MXPA06009596A - Aparato de cultivo continuo con recipiente movil, que permite la seleccion mas conveniente de viriantes de celulas. - Google Patents

Abstract

Se describen un metodo y un dispositivo que incrementan la velocidad de reproduccion (a traves de la velocidad incrementada de reproduccion y/o rendimiento reproductivo incrementado) de celulas vivas en suspension o de cualesquiera organismos cultivables a traves del proceso de seleccion natural, el dispositivo comprende: a) un tubo flexible esteril (7) que contiene el medio de cultivo, b) un sistema de compuertas moviles (abrazaderas) (3, 4, 5) que dividen el tubo (97) en regiones separadas que contienen cultivo gastado (region corriente abajo), cultivo en crecimiento (camara de crecimiento), y medio de cultivo fresco (corriente arriba), c) un medio para mover las compuertas y la tuberia (13) tal que una porcion de la camara de crecimiento y el cultivo asociado puede ser pinzada o comprimida y separada de la camara de crecimiento, y tal que una porcion de la tuberia fresca que contiene el medio no utilizado, puede ser unida con una porcion del cultivo y el medio asociado ya presente en la camara de crecimiento.

Description

APARATO DE CULTIVO CONTINUO CON RECIPIENTE MÓVIL, QUE PERMITE LA SELECCIÓN MAS CONVENIENTE DE VARIANTES DE CÉLULAS Campo de la Invención ' La invención descrita proporciona un método y un dispositivo que permiten la selección, de células vivas, con proporciones incrementadas de reproducción y propiedades metabólicas específicas, en un medio líquido o semilíquido. Para el proceso de selección (evolución adaptativa) , los organismos genéticamente variantes (mutantes) surgen de una población y compiten con otras variantes del mismo origen. Aquellas con la velocidad de reproducción más rápida se incrementan en ' proporción relativa con el tiempo, conduciendo a una población (y organismos individuales) con velocidad reproductiva incrementada. Este proceso puede mejorar el funcionamiento de los organismos utilizados en procesos industriales o propósitos académicos . Antecedentes de la Invención La selección para la velocidad reproductiva incrementada (ajuste) requiere un crecimiento sostenido, que es logrado a través de la dilución regular de un cultivo en crecimiento. En la técnica anterior esto ha sido logrado de dos maneras: la dilución en serie y el cultivo continuo, que difieren principalmente en el grado de dilución. El cultivo en serie involucra la transferencia REF:175365 repetitiva de un pequeño volumen de cultivo en crecimiento a un recipiente mucho más grande que contiene medio de crecimiento fresco. Cuando los organismos cultivados se han desarrollado hasta la saturación en el nuevo recipiente, el proceso se repite. Este método ha sido utilizado para lograr las demostraciones más prolongadas de cultivo sostenido en la literatura (Lens i y Travisano; Dynamics of adaptation and diver si f ication : a 10, 000-generation experiment wi th bacterial populations, 1994, Proc Nati Acad Sci EUA. 15:6808-14), en experimentos que demostraron claramente mejoramiento consistente en la velocidad reproductiva en un periodo de años. Este proceso es usualmente realizado manualmente, con inversión de labor considerable, y está sujeto a contaminación a través de la exposición al ambiente externo. El cultivo en serie es también ineficiente, como se describe en el siguiente párrafo . La velocidad de selección, o la velocidad de mejoramiento en la velocidad reproductiva, es dependiente del tamaño de la población (Fisher: The Genetical Theory of Natural Selection. 1930. Oxford University Press, Londres Reino Unido) . Además, en una situación como la transferencia en serie donde el tamaño de la población fluctúa rápidamente, la selección es proporcional a la media harmónica (Ñ) de la población (Wright: Size of population and breeding structure in relation to evolution, 1938. Science 87:430-431), y por lo tanto puede ser aproximado por la población más baja durante el ciclo. El tamaño de la población puede ser sostenido, y la selección por lo tanto hecha más eficiente, a través del cultivo continuo. El cultivo continuo, como es distinguido de la dilución en serie, involucra un volumen relativo más pequeño tal que una porción pequeña de cultivo de crecimiento es regularmente reemplazada por un volumen igual del medio de crecimiento fresco. Este proceso eleva al máximo el tamaño efectivo de la población al incrementar su tamaño mínimo durante la dilución cíclica. Los dispositivos que permiten el cultivo continuo son denominados "guimiostáticos" si las diluciones ocurren a intervalos de tiempo especificados, y "turbi ostáticos" si la dilución ocurre automáticamente cuando el cultivo crece a una densidad específica. Para fines de simplicidad, ambos tipos de dispositivos serán agrupados de aquí en adelante bajo el término "quimiostáticos" . Los quimiostáticos fueron inventados simultáneamente por dos grupos en los años 1950 (Novick y Szilard: Description of the chemostat . 1950, Science 112: 715-716) y (Monod: La technique de la cul ture continué - Théorie et applications . 1950. Ann. Inst. Pasteur 79: 390-410). Los quimiostáticos han sido utilizados para demostrar periodos cortos de mejoramiento rápido en la velocidad reproductiva (Dykhuizen DE. Chemostats used for studying natural selection and adaptative evolution . 