MXPA06002414A

MXPA06002414A - Uso de tigeciclina, sola o en combinacion con rifampicina para el tratamiento de osteomielitis y/o artritis.

Info

Publication number: MXPA06002414A
Application number: MXPA06002414A
Authority: MX
Inventors: Raymond Thomas Testa
Original assignee: Wyeth Corp
Priority date: 2003-09-05
Filing date: 2004-09-07
Publication date: 2006-08-31
Also published as: RU2006110936A; DK1663233T3; ECSP066482A; CA2537281A1; NO20061468L; EP1663233A1; RU2329047C2; AU2004270231A1; EP1663233B1; ATE401888T1; CO5690590A2; WO2005023263A1; KR20060072135A; UA83250C2; CN1889957A; IL173878A0; BRPI0413770A; US20050148553A1; JP2007504249A; ES2311860T3

Abstract

La presente invencion esta dirigida a un metodo para el tratamiento de infecciones de hueso o medula osea, infeccion de la articulacion o infeccion de los tejidos circundantes a la articulacion por la administracion del antibiotico tigeciclina sola o en combinacion con una antibiotico de rifamicina. En una realizacion de preferencia, la infeccion de hueso o de medula osea causa osteomielitis. En otra realizacion, la infeccion articular o infeccion de los tejidos circundantes causa artritis septica. La invencion tambien esta dirigida a la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de infecciones de hueso y/o medula osea, o infecciones articulares y/o infecciones en los tejidos circundantes a la articulacion con tigeciclina sola o en combinacion con rifampicina.

Description

USO DE TIGECICLINA SOLA O EN COMBINACIÓN CON RIFAMPICINA PARA TRATAR LA OSTEOMIELITIS Y/O LA ARTRITIS SÉPTICA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un método nuevo para el tratamiento de osteomielitis y artritis séptica causada o consecuente de infecciones bacterianas. La presente invención también se refiere al tratamiento de infecciones bacterianas del hueso, la médula ósea, las articulaciones y el líquido sinovial. La presente invención también se refiere al tratamiento de infecciones bacterianas resistentes a antibióticos en estas patologías y tejidos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN En la última mitad del siglo XX se produjeron significativos progresos en el desarrollo de agentes antibacterianos. Este éxito generó la percepción de que las enfermedades bacterianas se curaban con mayor facilidad que cualquier otro trastorno importante, pero la emergencia de microorganismos resistentes a múltiples fármacos en la década de 1990 dio por resultados severas implicaciones de salud pública. La resistencia se diseminó a microorganismos previamente susceptibles, y algunos microorganismos son esencialmente resistentes a todos los agentes antibacterianos aprobados .

La tigeciclina, que pertenece a la clase de antibióticos de la glicilciclina, supera los mecanismos existentes de resistencia microbiana. Demostró un amplio espectro de actividad antibacteriana, con inhibición de múltiples bacterias resistentes grampositivas, gramnegativas y anaerobias. La tigeciclina- es activa contra la mayoría de los agentes patógenos más comunes. La tigeciclina es activa contra agentes patógenos tales como Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) , enterococos resistentes a vancomicina (incluso Enterococcus faecalis) , neumococos resistentes a penicilina /macrólidos, Prevotella spp., peptostreptococos, micobacterias y microorganismos resistentes a minociclina (Boucher et al . , Antimicrob Agents Chemother. 2000; 44(8): 2225-2229, Gales et al . , Antimicrob Agents Chemother. 2000; 46: 19-36, Goldstein et al . , Antimicrob Agents Chemother. 2000; 44(10): 2747-2751). La tigeciclina es útil para el tratamiento agentes patógenos respiratorios tales como Streptococcus pneumoniae (sensible a penicilina y resistente a penicilina) , Haemophilus influenzae, Chlamydia pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, Staphylococcus aureus (susceptible a meticilina y resistente a meticilina) , bacilos gramnegativos aerobios, y enterococos (enterococos susceptibles a vancomicina y resistentes a vancomicina) . Los resultados in vivo han sido muy alentadores y mejores de los previsto, sobre la base del tiempo superior a la concentración inhibitoria mínima (CIM) en suero. Se observa que tigeciclina es un agente antibacteriano seguro. Los estafilococos eticilinorresistentes son los microorganismos más comunes en las infecciones de huesos y articulaciones (Waldvogel, Infectious Diseases 1988: 1339-1344). Las opciones para el tratamiento de infecciones debidas a estos microorganismos son limitadas: la sensibilidad de las cepas clínicas a las quinolonas, clindamicina, cotrimoxazol y rifampicina es variable, y a menudo la sensibilidad se limita a los glucopéptido, que se deben administrar por vía parenteral. Ya se describió la resistencia de los estafilococos a los glucopéptidos, lo cual representa un problema importante, dado que esos fármacos se consideran la regla de oro para el tratamiento de infecciones severas debidas a estafilococos meticilinorresistentes (Smith, et al . , N Engl J Med 1999; 340: 493-501) . Recientemente se han introducido en la práctica clínica nuevos fármacos para el tratamiento de infecciones estafilocócicas meticilinorresistentes, tales como quinupristina-dalfopristina y linezolid (Johnson, et al . , Lancet 1999; 354: 2012-2013, Livermore, J Antimicrob Chemother 2000; 46: 347-350) . No obstante, ninguno de ellos se ha investigado con detenimiento en estudios clínicos para el tratamiento de osteomielitis. El tratamiento de infecciones ortopédicas agudas y crónicas es difícil, en parte debido a que muchas de las infecciones son causadas por agentes patógenos resistentes a antibióticos, pero también debido en parte a la localización de la infección. A menudo el tratamiento requiere una prolongada terapéutica con antibióticos y tratamiento quirúrgico (Lazzarini et al . , Curr Infect Dis Rep 2002: 4: 439-445). Se han llevado a cabo varios estudios con diversos modelos animales de osteomielitis (Rissing, Infect Dis Clin North Am 1990; 4: 377-390). A pesar de un prolongado tratamiento con antibióticos, aún se pueden hallar bacterias viables en el hueso. La erradicación de más bacterias del hueso se ha asociado con una duración prolongada de tratamiento con antibióticos (Norden, Rev Infect Dis 1988; 10: 103-110) . Tras cuatro semanas de tratamiento con antibióticos, la mayoría de los regímenes antibióticos fueron incapaces de erradicar los estafilococos del hueso. Tradicionalmente se administra el tratamiento antibiótico para osteomielitis por vía intravenosa. Sin embargo, se han probado con éxito regímenes orales para osteomielitis en estudios humanos (Bell, Lancet 1968; 10: 295-297, Feigin et al . , Pediatr 1975; 55: 213-223, Slama et al . , Am J Med 1987; 82 (Suppl 4A) : 259-261) . Lamentablemente, la elección de agentes antimicrobianos orales es restringida cuando se manejan microorganismos resistentes a múltiples fármacos, y el tratamiento de estos microorganismos resistentes a múltiples fármacos puede requerir el uso de fármacos parenterales (Tice, Infect Dis Clin North Am 1998; 12: 903-919) . En consecuencia, aún hay necesidad de un método para el tratamiento de osteomielitis y/o artritis séptica causadas por infecciones bacterianas, especialmente las causadas por cepas bacterianas resistentes a antibióticos. La presente invención cubre esta necesidad de larga data.

SÍNTESIS DE LA INVENCIÓN La presente invención provee un método para el tratamiento de infecciones del hueso o de la médula ósea (a menudo denominadas osteomielitis) y/o infecciones articulares e infecciones de los tejidos circundantes (a menudos denominados artritis séptica) en un mamífero, de preferencia un humano. Este método comprende la administración al mamífero de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina y/o un agente antimicrobiano seleccionado del grupo formado por rifamicina, rifampicina, rifapentina, rifaximina o estreptovaricina, para tratar la infección. De preferencia, el antimicrobiano es rifampicina. La infección puede ser causada por un agente patógeno seleccionado del grupo formado por bacterias gramnegativas, bacterias grampositivas, bacterias anaerobias, y bacterias aerobias. Entre los ejemplos de estas bacterias se incluyen Staphylococcus , Acinetobacter, Mycobacterium, Haemophilus, Salmonella, Streptococcus, Enterobacteriaceae, Enterococcus, Escherichia , Pseudomonas, Neisseria , Rickettsia, neumococos, Prevotella , peptoestreptococos, Bacteroides , Legionella, estreptococos beta hemolíticos, estreptococos grupo B y espiroquetas. De preferencia, la infección se debe a Neisseria, Mycobacterium, Staphylococcus y Haemophilus, con mayor preferencia a Neisseria meningitidis , Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, o Mycobacterium leprae . En realizaciones de preferencia, la infección comprende un agente patógeno que exhibe resistencia a antibióticos. Como ejemplos de resistencia a antibióticos se incluye la resistencia a meticilina, resistencia a glucopéptido, resistencia a tetraciclinas, resistencia a oxitetraciclinas, resistencia a doxiciclina; resistencia a clortetraciclinas, resistencia a minociclina, resistencia a glicilciclina, resistencia a cefalosporinas, resistencia a ciprofloxacina, resistencia a nitrofurantoína, resistencia a trimetoprima-sulfas, resistencia a piperacilina/tazobactam, resistencia a moxifloxacina, resistencia a vancomicina, resistencia a teicoplanina, resistencia a penicilina y resistencia a macrólidos. Una resistencia a glucopéptidos de preferencia es la resistencia a vancomicina. En otra realización de preferencia, la infección comprende S. aureus que exhibe resistencia seleccionada del grupo formado por resistencia a glucopéptido, resistencia a tetraciclinas, resistencia a minociclina, resistencia a meticilina, resistencia a vancomicina y resistencia a antibióticos de gligilciclina distintos de tigeciclina. En otra realización, la infección comprende Acinetobacter baumannii, que puede o no exhibir resistencia a antibióticos seleccionada del grupo formada por resistencia a cefalosporinas, resistencia a ciprofloxacina, resistencia a nitrofurantoína, resistencia a trimetoprima-sulfas, resistencia a y piperacilina/tazobactam. En otra realización, la infección comprende Mycobacterium abscessus que puede o no exhibir resistencia a moxifloxacina. En otras realizaciones, la infección comprende Haemophilus influenzae, Enterococcus faecium, Escherichia coli, Neisseria gonorrhoeae, Rickettsia prowazekii, Rickettsia typhi, o Rickettsia rickettsii . La presente invención también provee el uso de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina para el tratamiento de osteomielitis y/o artritis séptica en un mamífero. En otra realización, la presente invención provee el uso de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina y un agente antimicrobiano seleccionado del grupo formado por rifamicina, rifampicina, rifapentina, rifaximina o estreptovaricina para el tratamiento de osteomielitis y/o artritis séptica. En otra realización, la invención provee el uso de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de osteomielitis y/o artritis séptica en un mamífero. En otra realización se provee el uso de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina y un agente antimicrobiano seleccionado del grupo formado por rifamicina, rifampicina, rifapentina, rifaximina o estreptovaricina para el tratamiento de osteomielitis y/o artritis séptica en un mamífero.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Los dibujos ilustran ciertas realizaciones de la presente invención y de ninguna manera intentan limitar el alcance de la invención. La Figura 1 muestra farmacocinética de tigeciclina en conejos New Zealand blancos normales, que establece niveles séricos superiores a la concentración inhibitoria mínima más de doce horas después del tratamiento con 14 mg/kg de tigeciclina. La Figura 2 muestra la gradación por los investigadores de la extensión de la infección ósea como se observa en las imágenes de rayos X. Los datos demuestran el efectivo tratamiento de la osteomielitis mediante tigeciclina y tigeciclina en combinación con rifampicina, sobre los controles.

