DERIVADOS DE BE ZOXA.ZOL Y SU USO COMO LIGA DOS DE RECEPTOR DE ADE OSINA
CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se relaciona con compuestos de la fórmula general :
en donde: R es fenilo, no sustituido o sustituido por halógeno o -CH2N(CH3) (CH2)nOCH3, o es bencilo, alquilo inferior, alcoxi inferior , -(CH2)nOC¾, o es piridin-3-? 4-ilo, no sustituido o sustituido por alquilo inferior, halógeno, morfolinilo, - (CH2) n-halógeno, - (CH2)nOCH3, - (CH2)n-morfolin-4-ilo, o - (CH2)n-pirrolidin-l-ilo; R1 es fenilo, no sustituido o sustituido por halógeno, tetrahidropiran-4-ilo, 3 , 6-dihidro-2H-piran-4-ilo o morfolin-4-ilo ; n es, independientemente cada uno de otro, 1 ó 2; y sales ácidas de adición farmacéuticamente REF: 165240 aceptable de los mismos . ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Sorprendentemente se ha encontrado que los compuestos de fórmula general I son ligandos de receptor de adenosina. Específicamente, los compuestos de la presente invención tienen una buena afinidad para el receptor A2¾ Y una selectividad elevada por los receptores Ai- A3. La adenosina modula una amplia gama de funciones fisiológicas al interactuar con receptores específicos en la superficie celular. El potencial de los receptores de adenosina como medicamentos objetivo fue revisada por primera vez en 1982. La adenosina se relaciona estructural y metabólicamente con los nucleótidos bioactivos trifosfato de adenosina (ATP, por sus siglas en inglés) , difosfato de adenosina (ADP, por sus siglas en inglés) , monofosfato de adenosina (AMP, por sus siglas en inglés) y monofosfato de adenosina cíclico (AMPc, por sus siglas en inglés) con el agente metilante S-adenosil-L-metionina (SAM, por sus siglas en inglés) ; y estructuralmente con las coenzimas NAD, FAD y coenzima A, así como con el ARN. Juntos, la adenosina y estos compuestos relacionados son importantes en la regulación de muchos aspectos del metabolismo celular y en la modulación de diferentes actividades del sistema nervioso central. Los receptores para adenosina se han clasificado como receptores Ai, A2 A2b y A3, que pertenecen a la familia de receptores acoplados a proteína G. La activación de los receptores de adenosina por la adenosxna inicia los mecanismos de transducción de señal . Estos mecanismos dependen del receptor asociado a proteína G. Cada uno de los subtipos de receptor de adenosina ha sido caracterizado clásicamente por el sistema efector adenilato ciclasa el cual utiliza AMPc como un segundo mensajero. Los receptores Ai y A3, acoplados con proteínas G± inhiben a adenilato ciclasa, lo que genera una disminución en las concentraciones celulares de AMPc, mientras que los receptores A2A y A2B se acoplan a proteínas Gs y activan a adenilato ciclasa, lo que lleva a un incremento en las concentraciones de AMPc celular. Se sabe que el sistema receptor Ai incluye la activación de fosfolipasa C y la modulación de los canales de iones tanto de potasio como de calcio. El subtipo A3, además de su asociación con adenilato ciclasa, también estimula a fosfolipasa C e igualmente activa los canales de ión de calcio. El receptor Ai (326-328 aminoácidos) ha sido clonado de diversas especies (canino, humano, rata, perro, pollo, bovino, cobayo) con 90-95% de identidad de secuencia entre las especies de mamífero. El receptor A2A (409-412 aminoácidos) se ha clonado de perro, rata, humano, cobayo y ratón. El receptor A2B (332 aminoácidos) se ha clonado de humano y ratón con 45% de homología con A2B humano y con los receptores humanos Ai y A2A. El receptor A3 (317-320 aminoácidos) se ha clonado de humano, rata, perro, cone o y borrego. Los subtipos de receptor Ai y A2A se han propuesto que juegan papeles complementarios en la regulación de adenosina del suministro de energía. La adenosina, la cual es un producto metabólico de ATP, difunde de la célula y actúa localmente para activar los receptores de adenosina para disminuir la demanda de oxígeno (Ai) o incrementar el suministro de oxígeno (A2A) y de esta manera restablecen el equilibrio de suministro: demanda de energía dentro del tejido. Las acciones de ambos subtipos son para incrementar la cantidad de oxígeno disponible en el tejido y para proteger a las células impidiendo daños causados por un desequilibrio de oxígeno a corto plazo. Una de las funciones importantes de la adenosina endógena es que evitan daño durante traumatismos tales como hipoxia, isquemia, hipotensión y actividad de ataques . Además, se sabe que la unión del agonista receptor de adenosina a astocitos que se expresen al receptor A3 de rata resulta en concentraciones aumentadas de trifosfato de inositol y calcio intracelular, lo cual potencia la secreción inducida por antígeno de mediadores inflamatorios . Por lo tanto, el receptor A3 juega un papel en mediar los ataques asmáticos y otras respuestas alérgicas . La adenosina es un neuromodulador, capaz de modular muchos aspectos de la función cerebral fisiológica. La adenosina endógena, un enlace central entre el metabolismo de energía y la actividad neuronal, varía de acuerdo con el estado de comportamiento y las condiciones fisicopatológicas . Bajo condiciones de demanda aumentada y de disponibilidad disminuida de energía (tales como hipoxia, hipoglucemia o actividad neurona! excesiva) , la adenosina proporciona un mecanismo poderoso de retroalimentación protectora. La interacción con los receptores de adenosina representa un objetivo promisorio para intervención terapéutica en muchas enfermedades neurológicas y psiquiátricas tales como epilepsia, trastornos en el sueño y en los movimientos (enfermedad de Parkinson o Corea de Huntington) , enfermedad de Alzheimer, depresión, esquizofrenia o adicción. Un incremento en la liberación de neurotransmisor después de traumatismo tales como hipoxia, isquemia y apoplejías. Estos neurotransmisores finalmente son los responsables de la degeneración neural y la muerte neural, lo cual provoca daño al cerebro o muerte del individuo. Los agonistas de adenosina Ai los cuales imitan los efectos inhibidores centrales de la adenosina por lo tanto pueden ser útiles como agentes neuroprotectores . Se ha propuesto la adenosina como un agente anticonvulsivo endógeno, que inhibe la liberación de glutamato de las neuronas excitadoras y que inhibe la activación neuronal. Por lo tanto, los agonistas de adenosina se han utilizado como agentes antiepilépticos. Los antagonistas de adenosina estimulan la actividad del SNC y han demostrado ser eficaces como mejoradores del conocimiento. Los antagonistas selectivos A2 tienen potencial terapéutico en el tratamiento de diversas formas de demencia, por ejemplo enfermedad de Alzheimer o en desórdenes neurodegenerativos, por ejemplo apoplejía. El antagonista del receptor A2A de adenosina modula la actividad de neuronas GABAergicas de la parte del estriato y regula los movimientos uniformes y bien coordinados, y de esta manera proporciona un tratamiento potencial para los síntomas del Parkinsonismo. La adenosina también está implicada en muchos procesos fisiológicos involucrados en sedación, hipnosis, esquizofrenia, ansiedad, dolor, respiración, depresión y adicción a drogas (anfetamina, cocaína, opioides, etanol, nicotina, canabinoides ) . Los medicamentos que actúan como receptores de adenosina, por lo tanto, tienen potencial terapéutico como sedantes, relajantes musculares, antipsicóticos , ansiolíticos , analgésicos, estimulantes respiratorios, antidepresivos y para tratar el abuso de drogas . También se les puede utilizar en el tratamiento de ADHD (desorden de hiperactividad y deficiencia de atención) . Un papel importante de la adenosina en el sistema