (DPGs) de 0,95 µm (4,344), 1,44 µm (4,312), 1,10 µm (4,759) y 1,52 µm (4,233) para los grupos 3, 5, 8 y 10, respectivamente. Para la anfotericina B solamente (determinada analíticamente) 56,4%, 61,9%, 56,4% e 61,9% de partículas em aerosol estabam abajo de 3,5 µm, con DAMMs (DPGs) de 1,58 µm (3,563), 1,171 µm (3,309), 1,58 µm (3,563) y 1,71 µm (3,309) en el Día 1 para los Grupos 2, 4, 7 y 9, respectivamente. En los días subsecuentes, 66,8%, 57,4%, 62,0% y 63,0% de partículas en aerosol estabam abajo de 3 , 5 µm con DAMMs (DPGs) de 1,09 µm (4,181), 1,95 µm (3,386), 1,42 µm (3,372) y 1,83 µm (3,075) para los Grupos 2, 4, 7 y 9, respectivamente. Para los Grupos 3, 5, 8 y 10, respectivamente, 61,9%, 57,6%, 63,8% y 61,5% de la anfotericina B aislada (determinada analíticamente) tenían menos de 3,5 µm con DAMMs (DPGs) de 1,30 µm (4,208), 1,77 µm (3,782), 1,20 µm (4,608) y 1,58 µm (4,097). Hallazgos de necropsia asociados a la inhalación de anfotericina B incluyeron focos oscurecidos en el pulmón, pulmones oscurecidos, rojizos o esponjosos, contenido anormal en la traquea y bronquios y nodulos linfáticos cervicales aumentados. Adicionalmente, se observó estómago e intestinos distendidos en los animales que murieron precozmente . La evaluación histológica reveló: hipertrofia difusa de mucosas en la traquea en la mayoría de los animales tratados con ambos lotes de anfotericina B, administrada por inhalación en ambos regímenes de dosificación. Hubo un aumento en la gravedad de la hipertrofia de mucosas con el segundo régimen de dosificación (inhalación de anfotericina B en los Días 1, 8 y 15) , comparado al primer régimen de dosificación (inhalación de anfotericina B en los Días 1, 2 y 3) . No hubo diferencia expresiva entre el Lote 4001T (A) y el Lote 4019T (B) , en términos de incidencia y gravedad de ese hallazgo. La Infiltración de células inflamatorias en la submucosa y exudados luminales, en la traquea, también eran previstos con la administración de anfotericina B por inhalación. Esos hallazgos fueron observados, predominantemente, en la traquea de animales tratados utilizando el segundo régimen de dosificación (inhalación de anfotericina B en los Días 1, 8 y 15) . Fue considerado que la incidencia más baja de estos hallazgos y la falta de una relación evidente dosis -respuesta, en los grupos del primer régimen de dosificación, se debió a la corta duración de este régimen (inhalación de anfotericina B en los Días 1, 2 y 3, con interrupción, en los animales, en el Día 4) . Fue constatada la presencia de exudados en los bronquios, bronconeumonía e inflamación peribronquial/peribronquiolar o infiltración de células inflamatorias en el pulmón, que eran también hallazgos esperados con administración de anfotericina B. En animales con bronconeumonía, fue constatada también la presencia de exudado bronquial, siendo que la bronconeumonía fue considerada como siendo provocada por infección secundaria resultante de la comunicación con las vías aéreas superiores. La incidencia más baja de exudados en el lumen de bronquios, en los pulmones, en los grupos del primer régimen de dosificación, fue considerada como siendo debido a la corta duración de este régimen. La incidencia de los hallazgos pulmonares fue, de una manera general, más alta en los grupos de dosis altas que en los grupos de dosis bajas . Análisis de toxicocinética revelaron que las concentraciones plasmáticas aumentaban con la dosis. No fueron detectados niveles cuantificables de anfotericina B en muestras de Control de Vehículo. En conclusión, la administración solamente por el hocico de anfotericina B (aislada), en dosis de hasta 30,60 mg/kg/dosis, resultó en señales clínicas indicativas de comprometimiento y/o irritación respiratoria y la muerte prematura de 3 animales. La administración por inhalación de anfotericina B, en todas las dosis, fue asociada a la hipertrofia difusa de mucosa en la traquea, infiltración de células inflamatorias en la submucosa, exudados en el lumen de la traquea y bronquios, bronconeumonía e inflación peribronquial/peribronquiolar o infiltración de células inflamatorias en el pulmón. La gravedad de estos hallazgos fue más alta en el segundo régimen de dosificación (inhalación de anfotericina B en los Días 1, 8 y 15) . Los hallazgos pulmonares, correlacionados a un aumento, aparentemente, relacionado a la dosis, en términos de peso de pulmón, fueron más significativos en animales que utilizaron dosis del segundo régimen. El aumento fue más expresivo en animales tratados con anfotericina B del Lote 4001T. Ejemplo 16 Toxicidad de Polvo Seco en Ratones con Dosis Diarias o Semanales Este Ejemplo involucró la determinación de la toxicidad de dos lotes diferentes de anfotericina B en polvo seco en ratones, después de administración por inhalación, utilizando dos regímenes diferentes de dosificaciones . Anfotericina B en polvo conteniendo 50% en peso de sustancia activa fue formulada utilizando el proceso descrito en el Ejemplo 8. Los polvos resultantes tenían las características mostradas en la Tabla 12 abajo.

Tabla 12 Ciento veinte ratones fueron distribuidos en 10 grupos de dosis y tratados conforme a lo mostrado en la Tabla 13 abajo.

Tabla 13 10 * = Fórmula en polvo seco conteniendo 50% en peso de anfotericina B 15 A = Dosis utilizando anfotericina B del Lote N020226 (altamente cristalina) B = Dosis utilizando anfotericina B del Lote N020227 (altamente amorfa) N/A = No aplicable Animales sobresalientes fueron numerados de 121-126.

Los animales recibieron las dosis utilizando una técnica de exposición solamente del hocico, una vez al día durante 1 hora, de acuerdo con la Tabla 13 arriba. Fueron efectuadas las siguientes investigaciones : observaciones clínicas, peso corporal, determinaciones respiratorias, hematología, química clínica, histopatología, toxicocinética y análisis bioquímico. La concentración global media del grupo de exposición de cámara de la fórmula vehiculada fue de 0,91 mg/l, en el Día 1, y 0,22 y 0,17 mg/l, en los días subsecuentes, para los Grupos 1 y 6, respectivamente. Las concentraciones globales medias del grupo de exposición de cámara de la fórmula con anfotericina B fueron de 0,31; 0,36; 0,31 y 0,36 mg/l, en el Día 1, y de 0,056; 0,078; 0,073 y 0,088 mg/l en los días subsecuentes, para los Grupos 2, 4, 7 y 9, respectivamente y de 1,04; 0,94; 1,04 y 0,94 mg/l, en el Día 1, y de 0,18; 0,21; 0,18 y 0,19 mg/l en los días subsecuentes para los Grupos para los Grupos 3, 5, 8 y 10, respectivamente. Las concentraciones globales medias del grupo de exposición de cámara de anfotericina B aislada (determinada analíticamente) fueron de 0,125; 0,124; 0,125 y 0,124 mg/l en el Día 1 y de 0,0166; 0,0249; 0,0277 y 0,0278 en los días subsecuentes, para los Grupos 2, 4, 7 y 9, respectivamente, y de 0,0686; 0,0717; 0,0724 y 0,0687 mg/l, en los días subsecuentes, para los Grupos 3, 5, 8 y 10, respectivamente La media global del grupo de dosis estimada alcanzada de fórmula vehiculada fue de 29,29 y 29,40 mg/kg, en el Día 1, y de 6,87 y 4,98 mg/kg, en los días subsecuentes, para los Grupos 1 y 6, respectivamente. Las medias globales de grupos de dosis estimadas alcanzadas de fórmula con anfotericina B fueron de 10,03; 11,63; 9,93 y 11,65 mg/kg en el Día 1 y de 1,80; 2,50; 2,19 y 2,66 mg/kg en los días subsecuentes, para los Grupos 2, 4,7 y 9, respectivamente, y de 33,48; 30,54; 33,83 y 30,58 mg/kg, en el Día 1, y de 5,75; 6,76; 5,47 y 5,81 mg/kg, en los días subsecuentes, para los Grupos 3, 5, 8 y 10, respectivamente. Las medias globales de grupos de dosis estimadas alcanzadas de anfotericina B aislada (determinada analíticamente) fueron de 4,04; 4,01; 4,00 y 4,01 mg/kg en el Día 1 y de 0,53; 0,79; 0,83 y 0,84 mg/kg en los días subsecuentes para los Grupos 2, 4, 7 y 9, respectivamente, y de 14,65; 10,72; 14,80 y 10,74 mg/kg en el Día 1 y de 2,19; 2,31; 2,20 y 2,11 mg/kg en los días subsecuentes para los Grupos 3, 5, 8 y 10, respectivamente. Los datos de distribución de tamaño de partículas indicaron que 70,8% de las partículas vehiculadas en aerosol tenían menos de 3,5 µm en el Día 1 y 77,1% y 75,6% tenían menos de 3,5 µm, para los Grupos 1, y 6, respectivamente, en los días subsecuentes, con un diámetro aerodinámico medio de masa (DAMM) (± desviación estándar geométrica (DPG) ) de 1,56 µm (2,832), en el Día 1, y 1,43 µm (3,446) y 1,24 (2,948) para los Grupos 1 y 6, respectivamente, en los días subsecuentes, 65,1%, 75,7%, 65,1% y 75,7% de las partículas de aerosol de la fórmula con anfotericina B tenían menos de 3,5 µm, en el Día 1, y 52,2%, 79,4%, 65,8% y 75,2% tenían menos de 3,5 µm, en los días subsecuentes, con DAMMs y (DPGs) de 1,77 µm (3,787), 2,06 µm (2,805), 1,77 µm (3,787) y 2,06 µm (2,805) en el Día 1, y 2,88 µm (2,269), 1,81 µm (2,540), 1,97 µm (2,719) y 2,14 µm (2,288), en los días subsecuentes, para los Grupos 2, 4, 7 y 9, respectivamente. 72,0%, 78,9%, 72,0% y 78,9% de los particulados de la fórmula con anfotericina B tenían menos de 3,5 µm, en el Día 1, y 68,6%, 76,0%, 72,4% y 77,5% tenían menos de 3,5 µm en los días subsecuentes con DAMMs (DPGs) de 2,07 µm (2,368), 1,87 µm (2,464), 2,07 µm (2,368) y 1,87 µm (2,464) en el Día 1 y 1,67 µm (3,466), 1,77 µm (2,378), 1,42 µm (2,965) y 1,40 µm (2,911), en los días subsecuentes, para los grupos 3, 5, 8 y 10, respectivamente .

