MXPA06014581A - Metodo para mejorar la respuesta inmune a una vacuna. - Google Patents

Abstract

Un metodo para mejorar la respuesta inmune a un antigeno o vacuna. que comprende administrar una cantidad efectiva de una citocina estimuladora de Thl. de preferencia interferon. en forma oromucosal sustancialmente al mismo tiempo de la administracion de una cantidad efectiva de un antigeno o vacuna.

Description

MÉTODO PARA MEJORAR LA RESPUESTA INMUNE A UNA VACUNA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un método para mejorar la respuesta Inmune a la vacunación. Más particularmente, se refiere al uso de interferón, y/u otras citocinas estimuladoras Th1 , como en un inmunoadyuvante, para mejorar la respuesta inmune después de la administración de una vacuna.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Se conocen vacunas en la técnica. En general, incluyen patógenos destruidos o atenuados y vacunas subunitarias, o vacunas que comprenden otro antígeno contra el cual se desea una respuesta inmune, las cuales se administran con el propósito de prevenir, mejorar o tratar enfermedades infecciosas. En particular, las vacunas subunitarias son vacunas basadas en antígenos derivados de componentes del patógeno que se considera son objetivos importantes para la protección mediada por el sistema inmune del hospedero. Aunque se ha demostrado que son altamente seguras, las vacunas subunitarias inducen con frecuencia respuestas inmunes inadecuadas debido al hecho de que el antígeno en el cual se basan, es poco inmunógeno o no inmunógeno. Por consiguiente, para producir inmunogenicidad, las vacunas subunitarias con frecuencia necesitan incluir o necesitan administrarse junto con un adyuvante. Los adyuvantes se definen con respecto a inmunología, como "un vehículo usado para mejorar la antigenicidad" (Stedman's Medical Dictionary, 2003). De esta manera, un adyuvante es una sustancia que, cuando se administra junto con el antígeno, mejora la antigenicidad del mismo en comparación con el antígeno solo. Aunque muchos de adyuvantes se han usado en modelos animales, y ejemplos clásicos incluyen emulsiones de agua en aceite en las cuales la solución del antígeno es emulsionada en aceite mineral (adyuvante incompleto de Freund), a veces con la inclusión de micobacterias destruidas (adyuvante completo de Freund), una suspensión de minerales (alumbre, hidróxido o fosfato de aluminio) en la cual el antígeno es adsorbido, saponinas y productos depvados de LPS, comúnmente, sales minerales basadas en aluminio, son los únicos adyuvantes incluidos habitualmente en las formulaciones de vacuna en humanos. Aunque seguras, dichas sales son adyuvantes débiles para la inducción de anticuerpos, y no son capaces de estimular respuestas inmunes clásicas mediadas por células. La inducción de anticuerpos y una respuesta mediada por células, se requiere para proveer una defensa altamente efectiva contra los patógenos invasores con el propósito de limitar su propagación o eliminarlos.