cardiovascular es como un agente cardioprotector . Las concentraciones de adenosina endógena se incrementan en respuesta a isquemia e hipoxia y protegen al te ido cardíaco durante y después del traumatismo (preacondic onamiento) . Al actuar en el receptor Ai, los agonistas de adenosina ?? pueden proteger contra el daño causado por isquemia y reperfusión al miocardio. La influencia de modulación de los receptores A2A en la función adrenérgica puede tener implicaciones para una variedad de desórdenes tales como enfermedad de la arteria coronaria e insuficiencia cardíaca. Los antagonistas A2¾ pueden ser de beneficio terapéutico en situaciones en las cuales es deseable una respuesta antiad enérgica mejorada, por ejemplo durante isquemia aguda al miocardio. Los antagonistas selectivos en los receptores A2A también pueden mejorar la eficacia de la adenosina en terminar arritmias supraventriculares . La adenosina modula muchos aspectos de la función renal, que incluyen la liberación de renina, la velocidad de filtración glomerular y el flujo sanguíneo renal. Los compuestos los cuales antagonizan con la función renal que afecta la adenosina tienen potencial como agentes protectores renales. Además, los antagonistas de adenosina A3 o A2B, O ambos, pueden ser útiles en el tratamiento de asma y otras respuestas alérgicas o en el tratamiento de diabetes mellitus y obesidad. Muchos documentos describen el conocimiento actual sobre los receptores de adenosina, por ejemplo, las siguientes publicaciones:
Bioorganic & Medicinal Cheirdstry, 6, (1998), 619-641, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 6, (1998), 707-719, J. Med. Chem., (1998), 41, 2835-2845, J. Med. Chem., (1998), 41, 3186-3201, J. Med. Chem., (1998), 41, 2126-2133, J. Med. Chem., (1999), 42, 706-721, J. Med. Chem., (1996), 39, 1164-1171, Arch. Pharm. Med. Chem., 332, 39-41, (1999), Am. J. Physiol., 276, H1113-1116, (1999) o Naunyn Sahmied, Arch. Pharmacol . 362, 375-381, (2000) ¦ DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los objetivos de la presente invención son los compuestos de fórmula I, por sí mismos, el uso de compuestos de fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables para la elaboración de medicamentos para el tratamiento de enfermedades relacionadas con el receptor A2 de adenosina, su elaboración, medicamentos basados en un compuesto de acuerdo con la invención y su producción así como el uso de compuestos de fórmula I en el control o prevención de enfermedades en base en la modulación del sistema de adenosina, tal como la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, Corea de Huntington, neuroprotección, esquizofrenia, ansiedad, dolor, deficiencia en la respiración, depresión, adicción a drogas tales como anfetamina, cocaína, opioides, etanol, nicotina, canabinoides o contra el asma, respuestas alérgicas, hipoxia, isquemia, apoplejía y abuso de sustancias. Además, los compuestos de la presente invención pueden ser útiles como sedantes, relajantes musculares, antipsicóticos, antiepilépticos, anticonvulsivos y agentes cardioprotectores para desórdenes tales como enfermedad de la arteria coronaria e insuficiencia cardíaca. Las indicaciones más preferidas de acuerdo con la presente invención son aquellas, las cuales se basan en la actividad antagonista del receptor A2A y las cuales incluyen desórdenes del sistema nervioso central, por ejemplo el tratamiento o prevención de la enfermedad de Alzheimer, ciertos desórdenes depresivos, adicción a drogas, neuroprotección y enfermedad de Parkinson así como ADHD. Como se utiliza en la presente, el término "alquilo inferior" indica un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada saturado que contiene 1 a 6 átomos de carbono, por ejemplo metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, is-butilo, 2-butilo, terbutilo y similares. Los grupos alquilo inferiores preferidos son grupos con 1 a 4 átomos de carbono. El término "halógeno" indica cloro, yodo, flúor o bromo . El término "alcoxi inferior" indica un grupo en donde los residuos alquilo son como se definen en lo anterior y el cual está unido vía un átomo de oxígeno. El término "sales ácidas de adición farmacéuticamente aceptable" abarca sales con ácidos inorgánicos u orgánicos tales como los ácidos: clorhídrico, nítrico, sulfúrico, fosfórico, cítrico, fórmico, fumárico, maleico, acético, succínico, tartárico, metansulfónico, p-toluensulfónico y similares . Los compuestos preferidos de la presente solicitud son compuestos de fórmula I, en donde R1 es 4-fluorofenilo . Tales compuestos son: 2-clorometil-N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -isonicotinamida, N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -2-metilisonicotinamida, N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -6-metilnicotinamida, 4-fluoro-N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -benzamida, N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -2-morfolin-4-il-isonicotinamida o N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -2-metoximetilisonicotinamida. Se prefieren adicionalmente los compuestos de fórmula I en donde R1 es fenilo no sustituido, por ejemplo los siguientes compuestos : 4-fluoro-N- [4-metoxi-7-fenilbenzoxazol-2-il) -benzamida o
4-{ [ (2-metoxietil) -emtilamino]-metil}-N- (4-metoxi-7-fenilbenzoxazol-2-il) -benzamida .
Se prefieren adicionalmente los compuestos, en donde tetrahidropiran-4-ilo, por ejemplo los siguientes compuestos : N- [4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -6-metilnicotinamida o N- [4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] - 2-metilisonicotinamida. Los presentes compuestos de fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden preparar por métodos conocidos en la técnica, por ejemplo por procedimientos descritos en lo siguiente, procedimientos los cuales comprenden: a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula:
con un compuesto de fórmula R^-SnBua / cat.Pd(O) con un compuesto de fórmula R1B(OH)2 / cat.Pd(O) (10) compuesto de fórmula
I (8) en donde R1 es fenilo, no sustituido o sustituido por halógeno , o b) hacer reaccionar un compuesto de fórmula:
con un compuesto de fórmula C1C(0)R / base (11) o con un compuesto de fórmula HOC(0)R / HATU /base (12: a un compuesto de fórmula
en donde R1 es fenilo no sustituido o sustituido por halógeno, o c) hidrogenar un compuesto de fórmula
con H2/Pd/C compuesto de fórmula
hacer reaccionar un compuesto de fórmula
con NaOH y después con un compuesto de fórmula
C1C(0)R / base (11) o con un compuesto de fórmula HOC(0)R / HATU /base (12) a un compuesto de fórmula
e) hacer reaccionar un compuesto de fórmula Con NaOH y después con un compuesto de fórmula
C1C(0)R / base (11) o con un compuesto de fórmula HOC(0)R / HATU /base (12) a un compuesto de fórmula
f) hacer reaccionar un compuesto de fórmula
con un compuesto de fórmula C1C(0)R / base (11) o con un compuesto de fórmula HOC(0)R / HATU /base (12) a un compuesto de fórmula
g) modificar uno o más sustituyentes R1 o R dentro de las definiciones proporcionadas en lo anterior, y si se desea, convertir los compuestos obtenidos en sales ácidas de adición farmacéuticamente aceptables . Los compuestos de fórmula I se pueden preparar de acuerdo con los siguientes esquemas: Preparación de compuestos de fórmula I en donde R1 es fenilo fenilo sustituido con halógeno Un método de preparación de compuestos de fórmula I, en donde R1 es fenilo o fenilo sustituido con halógeno, es a partir de un intermediario de fórmula (5) , como se muestra en el esquema de reacción II siguiente. La preparación del intermediario de fórmula (5) se muestra en el esquema de reacción I siguiente.