La Figura 3 muestra las unidades formadores de colonias por gramo de médula y de hueso en cada uno de los tratamientos, lo cual demuestra que tigeciclina y tigeciclina en combinación con rifampicina fueron tratamientos efectivos de la infección del hueso y de la infección de la médula ósea respecto de los controles . La Figura 4A provee una descripción gráfica de los pesos de los conejos durante el curso temporal de la administración de diversos agentes antibacterianos. La Figura 4B provee una descripción gráfica de las variaciones de pesos de los conejos durante el curso temporal de la administración de diversos agentes antibacterianos. Las Figuras 5A y 5B muestran los picos y valles de tigeciclina (14 mg/kg dos veces por día) y vancomicina (30 mg/kg dos veces por día) en el suero de conejos infectados, tras la administración de los fármacos respectivos. Los datos demostraron que los niveles séricos de antibiótico eran superiores a las concentraciones inhibitorias mínimas durante el tratamiento.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención está dirigida a métodos para el tratamiento de infecciones de hueso y médula ósea en un mamífero. De preferencia, el mamífero es un humano. En una realización de preferencia, la infección de hueso o médula ósea causa osteomielitis. La osteomielitis es una infección aguda o crónica del hueso y/o la médula ósea, e incluye el proceso inflamatorio relacionado del hueso y sus estructuras debido a la infección por microorganismos piogénicos. La infección asociada con osteomielitis puede ser localizada o diseminarse por el periostio, la corteza, la médula y el tejido trabecular. Los agentes patógenos bacterianos comunes causales de osteomielitis varían sobre la base de la edad del paciente y al mecanismo de infección. La osteomielitis aguda incluye dos categorías principales: osteomielitis hematógena y osteomielitis por inoculación directa o contigua. La osteomielitis hematógena es una infección causada por la siembra bacteriana desde la sangre. La osteomielitis hematógena aguda se caracteriza por una infección aguda del hueso causada por la siembra de la bacteria dentro del hueso, proveniente de una fuente remota. La osteomielitis hematógena ocurre sobre todo en niños. El sitio más frecuente es la metáfisis altamente vascular y de rápido crecimiento de los huesos en desarrollo. El aparente enlentecimiento y la sedimentación del flujo sanguíneo a medida que los vasos forman ángulos agudos en la metáfisis distal predispone a trombosis de los vasos y a necrosis localizada del hueso, con siembra bacteriana. Estos cambios de la estructura ósea se puede detectar en las imágenes radiológicas. A pesar de su nombre, la osteomielitis hematógena aguda puede tener un desarrollo clínico lento y un inicio insidioso. La inoculación directa o contigua de osteomielitis es causada por el contacto del tejido con la bacteria durante un traumatismo o una cirugía. La osteomielitis por inoculación directa (foco contiguo) en una infección del hueso secundaria a la inoculación de microorganismos por traumatismo directo, diseminación a partir de un foco de infección contiguo, o sepsis tras un procedimiento quirúrgico. Las manifestaciones clínicas de la osteomielitis por inoculación directa son más localizadas que las de la osteomielitis hematógena, y tienden a comprometer múltiples microorganismos / agentes patógenos. Otras categorías incluyen osteomielitis crónica y osteomielitis secundaria a enfermedad vascular periférica. La osteomielitis crónica persiste o recurre, con independencia de la causa y/o mecanismo inicial y a pesar de la intervención agresiva. Si bien se considera una etiología, la enfermedad vascular periférica en realidad es un factor predisponente más que una causa verdadera de infección. Los síntomas de osteomielitis a menudo incluyen fiebre alta, fatiga, irritabilidad y malestar. A menudo hay restricción de movimientos en el miembro o articulación infectado. Por lo general, la infección viene acompañada de edema local, eritema y sensibilidad, y puede haber calor alrededor de la zona afectada. También puede haber drenaje de los tractos sinusales en estadios más tardíos de la infección. Por lo general, la osteomielitis hematógena se presenta con una progresión insidiosa lenta de síntomas, mientras que la osteomielitis cónica puede incluir una úlcera que no cura, drenaje del tracto sinusal, fatiga crónica y malestar. Por lo general, la osteomielitis directa se presenta son síntomas y signos destacados en una zona más localizada. Se sabe que ciertos estados patológicos predisponen a los pacientes a osteomielitis . Estos estados incluyen diabetes mellitus, enfermedad de células falciformes, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) , abuso de drogas IV, alcoholismo, uso crónico de esteroides, inmunosupresión y artropatías crónicas. Además, la presencia de un dispositivo protésico ortopédico es un factor de riesgo independiente, al igual que cualquier cirugía ortopédica o fractura abierta recientes. Varios agentes patógenos bacterianos son causales comunes conocidas de osteomielitis aguda y directa. Por ejemplo, la osteomielitis directa aguda en recién nacidos (menores de 4 meses) suele ser causada por S. aureus, especies de Enterobacter, y especies de Streptococcus grupos A y B. En niños de entre 4 meses y 4 años, la osteomielitis hematógena aguda suele ser causada por S. aureus, especies de Streptococcus grupo A, Haemophilus influenzae, y especies de Enterobacter. En niños y adolescentes entre 4 años y adultos, la osteomielitis hematógena aguda suele ser causada por S. aureus (80%), especies de Streptococcus grupo A, Haemophilus influenzae, y especies de Enterobacter. En adultos, la osteomielitis hematógena aguda suele ser causada por S . aureus y, en ocasiones, especies de Enterobacter o Streptococcus . En épocas pasadas, el tratamiento primario incluía una combinación de penicilina sintética resistente a penicilinasa y una cefalosporina de tercera generación. La terapéutica alternativa incluye vancomicina o clindamicina y una cefalosporina de tercera generación. Además de estos agentes antibacterianos antes mencionados, se han usado ciprofloxacina y rifampicina en terapéutica combinada para pacientes adultos. En los casos de evidencias de infección por bacilos gramnegativos, a menudo se administra una cefalosporina de tercera generación. En general, la osteomielitis directa suele ser causada por S . aureus, especies de Enterobacter, y especies de Pseudomonas . A menudo, la osteomielitis directa es causada por una herida punzante a través de un calzado deportivo. En estos casos, la osteomielitis directa suele ser causada por S . aureus y especies de Pseudomonas . En este escenario, los principales antibióticos incluyen ceftazidime o cefepime. A menudo se utiliza ciprofloxacina como tratamiento alternativo. En pacientes con enfermedad de células falciformes, la osteomielitis directa sueles ser causada por S. aureus y especies de Salmonella, y la principal elección de tratamiento es un antibiótico de fluoroquinolona (no en niños) . Una elección alternativa es una cefalosporina de tercera generación (p.e ., ceftriáxona) . Para pacientes con osteomielitis debida a traumatismo, por lo general los agentes infecciosos incluyen S . aureus, bacilos coliformes y Pseudomonas aeruginosa . Los antibióticos principales son nafcilina y ciprofloxacina. Entre las alternativas se incluyen vancomicina y una cefalosporina de tercera generación con actividad antipseudomonas . En consecuencia, tal como se usa en la presente y en las reivindicaciones, el término "osteomielitis" incluye osteomielitis hematógena, osteomielitis de inoculación directa o contigua, osteomielitis crónica y osteomielitis secundaria a enfermedad vascular periférica. La osteomielitis puede ser consecuencia de infecciones causadas por cualquiera de los agentes patógenos antes descritos, sino también otros agentes patógenos con capacidad para infectar el hueso, la médula ósea, la articulación o el tejido circundante. El término "tratamiento de osteomielitis" incluye la erradicación de los agentes patógenos / bacterias causales de infección asociada con osteomielitis, la inhibición de crecimiento bacteria, la reducción de la concentración bacteriana, la reducción del tiempo de recuperación de la infección, el mejoramiento, la eliminación o la reducción de los síntomas de infección tales como tumefacción, necrosis, fiebre, dolor, debilidad y/u otros indicadores seleccionados como medidas adecuadas por los expertos en el arte. En la actualidad, el principal tratamiento de osteomielitis consiste en antibióticos parenterales que penetran las cavidades óseas y articulares. Se requiere tratamiento durante al menos cuatro a seis semanas. Después de iniciar la administración de antibióticos intravenosos en un paciente internado se puede continuar la terapéutica con antibióticos intravenosos u orales, según el tipo y la localización de la infección, para pacientes externos . Por ejemplo, por lo general la osteomielitis causada por infección por S. aureus se trata con 2 gramos de cloxacilina administrada por vía intravenosa o parenteral cada seis horas, durante al menos los primero 14 días, o durante todo el curto del tratamiento de hasta seis semanas. Otros tratamientos son cefazolina administrada en 1-2 gramos cada ocho horas durante seis semanas o 600 mg de clindamicina cada ocho horas durante seis semanas. En general, la osteomielitis causada por estreptococos beta-hemolíticos se trata por vía intravenosa o parenteral con penicilina bencílica con dos millones de Ul cada cuatro a seis horas durante dos a cuatro semanas. Las infecciones por Salmonella spp. se tratan con ciprofloxacina a 750 mg por vía oral cada 12 horas durante seis semanas. En general, el tratamiento de la osteomielitis causada por Haemophilus influenzae en niños consiste en la administración intravenosa o parenteral de 25-50 mg de cloxacilina cada cuatro a seis horas durante cuatro a seis días, mas ceftriáxona en 50-75 mg/kg cada 24 horas durante cuatro a seis días. Este tratamiento se continúa con amoxicilina en 15 mg/kg más ácido clavulánico por vía oral (máximo 500 mg) cada ocho horas durante cuatro semanas.

En recién nacidos se logra el tratamiento con cloxacilina por vía intravenosa o parenteral en 25-50 mg/kg cada cuatro a seis horas durante cuatro a seis días, más cefotaxime intravenoso o parenteral en 50-75 mg/kg cada ocho horas durante cuatro a seis días. Se sigue el tratamiento con amoxicilina en 15 mg/kg más ácido clavulánico oral (máximo 500 mg) cada ocho horas durante cuatro semanas. En general, la infección en niños por S. aureus se trata mediante la administración intravenosa o parenteral de 25-50 mg de cloxacilina cada cuatro a seis horas durante cuatro a seis días, mas ceftriáxona en 50-75 mg/kg cada 24 horas durante cuatro a seis días. Este tratamiento se sigue con cloxacilina en 12,5 mg/kg por vía oral cada seis horas durante tres o cuatro semanas.

El tratamiento de la infección en niños por Salmonella spp. depende de la susceptibilidad del agente patógeno. Las elecciones de tratamiento incluyen cloxacilina más ceftriaxona, seguido de sulfametoxazol en 20 mg/kg y trimetoprima en 4 mg/kg por vía oral cada 12 horas durante seis semanas, o amoxicilina en 7,5-15 mg/kg por vía oral cada 12 horas durante seis semanas, o ciprofloxacina en 10-15 mg/kg cada cuatro a seis horas durante cuatro a seis días, más cefotaxime en 50-75 mg/kg por vía intravenosa cada ocho horas durante cuatro a seis días, seguido de sulfametoxazol y trimetoprima o amoxicilina o ciproflaxacina. Otra realización de la presente invención provee métodos para el tratamiento de infecciones articulares y/o infecciones de tejidos circundantes en un mamífero. De preferencia, el mamífero es un humano. En una realización de preferencia, la infección articular y/o la infección de tejidos circundantes causa artritis séptica. La artritis séptica es una infección de la articulación y los tejidos circundantes, y causa inflamación de la articulación causada por la presencia de microorganismos intraarticulares vivos. Con mayor frecuencia, la artritis séptica es secundaria a osteomielitis, especialmente en la infancia, es consecuencia de la infección bacteriana. La infección de la articulación se puede producir por varias vías. Con mayor frecuencia, la diseminación del agente patógeno infectante es hematógena. Con frecuencia, la artritis séptica se origina a partir de infecciones o abscesos en la piel. La sepsis en la boca y los dientes o tras procedimientos dentales o en asociación con infecciones de las vías respiratorias o urogenitales también pueden causar artritis séptica. Los traumatismos penetrantes directos de la articulación con objetos punzantes, o por lesiones traumáticas importantes también pueden causar infección articular. La aspiración o la inyección articular y los procedimientos quirúrgicos tales como el reemplazo articular también pueden causar infección articular. Además, a menudo la osteomielitis se disemina y afecta la articulación. Esto es especialmente común en niños pequeños. Por último, la infección de los tejidos blandos adyacentes a la articulación, por ejemplo la inflamación de las bolsas o vainas tendinosas, se pueden diseminar hasta afectar el espacio articular. La diseminación de la infección por vía hematógena sigue siendo la causa más frecuente de sepsis articular. Entre los síntomas de artritis séptica se incluyen malestar y fiebre, articulación o articulaciones calientes agudas, junto con inflamación aguda: tumefacción y efusión articular, enrojecimiento, dolor y pérdida de función. Los microorganismos causales de artritis séptica más comunes son Staphylococcus aureus . En artritis séptica neonatal también son agentes patógenos comunes Escherichia coli y Haemophilus influenzae . En niños de hasta 5 años, la causa más común de sepsis articular hematógena es Haemophilus influenzae. Las bacterias gramnegativas intestinales también son agentes patógenos comunes en ancianos y en personas con diabetes mellitus o prótesis articulares. En los casos de lesiones penetrantes, y en personas que abusan de drogas intravenosas a menudo se encuentra infección por Pseudomonas aeruginosa o Staphylococcus epidermidis . En adultos jóvenes sanos, en ocasiones la causa de artritis séptica es la infección por Neisseria gonorrhoeae o por meningococos . La artritis séptica crónica de grado bajo, especialmente en la columna, puede ser consecuencia de infección por microorganismos tales como Mycobacteria o Brucella abortus . Además, el rango de agentes patógenos en pacientes con síndrome de inmunodeficiencia adquirida es variado. Algunos de los agentes patógenos de artritis séptica más comunes incluyen, sin limitaciones, (1) grampositivos : Staphylococcus aureus (80% de los casos), Streptococcus pyogenes /pneumoniae; (2) gramnegativos : Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae / ' eningitidis , Pseudomonas aeruginosa, Bacteroides fragilis, especies de Brucella, especies de Salmonella, bacterias fusiformes; (3) bacilos ácido-alcohol resistentes: Mycobacterium tuberculosis, micobacterias atípicas; y (4) espiroquetas: Leptospira icterohaemorrhagica . En consecuencia, tal como se usa en la presente y en las reivindicaciones el término "artritis séptica" incluye infecciones articulares y de los tejidos circundantes causados por los agentes patógenos antes mencionados, además de cualquier otro agente patógeno con capacidad para infectar la articulación y los tejidos circundantes. Los tejidos circundantes incluyen, sin limitaciones, el músculo circundante, los tendones relacionados, los huesos conectados, las bolsas, las vainas tendinosas, el sinovio, el líquido sinovial y el cartílago relacionado. El término "tratamiento de la artritis séptica" incluye la erradicación de los agentes patógenos / bacterias causales de la infección subyacente asociada a artritis séptica, la inhibición del desarrollo bacteriano, la reducción de la concentración bacteriana, la reducción del tiempo de recuperación de la infección, el mejoramiento, la eliminación, o la reducción de síntomas de infección tales como tumefacción, necrosis, fiebre, dolor, debilidad, y/u otros indicadores seleccionados como medidas adecuadas por los expertos en el arte. Por lo general, las articulaciones sépticas se tratan durante cuatro a seis semanas, mientras que las artroplastias infectadas se tratan durante cuatro a seis semanas o más. (Calhoun et al . , Am . J. of Surgery 1989; 157: 443-449, Calhoun et al . , Archives of Otolaryngology - Head and Neck Surgery 1988; 114: 1157-1162, Gordon et al . , Antimicrob Agents Chemother 2000; 44(10): 2747-2751, Mader et al . , West J Med 1988; 148: (5)568, Mader et al . , Orthopaedic Review 1989; 18: 581-585, Mader et al . Drugs & Aging 2000; 16(1): 67-80). Estos prolongados tratamientos antibióticos se tornan aún más problemáticos cuando hay bacterias resistentes a fármacos, tales como Staphylococcus aureus resistentes a meticilina. Antes de la caracterización del agente patógeno, por lo general el tratamiento de la artritis séptica en adultos comienza con 2 g de cloxacilina por vía intravenosa o intramuscular cada seis horas en combinación con 1-2 g de ceftriáxona cada 24 horas. En niños mayores de dos meses, el tratamiento incluye cloxacilina por vía intravenosa o intramuscular en 25-50 mg/kg, hasta un máximo de 2 g cada seis horas, en combinación con ceftriáxona 25-50 mg/kg hasta un máximo de 2 g cada 24 horas. En neonatos, el tratamiento incluye cloxacilina por vía intravenosa o intramuscular en 50-75 mg/kg hasta un máximo de 2 g por vía intravenosa cada ocho horas. Otros tratamientos antibióticos incluyen cefotaxima, flucloxacilina, y penicilina bencílica. Una vez identificado el agente patógeno, el curso común de tratamiento se basa en los agentes patógenos infectantes presentes. Por ejemplo, cuando se determina que la infección comprende Staphylococcus aureus, a menudo se trata la artritis séptica con cloxacilina por vía intravenosa cada seis horas, o cefazolina cada ocho horas, o clindamicina cada ocho horas, donde el tratamiento elegido dura dos o tres semanas. El S. aureus meticilinorresistente se trata con vancomicina administrado por vía parenteral.