Las vacunas necesitan proveer o inducir dos tipos de señales para inducir una respuesta inmune protectora fuerte. Primero, las vacunas necesitan suministrar el antígeno, el cual desencadena receptores específicos del antígeno en llnfocitos T y B. Segundo, las vacunas efectivas necesitan inducir la expresión de moléculas coestimuladoras por células que presentan antígeno, las cuales promueven entonces una respuesta fuerte por los linfocitos desencadenados por el antígeno. Esta segunda señal es provista con frecuencia por factores asociados con la infección, cuando se usan vacunas que contienen patógenos vivos, pero falta en general en las vacunas subunitarias, resultando en su inmunogenicidad reducida. La adición de un adyuvante que pueda contribuir esta segunda señal, mejora la eficacia de la vacuna y, además, puede dictar el tipo de respuesta inmune inducida. Estas señales dirigen el sistema inmune del hospedero hacia el desarrollo subsiguiente de mecanismos efectores que caracterizan el tipo y la potencia de la respuesta inmune general a un agente infeccioso determinado. Las citocinas representan los factores principales implicados en la comunicación entre células inmunocompetentes, que incluyen células T, células B, macrófagos y células dendríticas, durante el curso de una respuesta inmune, a antígenos y agentes infecciosos. Muchos estudios en clones de células auxiliares T (Th) humanas y de ratón, han provisto evidencia extensiva de la existencia de diferentes actividades exhibidas por las células Th (denominadas Th1 y Th2), la cual fue inferida del perfil de secreción de citocinas. De esta manera, se considera a la producción de IFN-? o IL-4 como el distintivo típico de una respuesta Th1 o Th2, respectivamente. El tipo de respuesta inmune Th1 se asocia en general con la producción de lgG2a en ratones y el desarrollo de inmunidad celular, mientras que el tipo de respuesta inmune Th2 se asocia con la producción de IgE, eosinófilos y producción de células cebadas. Se piensa en general que la inducción de un tipo de respuesta inmune Th1 es instrumental en la generación de una respuesta inmune protectora a virus y ciertas infecciones bacterianas. A este respecto, es importante notar que adyuvantes clínicamente disponibles, tales como sales minerales basadas en aluminio, tienden a inducir un tipo de respuesta inmune Th2, el cual puede causar una respuesta alérgica que contribuye a sus efectos secundarios no deseables. La vacunación contra la influenza reduce la morbilidad y mortalidad causadas por la infección por la influenza en grupos de alto riesgo, que incluyen los individuos maduros e individuos con una respuesta inmune deteriorada, pero no es totalmente protectora en todos los receptores (Oxford et al., 2003). Se piensa que la protección provista por las vacunas subunitarias usadas comúnmente se debe principalmente a la producción de anticuerpos para la hemaglutinina viral, ya que dichas vacunas inducen una respuesta de células T citotóxica reducida, y el título de los anticuerpos inhibidores de hemaglutinación (Hl) se usa en general como un marcador de protección sustituto. La producción de anticuerpos neutralizantes (lgG2a) contra los antígenos virales, requiere la participación de células auxiliares T CD4+, las cuales reconocen el antígeno en asociación con los antígenos del MHC clase II, y una frecuencia incrementada de polimorfismo HLA-DRB1 *7 se ha observado en no respondedores "en riesgo" a la vacunación contra la influenza (Gelder et al., 2002). La ausencia de un adyuvante altamente efectivo constituye un obstáculo significativo para el desarrollo exitoso de vacunas, en particular aquellas dirigidas contra los patógenos intracelulares que requieren inmunogenicidad celular. Actualmente, existe una necesidad no cubierta por una composición no tóxica efectiva o método capaz de mejorar la respuesta de los anticuerpos a la vacuna contra la influenza y otras vacunas. A este respecto, debido a las propiedades evidenciadas anteriormente, las citocinas, y en particular los interferones (IFNs), se han considerado en la técnica como adyuvantes posibles (Heat et al., 1992). Los interferones con cltocinas multifuncionales clasificadas sobre la base de estructura como: i) IFNs tipo I, codificados por genes carentes de intrones y que incluyen la familia del IFN-a de por lo menos 13 subtipos de IFN-a funcionales, IFN-ß e IFN-?, producidos efectivamente por todos los tipos de células. il) IFN tipo II, codificado por un sólo gen que contiene intrones, denominado también IFN-?, y producido principalmente por células T y células NK en respuesta a mitógenos o antígenos específicos. Considerados originalmente como sustancias antivirales simples, se ha mostrado subsiguientemente que los IFNs tipo I exhiben una variedad de efectos biológicos, que incluyen actividades antitumorales en modelos animales experimentales así como en pacientes. Se ha mostrado que los IFNs tipo I y tipo II ejercen efectos inhibidores potentes sobre la producción de anticuerpos y la proliferación de células T in vitro, evocando la cuestión de si estas citocinas actuarían en una forma estimuladora o inhibidora in vivo. Un conjunto de datos obtenidos en diferentes sistemas modelo, ha indicado recientemente la importancia del IFN tipo I en la inducción de un tipo de respuesta inmune Th1 , y en el soporte de la proliferación, actividad funcional y supervivencia de ciertos subgrupos de células T (Belardelli F. y Gresser I., 1996; y Tough ef al., 1996). Los interferones tipo I son actualmente las citocinas que se usan más ampliamente en la práctica clínica. En particular, el IFN-a se usa mundialmente en más de 40 países para el tratamiento de algunas enfermedades virales (especialmente hepatitis C) y varios tipos de cáncer humano, que incluyen algunas malignidades hematológicas (leucemia de células pilosas, leucemia mieloide crónica, algunos linfomas de células B y T), y ciertos tumores sólidos, tales como melanoma, carcinoma renal y sarcoma de Kaposi. En contraste, el IFN-? ha encontrado aplicación clínica limitada, debido por lo menos en parte a su toxicidad. Durante los últimos años, varios estudios han provisto evidencia de que los efectos biológicos ejercidos por los IFNs tipo I y tipo II pueden diferir sustancialmente en términos de tipo de actividad en diferentes modelos experimentales. En algunos casos, tales como en melanoma y esclerosis múltiple, el uso clínico del IFN-? ha llevado a efectos opuestos con respecto a aquellos logrados con el IFN tipo I. A pesar de su amplio uso clínico, el IFN tipo I no se usa aún como un adyuvante de vacunas en humanos. Un uso relevante de los IFNs in vivo como adyuvantes en vacunas, se ha mostrado para el IFN tipo II (es decir, IFN?). En particular, en el documento EP 0241725, se descpbe una vacuna que contiene un extracto de proteína cruda derivado de células sanguíneas de ratones infectados con la línea YM virulenta de Plasmodium yoelii, que incluye al IFN-? como un adyuvante. La cantidad de IFN-? incluida en la vacuna se indica en la escala de 1 ,000 a 10,000 unidades por dosis, en donde la cantidad de IFN-? que produce el efecto adyuvante se indica como 100 a 50,000 unidades. La dosificación usada es 5,000 unidades, incluso si dosis menores de 200 unidades se han indicado también como efectivas. El uso del IFN tipo I como un adyuvante ha sido contemplado por algunos documentos de la técnica anterior, y se ha mostrado que el IFN tipo I mejora una respuesta protectora tipo Th1 in vivo cuando se usa como adyuvante de vacunas. El IFN-a es un activador de células B policlonal poderoso que induce una fuerte respuesta inmune humoral primaria caracterizada por cambio de isotipos y protección contra el desafío del virus (LeBon et al., 2001 ). Por supuesto, se ha mostrado que el IFN-a secretado por células dendríticas plasmacitoides en respuesta a la infección viral, induce a los linfocitos B para que se diferencien en células plasmáticas productoras de anticuerpos, y es necesario para la producción de IgGs policlonales y específicas en respuesta a la infección por la influenza (Jego, 2003). Además, se ha mostrado también que el IFN-a estimula la respuesta de anticuerpos lgG2a característica de la inmunidad Th1 y la protección contra la infección viral (Le Bon et al., 2001 ), y se ha mostrado también que es un adyuvante inusualmente poderoso cuando se mezcla con la vacuna contra la influenza y se inyecta ¡ntramuscularmente (Proietti et al., 2002). En contraste, adyuvantes tales como el alumbre potencian la producción de lgG1 característica de una respuesta Th2. Se ha mostrado también que el IFN-a mejora marcadamente la proliferación de células B tonsilares humanas en respuesta a anticuerpos anti-IgM. Además, se ha mostrado también que el IFN-a administrado por vía oromucosa, cuando se mezcla y se coadministra con la vacuna contra la influenza humana, es un adyuvante activo en mucosas que resulta en niveles mejorados de IgA secretoria (Proietti ef al., 2002). Los interferones tipo I, predominantemente interferón-a (IFN-a) e interferón-ß (IFN-ß), se producen en superficies mucosas como parte de la respuesta inmune innata a agentes infecciosos. La administración oromucosa de IFN-a recombinante imita la producción oromucosa de IFN, y se ha mostrado confiere protección contra la infección viral y la multiplicación de células tumorales (Tovey y Maury, 1999). Ocurre protección sin toxicidad a través de la estimulación de la inmunidad celular en ausencia de niveles circulantes de IFN (Eid et al., 1999). En particular, la administración oromucosa de IFN-a estimula la maduración de células dendríticas y la presentación de antígenos, y la respuesta de linfocitos T auxiliares tipo I (Th1 ) a antígenos extraños (Belardelli et al., 2002). De esta manera, la terapia oromucosa con IFN, es más efectiva para estimular defensas del hospedero durante una reacción inmunológica en curso, ya sea en respuesta a antígenos virales o tumorales. Las patentes de E.U.A. Nos. 6,007,805 y 6,436,391 describen el uso de subtipos de interferón-a como adyuvantes en composiciones de vacuna, en particular composiciones de vacuna antivírales. Existe también la necesidad de adyuvantes efectivos para su uso con vacunas contra el cáncer. Por ejemplo, aunque el melanoma es uno de los tumores inmunógenos prototípicos, la mayoría de los antígenos tumorales son también auto-antígenos, limitando la eficacia terapéutica de las vacunas contra el cáncer debido a la tolerancia de los auto-antígenos. De esta manera, las vacunas derivadas de antígenos de melanoma de la familia de MAGE, que ¡ncluyen tirosinasa, Melan-A/MART-1 , MAGE-A3/MAGE-A6, Trp-2 y gp100, resultan en sólo activación transitoria de células T citotóxicas y una respuesta clínica limitada, aún cuando se hayan usado muchos procedimientos de vacunación. Estos incluyen inmunización directa (vacunas de péptidos), vectores virales o ADN desnudo que expresa al péptido, o la carga de células que presentan antígeno, tales como células dendríticas con antígeno (vacunas basadas en células dendríticas).

