MXPA05004820A - Acondicionadores y colorantes a base de peptidos para cabello, piel y unas. - Google Patents

Abstract

Se describen peptidos que se han identificado que se enlazan con alta afinidad al cabello, piel, y unas. Se describen acondicionadores, colorantes de cabello, acondicionadores de la piel, colorantes de la piel y colorantes de las unas basados en peptido. Los acondicionadores de cabello y colorantes de cabello basados en peptido consisten de un peptido que se enlaza al cabello acoplado al agente acondicionador de cabello o un agente colorante, respectivamente. Los acondicionadores de la piel y colorantes de la piel basados en peptido consiste de un peptido que se enlaza a la piel acoplado a un agente o colorante acondicionador de la piel, respectivamente. Los colorantes de unas basados en peptido consisten de un peptido que se enlaza a las unas acoplado a un agente colorante. En todas estas composiciones, el peptido puede acoplarse directamente al agente activo o el acoplamiento puede ser por medio de un espaciador. Tambien se describen composiciones de cuidado personal que contienen estos acondicionadores y colorantes basados en peptido.

Description

ACONDICIONADORES Y COLORANTES A BASE DE PEPTIDOS PARA CABELLO, PIEL Y UÑAS Campo de la Invención La invención se relaciona al campo de los productos de cuidado personal. Más específicamente, la invención se relaciona a acondicionadores para la piel, acondicionadores de cabello, colorantes de cabello, colorantes de uñas, y colorantes de piel basados en péptidos específicos que se enlazan a la piel, que se enlazan al cabello y que se enlazan a las uñas . Antecedentes de la Invención Las sustancias que forman película se usan ampliamente en composiciones para cuidado de piel y de cabello como agentes acondicionadores y humectantes, y para proteger la piel y cabello contra daño ambiental y químico. Estas sustancias se absorben sobre y/o se absorben dentro de la piel o el cabello, formando un recubrimiento protector. Las sustancias que forman película usadas comúnmente incluyen polímeros sintéticos, tales como silicones, polivinilpirrolidona, polímeros de ácido acrílico, y polisacáridos, y proteínas, tales como colágeno, queratina, elastina, caseína, seda y proteínas de soya. Muchas proteínas se conocen por ser agentes que forman película particularmente efectivos. Debido a su baja solubilidad en Ref . : 163051 las condiciones usadas en productos para el cuidado de la piel y el cabello, las proteínas se usan comúnmente en la forma de péptidos, formados por la hidrólisis de proteínas. En composiciones para cuidado de cabello y coloración del cabello, las sustancias que forman película se usan para formar una capa protectora en la superficie del cabello para protegerlo de daño debido a cepillado, peinado, uso de shampoo, y exposición a luz ultravioleta y los químicos reactivos comúnmente usados en agentes de ondulado permanente, productos de coloración de cabello, decolorantes, y alaciadores de cabello, los cuales desnaturalizan la proteína de queratina del cabello. Más aún, estas sustancias que forman película mejoran la elasticidad del cabello. Las sustancias que forman película que se han usado en productos para el cuidado del cabello incluyen proteínas, tales como queratina, colágeno, soya, y proteínas de seda e hidrolizados de estos, y materiales poliméricos, tales como poliacrilatos, aminas cuaternizadas de alquilo de cadena grande, y polímeros de siloxano. Por ejemplo, Cannell y colaboradores, en la Patente de EUA No. 6,013,250 describe una composición para cuidado del cabello para tratamiento del cabello contra daño químico y luz ultravioleta. Esa composición comprende proteína hidrolizada, que tiene una abundancia de aminoácidos aniónicos, particularmente, aminoácidos que contienen azufre, y cationes divalentes. En esa publicación se propone que los componentes aniónicos de la proteína hidrolizada se enlacen al cabello por medio de puentes catiónicos . Los aminoácidos y sus derivados también se han usado en composiciones para el cuidado del cabello para acondicionar y fortalecer el cabello. Por ejemplo, O'Toole y colaboradores, en WO 0051556 describe composiciones para el cuidado del cabello que contienen cuatro o más compuestos de aminoácido seleccionados de compuestos de histidina, lisina, metionina, tirosina, triptofano, y cisteína. Las sustancias que forman película también se usan en composiciones para el cuidado de la piel para formar una película protectora en la piel. Estas películas pueden servir para lubricar y recubrir la piel para impedir pasivamente la evaporación de humedad y alaciar y suavizar la piel. Las sustancias que forman película usadas comúnmente en composiciones para el cuidado de la piel incluyen proteínas animales y vegetales hidrolizadas (Puchalski y colaboradores, Patente de EUA No. 4,416,873, El-Menshawy y colaboradores, Patente de EUA No. 4,482,537, y Koj ima y colaboradores, JP 02311412) y proteínas de seda (Philippe y colaboradores, Patente de EUA No.