El tratamiento antibiótico de osteomielitis y artritis séptica es aún un desafío para el médico. Muchas infecciones ortopédicas se adquieren en el ambiente hospitalario (Holtom et al . , Clin Orthop 2002; 403: 38-44). Además, los agentes causales de estas infecciones a menudo son resistentes a múltiples fármacos. Los estafilococos son los microorganismos hospitalarios resistentes a fármacos más comunes, pero también pueden intervenir agentes patógenos gramnegativos (Cunha, Clin Infect Dis 2002; 35: 287-293) . Las infecciones debidas a Staphylococcus aureus meticilinorresistentes, comparadas con las debidas a S . aureus meticilinosensibles, son más difíciles de tratar y pueden tener un peor pronóstico (Cosgrove et al . , Clin Infect Dis 2003; 36: 53-59) . Las opciones terapéuticas para estas infecciones son limitadas. Los únicos fármacos con eficacia constante contra todas las cepas de estafilococos y extensamente estudiados para el tratamiento de infecciones óseas son los glucopéptidos . Lamentablemente, ya se ha reconocido la resistencia a estos antibióticos como uno de los principales problemas del tratamiento de agentes patógenos grampositivos . Los enterococos resistentes a vancomicina tienen distribución mundial, y dicha resistencia ha demostrado ser potencialmente transmisible a otros microorganismos grampositivos in vitro (Noble, et al . , FEMS Microbiology Letters 1992; 72:195-198). Además, se han aislado cepas esporádicas de Staphylococcus aureus resistentes a vancomicina en varios países (Hiramatsu, Am J Med 1998; 104 :7S-10S, Hamilton-Miller, Infección 2002; 30: 118-124). En consecuencia, tiene fundamental importancia la disponibilidad de agentes antimicrobianos alternativos para el tratamiento de patógenos resistentes a múltiples fármacos. Tigeciclina (antes a menudo aún denominado "GAR-936") es un derivado sintético 9-t-butilglicilamido de una nueva clase de antibióticos denominados glicilciclinas . Esta nueva clase de derivados de las tetraciclinas demostró una excelente actividad in vitro contra una gran cantidad de microorganismos grampositivos y gramnegativos, aerobios y anaerobios, incluso Staphylococcus aureus meticilinorresistente (MRSA) , enterococos vancomicinorresistentes (incluso Enterococcus faecalis) , neumococos penicilinorresistentes/macrolidorresistentes, Prevotella spp., peptostreptococos, y Mycobacterium spp. (Boucher et al . , Antimicrob Agents Chemother. 2000; 44(8): 2225-2229, Gales et al . , Antimicrob Agents Chemother. 2000; 46: 19-36, Goldstein et al . , Antimicrob Agents Chemother. 2000; 44(10): 2747-2751) . Las tetraciclinas son agentes bacteriostáticos que actúan por inhibición de la síntesis de proteínas bacterianas. Se han desarrollado glicilciclinas para superar los mecanismos bacterianos de resistencia a las tetraciclinas, si bien aún no se ha determinado el mecanismo de acción exacto (Rasmussen et al . , Antimicrob Agents Chemother 1995; 38: 1658-1660). La tigeciclina se concentra en hueso, médula ósea, articulaciones y líquido sinovial, además de muchos otros órganos y tejidos de interés. Además, se ha descubierto que tigeciclina se concentra en las porciones infectadas de los tejidos antes descritos. Los estudios de farmacocinética de tigeciclina intravenosa en humanos han demostrado que hay una fase de difusión rápida, con una vida media prolongada (40 a 60 horas) y un elevado volumen de distribución en estado estable (7 a 14 L/kg) . Estudios en animales con tigeciclina con marca radiactiva sugieren que esta fase de distribución rápida y elevado volumen de distribución en estado estable representa la penetración de tigeciclina en tejidos que incluyen pulmones y hueso. Por ejemplo, se ha demostrado la distribución de tigeciclina en tejidos de ratas Sprague-Dawley cuando se administra [14C] tigeciclina en una dosis de 3 mg/kg por infusión IV durante 30 minutos. En general, hubo una buena distribución de la radiactividad en la mayoría de los tejidos, y se observó la mayor exposición global en hueso. Las exposiciones en tejidos que mostraron las mayores concentraciones fueron las siguientes: hueso>médula ósea >glándula salival, tiroides, bazo y riñon. En cada uno de estos tejidos, la relación de superficie bajo la curva concentración-tiempo (AUC) en tejidos respecto de AUC en plasma fue superior a 10. En este estudio, la relación entre AUC en el pulmón de rata y AUC en plasma fue de 4,4. Además, se ha demostrado que la tigeciclina administrada por vía intravenosa penetra en el tejido óseo de humanos y la administración intravenosa extiende la concentración de tigeciclina en líquido sinovial en humanos en el tiempo. Los inventores descubrieron que tigeciclina es un tratamiento útil de osteomielitis y artritis séptica. El espectro antimicrobiano es amplio, e incluye todos los agentes patógenos hallados en las infecciones nosocomiales de huesos y articulaciones. Las propiedades farmacocinéticas son favorables, dado que el fármaco se puede administrar dos veces por día. Además, se hallaron penetración ósea y niveles farmacológicos superiores a la concentración inhibitoria mínima (CIM) en casi todas las muestras obtenidas. La concentración inhibitoria mínima es un método para determinar la eficacia de un compuesto en la inhibición del crecimiento bacteriano. Es la menor concentración de un agente antimicrobiano que inhibe el desarrollo de un microorganismo, y debería corresponder a concentraciones requeridas en los sueros de los mamíferos para el tratamiento mínimo. Además, la tigeciclina proporcionó un buen perfil de seguridad en humanos, lo que demuestra que el agente antimicrobiano debería ser adecuado para estudios clínicos sobre infecciones ortopédicas.

En consecuencia, un aspecto de la invención provee un método para el tratamiento de infecciones de hueso, médula ósea, articulaciones y tejidos circundantes, y un método para el tratamiento de osteomielitis y/o artritis séptica en un mamífero por administración al mamífero de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina. Las infecciones de hueso, médula ósea, articulación y tejidos circundantes y osteomielitis y/o artritis séptica pueden ser causadas por cualquiera de los agentes patógenos comúnmente hallados, tales como los agentes patógenos antes analizados, que incluyen bacterias gramnegativas, bacterias grampositivas, bacterias anaerobias y bacterias aerobias. Por ejemplo, la infección puede comprender, sin limitaciones, Staphylococcus , Acinetobacter, Mycobacterium, Haemophilus, Salmonella , Streptococcus, Enterobacteriaceae, Enterococcus, Escherichia , Pseudomonas, Neisseria , Rickettsia, Pneumococci , Prevotella , Peptostreptococci, Bacteroides Legionella, estreptococos beta hemolíticos, y estreptococos grupo B. En realizaciones de preferencia, la infección comprende Neisseria, Mycobacterium, Staphylococcus, y Haemophilus . En realizaciones de mayor preferencia, la infección comprende Escherichia coli , Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae, Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes , Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Enterococcus faecium, Rickettsia prowazekii, Rickettsia typhi, Rickettsia rickettsii, Mycobacterium leprae, Mycobacterium abscessus, o Mycoplasma pneumoniae. En una realización de la presente invención se provee un método para el tratamiento de infecciones de hueso, médula ósea, articulaciones y los tejidos circundantes, y un método para el tratamiento de osteomielitis y/o artritis séptica causados por las cepas bacterianas (tales como las antes descritas) que muestran resistencia a antibióticos por la administración de una cantidad farmacéuticamente efectiva de tigeciclina. Por ejemplo, la resistencia exhibida puede ser, sin limitaciones, resistencia a meticilina, resistencia a glucopéptido, resistencia a tetraciclina, resistencia a oxitetraciclina, resistencia a doxiciclina; resistencia a clortetraciclina, resistencia a minociclina, resistencia a glicilciclina, resistencia a cefalosporina, resistencia a ciprofloxacina, resistencia a nitrofurantoína, resistencia a trimetoprima-sulfas, resistencia a piperacilina/tazobactam, resistencia a moxifloxacina, resistencia a vancomicina, resistencia a teicoplanina, resistencia a penicilina, y resistencia a macrólidos. En una realización de preferencia, la resistencia a glucopéptido es resistencia a vancomicina. En otra realización de preferencia, la infección comprende S . aureus que exhibe resistencia de resistencia a glucopéptido, resistencia a tetraciclina, resistencia a minociclina, resistencia a meticilina, resistencia a vancomicina o resistencia a un antibiótico de glicilciclina distinto de tigeciclina. En otra realización de preferencia, la infección comprende Acinetobacter baumannii que puede o no exhibir resistencia a antibióticos tales como resistencia a cefalosporinas, resistencia a ciprofloxacina, resistencia a nitrofurantoína, resistencia a trimetoprima-sulfas, y resistencia a piperacilina/tazobactam. En otra realización, la infección comprende Mycobacterium abscessus que puede o no exhibir resistencia a moxifloxacina. En el tratamiento de humanos y otros mamíferos, tigeciclina se administra más comúnmente por vía intravenosa, si bien los expertos en el arte disponen de otras vías de administración. Los sujetos humanos toleran dosis de hasta 100 mg administradas durante infusiones de una hora. Las administraciones dos veces al día durante nueve días de 75 mg o más en infusiones de 200 ml durante una hora a sujetos alimentados 30 minutos antes de la infusión produjeron intolerancia gastrointestinal en todos los sujetos, con náuseas y vómitos. Fue tolerada la administración dos veces diarias de 25-50 mg en infusiones de 200 ml durante una hora. También se toleró una única infusión de 100 mg, con concentraciones séricas pico promedio de 0,9 a 1,1 microgramos/ml . La administración de 14 mg/kg dos veces al día a conejos New Zealand White produjo niveles de estado estable superiores a la concentración inhibitoria mínima. Véase Figura 1. Las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) y concentraciones bactericidas mínimas (CBM) para tigeciclina en las cepas MRSA utilizadas en este estudio fueron inferiores a 0,2 Dg/ml y 0,2 Dg/ml, respectivamente. La medición de CBM provee un método para la determinación de la eficacia de un compuesto en la eliminación de las bacterias . La técnica de CBM establece el nivel mínimo de un agente bactericida que eliminará al menos 99,9% de los organismo en un inoculo estándar. Las CIM y CBM fueron determinadas por Mercier et al . para tigeciclina contra E. faecium resistente a vancomicina en 0,125 Dg/ml y entre 16 y 32 Dg/ml, respectivamente. Para S. aureus, las concentraciones inhibitorias mínimas y las concentraciones bactericidas mínimas fueron entre 0,25 y 1 Dg/ml y 16 y 64 Dg/ml, respectivamente. En un estudio de uso compasivo, los inventores hallaron que la concentración inhibitoria mínima de tigeciclina contra M. abcessus en un paciente humano fue de 0,25 Dg/ml. En mamíferos, S. aureus meticilinorresistente se puede tratar con tigeciclina en el rango de 5 mg/kg a 60 mg/kg dos veces al día, con mayor preferencia 10 mg/kg a 40 mg/kg, con mayor preferencia 12 mg/kg a 20 mg/kg. Las dosificaciones adecuadas para el tratamiento de otros agentes patógenos serán aparentes a los expertos en el arte. En un estudio de uso compasivo, un paciente humano padecía espina bífida con consecuente paraplejia. El paciente tenía alergia severa a sulfas y se presentó con bacteriemia i meticilinorresistente por talón decúbito infectado. El paciente también presentaba degradación cutánea sobre el isquión derecho. Se debridó la úlcera, pero no curó. Una IRM reveló osteomielitis y una sección del hueso fue positiva para infección por Acinetobacter baumannii . El A. baumanii era resistente a cefalosporinas, ciprofloxacina, nitrofurantoína, y mostró resistencia intermedia a trimetoprima-sulfas y piperacilina/tazobactam. El microorganismo era susceptible a imipenem, gentamicina y tobramicina. Se trató el paciente con meropenem y tobramicina. Luego se reemplazó meropenem por aztreonam debido a la presencia de eosinofilia. Luego se discontinuó aztreonam debido a eosinofilia persistente. También se discontinuó tobramicina debido al aumento de la creatinina. Luego se trató el paciente con tigeciclina durante dos meses con 50 mg cada 12 horas o 50 mg cada 24 horas. Al cabo de un mes de recibir tratamiento con tigeciclina, una IRM mostró la resolución de la osteomielitis y se observó notable mejoría en el líquido obtenido de la zona isquial derecha. Se informó que el paciente evolucionaba bien diez semanas después del tratamiento con tigeciclina. En otro estudio de uso compasivo, un paciente con displasia ectodérmica anhidrótica e inmunodeficiencia tenía antecedentes de tres años y medio de osteomielitis vertebral con infección Mycobacterium abscessus . La debridación se logró tras un año un año de infección con colocación de hardware. El paciente mostró cierta mejoría con cefoxitano, claritromicina y amicacina. Más tarde se interrumpió la amicacina debido a deterioro renal. Más tarde se agregó linezolide y azitromicina al régimen terapéutico. Se determinó que el microorganismo era resistente a moxifloxacina . Más adelante, el paciente se presentó con una nueva osteomielitis vertebral justo por encima del sitio de la vieja infección. Se realizó una biopsia y se determinó que no era necesaria una debridación adicional. Se halló que el microorganismo sólo era sensible a cefoxitina. Se determino que sería útil otro agente antimicrobiano, y se encontró que el microorganismo era susceptible a tigeciclina. Se administró tigeciclina en CIM 0,25 microgramos/ml . El recuento de leucocitos del paciente era normal, había hipogamaglobulinemia y disminución de la función linfocitaria. El paciente también había estado bajo tratamiento con IL-12, pero se mantuvo IL-12 durante el tratamiento antibiótico. Se informó que el paciente evolucionaba bien un año después del tratamiento. Otra realización de la presente invención provee un método para el tratamiento de infecciones de hueso, médula ósea, articulaciones y tejido circundante, y un método para el tratamiento de osteomielitis y/o artritis séptica en un mamífero, de preferencia un humano, que comprende la administración al mamífero de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina y un agente antimicrobiano de la familia de ansamicina, que incluye los grupos de antibióticos rifamicina y estreptovaricina. La familia de rifamicina incluye rifampicina, rifapentina, rifaximina, y de preferencia, rifampicina. Estos antibióticos macrocíclicos tienen actividad bactericida debido a su propensión a unirse a ARN polimerasa. Estos antibióticos son útiles en combinación con tigeciclina pues efectúan distintos pasos en la síntesis de proteínas bacterianas. Mientras que las rifamicinas actúan con la ARNpolimerasa y limitan la producción de ARN mensajero, la tigeciclina tiene acción sobre los ribosomas y la producción de las proteínas a partir del ARN mensajero. El modo de acción de la tigeciclina parece estar relacionado con la inactivación de los ribosomas 70S a través de la unión al sitio de fijación de una tetraciclina en la subunidad ribosomal 30S con una orientación algo diferente que la tetraciclina. (Bauers et al . , J. Antimicrob Chemother. 2004; 53(4): 592-599). Los presentes inventores descubrieron que tigeciclina en combinación con un antibiótico de la clase de antimicrobianos de rifamicina provee efecto antimicrobiano aditivo en tejidos infectados. En una investigación con conejos inoculados en la tibia con S. aureus meticilinorresistentes, el tratamiento de osteomielitis con tigeciclina en combinación con rifampicina no demostró infección en hueso en 10 conejos mientras los controles mostraron infección en 11 de 15 conejos. El tratamiento en médula ósea tampoco demostró infección en 10 conejos mientras los controles mostraron 5 conejos infectados de 15 conejos estudiados. Además el tratamiento de osteomielitis en conejos con tigeciclina sola demostró infección en hueso de un conejo de 10 y sin infección en la médula ósea. En mamíferos, el tratamiento con rifampicina puede estar en el rango de 10 mg/kg a 100 mg/kg dos veces por día, con mayor preferencia puede estar en el rango de 20 mg/kg a 70 mg/kg dos veces por día, con mayor preferencia puede estar en el rango de 30 mg/kg a 50 mg/kg dos veces por día. En conejos New Zealand White infectados por MRSA, el tratamiento con 40 mg/kg dio por resultado actividad bactericida. Los niveles de concentración inhibitoria mínima y concentración bactericida mínima para rifampicina contra la cepa MRSA fueron de 0,78 µg/ml y 1,56 µg/ml, respectivamente, para dar una proporción de 0,5. La administración oral a humanos de rifampicina está disponible en cápsulas de 150 y 300 mg. Tras una dosis única de 600 en adultos humanos sanos, las concentraciones séricas pico promediaron 7 microgramos/ml pero con amplia variación entre 4 y 32 microgramos/ml. Con la administración de 600 mg por vía intravenosa a humanos adultos sanos durante 30 minutos se obtuvieron concentraciones séricas pico promedio de aproximadamente 17 microgramos/ml. De preferencia, la administración de tigeciclina es por vía intravenosa o intramuscular, mientras que la rifampicina se puede administrar por vía intravenosa, intramuscular, oral o por otras vías de administración conocidas en el arte, tales como sistemas de administración transbucal, intrapulmonar o transdérmica. La administración conjunta puede incluir una combinación de cualquiera de estos métodos. Por ejemplo, se puede administrar tigeciclina por vía intravenosa, mientras que la rifampicina se puede administrar por vía oral. La administración conjunta incluye la administración simultánea o secuencial en cualquier orden y no necesariamente implica la administración simultánea a la misma hora o el mismo día o el mismo esquema de tiempo. De preferencia se mantienen las concentraciones de tigeciclina y rifampicina concurrentemente bien por encima de la concentración inhibitoria mínima. En un estudio de los inventores, un grupo de conejos infectados por S . aureus meticilinorresistentes y tratados con tigeciclina mostró menos unidades formadoras de colonias en hueso y médula ósea que el grupo control infectado y no tratado, o el grupo tratado con vancomicina al final del periodo de tratamiento. La CIM y la CBM para tigeciclina (0,2 Dg/ml) fueron inferiores que para vancomicina (0,39 Dg/ml y 0,78 Dg/ml), lo que mejora la resolución de las infecciones osteomielíticas . La asociación de tigeciclina y rifampicina permitió la erradicación completa de bacterias de la médula ósea, mientras que en el grupo con vancomicina más rifampicina una muestra seguía siendo positiva. Véase Figura 3. El tratamiento fue exitosos con la administración subcutánea de 14 mg/kg de tigeciclina dos veces por día y la administración oral de 40 mg/kg de rifampicina dos veces por día. Estos datos demuestran que la osteomielitis en conejos con infección por S . aureus meticilinorresistente se trata eficazmente con una combinación de tigeciclina y rifampicina. En consecuencia, de acuerdo con las descripciones de la presente, tales como los regímenes de dosificación y de tratamiento (es decir, longitud y modo de administración, y curso temporal de la terapéutica) utilizados en los estudios de uso compasivo antes descritos los típicos regímenes de dosificación y de tratamiento de los antibióticos comunes administrados a pacientes para tratar infecciones con los agentes patógenos enumerados, y los regímenes de dosificación y de tratamiento utilizados en el estudio con conejos, un experto en el arte apreciará el régimen de dosificación y de tratamiento adecuado para administrar a un mamífero a fin de lograr una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina y/o antimicrobianos adicionales tales como rifampicina, para tratar osteomielitis y/o artritis séptica. Un experto en el arte apreciará que factores tales como la extensión de la infección, la salud general, el peso y la edad del paciente tendrán efecto sobre el régimen de dosificación y tratamiento buscado. El término "cantidad farmacológicamente efectiva " significa, de acuerdo con consideraciones conocidas en el arte con la cantidad de agente antimicrobiano efectiva para lograr un efecto farmacológico o una mejoría terapéutica sin efectos secundarios adversos indebidos, incluyendo, sin limitaciones, inhibición del desarrollo bacteriano, reducción de la concentración de bacterias, reducción del tiempo de recuperación de la infección, mejoramiento, eliminación, o reducción de los síntomas de infección u otros patológicos tales como tumefacción, necrosis, fiebre, dolor, debilidad, y/u otros indicadores, como se seleccione como medidas adecuadas para los expertos en el arte. Otra realización de la presente invención provee el uso de tigeciclina con o sin un agente antimicrobiano seleccionado del grupo formado por rifamicina, rifampicina, rifapentina, rifaximina, o estreptovaricina (de preferencia rifampicina) para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de infecciones de hueso, médula ósea, articulaciones y tejidos circundantes, y osteomielitis y/o artritis séptica en un mamífero, de preferencia un humano. Otra realización provee una composición farmacéutica para el tratamiento de infecciones de hueso, médula ósea, articulaciones y tejidos circundantes, y osteomielitis y/o artritis séptica en un mamífero, de preferencia un humano, que comprende tigeciclina, con o sin un agente antimicrobiano seleccionado del grupo formado por rifamicina, rifampicina, rifapentina, rifaximina, o estreptovaricina (de preferencia rifampicina) , y diluyentes, conservadores, solubilizantes, emulsionantes, coadyuvantes y/o portadores farmacéuticamente aceptables y convencionalmente utilizados en formulaciones farmacéuticas y veterinarias. Las presentes formulaciones farmacéuticas se pueden adaptar para la administración a humanos y/o animales. Otra realización de la presente invención provee el uso de tigeciclina con o sin un agente antimicrobiano seleccionado del grupo formado rifamicina, rifampicina, rifapentina, rifaximina, o estreptovaricina (de preferencia rifampicina) para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de infecciones de hueso, médula ósea, articulaciones y tejidos circundantes, y osteomielitis y/o artritis séptica en un mamífero, de preferencia un humano. Se entiende que las diversas realizaciones de la presente invención, tigeciclina y/o rifampicina y otros agentes antimicrobianos pueden estar presentes como las correspondientes sales farmacéuticamente aceptables. Por ejemplo, dichas sales pueden incluir, sin limitaciones, las sales de clorhidrato, sulfato o fosfato. También pueden incluir las sales de acetato, citrato o lactato, por ejemplo. El medicamento o composición farmacéutica se administra en una dosis para obtener una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina y una cantidad farmacológicamente efectiva de un agente antimicrobiana seleccionado del grupo formado por rifamicina, rifampicina, rifapentina, rifaximina, o estreptovaricina (de preferencia rifampicina) . La composición farmacéutica y/o medicamento además comprende diluyentes, conservadores, solubilizantes, emulsionantes, coadyuvantes y/o portadores farmacéuticamente aceptables. Pueden incluir, sin limitaciones, sacarosa, manitol, sorbitol, lecitinas, polivinilpirrolidonas, celulosas microcristalinas, metilcelulosas, carboximetilcelulosas, hidroxietilcelulosas, hidroxipropilcelulosas; almidones, poliacrilatos, etilcelulosas, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa y sus derivados, triacetina, dibutilftalato, dibutilsebacato, esteres de ácido cítrico, polietilenglicoles, polipropilenglicoles, polivinilpirrolidona, lactosa, sacarosa, estearato de magnesio, talco, o aceite de silicona.