La transferencia adoptiva de células provee un medio para superar la tolerancia por la selección y activación de subpoblaciones de células T altamente reactivas combinadas con la linfodepleción de células T reguladoras. De esta manera, la transferencia adoptiva de células T autólogas reactivas a tumores, junto con la terapia con IL-2 a altas dosis después de quimioterapia de linfodepleción no mieloablativa (ciclofosfamida y fluarabina), resultó en el crecimiento rápido in vivo de poblaciones clónales de células T específicas del antígeno de diferenciación de melanocitos MART-1 , y resultó en la destrucción de tumores metastásícos y respuestas clínicas objetivas, en pacientes con enfermedad progresiva (melanoma de etapa IV) refractaria a la terapia estándar. Algunos pacientes con regresión tumoral concomitante, mostraron también signos de destrucción de melanocitos autoinmunes que incluyen vitíligo y uveítis anterior (Dudley et al., 2002). La adición de oligonucleótidos de CpG, potenció marcadamente la actividad antitumoral de la transferencia adoptiva de células T autólogas reactivas a tumores junto con la terapia con IL-2 a altas dosis después de la quimioterapia de linfodepleción no mieloablativa (Restifo, 2004). El tratamiento del melanoma de etapa IV con la vacuna de proteínas MAGE 3, junto con 1.0 CpG, resultó en 1CR, 2PR, 2SD y 2PD (Davis, 2004). Los oligonucleótidos de CpG mejoran la respuesta humoral y la respuesta específica de antígenos mediada por células, a una amplia gama de antígenos. Los motivos de CpG no metilados son uno de varios patrones moleculares asociados al patógeno (PAMPs) que activan al sistema inmune innato por medio de receptores tipo Toll (TLR) presentes sobre la superficie de células que presentan antígeno (APC). CpG activa a TLR-9, que se encuentra sólo sobre la superficie de células B humanas y células dendríticas plasmacitoides (pDC). Receptores tipo Toll, tales como TLR-9, funcionan como un puente entre la respuesta inmune innata y adaptativa, que resulta en la activación directa de células B y la producción de inmunoglobulina, activación de pDC, sobrerregulación de antígenos del MHC clase II, expresión de B7, y expresión de CD40, y presentación mejorada de antígenos, y activación de células T CD4+ y CD8+, y una respuesta de citocinas Th1. La actividad de los oligonucleótidos de CpG depende de la señalización de receptores de IFN tipo I, y la adición de IFN tipo I exógeno puede evitar una lesión corriente arriba en la vía, y puede sustituir a CpG e inducir sobrerregulación de moléculas coestimuladoras en ausencia de algún estímulo microbiano. Además, los oligonucleótidos de CpG carecen de actividad adyuvante en ratones -/- receptores de IFN-a/ß (IFNAR1-/-), o en ratones normales tratados con un anticuerpo anti-IFN-a/ß policlonal (Le Bon, et al., 2001 ; y Proietti et al., 2002). Por consiguiente, a pesar de la disponibilidad de antígenos recombinantes potencialmente eficaces, la debilidad o ausencia de sensibilidad a la vacunación, y el cumplimiento por el paciente, continúan siendo aún las inquietudes principales para el uso de vacunas subunitarias profilácticas o terapéuticas. La inmunogenicidad débil de las vacunas subunitarias, hace necesario que estas vacunas sean administradas veces múltiples para inducir una respuesta satisfactoria, haciendo que la falta de cumplimiento por el paciente sea un problema significativo. Por lo tanto, una composición que mejore la inmunogenicidad del antígeno y promueva respuestas inmunes consistentemente fuertes, que disminuya el número de dosis de la vacuna requeridas para inducir seroconversión/seroprotección, incluso a una dosis individual, encontraría aplicación extendida. No se pretende que la cita de cualquier documento en la presente sea una admisión de que dicho documento es técnica anterior pertinente, o considerado material a la patentabilidad de cualquier reivindicación de la presente solicitud. Cualquier declaración en cuanto al contenido o una fecha de cualquier documento se basa en la información disponible para el solicitante al momento de la presentación, y no constituye una admisión en cuanto a la exactitud de dicha declaración.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un método para mejorar la respuesta inmune a una vacuna, administrando por vía oromucosa sustancialmente concurrentemente con la administración de la vacuna, una cantidad de interferón y/u otras citocinas estimuladoras Th1 , suficiente para mejorar la respuesta inmune a la vacuna. La respuesta inmune que está siendo mejorada puede ser de una respuesta humoral o una respuesta celular, o ambas. La presente invención es particularmente efectiva para mejorar una inmunorrespuesta humoral tipo Th1 a una vacuna en un tratamiento de inmunización protectora. El interferón y/u otras citocinas que se administran por vía oromucosa, sirven efectivamente como un inmunoadyuvante cuando se administran sustancialmente concurrentemente con una administración de una vacuna, ya que mejoran la respuesta inmune celular y de los anticuerpos a la vacuna. La respuesta inmune mejorada se caracteriza por la producción de anticuerpos y memoria inmunológica a largo plazo. Puesto que la administración oromucosa de interferón y/u otras citocinas no implica la transferencia de interferón y/u otras citocinas a la corriente sanguínea, grandes cantidades de interferón y/u otras citocinas pueden usarse con seguridad sin que se induzca una respuesta tóxica. Esta es una gran mejora sobre el uso de adyuvantes conocidos y disponibles actualmente, tales como el alumbre.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1A muestra el efecto del IFN-a sobre la respuesta de anticuerpos anti-ínfluenza 15 días después de la vacunación. Se determinó la respuesta de anticuerpos usando pruebas de ELISA de captura de antígenos para las subclases de ¡nmunoglobulina específicas: IgG total, lgG1 , lgG2a e IgA, como se índica en la figura. Cada subclase de anticuerpo se midió después de la administración im de vacuna antí-influenza VAXIGRIP™ ya sea sola, o mezclada con 105 Ul de IFN-a recombinante, o con la administración concurrente de 105 Ul de IFN-a recombinante om. La figura 1 B muestra el efecto del IFN-a sobre la respuesta de anticuerpos anti-influenza 30 días después de la vacunación. Se determinó la respuesta de anticuerpos usando pruebas de ELISA de captura de antígenos para las subclases de inmunoglobulina específicas: IgG total, lgG1 , lgG2a e IgA, como se indica en la figura. Cada subclase de anticuerpo se midió después de la administración im de vacuna anti-influenza VAXIGRIP™ ya sea sola, o mezclada con 105 Ul de IFN-a recombinante, o con la administración concurrente de 105 Ul de IFN-a recombinante om. La figura 2A muestra el efecto del IFN-a sobre la respuesta de anticuerpos anti-influenza después de la revacunación. Se vacunó a ratones en el día 0 por inyección im de 15 microgramos de vacuna anti-ínfluenza VAXIGRIP™ ya sea sola, o mezclada con 105 Ul de IFN-a recombinante, o con la administración concurrente de 105 Ul de IFN-a recombinante om. A 90 días, se volvió a vacunar a los animales por inyección im de 15 microgramos de VAXIGRIP™ ya sea sola, o mezclada con 105 Ul de IFN-a, o con la administración concurrente de 105 Ul de IFN-a om. La respuesta de anticuerpos anti-influenza se determinó a 105 días usando pruebas de ELISA de captura de antígenos para las subclases de inmunoglobulina específicas: IgG total, lgG1 , lgG2a e IgA, como se indica en la figura.