- 6,280,747 y Fahnestock y colaboradores, la Solicitud de Patente copendiente de E.U.A No. 10/704337) . Los aminoácidos y derivados también se han usado en composiciones para el cuidado de la piel como agentes acondicionadores . Por ejemplo, Kojiman y colaboradores, en JP06065049 describen composiciones para el cuidado de la piel que contienen aminoácidos y/o sus derivados y ácidos docosahexaenóico, sus sales o sus esteres. Los agentes de coloración de cabello se pueden dividir en tres categorías, específicamente, permanente, semi-permanente o directa, y temporal. Los tintes para cabello permanentes generalmente son tintes oxidantes que proveen color al cabello que dura alrededor de cuatro a seis semanas. Estos tintes de cabello oxidantes consisten de dos partes, una parte contiene los tintes oxidantes además de otros ingredientes, mientras que la segunda parte contiene un agente de oxidación tal como peróxido de hidrógeno. Los dos componentes se mezclan inmediatamente antes de usarse. El agente de oxidación oxida los precursores del tiente, que después combinan para formar moléculas de color grandes dentro del largo del cabello. Aunque los tintes para cabello oxidantes proveen color de larga duración, los agentes de oxidación que ellos contienen provocan daño al cabello. Los tientes de cabello semi-permanentes o directos se desarrollan por moléculas de tinte que se aplican al cabello y proveen color por alrededor de seis a doce lavadas con champú. Este tipo de tinte de cabello es más noble para el cabello debido a que estos no contienen peróxidos, pero el color del cabello no dura mucho. Se logra alguna durabilidad mejorada por el uso de materiales de coloración del cabello de nanopartículas con un tamaño de partícula de 10 a 500 nm, como se describió por Hensen y colaboradores, en WO 01045652. Estos materiales de coloración de cabello de nanoparticulas son tintes de cabello directos convencionales que son tratados para obtener dimensiones a nanoescala y exhiben absorción incrementada en el cabello. Los tintes de cabello temporales son agentes de coloración que se aplican a la superficie del cabello y se remueven después de una lavada. Es deseable desarrollar un agente de coloración del cabello que provea la durabilidad de los tintes de cabello permanentes sin el uso de agentes de oxidación que dañen el cabello. El principal problema con las composiciones para cuidado de piel y cuidado de cabello actuales, tintes de cabello no oxidantes, además de agentes de coloración de uñas es que carecen de la durabilidad requerida para efectos de larga duración. Por esta razón, han existido inventos para mejorar el enlace del agente cosmético al cabello, piel o uñas. Por ejemplo, Richardson y colaboradores, en la Patente de EUA No. 5,490,980 y Green y colaboradores, en la Patente de EUA No. 6,267,957 describen el enlace covalente de los agentes cosméticos, tales como acondicionadores para la piel, acondicionadores de cabello, agentes de coloración, protectores solares y perfumes, al cabello, piel, y uñas usando la enzima de transglutaminasa . Esta enzima retícula a una porción de amina en el agente cosmético a los residuos de glutamina en la piel, cabello, y uñas. Similarmente, Green y colaboradores, en O 0107009 describe el uso de la enzima lisina oxidasa para enlazar covalentemente agentes cosméticos al cabello, piel, y uñas. En otro método, los agentes cosméticos se han enlazado covaleíitemente a las proteínas o hidrolizados de proteína. Por ejemplo, Lang y colaboradores, en la Patente de EUA No. 5,192,332 describe las composiciones de coloración temporales que contienen una proteína animal o vegetal, o hidrolizados de estas, las cuales contienen residuos de moléculas de tinte injertadas sobre la cadena de la proteína. En estas composiciones, la proteína sirve como un agente acondicionador y no mejora el enlace del agente cosmético al cabello, piel o uñas. Horikoshi y colaboradores, en JP 08104614 e Igarashi y colaboradores, en la Patente de EUA No. 5,597,386 describe agentes de coloración de cabello que consisten de un anticuerpo de anti-queratina enlazado covalentemente al tinte o pigmento. El anticuerpo se enlaza al cabello, mejorando de esa manera el enlace del agente de coloración de cabello al cabello. Similarmente, Kizawa y colaboradores, en JP 09003100 describe un anticuerpo que reconoce la capa de superficie de cabello y su uso para tratar el cabello. También se describe un agente de coloración de cabello que consiste de ese anticuerpo anti-cabello acoplado a las partículas de látex coloreadas. El uso de anticuerpos para mejorar el enlace de tintes al cabello es efectivo en el incremento de la durabilidad de la coloración del cabello, pero estos anticuerpos son difíciles y caros de producir. Terada y col boradores, en JP 2002363026 describe el uso de conjugados que consisten de anticuerpos de cadena sencilla, preferiblemente anti-queratina, acoplados a tintes, ligandos y agentes cosméticos para composiciones para el cuidado de la piel y el cabello. Los anticuerpos de cadena sencilla se pueden preparar usando técnicas de ingeniería genética, pero todavía son difíciles y caros de preparar debido a su gran tamaño. Fíndlay en WO 00048558 describe el uso de proteínas de calicina, tales como ß-lactoglobulina, las cuales contienen un dominio' de enlace para un agente cosmético y otro dominio de enlace que enlaza a por lo menos una parte de la superficie de una fibra de cabello o superficie de piel, para acondicionadores, tintes, y perfumes. Nuevamente estas proteínas son grandes y difíciles y caras de producir. Linter en la Patente de EUA No. 6,620,419 describe péptidos injertados a una cadena de ácido graso y su uso en aplicaciones cosméticas y dermofarmacéuticas . Los péptidos descritos en esa publicación están seleccionados debido a que estimulan la