1993. Methods Enzymol, 224: 613-31). Los quimiostáticos tradicionales son incapaces de sostener periodos prolongados de selección para la velocidad incrementada de reproducción, debido a la selección no pretendida de las variantes resistentes de dilución (estático) . Estas variantes son capaces de resistir la dilución por adherencia a la superficie del quimiostático, y al hacerlo así, compiten con individuos menos adherentes, incluyendo aquellos que tienen velocidades reproductivas más altas, evitando de este modo el propósito destinado del dispositivo (Chao' y Ramsdell: The effects of wall populations on coexistence of bacteria in the liquid phase of chemostat cultures 1985, J. Gen. Microbiol, 131: 1229-36). Un método y dispositivo gui iostático (la Máquina Genética) ha sido inventado para evitar la resistencia a la dilución en el cultivo continuo (patente de los Estados Unidos 6,686,194-Bl presentada por PASTEUR INSTITUT [FRANCIA] Y MUTZEL RUPERT [ALEMANIA] ) . Este método utiliza la transferencia de fluido, controlada por válvula, para mover periódicamente el cultivo de crecimiento entre dos quimiostáticos, permitiendo que cada uno sea esterilizado y enjuagado entre periodos de crecimiento de cultivo activo. Los ciclos de esterilización regulares previenen la selección de las variantes resistentes a la dilución al destruirlas. Este método y dispositivo logra la meta, pero requiere manipulaciones complejas independientes de varios fluidos dentro de un ambiente estéril (sellado) , incluyendo uno (hidróxido de sodio) que es muy cáustico y potencialmente muy reactivo, dañando rápidamente las válvulas, e imponiendo problemas de contenimiento y desecho de desperdicios . Breve Descripción de la Invención Es por lo tanto un objetivo de la presente invención proporcionar un método y dispositivo mejorados (y completamente independientes) para el cultivo continuo de organismos (incluyendo bacterias, arqueobacterias , eucariotes y virus) sin interferencia de las variantes resistentes a la dilución. Como otros guimostáticos, el dispositivo proporciona un medio para la dilución regular de un cultivo de crecimiento con medio de crecimiento fresco, un medio para el intercambio de gases entre el cultivo y el ambiente externo, la esterilidad y la operación automática ya sea como un quimostático o un turbidostático. La presente invención está diseñada para lograr esta meta sin ninguna transferencia de fluidos, incluyendo las funciones de esterilización o de enjuague. Esto representa una ventaja específica de la presente invención con respecto a la técnica anterior en cuanto a que ésta evita los peligros y dificultades asociados con la esterilización y el enjuague, incluyendo la contención y las transferencias complejas de fluidos que involucran solventes cáusticos.

El cultivo continuo es logrado dentro de un tubo sellado estéril flexible relleno con medio de crecimiento. El medio y la superficie de la cámara son estáticos uno con respecto al otro, y ambos son regular y simultáneamente reemplazados por el movimiento peristáltico de la tubería a través de las "compuertas", o puntos en los cuales el tubo es estérilmente subdividido por pinzas que previenen que los organismos cultivados se muevan entre las regiones del tubo. Las compuertas de UV pueden también (opcionalmente) ser agregadas corriente arriba y corriente abajo del recipiente de cultivo para la seguridad adicional . El presente método y dispositivo son también un mejoramiento sobre la técnica anterior, en cuanto a que éstos continuamente, en vez de periódicamente, seleccionan contra la adherencia de las variantes resistentes a la dilución a las superficies quimistáticas, conforme ocurre el reemplazo de las superficies afectadas en tándem con el proceso de dilución. El tubo es subdividido de una manera transitoria, tal que existen regiones que contienen cultivo saturado (completamente desarrollado) , regiones que contienen medio fresco, y una región entre estas dos, denominada la cámara de crecimiento, en la cual el cultivo en crecimiento es mezclado con el medio fresco para lograr la dilución. Las compuertas son periódicamente liberadas desde un punto sobre el tubo y reemplazadas en otro punto, tal que el cultivo de crecimiento junto con su superficie de la cámara de crecimiento asociada y los organismos estáticos acoplados, es retirado por aislamiento de la cámara de crecimiento, y reemplazado por medio fresco y la superficie de la cámara fresca. Mediante este método, las variantes estáticas son específicamente contra-seleccionadas mediante retiro de la región en la cual está ocurriendo la selección (la cámara de crecimiento) . Breve Descripción de las Figuras Sin ser exhaustivos y limitantes, una posible configuración general incluirá varios componentes' como se describen de aquí en adelante. En lo subsiguiente, la presente invención es ejemplarmente explicada con base en una modalidad preferida, con la cual se hace referencia a los dibujos en los cuales : La figura 1 muestra una vista general de una configuración posible del dispositivo en el cual: (1) representa la tubería flexible que contiene las diferentes regiones del dispositivo que son: el medio fresco (7) corriente arriba, la cámara de crecimiento (10) , la cámara de muestreo (11) y la región (15) de cultivo desarrollado, desechado. (2) representa la caja termostáticamente controlada que permite la regulación de la temperatura de acuerdo a las condiciones determinadas por el usuario, y en la cual puede estar localizada: a. la cámara de crecimiento (10) , b. la cámara de muestreo (11) , c. la compuerta (3) corriente arriba que define el comienzo de la cámara de crecimiento (10) , d. la compuerta (4) corriente abajo que define el final de la cámara de crecimiento (10) y el comienzo de la cámara de muestreo (11) . e. la segunda compuerta (5) corriente abajo que define el final de la cámara de muestreo (11) , f. el turbidímetro (6) que permite que el usuario o el sistema de control automatizado monitorice la densidad óptica del cultivo de crecimiento y opere un sistema de control (13) de