La figura 2B muestra el efecto del IFN-a sobre la respuesta de anticuerpos anti-influenza después de la revacunación. Se vacunó a ratones en el día 0 por inyección im de 15 microgramos de vacuna anti-ínfluenza VAXIGRIP™ ya sea sola, o mezclada con 105 Ul de IFN-a recombinante, o con la administración concurrente de 105 Ul de IFN-a recombinante om. A 90 días, se volvió a vacunar a los animales por inyección im de 15 microgramos de VAXIGRIP™ ya sea sola, o mezclada con 105 Ul de IFN-a, o con la administración concurrente de 105 Ul de IFN-a om. La respuesta de anticuerpos anti-influenza se determinó a 120 días usando pruebas de ELISA de captura de antígenos para las subclases de inmunoglobulína específicas: IgG total, lgG1 , lgG2a e IgA, como se indica en la figura. La figura 2C muestra el efecto del IFN-a sobre la respuesta de anticuerpos s-lgA secretoria anti-influenza después de la revacunación. Se vacunó a ratones en el día 0 por inyección im de 15 microgramos de vacuna anti-influenza VAXIGRIP™ ya sea sola, o mezclada con 105 Ul de IFN-a recombinante, o con la administración concurrente de 105 Ul de IFN-a recombinante om. A 90 días, se volvió a vacunar a los animales por inyección im de 15 microgramos de VAXIGRIP™ ya sea sola, o mezclada con 105 Ul de IFN-a, o con la administración concurrente de 105 Ul de IFN-a om. La respuesta de anticuerpos anti-influenza s-lgA secretoria se determinó a 120 días usando una prueba de ELISA de captura de antígenos específica para s-IgA secretoria, como se indica en la figura.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se basa en el descubrimiento sorprendente de que el tratamiento de animales con interferón-a (IFN-a) recombinante por la vía oromucosa, mejora marcadamente la respuesta humoral a la inyección intramuscular (im) distante de la vacuna contra la influenza disponible comercialmente (VAXIGRIP™, Aventis Pasteur MSD). Por supuesto, se encontró que las cuatro clases de inmunoglobulinas específicas de la influenza puestas a prueba (IgG total, lgG1 , lgG2a e IgA), son incrementadas marcadamente en respuesta a la vacunación contra la influenza después de la administración oromucosa (om) de IFN-a en una forma dependiente de la dosis. Aún más remarcablemente, el efecto inmunoadyuvante del IFN-a administrado por vía oromucosa fue, bajo ciertas circunstancias, mayor que el obtenido cuando el IFN-a se mezcló con la vacuna contra la influenza y la mezcla se inyectó intramuscularmente (im). Estos resultados pueden explicarse en parte por los resultados de estudios previos que muestran que la administración oromucosa de IFN-a, resulta en una migración rápida de células inmunocompetentes de los nodulos linfáticos periféricos hacia el sitio del antígeno inyectado sistémicamente (ya sea antígeno tumoral o viral), debido a la inducción rápida de quimiocinas tales como Crg2 (que regula el tráfico de linfocitos), en ausencia de la absorbancia sístémica de la proteína del IFN. En contraste, la inyección parenteral de IFN-a en un sitio distante del sitio de vacunación, induce más probablemente la migración de células dendriticas y otras células que presentan antígeno hacia el sitio de inyección del IFN y lejos del sitio de vacunación, reduciendo de esta manera la respuesta humoral a la vacuna contra la influenza. Esta es la primera demostración de que una sustancia, referida en la presente como un "inmunoadyuvante", puede mejorar la respuesta inmune a una vacuna cuando se administra en un sitio distante del sitio de vacunación. Se usa el término "inmunoadyuvante", puesto que el ¡nterferón no está actuando como un adyuvante típico, que es una sustancia que debe mezclarse con la vacuna para mejorar la antígenicidad de la vacuna. Por otra parte, la función del interferón en la presente invención no se debe solamente a sus efectos inmunoestimuladores como se describe, por ejemplo, en las patentes de E.U.A. 6,361 ,769 y 6,660,258 y en la publicación de la patente de E.U.A. 2003/0108519. Estas descripciones de patente previas que se refieren al efecto inmunoestimulador del ¡nterferón administrado por vía oromucosa para el tratamiento de virus, tumores y otros patógenos, depende de una ¡nmunorrespuesta celular rápida. De esta manera, los efectos terapéuticos observados ocurrieron antes del establecimiento de una respuesta de anticuerpos efectiva, la cual en consecuencia nunca se estudió y, en cualquier caso, no podría haber sido implicada en muchos de los experimentos reportados en la presente. Por supuesto, si se esperara que los interferones ejerzan un efecto estimulador o un efecto inhibidor sobre la producción de anticuerpos, ha sido una cuestión abierta. Por lo tanto, el efecto inmunoadyuvante reportado en la presente es diferente de, y no se habría esperado de, los reportes previos de los efectos inmunoestimuladores del interferón, o los efectos adyuvantes del ¡nterferón. Para distinguir la presente invención de la modalidad de Proietti, 2002, que implica la administración oromucosa de una vacuna mezclada con IFN-a como un adyuvante, la presente invención excluye explícitamente de esta manera el uso de IFN om en conjunto con una vacuna administrada por vía oromucosa. Una formulación individual que contenga ¡nterferón administrado por vía oromucosa, tal como una tableta o pastilla, tomada a la hora de vacunación, incrementa marcadamente la respuesta de anticuerpos, y por ende el grado de protección, no sólo para la vacuna contra la influenza, sino que se esperaría sea aplicable para todas las vacunas. Una ventaja distinta de una formulación de IFN oromucosa, es que puede usarse para mejorar el efecto protector de una vacuna particular que ha sido aprobada por una agencia reguladora adecuada, sin la necesidad de volver a registrar esa vacuna con esa agencia, como se sería el caso para un adyuvante novedoso que debe administrarse en mezcla con una vacuna. Numerosos estudios han mostrado que la inmunidad mucosa adquirida por la infección natural por el virus de la influenza, la cual se debe a la presencia de s-lgA secretoria en el tracto respiratorio, es más efectiva para prevenir la Infección, en particular contra infecciones virales variantes, que la inmunidad sistémica debida a la IgG en suero inducida por la vacunación parenteral. Véase Ito et al., 2003. La IgG en suero en el individuo inmunizado, parece ser importante para prevenir la neumonía letal, más que proteger contra la infección. La administración oromucosa de IFN-a incrementa los anticuerpos anti-influenza de IgA en suero a un grado similar o mayor como cuando el IFN-a se mezcla con la vacuna y la mezcla se inyecta intramuscularmente. Un efecto similar se observó también en la producción de anticuerpos s-lgA anti-influenza en los pulmones después de la administración oromucosa de IFN-a. Los resultados experimentales indican además que el IFN-a oromucoso reduce también el tiempo requerido para lograr una respuesta de anticuerpos máxima y por ende protección completa después de la vacunación. La respuesta inmune inducida por el IFN tipo I o el IFN-a, es una respuesta tipo Th1 caracterizada por un perfil de Ig específico, a saber, en ratones, por la inducción específica de lgG2a circulante y/o IgA secretoria, que confiere protección ante el desafío por patógenos tales como bacterias o virus. En la composición inmunoadyuvante no tóxica de la presente invención, el IFN puede ser cualquier interferón que pertenezca a la familia del IFN tipo I, o puede ser IFN-?, referido a veces como IFN tipo II. A este respecto, la dosificación más efectiva en humanos está en la escala de 105-108 Ul, de preferencia 106-107 Ul. Los siguientes son ejemplos no limitativos de fuentes de IFN que pueden usarse en la presente invención: IFN-a natural (una mezcla de diferentes subtipos de IFN-a o subtipos de IFN-a individuales) de leucocitos estimulados de donadores sanos, o IFN-a linfoblastoide de células Namalwa: un IFN tipo I sintético, tal como IFN consenso (CIFN); IFN-ß recombinante (disponible comercialmente como REBIF™, Serono; AVONEX™, Biogen; y BETASERON™, Berlex), o subtipos de IFN-a recombinantes, tales como IFN-a2a (disponible comercialmente como ROFERON™, Roche) e IFN-a2b (disponible comercialmente como INRON-A™, Schering Plough), o IFN-?; nuevas moléculas de IFN generadas por el método de entremezclado de ADN o mutagénesis dirigida a sitio, siempre que se usen en las dosificaciones mencionadas anteriormente indicadas por dosis de vacuna; y moléculas recombinantes de IFN-a o IFN-ß humano que tengan una o más sustituciones, delecíones o adiciones de aminoácidos o de otra manera obtenidas con polimorfismos de ocurrencia natural, tales como los polipéptidos de GenOdyssee, documento WO 02/101048 (véase los documentos WO 02/083733, WO 03/000896, y otros). En la composición farmacéutica para la forma de dosificación de interferón administrada por vía oromucosa de la presente invención, puede usarse una variedad de vehículos y excipientes para IFN, como será evidente para los expertos en la técnica. Tecnología de formulación representativa se enseña, entre otras referencias, en Remington 1995, y sus ediciones predecesoras. La formulación de IFN puede comprender intensificadores de estabilidad, tales como glicina o alanina, como se describe en la patente de E.U.A. No. 4,496,537, y/u uno o más vehículos, tales como una proteína portadora. Por ejemplo, para el tratamiento de humanos, se usa comúnmente albúmina de suero humano de grado farmacéutico, opcionalmente junto con solución salina regulada en su pH con fosfato como diluyente. En donde el excipiente para el IFN sea albúmina de suero humano, la albúmina de suero humano puede derivarse de suero humano, o puede ser de origen recombinante. Normalmente, cuando se usa albúmina de suero, será de origen homólogo. El IFN puede administrarse por cualquier medio que provea contacto del IFN con la cavidad oromucosa del receptor, por un tiempo suficiente que permita que el ¡nterferón mejore efectivamente la respuesta inmune a la vacuna administrada concurrentemente. Esto requiere contacto del ¡nterferón con la oromucosa por un período de por lo menos aproximadamente 5 segundos, de preferencia 1 a 2 minutos, y posiblemente tanto como 5 minutos, es decir, 5 a 360 segundos. De esta manera, la administración oromucosa es definitivamente distinguible de la administración oral. Si una tableta o composición líquida para administración oral es solamente tragada, no habrá tiempo de contacto suficiente del interferón con la oromucosa para permitir la mejora de la respuesta inmune a la vacuna. Dentro de estos parámetros, se entenderá claramente que la forma de dosificación del IFN usada en el método de la presente invención no se limita a algún tipo de formulación particular. El IFN puede administrarse profundamente en la cavidad oromucosa; esto puede lograrse con líquidos, sólidos o aerosoles, así como gotas nasales o rocíos. De esta manera, la formulación ¡ncluye, pero no está limitada a, líquido, rocío, jarabe, pastillas, tabletas bucales o sublinguales y formulaciones de nebulízador. El experto en la técnica reconocerá que para formulaciones de aerosol o nebulízador, el tamaño de partícula de la preparación puede ser importante, y estará al tanto de métodos adecuados por los cuales el tamaño de partícula pueda ser modificado. De esta manera, para formulaciones de aerosol, el tamaño de partícula debe ser tan grande que permita la deposición del interferón en la mucosa nasofaríngea, de modo que pueda permanecer ahí por el período requerido. Las formulaciones destinadas para administración hacia los pulmones no se consideran como formulaciones oromucosas, ya que el tamaño de partícula será tan pequeño que evita la deposición en la mucosa nasofaríngea y viaja directamente en los pulmones, que es su sitio de acción deseado, y en donde es absorbido en la circulación. Formulaciones representativas de interferón para su uso en oromucosas, incluyen las siguientes (todas están en por ciento en p/p): Tableta: dextrosa BP 45%; gelatina BP 30%; almidón de trigo BP 11%; carmelosa de sodio BP 5%; albúmina de huevo BPC 4%; leucina USP 3%; propilenglicol BP 2%; y 5x106 Ul de IFN-a2. La tableta puede usarse como está, o puede dejarse que se disuelva lentamente en la boca, o puede disolverse en agua y mantenerse en la boca, según sea necesario. Puede prepararse una pasta de interferón, como se describe en la patente de E.U.A. No. 4,675,184, a partir de glicerina 45%, CMC de sodio 2%, regulador de pH de citrato (pH 4.5) 25%, agua destilada a 100% y 5x106 Ul de IFN-a2. La pasta de ¡nterferón puede se adherida a la mucosa bucal.