síntesis de colágeno; no son péptidos de enlace específico que mejoren la durabilidad de los acondicionadores de cabello y piel, y colorantes de cabello, uñas, y piel. , dada como SEQ ID NO: 1, y ón en 1985, el despliegue de fagos ha enlaza a la piel y no al o para descubrir una "variedad de 2. Usando el mismo método, péptidos, proteínas y moléculas 04048399) identificó otros de fármacos (Dixit, J of Sci. & Ind. piel y que se enlazan al (1998)). Las aplicaciones se han íes de enlace . Aunque el uso tales como estudio de multiplicación iplicaciones para el cuidado s catalíticas novedosas, proteínas de uellas publicaciones, el ificidades novedosas, y andamiajes de péptidos para agentes de TÍ péptidos novedosos para ingeniería donadores para preparar . ev. 101:3205-3218 (2001) y Colmes, lo de alta afinidad, 6-21 (2002)). Whaley y colaboradores, , colorantes de cabello, 0) ) desglosa el uso de separación por de piel no se describe . Un e de fagos para identificar las :s de péptido de fago de alta ue pueden enlazar específicamente a . aquellas publicaciones. El istalográficas de sustratos de •ara identificar péptidos que después de elución de ácido. ración por exclusión modificado que .6-21 (2002) ) reporta que una .ia colección de péptido con un anti- para tener por objetivo un áptidos que enlazan al anti -objetivo ¡pecífico se ha desarrollado péptidos no enlazados con el objetivo ersonal . Sin embargo, no se y colaboradores, WO 0179479, Murray y icondicionadores basados en 5n de Solicitud de Patente de EUA No. en esa publicación. i y colaboradores, Publicación de enlace de péptidos de la ; EUA No. 2003/152976) . Usando ese ) ID NO: 3, se ha reportado i una secuencia de péptido que se para otros varios propósitos. Por ejemplo, Hupp y colaboradores, en WO 02065134 desglosa la secuencia de péptido SEQ ID NO: 3 como un péptido para uso en modulación del enlace de un polipéptido p53 a un polipéptido p300, útil para regulación del ciclo de célula mamífero o para inducir o prevenir la muerte de células. Liu y colaboradores, en la Patente de E.U.A. No. 6,344,443 describe el uso de esa misma secuencia de péptido para inhibir el enlace del factor de necrosis de tumor alfa a su receptor para prevención o cambios inflamatorios inversos en pacientes con artritis y otras enfermedades inflamatorias. Otra secuencia de enlace de péptido de la invención actual, dada como SEQ ID NO: 4, se reportó por Jagota y colaboradores, en WO 03102020 como un péptido de enlace de nanotubo de carbono. En vista de lo anterior, existe una necesidad para los acondicionadores de cabello y piel, y colorantes de cabello, uñas y piel que provean durabilidad mejorada para efectos de larga duración y sean fáciles y económicos para preparar. Los solicitantes han cubierto las necesidades establecidas por identificación de secuencias de pép idos que usan separación por exclusión de despliegue de fagos que se enlazan específicamente al cabello, piel, y uñas con alta afinidad y que los usan para diseñar acondicionadores de cabello basados en péptido, acondicionadores para la piel, colorantes de cabello, colorantes de uñas, y colorantes de piel.

Breve Descripción de la Invención La invención proporciona secuencias de péptido que se enlazan con alta afinidad al cabello, piel y uñas. La invención también provee acondicionadores basados en péptidos y colorantes para cabello, piel y uñas. En una modalidad, los acondicionadores a base de péptidos y colorantes son composiciones dibloque. En consecuencia la invención proporciona un péptido que se enlaza a cabello seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 1S, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23 , 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 , 34 , 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 , 59, 64, 66, 69, y 70. Similarmente la invención proporciona un péptido de enlace de uñas como se establece en la SEQ ID NO: 60. En otra modalidad la invención proporciona un péptido de enlace a la piel como se establece en la SEQ ID NO: 61. En una modalidad preferida la invención proporciona un acondicionador de cabello a base de péptido dibloque que tiene la estructura general (HBP)n-HCA, en donde a) HBP es un péptido que se enlaza al cabello; b) HCA es un agente acondicionador del cabello; y c) n varía desde 1 hasta alrededor de 1000. Similarmente la invención proporciona un acondicionador de piel basado en péptido dibloque que tiene la estructura general (SBP)n-SCA, en donde a) SBP es un péptido que se enlaza la piel; b) SCA es un agente acondicionador de la piel; y c) n varía desde 1 hasta alrededor de 1000. En una modalidad alterna la invención proporciona un colorante de -cabello basado en péptido dibloque que tiene la estructura general (HBP)n-C, en donde a) HBP es un péptido que se enlaza al cabello; b) C es un agente de coloración; y c) n varía desde 1 hasta alrededor de 10,000. En otra modalidad la invención proporciona un colorante de uñas basado en péptido dibloque que tiene la estructura general (NBP)n-C, en donde a) NBP es un péptido que se enlaza a las uñas; b) C es un agente de coloración; y c) n varía desde 1 hasta alrededor de 10,000. En otra modalidad la invención proporciona un colorante de piel basado en péptido dibloque que tiene la estructura general (SBP)n-C, en donde a) SBP es un péptido que se enlaza a la piel; b) C es un agente de coloración; y c) n varía desde 1 hasta alrededor de 10,000.