Para la administración oral, se pueden utilizar formulaciones farmacológicas tales como, por ejemplo, comprimidos, cápsulas, emulsiones, soluciones, jarabes o suspensiones. Para la administración parenteral, las formulaciones se pueden utilizar como ampollas, o como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos acuosos u oleosos. Es obvio que la necesidad de agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión tendrán en cuenta la solubilidad de los compuestos activos en los vehículos que se utilizan en las realizaciones particulares. Las formulaciones pueden además contener conservadores y antioxidantes fisiológicamente compatibles . Las formulaciones farmacológicas también se pueden utilizar como supositorios con las bases de supositorios convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos. Como alternativa, las formulaciones pueden estar disponibles en forma de depósito, que liberará el compuesto activo lentamente en el organismo, durante un periodo de tiempo preseleccionado. Los siguientes ejemplos se presentan a fin de ilustrar diversas realizaciones de la invención y no pretenden de ninguna manera limitar la presente invención.

EJEMPLOS EJEMPLO 1: Trata iento de osteomielitis en conejos con tigeciclina Este ejemplo muestra el tratamiento de osteomielitis en conejos con tigeciclina y tigeciclina en combinación con rifampicina. También se realizaron estudios comparativos con vancomicina y la combinación de vancomicina con rifampicina. Los datos demuestran mejoramiento de la eficacia antimicrobiana con tigeciclina sobre vancomicina, y con tigeciclina en combinación con rifampicina sobre vancomicina en combinación con rifampicina. Además, tigeciclina en combinación con rifampicina proveyó protección completa contra S . aureus meticilinorresistente dentro del grupo de prueba .

Generación de curvas estándar por bioensayos de difusión Se usaron suero normal de conejo NZW (Fisher Scientific) y hueso de tibia normal no infectado de conejo para generar curvas estándar para tigeciclina (Wyeth-Ayerst Research, Pearl River, Nueva York) , vancomicina (Abbott Laboratories, Chicago, Illinois), y rifampicina (Merrell Pharmacologicals, Inc. Kansas, Missouri) . Se realizaron bioensayos con cada fármaco para generar las curvas estándar para la concentración de antibiótico en suero y/o hueso de la tibia. Para el bioensayo se usó el microorganismo Bacillus cereus ATCC11778. Se prepararon estándares séricos con dos diluciones seriadas al medio con cada antibiótico, a fin de obtener concentraciones de 25 Dg/ml a 0,20 Dg/ml del fármaco en suero de conejo NZW normal. Se prepararon estándares de eluido de hueso para tigeciclina mediante la exhaustiva limpieza de tibias de conejo no infectado con 70% de etanol en una campana estéril. Cada tibia se rompió en trozos pequeños de aproximadamente 0,5 cm2 con un mortero. Los trozos se colocaron en un tubo de centrífuga cónico estéril de 50 ml y se pesaron. Se agregó un mililitro de solución fisiológica estéril 0,9% normal por cada gramo de hueso. Se agitó bien la solución durante dos minutos. El eluido de hueso obtenido se dejó bajo agitación a 180 rpm en una habitación fría a 4°C, durante 12 horas. Las muestras se centrifugaron a 4.000 rpm durante 3 minutos antes del ensayo para sedimentar los trozos. Se midió el diámetro de la zona de inhibición del crecimiento alrededor de cada cavidad, en milímetros. Se generó una curva estándar para la concentración de tigeciclina en los eluidos de suero y de hueso, y para vancomicina en suero, al graficar la concentración conocida de antibiótico en función de la medición de la zona de inhibición obtenida.

Farmacocinética de Tigeciclina A un grupo base de 6 conejos no infectados se administraron por vía subcutánea 14 mg/kg de tigeciclina, reconstituida en agua estéril, cada 12 horas, por un periodo de 8 día. Se obtuvieron muestras de sangre a los siguientes intervalos aproximados, tras el tratamiento inicial con antibiótico: 1 hora, 3 horas, 6 horas, 12 horas, 171 horas y 180 horas (momento del sacrificio) . Se obtuvo medio mililitro de sangre por técnicas estándar. Las muestras se colocaron de inmediato en tubos de centrífuga estériles de 1,5 ml . Tras la eutanasia se limpiaron exhaustivamente ambas tibias con etanol al 70% y se usaron después de retirar todos los tejidos blandos. Las tibias se colocaron en distintos tubos de centrífuga estériles de 50 ml y se almacenaron a -70°C. Las muestras de suero se almacenaron a -70 °C hasta realizar los bioensayos. Las muestras de hueso se prepararon como ya se describió. Se prepararon placas sembradas de agar y se cargaron las muestras por triplicado a las placas sembradas y se incubaron a 30 °C durante 18 horas. Se midió el diámetro de la zona de inhibición de crecimiento alrededor de cada cavidad y se extrapolaron las concentraciones de tigeciclina a partir de la curva estándar.

Determinaciones de concentración inhibitoria mínima y de concentración bactericida mínima Se determinaron las concentraciones inhibitoria mínima (CIM) de tigeciclina, vancomicina y rifampicina mediante el método de dilución de antibiótico a la mitad en tubo. También se determinaron las concentraciones bactericidas mínimas. Los límites de sensibilidad de este método fueron de 25 Dg/ml a 0,20 Dg/ml.

Inducción de osteomielitis tibial Por vía percutánea se indujo una osteomielitis localizada por S . aureus en la metáfisis tibial lateral izquierda de todos los conejos de los seis grupos de estudio. La cepa de S . aureus meticilinorresistente se obtuvo de un paciente sometido a con osteomielitis sometido a tratamiento. Preparación del medio infeccioso : se incubó S . aureus durante la noche en medio Mueller Hinton Broth (Difco Laboratories, Detroit, Michigan) al que se agregó 40 Dg/ml oxacilina, a 37 °C. La concentración bacteriana del cultivo se ajustó a 107 CFU's/ml. Procedimiento de infección del conejo : para el estudio se utilizaron conejos New Zealand blancos (Ray Nicholl ' s Conejory, Lumberton, Texas), de ocho a 12 semanas de edad y con un peso de 2,0 a 3,5 kg. Después de aplicar la anestesia, se insertó una aguja calibre 18 por vía percutánea a través de la cara lateral de la metáfisis tibial izquierda, hasta la cavidad medular. A continuación se inyectaron en secuencia 0,15 ml de morruato de sodio 5% (American Regent Laboratories, Inc., Shirley, New York), 0,1 ml de S. aureus (107 CFU/ml) , y 0,2 ml de solución fisiológica normal 0,9%. Se dejó progresar la infección durante 2 semanas, y entonces se determinó la severidad de la osteomielitis en forma radiológica (Tabla 1) . Grupos de tratamiento : transcurridas las dos semanas de la infección, se separaron los conejos con osteomielitis tibial proximal localizada (confirmada radiológicamente como de grados 2-4) en seis grupos de estudio. Grupo 1 (grupo control): infectado por sin tratamiento durante todo el estudio. Grupo 2: conejos tratados durante 4 semanas con vancomicina subcutánea en 30 mg/kg dos veces por día. Grupo 3: conejos tratados durante 4 semanas con vancomicina subcutánea en 30 mg/kg dos veces por día más rifampicina oral a 40 mg/kg dos veces por día en 0,5% de metilcelulosa. Grupo 4: conejos tratados durante 4 semanas con tigeciclina subcutánea a 14 mg/kg dos veces por día. Grupo 5: conejos tratados durante 4 semanas con tigeciclina subcutánea en la misma dosis que en los conejos del Grupo 4, más rifampicina oral en 40 mg/kg dos veces por día en 0,5% metilcelulosa. Los conejos que recibieron rifampicina oral (Grupos 3 y 5) recibieron un suplemento nutricional oral (Ensure Plus®, Abbott Laboratories, Columbus, Ohio) y una preparación de Lactobacillus spp. (Kvvet Supply, 3190 NRoad, David City, Nebraska) por día. Grupo 6: conejos tratados durante 1 semana con tigeciclina subcutánea en la misma dosis que el Grupo 4, pero se sacrificaron 3 horas tras, la administración de la última dosis. Al mismo tiempo se obtuvieron muestras de sangre y hueso infectado y se determinó la concentración de tigeciclina. Los Grupos 1 a 5 se dejaron sin tratamiento durante 2 semanas después de la fase de tratamiento del experimento y se sacrificaron 8 semanas tras la infección.

Evaluación radiológica Se obtuvieron radiografías de las tibias bilaterales al comienzo de la terapéutica (2 semanas después de la infección) , al final de la antibioticoterapia (6 semanas después de la infección) , y en el momento de ser sacrificados (8 semanas tras infección) . Las radiografías fueron comparadas con escalas visuales (Tabla 1) por tres investigadores, cada uno ciego respecto del grupo de tratamiento grupo, y se promediaron las evaluaciones.

TABLA 1 Criterios para evaluar radiológicamente el grado de severidad de osteomielitis en conejos ^porcentaje visualmente estimado de hueso alterado.

Determinación de niveles séricos de antibiótico Se determinaron niveles pico y valle de antibiótico para los Grupos 2 y 4 a 1 hora (pico) y 12 horas (valle) tras la administración inicial del antibiótico. Véanse Figuras 5A y 5B. Se determinaron las concentraciones de antibiótico mediante un bioensayo. El ensayo de difusión del antibiótico se realizó como se describió antes. Se extrapolaron las concentraciones de antibiótico a partir de las respectivas curvas estándar.

Determinación de la concentración bacteriana por gramo de hueso y médula ósea Tras el sacrificio se realizaron cultivos macroscópicos para las tibias derecha e izquierda. Se determinaron recuentos cuantitativos de S . aureus, en CFU por gramo, de hueso tibial izquierdo y médula ósea para todos los grupos de estudio. Preparación de cultivos : Se hicieron hisopados de médula ósea y del canal intramedular de las tibias bilaterales con hisopos de algodón estériles para el análisis macroscópico de cultivos de las tibias izquierdas, y controles de seguridad de calidad con las tibias derechas. El hisopo inoculado se estrió sobre placas de sangre y se colocaron en 5 ml de TSB estéril. Luego se incubaron las placas y los tubos a 37 °C durante 24 horas y se registró el desarrollo y/o la turbidez. La médula ósea se colocó en un tubo de centrífuga estéril de 50 ml y se pesó. Los fragmentos de hueso se rompieron en trozos de 0,5 cm2, se colocaron en un tubo de centrífuga estéril de 50 ml y se pesó el producto final. Se agregó solución fisiológica normal 0,9%, en una relación 3 a 1 (3 ml solución fisiológica / gramo de hueso o médula ósea) y se agitaron con fuerza las suspensiones durante 2 minutos. Se prepararon seis diluciones al décimo de cada suspensión con solución fisiológica normal 0,9%. Se sembraron en placas muestras de 20 microlitros de cada dilución, incluso la suspensión inicial, por triplicado en placas de agar sangre, y se incubaron a 37 °C durante 24 horas. Se contaron las CFU a la mayor dilución para cada muestra de tibia. Se calculó la concentración de S. aureus en CFUs por gramo de hueso o médula ósea. La resultante calculada se multiplicó por 3 para las muestras de hueso y por 4 para la médula ósea, a fin de compensar las diluciones iniciales en solución fisiológica y la adsorción de la médula ósea en solución fisiológica. Se calculó el log medio de la concentración de S. aureus para cada uno.