Asimismo, puede prepararse una gárgara o jarabe añadiendo la cantidad deseada de interferón a un lavado bucal o formulación de jarabe para la tos disponible comercialmente. En los experimentos en animales descritos en esta especificación, la administración oromucosa se logra por la administración de la preparación de IFN profundamente en la cavidad nasal, de modo que sea distribuida rápidamente en la cavidad orofaríngea, es decir, la boca y garganta del mamífero receptor, para hacer contacto con la mucosa que reviste a esta cavidad. Se sabe del trabajo previo del laboratorio del presente inventor, que la administración oromucosa de interferón no resulta en la aparición de niveles circulantes de IFN (Eid et al., 1999 y documento US 6,361 ,769). Mientras que el empuje de la presente descripción se refiere al interferón como el inmunoadyuvante, la presente invención se extiende también al uso de otras citocinas que se sabe desempeñan una función en la producción de anticuerpos y/o estimulan una respuesta Th1. La patente de E.U.A. No. 6,660,258, al presente inventor, está dirigida a la administración oromucosa de cualquier citocina específica Th1 o Th2 a dosis que inducen un efecto estimulador del mecanismo de defensa del hospedero. Entre las citocinas Th1 descritas en la presente, además de los interferones, están IL-2, IL-12, IL-15, IL-18, factor estimulador de colonias de macrófagos-granulocitos (GM-CSF) y factor de necrosis tumoral beta (FNT-ß o línfotoxína). De esta manera, estas citocinas, ya sea solas o en combinación con interferón y/o alguna otra citocina, pueden usarse también como el inmunoadyuvante de la presente invención, de la misma forma como se describe en la presente para el interferón, mutatus mutandi. De esta manera, la dosis efectiva para cada uno puede ser determinada fácilmente por el experto en la técnica sin experimentación indebida. Los antígenos incluyen preparaciones purificadas o parcialmente purificadas de antígenos de proteína, péptido, carbohidrato o lípido, y/o antígenos asociados con células enteras, en particular células dendríticas que se hayan mezclado con el antígeno. En general, cualquier patógeno o tumor y/o antígeno asociado a diferenciación, puede considerarse como un inmunógeno posible que se administrará a la misma hora que el IFN como inmunoadyuvante, y puede ser identificado fácilmente por el experto en la técnica. Aunque los experimentos en la presente especificación se refieren a la vacuna contra la influenza VAXIGRIP™, se espera completamente que la presente invención mejore la respuesta inmune a la administración de cualquier vacuna. Aunque el término "vacuna" se usa con frecuencia para referirse solamente a vacunaciones destinadas para inducir profilaxis, se pretende que el término como se usa a lo largo de la presente especificación y en las reivindicaciones, incluya también vacunación para propósitos terapéuticos. Por ejemplo, se pretende que vacunas que comprendan antígenos asociados a tumores, induzcan una respuesta inmune contra tumores. Vacunas para partículas virales pueden usarse no sólo para crear profilaxis contra el virus, sino también para erradicar una infección viral existente. De esta manera, por ejemplo, están disponibles vacunas contra el HBV y otras contra el SIDA y el HCV, las cuales están en desarrollo activo. Vacunación activa contra placas de amiloide-ß, están también en desarrollo para el tratamiento de enfermedad de Alzheimer. De esta manera, el término "vacuna" se aplica a la administración de cualquier antígeno con el propósito de inducir una respuesta inmune contra ese antígeno, o a un antígeno que reaccione en forma cruzada que exista in situ. Vacunas preferidas ¡ncluyen una vacuna contra la influenza, viruela, ántrax, virus de la hepatitis B, virus del papiloma humano, virus de herpes simple, poliomielitis, tuberculosis, o contra el cáncer. Entras las razones del por qué se esperaría que la presente invención sea aplicable a cualquiera de dichas vacunas a la luz de los resultados mostrados para la vacuna contra la influenza, es el hecho de que se sabe ya que los interferones son efectivos como un adyuvante cuando se administran en mezcla. Véase, por ejemplo, Proietti, 2002, documento WO 02/083170 y Le Bon et al., 2001. Además, una vez que se establece que el interferón administrado por vía oromucosa mejora la respuesta inmune a un antígeno que se administra remotamente pero concurrentemente, no hay razón para creer que lo mismo no será cierto cuando el sujeto es vacunado con algún antígeno que cause una respuesta inmune. Los efectos conocidos del interferón administrado por vía oromucosa para terapéutica (véase el documento U.S. 6,361 ,769, por ejemplo), combinados con los efectos conocidos del interferón como un adyuvante, permitirían extrapolar razonablemente los resultados que se han mostrado para la vacuna contra la influenza a cualquier otra vacuna. Se sabe que los adyuvantes existentes destinados para mejorar la antígenicidad de una vacuna, tales como el alumbre, tienen varios efectos secundarios severos. Aunque la vacuna usada en la presente invención puede incluir un adyuvante en su composición, sería deseable poder eliminar dichos adyuvantes, y tener aún una vacuna con una respuesta inmune satisfactoria. Se espera que el uso del inmunoadyuvante de interferón administrado por vía oromucosa, cumpla este propósito. Sin embargo, hasta el punto de que alguna vacuna no podría tener una respuesta ¡nmunológica mensurable sin un adyuvante, el efecto del ¡nmunoadyuvante de la presente invención tendría que ponerse a prueba sobre una base de caso por caso. La cantidad de antígenos presentes en cada dosis de vacuna, con adyuvante o no, se selecciona como una cantidad capaz de inducir una respuesta inmune protectora en sujetos vacunados. Esta cantidad dependerá del antígeno específico y la presencia posible de adyuvantes típicos, y puede ser identificada por el experto en la técnica. En general, cada dosis contendrá de 1 a 1000 microgramos de antígeno, de preferencia de 10 a 200 µg. Otros componentes pueden estar también presentes en forma ventajosa en la vacuna o en la vacuna con adyuvante. En algunos casos, la vacuna o la vacuna con adyuvante puede inyectarse subcutáneamente o intramuscularmente a causa del efecto esperado y la facilidad de uso. Puede realizarse efectivamente inyección intradérmica para algunas vacunas, y podrían considerarse otros sistemas de suministro adecuados para el reclutamiento de un número relevante de células dendríticas hacia el sitio de inyección. Sin embargo, se excluye la administración oromucosa. La administración intranasal hacia los pulmones y la administración oral de la vacuna, se incluyen también especialmente para aquellos agentes infecciosos transmitidos a través de estas vías de infección, tales como infecciones respiratorias virales, por ejemplo, infección por virus de la influenza. Además, la administración intranasal, oral o cualquier otra administración de la vacuna en mucosas o la vacuna administrada directamente con adyuvante, representa también una elección valiosa, que resulta en la inducción de una inmunidad sistémíca y/o local protectora potente, usando una modalidad muy práctica de suministro de la vacuna. El experto en la técnica puede determinar a este respecto la formulación más adecuada como una función del antígeno para el cual la vacunación está dirigida. La composición de vacuna puede formularse en cualquier forma convencional, como una composición farmacéutica que comprenda vehículos estériles fisiológicamente compatibles, tales como solución salina, excipientes, adyuvantes (si los hay), conservadores, estabilizadores, etc.