en donde R es fenilo o fenilo sustituido con halógeno y R' es como se define en lo anterior. Preparación del intermediario de fórmula (2) El 2-nitrorresorcinol inicial de fórmula (1) se puede obtener comercialmente, por ejemplo de Aldrich, o se puede preparar de acuerdo con los métodos bien conocidos en la técnica. El 2-nitrorresorcinol de fórmula (1) se hidrogena en presencia de un catalizador de hidrogenación, preferiblemente 10% de paladio en carbón. Esta reacción se puede llevar a cabo en una variedad de solventes orgánicos, tales como metanol, etanol, dioxano o tetrahidrofurano, preferiblemente metanol, a temperatura ambiente y a una presión de una atmósfera o superior, preferiblemente a una atmósfera, durante 2-24 horas, de manera preferible aproximadamente 18 horas. El producto de la fórmula (2), 2-aminorresorcinol, preferiblemente se utiliza en la siguiente etapa sin purificación. Preparación del intermediario de la fórmula (3) El intermediario de la fórmula (2) se hace reaccionar con un ligero exceso de bromuro de cianógeno en una mezcla de solvente acuoso, preferiblemente una mezcla de un alcohol inferior y agua, preferiblemente una mezcla de metanol y agua. La reacción preferiblemente se lleva a cabo a temperatura ambiente durante aproximadamente 2 horas . El producto compuesto benzoxazol de fórmula (3) se aisla por medios convencionales y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalización. Preparación del intermediario de fórmula (4) Un método de preparación de un intermediario de fórmula (4) es por tratamiento del intermediario de fórmula (3) con un ligero exceso de una base fuerte, preferiblemente hidruro de sodio, en un solvente no prótico, preferiblemente tetrahidrofurano a t temperatura elevada, preferiblemente aproximadamente 50°C durante aproximadamente 1 hora, el compuesto intermediario producido de esta manera posteriormente se trata con yoduro de metilo, preferiblemente con aproximadamente un equivalente de yoduro de metilo a una temperatura elevada, de manera preferible aproximadamente 50°C durante 1-5 horas, de manera preferible durante aproximadamente 3 horas. El producto de fórmula (4) se aisla por medios convencionales, y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalización. Preparación del intermediario de fórmula (5) Se hace reaccionar el intermediario de fórmula (4) con un ligero exceso de cloroformiato de metilo en un solvente orgánico, preferiblemente diclorometano . La reacción se lleva a cabo en presencia de una amina base tal como piridina, trietilamina o N-etildiisopropilamina, preferiblemente piridina, una temperatura inferior a la temperatura ambiente, de manera preferible a 0°C durante 0.25-4 horas. El producto de fórmula (5) se aisla por medios convencional s y se purifican preferiblemente por medio de cromatografía o recristalizació . Preparación del intermediario de fórmula (6) Se hace reaccionar el intermediario de fórmula (5) con un ligero exceso de un reactivo yodante, preferiblemente monocloruro de yodo, en un solvente orgánico, preferiblemente ácido acético. La reacción se lleva a cabo en presencia de una base débil, preferiblemente acetato de sodio a temperatura ambiente durante aproximadamente 2-30 horas, de manera preferible aproximadamente 16 horas. El producto de la fórmula (6) se aisla por medios convencionales y se purifican preferiblemente por medio de cromatografía o recristalización. Preparación de compuestos de fórmula 1(8) o fórmula (9) Los compuestos de tributilestanano iniciales de fórmula (7) se pueden obtener comercialmente, por ejemplo, de Fluka o se pueden preparar de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica. El intermediario de la fórmula (6) se hace reaccionar con un exceso de un compuesto de tributilestanano de fórmula (7) en un solvente orgánico, preferiblemente ?,?-dimetilformamida, que contiene catalizador de paladio, preferiblemente tris (dibencilidenacetona) dipaladio (0) , una cantidad catalítica de fosfina o ligando arsina, preferiblemente trifenilarsina y un exceso de una sal de cobre (I) , preferiblemente yoduro de cobre (I) . La reacción se lleva a cabo a temperatura elevada, preferiblemente a aproximadamente 80 °C durante aproximadamente 2-24 horas, de manera preferible aproximadamente 16 horas. Uno o varios de los productos se aislan por medios convencionales, y preferiblemente se purifican por medio de cromatografía o recristalización. Dependiendo de los parámetros tales como la temperatura de reacción y el tiempo de reacción, la mayor parte del producto de la reacción en algunos casos puede ser un compuesto de fórmula 1(8), en otros casos el producto principal puede ser un compuesto de fórmula (9), o la reacción puede suministrar una mezcla de productos de fórmula 1(8) y (9) . Preparación alternativa de compuestos de fórmula 1(8) o de fórmula (9) Los compuestos iniciales de ácido borónico de la fórmula (10) se pueden obtener comercialmente, por ejemplo de Fluka, o se pueden preparar de acuerdo con los métodos bien conocidos en la técnica. Los compuestos de fórmula 1(8) o (9) alternativamente se pueden preparar al tratar el intermediario de fórmula (6) con un exceso de compuesto de ácido borónico de fórmula (10) . La reacción se lleva a cabo en un solvente acuoso, preferiblemente una mezcla de agua, dioxano y 1,2-dietoxietano, que contiene un catalizador de paladio, preferiblemente tetrakis (trifenilfosfina)paladio (0) , un exceso de una sal de litio, preferiblemente cloruro de litio, y una base inorgánica, preferiblemente carbonato de sodio. La reacción preferiblemente se lleva a cabo a temperatura de reflujo del solvente, de manera preferible aproximadamente 100°C durante aproximadamente 2-24 horas, de manera preferible durante aproximadamente 16 horas. Uno o varios de los productos se aislan por medios convencionales y preferiblemente se purifican por medio de cromatografía o recristalización. En base en los parámetros tales como la temperatura de reacción y el tiempo de reacción, el producto principal de la reacción en algunos casos puede ser un compuesto de fórmula 1(8), en otros casos el producto principal puede ser un compuesto de fórmula (9), o la reacción puede suministrar una mezcla de productos de fórmula 1(8) y (9) . Preparación de intermediarios de fórmula (9) a partir de compuestos de fórmula 1(8) Los compuestos de fórmula 1(8) se pueden convertir a los intermediarios correspondientes de fórmula (9) por reacción con un exceso de una base acuosa tal como hidróxido de litio, hidróxido de sodio o hidróxido de potasio, preferiblemente hidróxido de sodio. La reacción se lleva a cabo en un solvente acuoso, preferiblemente una mezcla de agua y un solvente orgánico miscible tal como dioxano, tetrahidrofurano o etilenglicol , preferiblemente etilenglicol a temperatura elevada, preferiblemente la temperatura de reflujo del solvente, durante aproximadamente 2-16 horas, de manera preferible aproximadamente 16 horas. El producto de fórmula (9) se aisla por medios convencionales y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalización. Preparación de compuestos de fórmula I en donde R1 es fenilo o fenilo sustituido con halógeno Un método de preparación de compuestos de fórmula I, en donde R1 es fenilo o fenilo sustituido con halógeno, es por tratamiento del intermediario de fórmula (9) con un ligero exceso de un cloruro de acilo apropiado de fórmula (11) , el cual puede estar disponible comercialmente o se puede preparar por métodos bien conocidos en la técnica. También se puede utilizar un catalizador tal como N,N-dimetil-4-aminopiridina. La reacción se lleva a cabo en un solvente orgánico no prótico, preferiblemente una mezcla de diclorometano y tetrahidrofurano, . que contiene una base, preferiblemente N-etildiisopropilamina o trietilamina a una temperatura entre la temperatura ambiente y la temperatura de reflujo del solvente, durante 2-24 horas, de manera preferible 16 horas. El producto de fórmula I, en donde R1 es fenilo sustituido con halógeno, se aisla por medios convencionales, y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalización.