En una modalidad similar la invención proporciona un acondicionador de cabello a base de péptido tribloque que tiene la estructura general [ (HBP) m-S] n-HCA, en donde a) HBP es un péptido que se enlaza al cabello; b) HCA es un agente acondicionador del cabello; c) S es un espaciador; d) m varía desde 1 hasta alrededor de 50; y e) n varía desde 1 hasta alrededor de 1000. Alternativamente la invención proporciona un acondicionador de piel basado en péptido tribloque que tiene la estructura general [ (SBP) m-S] n-SCA, en donde a) SBP es un péptido que se enlaza al cabello; b) SCA es un agente acondicionador de la piel; c) S es un espaciador; d) m varía desde 1 hasta alrededor de 50; y e) n varía desde 1 hasta alrededor de 1000. Similarmente la invención proporciona un colorante de cabello basado en péptido tribloque que tiene la estructura general [ (HBP) m-S] n-C, en donde a) HBP es un péptido que se enlaza al cabello; b) C es un agente de coloración; c) S es un espaciador; d) m varía desde 1 hasta alrededor de 50; y e) n varía desde 1 hasta alrededor de 10,000. En otra modalidad la invención proporciona un colorante de uñas basado en peptido tribloque que tiene la estructura general [ (NBP) m-S] n-C, en donde a) NBP es un péptido que se enlaza al cabello; b) C es un agente de coloración; c) S es un espaciador; d) m varía desde 1 hasta alrededor de 50; y e) n varía desde 1 hasta alrededor de 10,000. En otra modalidad la invención proporciona un colorante de piel basado en péptido tribloque que tiene la estructura general [ (SBP) ra-S] n-C, en donde a) SBP es un péptido que se enlaza al cabello; b) C es un agente de coloración; c) S es un espaciador; d) m varía desde 1 hasta alrededor de 50; y e) n varía desde 1 hasta alrededor de 10,000. Adicionalmente la invención proporciona el método para generación de un péptido que se enlaza a cabello, piel o uñas de alta afinidad que comprende las etapas de : a) proveer una colección de fago-péptidos generados combinatorios ; b) poner en contacto la colección de a) con una muestra de cabello, piel o uñas para formar una solución de reacción que comprende : (i) complejos fago-péptido-cabello, fago-péptido-piel, o fago- péptido-uñas ; (ii) cabello piel o uñas no enlazadas, y (iii) péptidos no en complejo; c) el aislamiento de los complejos fago-péptido-cabello, fago-péptido-piel , o fago- péptido-uñas de (b) ; d) elución de los fago-péptidos enlazados débilmente desde el complejo de péptido fago de (b) ; e) infección de células hospedadoras bacteriales directamente con los complejos fago-péptido-cabello, fago-péptido-piel , o fago- péptido-uñas que permanecen después de la etapa (d) ; f) crecimiento de las células infectadas de la etapa (e) en un medio de crecimiento apropiado; y g) aislamiento e identificación de los fago-péptidos de las células de crecimiento de la etapa (f) , en donde los fago-péptidos tienen una afinidad de enlace alta para cabello, piel, o uñas. En una modalidad preferida la invención proporciona métodos para formación de una capa protectora de un acondicionador a base de péptido en cabello que comprende la aplicación de la composición de la invención al cabello y permite la formación de la capa protectora. Similarmente la invención proporciona métodos para la formación de una capa protectora de un acondicionador a base de péptido en piel o labios que comprende la aplicación de la composición de la invención a la piel o los labios y permite la formación de la capa protectora. En otra modalidad la invención proporciona un método para coloración de cabello, cejas, piel o uñas que comprende la aplicación de la composición de coloración de cabello, cejas, piel o uñas de la invención al cabello, cejas, piel o uñas por un período de tiempo suficiente para provocar la coloración del cabello, cejas, piel o uñas. En una modalidad preferida la invención proporciona un método para coloración de cabello, cejas o pestañas que comprende las etapas de: a) proveer una composición de coloración de cabello que comprenden un colorante de cabello seleccionado del grupo que consiste de: i) (HBP)n-C; y ii) [ (HBP)ra-S]k-C en donde 1) HBP es un péptido que se enlaza al cabello; 2) C'es un agente de coloración; 3) n varia desde 1 hasta alrededor de 10,000; 4) S es un espaciador; 5) m varía desde 1 hasta alrededor de 50; y 6) k varía desde 1 hasta alrededor de 10,000; y en donde el péptido que se enlaza al cabello se selecciona por un método que comprende las etapas de: A) proveer una colección de fago-péptidos generados por combinación; B) poner en contacto la colección de (A) con una muestra de cabello para formar una solución de reacción que comprende : (i) complejo fago-péptido-cabello; (ii) cabello no enlazado, y (iii) péptidos no en