La vacuna puede estar en una forma líquida o en una forma líofilizada, para disolución en un vehículo estéril antes de su uso. La presencia de alumbre o partículas tipo liposoma en la formulación, es también posible, puesto que son útiles para obtener una liberación lenta del antígeno. Otras estrategias que permiten una liberación lenta de la vacuna pueden ser identificadas fácilmente por los expertos en la técnica, y se incluyen en el alcance de esta invención. El vehículo portador o agente auxiliar farmacéuticamente aceptable, puede ser identificado fácilmente por consiguiente para cada formulación por el experto en la técnica. El método de la presente invención puede usarse en el tratamiento profiláctico y terapéutico de enfermedades infecciosas y cáncer. En particular, el método de la presente invención puede usarse en un tratamiento para prevenir enfermedades virales y bacterianas (es decir, vacunas profilácticas), así como para el tratamiento de enfermedades infecciosas crónicas severas (es decir, vacunas terapéuticas). Además, el método puede usarse también en la prevención y el tratamiento de cáncer u otras enfermedades y condiciones cuando se usan antígenos adecuados. Esto puede lograrse usando antígenos contra agentes infecciosos asociados con malignidades humanas, por ejemplo, EBV, HPV y H. pilori, o antígenos bien definidos asociados con tumores, tales como aquellos caracterizados en melanoma humano, por ejemplo, antígenos de MAGE, tírosinasa, gap100 y MART, así como en otros tumores humanos.

En particular, el método de la presente invención es particularmente adecuado para la vacunación de los denominados sujetos poco respondedores o no respondedores, tales como sujetos inmunocomprometídos, tales como pacientes bajo hemodiálísis de mantenimiento, trasplantados y con SIDA. En general, el método de la presente invención es en forma ventajosa adecuado para la vacunación de individuos en alto riesgo de infección en cualquier situación para la cual es deseable seroconversión/seroprotección temprana. Estas características son referidas en particular para la vacunación contra el HBV. Como otro ejemplo, el método de la presente invención puede ser particularmente valioso para inducir protección contra el virus de la influenza en individuos de edad avanzada poco sensibles a la vacunación estándar. Para la vacuna contra el HBV, así como para otras vacunas virales, puede ser preferible la vía de inyección subcutánea o intramuscular, mientras que en otros casos la administración intranasal en los pulmones puede exhibir ventajas en términos de eficacia y/o cumplimiento por el paciente, especialmente para agentes capaces de infectar al hospedero a través del sistema respiratorio. El método de la presente invención puede usarse incluso cuando la vacuna se administra oralmente. La administración oral de una vacuna im ípt lica deglución de la vacuna, y por lo tanto no incluye el suministro oromucoso, el cual requiere por lo menos 5 segundos de tiempo de contacto con la oromucosa. Por consiguiente, si la vacuna se administrará oralmente, el interferón y/u otra citocina estimuladora Th1 puede administrarse aún por vía oromucosa dentro de un tiempo corto antes o después de la administración oral de la vacuna. Lo mismo se aplica con respecto a la administración oromucosa del interferón y/u otra citocina estimuladora Th1 sustancialmente concurrentemente con el suministro intranasal de una vacuna hacia los pulmones. El inmunoadyuvante de la presente invención puede usarse en conjunto con la vacunación primaria, así como con la revacunación. De esta manera, la respuesta inmune contra el antígeno puede mejorarse en cualquier momento que el sujeto sea expuesto al antígeno, incluyendo una revacunación, así como exposición después de la vacunación al antígeno contra el cual el sujeto fue vacunado. Por consiguiente, la administración del ¡nmunoadyuvante puede ocurrir también al momento que el sujeto sea expuesto al antígeno en cuestión. Por ejemplo, si una persona es inmunizada contra el ántrax para protección contra un ataque bíoterrorista posible, y algún tiempo después de que el sujeto sea expuesto al ántrax en dicho ataque, la administración del inmunoadyuvante de la presente invención mejoraría la respuesta inmune de recordación protectora contra ese antígeno. La respuesta de recordación es aquella sensible a la activación de las células de memoria en la circulación después de la vacunación. Además, debido a que el interferón es un activador de células B policlonal, se esperaría que no sólo la respuesta inmune proteja al sujeto contra el antígeno específico contra el cual fue vacunado, sino exhiba también un grado de protección cruzada contra antígenos relacionados y quizá mutados a los cuales ese sujeto podría ser expuesto en el futuro. Esto sería particularmente importante para la protección contra la influenza, la cual se sabe exhibe deriva y cambio antigéníco. Por consiguiente, otro aspecto de la presente invención es el tratamiento de una infección u otra exposición a un antígeno contra el cual el sujeto fue vacunado previamente, administrando por vía oromucosa una cantidad mejoradora de la respuesta de recordación de interferón como un ¡nmunoadyuvante. Habiendo descrito ahora generalmente la invención, la misma se entenderá más fácilmente haciendo referencia al siguiente ejemplo, el cual se provee a manera de ilustración, y no se pretende que sea limitativo de la presente invención.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Efecto del IFN-a administrado por vía oromucosa sobre la respuesta de anticuerpos anti-influenza a una vacuna contra la influenza en la vacunación primaria Grupos de diez ratones C57B1/6 machos de 6 a 8 semanas de edad, se trataron con 15 microgramos de VAXIGRIP™ (Aventis Pasteur MSD) en el día 0 por administración intramuscular (im), ya sea sola o mezclada con un volumen igual de PBS que contenía cantidades crecientes (103, 104, 105, 106, 107 Ul) de IFN-a recombinante de ratón o IFN-a recombinante de humano, o PBS que contenía una cantidad de BSA que es equivalente a la cantidad de ¡nterferón usado. Otros grupos de ratones recibieron la vacuna por medio de inyección intramuscular (im) y cantidades crecientes de interferón por la vía oromucosa (om) en el día -2, -1 , 0, +1 o +2, respecto a la vacunación im de los animales. Otros grupos de animales se trataron con IFN o BSA solos, ya sea por inyección ¡m o por la vía om, y se dejaron sin vacunar. Se determinó la respuesta de anticuerpos a 15 y 30 días, usando pruebas de ELISA de captura de antígenos específicas para los siguientes subtipos de inmunoglobulina: IgG total, lgG1 , lgG2a e IgA en el suero, e IgA secretoria en los pulmones.