Con relación a la anfotericina B aislada (determinada analíticamente), 70,4%, 72,6%, 70,4% y 72,6% de los particulados tenían menos de 3 , 5 µm, en el Día 1, y 68,0%, 75,3%, 77,3% y 63,0% tenían menos de 3,5 µm, en los días subsecuentes, con DAMMs y (DPGs) de 1,80 µm (2,563), 2,06 µm (2,702), en el Día 1, y 2,05 µm (2,230), 2,01 µm (2,752), l,99µm (2,005) y 2,60 µm (2,463), en los días subsecuentes, para los grupos 2, 4, 7 y 9, respectivamente. 55,4%, 69,9%, 68,0% y 69,6% de los particulados tenían menos de 3,5 µm en el Dial y 67,9%, 63,6%, 67,8% y 63,3% tenían menos de 3,5 µm en los días subsecuentes con DAMMs y (DPGs) de 2,74 µm (2,116), 2,03 µm (2,788), 2,05 µm (2,230) y 2,03 µm (2,788), en el Día 1 y l,81µm (2,428), 1,94 µm (3,310), l,92µm (2,402) y 2,04 µm (3,236), en los días subsecuentes, para los grupos 3, 5, 8 y 10, respectivamente . Análisis de toxicocinética revelaron que las concentraciones plasmáticas de anfotericina B aumentaban, de una manera general, con la dosis. No fueron detectados niveles cuantificables de anfotericina B en las muestras de Control de Vehículo. No hubo hallazgos expresivos de necropsia asociados a la inhalación de anfotericina B.

La evaluación histológica reveló: hipertrofia difusa de mucosas en muchos animales tratados con ambos lotes de anfotericina B, en ambos regímenes de dosificación. Hubo un aumento en la incidencia y gravedad de la hipertrofia de mucosas con la anfotericina B del Lote N020227 (altamente amorfa) , comparado a la anfotericina B del Lote N020226 (altamente cristalina) . Aparentemente, hubo también un aumento marginal en la incidencia y gravedad de la hipertrofia constatada con el segundo régimen de dosificación (Días 1, 8 y 15) , comparado al primer régimen de dosificación (Días 1, 2 y 3) . La inflamación difusa en la traquea también era esperada con la inhalación de anfotericina B. La incidencia y gravedad de esas lesiones aumentó con la anfotericina del Lote N020227 (altamente amorfa) , comparado a la anfotericina B del Lote N020226 (altamente cristalina) . La incidencia de las lesiones disminuyó con el segundo régimen de dosificación (semanalmente) , comparado al primer régimen de dosificación (diariamente) ; Exudados en el lumen de traqueas y bronquios solamente fueron encontrados en animales tratados con anfotericina B del Lote N020227 (altamente amorfa) . En conclusión, la administración solamente por el hocico de anfotericina B (aislada), en dosis de hasta 14,80 mg/kg resultó en señales clínicas indicativas de comprometimiento respiratorio. La inhalación de fórmulas de anfotericina B en polvo seco, de los lotes N020226 (altamente cristalina) y N020226 (amorfa) , en los días 1, 2 y 3 o 1, 8 y 15, fue asociada a la hipertrofia difusa en la mucosa de traquea y bronquio, inflamación en la traquea, infiltrado de célula inflamatoria en la mucosa bronquial y exudados en el lumen de la traquea y bronquio. Los hallazgos tuvieron una incidencia y gravedad más elevadas con anfotericina B del Lote N020227 (amorfa) , comparado a la anfotericina B del lote N 020226 (altamente cristalina) . Hubo un aumento marginal en la incidencia y gravedad de la hipertrofia con el segundo régimen de dosificación (Días 1, 8 y 15) , comparado al primero (Días 1, 2 y 3) , aunque la gravedad e incidencia de inflamación traqueal fuera reducida. Hubo una pequeña diferencia entre grupos tratados con dosis altas y bajas, con la anfotericina B del lote N020227 (altamente amorfa), en ambos regímenes. Los efectos fueron menos graves y la incidencia menor en los grupos de dosis bajas, tratados con anfotericina B del lote N020226 (altamente cristalina) para ambos regímenes de dosificación.

Ejemplo 17 Toxicidad de Dos Polvos Secos en Perros con Dosis Diarias o Semanales Este Ejemplo involucró la determinación de la toxicidad de dos lotes diferentes de anfotericina B en polvo seco en perros de la raza beagle, después de la administración una vez por semana por inhalación. Anfotericina B en polvo conteniendo 50% en peso de sustancia activa fue formulada utilizando el proceso descrito en el Ejemplo 8. Los polvos resultantes tenían las características mostradas en la Tabla 14 abajo.

Tabla 14 00 co 10 NA = no disponible 15 Cuatro machos y cuatro hembras de perros de la raza beagle fueron distribuidos en 4 grupos de dosis y tratados conforme a lo mostrado en la Tabla 15 abajo. Tabla 15 * = Fórmula en polvo seco conteniendo 50% en peso de anfotericina B A = Dosis utilizando anfotericina B del Lote N020226 (altamente cristalina) B = Dosis utilizando anfotericina del Lote N020227 (altamente amorfa) Los animales recibieron las dosis utilizando un sistema con una máscara cerrada que encajaba en la cara (adaptada con un tubo en la boca) por 30 minutos por día, de acuerdo con la Tabla 15 arriba. Fueron efectuadas las siguientes investigaciones: observaciones clínicas, peso corporal, consumo de alimentos, hematología, química clínica, determinaciones respiratorias (volumen de inspiración, frecuencia respiratoria, volumen respiratorio por minuto) , histopatología, toxicocinética y análisis bioquímico. La concentración global media del grupo de exposición de cámara de la fórmula vehiculada fue de 1,34 mg/l, en el Día 1, y de 0,31 mg/l, en los días subsecuentes. Las concentraciones globales medias del grupo de exposición de cámara de la fórmula con anfotericina B fueron de 0,73; 1,80 y 1,58 mg/l, en el Día 1, y de 0,13; 0,33 y 0,33 mg/l en los días subsecuentes, para los Grupos 2, 3 y 4, respectivamente. Las concentraciones globales medias de exposición de cámara de anfotericina B aislada (determinada analíticamente) fueron de 0,236; 0,521 y 0,769 mg/l, en el Día 1, y de 0,0427; 0,120 y 0,154 mg/l, en los días subsecuentes, para los Grupos 2, 3 y 4, respectivamente.

Los niveles globales medios del grupo (ambos sexos) de dosis alcanzadas fueron de 29,3 mg/kg, en el Día 1, y de 6,9 mg/kg, en los días subsecuentes. Los niveles globales medios del grupo (ambos sexos) de dosis alcanzadas de la fórmula con anfotericina B fueron de 16,3; 45,1 y 33,0 mg/kg en el Día 1 y de 2,9; 8,1 y 6,7 mg/kg, en los días subsecuentes, para los Grupos 2, 3 y 4, respectivamente. Los niveles globales medios del grupo (ambos sexos) de dosis alcanzadas de anfotericina B aislada (determinada analíticamente) fueron de 5,3; 13,0 y 16,0 mg/kg, en el Día 1, y de 0,96; 3,0 y 3,2 mg/kg, en los días subsecuentes, para los Grupos 2, 3 y 4, respectivamente. Los datos de distribución de tamaño de partículas indicaron que 81,1% de las partículas vehiculadas en aerosol tenían menos de 5 µm en el Día 1 y 78,9% tenían menos de 5 µm, en los días subsecuentes, con un diámetro aerodinámico medio de masa (DAMM) (± desviación estándar geométrica (DPG) ) de 0,84 µm (4,553), en el Día 1, y 1,41 µm (3,104), en los días subsecuentes. 69,0%, 83,1% y 43,3% de los particulados de la fórmula con anfotericina B tenían menos de 5 µm, en el Día 1, y 85,9%, 67,6% y 57,3% tenían menos de 5 µm, en los días subsecuentes, con DAMMs y (DPGs) de 1,96 µm (2,406), 1,17 µm (2,725) y 3,26 µm (2,789) en el Día 1, y 0,69 µm (4,623), 1,62 µm (3,137) y 2,85 µm (2,692), en los días subsecuentes, para los Grupos 2, 3 y 4, respectivamente. Con relación a la anfotericina B aislada (determinada analíticamente), 57,7%, 73,6% y 46,2% de los particulados tenían menos de 5 µm, en el Día 1, y 72,6%, 63,6% y 62,8% tenían menos de 5 µm en los días subsecuentes con DAMMs (DPGs) de 2,20 µm (2,644), 1,79 µm (2,378) y 3,32 µm (2,482) en el Día 1 y 1,96 µm (2,507), 2,00 µm (2,526) y 2,48 µm (2,168), en los días subsecuentes, para los grupos 2, 3 y 4, respectivamente. No hubo cambios significativos observados en el peso corporal, hematología, química clínica, consumo de alimentos o parámetros de determinaciones respiratorias. Todos los hallazgos de necropsia fueron típicos de hallazgos históricamente encontrados espontáneamente en perros de esa banda de edad. No hubo hallazgos de necropsia que pudieran ser atribuidos a la administración de anfotericina B. Todos los hallazgos histopatológicos fueron típicos de hallazgos históricamente encontrados espontáneamente en perros de esa banda de edad. No hubo hallazgos de necropsia que pudieran ser atribuidos a la administración de anfotericina B. Análisis de toxicocinética indicaron que niveles cuantificables de anfotericina B eran detectados en el plasma de todos los animales tratados (a excepción del animal 4M del Grupo 4) . Los niveles detectados fueron comparables entre todos los grupos de dosis tratados . No fueron detectados niveles cuantificables de anfotericina B en muestras de Control de Vehículo. En conclusión, la administración por inhalación una vez por semana de la fórmula con anfotericina B (o de anfotericina B, conforme determinada analíticamente) para perros de la raza beagle en dosis de hasta 8,2 (3,2) mg/kg fue asociada a la salivación en todos los grupos de dosis (incluyendo el de control de vehículo) . Señales clínicas emergentes, incluyendo encías rojizas, también fueron observadas en animales específicos, en los Grupos 2 y 4, con orejas rojizas, habiendo sido también observada en un animal en el Grupo 2. Vómitos y regurgitación de alimentos fueron observados en un animal del Grupo 3. No fueron observados cambios en el peso corporal, consumo de alimentos, hematología, química clínica o perfiles de determinaciones respiratorias. No hubo hallazgos de necropsia o histopatológicos que pudieran ser atribuidos a la administración de anfotericina B. Determinaciones de distribución de tamaño de partículas revelaron que el Lote N020227 de anfotericina B (altamente amorfa) , en niveles altos de dosificación, presentaba un tamaño de partícula significativamente mayor que el del Lote N020226 de anfotericina B (altamente cristalina) .