complejo; C) aislamiento del complejo fago-péptidos-cabello de (B) ; D) elución de los péptidos enlazados débilmente del complejo de péptido de (B) ; E) identificación de los fago-péptidos enlazados que permanecen ya sea por el uso de la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo fago-péptido-cabello que permanece después de la etapa (D) , o por infección de células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo fago-péptido-cabello que permanece después de la etapa (D) , creciendo las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislando e identificando los fago-péptidos de las células de crecimiento, en donde los fago-péptidos son desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tienen una afinidad de enlace para el cabello, como se midió como MB50( igual o menor que 10"5 M; y b) aplicación del colorante de cabello de (a) al cabello, cejas o pestañas por un tiempo suficiente para que el colorante a base de peptido se enlace al cabello, cejas o pestañas . En otra modalidad la invención proporciona un método para formación de una capa protectora de un acondicionador a base de peptido en cabello que comprende las etapas de: a) proveer una composición para cuidado de cabello que comprenden un acondicionador de cabello seleccionado del grupo que consiste., de : i) (HBP) n-HCA; y ii) [ (HBP)m-S]k-HCA en donde 1) HBP es un péptido que se enlaza al cabello; 2) HCA es un agente acondicionador de cabello; 3) n varía desde 1 hasta alrededor de 1000; 4) S es un espaciador; 5) m varia desde 1 hasta alrededor de 50; y 6) k varia desde 1 hasta alrededor de 1000; y en donde el péptido que se enlaza al cabello se selecciona por un método que comprende las etapas de: A) proveer una colección de fago-péptidos generados por combinación; B) poner en contacto la colección de (A) con una muestra de cabello para formar una solución de reacción que comprende : (i) complejo fago-péptido-cabello; (ii) cabello no enlazado, y (iii) péptidos no en complejo; C) aislamiento del complejo fago-péptidos-cabello de (B) ; D) elución de los péptidos enlazados débilmente del complejo de péptido de (B) ; E) identificación de los fago-péptidos enlazados que permanecen ya sea por el uso de la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo fago-péptido-cabello que permanece después de la etapa (D) , o por infección de células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo fago-péptido-cabello que permanece después de la etapa (D) , creciendo las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislando e identificando los fago-péptidos de las células de crecimiento, erí donde los fago-péptidos son desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tienen una afinidad de enlace para el cabello, como se midió como MB50, igual o menor que 10~5 M; y b) aplicación del acondicionador de cabello de (a) al cabello y permitir la formación de la capa protectora. Alternativamente la invención proporciona un método para formación de una capa protectora en piel o labios que comprende las etapas de: a) proveer una composición para cuidado de la piel que comprenden un acondicionador de piel seleccionado del grupo que consiste de: i) (SBP)n-SCA; y ii) [ (SBP)m-S]k-SCA en donde 1) SBP es un péptido que se enlaza a la piel; 2) SCA es un agente acondicionador de la piel; 3) n varia desde 1 hasta alrededor de 1,000; 4) S es un espaciador; 5) m varía desde 1 hasta alrededor de 50; y 6) k varia desde 1 hasta alrededor de 1,000; y en donde el péptido que se enlaza a la piel se selecciona por un método que comprende las etapas de: A) proveer una colección de fago-péptidos generados por combinación; B) poner en contacto la colección de (A) con una muestra de piel para formar una solución de reacción que comprende : (i) complejo fago-péptido-piel ; (ii) piel no enlazada, y (iii) péptidos no en complejo; C) aislamiento del complejo fago-péptidos- piel de (B) ; D) elución de los péptidos enlazados débilmente del complejo de péptido de (B) ; E) identificación de los fago-péptidos enlazados que permanecen ya sea por el uso de la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo fago-péptido- piel que permanece después de la etapa (D) , o por infección de células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo fago-péptido-piel que permanece después de la etapa (D) , creciendo las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislando e identificando los fago-péptidos de las células de crecimiento, en donde los fago-péptidos son desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tienen una afinidad de enlace para la piel, como se midió como MB50, igual o menor que 10"5 M; y b) aplicación del acondicionador de piel de (a) a la piel o labios y permitir la formación de la capa protectora.