Los resultados se muestran en la figura 1A y en la figura 1 B. La figura 1A muestra el efecto del IFN-a sobre la respuesta de anticuerpos antiinfluenza después de 15 días. Para cada uno de los tipos de anticuerpo medidos, la columna de la izquierda es después de la administración im de la vacuna sola sin administración concurrente de interferón, la columna de en medio es después de la administración im de la vacuna con administración om concurrente de IFN, y la columna de la derecha es después de la administración ¡m de una mezcla de la vacuna e IFN. La figura 1 B muestra el efecto del IFN-a sobre la respuesta de anticuerpos anti-ínfluenza medida después de 30 días. Puede verse en cada caso que la respuesta de anticuerpos cuando la vacuna se administra con interferón om, es más pronunciada que la respuesta obtenida sin el interferón. Sin embargo, la administración del interferón ¡ntramuscularmente mezclado con la vacuna en la mayoría de los casos, da un resultado un poco mejor que el interferón administrado om. Existen aún ventajas sustanciales para la administración del interferón sublingualmente, opuestamente a im. Primero, existen con frecuencia efectos secundarios significativos para la administración de altas dosis de interferón ¡m. Segundo, el uso de interferón como un inmunoadyuvante que se administra por separado de la vacuna, pero sustancíalmente concurrentemente en tiempo, requiere sólo registro para la formulación que contiene interferón. En otras palabras, el uso de interferón om como un inmunoadyuvante, probablemente no requeriría volver a registrar por separado una vacuna ya aprobada. Cuando el interferón es un adyuvante que se mezcla con la vacuna, como se ha sabido previamente en la técnica, entonces debe obtenerse un registro separado de la mezcla de adyuvante/vacuna, lo cual es extremadamente costoso y consume tiempo. Se sabe generalmente en la técnica de vacunas, que la respuesta máxima de anticuerpos de IgG a una vacuna aparece a aproximadamente 30 días después la vacunación primaria. Puede verse comparando las figuras 1A y 1 B, que existe un cierto efecto de aceleración debido a la administración de interferón om. Las curvas de respuesta a la dosis (no mostradas), establecen que la respuesta óptima se obtiene cuando se administra la cantidad máxima del interferón (105 en este experimento particular). En otras pruebas que usan interferón humano en ratones, la curva de respuesta a la dosis mostró que la respuesta de anticuerpos se incrementa hasta un valor máximo a un cierto nivel, y disminuye entonces. De esta manera, se espera que haya una cantidad óptima de interferón para su uso como un ¡nmunoadyuvante, y que esta cantidad pueda determinarse empíricamente tras llevar a cabo pruebas en humanos. El cuadro 1 muestra los resultados de un experimento similar después de 15 días, con el título de ¡nmunoglobulina expresado como un título de punto final más que densidad óptica a una dilución en suero fija. Este experimento confirma también que la administración de IFN om provee resultados sustancialmente mejores que la vacuna sola. Sin embargo, este experimento muestra que los resultados con el ¡nterferón om son sustancialmente mejores que los resultados con la administración mixta de ¡nterferón im y vacuna.

CUADRO 1 Una comparación de los experimentos en los cuales se administró ¡nterferón a ratones a -2, -1 , 0, +1 y +2 días (no mostrados), establece que el efecto óptimo se obtiene cuando el interferón se administra en el día 0. Cuando se administra en el día -1 o -2 por la vía om, el efecto deseado no ocurre. Cuando se administra en el día +1 o +2 por la vía om, los resultados son sustancialmente iguales como si el interferón no se hubiese administrado en lo absoluto. De esta manera, es evidente que el tiempo óptimo de administración del IFN es sustancialmente simultáneo con la administración de la vacuna, lo cual significa dentro de unas cuantas horas antes o después de la administración de la vacuna.

EJEMPLO 2 Efecto del IFN-a administrado por vía oromucosa, sobre la respuesta de anticuerpos anti-influenza para una vacuna contra la influenza en la vacunación secundaria En el experimento 2, se administró a los grupos de ratones de la misma forma como en el experimento 1 , salvo que en el día 90, los ratones fueron revacunados. Cada paso de vacunación, es decir, el paso primario y el paso de revacunación, se hicieron con VAXIGRIP™ sola, VAXIGRIP™ mezclada con IFN-a, o VAXIGRIP™ con la administración concomitante de IFN-a om. Las figuras 2A, 2B y 2C muestran los resultados de estos experimentos, medidos después de 105 días para la figura 2A, o 120 días después de la vacunación inicial en las figuras 2B y 2C. Los títulos de Ig se expresan como determinaciones de densidad óptica a una dilución en suero particular. La densidad óptica se midió a 450 nm. Puede verse que ya a 15 días después de la revacunación, existe cierto incremento en el título del anticuerpo en los ratones a los que se les administró IFN om, en particular para la lgG2a, que es el subtipo de Ig que es más importante para la protección. Después de 30 días (figura 2B), se observa que existe un efecto muy significativo con el interferón administrado om. Por supuesto, el efecto parece ser incluso mayor que el obtenido cuando el interferón se mezcla con la vacuna y se administra intramuscularmente. Asimismo, después de 30 días (figura 2C), se observa que existe también un efecto estimulador muy significativo con el interferón administrado om, una producción de s-lgA secretoria anti-influenza en el lavado broncoalveolar.