Análisis estadístico de datos experimentales Se calcularon la desviación estándar y el error estándar de la media para todos los datos en crudo, incluso las medidas de difusión de disco, variaciones de peso, grados radiológicos, y los recuentos bacterianos. Se realizaron análisis de regresión lineal, por método de cuadrados mínimos para las curvas estándar de difusión de antibiótico mediante el log de base diez de las concentraciones de antibiótico para graficar la concentración (en Dg/ml) versus la zona de inhibición medida (en milímetros) . Se extrapolaron todas las mediciones de difusión posteriores a microgramos / mililitro de concentración de antibiótico a partir de curvas estándar que utilizan la pendiente y los valores de intersección de y derivados de los cálculos de cuadrados mínimos.

Concentraciones inhibitorias mínimas y_ concentraciones bactericidas mínimas Para la cepa de S. aureus meticilinorresistentes (inoculo de 106 CFU/ml) utilizada en el estudio, las concentraciones inhibitorias mínimas y las concentraciones bactericidas mínimas fueron inferiores a 0,2 Dg/ml y 0,2 Dg/ml, respectivamente. Los niveles de concentración inhibitoria mínima y de concentración bactericida mínima para vancomicina fueron 0,39 Dg/ml y 0,78 Dg/ml, respectivamente, para una relación CIM/CBM de 0,5. Los niveles de concentración inhibitoria mínima y de concentración bactericida mínima para rifampicina fueron de 0,78 Dg/ml y 1,56 Dg/ml, respectivamente, para una relación de 0,5.

Niveles de cinética de fármacos en hueso y suero Todas las concentraciones de antibiótico se derivaron de las respectivas curvas estándar. Las tendencias logarítmicas de las concentraciones de tigeciclina (14 mg/kg dos veces por día) en el suero del grupo de animales no infectados se muestran en la Figura 1. La tigeciclina, como se muestra en la Figura 1, se eliminó lentamente, por lo que mantuvo un nivel estable superior a la CIM (0,2 Dg/ml) por 12 horas (valle). Los picos y valles de tigeciclina (14 mg/kg dos veces por día) y vancomicina (30 mg/kg dos veces por día) en el suero de conejos infectados tras la administración de los respectivos fármacos se muestran en las Figuras 5a y 5b. Las concentraciones de tigeciclina en hueso (14 mg/kg, Bid) en el grupo de conejos infectados se midió por separado en la tibia infectada al final del tratamiento, donde promediaban 0,78 Dg/ml +/- 0,01 Dg/ml, y en la tibia no infectada, donde promediaron 0,49 Dg/ml +/- 0,01 Dg/ml. La diferencia fue estadísticamente significativa (p < 0,05).

Hallazgos radiológicos Se indujo una osteomielitis estadio 2 a 4, de acuerdo con la Tabla 1, en todos los animales infectados. Los grados radiológicos iniciales fueron similares entre los grupos. Los grados promedio para los grupos tigeciclina, tigeciclina + rifampicina y vancomicina + rifampicina a t=14 días fueron significativamente superiores a los grados promedio a t=56 días (p<0,05). El grupo control mostró la menor cantidad de mejoramiento radiológico (0,2 +/- 0,2 o 9,1%), comparado con los grupos vancomicina (0,5 +/- 0,2 o 25%), tigeciclina (0,9 +/- 0,1 o 40,9%), vancomicina + rifampicina (0,9 +/- 0,1 o 40,9%) o tigeciclina + rifampicina (0,8 +/- 0,1 o 40,0%).

La Figura 2 muestra la severidad radiológica promedio para cada grupo a t=14-y t=56 días. Al final del estudio (t=56 días), los grados radiológicos promedio se compararon entre los distintos grupos. Los grados promedio para los grupos tigeciclina, tigeciclina + rifampicina y vancomicina + rifampicina a t=56 días fueron significativamente inferiores a los grados promedio para el grupo control a t=56 días (p < 0,05). La clave para la Figura 2 es la siguiente: Control = grupo control, sin tratamiento; Vancomicina = grupo tratado con vancomicina subcutánea; Van + Rifam = grupo tratado con vancomicina subcutánea y rifampicina oral; Gar-936 = grupo tratado con Gar-936 subcutáneo; Gar + Rifam - grupo tratado con Gar-936 subcutáneo y rifampicina oral.

Cultivos de hueso Un elevado porcentaje de tibias de los controles infectado no tratados (n=15) revelaron cultivos positivos (80%) para Staphylococcus aureus meticilinorresistentes a una concentración media de 9,21 x 104 CFU/g hueso. Comparado con los controles no tratados, los grupos vancomicina grupo (n=ll) , tigeciclina y tigeciclina + rifampicina demostraron todos un porcentaje significativamente inferior de infección por Staphylococcus aureus meticilinorresistente. En el grupo vancomicina grupo, 2 de 11 muestras (18,2%) eran positivos para MRSA, y la concentración bacteriana promedio del grupo fue de 1,4 x 102 CFU/ gramo de hueso (p < 0,05) . En el grupo tigeciclina, 1 de 10 muestras fue positiva para Staphylococcus aureus meticilinorresistente y la concentración bacteriana promedio fue de 20 CFU/ gramo hueso, que es inferior a los grupos control o vancomicina (p < 0,05). Un conejo del grupo vancomicina + rifampicina mostró concentración bacteriana mayor que el control. Los conejos del grupo que recibió tratamiento con tigeciclina + rifampicina demostraron erradicación completa de bacterias de la tibia (0,0 CFU/ gramo de hueso en todas las muestras) . La Figura 3 compara el CFU/gramo de médula ósea y hueso entre todos los grupos. La Figura 3 demuestra que tigeciclina y tigeciclina en combinación con rifampicina representan un efectivo tratamiento para la infección de hueso y la infección de médula ósea respecto de los controles. La clave de la Figura 3 es la siguiente: Control = grupo control, sin tratamiento; Vancomicina = grupo tratado con vancomicina subcutánea; Van + Rifam = grupo tratado con vancomicina subcutánea y rifampicina oral; Gar-936 = grupo tratado con Gar-936 subcutáneo; Gar + Rifam = grupo tratado con Gar-936 subcutáneo y rifampicina oral.

Procesos adversos De los 66 conejos infectados un total de 6 murieron antes de completar el tratamiento. De los 5 conejos que murieron en el grupo con tratamiento de tigeciclina, uno fue sacrificado el día 19 debido a severo deterioro del estado nutricional. Otro conejo murió el día 17 de tratamiento con tigeciclina debido a gastroenterocolitis . Tres de los conejos de este grupo murieron el día 28 debido a gastroenterocolitis e intolerancia a la anestesia. Un conejo del grupo tigeciclina + rifampicina murió durante el tratamiento el día 15 debido a gastroenterocolitis. Es muy probable que la gastroenterocolitis se debiera a alteraciones de la flora normal del intestino grueso. Todos los conejos fueron controlados semanalmente para la variación de peso. El grupo control mostró el mayor aumento medio (0,58 kg +/- 0,27), vancomicina el segundo mayor (0,39 kg +/- 0,26), vancomicina + rifampicina el tercero (0,21 kg +/- 0,32). Los grupos tigeciclina (-0,05 kg +/-0,32) y tigeciclina + rifampicina (-0,39 +/- 0,31) perdieron peso después del tratamiento antibiótico. Casi todos los conejos de los grupos tigeciclina y tigeciclina + rifampicina se presentaron con síntomas leves a severos de disfunción gástrica aproximadamente 1,0-1,5 semanas después de la iniciación del antibiótico, con disminución del apetito, deshidratación, diarrea, y/o pérdida de peso. Las Figuras 4A y B muestran las variaciones de peso entre todos los grupos. La clave de las Figuras 4A y B es la siguiente: Control = grupo control, sin tratamiento; Vancomicina = grupo tratado con vancomicina subcutánea; Van + Rifam = grupo tratado con vancomicina subcutánea y rifampicina oral; Gar-936 = grupo tratado con Gar-936 subcutáneo; Gar + Rifampicina = grupo tratado con Gar-936 subcutáneo y rifampicina oral. Por seguridad se observó mayor número de muertes y efectos secundarios en los grupos de conejos tratados con tigeciclina. La enterocolitis debida a tigeciclina puede ser causada por extensa destrucción de la flora microbiana normal del intestino. Los síntomas se atenuaron con la administración de probióticos orales. El amplio espectro antimicrobiano de tigeciclina, en contraste con el espectro más angosto de vancomicina, puede ayudar a explicar la diferencia observada entre los grupos de tratamiento.

Resultados Los datos de recuento para cada animal en cada tejido se enumeran en la Tabla 2. Los recuentos en la tabla son promedios de las mediciones por triplicado en cada tejido. La inspección de los datos de la Tabla 2 revelan que en los grupos tratados con artículos de prueba, los recuentos en la mayoría de los animales o en todos ellos eran 0. En el grupo control, se midieron recuentos distintos de cero en médula ósea de 5 de 15 animales y en hueso de 11 de 15 animales. Hubo considerable variación en la magnitud de los recuentos distintos de cero en los grupos control, especialmente para hueso.

La cantidad de cultivos positivos y negativos en cada grupo de tratamiento, y los valores p obtenidos por comparación con el control fueron los siguientes: TABLA 2 Recuento de unidades formadoras de colonias por gramo de hueso y médula ósea de estudio de osteomielitis en conejos Datos provenientes de la comparación de osteomielitis en conejo con tigeciclina, vancomicina y rifampicina En médula ósea, la proporción de cultivos positivos en los grupos tigeciclina y tigeciclina + rifampicina fue 0, que en comparación con la proporción de 0,33 (5/15) del grupo control fue casi estadísticamente significativa (p=0,06) a nivel convencional p=0,05. Las proporciones de los grupos vancomicina y vancomicina + rifampicina no mostraron diferencias estadísticamente significativas del grupo control. En hueso, la proporción de cultivos positivos en cada grupo tratado con artículos de prueba muestra una disminución estadísticamente significativa de la proporción en el grupo control. En un modelo animal de Staphylococcus aureus meticilinorresistente, con endocarditis, se demostró que 14 mg\kg bid de tigeciclina era más efectivo que 40 mg\kg de vancomicina (Murphy, Antimicrob Agents Chemother 2000; 44(11): 3022-3027). En un modelo de rata se administraron dosis de hasta 80 mg\kg\día.

Sin embargo, en el modelo de conejo utilizado en la presente, la administración de dosis superiores a 14 mg/kg por día causó morbilidad y moralidad relevante en los animales (datos no mostrados) . En consecuencia, las dosis antes citadas se usaron en este estudio. Aun cuando el objetivo no era el estudio de la farmacocinética de tigeciclina en conejos, se realizaron algunas mediciones de niveles de fármacos, a fin de asegurar que se usaba una dosificación adecuada en el modelo animal. Los datos confirmaron que los niveles de fármacos en suero seguían siendo superiores a la CIM de la cepa estafilocócica usada 12 horas tras la última administración. Además, el fármaco mostró una importante penetración en hueso, y se hallaron niveles terapéuticos de tigeciclina en el hueso infectado y no infectado. La mayor concentración de fármaco infectado es otro hallazgo relevante, que requiere mayor estudio.

EJEMPLO 2: Distribución de t geciclina en tejido humano tras una administración intravenosa de 100 mg. Este ejemplo muestra la penetración de tejidos seleccionados en sujetos humanos tras una única aplicación intravenosa de tigeciclina. Los datos demuestran una fase de distribución rápida, con una vida media prolongada y un elevado volumen de distribución en estado estable. Establecen además la penetración de hueso, líquido sinovial, pulmones, vesícula biliar, y colon en sujetos humanos. La penetración mejora el tratamiento de las infecciones de hueso y articulaciones. Los estudios de farmacocinética de tigeciclina intravenosa en humanos han demostrado que hay una fase de distribución rápida, con una vida media prolongada (40 a 60 horas) y un elevado volumen de distribución en estado estable. Los estudios en animales con tigeciclina con marca radiactiva sugieren que esta fase de distribución rápida y elevado volumen de distribución en estado estable representa penetración de tigeciclina en los tejidos, incluso pulmón y hueso. Se administró a ratas Sprague-Dawley (18 machos) tigeciclina con carbono 14 en una dosis de 3 mg/kg por infusión durante 30 minutos. Se determinaron las concentraciones de radiactividad en tejidos de 3 ratas/por punto temporal al final de la infusión y a las 1, 8, 24, 72, y 168 horas tras el final de la infusión. Para todos los tejidos se observó concentración de radiactividad pico al fin de la infusión. En general, se distribuyó bien la radiactividad a la mayoría de los tejidos, con las mayores concentraciones según sigue: hueso>médula ósea >glándula salival, tiroides, bazo, y riñon. En cada uno de estos tejidos la proporción de superficie bajo la curva concentración-tiempo en tejido, respecto de la superficie bajo la curva de concentración-tiempo en plasma fue >10. El objetivo de este estudio fue determinar las correspondientes concentraciones en tejido y suero de tigeciclina en puntos temporales seleccionados en tejidos de pulmón, colon, vesícula biliar, hueso, y líquido sinovial. Las muestras se obtuvieron de sujetos programados para cirugía de pulmón, colon, vesícula biliar, o hueso, o una punción lumbar, a los que se les dio una única dosis de tigeciclina administrada por vía intravenosa. Se realizó un muestreo preespecificado de tejidos/fluidos de pulmón, colon, vesícula biliar, hueso y líquido sinovial en cada sujeto durante la cirugía a 4 horas, 8 horas, 12 horas, o 24 horas después del inicio de una dosis única de 100 mg de tigeciclina administrada durante 30 minutos. Se obtuvo suero de todos los sujetos a la hora 0 (antes de la primera dosis), aproximadamente a los 30 minutos (fin de la infusión) , y al momento correspondiente a las extracciones de tejido / líquido. Se determinó la concentración en tejido y en suero de acuerdo con el método especificado más adelante.

Parámetros de investigación para muestras de suero Las muestras de suero y tejido humano obtenidas de sujetos de estudio que había recibido tigeciclina se analizaron de acuerdo con métodos convalidados previamente. Las muestras de suero y el líquido sinovial (0,2 ml) se mezclaron con 0,6 ml de estándar interno . en acetonitrilo, se evaporó el sobrenadante hasta sequedad. y se reconstituyó el residuo en 200 microlitros de fase móvil. Alícuotas (10 microlitros) de las muestras reconstituidas se inyectaron en un LC/MS/MS . Los datos se adquirieron y analizaron en software PE SCIEX "Analyst" versión 1.3. Se usó regresión lineal, con calibración 1/x2 para obtener el mejor ajuste de los datos a las curvas de calibración. El límite inferior de cuantificación fue de 10 ng/ml para muestras de suero y de líquido sinovial, de 10 ng/g para muestras de colon y de vesícula biliar, y de 30 ng/g para muestras de hueso. Se analizaron muestras de control de calidad (2 juegos) bajas (25 ng/ml), medias (500 ng/ml) y altas (1500 ng/ml), preparadas en suero humano, con cada conjunto de muestras de suero. Para las muestras de control de calidad de colon, vesícula biliar y pulmón se analizaron dos conjuntos de muestras de control de calidad a 25, 500, y 1500 ng/g con cada conjunto de muestras de tejido. Para hueso se analizaron dos conjuntos de muestras de control de calidad a 100, 500, y 1500 ng/g con cada juego de muestras de tejido. Las curvas fueron lineales en el rango de 10 a 2000 ng/ml par suero y líquido sinovial, y desde el límite inferior de cuantificación hasta 2000 ng/g para los tejidos. Se consideró exitosa una corrida si no más de dos muestras de control de calidad estaban fuera del rango del 85-115% del blanco, y no había dos muestras de .control de calidad de la misma concentración fuera de ese rango. Si dos muestras de control de calidad de la misma concentración estaban fuera de ese rango sólo se informaban las concentraciones entre las muestras de control de calidad restantes.