En otra modalidad la invención proporciona un método para coloración de piel o labios que comprende las etapas de : a) proveer una composición cosmética que comprenden un colorante de piel seleccionado del grupo que consiste de: i) (SBP)n-C; y ii) [(SBP)m-S]k-C en donde 1) SBP es un péptido que se enlaza a la piel; 2) C es un agente de coloración de piel; 3) n varía desde 1 hasta alrededor de 10,000; 4) S es un espaciador; 5) m varía desde 1 hasta alrededor de 50; y 6) k varía desde 1 hasta alrededor de 10,000; y en donde el péptido que se enlaza a la piel se selecciona por un método que comprende las etapas de: A) proveer una colección de fago-péptidos generados por combinación; B) poner en contacto la colección de (A) con una muestra de piel para formar una solución de reacción que comprende : (i) complejo fago-péptido-piel ; (ii) piel no enlazada, y (iii) péptidos no en complejo; C) aislamiento del complejo fago-péptidos-piel de (B) ; D) elución de los péptidos enlazados débilmente del complejo de péptido de (B) ; E) identificación de los fago-péptidos enlazados que permanecen ya sea por el uso de la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo fago-péptido-piel que permanece después de la etapa (D) , o por infección de células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo fago-péptido-piel que permanece después de la etapa (D) , creciendo las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislando e identificando los fago-péptidos de las células de crecimiento, en donde los fago-péptidos son desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tienen una afinidad de enlace para la piel, como se midió como MB50, igual o menor que 10"5 M; y b) aplicación del colorante de piel de (a) a la piel o labios. Alternativamente la invención proporciona un método para coloración de uñas que comprende las etapas de : a) proveer una composición para pintar uñas que comprenden un colorante de uñas seleccionado del grupo que consiste de: i) ( BP)n-C; y ii) [ (NBP)m-S]k-C en donde 1) NBP es un péptido que se enlaza a uñas; 2) C es un agente de coloración; 3) n varía desde 1 hasta alrededor de 10,000; 4) S es un espaciador; 5) m varía desde 1 hasta alrededor de 50; y 6) k varía desde 1 hasta alrededor de 10,000; y en donde el péptido que se enlaza a uñas se selecciona por un método que comprende las etapas de: A) proveer una colección de fago-péptidos generados por combinación; B) poner en contacto la colección de (A) con una muestra de uñas para formar una solución de reacción que comprende: (i) complejo fago-péptido-uñas ; (ii) uñas no enlazada, y (iii) p ptidos no en complejo; C) aislamiento del complejo fago-péptidos-uñas de (B) ; D) elución de los péptidos enlazados débilmente del complejo de péptido de (B) ; E) identificación de los f go-péptidos enlazados que permanecen ya sea por el uso de la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo fago-péptido-uñas que permanece después de la etapa (D) , o por infección de células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo fago-péptido-uñas que permanece después de la etapa (D) , creciendo las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislando e identificando los fago-péptidos de las células de crecimiento, en donde los fago-péptidos son desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tienen una afinidad de enlace para las uñas, como se midió como MB50 igual o menor que 10~5 M; y b) aplicación del colorante de uñas de (a) a las uñas.

Breve Descripción de las Descripciones de Secuencia La invención puede ser entendida más completamente de la siguiente descripción detallada y las descripciones de secuencia que acompañan, las cuales forman una parte de esta solicitud. Las siguientes secuencias se conforman con 37 C.F.R. 1.821-1.826 ( "Requirimientos para solicitudes de Patente que contienen descripciones de secuencias de nucleótidos y/o secuencias de aminoácidos - Reglas de la Secuencia") y el Estándar ST.25 (1998) de la Organización Mundial de Propiedad Intelectual (OMPI) y los requerimientos de listado de secuencias de la EPO y PCT (Reglas 5.2 y 49.5 (a-bis) , y la Sección 208 y Anexo C de las Instrucciones Administrativas) . Los símbolos y formato usados para datos de secuencia de nucleótido y aminoácido cumplen con las reglas establecidas en 37 C.F.R. ? 1.822. SEQ ID NO:l es la secuencia de aminoácido de un peptido que enlaza cabello. SEQ ID NO: 2 es la secuencia de aminoácido de un peptido que enlaza piel . SEQ ID NOs:3-52, 54-59 son las secuencias de aminoácido de péptidos que enlazan cabello de la presente invención. SEQ ID NO: 53 es la secuencia de aminoácido de un péptido que enlaza cabello y que enlaza uñas de la presente invención. SEQ ID NO: 60 es la secuencia de aminoácido de un péptido que enlaza uñas de la presente invención. SEQ ID NO: 61 es la secuencia de aminoácido de un péptido que enlaza piel de la presente invención.

SEQ ID NO: 62 es el oligonucleótido cebador usado para secuenciar el ADN fago. SEQ ID NO: 63 es la secuencia de aminoácido de un péptido usado como un control en el ensayo de enlace ELISA. SEQ ID NO: 64 es la secuencia de aminoácido de un péptido que enlaza cabello acoplado a cisteína. SEQ ID NO: 65 es la secuencia de aminoácido del sitio de desdoblamiento de Caspasa 3. SEQ ID NOs : 66, 69 y 70 son las secuencias de aminoácido de péptidos que se enlazan al cabello, resistentes al lavado con champú . SEQ ID NOs : 67 y 68 son las secuencias de nucleótidos de los cebadores usados para amplificar los fago péptidos que se enlazan al cabello, resistentes al lavado con champú, como se describió en el Ejemplo 8. SEQ ID NOs: 71-74 son las secuencias de aminoácido de péptidos que se enlazan al cabello y que se enlazan a la piel biotinilados usados en el Ejemplo 9. SEQ ID NO: 75 es la secuencia de aminoácido del péptido D21 completamente protegido usado en el Ejemplo 16. SEQ ID NOs : 76-98 son las secuencias de aminoácido de péptidos que se enlazan al cabello. SEQ ID NOs: 99-104 son las secuencias de aminoácido de péptidos que se enlazan a la piel .