EJEMPLO 3 Pruebas clínicas en humanos Para poner a prueba el efecto del ¡nmunoadyuvante en humanos, se llevarán a cabo las siguientes pruebas clínicas. En una población de 140 sujetos, distribuidos al azar en dos grupos, un grupo se tratará con interferón por vía oromucosa, y entonces se vacunará de inmediato con VAXIGRIP™ intramuscularmente, y el otro grupo se tratará con un placebo om, y entonces se vacunará de inmediato con VAXIGRIP™ im. Se administrará el ¡nterferón por la vía oromucosa en una dosis de 5 ml de solución salina que contiene 5 millones de unidades de IFN-a recombinante ROFERON™. Se darán instrucciones a los sujetos para que mantengan la solución salina en su boca por dos minutos antes de la deglución. Los sujetos control recibirán solamente solución salina, seguida de vacunación con VAXIGRIP™ ¡m. Los sujetos tienen de 65 a 85 años de edad, no teniendo leucemia o tumores sólidos, o enfermedad autoinmune, y con amígdalas intactas. Todos los sujetos han recibido una vacuna contra la influenza en los cinco años anteriores. La respuesta de anticuerpos se medirá a 21 días, por inhibición de hemaglutinina y por ELISA de captura de antígenos, para la determinación de las subclases de inmunoglobulína. Se medirán también los niveles de IgA secretoria en la saliva. Se espera que los resultados sean comparables a los obtenidos en los experimentos preclínicos en animales, citados en los ejemplos 1 y 2. Habiendo descrito ahora completamente esta invención, los expertos en la técnica apreciarán que la misma puede realizarse dentro de una amplia gama de parámetros, concentraciones y condiciones equivalentes sin que se aparten del espíritu y alcance de la invención, y sin experimentación indebida. Aunque esta invención se ha descrito con relación a modalidades específicas de la misma, se entenderá que es capaz de sufrir otras modificaciones. Se pretende que esta solicitud abarque cualquier variación, uso o adaptación de las invenciones siguientes, en general, los principios de la invención, y que incluya dichas desviaciones de la presente descripción como vienen dentro de la práctica conocida o acostumbrada dentro de la técnica a la cual la invención pertenece, y como puede aplicarse a las características esenciales expuestas anteriormente como sigue en el alcance de las reivindicaciones anexas. Todas las referencias citadas en la presente, incluyendo artículos o resúmenes de revistas, solicitudes de patente de E.U.A. o extranjeras publicadas o correspondientes, patentes de E.U.A. o extranjeras expedidas, o cualquier otra referencia, se incorporan enteramente en la presente como referencia, incluyendo todos los datos, cuadro 1 , figuras anexas y texto presentados en las referencias citadas. Además, el contenido completo de las referencias citadas dentro de las referencias citadas en la presente, se ¡ncluye también enteramente en la presente como referencia. La referencia a pasos de método, pasos de métodos convencionales, métodos conocidos o métodos convencionales, de ninguna manera es una admisión de que cualquier aspecto, descripción o modalidad de la presente invención se describe, enseña o sugiere en la técnica relevante. La descripción anterior de las modalidades específicas revelará de esta manera completamente la naturaleza general de la invención que otros pueden, aplicando el conocimiento dentro de la aptitud de la técnica (incluyendo el contenido de las referencias citadas en la misma), fácilmente modificar y/o adaptar para varias aplicaciones dichas modalidades específicas, sin experimentación indebida, sin que se aparten del concepto general de la presente invención. Por lo tanto, se pretende que dichas adaptaciones y modificaciones estén dentro del significado y la gama de equivalentes de las modalidades descritas, con base en la enseñanza y guía presentadas en la presente. Se entenderá que la fraseología o terminología usada en la presente es con el propósito de descripción y no de limitación, de modo que la terminología o fraseología de la presente especificación sea interpretada por el experto en la técnica a la luz de las enseñanzas y guía presentadas en la presente, en combinación con el conocimiento del experto en la técnica.

REFERENCIAS Belardelli F. y Gresser I. The neglected role of type I interferon ¡n the T-cell response: implication for its clinical use, Immunol Today 17: 369-372, 1996. Davís, H., Coley Pharmaceuticles, Ottawa Canadá, Keystone Symposium, Rational Design of Vaccines and Immunotherapeutics, Keystone, 6-11 enero, 2004. Dudley et al., Science, 298, 850-854, 2002. Eid et al., J. IFN and Cytokine Res., 1999, 19, 157-169. Gelder, et al., J. Inf. Dis., 185, 114-117, 2002. Jego, et al., Immunity, 2003, 19, 225-234. Le Bon, et al., Immunity, 14, 461-473, 2001. Lien y Golenbock, en Nature Immunology, 4, 1162-1164, 2003. Oxford ef al., Vaccine, 21 , 2743-2746, 2003. Proietti et al., J. Immunol, 2002, 169, 375-383. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, ed. 189, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1995. Restifo, N., NCl, Keystone Symposium, Rational Design of Vaccines and Immunotherapeutics, Keystone, 6-11 enero, 2004. Spraycar, Marjory, ed., Stedman's Medical Dictionary, Williams and Wilkins, 1995. Tough DF, Borrow P y Sprent J. Induction of bystander T cell proliferation by viruses and type I interferon in vivo. Science 272: 1947-1950, 1996. Tovey y Maury, J. IFN and Cytokine Res., 1999, 19, 145-155.

Claims (16)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REVINDICACIONES

1.- El uso de interferón y/o por lo menos alguna otra cítocina estimuladora Th1 , en la fabricación de un medicamento útil para mejorar la respuesta inmune a una vacuna, en donde la vacuna o antígeno se adapta para ser administrable a un sujeto por medios diferentes del suministro oromucoso; y en donde el medicamento se adapta para ser administrable por vía oromucosa y sustancialmente concurrente con dicha vacuna.

2.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha respuesta inmune es una respuesta humoral.

3.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha respuesta inmune es una respuesta celular.

4.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha vacuna se adapta para ser administrable intramuscularmente.

5.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha vacuna se adapta para ser administrable oralmente o intranasalmente en los pulmones.

6.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha vacuna se adapta para ser administrable subcutáneamente o intradérmicamente.

7.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el medicamento está adaptado para que se mantenga en contacto con la mucosa oral por cuando menos 5 segundos.

8.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el medicamento está adaptado para que se mantenga en contacto con la mucosa oral por cuando menos 1 minuto.

9.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el medicamento está adaptado para que se mantenga en contacto con la mucosa oral de 5 a 300 segundos.

10.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha vacuna se adapta para ser administrable sin la presencia de un adyuvante.

11.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha vacuna es una vacuna con adyuvante.

12.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha vacuna es una vacuna contra la influenza, viruela, ántrax, virus de la hepatitis B, virus del papiloma humano, virus de herpes simple, poliomielitis, tuberculosis o contra el cáncer.

13.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el medicamento se adapta para ser administrable en una cantidad dentro de la escala de 105-108 Ul.

14.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el medicamento se adapta para ser administrable en una cantidad dentro de la escala de 106-107 Ul.

15.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho interferón se selecciona del grupo que consiste de un interferón tipo I o IFN-?.

16.- El uso de interferón, y/o una o más de otras citocínas estimuladoras Th1 , en la fabricación de un medicamento útil para mejorar la respuesta inmune en un sujeto tras la exposición a un antígeno al cual el sujeto ha sido inmunizado previamente, en donde el medicamento se adapta para ser administrable por vía oromucosa.