Ejemplo 18 Este Ejemplo involucró un estudio de toxicología de 14 días de una fórmula con anfotericina B, preparada utilizando el método del Ejemplo 2. Ochenta ratones recibieron dosis, utilizando la técnica de exposición solamente de hocico, por 60 minutos diarios, por, por lo menos, 14 días, con dosis meta de 0 mg/kg (control de aire o de vehículo solamente), 2,5 mg/kg, 10 mg/kg o 25 mg/kg. Animales en recuperación fueron mantenidos para un período de recuperación de 14 días después de la dosificación. En el 1° y 14° día del estudio, fueron recogidas muestras de sangre para análisis de toxicocinética de animales designados para los grupos solamente de vehículo y de dosis alta (25 mg/kg) , antes de la dosificación, 2 horas y 4 horas después de la dosificación. Las muestras de sangre, para toxicocinética, fueron también obtenidas durante el período de recuperación, en el 7° y 14° días, en machos, y en el 14° día de recuperación, solamente en hembras, debido a su menor peso corporal . Todos los animales del estudio fueron sometidos a una necropsia detallada, en la conclusión del período de tratamiento de 14 días (15° día) o en la conclusión del período de recuperación de 14 días (29° día) . Durante la necropsia, muestras de tejido pulmonar, para análisis de toxicocinética, fueron obtenidas de todos los animales. Las concentraciones plasmáticas de anfotericina B fueron determinadas utilizando un método de cromatografía líquida seguida por espectrofotometría de masa (LC-MS/MS) (límite inferior de cuantificación [LLQ] = 10 ng/ml) y la concentración de anfotericina B en el tejido pulmonar fue determinada utilizando un método de cromatografía líquida de alto desempeño (HPLC) y detección de luz visible (LLQ = 4 µg/g) • La anfotericina B fue detectable en el plasma y en el tejido pulmonar de todos los animales analizados que recibieron anfotericina B en polvo. Los perfiles de concentración-tiempo, en el plasma o en el pulmón, fueron semejantes en ambos sexos, independiente de la dosis. La anfotericina B no se acumuló en el plasma, de manera apreciable, después de 14 días de dosificación, y declinó, como previsto por valores publicados para semivida de eliminación de anfotericina B, después de administración intravenosa (IV) . Los valores plasmáticos de Cmax fueron de 1/1000 a 1/3000 de aquellos detectados para dosis IV comparables de anfotericina B liposomal. Las concentraciones en el pulmón aumentaron a medida que la dosis aumentaba, pero de una manera inferior a la proporcional. Las concentraciones medias, en el pulmón, al final de la dosificación fueron de 10 a 30 veces más altas que las relatadas para anfotericina B, en el pulmón, después de administración IV de una dosis comparable de anfotericina B liposomal. La exposición del tejido pulmonar, en este Ejemplo, fue acentuadamente más alta que la relatada anteriormente después de administración IV por tiempo prolongado. Durante el período de recuperación, las concentraciones pulmonares declinaron en tasas que indicaron valores de semivida de eliminación (t?/2) de 22 y 34 días, en los niveles de dosificación de 1,1 y 12,4 mg/kg, respectivamente, semejantes a los relatados para anfotericina B en el pulmón después de administración IV y por inhalación de anfotericina B liposomal. Ejemplo 19 Estudio de Toxicidad de inhalación por Catorce Días en Perros Este Ejemplo involucra la determinación de la toxicidad pulmonar y sistémica de una fórmula de anfotericina B, producida utilizando el método del Ejemplo 2, en perros, después de administración por inhalación durante 14 días consecutivos y la reversibilidad de cualesquiera efectos en el nivel de dosis alta, después de un período de recuperación de 14 días, en un total de 28 perros (14 M, 14 F) . La sustancia activa fue administrada en dosis de 1,4; 5,6 y 11,5 mg/kg, utilizando un sistema cerrado recubriendo la cara por 30 minutos, diariamente. En el 1° y 14° día del estudio, muestras de sangre fueron recogidas para análisis de toxicocinética de animales designados para los grupos de vehículo y de dosis alta, antes de la exposición, 2, 4, 8, 12 y 24 horas después de la exposición y diariamente durante el período de recuperación. Los animales del estudio principal fueron sometidos a la eutanasia y necropsia en el 15° día, animales en recuperación en el 29° día, durante la cual fue retirado el lóbulo anterior derecho de cada animal para análisis de toxicocinética. Las concentraciones plasmáticas de anfotericina B fueron determinadas utilizando un método de cromatografía líquida seguida por espectrofotometría de masa (LC-MS/MS) (límite inferior de cuantificación [LLQ] = 10 ng/ml) y las concentraciones de anfotericina B en el tejido pulmonar fueron determinadas utilizando un método de cromatografía líquida de alto desempeño (HPLC) y detección de luz visible (LLQ = 4 µg/g) . La anfotericina B se acumuló en el plasma después de 14 días de dosificación y declinó, conforme a lo previsto por valores de semivida de eliminación plasmática, observados en este Ejemplo. El valor de Cmax plasmático de perros que recibieron 11,5 mg/kg fue 1/25 del relatado para perros que recibieron anfotericina B desoxicolato IV y 1/1000 el de perros que recibieron anfotericina B liposomal IV, administrada diariamente por el mismo período. Las concentraciones pulmonares de anfotericina B aumentaron a medida que la dosis era aumentada, pero de manera inferior a la proporcional . Al final del período de exposición, las concentraciones medias de anfotericina B pulmonar eran de 22 a 44 veces más altas que las relatadas después de administración IV de anfotericina desoxicolato o anfotericina B liposomal. La exposición del tejido pulmonar en este estudio con perros fue acentuadamente más alta que la relatada anteriormente después de administración IV por período prolongado. Durante el período de recuperación, las concentraciones plasmáticas declinaron en una tasa que indicaba una semivida de eliminación aparente de 18,8 días, semejante a la relatada después de administración IV y por inhalación de anfotericina B liposomal en ratones. Ejemplo 20 Estudio de Estabilidad de Producto con el Fármaco La estabilidad de anfotericina B en polvos fue evaluada, como mostrado en la Tabla 16 abajo. En cada caso, el polvo estaba contenido en una cápsula de HPMC. Las cápsulas fueron colocadas en un frasco de HDPE de 25 ce. Cada frasco fue embalado en un saco doble con un desecante en el saco externo.

Tabla 16 Un resumen y conclusión de esas observaciones de estabilidad son suministrados abajo. Aspecto Todos los tres lotes atendieron a los criterios de aceptación, en términos de aspecto, en todos los parámetros probados y en todas las condiciones probadas. Tenor Anfotericina B a 5% en peso: Para el lote 10017, el resultado inicial fue de 0,053 mg de anfotericina B por mg de polvo. En el decorrer de un período de 18 meses, los resultados variaron de 0,049 a 0,053 mg de anfotericina B por mg de polvo, en ambas condiciones de almacenamiento. Anfotericina B a 50% en peso: Para el lote 10029, el resultado inicial fue de 0,507 mg de anfotericina B por mg de polvo. En el transcurso de un período de 18 meses, los resultados variaron de 0,469 a 0,508 mg de anfotericina B por mg de polvo, en ambas condiciones de almacenamiento. Con relación al lote 10247, el resultado inicial fue 0,470 mg de anfotericina B por mg de polvo. Después de 9 meses de almacenamiento en 2-8 °C, los resultados variaron de 0,448 a 0,446 mg de anfotericina B por mg de polvo. Para almacenamiento a 25 °C/60%UR, los resultados en el 1° mes, 3° mes y 6° mes fueron de 0,441; 0,399 y 0,385 mg de anfotericina B por mg de polvo, respectivamente. Humedad Los resultados iniciales para los tres lotes variaron de 3 - 5% en peso. El contenido hídrico varió de 3 - 6% en peso después de almacenamiento en ambas condiciones, normal y acelerada. Dosis Emitida La media inicial de la DE varió de 89-94% (8,9 mg/cápsula a 10,0 mg/cápsula). Después de almacenamiento en condiciones normal y acelerada, los resultados variaron de 88 - 96% (8,8 - 10,2 mg/cápsula). Perflubron Residual (PFOB) Fue efectuado el ensayo de PFOB, en el polvo a granel, antes del envase en cápsulas. Los resultados en el polvo a granel, de todos los lotes probados, fueron de < 0,1% en peso. En el parámetro de 12 meses, fue efectuada la prueba para determinación de PFOB para los lotes 10017 y 10029. Los niveles encontrados fueron < 0,05 - 1% en peso. Conteo de Aeróbicos y Agentes Patogénicos Específicos Las pruebas de límite microbiano fueron conducidas en el parámetro inicial de prueba, para todos los lotes. Las pruebas también fueron efectuadas después de 12 meses de almacenamiento a 25 °C/60%UR, para los Lotes 10017 y 10029, atendieron el criterio de aceptación. Pureza La pureza inicial del pico principal del área normalizada, para todos los lotes, varió de 93,6 - 96,4%. Durante el almacenamiento en condiciones normal y acelerada, la pureza del pico principal varió de 94,0 - 96,5%. Tamaño de Partícula de aerosol DAMM: Los resultados iniciales para diámetro aerodinámico medio de masa (DAMM) , para los lotes, variaron de 2,7 - 3,0 µm. Durante almacenamiento en condiciones normal y acelerada, el DAMM varió de 2,6 - 3,1 µm. Conclusión Los resultados de estabilidad presentados en este documento demuestran que el polvo de anfotericina B a 5% en peso (10 mg) y el polvo de anfotericina B a 50% en peso (10 mg) son estables y exhiben atributos aceptables del producto, incluyendo aspecto, tenor de anfotericina B, pureza, contenido hídrico, atributos microbianos y de actuación de aerosol, cuando embalado y almacenado en 2 -8 °C. Ejemplo 21 Actuación después de Exposición a Alta Humedad Este Ejemplo involucró la definición del período de tiempo apropiado que las cápsulas pueden ser dejadas fuera de la bolsa, en 70% UR, y también atender a criterios de aceptación de dosis emitida (%DE) y DE = 8,5 mg) . Fueron examinadas dos fórmulas: polvo de anfotericina B a 5% en peso (Lote X1429) y polvo de anfotericina B a 50% en peso (Lote N020242) . Las fórmulas estaban contenidas dentro de cápsulas, que a su vez estaban contenidas en bolsas. Para determinación de la DE, fue utilizado un dispositivo para inhalación, conforme a lo mostrado en el Requerimiento Estadounidense n° 10/298.177, incorporado al presente, por referencia, en su totalidad. El dispositivo fue equilibrado a 25 °C/70% UR. Las cápsulas fueron expuestas a 25 °C/70% UR, en intervalos específicos y antes de la actuación. La DE fue medida en diez parámetros de tiempo, para obtener un total de 10 actuaciones de DE por fórmula, conforme a lo mostrado en la Tabla 17 abajo.