Materiales y Métodos para muestras de suero Se midió tigeciclina en suero humano mediante un método LC/MS/MS. Se preparó la solución madre primaria de tigeciclina a 1 mg/ml por disolución en metanol. Se preparó una solución madre secundaria a partir de la solución madre primaria por dilución a una concentración de aproximadamente 40.000 ng/ml con acetonitrilo. Las soluciones madre se guardaron a -20 °C cuando no se usaban. Se preparó una solución madre estándar interno primaria de ter-butil-d9-tigeciclina a una concentración de 1 mg/ml en metanol. Se preparó una solución madre estándar interno secundaria por dilución de la solución madre primaria a una concentración de 100 microgramos/ml en acetonitrilo por agregado de 0,1% de trifluoroacetato. Las soluciones madre primaria y secundaria se almacenaron a -20 °C. Se preparó el estándar interno de trabajo por dilución en volumen con acetonitrilo /0,1% de trifluoroacetato. El estándar interno de trabajo se almacenó a 4°C cuando no se usaba. El día del análisis se llevó la solución madre secundaria a temperatura ambiente antes de usarla para preparar las soluciones de trabajo para la curva estándar. La curva estándar se preparó a aproximadamente 2.000, 1.600, 1.000, 500, 250, 100, 50, 20, y 10 ng/ml por dilución seriada en suero humano control . El procedimiento de extracción fue el siguiente: a 200 microlitros de calibrador, control de calidad o muestras se agregaron 600 microlitros de solución estándar interno de trabajo y se mezcló por agitación vigorosa. Las muestras se centrifugaron durante 10 minutos a 13.000 rpm para separar las capas, y se transfirió el sobrenadante a un tubo de cultivo. Las muestras se evaporaron hasta sequedad en un Speed Vac. Los residuos se reconstituyeron por sonicación en 200 microlitros de fase móvil y se inyectaron 10 microlitros en el LC/MS/MS. El LC/MS/MS comprendía HPLC (Agilent 1100), espectrómetro de masa (Applied Biosystems API3000) , Columna (Aquasil C18, 50 x 2.1 mm i.s., 5micron (ThermoKeystone) con fase móvil de 16% de acetonitrilo, 6% de metanol, 78% de agua, y 0,1% de tetrefluoroacetato, velocidad de flujo de aproximadamente 0,35 ml/min, volumen de inyección 10 microlitros, Condiciones del detector: 119 búsquedas por periodo, tipo de búsqueda MRM, polaridad positiva, fuente de aerosol de turbo ion, a bajo resolución, con nitrógeno a 6 psi como gas de nebulización, una gas de cortina, y un gas de colisión, con energía iónica a 4.500 v, y temperatura de aerosol iónico a 450 °C. El detector monitoreó tigeciclina y el estándar interno. Las muestras se analizaron en tres corridas analíticas. En cada día de análisis de muestras se corrió un estándar completo junto con muestras de control de calidad y muestras de sujeto de estudio. Las muestras con concentración medida superior al mayor calibrador se diluyeron al mezclar muestras de 100 microlitros con 900 microlitros de suero humano y se analizaron 200 microlitros de la mezcla como ya se describió. Se logró la cuantificación de tigeciclina en suero por comparación con una curva estándar preparada en la matriz adecuada y calculada mediante un factor de calibración (1/concentración) 2. El límite de cuantificación para tigeciclina fue de 10 ng/ml. No se detectaron picos que interfirieran con la determinación de cualquiera de los isómeros de tigeciclina en ninguna de las muestras previas a la dosis. Todas las muestras calibradoras y de control de calidad estaban dentro del rango (85-115% del blanco) . Los resultados de las muestras se presentan en la Tabla 1. Los resultados de las curvas estándar y los calibradoras se presentan en la Tabla 4.

Parámetros de investigación para muestras de tejidos Se preparó solución madre y solución estándar interno como para los parámetros de investigación para las muestras de suero anteriores. Se prepararon las soluciones estándar de trabajo a 10.000, 8.000, 5.000, 2.500, 500, 250, 100 y 50 mg/ml. El día del análisis se agregaron 40 microlitros de las soluciones de trabajo a 200 mg de tejido para obtener calibradores a 2.000, 1.600, 1.000, 500, 250, 100, 50, 20 y 10 ng/ml. Se sustituyó el tejido humano por tejido canino para preparar los calibradores y las muestras de control de calidad. Debido a la limitada disponibilidad de vesículas biliares caninas se usó colon canino para preparar la curva estándar para el análisis de vesícula biliar humana. Se demostró que el colon era una matriz sustituta adecuada para el análisis de muestras de vesícula biliar. El procedimiento de extracción fue el siguiente: a 200 mg de calibrados, control de calidad o muestra se agregaron 3 ml de solución estándar interno de trabajo y muestras y se homogenizaron con un homogenizador manual. Las muestras se centrifugaron durante 10 minutos a 14.000 rpm para separar las capas y se transfirió el sobrenadante a un tubo de centrífuga.

Las muestras se evaporaron hasta sequedad en un Speed Vac. Los residuos se reconstituyeron por sonicación en 200 microlitros de fase móvil y se inyectaron 10 microlitros en el LC/MS/MS. Las condiciones de LC/MS/MS eran las mismas que las utilizadas para analizar muestras de suero. Las muestras de líquido sinovial se extrajeron de la misma manera que las muestras de suero. Se analizaron las muestras mediante varias corridas analíticas. Cada día de análisis de las muestras se corrió una curva estándar completa, junto con muestras de control de calidad y tejido. La curva estándar se preparó en la matriz sustituta adecuada para analizar las muestras de tejido. Las muestras con concentración medida superior al calibrador mayor (200 ng/g) se homogenizaron con estándar interno a 10 o 20 veces la concentración utilizada para la curva estándar. Una alícuota (300 microlitros) (dilución al décimo) se evaporó hasta sequedad y se reconstituyeron las muestras de modo tal que las relaciones de superficie de los picos y las superficies de los picos estaban dentro del rango de la curva estándar. Se logró la cuantificación de tigeciclina en tejidos por comparación con una curva estándar preparada en la matriz adecuada y calculada mediante un factor de calibración (1/concentración) 2. Para líquido sinovial se prepararon los calibradores en solución fisiológica con buffer de fosfato. Un segundo conjunto de calibradores se preparó en un líquido sinovial artificial compuesto por los siguientes componentes: 100 mmol/L de glucosa, 2,03-2,26 g/L de hialuronato y aproximadamente 8 g/L de albúmina ajustada a pH 7,4. Para la curva de calibración preparada en PBS y la recuperación se calculó un factor de corrección mediante la realización de una regresión lineal de determinadas concentraciones de muestras de líquido sinovial artificial a partir de la curva de PBS en función de la concentración teórica de estas muestras con una ecuación potencial (y=y0 +axb) . Dado que la concentración determinada de las muestras de los sujetos de estudio estaba en el rango bajo de la curva de calibración, sólo los calibradores entre 20 y 500 ng/ml se usaron para calcular esta regresión. Los resultados de esta regresión demostraron una fuerte correlación (r2 = 0,9996) y las concentraciones calculadas hacia atrás de los calibradores ASF fueron de entre 94 y 122% de sus valores blanco para todo el rango completo de la curva estándar (20-2000ng/ml) . Luego se aplicó la ecuación de regresión a las concentraciones de muestras de sujeto de estudio a partir de la curva de estándar de PBS y se determinó la concentración corregida de tigeciclina en muestras de líquido sinovial. El límite de la cuantificación de tigeciclina fue de 10 ng/ml. Se hallaron concentraciones medibles de tigeciclina en todas las matrices analizadas. Todos los calibradores y las muestras de control de calidad con concentraciones similares a las muestras estaban dentro del rango (85-115% del blanco) . Los resultados de las muestras se presentan en la Tabla 4 (tejidos) y la Tabla 5 (líquido sinovial) .

Resultados Los datos demuestran una fase de distribución rápida, con una vida media prolongada y un elevado volumen de distribución en estado estable. También establecen la penetración de hueso, líquido sinovial, pulmón, vesícula biliar y colon en sujetos humanos. Además, las concentraciones en líquido sinovial muestran rápida distribución y prolongada retención de tigeciclina, comparado con los datos provenientes de suero en periodos similares . TABLA 3 Resultados del análisis de suero Calculado Calculado Calculado Muestra Concentr. Tiempo Muestra Conceptr. Tiempo Muestra Concentr. Tiempo ID. ín&mll Hora I.D. fnpJmlZ Hora I.D fnDJmli Hora IA BQL' 0 22A BQL 0 40A BQL 0 IB 5450 0..5 22B 1810 0,5 40B 1950 0,5 IC 81.6 24 22C 251 4 40C 80.6 24 2A BQL 0 23A BQL 0 41A BQL 0 2B 1080 0..5 23B 1530 0,5 41 B 2580 0,5 2C 151 4 23C 74.4 24 41C 191 12 4A BQL 0 24A BQL 0 42A BQL 0 4B 1490 0,.5 24B 1650 0,5 42B 789 0,5 4C 175 4 24C 85.6 12 42C 198 8 5A BQL 0 25A BQL 0 43A BQL 0 5B 1100 0,.5 25B 3550 0,5 43B 1150 0,5 5C 116 12 25C 136 4 43 C 77.4 24 6A BQL 0 26A BQL 0 44A BQL 0 6B 1170 0..5 26B 878 0,5 44B 954 0,5 6C 113 12 26C 120 12 44C 144 4 7A BQL 0 27A BQL 0 45A BQL 0 7B 1640 0,.5 27B 847 0,5 45B 894 0,5 7C 97.2 12 27C 78.9 12 45C 299 4 8A BQL 0 28A BQL 0 46A BQL 0 8B 1710 0,.5 28B 922 0,5 46B 1420 0,5 8C 186 4 28C 120 12 46C 66.6 24 9A BQL 0 29A BQL 0 47A BQL 0 9B 1860 0,.5 29B 5190 0,5 47B 447 0,5 9C 221 4 29C 147 4 47 C 252 4 IOA BQL 0 30A BQL 0 48A BQL 0 10B 27400 0..5 30B 1190 0,5 48B 976 0,5 IOC 244 4 30C 50.8 24 48C 86.9 24 HA BQL 0 31A BQL 0 49A BQL 0 11B 1320 0,.5 31B 2320 0,5 49B 1200 0,5 11C 47.2 12 31C 166 4 49C 102 12 12A BQL 0 32A BQL 0 50A BQL 0 12B 6950 0..5 32B 3550 0,5 50B 1430 0,5 12C 54.4 24 32C 42.1 24 SOC 186 8 15A BQL 0 33A BQL 0 51A BQL 0 15B 1960 0,.5 33B 620 0,5 51B 726 0,5 15C 250 4 33C 43.7 24 51C 44.7 24 16A BQL 0 34A BQL 0 52A BQL 0 16B 741 o,.s 34B 4080 0,5 52B 821 0,5 I6C 107 12 34C 92.7 12 52C 125 4 17A BQL 0 35A BQL 0 53A BQL 0 I7B 1110 0..5 35B 2430 0,.5 53B 1060 0,5 17C 51 24 35C 53.6 24 53C 209 4 I8A BQL 0 36A BQL 0 54A BQL 0 18B 761 0,.5 36B 2300 0,.5 54B 1850 0,5 18C 133 8 36C 65.7 24 54C 206 8 19A BQL 0 37A BQL 0 55A BQL 0 19B 1240 0..5 37B 2415 0,.5 55B 628 0,5 19C 162 4 37C 95.7 12 55C 431 4 20A BQL 0 38A BQL 0 20B 903 0,.5 38B 4600 0..5 20C 106 12 38C 106 12 21A BQL 0 39A BQL 0 21B 870 0,.5 39B 5130 0,.5 21C 778 4 39C 342 4 ' BQL = por debaj o del nivel cuantitativo TABLA 4 Resultados del análisis de tejido calculado *BQL = por debaj o de los límites cuantitativos del ensayo (<33 , 2 ng/ml) Muestra Concentración I.D. (n2/2) Tejido 001 8210 Vesícula biliar 002 1560 Vesícula biliar 004 41,6 Hueso 005 20.700 Vesícula biliar 006 46,5 Hueso 007 33.,3 Hueso 008 79,3 Hueso 009 1.890 Pulmón 010 141 Hueso 011 7.640 Vesícula biliar 0 1 2. BQL Hueso 015 8.400 Vesícula biliar 016 824 Vesícula biliar 017 93,3 Hueso 018 3.750 Vesícula biliar 019 18.900 Vesícula biliar 020 269 Hueso 021 86,6 Colon 022 50,0 Hueso 023 1.180 Vesícula biliar 024 BQL Hueso 025 1.50 Vesícula biliar 026 91,2 Colon 027 BQL Hueso 028 598 Colon 029 3.240 Vesícula biliar 030 BQL Hueso 031 5.960 Vesícula biliar 032 938 Vesícula biliar 033 BQL Hueso 034 3.480 Vesícula biliar 035 778 Vesícula biliar 037 3.850 Vesícula biliar 038 BQL Hueso 039 198 Colon 040 1.500 Vesícula biliar 041 106 Colon 042 238 Vesícula biliar 043 995 Colon 044 725 Colon 045 814 Colon 046 BQL Hueso 047 453 Colon 048 BQL Hueso 050 618 Colon 051 653 Pulmón 052 35,5 Hueso 053 BQL Hueso 054 36,1 Hueso 055 118 Colon TABLA 5 Resultados del análisis de liquido sinovxal .^ _.__ _ n-? Muestra Concentración Tiempo I.D. Cn_/mI1 .Horal 4 39,9 4 6 62,8 12 8 159 4 10 130 4 12 46,4 24 20 111 12 22 181 4 24 65,0 12 30 37,8 24 33 25,9 24 38 65,7 12 46 55,4 24 48 45,0 24 52 70,6 4 54 70,9 8 EJ?MPLO 3 : Distribución tisular en ratas tratadas con Tigeciclina Este estudio se llevó adelante para cuantificar la radiactividad derivada de [14C] -tigeciclina en tejidos mediante autorradiografías de cuerpo entero con imágenes de fósforo, después de una única infusión intravenosa de 3 mg/kg durante 30 minutos de [14C] -tigeciclina en ratas Sprague-Dawley y Long-Evans machos .