Preparación alternativa de compuestos de fórmula I en donde R' es fenilo o fenilo sustituido con halógeno Un método alternativo de preparación de compuestos de fórmula I, en donde R1 es fenilo o fenilo sustituido con halógeno, involucra el tratamiento de un ácido carboxílico apropiado de fórmula (12) con un equivalente estequiomét ico de un reactivo acoplante de péptido, preferiblemente hexafluorofosfato de 0- (7-azabenzotriazol-l-il) -?,?,?' ,?' -tetrametiluronio (HATU) , en un solvente etéreo, preferiblemente tetrahidrofurano, que contiene una base, preferiblemente N-etildiisopropilamina, a temperatura ambiente durante 30-90 minutos, preferiblemente 1 hora. Esta mezcla después se trata con los intermediarios de fórmula (9) en una mezcla de solventes, preferiblemente una mezcla de tetrahidrofurano, dioxano y ?,?-dimetilformamida, a temperatura ambiente durante 16-24 horas, de manera preferible 16 horas. El producto de fórmula I, en donde R1 es fenilo o fenilo sustituido con halógeno, se aisla por medios convencionales y preferiblemente se purifica por medio de cromatograf a o recristalización. Preparación de los compuestos de fórmula I en donde R1 es 3,6-dihidro-2H-piran-4-ilo o tetrahidropiran-4-ilo Un método de preparación de los compuestos de fórmula I en donde R1 es 3 , 6-dihidro-2H-piran-4-ilo o tetrahidropiran-4-ilo, es a partir de un intermediario de fórmula (6) como se muestra en el esquema de reacción 3 siguiente . Esquema de Reacción 3
en donde R es como se define en lo anterior Preparación de los compuestos de fórmula 1(15) El compuesto de tributilestanano inicial de fórmula (13) se puede preparar de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica. El intermediario de fórmula (6) se hace reaccionar con un exceso del compuesto de tributilestanano de fórmula (13) en un solvente orgánico, preferiblemente dioxano, que contiene un catalizador de paladio, preferiblemente dis (dibencilidenacetona)paladio (0) y una cantidad catalítica de un ligando fosfina o arsina, preferiblemente tris (2-furil) fosfina. La reacción se lleva a cabo a temperatura elevada, preferiblemente a aproximadamente 100°C durante aproximadamente 2-24 horas, de manera preferible a aproximadamente 16 horas. El producto de fórmula 1(15) se aisla por medios convencionales, y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalización. Preparación alternativa de compuestos de fórmulas 1(15) El compuesto de ácido borónico inicial de fórmula (14) se puede preparar de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica. Los compuestos de fórmula 1(15) alternativamente se pueden preparar al tratar el intermediario de fórmula (6) con un exceso de compuesto de ácido borónico de fórmula (14) . La reacción se lleva a cabo en un solvente acuoso preferiblemente una mezcla de agua, dioxano y 1, 2-dietoxietano, que contiene un catalizador de paladio, preferiblemente tetrakis (trifenilfosfina)paladio (0) y una base inorgánica, preferiblemente carbonato de sodio. La reacción preferiblemente se lleva a cabo a la temperatura de reflujo del solvente, de manera preferible aproximadamente 100°C, durante aproximadamente 2-24 horas, de manera preferible aproximadamente 16 horas. Se aisla el producto de fórmula 1(15) por medios convencionales, y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalización. Preparación de los compuestos de fórmula 1(16) Los compuestos de fórmula 1(15) se pueden convertir a los compuestos de fórmula 1(16) por hidrogenación en presencia de un catalizador de hidrogenación, preferiblemente paladio 10% en carbón. Esta reacción se puede llevar a cabo en una variedad de solventes orgánicos tales como metanol, etanol, dioxano, tetrahidrofurano o diclorometano, preferiblemente una mezcla de metanol y diclorometano, a temperatura ambiente y a una presión de una atmósfera o superior, de manera preferible a una atmósfera, durante 2-24 horas, de manera preferible aproximadamente 18 horas. El producto de fórmula 1(16) se aisla por medios convencionales y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalización. Preparación de compuestos de fórmula I en donde R1 es 3,6-dihidro-2H-piran-4-ilo (la) Los compuestos de fórmula I, en donde R1 es 3,6-dihidro-2H-piran-4-ilo, se pueden preparar a partir de los compuestos de fórmula 1(15) por métodos exactamente análogos a los descritos en lo anterior para la preparación de compuestos de fórmula I a partir de intermediarios de fórmula (8) . El producto de fórmula I, en donde R1 es 3 , 6-dihidro-2H-piran-4-ilo, se aisla por medios convencionales y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalización. Preparación de compuestos de fórmula I en donde R1 es tetrahidropiran-4-ilo (Ib) Los compuestos de fórmula I, en donde R1 es tetrahidropiran-4-ilo se pueden preparar a partir de los compuestos de fórmula I (16) por métodos exactamente análogos a los descritos en lo anterior para la preparación de compuestos de fórmula I a partir de intermediarios de fórmula (8) . Se aisla por medios convencionales el producto de fórmula I en donde R1 es tetrahidropiran-4-ilo, y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalización. Preparación de compuestos de fórmula I en donde R1 es morfolin-4-ilo Un método de preparación de compuestos de fórmula I, en donde R1 es morfolin-4-ilo es a partir de un intermediario de fórmula (5), como se muestra en el esquema de reacción 4 siguiente.
en donde R es como se define en lo anterior. Preparación del intermediario de fórmula (17) El intermediario de fórmula (5) se hace reaccionar con un agente nitrante, preferiblemente tetrafluoroborato de nitronio en un solvente orgánico polar, preferiblemente nitrometano. La reacción se lleva a cabo a una temperatura de entre 0°C y la temperatura ambiente durante aproximadamente 2 - 24 horas, de manera preferible aproximadamente 18 horas. Se aisla el producto de fórmula (17) por medios convencionales y preferiblemente se purifica por medio de cromatograf a o recristalizació . Preparación del intermediario de fórmula (18) El intermediario de fórmula (17) se puede convertir al intermediario de fórmula (18) por hidrogenación en presencia de un catalizador de hidrogenación, preferiblemente 10% de paladio en carbón. Esta reacción se puede llevar a cabo en una variedad de solventes orgánicos, tales como metanol, etanol, dioxano, tetrahidrofurano o diclorometano, preferiblemente una mezcla de metanol y diclorometano, a temperatura ambiente y a una presión desde una atmósfera o superior, preferiblemente a una atmósfera, durante 2 - 24 horas, de manera preferible durante aproximadamente 18 horas. El producto de la fórmula (18) se aisla por medios convencionales y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalización. Preparación del intermediario de fórmula (19) El intermediario de fórmula (18) se puede convertir al intermediario de fórmula (19) por reacción con un exceso de una base acuosa tal como hidróxido de litio, hidróxido de sodio o hidróxido de potasio, de manera preferible hidróxido de sodio. La reacción se lleva a cabo en un solvente acuoso, de manera preferible una mezcla de agua y un solvente orgánico miscible tal como dioxano, tetrahidrofurano o etilenglicol, de manera preferible una mezcla de agua, dioxano y etilenglicol a una temperatura elevada, preferiblemente a la temperatura de reflujo del solvente, durante aproximadamente 2 - 16 horas, de manera preferible aproximadamente 4 horas . Se aisla el producto de fórmula (19) por medios convencionales y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalizació . Preparación del intermediario de fórmula (20) El intermediario de fórmula (19) se hace reaccionar con un compuesto de diyoduro de alquilo de fórmula (21) , el cual se puede preparar de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica, en un solvente orgánico, preferiblemente N,N-dimetilformamida, que contiene una base, preferiblemente carbonato de potasio. La reacción se lleva a cabo a una temperatura entre la temperatura ambiente y la temperatura de reflujo del solvente, de manera preferible a aproximadamente 60°C durante aproximadamente 1 - 48 horas, de manera preferible aproximadamente 48 horas. El producto de fórmula (20) se aisla por medios convencionales y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalización.