retroalimentación, permitiendo el movimiento controlado de la tubería (1) con base en la densidad del cultivo (función túrbidostática) , g. uno o varios agitadores (9) . Se debe notar que los elementos del dispositivo, listados en a-g pueden también estar localizados fuera de, o en ausencia de, una caja termostáticamente controlada. (7) representa el medio fresco en la tubería flexible no utilizada. (8) representa un barril cargado con tubería llena con medio fresco, con el fin de surtir el medio fresco y la tubería durante las operaciones . (12) representa las compuertas de radiación ultravioleta opcionales, (13) representa el sistema de control que puede consistir de una computadora conectada con los medios de comunicación a diferentes interconexiones de monitoreo u operación, como los turbidímetros de densidad óptica, los dispositivos de medición y regulación de la temperatura, los agitadores y los motores de inclinación, etc, que permiten la automatización y control de las operaciones, (14) representa el barril de disposición opcional, sobre el cual se bobina . la tubería que contiene la -tubería rellena con cultivo desarrollado, desechado, (15) representa el cultivo desarrollado desechado, localizado corriente abajo de la cámara de muestreo. La figura 2 muestra dos posibles posiciones del dispositivo, e emplificando el hecho de que la caja (2) termostáticamente controlada y otras piezas del dispositivo asociado con dicha cámara de cultivo, pueden estar inclinados a varios grados para fines de agitación, circulación del gas y propósitos de eliminación, y para fines de garantizar el retiro de las células granuladas (agregadas) que puedan escapar a la dilución mediante asentamiento hacia el fondo. Las figuras 3 a 9 representan la tubería flexible (1) en su sitio en la caja (2) termostáticamente controlada, e introducida a través de las compuertas (3), (4) y (5), a través de las cuales la tubería permanecerá durante todos los pasos del proceso y a través de los cuales la tubería se moverá de acuerdo a su movimiento peristáltico. La figura 3 simboliza el estado TO del dispositivo, en el cual todas las regiones de la tubería flexible son rellenadas con medio fresco antes de la inyección del organismo pretendido para el cultivo continuo. La figura 4 simboliza el estado Ti de la tubería flexible, justo después de la inyección de la cepa del organismo. La figura 5 simboliza el estado T2 del dispositivo, que es un periodo de crecimiento durante el cual el cultivo crece en la región definida como la cámara de crecimiento (10), limitada por las compuertas (3) y (4). La figura 6 simboliza el estado T3 del dispositivo, justo después del primer movimiento peristáltico de la tubería y el medio asociado, que determina el comienzo del segundo ciclo de crecimiento, introduciendo tubería y medio frescos a través del movimiento de la compuerta 3 simultáneamente con una transferencia del volumen equivalente de la tubería, el medio y el cultivo de crecimiento fuera de la región (10) de la cámara de crecimiento, y dentro de la región (11) de la cámara de muestreo, mediante el movimiento de la compuerta 4. Es crítico reconocer que la tubería, el medio que está dentro de la tubería, y cualquier cultivo que se haya desarrollado en ese medio, todos se mueven con untamente. La transferencia del fluido únicamente ocurre en cuanto a que el medio fresco y el medio desarrollado se mezclen entre sí a través de agitación dentro de la región de la cámara de crecimiento. La figura 7 simboliza el estado T4 del dispositivo que es el segundo ciclo de crecimiento; durante este ciclo los organismos que permanecen en la cámara de crecimiento después del movimiento peristáltico de la tubería pueden ahora desarrollarse utilizando nutrientes proporcionados en el medio fresco que es mezclado con el cultivo remanente durante este paso. La figura 8 simboliza el estado T5 del dispositivo, justo después del segundo movimiento peristáltico de la tubería y el medio contenido, que determina el comienzo del tercer ciclo de crecimiento, introduciendo una tubería fresca y el medio a través del movimiento de la compuerta 3 simultáneamente con una transferencia de volumen equivalente de la tubería, el medio, y el cultivo de crecimiento fuera de la región (10) de la cámara de crecimiento y dentro de la región (11) de la cámara de muestreo, mediante movimiento de la compuerta 4. La figura 9 simboliza • el estado T6 del dispositivo que es el tercer ciclo de crecimiento; este paso es equivalente al estado T4 e indica la naturaleza repetitiva de las operaciones adicionales. Las muestras de los organismos seleccionados pueden ser removidas a cualquier tiempo de la región (11) de la cámara de muestreo, utilizando una jeringa u otro dispositivo de recuperación. La figura 10 muestra un posible perfil de los dientes que determinan una compuerta en la configuración que consiste de dos dientes de apilamiento que comprimen la tubería flexible. Las compuertas podrían también ser determinadas por los dientes simples que presionan contra una banda móvil, pinzas o abrazaderas removibles, u otros mecanismos que previenen el movimiento de los organismos a través de la compuerta y que pueden ser alternadamente colocados y removidos en posiciones variables a lo largo de la tubería. Descripción Detallada de la Invención La operación básica del dispositivo es descrita en las figuras 3 a la 9. Una configuración potencial para el presente dispositivo es mostrado en la figura 1, como éste aparece después de haber sido cargado con un tubo fresco de medio estéril (mostrado dividido en las regiones A-H por las compuertas (3), (4) y (5)). La inoculación del dispositivo con el organismo elegido podría ser lograda mediante introducción