Tabla 17 N° de la Parámetro 10 15 Los resultados para el Lote N020242 son mostrados en la Tabla 18 abajo. 20 25 Tabla 18 DE (DPR%) = 8,66 mg (4) Intervalo de DE = 8,29 - 9,43 mg %DE (DPR%) = 85% (4) Intervalo de DE% = 81 - 93% Los resultados para el Lote X1249 son mostrados en la Tabla 19 abajo. Tabla 19 DE (DPR%) = 9,16 (2) Intervalo de DE = 8,88 - 9,35 mg %DE (DPR%) = 89% (2) Intervalo de DE% = 86 - 91í Los resultados arriba no muestran correlación de la actuación de la DE con el aumento de la exposición a la humedad. La actuación media de la DE disminuye bajo un ambiente de alta humedad, pero aún atiende los criterios de aceptación. La actuación media de la DE del Lote N020042 (fórmula con 50% en peso) atiende los criterios de aceptación, sin embargo ni todas las DEs fueron = 85% y = 8,5 mg.

Resumen de Ejemplos Seleccionados Un resumen de Ejemplos seleccionados es mostrado en la Tabla 20 abajo.

Tabla 20 Tabla 20 (continuación ) Tabla 20 (continuación ) Niveles medios de dosis Especie inhalada de la dosis formulada Ejemplo Hallazgos significantes (N° / grupo) con la fórmula de ABIP (Dosis sustancia activa) Días 2 y 3 Niveles de (Diariamente) o dosis del Día Días 8 y 15 1 (Semanalmente) 72,8 (0 72 8 (0, vehículo) Ninguno vehículo) 1 animal en el grupo de dosis diana X3 quedo moribundo (Día 2) Señales clínicas de efectos respiratorios (chirrido de discreto a grave o ruidos pulmonares) Estomago e intestinos distendidos en animales moribundos Contenido anormal en la traquea Pulmones Lote 4001T Lote 4001 T 5,6 con focos oscuros, pulmones 33,4 (11,7) (2,1) mg/kg rojizos mg/kg Histopatologia traquea hipertrofia de mucosa de mínima a discreta con infiltración de célula inflamatoria en la submucosa y exudados en el lumen Pulmón inflamación pepbronquial/peribronquiolar, Ratón acumulación de macrofagos en los 15 10M (principal) alveolos y congestión/hemorragia 1 animal en el grupo de dosis diana X3 quedo moribundo (Día 2), 1 animal en el Semanal X3 fue encontrado muerto (Día 8) Señales clínicas de defectos respiratorios (chirrido de discreto a grave o ruidos pulmonares) Estomago e intestinos distendidos en animales moribundos Contenido anormal en la traquea pulmones con focos Lote 4001 T Lote 4001 T 73,4 oscuros 734 (27,2) (27,2) mg/kg Histopatologia traquea hipertrofia mg/kg difusa de mucosa de mínima a moderada con infiltración de célula inflamatoria en la submucosa y exudados en el lumen Pulmón exudado en los bronquios, inflamación penbronquial/pepbronquioíar, acumulación de macrofagos en los alveolos y congestión/hemorragia y bronconeumonia Tabla 20 (continuación ) Niveles medios de dosis Especie inhalada de la dosis formulada Ejemplo Hallazgos significantes (N° / grupo) con la fórmula de ABIP (Dosis sustancia activa) Días 2 y 3 Niveles de (Diariamente) o dosis del Día 1 Días 8 y 15 (Semanalmente) Señales clínicas de defectos respiratorios (chirrido de discreto a grave o ruidos pulmonares). Contenido anormal en la traquea. Pulmones con focos oscuros. Lote 4019T: Histopatología: traquea: hipertrofia de Lote 4019T: 5,6 29,1 (10,9)) mucosa de mínima a discreta con (2,2) mg/kg mg/kg) infiltración de célula inflamatoria en la submucosa y exudados en el lumen. Pulmón: inflamación Ratón peribronquial/peribronquiolar, 15 10M (principal) acumulación de macrófagos en los alvéolos y congestión/hemorragia. Señales clínicas de defectos respiratorios (chirrido de discreto a grave o ruidos pulmonares). Contenido anormal en la traquea. Pulmones con focos oscuros, pulmones rojizos o esponjosos.. Lote 4019T: Lote 4019T: 76,2 Histopatología: traquea: hipertrofia de 76,2 (30,3) (30,3) mg/kg mucosa de mínima a discreta con mg/kg infiltración de célula inflamatoria en la submucosa y exudados en el lumen. Pulmón: inflamación peribronquial/peribronquiolar, acumulación de macrófagos en los alvéolos, y bronconeumonía.

Tabla 20 (continuación ) Tabla 20 (continuación ) Aungue diversas concretizaciones de la presente invención hayan sido descritas en detalles considerables, con relación a ciertas versiones de elección de la misma, otras versiones son posibles y alteraciones, permutas y equivalentes de la versión mostrada serán aparentes para aquellos experimentados en la técnica, al leer la especificación y estudiar los diseños. Por ejemplo, las posiciones relativas de los elementos en el dispositivo para aerosolización pueden ser alteradas y piezas flexibles pueden ser sustituidas por piezas más rígidas que pueden ser sujetadas con bisagras, o ser movidas de otra forma, con vistas a imitar el movimiento de la pieza flexible. Además, las vias de pasaje no necesitan necesariamente ser lineales, como mostrado en los diseños, pudiendo ser, por ejemplo, curvas o en ángulos. Igualmente, los diferentes aspectos de las versiones en este documento pueden ser combinados de diversas maneras de modo que suministren concretizaciones adicionales de la presente invención. Además, ciertos términos fueron utilizados para suministrar una descripción más clara y no para limitar la presente invención. Por consiguiente, cualesquiera reivindicaciones anexadas sometidas con relación a esta divulgación no deben restringirse a la descripción de las versiones de elección contenidas en este documento y deben incluir todas estas alteraciones, permutas y equivalentes que se encuadren en el verdadero espíritu y alcance de la presente invención.

Claims (355)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes REIVINDICACIONES ;

1. Una composición comprendiendo, partículas conteniendo, por lo menos, cerca de 95% en peso de anfotericina B, en que las partículas poseen un diámetro medio de masa que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

2. La composición de la reivindicación 1, en que el diámetro medio de masa varía de cerca de 1,2 µm a cerca de 1,8 µm.

3. La composición de la reivindicación 1, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de las partículas poseen un diámetro geométrico que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

4. La composición de la reivindicación 1, en que por lo menos, cerca de 90% en peso de las partículas poseen un diámetro geométrico que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

5. La composición de la reivindicación 1, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 20%.

6. La composición de la reivindicación 1, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 70%.

7. La composición de la reivindicación 1, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 90%.

8. La composición de la reivindicación 1, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 50% a cerca de 99%.

9. Una composición comprendiendo, partículas conteniendo, por lo menos, cerca de % en peso de anfotericina B, y en que, cerca de 80% de las partículas poseen un diámetro geométrico que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

10. La composición de la reivindicación 9, en que, por lo menos, cerca de 90% de las partículas poseen un diámetro geométrico que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

11. La composición de la reivindicación 9, en que, las partículas poseen un diámetro medio de masa que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

12. La composición de la reivindicación 9, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 20%.

13. La composición de la reivindicación 9, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 70%.

14. La composición de la reivindicación 9, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 90%.

15. La composición de la reivindicación 9, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 50% a cerca de 99%.

16. Una composición comprendiendo, partículas conteniendo anfotericina B, en que las partículas poseen un diámetro medio de masa inferior a cerca de 1,9 µm y, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 20%.

17. La composición de la reivindicación 16, en que el diámetro medio de masa varía de cerca de 0,5 µm a cerca de 1,8 µm.

18. La composición de la reivindicación 16, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de las partículas poseen un diámetro geométrico inferior a cerca de 3 µm.

19. La composición de la reivindicación 16, en que, por lo menos, cerca de 90% en peso de las partículas poseen un diámetro geométrico inferior a cerca de 3 µm.

20. La composición de la reivindicación 16, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 70%.

21. La composición de la reivindicación 16, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 90%.

22. La composición de la reivindicación 16, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 50 a cerca de 99%.

23. Una composición farmacéutica, comprendiendo: una cantidad eficaz de anfotericina B; y excipiente farmacéuticamente aceptable, en que la composición farmacéutica se hace de partículas conteniendo anfotericina B, la que posee un diámetro medio de masa que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

24. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que la composición farmacéutica se hace de partículas conteniendo anfotericina B, la que posee un diámetro medio de masa que varía de cerca de 1,2 µm a cerca de 1,8 µm.

25. La composición de la reivindicación 23, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de las partículas poseen un diámetro geométrico que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

26. La composición de la reivindicación 23, en que, por lo menos, cerca de 90% en peso de las partículas posee un diámetro geométrico que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

27. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%.

28. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 70%.

29. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 80%.

30. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que la composición farmacéutica comprende particulados.

31. La composición farmacéutica de la reivindicación 30, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm.

32. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de la composición farmacéutica es compuesta de particulados, comprendiendo tanto anfotericina B como el excipiente farmacéuticamente aceptable.

33. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que la composición farmacéutica comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm y en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 70%.

34. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un componente seleccionado entre carbohidrato, lipidio, aminoácido, buffer y sal.

35. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido.

36. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende ion de metal .

37. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido e ion de metal .

38. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que la composición farmacéutica comprende particulados huecos y/o porosos.

39. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que la composición farmacéutica es compuesta de particulados, comprendiendo anfotericina B en una matriz formada por el excipiente farmacéuticamente aceptable.

40. La composición farmacéutica de la reivindicación 39, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

41. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que la composición farmacéutica comprende polvo seco.

42. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que la composición farmacéutica comprende también un propelente.

43. La composición farmacéutica de la reivindicación 42, en que el propelente comprende, por lo menos, un hidrofluoroalcano.

44. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, en que la composición farmacéutica comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm, en que la anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, por lo menos 70%, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso comprenden particulados conteniendo anfotericina B en una matriz, comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable y en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

45. Una composición farmacéutica, comprendiendo: una cantidad eficaz de anfotericina B; y excipiente farmacéuticamente aceptable, en que la composición farmacéutica se hace de partículas conteniendo anfotericina B y en que, por lo menos, 80% en peso de las partículas comprenden anfotericina B con un diámetro geométrico que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

46. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que, por lo menos, 90% en peso de las partículas poseen un diámetro geométrico que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

47. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que la composición farmacéutica se hace de partículas conteniendo anfotericina B, la que posee un diámetro medio de masa que varía de cerca de 1,2 µm a cerca de 1,8 µm.

48. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%.

49. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 70%.

50. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 80%.

51. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que la composición farmacéutica comprende particulados .

52. La composición farmacéutica de la reivindicación 51, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm.

53. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de la composición farmacéutica comprenden particulados, comprendiendo tanto anfotericina B como el excipiente farmacéuticamente aceptable.

54. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que la composición farmacéutica comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm y en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 70%.

55. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un componente seleccionado entre carbohidrato, lipidio, aminoácido, buffer y sal.

56. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido.

57. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende ion de metal .

58. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido e ion de metal .

59. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que la composición farmacéutica comprende particulados huecos y/o porosos .

60. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que la composición farmacéutica es compuesta de particulados, comprendiendo anfotericina B en una matriz formada por el excipiente farmacéuticamente aceptable.

61. La composición farmacéutica de la reivindicación 60, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

62. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que la composición farmacéutica comprende polvo seco.

63. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que la composición farmacéutica comprende también un propelente.

64. La composición farmacéutica de la reivindicación 63, en que el propelente comprende, por lo menos, un hidrofluoroalcano.

65. La composición farmacéutica de la reivindicación 45, en que la composición farmacéutica comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm, en que la anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de, por lo menos 70%, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso comprenden particulados conteniendo anfotericina B en una matriz, comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable y en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

66. Una composición farmacéutica, comprendiendo: una cantidad eficaz de anfotericina B; y excipiente farmacéuticamente aceptable, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 20% a cerca de 99%.

67. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 70% a cerca de 98%.

68. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que la composición farmacéutica se hace de partículas conteniendo anfotericina B con un diámetro medio de masa inferior a cerca de 3 µm.

69. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que la composición farmacéutica se hace de partículas conteniendo anfotericina B con un diámetro medio de masa inferior a cerca de 2 µm.

70. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que la composición farmacéutica se hace de partículas conteniendo anfotericina B y en que, por lo menos, 80% en peso de las partículas, conteniendo anfotericina B, poseen un diámetro geométrico inferior a cerca de 3 µm.

71. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que la composición farmacéutica se hace de partículas conteniendo anfotericina B y en que, por lo menos 90% en peso de las partículas conteniendo anfotericina B poseen un diámetro geométrico inferior a cerca de 3 µm.

72. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que la composición farmacéutica comprende particulados.

73. La composición farmacéutica de la reivindicación 72, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm.

74. La composición farmacéutica de la reivindicación 72, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 10 µm.

75. La composición farmacéutica de la reivindicación 66 , en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de la composición farmacéutica comprenden particulados, comprendiendo tanto anfotericina B como el excipiente farmacéuticamente aceptable.

76. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un componente seleccionado entre carbohidrato, lipidio, aminoácido, buffer y sal.

77. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido.

78. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende ion de metal .

79. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido e ion de metal.

80. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que la composición farmacéutica comprende particulados huecos y/o porosos.

81. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que la composición farmacéutica es compuesta de particulados, comprendiendo anfotericina B en una matriz comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable.

82. La composición farmacéutica de la reivindicación 81, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

83. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que la composición farmacéutica comprende polvo seco .

84. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que la composición farmacéutica comprende aún un propelente .

85. La composición farmacéutica de la reivindicación 84, en que el propelente comprende, por lo menos, un hidrofluoroalcano.

86. La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en que la composición farmacéutica comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm, en que por lo menos 80% en peso comprenden particulados conteniendo anfotericina B en una matriz, comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable y en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

87. Un polvo seco comprendiendo: Anfotericina B con un nivel de cristalinidad de o menos cerca de 20%, en que el polvo seco comprende partículas con diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm .

88. El polvo seco de la reivindicación 87, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 70% a cerca de 99%.

89. El polvo seco de la reivindicación 87, en que el polvo seco comprende partículas con diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm.

90. El polvo seco de la reivindicación 87, en que la composición farmacéutica se hace de partículas conteniendo anfotericina B con diámetro medio de masa inferior a cerca de 3 µm.

91. El polvo seco de la reivindicación 87, en que la composición farmacéutica se hace de partículas conteniendo anfotericina B y en que, por lo menos, 80% en peso de las partículas, conteniendo anfotericina B, poseen un diámetro geométrico inferior a cerca de 3 µm.

92. El polvo seco de la reivindicación 87, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de la composición farmacéutica comprenden particulados, compuestos tanto de anfotericina B como de excipiente farmacéuticamente aceptable.

93. El polvo seco de la reivindicación 87 es compuesto también por un excipiente farmacéuticamente aceptable.

94. El polvo seco de la reivindicación 93, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un componente seleccionado entre carbohidrato, lipidio, aminoácido, buffer y sal.

95. El polvo seco de la reivindicación 93, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido.

96. El polvo seco de la reivindicación 93, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende ion de metal .

97. El polvo seco de la reivindicación 93, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido e ion de metal.

98. El polvo seco de la reivindicación 87, en que el polvo seco es compuesto de partículas huecos y/o porosos.

99. El polvo seco de la reivindicación 87, en que el polvo seco es compuesto de particulados, que comprenden anfotericina B en una matriz comprendiendo un excipiente farmacéuticamente aceptable.

100. Una forma de dosificación unitaria, comprendiendo: una cantidad eficaz de anfotericina B, y excipiente farmacéuticamente aceptable, en que la composición farmacéutica se hace de partículas comprendiendo anfotericina B con diámetro medio de masa inferior a cerca de 1,9 µm.

101. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que el recipiente comprende una cápsula.

102. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que la composición farmacéutica se hace de partículas comprendiendo anfotericina B con diámetro medio de masa que varía de cerca de 0,5 µm a cerca de 1,8 µm.

103. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de las partículas comprendiendo anfotericina B poseen diámetro geométrico inferior a cerca de 1,9 µm.

104. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que, por lo menos, cerca de 90% en peso de las partículas comprendiendo anfotericina B poseen diámetro geométrico inferior a cerca de 1,9 µm.

105. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%.

106. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que la composición farmacéutica comprende particulados.

107. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 106, en que los particulados poseen diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm.

108. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 106, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm.

109. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que, por lo menos cerca de 80% de la composición farmacéutica comprenden particulados conteniendo tanto anfotericina B como el excipiente farmacéuticamente aceptable.

110. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que la composición farmacéutica comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm y en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 70%.

111. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un componente seleccionado entre carbohidrato, lipidio, aminoácido, buffer y sal.

112. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido.

113. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende ion de metal .

114. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido e ion de metal .

115. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que la composición farmacéutica comprende particulados huecos y/o porosos.

116. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que la composición farmacéutica comprende particulados que contienen anfotericina B en una matriz comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable.

117. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 100, en que la composición farmacéutica comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 70%, en que, por lo menos 80% en peso comprenden particulados conteniendo anfotericina B en una matriz, comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable y en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

118. Una forma de dosificación unitaria, comprendiendo : un recipiente conteniendo una composición farmacéutica comprendiendo: una cantidad eficaz de anfotericina B, y excipiente farmacéuticamente aceptable, en que la composición farmacéutica se hace de partículas comprendiendo anfotericina B y en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de las partículas comprenden anfotericina B con un diámetro geométrico inferior a cerca de 1,9 µm.

119. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que el recipiente comprende una cápsula.

120. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que la composición farmacéutica se hace de partículas comprendiendo anfotericina B con diámetro medio de masa que varía de cerca de 0,5 µm a cerca de 1,8 µm.

121. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que, por lo menos, cerca de 90% en peso de las partículas comprendiendo anfotericina B poseen diámetro geométrico inferior a cerca de 1,9 µm.

122. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que, por lo menos, cerca de 95% en peso de las partículas comprendiendo anfotericina B poseen diámetro geométrico inferior a cerca de 1,9 µm.

123. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%.

124. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que la composición farmacéutica comprende particulados.

125. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 124, en que los particulados poseen diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm.

126. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 124, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm.

127. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que, por lo menos cerca de 80% de la composición farmacéutica comprenden particulados conteniendo tanto anfotericina B como el excipiente farmacéuticamente aceptable.

128. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que la composición farmacéutica comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm y en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 70%.

129. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un componente seleccionado entre carbohidrato, lipidio, aminoácido, buffer y sal.

130. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido.

131. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende ion de metal.

132. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido e ion de metal .

133. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que la composición farmacéutica comprende particulados huecos y/o porosos.

134. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que la composición farmacéutica comprende particulados que contienen anfotericina B en una matriz comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable.

135. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 134, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

136. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que la composición farmacéutica es compuesta de polvo seco.

137. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 118, en que la composición farmacéutica comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 70%, en que, por lo menos 80% en peso comprenden particulados conteniendo anfotericina B en una matriz, comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable y en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

138. Una forma de dosificación unitaria, comprendiendo : un recipiente conteniendo una composición farmacéutica comprendiendo: Anfotericina B; y excipiente farmacéuticamente aceptable, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 20% a cerca de 99%.

139. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 138, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de varía de cerca de 70% a cerca de 98%.

140. La forma de dosificación unitaria de la • reivindicación 138, en que la composición farmacéutica se hace de partículas comprendiendo anfotericina B, poseen un diámetro medio de masa inferior a 3 µm.

141. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 138, en que la composición farmacéutica se hace de partículas comprendiendo anfotericina B y en que, por lo menos, 80% en peso de las partículas comprenden anfotericina B con diámetro geométrico inferior a 3 µm.

142. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 138, en que la composición farmacéutica comprende particulados.

143. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 142, en que los particulados poseen diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm.

144. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 142, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm.

145. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 138, en que, por lo menos cerca de 80% en peso de la composición farmacéutica comprenden particulados conteniendo tanto anfotericina B como el excipiente farmacéuticamente aceptable.

146. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 138, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un componente seleccionado entre carbohidrato, lipidio, aminoácido, buffer y sal.

147. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 138, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido.

148. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 138, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende ion de metal .

149. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 138, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido e ion de metal .

150. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 138, en que la composición farmacéutica comprende particulados huecos y/o porosos.

151. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 138, en que la composición farmacéutica comprende particulados que contienen anfotericina B en una matriz comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable.

152. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 151, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

153. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 138, en que la composición farmacéutica es compuesta de polvo seco.

154. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 138, en que la composición farmacéutica comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm, en que, por lo menos cerca de 80% en peso de la composición farmacéutica es compuesta de particulados comprendiendo de anfotericina B en una matriz, comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable y en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

155. Un sistema de suministro, comprendiendo: un inhalador; y una composición farmacéutica comprendiendo particulados comprendiendo: Anfotericina B; y excipiente farmacéuticamente aceptable, en que los particulados son hechos de partículas comprendiendo anfotericina B con diámetro medio de masa inferior a cerca de 1,9 µm.

156. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que el inhalador comprende un inhalador de polvo seco.

157. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que el inhalador comprende un cartucho conteniendo los particulados y propelente y en que el inhalador comprende una válvula medidora que se comunica con el interior del cartucho.

158. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que el inhalador comprende un nebulizador y, en que, los particulados están suspendidos en un líquido.

159. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que los particulados son hechos a partir de partículas que contienen anfotericina B con diámetro medio de masa que varía de cerca de 0,5 µm a cerca de 1,8 µm.

160. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de las partículas comprendiendo anfotericina B poseen diámetro geométrico inferior a cerca de 1,9 µm.

161. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que a anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%.

162. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 70% a cerca de 99%.

163. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que los particulados poseen diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm.

164. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm.

165. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que, por lo menos cerca de 80% en peso de la composición farmacéutica comprenden particulados conteniendo tanto anfotericina B como el excipiente farmacéuticamente aceptable.

166. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que la composición farmacéutica comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm y en gue la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 70%.

167. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un componente seleccionado entre carbohidrato, lipidio, aminoácido, buffer y sal.

168. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido.

169. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que los particulados comprenden la anfotericina B en una matriz comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable.

170. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de la composición farmacéutica comprenden particulados conteniendo anfotericina B en una matriz, comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable y en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

171. Un sistema de suministro comprendiendo: un inhalador; y una composición farmacéutica comprendiendo particulados comprendiendo: Anfotericina B y excipiente farmacéuticamente aceptable, en que los particulados son hechos a partir de partículas que contienen anfotericina B y en que, por lo menos, 80% en peso de las partículas conteniendo anfotericina B poseen un diámetro geométrico inferior a cerca de 1,9 µm.

172. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que el inhalador comprende un inhalador de polvo seco.

173. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que el inhalador comprende un cartucho conteniendo los particulados y propelente y en que el inhalador comprende una válvula medidora que se comunica con el interior del cartucho.

174. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que el inhalador comprende un nebulizador y, en que, los particulados están suspendidos en un líquido.

175. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que los particulados son hechos a partir de partículas que contienen anfotericina B con diámetro medio de masa que varía de cerca de 0,5 µm a cerca de 1,8 µm.

176. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de las partículas comprendiendo anfotericina B poseen diámetro geométrico inferior a cerca de 1,9 µm.

177. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%.

178. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 70% a cerca de 99%.

179. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que los particulados poseen diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm.

180. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm.

181. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que, por lo menos cerca de 80% en peso de la composición farmacéutica comprenden particulados conteniendo tanto anfotericina B como el excipiente farmacéuticamente aceptable.

182. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que la composición farmacéutica comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm y en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 70%.

183. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un componente seleccionado entre carbohidrato, lipidio, aminoácido, buffer y sal.

184. El sistema de suministro de la reivindicación 155, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido.

185. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que los particulados comprenden la anfotericina B en una matriz comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable.

186. El sistema de suministro de la reivindicación 171, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de la composición farmacéutica comprenden particulados conteniendo anfotericina B en una matriz, comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable y en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

187. Un sistema de suministro comprendiendo: un inhalador; y una composición farmacéutica comprendiendo particulados, comprendiendo; Anfotericina B con nivel de cristalinidad variando de cerca de 20% a cerca de 99% y excipiente farmacéuticamente aceptable.

188. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que el inhalador comprende un inhalador de polvo seco.

189. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que el inhalador comprende un cartucho conteniendo los particulados y propelente y en que el inhalador comprende una válvula medidora que se comunica con el interior del cartucho.

190. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que el inhalador comprende un nebulizador y, en que, los particulados están suspendidos en un líquido.

191. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad que varía de cerca de 70% a cerca de 98%.

192. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que los particulados son hechos a partir de partículas conteniendo anfotericina B con diámetro medio de masa inferior a cerca de 3 µm.

193. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que los particulados son hechos a partir de partículas conteniendo anfotericina B con diámetro medio de masa inferior a cerca de 2 µm.

194. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que los particulados son hechos a partir de partículas conteniendo anfotericina B y en que, por lo menos, 80% en peso de los particulados, conteniendo anfotericina B, poseen un diámetro geométrico inferior a cerca de 3 µm.

195. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm.

196. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm.

197. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que, por lo menos cerca de 80% en peso de la composición farmacéutica comprenden particulados conteniendo tanto anfotericina B como el excipiente farmacéuticamente aceptable.

198. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm y en que los particulados son hechos a partir de partículas conteniendo anfotericina B con diámetro medio de masa inferior a cerca de 3 µm.

199. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un componente seleccionado entre carbohidrato, lipidio, aminoácido, buffer y sal.

200. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido.

201. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que los particulados comprenden a anfotericina B en una matriz comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable.

202. El sistema de suministro de la reivindicación 187, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de la composición farmacéutica comprenden particulados conteniendo anfotericina B en una matriz, comprendiendo el excipiente farmacéuticamente aceptable y en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un fosfolípido.

203. Un método de caracterización de anfotericina B para producción de una composición farmacéutica, comprendiendo: la determinación del nivel de cristalinidad de una composición conteniendo anfotericina B; y garantizar que el nivel de cristalinidad sea más alto que un primer nivel predeterminado, antes que la composición conteniendo anfotericina B sea liberada Z para combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable para producción de una composición farmacéutica.

204. El método de la reivindicación 203, en que la determinación del nivel de cristalinidad comprende la ejecución de difracción de rayos-X de polvo de, por lo menos, una parte de la composición con la anfotericina B.

205. El método de la reivindicación 203, en que la determinación del nivel de cristalinidad comprende la ejecución de espectroscopia en el infrarrojo de, por lo menos, una parte de la composición con la anfotericina B.

206. El método de la reivindicación 203, en que la determinación del nivel de cristalinidad comprende la ejecución de sorción dinámica de vapor de, por lo menos, una parte de la composición con la anfotericina B.

207. El método de la reivindicación 203, en que el primer nivel predeterminado es de, por lo menos, cerca de 50%.

208. El método de la reivindicación 203, en que el primer nivel predeterminado es de, por lo menos, cerca de 70%.

209. El método de la reivindicación 203, en que el primer nivel predeterminado es de, por lo menos, cerca de 90%.

210. El método de la reivindicación 203 comprende también la recristalización de la composición conteniendo anfotericina B si el nivel de cristalinidad está en el primer nivel predeterminado o si es abajo del mismo.

211. El método de la reivindicación 203 comprende también descartar la composición conteniendo anfotericina B si el nivel de cristalinidad está en el primer nivel predeterminado o si es abajo del mismo.

212. El método de la reivindicación 203 comprende también la combinación de la composición conteniendo anfotericina B con un excipiente farmacéuticamente aceptable para formar la composición farmacéutica .

213. El método de la reivindicación 212, en que la combinación de la composición conteniendo anfotericina B con el excipiente farmacéuticamente aceptable para formar la composición farmacéutica comprende secado por aspersión.

214. El método de la reivindicación 212 comprende también la determinación del nivel de cristalinidad de la composición farmacéutica.

215. El método de la reivindicación 214 comprende también la liberación de la composición farmacéutica para administración a un paciente si el nivel de cristalinidad está por encima de un segundo nivel predeterminado.

216. El método de la reivindicación 215, en que el segundo nivel predeterminado es de, por lo menos, cerca de 50%.

217. Un método de caracterización de anfotericina B para producción de una composición farmacéutica, comprendiendo: la determinación de la amorficidad de una composición conteniendo anfotericina B; y garantizar que la amorficidad sea más alta que un primer nivel predeterminado, antes que la composición conteniendo anfotericina B sea liberada para combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable para producción de una composición farmacéutica .

218. El método de la reivindicación 217, en que la determinación de la amorficidad comprende la ejecución de difracción de rayos-X de polvo de, por lo menos, una parte de la composición con la anfotericina B.

219. El método de la reivindicación 217, en que la determinación de la amorficidad comprende la ejecución de espectroscopia en el infrarrojo de, por lo menos, una parte de la composición con la anfotericina B.

220. El método de la reivindicación 217, en que la determinación de la amorficidad comprende la ejecución de sorción dinámica de vapor de, por lo menos, una parte de la composición con la anfotericina B.

221. El método de la reivindicación 217, en que el primer nivel predeterminado es inferior a, por lo menos, cerca de 50%.

222. El método de la reivindicación 217, en que el primer nivel predeterminado es inferior a, por lo menos, cerca de 30%.

223. El método de la reivindicación 217, en que el primer nivel predeterminado es inferior a, por lo menos, cerca de 10%.

224. El método de la reivindicación 217, en que la combinación de la composición conteniendo anfotericina B con un excipiente farmacéuticamente aceptable para formar la composición farmacéutica comprende secado por aspersión.

225. El método de la reivindicación 217, comprende también la determinación de la amorficidad de la composición farmacéutica.

226. El método de la reivindicación 225, comprende también la liberación de la composición farmacéutica para administración a un paciente si la amorficidad está por encima de un segundo nivel predeterminado .

227. El método de la reivindicación 226, en que el segundo nivel predeterminado es inferior a, por lo menos, cerca de 50%.

228. Un método para producción y caracterización de una composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco, comprendiendo: la combinación de una composición con anfotericina B con un excipiente farmacéuticamente aceptable para formar la composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco; y la determinación de un diámetro aerodinámico medio de masa de la composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco; y garantizar que el diámetro aerodinámico medio de masa sea inferior al de un nivel predeterminado, antes que la composición conteniendo anfotericina B sea liberada para administración a un paciente.