Preparación de los compuestos de fórmula Ic ( 1 es morfolin-4-ilo) Los compuestos de fórmula I en donde R1 es morfolin-4-ilo se pueden preparar a partir del intermediario de fórmula (20) por métodos exactamente análogos descritos en lo anterior para la preparación de compuestos de fórmula I a partir de intermediarios de fórmula (9). El producto de fórmula I, en donde R1 es morfolin-4-ilo se aisla por medios convencionales y preferiblemente se purifica por medio de cromatografía o recristalización. Conversión de los compuestos de fórmula I a otros compuestos de fórmula I con un sustituyente R modificado En los casos en donde el compuesto de fórmula I contiene un sustituyente R con un grupo funcional químicamente reactivo, por ejemplo cuando R contiene una funcionalidad de haluro bencílico o una funcionalidad de 2-halopiridilo, el compuesto de fórmula I se puede convertir a otro compuesto de fórmula I que tiene un sustituyente R modificado, por reacciones que involucran la funcionalidad reactiva contenida en el sustituyente R original. Tales transformaciones se pueden llevar a cabo con métodos bien conocidos en la técnica y los ejemplos específicos que se pueden tener de un número de ejemplos que se proporcionan en lo siguiente. Por ejemplo, los compuestos de fórmula I que contienen sustituyentes R con una funcionalidad de haluro bencílico o una funcionalidad de 2-halopiridilo se pueden hacer reaccionar con un alcohol nucleofílico o con reactivos amina para proporcionar compuestos de fórmula I que contienen sustituyentes R que tienen, respectivamente, grupos funcionales de éter bencílico o amina bencílica, o grupos funcionales piridil-2-iléter o piridil-2-il-amino . Aislamiento y purificación de los compuestos El aislamiento y purificación de los compuestos intermediarios descritos en la presente se puede llevar a cabo, si se desea, por cualquier procedimiento adecuado de separación o purificación tal como, por ejemplo, filtración, extracción, cristalización, cromatografía en columna, cromatografía en capa delgada, cromatografía en capa gruesa, cromatografía líquida de baja o alta presión preparativa o una combinación de estos procedimientos . Las ilustraciones específicas de procedimientos adecuados de separación y aislamiento se- pueden tener .. como referencia a las preparaciones y ejemplos en la presente, en lo que sigue. No obstante, por supuesto también se pueden utilizar otros procedimientos de separación o aislamiento equivalentes. Sales de compuestos de fórmula I Los compuestos de fórmula I pueden ser básicos, por ejemplo en casos en donde el residuo R contiene un grupo básico tal como una porción amina alifática o aromática. En tales casos, los compuestos de fórmula I se pueden convertir en una sal de adición de ácido correspondiente. La conversión se lleva a cabo por tratamiento con por lo menos una cantidad estequiómetrica de un ácido apropiado, tal como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico y similares, y ácidos orgánicos tales como los ácidos: acético, propionico, glicolico, piruvico, oxálico, mélico, malonico, succínico, maleico, fumárico, tartárico, cítrico, benzoico, cinámico, mandelico, metansulfónico, etansulfónico, p-toluensulfónico, salicílico y similares. Típicamente, la base libre se disuelve en un solvente orgánico inerte tal como dietiléter, acetato de etilo, cloroformo, etanol o metanol y similares, y el ácido se agrega en un solvente similar. La temperatura se mantiene entre 0°C y 50°C. La sal resultante se precipita de manera espontánea o se puede extraer de la solución con un solvente menos polar. Las sales acidas de adición de los compuestos básicos de fórmula I se pueden convertir a las bases libres correspondientes por tratamiento con por lo menos un equivalente esteguiómetrico de una base adecuada tal como hidróxido de sodio o de potasio, carbonato de potasio, bicarbonato de sodio, amoniaco y similar. Los compuestos de fórmula I y sus sales de adición farmacéuticamente utilizables poseen propiedades farmacológicas útiles. Específicamente, se ha encontrado que los compuestos de la presente invención son ligandos del receptor de adenosina (A2A) · Además, se ha demostrado que los compuestos preferidos de fórmula I tienen buena selectividad por el receptor ?? en el intervalo de 26 a 650. Se investigaron los compuestos de acuerdo con las pruebas que se proporcionan en lo siguiente. Receptor A2A de adenosina humano El receptor A2A de adenosina humano se expresa de manera recombinante en células de ovario de hámster chino (CHO) utilizando el sistema de expresión del virus semliki forest. Las células se cosechan, se lavan dos veces por centrifugación, se homogenizan y se lavan nuevamente por centrifugación. El sedimento de membrana lavado final se suspende en amortiguador Tris 50 mM que contiene WaCl 120 mM, KC1 5 mM, CaCl2 2 mM y MgCl2 10 mM (pH 7.4) (amortiguador A). Se lleva a cabo el ensayo de unión de [3H] -SCH-58261 (Dionisotti el al., 1997, Br J Pharmacol 121, 353; 1 nM) en placas de 96 pozos, en presencia de 2.5 ug de proteína de membrana, 0.5 mg de esfera SPA de Ysi-poli-l-lisina y 0.1 U de adenosina desaminasa en un volumen final de 200 µ? de amortiguador A. Se define la unión no específica utilizando un congenere de xantina amina (XAC; 2µ?) . Los compuestos se prueban a 10 concentraciones desde 10 µ?-0.3 nM. Todos los ensayos se llevan a cabo por duplicado y se repiten por lo menos dos veces . Las placas de ensayo se incuban durante 1 hora a temperatura ambiente antes de centrifugación y después se determina el ligando unido utilizando un contador de centelleo Packard Topcount. Se calculan los valores CI50 utilizando un programa de ajuste de curva no lineal y se calculan los valores Ki utilizando la ecuación de Cheng-Prussoff . Los compuestos preferidos muestran una pKi> 7.5. En la siguiente tabla se muestra la afinidad por el receptor A2a y su selectividad por el receptor Ai, para estos compuestos.
Los compuestos de la fórmula I y las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I se pueden utilizar como medicamentos, por ejemplo en forma de preparaciones farmacéuticas Las preparaciones farmacéuticas se pueden administrar por vía oral, por ejemplo en forma de tabletas, tabletas recubiertas, grageas, cápsulas de gelatina dura y suave, soluciones, emulsiones o suspensiones. No obstante, la administración también se puede llevar a cabo por vía rectal, por ejemplo en forma de supositorios, o por vía parenteral, por ejemplo en forma de soluciones de inyección. Los compuestos de fórmula I se pueden procesar con portadores farmacéuticamente inertes, inorgánicos u orgánicos para la producción de preparaciones farmacéuticas . Se pueden utilizar lactosa, almidón de maíz o derivados de los mismos, talco, ácidos estaricos o sus sales y similares, por ejemplo tales como los portadores para tabletas, tabletas recubiertas, grageas y cápsulas de gelatina dura. Los portadores adecuados para cápsulas de gelatina suave son, por ejemplo, aceites vegetales, ceras, grasas, polioles semisólidos y líquidos, y similares. En base en la naturaleza de la sustancia activa, no obstante, habitualmente no se requieren portadores en el caso de cápsulas de gelatina suave. Los portadores adecuados para la introducción de soluciones y jarabes son, por ejemplo agua, polioles, glicerol, aceite vegetal y similares. Los portadores adecuados para supositorios son, por ejemplo, aceites naturales o endurecidos, ceras, grasas, polioles semilíquidos o líquidos y similares. Además, las preparaciones farmacéuticas pueden contener conservadores, solubilizantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsificantes , edulcorantes, colorantes, saborizantes, sales para variar la presión osmótica, amortiguadores, agentes enmascadores o antioxidantes . También pueden obtener otras sustancias terapéuticamente valiosas adicionales . Los medicamentos que contienen un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador terapéuticamente inerte también son un objeto de la presente invención, puesto que es el procedimiento para su elaboración, el cual comprende colocar uno o más compuestos de fórmula I o sus sales ácidas de adición farmacéuticamente aceptables y, si se desea, una o más sustancia terapéuticamente útiles adicionales en una forma de administración galénica juntos, con uno o más portadores terapéuticamente inertes . De acuerdo con la invención, los compuestos de fórmula I así como sus sales farmacéuticamente aceptables son útiles en el control o prevención de enfermedades basadas en la actividad antagonista del receptor de adenosina, tal como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, neuroprotección, esquizofrenia, ansiedad, dolor, deficiencia en la respiración, depresión, asma, respuestas alérgicas, hipoxia, isquemia, apoplejía y abuso de sustancias. Además, los compuestos de la presente pueden ser útiles como sedantes, relajantes musculares, antipsicóticos, antiepilépticos, anticonvulsivos y agentes cardioprotectores y para la producción de medicamentos correspondientes . Las indicaciones más preferidas de acuerdo con la presente invención son aquellas en las cuales se incluyen desórdenes del sistema nervioso central, por ejemplo el tratamiento o prevención de ciertos desórdenes depresivos, neuroprotección y enfermedad de Parkinson. La dosificación puede variar dentro de limites amplios y por supuesto, deberá ajustarse a lo requerimientos particulares en cada caso particular. En el caso de administración oral, la dosificación para adultos puede variar desde aproximadamente 0.01 mg hasta aproximadamente 1000 mg al día de un compuesto de fórmula general I o de la cantidad correspondiente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La dosificación diaria se puede administrar como dosis única o en dosis divididas y, -además, el limite superior también se puede exceder cuando se encuentre que así está indicado. Formulación de tabletas (granulación en húmedo)