Materiales y Métodos La tigeciclina fue provista por el Departamento analítico de Wyeth-Ayerst Research, Montreal, Canadá. La [1C] -tigeciclina fue provista por Amersham (Boston, MA) . La pureza radioquímica y la actividad específica de [1C] -tigeciclina en masa fue de 1 98% y 93,6 microCi/mg, respectivamente. Se usó agua estéril para preparar la solución de dosificación intravenosa. El cóctel de centelleo líquido utilizado para contar la radiactividad en plasma y orina fue Ultima Gold (Packard Instruments Co., Meriden, CT) . Se usó un Tri-Carb Sample Oxidizer Modelo 3078 equipado con un Oximate-80 Robotic Automatic Sampler (Canberra-Packard Co., Downers Grove, IL) para la combustión de las muestras de sangre. Se usaron cóctel de centelleo líquido Permafluor E (Packard Instruments Co., Meridan, CT) , Carbo-Sorb-E (Packard Instruments Co . , Meridan CT) para la absorción de dióxido de carbono y agua deionizada para atrapar el dióxido de carbono radiactivo generado por la combustión de la muestra en el oxidador. Las alícuotas de sangre se transfirieron a conos de combustión y parches de cubierta (Canberra-Packard Co., Downers Grove, IL) para la combustión. Todas las determinaciones de radiactividad (dosis, sangre y plasma) se realizaron con un contador de líquido de centelleo Tri-Carb Model 2700 TR (Canberra-Packard Co., Downers Grove, IL) con una curva estándar Ultima Gold o de tolueno. Las cuentas por minuto (CPM) se transformaron en desintegraciones por minuto (DPM) mediante la aplicación de estándares externos de radiactividad conocida. Se determinó el apagado de cada estándar mediante el índice espectral transformado de un estándar radiactivo externo (TSIE) . Los límites inferiores de detección se definieron como fondo doble. Se obtuvieron ratas Sprague-Dawley y Long-Evans machos de Charles River Breeding Laboratories, Raleigh, NC, y dejaron en cuarentena durante al menos una semana antes del inicio del estudio. La solución dosis intravenosa (1,02 mg/ml) se preparó por disolución de 6,90 mg de tigeciclina sin marca y 5,30 mg de [14C] -tigeciclina en 12 ml de agua estéril. La solución de dosificación se diluyó y se hizo el radioensayo directo en cóctel de recuento de centelleo Ultima Gold (Packard Inc.). Todas las determinaciones de radiactividad total se realizaron con un espectrómetro de centelleo líquido Packard 2700 TR (Canberra-Packard Co . ) . Los pesos de las ratas variaban entre 0,206 y 0,301 kg. Todas las raras recibieron una única dosis por infusión intravenosa de 30 minutos de [1C] -tigeciclina a través de una cánula de vena yugular, (3 ml/kg, 3 mg/kg como residuo activo, 40 microCi/kg) con una bomba de infusión Harvard 22 (Harvard Apparatus, Southnatick, MA) . Todas las bombas se calibraron antes de la administración del compuesto. Las ratas se anestesiaron con isoflurano antes de realizar exsanguinación por punción cardiaca en los momentos prescritos tras la dosificación. Las ratas Sprague-Dawley y Long-Evans se sacrificaron una a la vez en los momentos 0,5, 8,5, 24, 72, 168 y 336 hr después de la dosis. Se obtuvieron muestras control de sangre entera de ratas macho Sprague-Dawley en tubos que contenían heparina sódica. Se usó sangre de una muestra común para preparar los estándares de calibración y las muestras de control de calidad. Los estándares se usaron para construir la curva estándar para la cuantificación de la distribución de fármaco con marca radiactiva en tejidos de criosecciones de sangre entera. Se usaron controles de calidad incluidos en el mismo bloque de CMC con cada rata, para evaluar la variación entre e intrasecciones en el espesor de criosecciones de cuerpo entero de rata. Se diluyó en forma seriada una solución madre de 200 microCi/ml de _14C] -glucosa (New England Nuclear, Boston, MA) son sangre entera de ratas macho Sprague-Dawley para obtener catorce estándares con las siguientes concentraciones: 832, 485, 250, 122, 48,6, 24,3, 12,0, 4,72, 2,36, 0,853, 0,638, 0,405, 0,327 y 0,221 nCi equiv. /ml. Las concentraciones de GC bajas, medias y altas fueron de 12,39, 25,9 y 508 nCi equiv. /ml. Inmediatamente después de la eutanasia, se sumergió toda la rata en un baño de hexano y hielo seco (-75 °C) hasta su congelación. Cada carcasa se secó y almacenó a -30 °C hasta su inclusión. Cada animal se incluyó en un molde (15 cm x 45 cm) por el agregado de 10% descarboxi etilcelulosa (CMC) de baja viscosidad y su congelamiento al colocar la placa en una mezcla de hexano-hielo seco. Los bloques congelados se transfirieron al Jung Cryo acrocut 3000 (Leica Instruments GmbH, Nussloch, Germany) y se dejaron equilibrar durante la noche hasta la temperatura interna del criótomo durante al menos 12 horas antes de cortar. Cada rata congelada se sometió a cortes sagitales a -20 °C. Se juntó una cantidad suficiente de cortes para asegurar el muestreo de todos los tejidos de interés. Las secciones se deshidrataron durante la noche en una criocámara y luego se transfirieron rápidamente a un desecador que contenía CaS04 para impedir la condensación de la humedad ambiente mientras se equilibraba a temperatura ambiente. Las secciones se montaron en cartón y se marcaron con [14C] -tinta negra con un número de identificación exclusivo. La tinta radiactiva se preparó con volúmenes iguales de tinta china y [14C] -CL-284846 (100 microCi/ml) . Se colocó un pequeño trozo de cinta adhesiva sobre la tinta radiactiva seca para impedir la contaminación de las pantallas de almacenamiento de fósforo. Las placas de imágenes de fósforoBAS-SR 2025 (Fuji Photo Film Co., Japan) se expusieron a luz visible brillante durante 20 minutos con un borrador IP (Raytest, USA Inc., New Castle, DE) para eliminar la radiación de fondo. Las secciones y los estándares de calibración de sangre se colocaron concurrentemente en contacto directo con Ips y se expusieron durante 7 días. Todas las secciones se guardaron a temperatura ambiente en una caja protectora de plomo para minimizar los niveles de fondo. Se generaron las imágenes de fósforo con un Fujifilm BAS-5000 Bio-Imaging Analyzer y se cuantificaron mediante MCID M2 Software, versión 3.2 (Imaging Research Inc., St. Catherines, Ontario, Canadá) . Los STD y los CC se analizaron mediante la herramienta de muestreo circular del programa de software de MCID. Las zonas de interés en las secciones de cuerpo entero se marcaron manualmente con la herramienta de muestreo regional para generar los datos de recuento. Se determinaron las concentraciones radiactivas en tejidos seleccionados mediante análisis digital de las autorradiografías obtenidas en base a una curva de calibración. Se generó una curva de calibración de las concentraciones establecidas (nCi/g) versus la respuesta de MCID, con luz fotoestimulada /mm2 (PSL/ mm2-menos el fondo convertido a nCi/g) para cada estándar mediante análisis de regresión lineal calibrado (1/x2) . Luego se usó la curva de regresión lineal para determinar la concentración de la radiactividad desconocida de las muestras de estudio. Las regiones de interés (ROÍ) que visualmente exhibieron niveles de radiactividad se marcaron individualmente o se autoescanearon con herramientas de muestreo, a fin de obtener las concentraciones de radiactividad. Para determinar el límite de cuantificación para QWBAR, se determinaron coeficientes de variación respecto de los estándares de sangre estudiados, y se definió el límite de cuantificación como la menor concentración para la cual los coeficientes de variación no excedían el 15% . Las alícuotas de plasma se combinaron con 10 ml de cóctel de recuento de centelleo Ultima Gold™ (Packard Inc.) y se contaron directamente. Las muestras de sangre se sometieron a combustión con un oxidador de muestras Model 307 (Packard Instrument Company). El [14C]02 obtenido se atrapó en Carbo-Sorb®, se agregó cóctel de centelleo (PermaFlour®E+) y se cuantificaron las muestras mediante LSC. Las muestras se contaron en un espectrofotómetro de centelleo líquido Packard 2700 TR (Canberra-Packard Co.) durante 10 minutos o 0,2 sigma. Las cuentas por minuto se convirtieron en desintegraciones por minuto mediante el uso de una curva de apagado generada a partir de estándares externos de radiactividad conocida. Se determinó el apagado de cada estándar y muestra mediante variación espectral total. El límite de cuantificación (LOQ) para LSC se definió como dos veces el fondo. Se calcularon los parámetros farmacocinéticos para la radiactividad derivada de [1C] -GAR-936 mediante la infusión intravenosa en el módulo de análisis sin compartimientos (Model 202) WinNonlin, ver. 1.1, (Scientific Consultants, Inc. Research Triangle Park, NC) , que aplica un enfoque independiente del modelo y procedimientos estándar como se describe en Gibaldi y Perrier. Gibaldi, Farmacocinética, 1982. Para determinar la concentración media se sustituyó el cero por cualquier valor inferior al límite de cuantificación (5.10 ng equiv. /g) . Para la dosificación de la infusión IV, C30 min fue la concentración a los 30 minutos, el primer momento de muestreo. La concentración plasmática máxima (Cmax) y el correspondiente momento de concentración pico tras la administración IV se obtuvieron directamente por inspección numérica a partir de cada dato de concentración-tiempo. La vida media terminal se calculó mediante la relación ln2/?z donde ?z se derivó de la pendiente terminal de la curva de concentración/tiempo. La superficie bajo la curva concentración plasmática versus tiempo entre cero e infinito se calculó mediante la regla del trapezoide, donde Cúitima es la última concentración plasmática medible. Las proporciones entre concentración tisular y plasmática se calcularon de acuerdo con la siguiente ecuación: Cejido/Cp?asma, donde Ctejido equivale a la concentración de fármaco en tejido (ng equiv. /g), y Cp?asma equivale a concentración de fármaco en plasma (ng equiv. /g). La actividad específica de [l4C] -tigeciclina (base) se determinó por ensayo gravimétrico en 43,94 µCi/mg (Tabla 1). La concentración de la solución de dosificación fue de 1,02 mg/ml. Los animales recibieron una dosis promedio de 3,09 ± 0,11/kg comparada con la dosis blanco de 3 mg/kg.

Resultados Las concentraciones individuales (ng equiv. /g) de radiactividad total en tejidos de ratas Sprague-Dawley tras una infusión IV de 3 mg/kg de [1C] -tigeciclina se representan en la Tabla 6. Los parámetros farmacocinéticos en tejidos se presentan en la Tabla 7. Las relaciones entre tejido y plasma se presentan en la Tabla 8. Se obtuvieron concentraciones pico individuales (Cmax) de radiactividad total al final de la infusión para cada todos los tejidos. Los tejidos con las mayores concentraciones de radiactividad fueron riñon (7601 ng equiv. /g), hígado (7300 ng equiv. /g) y bazo (6627 ng equiv. /g) (Tabla 7). Los tejidos con menor concentración pico de radiactividad fueron encéfalo (54 ng equiv. /g) y ojo (108 ng equiv. /g) (Tabla 7) . Cmax fue superior a 2000 ng equiv. /g para la mayoría (70%) de los tejidos. La radiactividad derivada de tigeciclina a Cmax fue menor en plasma que en todos los tejidos, salvo encéfalo, ojos, grasa y testículos (Tabla 7) . A las 24 hs, todos los tejidos tenían concentraciones de radiactividad derivada de [14C] -tigeciclina (Tabla 6) superiores a las de plasma, salvo en ojo. Las concentraciones tisulares individuales de radiactividad a las 168 horas para la mayoría de los tejidos declinó hasta el 1% o menos, respecto de su Cmax, salvo hueso, riñon, hígado, piel, bazo y tiroides (Tabla 6) . Hacia las 336 horas, la mayoría de los tejidos tenían concentraciones inferiores al límite de cuantificación (5,10 ng. equiv. /g) excepto hueso, riñon, piel y tiroides. Sin embargo, las concentraciones en estos tejidos (hueso, tiroides, riñon y piel) se redujeron mucho respecto de Cmax. En general, las concentraciones tisulares de radiactividad derivada de [14C] -tigeciclina en hueso, riñon, piel y tiroides a las 336 horas eran del 19%, 0,18%, 0,43% y 6% de Cmax, respectivamente .

Con AUC como medida de la carga tisular, hueso y tiroides tenían una carga mucho mayor que cualquier otro tejido. Los mayores valores de AUC se hallaron en hueso (794704 ng eq-hr/g) , tiroides (330047 ng eq-hr/g), glándula salival (110979 ng eq-hr/g), riñon (70704 ng eq-hr/g), tiroides (33047 ng eq-hr/g), bazo (70522 ng eq-hr/g) e hígado (53527 ng eq-hr/g). Los tejidos con menor carga eran encéfalo (2865 ng eq-hr/g), grasa (3500 ng eq-hr/g) y testículos (10303 ng eq-hr/g) . La exposición AUC en hueso era dos veces superior a la del siguiente tejido (tiroides) . Los valores de la relación de AUC en tejido:plasma eran superiores a uno en la mayoría de los tejidos (Tabla 7) . La vida media terminal para la radiactividad derivada de [14C] -tigeciclina varía desde un mínimo de 5 horas en grasa hasta más de 200 horas en hueso y tiroides, comparado con un t?/2 plasmático de 24 horas (Tabla 7) . Los tejidos con vida media de eliminación más prolongada fueron tiroides (804 horas) , hueso (217 horas), piel (182 horas) y riñon (118 horas) (Tabla 7). Las relaciones de concentración tejido :plasma (Tabla 8) fueron superiores a uno en la mayoría de los tejidos, con excepción de encéfalo, ojo, testículo y grasa en los puntos temporales 0,5 y 8,5 horas. A las 24 horas, todas las relaciones eran superiores a uno. Las mayores relaciones entre tejido y plasma se observaron para algunos tejidos a 72 horas:hueso (414), tiroides (56), piel (19,3), bazo (16,7) y riñon (11,1). Las relaciones sangre:plasma fueron mayores a uno para todos los puntos temporales, lo cual sugiere que hubo sustancial particionamiento de la radiactividad derivada de [1C]-tigeciclina hacia los eritrocitos. También se evaluó la distribución de la radiactividad derivada de [14C] -tigeciclina hacia los tejidos que contienen melanina (piel y tracto uveal) en ratas Long-Evans hasta 336 horas después de la dosis . Las concentraciones en sangre y plasma de radiactividad derivada de [14C] -tigeciclina en ratas Long-Evans fueron similares a ratas Sprague-Dawley (Tablas 2 y 5) . Las concentraciones de radiactividad pico (Cmax) se observaron al final de la infusión (0,5 horas) para piel, tracto uveal, plasma y sangre (Tabla 9). La Cmax de la radiactividad derivada de [14C]-tigeciclina en piel y tracto uveal fue de 1997 y 2502 ng equiv. /g, respectivamente. La AUC para la radiactividad derivada de [14C] [14C] -tigeciclina en piel y tracto uveal fue de 109.296 y 233.288 ng equiv- hr/g, respectivamente. Las vidas medias terminales para piel y tracto uveal fueron de 473 y 20 horas, respectivamente (Tabla 10) . Los valores de vida media son de incuestionable importancia, dado que no se pudieron identificar con certeza las fases de eliminación en el perfil de concentración-tiempo. Esto también se refleja en la extrapolación de los datos AUC para tracto uveal y piel. Las relaciones de concentración tejido: plasma fueron superiores a uno para piel y tracto uveal en todos los puntos de tiempo (Tabla 7) . Las mayores relaciones globales entre tejido y plasma de observaron a las 72 horas en piel (179) y tracto uveal (393). Las relaciones de AUC tejido:plasma fueron 8,45 y 18,0 para piel y tracto uveal, respectivamente, e indican que estos tejidos retienen selectivamente concentraciones significativas de radiactividad derivada de [1C] -tigeciclina. Los datos sugieren que la radiactividad es selectivamente particionada en la región del ojo de rata que contiene melanina. Las concentraciones tisulares medias de radiactividad a las 336 horas para piel y tracto uveal declinaron a 8 y 1% de Cmax, respectivamente.