229. El método de la reivindicación 228, en que el diámetro aerodinámico medio de masa es determinado por impactación en cascada.

230. El método de la reivindicación 228, en que el nivel predeterminado es inferior a cerca de 10 µm.

231. El método de la reivindicación 228, en que el nivel predeterminado es inferior a cerca de 5 µm.

232. Un método para producción y caracterización de una composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco, comprendiendo: la combinación de una composición con anfotericina B con un excipiente farmacéuticamente aceptable para formar la composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco; y la determinación de un grado de homogeneidad de la composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco; y garantizar que el grado de homogeneidad sea superior al de un nivel predeterminado, antes que la composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco sea liberada para administración a un paciente.

233. El método de la reivindicación 232, en que la determinación del grado de homogeneidad comprende la determinación de cual porcentual en peso de la composición farmacéutica bajo la forma de polvo seco comprende particulados que incluyan tanto anfotericina B como el excipiente farmacéuticamente aceptable.

234. El método de la reivindicación 232, en que la composición farmacéutica bajo la forma de polvo es liberada para administración si el porcentual en peso es superior a, por lo menos, 80% en peso.

235. El método de la reivindicación 232, en que la composición farmacéutica bajo la forma de polvo es liberada para administración si el porcentual en peso es superior a, por lo menos, 90% en peso.

236. Un método para producción de partículas secas por aspersión, comprendiendo: la suspensión de partículas conteniendo anfotericina B en un líquido formando una carga, en que las partículas poseen un diámetro medio de masa inferior a cerca de 3 µm; y el secado por aspersión de la carga para producción de las partículas secadas por aspersión.

237. El método de la reivindicación 236, en que las partículas comprendiendo anfotericina B poseen un diámetro medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 2 µm.

238. El método de la reivindicación 236, en que las partículas comprendiendo anfotericina B tienen un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%.

239. El método de la reivindicación 236, en que las partículas secadas por aspersión poseen un diámetro medio de masa inferior a cerca de lOµm.

240. El método de la reivindicación 236, en que por lo menos cerca de 80% en peso de las partículas secadas por aspersión comprenden la anfotericina B y un excipiente farmacéuticamente aceptable .

241. El método de la reivindicación 236, en que las partículas secadas por aspersión poseen un diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de lOµm y en que las partículas conteniendo anfotericina B tienen un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%.

242. El método de la reivindicación 236, en que la carga comprende también un excipiente farmacéuticamente aceptable.

243. El método de la reivindicación 236, en que el secado por aspersión de la carga comprende el secado por aspersión de una carga adicional conteniendo un excipiente farmacéuticamente aceptable.

244. El método de la reivindicación 236, en que las partículas secadas por aspersión comprenden también un excipiente farmacéuticamente aceptable.

245. El método de la reivindicación 236 comprende también la coleta de las partículas secadas por aspersión.

246. El método de la reivindicación 236 comprende también la adición de un emulsificante a la carga

247. El método de la reivindicación 246, en que el emulsificante comprende fosfatidilcolina.

248. El método de la reivindicación 247, en que la fosfatidilcolina comprende diestearoilfosfatidilcolina.

249. El método de la reivindicación 236 comprende también la adición de un agente de expansión a la carga.

250. El método de la reivindicación 236, en que las partículas secadas por aspersión comprenden cristales de anfotericina B en una matriz de fosfolípidos.

251. El método de la reivindicación 236, en que las partículas secadas por aspersión son huecas y/o porosas.

252. El método de la reivindicación 251, en que la carga comprende también un aminoácido hidrofóbico.

253. Un método para producción de partículas secadas por aspersión, comprendiendo: la suspensión de partículas conteniendo anfotericina B en un líquido formando una carga, en que la anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 20%; y el secado por aspersión de la carga para producción de las partículas secadas por aspersión.

254. El método de la reivindicación 253, en que la anfotericina B posee un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%.

255. El método de la reivindicación 253, en que las partículas comprendiendo anfotericina B tienen un diámetro medio de masa inferior a cerca de 3 µm. 256. El método de la reivindicación 253, en que por lo menos cerca de 80% en peso de las partículas conteniendo anfotericina B poseen un diámetro geométrico de por lo menos cerca de 3 µm.

256. El método de la reivindicación 253, en que por lo menos cerca de 80% en peso de las partículas conteniendo anfotericina B poseen un diámetro geométrico de por lo menos cerca de 3 µm.

257. El método de la reivindicación 253, en que las partículas secadas por aspersión poseen un diámetro medio de masa inferior a cerca de 10 µm.

258. El método de la reivindicación 253, en que, por lo menos, 80% en peso de las partículas secadas por aspersión comprenden la anfotericina B y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

259. El método de la reivindicación 253, en que las partículas secas por aspersión poseen un diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de lOµm y en que las partículas conteniendo anfotericina B tienen un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%.

260. El método de la reivindicación 253, en que la carga comprende también un excipiente farmacéuticamente aceptable.

261. El método de la reivindicación 253, en que el secado por aspersión de la carga comprende también el secado por aspersión de una carga adicional conteniendo un excipiente farmacéuticamente aceptable.

262. El método de la reivindicación 253, en que las partículas secadas por aspersión comprenden también un excipiente farmacéuticamente aceptable.

263. El método de la reivindicación 253, comprende también la coleta de las partículas secadas por aspersión.

264. El método de la reivindicación 253, comprende también la adición de un emulsificante a la carga

265. El método de la reivindicación 264, en que el emulsificante comprende fosfatidilcolina.

266. El método de la reivindicación 265, en que la fosfatidilcolina comprende diestearoilfosfatidilcolina .

267. El método de la reivindicación 253, comprende también la adición de un agente de expansión a la carga.

268. El método de la reivindicación 253, en que las partículas secadas por aspersión comprenden cristales de anfotericina B en una matriz de fosfolípidos.

269. El método de la reivindicación 253, en que las partículas secadas por aspersión son huecas y/o porosas .

270. El método de la reivindicación 269, en que la carga comprende también un aminoácido hidrofóbico.

271. Un método para tratamiento y/o suministro de profilaxis contra infección fúngica, comprendiendo: la administración, por inhalación, de una cantidad eficaz de una composición conteniendo anfotericina B a un paciente que necesita la misma, en que la composición se hace a partir de partículas con anfotericina que poseen un diámetro medio de masa que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

272. El método de la reivindicación 271, en que una cantidad suficiente de la composición es administrada para mantener por, por lo menos, cerca de 4 semanas, una concentración pulmonar pretendida de anfotericina B de por lo menos cerca de 5 veces una concentración mínima de inhibición determinada.

273. El método de la reivindicación 272, en que la concentración mínima de inhibición es la concentración mínima de inhibición en el revestimiento epitelial del pulmón.

274. El método de la reivindicación 272, en que la concentración mínima de inhibición es la concentración mínima de inhibición en el tejido pulmonar sólido.

275. El método de la reivindicación 272, en que la concentración pulmonar pretendida de anfotericina B es mantenida por, por lo menos, cerca de 8 semanas .

276. El método de la reivindicación 272, en que la concentración pulmonar pretendida de anfotericina B es de por lo menos cerca de 4 µg/g.

277. El método de la reivindicación 272, en que la concentración pulmonar pretendida de anfotericina varía de cerca de 4,5 µg/g a cerca de 20 µg/-J Y en ue la- administración comprende el suministro de la composición farmacéutica regularmente para mantener la concentración pulmonar de anfotericina dentro del intervalo pretendido de concentración pulmonar de anfotericina B.

278. El método de la reivindicación 272, en que la administración comprende el suministro de 1 dosis de la composición durante la primera semana de administración .

279. El método de la reivindicación 271, en que la administración comprende el suministro de por lo menos 2 dosis de la composición durante la primera semana de administración.

280. El método de la reivindicación 271, en que la administración comprende un primer período de administración y un segundo período de administración y en que la composición es administrada más frecuentemente o en una dosificación más alta durante el primer período de administración que durante el segundo período de administración.

281. El método de la reivindicación 271, en que las partículas conteniendo anfotericina B poseen un diámetro medio de masa que varía de cerca de 1,2 µm a cerca de 1,8 µm.

282. El método de la reivindicación 271, en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de las partículas comprendiendo anfotericina B poseen diámetro geométrico inferior a cerca de 1,9 µm.

283. El método de la reivindicación 271, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%.

284. El método de la reivindicación 271, en que la composición comprende particulados.

285. El método de la reivindicación 284, en que los particulados poseen diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm.

286. El método de la reivindicación 284, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm.

287. El método de la reivindicación 271, en que, por lo menos cerca de 80% en peso de la composición comprenden particulados conteniendo tanto anfotericina B como excipiente farmacéuticamente aceptable.

288. El método de la reivindicación 271, en que la composición comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm y en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%.

289. El método de la reivindicación 271, en que la composición comprende partículas consistiendo en esencialmente de anfotericina B.

290. El método de la reivindicación 289, en que la composición comprende aún partículas conteniendo un excipiente farmacéuticamente aceptable.

291. El método de la reivindicación 271, en que la composición comprende particulados que contienen la anfotericina B y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

292. El método de la reivindicación 291, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un componente seleccionado entre carbohidrato, lipidio, aminoácido, buffer y sal.

293. El método de la reivindicación 291, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido.

294. El método de la reivindicación 291, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende ion de metal .

295. El método de la reivindicación 291, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido e ion de metal.

296. El método de la reivindicación 271, en que la composición comprende partículas huecas y/o porosas .

297. El método de la reivindicación 271, en que la composición comprende particulados que contienen anfotericina B cristalina en un material de matriz .

298. El método de la reivindicación 297, en que el material de matriz comprende, por lo menos, un fosfolípido.

299. El método de la reivindicación 271, en que la administración comprende el suministro de la composición bajo la forma de polvo seco, utilizando un inhalador de polvo seco .

300. El método de la reivindicación 271, en que la composición comprende un propelente y en que la administración comprende la aerosolización de la composición por la abertura de una válvula para liberación de la composición.

301. El método de la reivindicación 300, en que el propelente comprende por lo menos un hidrofluoroalcano .

302. El método de la reivindicación 271, en que el método comprende el tratamiento contra la infección fúngica.

303. El método de la reivindicación 271, en que el método comprende el suministro de profilaxis contra la infección fúngica.