Artículo Ingredientes mg/tableta 5 mg 25 mg 100 mg 500 mg
1 Compuesto de fórmula I 5 25 100 500
2 Lactosa anhidra DTG 125 105 30 150
3 Sta-Rx 1500 6 6 6 30 4 Celulosa microcristalina 30 30 30 150
Estereato de magnesio 1 1 1 1 Total 167 167 167 831
Procedimiento de elaboración 1. Se mezclan los artículos granulan con agua purificada 2. Se secan los granulos a 50°C 3. Se hacen pasar los granulos a través de un equipo de molido adecuado. . Se agrega el artículo 5 y se mezcla durante tres minutos; se comprime en una prensa adecuada. Formulación en cápsula
Artículo Ingredientes mg/cápsula 5 mg 25 mg 100 mg 500 mg
1 Compuesto de fórmula I 5 25 00 500
2 Lactosa hidratada 159 123 148 — 3 Almidón de maíz 25 35 40 70 4 Talco 10 15 10 25 5 Estereato de magnesio 1 2 2 5 Total 200 200 300 600
Procedimiento de elaboración 1. Se mezclan los artículos 1, 2 y 3 en un mezclador adecuado durante 30 minutos . 2. Se agregan los artículos 4 y 5 y se mezclan durante 3 minutos . 3. Se rellenan en una cápsula adecuada. Los siguientes ejemplos ilustran la invención pero no se consideran como limitantes de su alcance. Ejemplo 1 4-fluoro-N- (4-metoxi-7-fenilbenzoxazol-2-il) -benzamida a) 2-aminobenzoxazol-4-ol A una solución agitada de 30 g (193 minóles) de 2.nitrorresorcinol en 900 mi de metanol se agregan 2.00 g de 10% de paladio en carbón y la mezcla después se agita durante 18 h a temperatura ambiente bajo una atmósfera de hidrógeno. La mezcla después se filtra y el filtrado, el cual contiene 2-aminorresorcinol , se agrega a gotas a una solución agitada de 22.5 g (213 mmoles) de bromuro de cianógeno en 230 mi de metanol y 100 mi de agua. Se continúa agitando durante 2 h a temperatura ambiente y después la mezcla se concentra al vacío. Al residuo se le agrega una solución acuosa de bicarbonato de sodio y la mezcla se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavan con salmuera saturada, se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea (acetato de etilo) seguido por trituración en éter proporciona 27.0 g (93%) de 2-aminobenzoxazol-4-ol como un sólido cristalino beige. EI-EM m/e (%) : 150 (M"1", 100), 107 (28). b) 4-metoxibenzoxazol-2-ilamina A una solución agitada de 10 g (66 mmoles) de 2-aminobenzoxazol-4-ol en 100 mi de tetrahidrofurano a temperatura ambiente se agregan en porciones 3.49 g (79.9 mmoles) de hidruro de sodio (dispersión 55% en aceite) y la mezcla después se agita durante 1 h a 50°C. Después se agrega a gotas durante 3 h una solución de 14.5 mi (233 mmoles) de yodometano en 500 mi de tetrahidrofurano mientras la mezcla de reacción se mantiene a 50°C. La mezcla después se vierte sobre agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavan con salmuera saturada, se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea (diclorometano, después 2/98 de metanol/diclorometano) proporciona 7.5 g (69%) de 4-metoxibenzoxazol-2-ilamina como un sólido cristalino café. EI-EMi/e (%) : 164 (M+( 100), 149 ([M~C¾] +, 23), 135 (46). c) éster metílico del ácido (4-metoxibenzoxazol-2-il) -carbámico A una solución agitada de 6.5 g (40 mmoles) de 4-metoxibenzoxazol-2-ilamina y 4.5 mi (56 mmoles) de piridina en 250 mi de diclorometano a 0°C se agregan a gotas una solución de 4.1 mi (49 mmoles) de cloroformiato de metilo en 50 mi de diclorometano y se continúa agitando durante 3.5 horas . La mezcla después se vierte sobre agua y se extrae tres veces con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea (diclorometano) proporciona 4.7 g (54%) del éster metílico del ácido (4-metoxibenzoxazol-2-il) -carbámico como un sólido cristalino blancuzco. EI-EM m/e (%) : 222 (M+, 100), 190 (27) , 163 (23) . d) éster metílico del ácido (7-yodo-4-metoxibenzoxazol-2-yl) -carbámico A una solución agitada de 4.0 g (18 mmoles) del éster metílico del ácido (4-metoxibenzoxazol-2-il) -carbámico y 4.4 g (54 mmoles) de acetato de sodio en 20 mi de ácido acético a temperatura ambiente se agregan a gotas 8.8 g (54 mmoles) de monocloruro de yodo y se continúa agitando durante 30 h. La mezcla después se vierte en agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavan con una solución de tiosulfato de sodio acuoso 1 M, después se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. El triturado en éter proporciona 4.1 g (65%) del éster metílico del ácido (7-yodo-4-metoxibenzoxazol-2-il) -carbámico como un sólido cristalino blanco. ES-EM m/e (%) : 349 (M+H+, 100). e) -metoxi-7-feniIbenzoxazol-2-ilamina A una solución agitada de 820 mg (2.36 mmoles) del éster metílico del ácido (7-yodo-4-metoxibenzoxazol-2-il) -carbámico en 20 mi de ?,?-dimetilformamida se agregan 1.17 mi (3.58 mmoles) de feniltri-n-butilestanano, 162 mg (0.18 mmoles) de tris (dibencilidenacetona) dipaldio (0), 65 mg (0.21 mmoles) de trifenilarsina y 208 mg (1.09 mmoles) de yoduro de cobre (I) . La mezcla se calienta a 80°C durante 16 h y después se vierte en agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavan con salmuera, se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea (1/99 de metanol/diclorometano) seguido por trituración en éter proporciona 200 mg de 4-metoxi-7-fenilbenzoxazol-2-ilamina como un sólido blanco. ES-EM m/e (%) : 241 (M+H+, 100) . f) 4-fluoro-N- (4-metoxi-7-fenilbenzoxazol-2-il) -benzamida A una solución agitada de 100 mg (0.42 mmoles) de 4-metoxi-7-fenilbenzoxazol-2-ilamina, 0.087 mi (0.62 inmoles) de trietilamina y 5.1 mg de N,N-dimetil-4-aminopiridina en 5 mi de THF a temperatura ambiente se agregan a gotas una solución de 0.064 mi (0.54 mmoles) de cloruro de 4-fluorobenzoilo en 2 mi de THF y se continua agitando a 65°C durante 16 h. La mezcla de reacción después se concentra al vacío . Al residuo se le agrega agua y la mezcla se extrae tres veces con diclorometano . Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea (1/4 y después 4/1 de acetato de etilo/hexano) seguido por trituración en éter, proporciona 50 mg (33%) de 4-fluoro-N- (4-metoxi-7-fenilbenzoxazol-2-il) -benzamida como un sólido cristalino amarillo claro. EI-EM m/e (%) : 362 (M+, 90), 123 ( [FC6H4CO+, 100). De una manera análoga se obtiene: Ejemplo 2 4-{ [ (2-metoxietil) -metilamino] -metil}-N- (4~metoxi-7-fenilbenzoxazol-2-il) -benzamida A partir de 4-metoxi-7-fenilbenzoxazol-2-ilamina con cloruro de 4-{ [ (2-metoxietil) -metilamino] -metil}-benzoilo, trietilamina y N,N-dimetil-4-aminopiridina en THF. ES-EM m/e (%) : 446 (M+H+, 100) . Ejemplo 3 Ester metílico del ácido [7- (3 , 6-dihidro-2H-piran-4-il) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -carbámico A una solución agitada de 3.50 g (10.1 mmoles) del éster metílico del ácido (7-yodo-4-metoxibenzoxazol-2-il) -carbamico en 50 mi de dioxano se agregan 5.63 g (15.1 mmoles) de tributil- (3 , 6-dihidro-2H-piran-4-il) estanano, 173 mg (0.30 mmoles) de bis (dibencilidenacetona)paladio (0), 374 mg (1.61 mmoles) de tri (2-furil) fosfina. La mezcla se calienta a 100°C durante 22 h y después se vierte sobre agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea (2/98 de metanol/diclorometano y después 5/95 de metanol/diclorometano) seguido por trituración en diclorometano proporciona 1.30 g (42%) del éster metílico del ácido [7- (3 , 6-dihidro-2H-piran-4-il) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -carbámico como un sólido blanco. ES-EM m/e (%) : 305 (M+H+, 100). Ejemplo 4 2-bromo-N- [4-metoxi-7- ( tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -isonicotinamida a) éster metílico del ácido [4-metoxi-7- ( tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -carbámico A una solución agitada de 1.30 g (4.27 mmoles) del éster metílico del ácido [7- (3 , 6-dihidro-2H-piran-4-il) -4-metoxi-benzoxazol-2-il] -carbámico en 250 mi de metanol y 250 mi de diclorometano se agrega 1.00 g de 10% de paladio en carbón y después la mezcla se agita durante 10 h a temperatura ambiente bajo una atmósfera de hidrógeno. La mezcla después se filtra, se lava con diclorometano/metanol (1/1) y el filtrado se concentra al vacío para proporcionar 1.30 g (100%) del éster metílico del ácido [4-metoxi-7- (tetrahidropiran4-il) -benzoxazol-2-il] -carbámico en un sólido blancuzco. ES-E m/e (%) : 307 (M+H+, 100) . b) 4-metoxi-7- ( tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-ilamina A una solución agitada de 1.30 g (4.24 mmoles) del éster metílico del ácido [4-metoxi-7- ( tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -carbámico en 90 mi de dioxano y 30 mi de etilenglicol se agregan 90 mi de una solución acuosa de hidróxido de sodio 5 N y la mezcla se calienta a 100°C durante 16 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se vierte en agua y se extrae cuatro veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío . "La cromatografía instantánea (diclorometano después 5/95 de metanol/diclorometano) proporciona 0.78 g (74%) de 4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-ilamina como un sólido café. ES-EM m/e (%) : 249 (M+H+, 100) . c) 2-bromo-N- [4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -isonicotinamida A una solución de 106 mg (0.52 mmoles) de ácido 2-bromoisonicotínico en 5 mi de THF se agregan 230 mg (0.60 mmoles) de HATU y 0.10 mi (0.60 mmoles) de N-etildiisopropilamina y se contonúa agitando a temperatura ambiente durante 5 h. Después se agrega una solución de 100 mg (0.40 mmoles) de 4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-ilamina en 5 mi de dioxano y 1 mi de DMF y se continúa agitando a 40°C durante 72 h. La mezcla de reacción después se vierte en 100 mi de agua y se extrae tres veces con actato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea (dielorómetaño después metanol/diclorometano 20/80) seguido por trituración en éter proporciona 146 mg (84%) de 2-bromo-N- [4-metoxi-7-(tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -isonicotinamida como un sólido cristalino blanco. ES-EM m/e (%) : 434 (M{81Br}+H+, 95), 432 (M{79Br}+, 100) . De una manera análoga se obtiene: Ejemplo 5 4-fluoro-N- [4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -benzamida A partir de ácido 4-fluorobenzoico, HATU y N-dietilisopropilamina en THF , después tratamiento con 4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-ilamina en dioxano y DMF . ES-EM m/e (%) : 371 (M+H+, 100) . Ejemplo 6 N- [4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -6-metilnicotinamida A partir de ácido 6-metilnicotínico, HATU y N-dietilisopropilamina en THF, después tratamiento con 4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il ) -benzoxazol-2ilamina en dioxano y DMF. ES-EM m/e (%) : 368 (M+H+, 100) . Ejemplo 7 N- [4-metoxi-7~ (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -2-metilisonicotinamida A partir de ácido 2-metilisonicotínico, HATU y N-dietilisopropilamina en THF, después tratamiento con 4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-ilamina en dioxano y DMF. ES-EM m/e (%) : 368 (M+H+, 100). Ejemplo 8 2-clorometil-N- [4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -isonicotinamida ? partir de ácido 2-clorometilisonicotínico, HATU y N-dietilisopropilamina en THF, después tratamiento con 4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-ilamina en dioxano y DMF. ES-EM m/e (%) : 404 (M{37Cl}+H+, 30), 402 (M{35C1}-H+, 100). Ejemplo 9 N- [4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -2-morfolin-4-ilisonicotinamida Una suspensión agitada de 460 mg (1.06 mmoles) de 2-bromo-N- [4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -isonicotinamida, 693 mg (2.13 mmoles) de carbonato de cesio y algunos cristales de 2 , 6-diterbutil-p-cresol en 2.78 mi (3.19 mmoles) de morfolina y 2 mi de N-metilpirrolidona en un tubo de presión de vidrio de pared gruesa al que se le coloca un tapón de teflón, se calienta a 140°C durante 24 h. La mezcla de reacción después se enfría a temperatura ambiente y se vierte en agua. La mezcla se extrae tres veces con acetato de etilo y las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea (2/98 de metanol/diclorometano) seguido por trituración en éter proporciona 136 mg (29%) de N- [4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -2-morfolin-4-il-isonicotinamida como un sólido cristalino blanco. ES-EM m/e (%) : 439 (M+H+f 100) . Ejemplo 10 2-metoximetil-N- [4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -2-isonicotinamida A una solución agitada de 0.05 mi (1.24 mmoles) de metanol en 5 mi de dioxano y 1 mi de ?,?-dimetilformamida a temperatura ambiente se agregan 27 mg (0.62 mmoles) de hidruro de sodio (dispersión 55% en aceite mineral) y la mezcla se calienta a 50°C durante 1 hora. Después se agregan 50 mg (0.12 mmoles) de 2-clorometil-N- [4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -isonicotinamida, y la mezcla se calienta a 50°C durante 20 h. La mezcla de reacción después se enfría a temperatura ambiente y se vierte en agua. La mezcla se acidifica con ácido clorhídrico acuoso 1 N y después se extrae tres veces con diclorometano . Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea (diclorometano) seguido por trituración en éter proporcionar 32 mg (65%) de 2-metoximetil-N- [4-metoxi-7- (tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -2-isonicotinamida como un sólido cristalino blanco. ES-EM m/e (%) : 398 (M+H+, 100) . De manera análoga al ejemplo 4, se obtienen: Ejemplo 11 N- [4-metoxi-7- ( tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-il] -2-fenilacetamida A partir de ácido fenilacético, HATU y N-dietilisopropilamina y THF, después tratamiento con 4-metoxi-7- ( tetrahidropiran-4-il) -benzoxazol-2-ilamina en dioxano y DMF. ES-EM m/e (%) : 367 (M+H+, 100) . Ejemplo 12 2-bromo-N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -isonicotinamida a) éster metílico del ácido [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -carbámico A una solución agitada de 3.00 g (8.62 mmoles) el éster metílico del ácido (7-yodo-4-metoxibenzoxazol-2-il) -carbámico en 20 mi de dioxano y 60 mi de 1 , 2-dimetoxiétano se agregan 731 mg (17.2 mmoles) de cloruro de litio, 299 mg (0.26 mmoles) de tetrakis (trifenilfosfina)paladio (0) , 1.45 g (10.3 mmoles) de ácido parafluorobencenoborónico y 18 mi de una solución acuosa 1 N de bicarbonato de sodio. La mezcla se calienta a 100°C durante 24 h y después se vierte sobre agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La trituración en éter proporciona 2.67 g (98%) del éster metílico del ácido [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -carbámico como un sólido blancuzco. ES-EM m/e (%) : 317 (M+H+, 100) . b) 7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-ilamina A una solución agitada de 2.80 g (8.85 mmoles) del éster metílico del ácido [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -carbámico en 100 mi de dioxano y 30 mi de etilenglicol se agregan 100 mi de una solución acuosa de hidróxido de sodio 5 N y la mezcla se calienta a 100°C durante 16 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se vierte en agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavan con salmuera, después se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La trituración en éter proporciona 0.95 g (42%) de 7-(4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-ilamina como un sólido blancuzco. ES-EM m/e (%) : 259 (M+H+, 100) . c) 2-bromo-N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol- 2-il] -isonicotlnamida A una solución agitada de 203 mg (1.00 mmoles) de ácido 2-bromoisonicotínico en 5 mi de THF se agregan 442 mg (1.16 mmoles) de HATU y 0.20 mi (1.16 mmoles) de N-etildiisopropilamina y se continúa agitando a temperatura ambiente durante 5 h. Después se agrega una solución de 200 mg (0.77 mmoles) de 7- (4-fluorofenil ) -4-metoxibenzoxazol-2-ilamina en 5 mi de dioxano y 1 mi de DMF, y se continúa agitando a 40°C durante 16 h. La mezcla de reacción después se vierte en 100 mi de agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío . La trituración en éter/acetato de etilo (4/1) proporciona 233 mg (68%) de 2-bromo-N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -isonicotinamida como un sólido cristalino blancuzco. ES-EM m/e (%) : 444 (M{81Br}+H+, 90), 442 (M{79Br} +H+, 100). De una manera análoga se obtiene: Ejemplo 13 2-clorometil-N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il]-isonicotinamida A partir de ácido 2-clorometilisonicotinico, HATU y N-dietilisopropilamina en THF, y después tratamiento con 7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-ilamina en dioxano y DMF. ES-EM m/e (%) : 414 (M{37C1}+H+, 30), 412 (M{35C1}-H+, 100). Ejemplo 14 N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -2-metilisonicotinamida A partir de ácido 2-metilisonicotinico, HATU y N-dietilisopropilamina en THF, después tratamiento con 7-{4-fluorofenil) -4-metoxibenoozaxol-2-ilamina en dioxano y DMF. ES-EM m/e (%) : 378 (M+H+, 100) . Ejemplo 15 N- [7- (4-fluorofenil ) -metoxibenzoxazol-2-il -propionamida A partir de ácido propiónico, HATU y N-dietilisopropilamina en THF, después tratamiento con 7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenoozaxol-2-ilamina en dioxano y DMF. ES-EM m/e (%) : 315 (M+H+, 100) . Ejemplo 16 N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -2-metoxiacetamida A partir de ácido metoxiacético, HATU y
N-dietilisopropilamina en THF, después tratamiento con 7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenoozaxol-2-ilamina en dioxano y DMF. ES-EM m/e (%) : 331 (M+H+, 100) . Ejemplo 17 N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -6-metilnicotinamida A partir de ácido 6-metilnicotínico, HATU y N-dietilisopropilamina en THF, después tratamiento con 7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenoozaxol-2-ilamina en dioxano y DMF. ES-EM m/e (%) : 378 (M+H+, 100) .