Descripción Detallada de la Invención La presente invención provee secuencias de péptido que específicamente se enlazan a cabello, piel y uñas humanos con alta afinidad. Adicionalmente, la presente invención provee acondicionadores de cabello y piel basados en péptido, y colorantes de cabello, uñas y piel con durabilidad mejorada.

Las siguientes definiciones se usan aquí y deben ser referidas para la interpretación de las reivindicaciones y la especificación. "HBP" significa péptido que enlaza al cabello. "SBP" significa péptido que enlaza a la piel. "NBP" significa péptido que enlaza a las uñas. "HCA" significa agente acondicionador del cabello. "SCA" significa agente acondicionador de la piel. "C" significa agente colorante para cabello, piel o uñas.

"S" significa espaciador. El término "péptido" se refiere a dos o más aminoácidos unidos uno al otro por enlaces de péptido o enlaces de péptido modificados . El término "cabello" como se usó aquí se refiere a cabello, cejas, y pestañas humanas. El término "piel" como se usó aquí se refiere a piel humana, o piel de cerdo, Vitro-Skin® y EpiDerm™ las cuales son sustitutos de piel humana. El término "uñas" como se usó aquí se refiere a uñas de los dedos de la mano y del pie. El término "severidad" como se aplicó a la selección de los péptidos que se enlazan al cabello, que se enlazan a la piel, y que se enlazan a las uñas de la presente invención, se refiere a la concentración del agente de elución (usualmente detergente) usado para eluir péptidos del cabello, piel o uñas. Las concentraciones más altas del agente de elución proveen condiciones más severas . El término "complejo péptido-cabello" significa la estructura que comprende un péptido enlazado a una fibra de cabello mediante un sitio de enlace en el péptido. El término "complejo péptido-piel" significa la estructura que comprende un péptido enlazado a la piel mediante un sitio de enlace en el péptido. El término "complejo péptido-uñas" significa la estructura que comprende un péptido enlazado a uñas de la mano o del pie mediante un sitio de enlace en el péptido. El término "complejo péptido-sustrato" se refiere a cualquiera de los complejos péptido-cabello, péptido-piel, o péptido-uñas. El término "MB50" se refiere a la concentración del péptido que enlaza que da una señal que es 50% de la señal máxima obtenida en un ensayo de enlace basado en ELISA, como se describió en el Ejemplo 9. El MB50 provee una indicación de la fuerza de la interacción de enlace o afinidad de los componentes del complejo. Entre más bajo el valor de MBS0, más fuerte la interacción del péptido con su sustrato que corresponde . El término "afinidad de enlace" se refiere a la fuerza de la interacción de un péptido de enlace con su sustrato respectivo. La afinidad de enlace se define aquí en términos del valor MB50, determinado en un ensayo de enlace basado en ELISA. El término "aminoácido" se refiere a la unidad estructural química básica de una proteína o polipéptido. Las siguientes abreviaciones se usan aquí para identificar aminoácidos específicos: Abreviación Abreviación Aminoácido de Tres Letras de Una Letra Alaniña Ala A Arginina Arg R Asparagina Asn N Ácido Aspártico Asp D Cisteína Cys C Glutamina Gln Q Ácido Glutámico Glu E Glicina Gly G Histidina His H Isoleucina lie I Leucina Leu L Lisina . . Lys K Metionina Met M Fenilalanina Phe F Prolina Pro P Serina Ser S Treonina T r T Triptofano Trp w Tirosina Tyr ? Valina Val V "Gen" se refiere a un fragmento de ácido nucleico que expresa una proteína específica, que incluye secuencias reguladoras que preceden (secuencias no codificación 5') y que continúan (secuencias no codificación 3') la secuencia que codifica. El "gen nativo" se refiere a un gen como se encontró en la naturaleza con sus propias secuencias reguladoras. "Gen quimérico" se refiere a cualquier gen que no es un gen nativo, que comprende secuencias reguladoras y de codificación que no se encuentran juntos en la naturaleza. En consecuencia, un gen quimérico puede comprender secuencias reguladoras y secuencias de codificación que son derivadas de fuentes diferentes, o secuencias reguladoras y secuencias de codificación derivadas de la misma fuente, pero arregladas de una manera diferente que aquella encontrada en la naturaleza. Un gen "externo" se refiere a un gen que normalmente no se encuentra en el organismo hospedador, pero que se introduce en el organismo hospedador por transferencia de gen. Los genes externos pueden comprender genes nativos insertados en un organismo no nativo, o genes quiméricos. Los "genes sintéticos" pueden estar ensamblados de bloques de construcción de oligonucleótido que son sintetizados químicamente usando procedimientos conocidos por aquellos expertos en la técnica. Estos bloques de construcción se ligan y combinan en sus pares base para formar segmentos de gen los cuales son luego ensamblados enzimáticamente para construir el gen completo. "Sintetizado químicamente", como se relaciona a una secuencia de ADN, significa que los nucleótidos componentes se ensamblan in vitro. La síntesis química manual de ADN se puede lograr usando procedimientos bien establecidos, o puede ser realizada síntesis química automatizada usando una de un sinnúmero de máquinas disponibles comercialmente . En