304. El método de la reivindicación 271, en que la infección fúngica comprende infección pulmonar fúngica.

305. El método de la reivindicación 271, en que la infección fúngica comprende infección nasal fúngica.

306. El método de la reivindicación 271, en que la administración comprende administración pulmonar .

307. El método de la reivindicación 271, en que la administración comprende administración nasal .

308. El método de la reivindicación 271, en que el método comprende el suministro de profilaxis contra infección pulmonar fúngica, en que la administración comprende administración pulmonar, en que una cantidad suficiente de la composición es administrada para mantener por, por lo menos, cerca de 8 semanas una concentración pulmonar pretendida de anfotericina B de, por lo menos, 5 veces una concentración mínima de inhibición determinada, en que la composición se hace a partir de partículas comprendiendo anfotericina B con un diámetro medio de masa que varía de cerca de 0,5 µm a cerca de 1,8 µm, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 50%, en que la composición comprende particulados con diámetro aerodinámica medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm, y en que, por lo menos, 80% en peso de la composición comprenden particulados que contienen tanto anfotericina B como fosfolípido.

309. Un método para tratamiento y/o suministro de profilaxis contra infección fúngica, comprendiendo: la administración, por inhalación, de una cantidad eficaz de una composición conteniendo anfotericina B a un paciente que necesita la misma, en que la composición se hace a partir de partículas con anfotericina B y en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de las partículas comprenden anfotericina B con un diámetro geométrico que varía de cerca de 1,1 µm a cerca de 1,9 µm.

310. Un método para tratamiento y/o suministro de profilaxis contra infección fúngica, comprendiendo: la administración, por inhalación, de una cantidad eficaz de una composición conteniendo anfotericina B a un paciente que necesita la misma, en que la composición se hace a partir de partículas con anfotericina B, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 20%.

311. El método de la reivindicación 310, en que una cantidad suficiente de la composición es administrada para mantener por, por lo menos, cerca de 4 semanas, una concentración pulmonar pretendida de anfotericina B de por lo menos cerca de 5 veces una concentración mínima de inhibición determinada.

312. El método de la reivindicación 311, en que la concentración mínima de inhibición es la concentración mínima de inhibición en el revestimiento epitelial del pulmón.

313. El método de la reivindicación 311, en que la concentración mínima de inhibición es la concentración mínima de inhibición en el tejido pulmonar sólido.

314. El método de la reivindicación 311, en que la concentración pulmonar pretendida de anfotericina B es mantenida por, por lo menos, cerca de 8 semanas.

315. El método de la reivindicación 311, en que la concentración pulmonar pretendida de anfotericina es de por lo menos cerca de 4 µg/g.

316. El método de la reivindicación 311, en que la concentración pulmonar pretendida de anfotericina varía de cerca de 4,5 µg/g a cerca de 20 J--/SJ Y en gue la administración comprende el suministro de la composición farmacéutica regularmente para mantener la concentración pulmonar de anfotericina dentro del intervalo pretendido de concentración pulmonar de anfotericina B.

317. El método de la reivindicación 311, en que la administración comprende el suministro de 1 dosis de la composición durante la primera semana de administración.

318. El método de la reivindicación 310, en que la administración comprende el suministro de por lo menos 2 dosis de la composición durante la primera semana de administración.

319. El método de la reivindicación 310, en que la administración comprende un primer período de administración y un segundo período de administración y en que la composición es administrada más frecuentemente o en una dosificación más alta durante el primer período de administración que durante el segundo período de administración.

320. El método de la reivindicación 310, en que la composición se hace de partículas conteniendo anfotericina B con diámetro medio de masa inferior a cerca de 3 µm.

321. El método de la reivindicación 310, en que la composición se hace de partículas comprendiendo anfotericina B y en que, por lo menos, cerca de 80% en peso de las partículas comprendiendo anfotericina poseen un diámetro geométrico inferior a cerca de 3 µm.

322. El método de la reivindicación 310, en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 70%.

323. El método de la reivindicación 310, en que la composición comprende particulados.

324. El método de la reivindicación 323, en que los particulados poseen diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm.

325. El método de la reivindicación 323, en que los particulados poseen un diámetro aerodinámico medio de masa que varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm.

326. El método de la reivindicación 323, en que, por lo menos cerca de 80% en peso de la composición comprenden particulados conteniendo tanto anfotericina B como excipiente farmacéuticamente aceptable .

327. El método de la reivindicación 310, en que la composición comprende particulados con diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm y en que la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 70%.

328. El método de la reivindicación 310, en que la composición comprende partículas consistiendo en esencialmente de anfotericina B.

329. El método de la reivindicación 328, en que la composición comprende también partículas conteniendo un excipiente farmacéuticamente aceptable.

330. El método de la reivindicación 310, en que la composición comprende particulados que contienen la anfotericina B y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

331. El método de la reivindicación 330, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende, por lo menos, un componente seleccionado entre carbohidrato, lipidio, aminoácido, buffer y sal.

332. El método de la reivindicación 330, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido.

333. El método de la reivindicación 330, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende ion de metal .

334. El método de la reivindicación 330, en que el excipiente farmacéuticamente aceptable comprende fosfolípido e ion de metal.

335. El método de la reivindicación 310, en que la composición comprende partículas huecas y/o porosas.

336. El método de la reivindicación 310, en que la composición comprende particulados que contienen anfotericina B cristalina en un material de matriz .

337. El método de la reivindicación 336, en que el material de matriz comprende, por lo menos, un fosfolípido.

338. El método de la reivindicación 310, en que la administración comprende el suministro de la composición bajo la forma de polvo seco, utilizando un inhalador de polvo seco.

339. El método de la reivindicación 310, en que la composición comprende un propelente y en que la administración comprende la aerosolización de la composición por la abertura de una válvula para liberación de la composición.

340. El método de la reivindicación 339, en que el propelente comprende por lo menos un hidrofluoroalcano.

341. El método de la reivindicación 310, en que el método comprende el tratamiento contra la infección fúngica.

342. El método de la reivindicación 310, en que el método comprende el suministro de profilaxis contra la infección fúngica.

343. El método de la reivindicación 310, en que la infección fúngica comprende infección pulmonar fúngica.

344. El método de la reivindicación 310, en que la infección fúngica comprende infección nasal fúngica.

345. El método de la reivindicación 310, en que la administración comprende administración pulmonar .

346. El método de la reivindicación 310, en que la administración comprende administración nasal .

347. El método de la reivindicación 310, en que el método comprende el suministro de profilaxis contra infección pulmonar fúngica, en gue la administración comprende administración pulmonar, en gue una cantidad suficiente de la composición es administrada para mantener por, por lo menos, cerca de 8 semanas una concentración pulmonar pretendida de anfotericina B de, por lo menos, 5 veces una concentración mínima de inhibición determinada, en gue la composición se hace a partir de partículas comprendiendo anfotericina B con un diámetro medio de masa inferior a 3 µm, en gue la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de por lo menos cerca de 70%, en gue la composición comprende particulados con diámetro aerodinámica medio de masa gue varía de cerca de 1 µm a cerca de 6 µm, y en gue, por lo menos, 80% en peso de la composición comprenden particulados gue contienen tanto anfotericina B como fosfolípido.

348. Un método para tratamiento y/o suministro de profilaxis contra infección fúngica, comprendiendo : la administración, por inhalación, de una cantidad eficaz de una composición conteniendo anfotericina B a un paciente gue necesita la misma, en gue la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 20%, y en gue la anfotericina B tiene una semivida de permanencia en tejido pulmonar sólido de por lo menos cerca de 1 semana, conforme determinada por biopsia de tejido pulmonar.

349. Un método para tratamiento y/o suministro de profilaxis contra infección fúngica, comprendiendo : la administración, por inhalación, de una cantidad eficaz de una composición conteniendo anfotericina B a un paciente gue necesita la misma, en gue la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 20%, y en gue la anfotericina B tiene una semivida de permanencia en fluido de revestimiento epitelial pulmonar de por lo menos cerca de 10 horas, conforme determinada por lavado broncoalveolar.

350. Un método para tratamiento y/o suministro de profilaxis contra infección fúngica, comprendiendo : la administración, por inhalación, de una composición comprendiendo una cantidad de anfotericina B gue varía de cerca de 0,01 mg/kg a 7,0 mg/kg a un paciente gue necesita la misma, en gue la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 20%, y en gue la concentración plasmática de anfotericina B permanece inferior a cerca de 1000 ng/ml .

351. Un método para tratamiento y/o suministro de profilaxis contra infección fúngica, comprendiendo: la administración, por inhalación, de una composición comprendiendo una cantidad de anfotericina B gue varía de cerca de 0,01 mg/kg a 7,0 mg/kg a un paciente gue necesita la misma, en gue la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 20%, en gue la concentración plasmática de anfotericina B permanece suficientemente baja de forma a prevenir toxicidad renal y/o hepática.

352. Un método para tratamiento y/o suministro de profilaxis contra infección fúngica, comprendiendo: la administración, por inhalación, de una composición comprendiendo una cantidad de anfotericina B a un paciente gue necesita la misma, en gue la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 20%, en gue la concentración pulmonar de anfotericina B atinja por lo menos 5 veces la concentración mínima de inhibición por, por lo menos, una parte de la duración del tratamiento, conforme a lo determinado por lavado broncoalveolar, y en gue la concentración plasmática de anfotericina B permanece inferior a cerca de 1000 ng/ml .

353. Un método para tratamiento y/o suministro de profilaxis contra infección fúngica, comprendiendo : la administración, por inhalación, de una composición comprendiendo una cantidad de anfotericina B a un paciente gue necesita la misma, en gue la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 20%, en gue la duración del tratamiento varía de cerca de 15 semanas a cerca de 20 semanas, y en gue la concentración pulmonar de anfotericina B atinja por lo menos 5 veces la concentración mínima de inhibición por, por lo menos, una parte de la duración del tratamiento, conforme a lo determinado por lavado broncoalveolar, y

354. Un método para tratamiento y/o suministro de profilaxis contra infección fúngica, comprendiendo: la administración, por inhalación, de una composición comprendiendo una cantidad de anfotericina B gue varía de cerca de 20 mg a cerca de 50 mg a un paciente gue necesita la misma, en gue la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 20%, y en gue la administración es conducida en menos de cerca de 5 minutos .

355. Un método para tratamiento y/o suministro de profilaxis contra infección fúngica, comprendiendo : la administración, por inhalación, de una cantidad eficaz de polvo seco, comprendiendo anfotericina B a un paciente gue necesita la misma, en gue la anfotericina B tiene un nivel de cristalinidad de, por lo menos, cerca de 20%, y en gue el polvo seco comprenda partículas con diámetro aerodinámico medio de masa inferior a cerca de 10 µm.