Tabla 6 Concentraciones medias de radiactividad total en tejidos después de una única infusión durante 30 Minutos de [1C] -tigecxclina en ratas macho Sprague-Dawley Tabla 7 Parámetros farmacocinéticos de radiactividad total en tejidos tras una única infusión de 30 minutos de [1C] -tigeciclina en ratas macho Sprague-Dawley Tabla 8 Relación tejido :plasma tras una única infusión de 30 minutos de [r14C] -txgecxclxna en ratas macho Sprague-Dawley Tabla 9 Concentración media (ng equiv. /g) de radiactividad total en tejidos después de una única infusión de 30 minutos de [14C] - tigeciclina en ratas macho Long-Evans Tabla 10 Parámetros farmacocinéticos de radiactividad total en tejidos después de una única infusión de 30 minutos de [1C] -tigeciclina en ratas macho Long-Evans Tabla 11 Relación tejido :plasma después de una única infusión de 30 minutos de [1C] -tigecxclxna en ratas macho Long-Evans Análisis La distribución de la radiactividad a los tejidos se evaluó después de una única infusión de 30 minutos (3 mg/kg) de [14C]-tigeciclina en ratas macho Long-Evans y Sprague-Dawley. La radiactividad se distribuyó rápidamente a los tejidos, con Cmax observada al final de la infusión (0,5 hr) para la mayoría de los tejidos. Las concentraciones tisulares fueron similares a un estudio conducido previamente por el método de disección de tejidos. La extensa distribución de tigeciclina en diversos tejidos sugiere un volumen de distribución muy grande. Este hallazgo confirma la observación previa de un elevado volumen de distribución en ratas y perros. En general, la eliminación de la radiactividad de la mayoría de los tejidos fue más lenta que la velocidad en plasma. Las concentraciones de radiactividad derivada de [14C]-tigeciclina en tejidos de ratas Sprague-Dawley fue mayor que en plasma en la mayoría de los puntos de tiempo. Las concentraciones tisulares de radiactividad a las 168 horas para la mayoría de los tejidos declina a 1% o menos, respecto de los valores al final de la infusión. A las 336 horas, las concentraciones en hueso, tiroides, riñon y piel declinaron a 19%, 6,25%, 0,18% y 0,43% de los valores de Cmax, respectivamente. Los tejidos con los mayores valores de exposición en ratas Sprague-Dawley, como se incida con los valores medios de AUC, fueron hueso, tiroides, glándulas salivales, riñon y bazo. Las vidas medias de eliminación fueron bastante largas (5 a 217 horas) , donde las vidas medias de eliminación más prolongadas en hueso, piel y tiroides. El valor de la vida media para el tejido tiroide es cuestionable, dado que las fases de eliminación en el perfil concentración-tiempo no se pudieron identificar con certeza. Esto también se refleja en la extrapolación de los datos AUC a AÜC. Las relaciones entre tejido y sangre o plasma fueron mayores de uno para todos los puntos de tiempo, o que sugiere que hubo sustancial particionamiento de la radiactividad derivada de [1C] -tigeciclina a los tejidos y las células de la sangre. Los resultados de la relación tejido ¡plasma obtenidos en este estudio son similares a los resultados de la relación tejido:plasma de la rara después de una dosis IV de minociclina. Si bien no está limitado por la teoría, las elevadas concentraciones de radiactividad en hueso se pueden deber a la quelación de tigeciclina con calcio. La capacidad de las tetraciclinas (minociclina, clortetraciclinas) para formar complejos de quelación con calcio u otros iones metálicos, y así adherirse al hueso ha sido descrita en la bibliografía. En el estudio actual, la radiactividad derivada de [1C] -tigeciclina era retenida significativamente en hueso, con AUC de 794.704 ng equiv- r/g. Este valor es aproximadamente 75 veces más elevado que en plasma. En hueso también se observó una vida media de eliminación aparente de 217 horas. La retención de radiactividad en hueso puede ser responsable de la recuperación algo incompleta (89,4 ± 2,50%) de [14C] -tigeciclina en un estudio de equilibrio de masa en ratas macho Sprague-Dawley observada tras una dosis intravenosa de 5 mg/kg. La exposición (AUC) en hueso fue 2,5 veces superior que en el siguiente tejido, en valor elevado (tiroides). La radiactividad derivada de [1C] -tigeciclina también mostró una fuerte afinidad y vida media prolongada para los tejidos de hueso y tiroides, similar a otras tetraciclinas conocidas. Las concentraciones de radiactividad derivada de [14C]-tigeciclina se detectaron hasta 336 horas en el riñon y fueron más elevadas que las de otros tejidos, excepto hueso y tiroides. No obstante, en el estudio de equilibrio de masa, además del estudio de excreción biliar y urinaria, la mayor parte de la radiactividad derivada de [14C] -tigeciclina se excretó durante las primeras 48 horas, lo cual sugiere que parte de la radiactividad derivada de [1C] -tigeciclina puede ser fijadora, con gran afinidad por el tejido renal. La fijación al tejido renal también es conocida en las tetraciclinas. Como se determinó mediante QWBAR, la radiactividad presente en tejidos oculares de rata sólo se particionó selectivamente en los tejidos que contienen melanina del tracto uveal, además de la piel de ratas Long-Evans. El tracto uveal tenía concentraciones relativamente elevadas de radiactividad en todos los puntos temporales después de 0,5 horas, lo cual sugiere un significativo nivel de exposición y una vida media prolongada. En un estudio realizado con anterioridad mediante el método de disección de tejidos, la evaluación del globo ocular intacto reveló la presencia de radiactividad en este órgano; sin embargo, no fue posible asociar la ubicación de esta radiactividad en ningún tejido ocular específico. Las concentraciones de los 14 estándares y 28 QCS determinados por recuento convencional de centelleo líquido (LSC) fueron similares a las evaluaciones QWBAR para estos mismos estándares. La exposición de estos estándares a 14 pantallas de almacenamiento de fósforo diferentes dio por resultado una respuesta MCID confiable que se correlacionaba con las actividades específicas determinadas por LSC, lo cual sugiere que la variabilidad entre días e intra días era muy baja. La CV y la exactitud del método QWBAR estaban dentro de límites aceptables (< 20%) . La reproducibilidad de la respuesta MCID y la buena correlación de las actividades específicas entre LSC convencional y QWBAR demostraron que los estándares RBC tenía concentraciones uniformes de radiactividad. Se consideró que la variabilidad observada en este estudio se relacionaba con diversos aspectos de los cortes congelados, la técnica QWBAR y el análisis por imágenes. Se demostró que QWBAR era reproducible, con una sensibilidad de 0,221 nCi/g (límite inferior de cuantificación). El rango dinámico era lineal a través de cuatro órdenes de magnitud entre 0,221 y 832 nCi/g. En conclusión, las concentraciones tisulares de radiactividad derivada de [14C] -tigeciclina eran superiores para la mayoría de los tejidos que para las concentraciones plasmáticas. En general, la eliminación de la radiactividad proveniente de la mayoría de los tejidos era más lenta que la tasa proveniente del plasma. La AUC era más elevada para la mayoría de los tejidos que para el plasma, lo cual sugiere que la mayoría de los tejidos eliminaba lentamente la radiactividad derivada de [14C] -tigeciclina.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un método para el tratamiento de una infección en hueso o médula ósea en un mamífero, que comprende la administración al mamífero de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1 que, además, comprende la administración de un agente antimicrobiano seleccionado del grupo formado por rifamicina, rifampicina, rifapentina, rifaximina o estreptovaricina.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 2, donde el agente antimicrobiano es rifampicina.

4. El método de acuerdo con la reivindicación 1, 2 o 3, donde la infección comprende un agente patógeno seleccionado del grupo formado por bacterias gramnegativas, bacterias grampositivas, bacterias anaerobias y bacterias aerobias.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 4, donde el agente patógeno se selecciona del grupo formado por Staphylococcus , Acinetobacter, Mycobacterium, Haemophilus, Salmonella , Streptococcus, Enterobacter ?acea , Enterococcus , Escherichia , Pseudomonas, Neisseria , Rickettsia, Pneumococci, Prevotella , Peptostreptococci, Bacteroides Legionella, estreptococos beta-hemolíticos, estreptococos grupo B y espiroquetas .

6. El método de acuerdo con la reivindicación 5, donde la infección comprende Neisseria, Mycobacterium, Staphylococcus y Haemophilus .

1 . El método de acuerdo con la reivindicación 6, donde la infección comprende Neisseria meningitidis, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, o Haemophilus influenzae .

8. El método de acuerdo con la reivindicación 4, donde le agente patógeno exhibe resistencia a antibióticos.

9. El método de acuerdo con la reivindicación 8, donde la resistencia a antibióticos se selecciona del grupo formado por resistencia a meticilina, resistencia a glucopéptidos, resistencia a tetraciclinas, resistencia a oxitetraciclina, resistencia a doxiciclina; resistencia a clortetraciclina, resistencia a minociclina, resistencia a glicilciclina, resistencia a cefalosporinas, resistencia a ciprofloxacina, resistencia a nitrofurantoína, resistencia a trimetoprima-sulfas, resistencia a piperacilila/tazobactam, resistencia a moxifloxacina, resistencia a vancomicina, resistencia a teicoplanina, resistencia a penicilina y resistencia a macrólidos .

10. El método de acuerdo con la reivindicación 9, donde la resistencia a glucopéptido resistencia a vancomicina.

11. El método de acuerdo con la reivindicación 5, donde el agente patógeno se selecciona del grupo formado por Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis , Streptococcus pneumoniae, o Streptococcus pyogenes .

12. El método de acuerdo con la reivindicación 11, donde la infección comprende Staphylococcus aureus .

13. El método de acuerdo con la reivindicación 12, donde el Staphylococcus aureus exhibe resistencia a antibióticos seleccionada del grupo formado por resistencia a glucopéptido, resistencia a tetraciclina, resistencia a minociclina, resistencia a meticilina, resistencia a vancomicina y resistencia a un antibiótico de glicilciclina distinto de tigeciclina.

14. El método de acuerdo con la reivindicación 5, donde la infección comprende Acinetobacter baumannii .

15. El método de acuerdo con la reivindicación 14, donde Acinetobacter baumanii exhibe resistencia a antibiótico seleccionada del grupo formado por resistencia a cefalosporina, resistencia a ciprofloxacina, resistencia a nitrofurantoína, resistencia a trimetoprima-sulfas, y resistencia a piperacilina/tazobactam.

16. El método de acuerdo con la reivindicación 5, donde la infección comprende Mycobacterium abscessus .

17. El método de acuerdo con la reivindicación 16, donde el Mycobacterium abscessus exhibe resistencia a moxifloxacina.

18. El método de acuerdo con la reivindicación 5, donde la infección comprende Haemophilus influenzae .

19. El método de acuerdo con la reivindicación 5, donde la infección comprende Enterococcus faecium.

20. El método de acuerdo con la reivindicación 5, donde la infección comprende Escherichia coli .

21. El método de acuerdo con la reivindicación 5, donde la infección comprende Neísseria gonorrhoeae .

22. El método de acuerdo con la reivindicación 5, donde la infección comprende Rickettsia prowazekii, Rickettsia typhi o Rickettsia rickettsii .

23. El método de acuerdo con la reivindicación 4, donde la infección causa osteomielitis.

24. Un método para el tratamiento de una infección articular o una infección de los tejidos circundantes de la articulación en un mamífero, que comprende la administración al mamífero de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina.

25. El método de acuerdo con la reivindicación 1 que, además, comprende la administración de un agente antimicrobiano seleccionado del grupo formado por rifamicina, rifampicina, rifapentina, rifaximina o estreptovaricina.

26. El método de acuerdo con la reivindicación 25, donde al agente antimicrobiano es rifampicina.

27. El método de acuerdo con la reivindicación 24, 25 o 26, donde la infección comprende un agente patógeno se selecciona del grupo formado por baterías gramnegativas, bacterias grampositivas, bacterias anaerobias y bacterias aerobios.

28. El método de acuerdo con la reivindicación 27, donde el agente patógeno se selecciona del grupo formado por Staphylococcus , Acinetobacter , Mycobacterium, Haemophilus, Salmonella , Streptococcus , Enterobacter iaceae , Enterococcus , Escherichia, Pseudomonas, Neisseria , Rickettsia, Pneumococci , Prevotella , Peptostreptococci, Bacteroides Legionella, estreptococo beta-hemolítico, estreptococos grupo B y espiroquetas .

29. El método de acuerdo con la reivindicación 28, donde la infección comprende Neisseria, Mycobacterium, Staphylococcus, y Haemophilus .

30. El método de acuerdo con la reivindicación 29, donde la infección comprende Neisseria meningitidis, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis o Haemophilus influenzae.

31. El método de acuerdo con la reivindicación 27, donde el agente patógeno exhibe resistencia a antibióticos.

32. El método de acuerdo con la reivindicación 31, donde la resistencia a antibióticos se selecciona del grupo formado por resistencia a meticilina, resistencia a glucopéptido, resistencia a tetraciclina, resistencia a oxitetraciclina, resistencia a doxiciclina; resistencia a clortetraciclina, resistencia a minociclina, resistencia a glicilciclina, resistencia a cefalosporina, resistencia a ciprofloxacina, resistencia a nitrofurantoína, resistencia a trimetoprima-sulfas, resistencia a piperacilina/tazobactam, resistencia a moxifloxacina, resistencia a vancomicina, resistencia a teicoplanina, resistencia a penicilina y resistencia a macrólidos.

33. El método de acuerdo con la reivindicación 32, donde la resistencia a glucopéptido es resistencia a vancomicina.

34. El método de acuerdo con la reivindicación 28, donde el agente patógeno se selecciona del grupo formado por Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pneumoniae, o Streptococcus pyogenes .

35. El método de acuerdo con la reivindicación 34, donde la infección comprende Staphylococcus aureus .

36. El método de acuerdo con la reivindicación 35, donde el Staphylococcus aureus exhibe resistencia a antibiótico seleccionada del grupo formado por resistencia a glucopéptido, resistencia a tetraciclina, resistencia a minociclina, resistencia a meticilina, resistencia a vancomicina y resistencia a un antibiótico glicilciclina distinto de tigeciclina.

37. El método de acuerdo con la reivindicación 28, donde la infección comprende Acinetobacter baumannii .

38. El método de acuerdo con la reivindicación 37, donde Acinetobacter baumanii exhibe resistencia a un antibiótico seleccionado del grupo formado por resistencia a cefalosporina, resistencia a ciprofloxacina, resistencia a nitrofurantoína, resistencia a trimetoprima-sulfas, y resistencia a piperacilina/tazobactam.

39. El método de acuerdo con la reivindicación 28, donde la infección comprende Mycobacterium abscessus .

40. El método de acuerdo con la reivindicación 39, donde Mycobacterium abscessus exhibe resistencia a moxifloxacina.

41. El método de acuerdo con la reivindicación 28, donde la infección comprende un agente patógeno seleccionado del grupo formado por Haemophilus influenzae, Enterococcus faecium, Escherichia coli, Neisseria gonorrhoeae, Rickettsia prowazekii, Rickettsia typhi o Rickettsia rickettsii .

42. El método de acuerdo con la reivindicación 27, donde la infección articular o la infección de los tejidos circundantes a la articulación causan artritis séptica.

43. El uso de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina para el tratamiento de infecciones en hueso, médula ósea o articulaciones en un mamífero.

44. El uso de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina y un agente antimicrobiano seleccionado del grupo formado por rifamicina, rifampicina, rifapentina, rifaximina, o estreptovaricina para el tratamiento de infecciones de hueso, médula ósea o articulares en un mamífero.

45. El uso de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de infecciones de hueso, médula ósea o articulares en un mamífero.

46. El uso de una cantidad farmacológicamente efectiva de tigeciclina y un agente antimicrobiano seleccionado del grupo formado por rifamicina, rifampicina, rifapentina, rifaximina, o estreptovaricina para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de infecciones de hueso, médula ósea o articulaciones en un mamífero.

47. El uso de las reivindicaciones 43 - 45, donde la infección de hueso o médula ósea causa osteomielitis.

48. El uso de las reivindicaciones 43 - 45, donde la infección articular o la infección de los tejidos circundantes de la articulación causa artritis séptica.