del organismo dentro de la cámara de crecimiento (figura 3), a través de inyección (figura 4, región B) . El cultivo podría ser luego dejado desarrollarse a la densidad deseada y el cultivo continuo podría comenzar (figura 5) . El cultivo continuo podría proceder por movimientos repetitivos de las regiones con compuerta de la tubería. Esto involucra los movimientos simultáneos de las compuertas, la tubería, el medio, y cualquier cultivo dentro de la tubería. La tubería siempre se moverá en la misma dirección; la tubería no utilizada que contiene medio fresco (y de aquí en adelante denominada como "corriente arriba" de la cámara (7)) se moverá dentro de la cámara de crecimiento y se mezclará con el cultivo remanente allí, proporcionando el sustrato para el crecimiento adicional de los organismos contenidos en ésta. Antes de la introducción dentro de la región de la cámara de crecimiento, este medio y su tubería asociada serán mantenidos en una condición estéril por la separación desde la cámara de crecimiento por las compuertas (3) corriente arriba. La tubería utilizada que contiene el cultivo desarrollado simultáneamente será movida "corriente abajo" y separada de la cámara de crecimiento por las compuertas (4) corriente abajo. La configuración de compuerta no es un punto específico de la presente solicitud de patente. Por ejemplo, en una configuración dada, las compuertas pueden ser diseñadas a través de una cadena de múltiples dientes simultáneamente movidos o en otra configuración separada en cadenas sincronizadas distintas como se describe en la figura 1. Las compuertas pueden consistir de un sistema elaborado de dos dientes que comprimen la tubería de una manera por apilamiento como se describe en la figura 10, evitando la contaminación entre las regiones G y H de la tubería a través de la precisión de la interfaz entre los dientes . En otra configuración más, las compuertas estériles pueden ser obtenidas mediante el prensado de un diente contra un lado de la tubería, y con esto presionando la tubería herméticamente contra un chasis fijo a lo largo del cual la tubería es deslizada durante su movimiento peristáltico, como se bosqueja en las figuras 3 a la 9, marcas 3, 4 y 5. La caja (2) termostáticamente controlada es obtenida por los medios ya conocidos tales como un termómetro acoplado con un dispositivo de calentamiento y enfriamiento. La aireación (intercambio de gases) , cuando es requerida para el crecimiento del organismo cultivado o por el diseño del experimento, es lograda directamente y sin asistencia mecánica por el uso de la tubería permeable al gas. Por ejemplo y sin ser limitantes, la tubería permeable al gas, flexible, puede ser elaborada de silicona. La aireación podría ser lograda a través del intercambio con la atmósfera ambiental o a través del intercambio con una atmósfera artificialmente definida (líquida o gaseosa) que hace contacto con la cámara de crecimiento o el guimiostático completo. Cuando un experimento demanda anaerobiosis la tubería flexible puede ser impermeable al gas. Por ejemplo y sin ser limitantes, la tubería flexible impermeable al gas, puede ser elaborada de silicona recubierta o tratada. Para las condiciones de evolución anaeróbica, las regiones de la tubería pueden ser también confinadas en un área atmosférica específica y controlada para controlar la dinámica de intercambio de gases . Esto puede ser logrado ya sea haciendo que la caja termostáticamente controlada sea hermética a los gases y luego inyectando gas neutro dentro de ésta, o al colocar el dispositivo completo en una habitación de atmósfera controlada. La contra-selección de las variantes estáticas es lograda mediante el reemplazo de la superficie de la cámara de crecimiento junto con el medio de crecimiento. El dispositivo está además diseñado para ser operable en una variedad de orientaciones con respecto a la gravedad, es decir, para ser inclinado como se muestra por la figura 2, a lo largo de un intervalo de hasta 360°. Las variantes resistentes a la dilución pueden evitar la dilución mediante apilamiento una a la otra, en vez de a la pared de la cámara si las células agregadas pueden caer corriente arriba, y con esto evitar la eliminación desde la cámara. Por lo tanto, es deseable que la tubería en general esté inclinada hacia abajo, tal que las células agregadas caerán hacia la región que será removida de la cámara de crecimiento durante un ciclo de movimiento de la tubería. Esta configuración involucra la inclinación del dispositivo, de modo que las compuertas corriente abajo están debajo de las compuertas corriente arriba con respecto a la gravedad. La cámara de crecimiento puede ser despresurizada o sobre-presurizada de acuerdo a las condiciones elegidas por el experimentador. Las diferentes maneras de ajustar la presión pueden ser utilizadas, por ejemplo, aplicando vacío o aire presurizado al medio fresco y la tubería a través de su extremo corriente arriba y a través de la cámara de crecimiento; otra manera de despresurizar o superpresurizar la tubería puede ser realizada estrechando o comprimiendo y asegurando de manera alternada la tubería corriente arriba de la cámara de crecimiento. Cuando el medio es contenido en una tubería permeable al gas, pueden formarse burbujas de aire dentro del medio. Éstas se elevarán hacia la parte superior de una región sellada de la tubería y llegarán a ser atrapadas allí hasta que el movimiento de la región (y las compuertas que la definen) liberen la región hacia la cámara de crecimiento, la cámara de muestreo o el punto final del güimostático (figuras 6, regiones D-C, B ó A respectivamente) . Si el dispositivo es inclinado hacia abajo tales burbujas se acumularán en la cámara de