Ejemplo 18 4-fluoro-N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -2-benzamida A partir de ácido 4-fluorobenzoico, HATU y N-dietilisopropilamina en THF, después tratamiento con 7-(4-fl orofenil) -4-metoxibenoozaxol-2-ilamina en dioxano y DMF . ES-EM m/e (%) : 381 (M+H+, 100) . Ejemplo 19 N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -2-fenilacetamida A partir de ácido fenilacético, HATU y N-dietilisopropilamina en THF, después tratamiento con 7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenoozaxol-2-ilamina en dioxano y DMF. ES-EM m/e (%) : 377 (M+H+, 100) . De una manera análoga al ejemplo 9, se obtiene: Ejemplo 20 N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -2-morfolin-4-il-isonicotinamida A partir de 2-bromo-N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -isonicotinamida con carbonato de cesio y morfolina en NMP. ES-EM m/e (%) : 449 (M+H+, 100) . De una manera análoga al ejemplo 10, se obtiene: Ejemplo 21 N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -2-metoximetilisonicotinamida A partir de 2-clorometil-N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenoozaxol-2-il] isonicotinamida con hidruro de sodio y etanol en dioxano y DMF. ES-EM m/e (%) : 408 ( +H+, 100) . Ejemplo 22 2-clorometil-N- (4-metoxi-7-morfolin-4-ilbenzooxaol- 2-il) -isonicotinamida a) éster metílico del ácido (4-metoxi-7-nitrobenzoxazol-2-il) -carbámico A una solución agitada de 780 mg (3.51 mmoles) del éster metílico del ácido (4-metoxibenzoxazol-2-il) -carbámico en 40 mi de nitrometano a 0°C se agregan 699 mg (5.27 mmoles) de tetrafluoroborato de nitronio y se continúa agitando durante 18 h mientras se permite que la mezcla de reacción se caliente gradualmente hasta la temperatura ambiente. La mezcla después se concentra al vacío. La cromatografía instantánea (acetato de etilo/hexano) proporciona 300 mg (32%) del éster metílico del ácido (4-metoxi-5-nitrobenzoxazol-2-il) -carbámico como un sólido naranja, y 220 mg (32%) del éster metílico del ácido (4-metoxi-7-nitrobenzoxazol-2-il) -carbámico como un sólido amarillo. ES-EM m/e (%) : 268 (M+H+, 100) . b) éster metálico del ácido (7-amino-4-metoxibenzoxazol-2-il ) -carbámico A una solución agitada de 220 mg (0.82 mmoles) del éster metílico del ácido (4-metoxi-7-nitrobenzoxazol-2-il) -carbámico en 25 mi de metanol y 45 mi de diclorometano se agrega con el extremo de una espátula 10% de paladio en carbón y se continúa agitando durante 18 h a temperatura ambiente bajo una atmósfera de hidrógeno. La mezcla después se filtra y el filtrado se concentra al vacío. La cromatografía instantánea (2/98 metanol/diclorometano) proporciona 114 mg (58%) del éster metílico del ácido (7-amino-4-metoxibenzoxazol-2-il) -carbámico como un sólido cristalino blanco. ES-EM m/e (%) : 238 (M+H+, 100). c) 4-metoxibenzoxazol-2 , 7-diamina A una solución agitada de 100 mg (0.42 mmoles) del éster metílico del ácido (7-amino~4-metoxibenzoxazol-2-il) -carbámico en 15 mi de dioxano y 5 mi de etolenglicol se agregan 15 mi de una solución acuosa de hidróxido de sodio 5 N y la mezcla se calienta a 100°C durante 4 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se vierte en agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromaografía instantánea (5/95 de metanol/diclorometano, después 10/89/1 de metanol/diclorometano/trietilamina) seguido por trituración en éter proporciona 15 mg (20%) de -metoxibenzoxazol-2 , 7-diamina como un sólido café. ES-EM m/e (%) : 180 (M+H+, 100) . d) 4-metoxi-7-morfolin-4-ilbenzoxazol-2 , 7-ilamina A una solución agitada de 800 mg (4.47 mmoles) de 4-metoxibenzoxazol-2, 7-diamina en 40 mi de DMF a temperatura ambiente se agregan 2.47 g (17.9 mmoles) de carbonato de potasio y 2.18 g (6.70 mmoles) de l-yodo-2- (2-yodoetoxi) -etano y la mezcla se calienta a 60°C durante 48 h. Después de enfriar a temperatura ambiente la mezcla se vierte en agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavan con salmuera, después se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea (2/98 de metanol/diclorometano después 10/90 de metanol/diclorometano) proporciona 585 mg (53%) de 4-metoxi-7-morofolin-4-ilbenooxazol-2-ilamina como un sólido café claro. ES-EM m/e (%) : 250 (M+H+, 100) . e) 2-elorómeti1-N- (4-metoxi-7-morfo1in-4-ilbenzooxaol-2-il) -isonicotinamida A una solución agitada de 72 mg (0.42 mmoles) de ácido 2-clorometilisonicotínico en 5 mi de THF se agregan 183 mg (0.48 mmoles) de HATU y 0.08 mi (0.48 mmoles) de N-etildiisopropilamina y se continúa agitando a temperatura ambiente durante 5 h. Una solución de 80 mg (0.32 mmoles) de 4-metoxi-7-morfolin-4-ilbenzoxazol-2-il-amina en 5 mi de dioxano y 1 mi de DMF después se agrega y se continúa agitando a 40°C durante 48 . La mezcla de reacción después se vierte en 50 mi de agua, se acidifica con ácido clorhídrico acuoso 1 M y se extrae tres veces con acetato de etilo . Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea (3/97 de metanol/diclorornetaño, después 10/90 de metanol/diclorometano) seguido por trituración en éter proporciona 8 mg (6%) de 2-clorometil-N- (4-metoxi-7-itiorfolin-4-ilbenzoxazol-2-il) -isonicotinamida como un sólido cristalino blancuzco. ES-EM m/e (%) : 405 (M{37C1}-H, 35), 403 (M{35C1}-H+, 100) . De una manera análoga se obtiene: Ejemplo 23 N- (4-metoxi-7-morfolin-4-ilbenzoxazol-2-il) -6-metilnicotinamida A partir de ácido 6-metilnicotínico, HATU y N-dietilisopropilamina en THF, después tratamiento con 4-metoxi-7-morfolin-4-ilbenzoxazol-2-ilamina en dioxano y D F. ES-EM m/e (%) : 369 (M+H+, 100) . E emplo 24 4-fluoro-N- (4-metoxi-7-morfolin-4-ilbenzoxazol-2-il) -benzamida A partir de ácido 4-fluorobenzoico, HATU y N-dietilisopropil mina en THF, después de tratamiento con 4-metoxi-7-morfolin-4-ilbenzoxazol-2-ilamina en dioxano y DMF. ES-EM m/e (%) : 372 (M+H+, 100) . De una manera análoga al ejemplo 8 se obtiene: E emplo 25 N- (4-metoxi-7-morfolin-4-ilbenzoxazol-2-il) -2-morfolin-4-ilisonicotinamida A partir de 2-bromoisonicotínico, HATU y N-dietilisopropilamina en THF , seguido por tratamiento con 4-metoxi-7-morfolin-4-ilbenzoxazol-2-ilamina en dioxano. Posteriormente tratamiento con carbonato de cesio y morfolina en NMP. ES-EM m/e (%) : 440 (M+H+, 100) . Ejemplo 26 N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol~2-il) -2-pirrolidin-l-ilmetilisonicotinamida Una mezcla de 100 mg (0.24 mmoles) de 2-clorometil-N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -isónicotinamida y 0.35 g (4.86 mmoles) de pirrolidina se somete a ultrasonicación a temperatura ambiente durante 10 minutos. La mezcla de reacción después se vierte en agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La trituración en éter/acetato de etilo (5/1) proporciona 56 mg (52%) de N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzooxaol-2-il] -2-pirrolidin-l-ilmetil-isonicotinamida como un sólido cristalino amarillo. ES-EM m/e (%) : 447 (M+H+, 100). De una manera análoga se obtiene: Ejemplo 27 N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -2-morfolin-4-ilmetilisonicotinamida A partir de 2-clorometil-N- [7- (4-fluorofenil) -4-metoxibenzoxazol-2-il] -isonicotinamida y morfolina. ES-EM m/e (%) : 463 (M+H+, 100) .
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.