crecimiento o en la cámara de muestreo, y desplazarán el cultivo. El dispositivo está diseñado para inclinarse periódicamente hacia arriba por un ciclo de tubo del movimiento del tubo, permitiendo la eliminación del gas acumulado desde las cámaras . Los movimientos de inclinación del dispositivo, y/o la agitación de la cámara de crecimiento por un dispositivo (9) externo pueden ser utilizados para disminuir la agregación de las células dentro de la cámara de crecimiento. Alternativamente, una o varias barras de agitación pueden ser incluidas en la tubería rellena con el medio fresco antes de la esterilización y agitados magnéticamente durante las operaciones de cultivo. La longitud proporcional de las regiones de medio fresco definido por las compuertas corriente arriba, en comparación a la longitud de la cámara de cultivo, definirán el grado de dilución logrado durante un ciclo. La frecuencia de la dilución puede ser determinada ya sea mediante sincronización (función quimiostática) o mediante regulación de retroalimentación, con lo cual la densidad del cultivo en la cámara de crecimiento es medida por un turbidímetro (figura 1- marca 6) y el ciclo de dilución ocurre cuando la turbidez alcanza un valor de umbral (función turbidostática) . La cámara de muestreo permite el retiro del cultivo desarrollado, con el fin de analizar el resultado de un experimento, recolectar organismos con velocidad mejorada de crecimiento para el cultivo posterior, almacenamiento o implementación funcional posteriores, u otros propósitos tales como el conteo de la población, la verificación de la composición química del medio, o la prueba del pH del cultivo desarrollado. Con el fin de lograr el monitoreo permanente del pH dentro de la cámara de crecimiento, la tubería puede incluir mediante construcción, una línea indicadora del pH incrustada en la pared de la tubería. Cualquier forma de material líquido o semi-sólido puede ser utilizado como medio de crecimiento en el presente dispositivo. La habilidad para utilizar sustratos de crecimiento semi-sólidos es un avance notable sobre la técnica anterior. El medio de crecimiento, el cual definirá los procesos metabólicos mejorados por el proceso de selección, puede ser elegido y definido por el usuario. Si es necesario, este dispositivo puede contener múltiples cámaras de crecimiento, tal que las compuertas corriente abajo de una cámara de crecimiento se vuelven las compuertas corriente arriba de la otra. Esto podría, por ejemplo, permitir que un organismo se desarrolle solo en la primera cámara, y luego actuar como la fuente de nutrición para un segundo organismo (o virus) en la segunda cámara. Este dispositivo y método permiten que los investigadores y los. desarrolladores de productos evolucionen cualquier cepa de células vivas cultivables en suspensión, a través del crecimiento sostenido (cultivo continuo) ; el organismo mejorado resultante puede constituir una nueva cepa o especie. Estos nuevos organismos pueden ser identificados mediante mutaciones adquiridas durante el curso del cultivo, y estas mutaciones pueden permitir que los nuevos organismos sean distinguidos de las características genotípicas de sus ancestros. Este dispositivo y método permiten que el investigador seleccione las nuevas cepas de cualquier organismo viviente al segregar los individuos con velocidades de reproducción mejoradas a través del proceso de selección natural . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Un dispositivo que incrementa la velocidad de reproducción (a través de la velocidad incrementada de reproducción y/o rendimiento reproductivo incrementado) de las células vivas en suspensión o de cualesquiera organismos cultivables a través del proceso de selección natural, el dispositivo está caracterizado porque comprende: a) un tubo flexible estéril que contiene el medio de cultivo, b) un sistema de abrazaderas, cada una capaz de abrirse y cerrarse, las abrazaderas son colocadas para ser capaces de dividir el tubo en regiones separadas que contienen el cultivo gastado (región corriente abajo) , el cultivo de crecimiento (cámara de crecimiento) , y el medio de crecimiento fresco (región corriente arriba) , c) un medio para mover las abrazaderas y la tubería, tal que una porción de la cámara de crecimiento y el cultivo asociado puede ser abrazada o comprimida y separada de la cámara de crecimiento, y tal que una porción de la tubería fresca que contiene el medio no utilizado puede ser unida con una porción de cultivo y el medio asociado ya presente en la cámara de crecimiento, en donde cada una de las abrazaderas no se mueve con respecto al tubo cuando la abrazadera está en la posición cerrada, 2. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue la tubería es flexible para permitir el pinzado o compresión y la segregación en cámaras separadas . 3. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue la tubería es permeable al gas, por ejemplo comprendida principalmente de silicio, para permitir el intercambio de gases entre el organismo cultivado y el ambiente externo, de acuerdo al tipo de experimento . 4. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue la tubería es impermeable al gas, para prevenir el intercambio de gases entre la tubería y el ambiente externo, si el experimento demanda anaerobiosis . 5. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la tubería es transparente o translúcida, para permitir la medición de la turbidez . 6. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la tubería de la cámara de crecimiento y el medio asociado y el cultivo pueden ser despresurizados o sobre-presurizados con relación a la atmósfera ambiental, como sea necesario por los requerimientos experimentales . 7. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la tubería permite la medición del pH del medio mediante la inclusión de un indicador de pH en la composición o revestimiento de la tubería. 8. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la tubería de la cámara de crecimiento y el medio asociado y el cultivo, pueden ser calentados o enfriados como sea apropiado para las condiciones experimentales. . El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la tubería de la cámara de crecimiento y el medio asociado y el cultivo, pueden ser mantenidos sin movimiento o agitados mediante cualquier método ya conocido. 10. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la tubería puede incluir una o varias barras de agitación para fines de agitación. 11. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue las regiones de la tubería pueden ser confinadas en un área atmosférica específica y controlada para controlar la dinámica del intercambio de gases . 12. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue la tubería de la cámara de crecimiento y el medio de cultivo asociado pueden ser inclinados ya sea hacia abajo para eliminar las células agregadas, o hacia arriba para eliminar el aire a través de las funciones descritas en la reivindicación l-c. 13. Un método que incrementa la velocidad de reproducción (a través de la velocidad incrementada de reproducción y/o rendimiento reproductivo incrementado) de las células vivas en suspensión o de cualesquiera organismos cultivables a través del proceso de selección natural, caracterizado el método porgue comprende: a) la provisión de un cultivo inicial en la cámara de crecimiento descrita a través de inyección estéril de un cultivo iniciador dentro de un tubo estéril que contiene el medio de crecimiento estéril; b) el mantenimiento de las condiciones de crecimiento de acuerdo a los requisitos experimentales; c) después de un cierto periodo de tiempo y el crecimiento asociado del cultivo, el ajuste de la posición de las compuertas descritas para mover así porciones iguales del medio fresco y del medio desarrollado (respectivamente) dentro y fuera de la región definida como la cámara de crecimiento, permitiendo que la porción remanente del cultivo desarrollado se mezcle con la porción introducida del medio fresco y continúe desarrollándose; d) la reproducción de los pasos b) y e) hasta el fin del experimento, para lograr el cultivo continuo y la selección de las variantes con velocidades reproductivas incrementadas ; e) el retiro a demanda de una muestra del cultivo desarrollado a partir de la cámara de muestreo. 14. Un método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porgue la aplicación de un movimiento peristáltico simultáneo de las compuertas, la tubería y el medio y el cultivo de la tubería, permite la provisión de una cierta cantidad de medio fresco a la cámara de crecimiento, mientras que una cantidad igual de cultivo es aislada y removida a través de otro extremo de dicha cámara de crecimiento, terminando un ciclo de crecimiento y comenzando uno nuevo . 15. Un método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque un experimento puede incluir tantos ciclos de crecimiento como sean requeridos por el experimentador sin contaminación posible de la cámara de crecimiento aislada y sin posible proliferación de una población resistente a la dilución. 16. Un método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque durante las operaciones el experimentador puede mantener las condiciones de crecimiento de acuerdo a los requisitos experimentales que pueden incluir temperatura, presión, densidad óptica, acidez química, agitación y aireación con diversos gases. 17. Un método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porgue una combinación de inclinación del dispositivo y operación de los agitadores conduce a una agitación apropiada para mezclar el cultivo de crecimiento, con el fin de prevenir o reprimir la agregación de organismos vivientes . 18. Un dispositivo que incrementa la velocidad de reproducción (a través de la velocidad incrementada de reproducción y/o rendimiento reproductivo incrementado) de las células vivientes en suspensión o de cualesquiera organismos cultivables a través del proceso de selección natural, caracterizado el dispositivo porque comprende: una longitud continua de tubería estéril, flexible; un sistema de abrazaderas colocadas en puntos a lo largo de una sección de la tubería, cada una de las abrazaderas es colocada y acomodada para ser capaz de comprimir controlablemente la tubería al poner dicha abrazadera en una posición cerrada en la cual la tubería es dividida en regiones separadas sobre lados respectivos de la abrazadera, las regiones separadas sobre los lados respectivos de la abrazadera son fusionados hacia atrás en una región simple cuando la abrazadera es devuelta a una posición abierta; en donde las abrazaderas y la tubería están acomodadas tal que la tubería es abrazada o comprimida en un primero a cuarto puntos a lo largo de la tubería, definiendo la primera a tercera regiones corriente abajo del primero al tercer puntos, respectivamente; y en donde un volumen de la segunda región delimitada por los puntos dos y tres, es mayor que un volumen de la primera y tercera regiones; en donde el sistema de abrazaderas está construido tal que, en un patrón repetitivo, la tubería es comprimida corriente arriba del primer punto, la tubería es comprimida en un punto entre el segundo y tercer puntos, y el segundo punto es regresado a la posición abierta, con lo cual se subdivide la segunda región en una porción corriente arriba y una porción corriente abajo, fusionando la primera región y la porción corriente arriba, y con esto definiendo nuevos primero a cuarto puntos y primera a tercera regiones . 19. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque la tubería es permeable al gas . 20. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porcjue la tubería es impermeable al gas. 21. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque la tubería es translúcida. 22. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque la tubería es transparente. 23. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque los contenidos de la tubería en la segunda región pueden ser controlablemente despresurizados o sobre-presurizados con relación a la atmósfera ambiental . 24. El dispositivo. de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque comprende además un indicador de pH en la tubería. 25. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque comprende además un dispositivo de calentamiento y enfriamiento que puede controlar una temperatura del contenido de la tubería. 26. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque comprende además un agitador. 27. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el agitador comprende al menos una barra de agitación. 28. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque las regiones de la tubería pueden ser confinadas en un área atmosférica específica y controlada para controlar la dinámica de intercambio de gases . 2 . El dispositivo de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque comprende además un dispositivo para controlar la inclinación de la segunda porción de la tubería. 30. Un método que incrementa la velocidad de reproducción (a través de la velocidad incrementada de reproducción y/o rendimiento reproductivo incrementado) de células vivientes en suspensión o de cualesquiera organismos cultivables a través del proceso de selección natural, el dispositivo está caracterizado porque comprende los pasos de: la provisión de una longitud continua de tubería, estéril, flexible; la provisión de un sistema de abrazaderas colocadas en puntos a lo largo de una sección de la tubería, cada una de las abrazaderas está colocada y acomodada para ser capaz de comprimir controlablemente la tubería, al poner la abrazadera en una posición cerrada en la cual la tubería es dividida en regiones separadas sobre lados respectivos de la abrazadera, las regiones separadas sobre lados respectivos de la abrazadera son fusionadas en una región simple cuando la abrazadera es devuelta a una posición abierta; la colocación del medio de cultivo en la tubería; el cierre de las abrazaderas en el primero a cuarto puntos a lo largo de la tubería, para definir primera a tercera regiones corriente abajo del primero a tercer puntos, respectivamente, en donde el volumen de la segunda región delimitada por los puntos dos y tres es mayor que un volumen de la primera y tercera regiones; la introducción del organismo cultivable dentro de la segunda región entre el segundo y tercer puntos, y permitiendo que el cultivo se desarrolle en el medio de cultivo; y la repetición de un paso que comprende el pinzado o compresión de la tubería corriente arriba del primer punto, compromiendo la tubería en un punto entre el segundo y tercer puntos, y regresando el segundo punto a la posición abierta, con lo cual se subdivide la segunda región en una porción corriente arriba y una porción corriente abajo, fusionando la primera región y la porción corriente arriba, y con esto definiendo nuevos primero a cuarto puntos y primera a tercera regiones . 31. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque se aplica un movimiento peristáltico simultáneo de las abrazaderas, la tubería y el medio y el cultivo de la tubería, permite la provisión de una cierta cantidad de medio fresco a la segunda región de la tubería, mientras que una cantidad igual del cultivo es aislada y removida a través de un extremo opuesto de la segunda región, terminando un ciclo de crecimiento y comenzando un nuevo ciclo de crecimiento. 32. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porgue comprende además un paso de controlar una presión del contenido de la tubería en la segunda región. 33. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque comprende además un paso de controlar una temperatura de los contenidos de la tubería. 34. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque comprende además un paso de agitar los contenidos de la tuberia. 35. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque comprende además un paso de proporcionar un área atmosférica especifica y controlada alrededor de la tubería, para controlar la dinámica de intercambio de gases.* 36. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porgue comprende además un paso de inclinar controlablemente la segunda porción de la tubería. 37. Un dispositivo para desarrollar células vivas de una manera continua, caracterizado porgue comprende: tubería flexible que contiene medios de cultivo; y un sistema de abrazaderas, cada una capaces de tener posiciones abiertas y cerradas, las abrazaderas son colocadas para ser capaces de dividir la tubería en: i) una región corriente arriba que contiene un medio de cultivo no utilizado; ii) una región corriente abajo que contiene medio de cultivo gastado; iii) una región de la cámara de crecimiento para desarrollar las células colocadas entre las regiones corriente arriba y corriente abajo; en donde el sistema de abrazaderas está construido y acomodado para abrirse y cerrarse para comprimir así y definir la región de la cámara de crecimiento de la tubería, entre las corrientes corriente arriba y corriente abajo de la tubería, y para redefinir cíclicamente la región de la cámara de crecimiento de la tubería, de modo que una primera porción de la región de la cámara de crecimiento previamente definida, se vuelva una porción de la región corriente abajo de la tubería, y una porción de la región corriente arriba previamente definida de la tubería, se vuelve una porción de la región de la cámara de crecimiento de la tubería. 38. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque el sistema de abrazaderas está construido y acomodado de modo que cada una de las abrazaderas no se mueve con respecto a la tubería cuando dicha abrazadera está en la posición cerrada. 39. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque la tubería es permeable al gas . 40. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque la tubería es impermeable al gas . 41. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque la tubería es una de transparente y translúcida para permitir que un turbidímetro determine la densidad del cultivo. 42. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque el dispositivo comprende además un regulador de la presión, construido para cambiar una presión de la porción de la cámara de crecimiento de la tubería, con relación a la presión ambiental. 43. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque la tubería comprende un indicador de pH. 4 . El dispositivo de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque comprende además un regulador de la temperatura, construido para controlar la temperatura de la región de la cámara de crecimiento de la tubería. 45. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque el dispositivo comprende además un agitador construido para permitir la agitación de la porción de la cámara de crecimiento de la tubería . 46. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porgue el agitador comprende al menos una barra de agitación. 47. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque la región de la cámara de crecimiento comprende una o más cámaras de crecimiento que contienen el medio de cultivo. 48. Un método para desarrollar células de una manera continua, caracterizado porque comprende: a) la provisión de tubería flexible y un sistema de abrazaderas, cada una de las abrazaderas es capaz de tener posiciones abierta y cerrada, las abrazaderas son colocadas para ser capaces de dividir la tubería en: i) una región corriente arriba que contiene un medio de cultivo no utilizado; ii) una región corriente aba o que contiene medio de cultivo gastado; iii) una región de la cámara de crecimiento para desarrollar las células colocadas entre las regiones corriente arriba y corriente abajo; b) el cierre de las seleccionadas de las abrazaderas sobre la tubería, para definir la región de la cámara de crecimiento de la tubería entre las regiones corriente arriba y corriente abajo de la tubería, e introduciendo células viables dentro de la región de la cámara de crecimiento; c) cerrar y abrir cíclicamente las seleccionadas de las abrazaderas, para redefinir la región de la cámara de crecimiento de la tubería, de modo que una primera porción de la región de la cámara de crecimiento previamente definida, se vuelve una porción de la región corriente abajo de la tubería, y una porción de la región corriente arriba previamente definida de la tubería, se vuelve una porción de la región de la cámara de crecimiento de la tubería, y d) la repetición del paso c) hasta que haya sido desarrollada una cantidad suficiente de células . 49. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque comprende el paso adicional de retirar una muestra de las células vivas del medio de cultivo, desde la región corriente abajo. 50. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porgue comprende además el aislamiento de las células vivas a partir de la región corriente abajo. 51. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque las células vivas se seleccionan del grupo que consiste de levaduras, bacterias, ar ueobacterias , eucariotes y virus . 52. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque la región de la cámara de crecimiento comprende uno o más cámaras de crecimiento que contienen medio de cultivo. 53. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque una o más especies de organismos se desarrollan en las cámaras de crecimiento. 54. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque la cantidad suficiente de células del paso d) es definido como un nivel de densidad predeterminado de las células . 55. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque la tubería es permeable a los gases. 56. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque la tubería es impermeable a los gases . 57. El método de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque la tubería es transparente y translúcida, siendo colocado un turbidímetro para determinar el nivel de densidad de las células . 58. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque comprende además la regulación de la presión de la porción de la cámara de crecimiento de la tubería, con relación a la presión ambiental. 59. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque comprende además la medición del pH del medio de cultivo en la región de la cámara de crecimiento. 60. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque comprende además la regulación de la temperatura de la región de la cámara de crecimiento, con un regulador de temperatura construido para controlar la temperatura de la región de la cámara de crecimiento de la tubería. 61. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque comprende además la agitación del medio de cultivo en la región de la cámara de crecimiento, con un agitador. 62. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque al agitador comprende al menos una barra de agitación.