consecuencia, los genes pueden ser ajustados para expresión de gen óptima basada en la optimización de secuencia de nucleótido para reflejar las desviaciones de codón de la célula hospedadora. El técnico experto apreciará la probabilidad de expresión del gen exito'sa si el uso del codón está dirigido hacia aquellos codones favorecidos por el hospedador. La determinación de los codones preferidos puede estar basada en una sobre vivencia de genes derivados de la célula ospedadora donde la información de secuencia está disponible . "Secuencia de codificación" se refiere a una secuencia de ADN que codifica para una secuencia de aminoácido específica. "Secuencias reguladoras apropiadas" se refiere a las secuencias de nucleótido localizadas en la dirección 5' (secuencias no codificación 5'), dentro, o en la dirección 3' (secuencias no codificación 3') de' una secuencia de codificación, y la cual influye la transcripción, procesamiento de ARN o estabilidad, o traducción de la secuencia de codificación asociada. Las secuencias reguladoras pueden incluir promotores, secuencias líderes de traducción, intrones, secuencias de reconocimiento de poliadenilación, sitio de procesamiento de ARN, sitio de enlace de efector y estructura de ciclo-detención. "Promotor" se refiere a una secuencia de ADN capaz de controlar la expresión de una secuencia que codifica o de ARN funcional. En general, una secuencia de codificación está localizada 3' hacia una secuencia promotora. Los promotores pueden ser derivados en su totalidad de un gen nativo, o estar compuestos de diferentes elementos derivados de promotores diferentes encontrados en la naturaleza, o aún comprende segmentos de ADN sintéticos. Se entiende que por aquellos expertos en la técnica que los diferentes promotores pueden dirigir la expresión de un gen en diferentes tejidos o tipos de células, o en diferentes etapas de desarrollo, o en respuesta a diferentes condiciones ambientales o fisiológicas . Los promotores que provocan que un gen sea expresado en la mayoría de los tipos de célula en la mayoría de las veces se refieren comúnmente como "promotores constitutivos" . Además se reconoce que puesto, que el la mayoría de los casos los límites exactos de secuencias reguladoras no han sido definidas completamente, los fragmentos de ADN de longitudes diferentes pueden tener actividad promotora idéntica. El término "expresión", como se usó aquí, se refiere a la trascripción y acumulación estable de sentido (ARNm) o antisentido ARN derivado del fragmento de ácido nucleico de la invención. La expresión también se puede referir a la traslación del ARNm en un polipéptido. El término "transformación" se refiere a la transferencia de un fragmento de ácido nucleico en el genoma de un organismo hospedador, que resulta en herencia genéticamente estable. Los organismos hospedadores que contienen los fragmentos de ácido nucleico transformados son referidos como "transgénicos" o "recombinantes" u organismos "transformados" . El término "célula hospedadora" se refiere a la célula que ha sido transformada o transfectada, o es capaz de transformación o transfección por una secuencia de polinucleótido exógeno. Los términos ¾plásmido" , "vector" y "cásete" se refieren a un elemento cromosomal extra que portan a menudo genes los cuales no son parte del metabolismo central de la célula, y usualmente en la forma de moléculas de ADN de doble hebra circular. Los elementos pueden ser secuencias de replicación autónoma, secuencias de integración de genoma, secuencias de fago o nucleótido, lineal o circular, de un ADN o ARN de hebra doble o sencilla, derivado de cualquier fuente, en la cual han sido unidas o recombinadas un sinnúmero de secuencias de nucleótido en una construcción única la cual es capaz de introducir un fragmento promotor y la secuencia de ADN para un producto de gen seleccionado a lo largo con la secuencia no traducida 3' apropiada dentro de una célula. "Cásete de transformación" se refiere a un vector específico que contiene un gen externo y tiene elementos además del gen externo que facilitan la transformación de una célula hospedadora particular. "Cásete de Expresión" se refiere a un vector específico que contiene un gen externo y que tiene elementos además del gen externo que permiten la expresión mejorada de ese gen en un hospedador externo. El término "fago" o "bacteriófago" se refiere a un virus que infecta bacterias . Las formas alteradas pueden ser usadas para el propósito de la presente invención. El bacteriófago preferido se deriva del fago "silvestre", llamado M13. El sistema M13 puede crecer dentro de una bacteria, de manera que esta no destruye la célula que este infecta pero provoca que este produzca fagos nuevos continuamente. Es un fago de ADN de hebra simple. El término "despliegue de fagos" se refiere a la exhibición de los péptidos externos funcionales o proteínas pequeñas en la superficie del bacteriófago o partículas fagémidas . Genéticamente el fago diseñado puede ser usado para presentar péptidos como segmentos de sus proteínas de superficie nativa. Las bibliotecas de péptido pueden ser producidas por poblaciones de fagos con diferentes secuencias de genes . La "PCR" o "reacción de cadena de polimerasa" es una técnica usada para la amplificación de segmentos de ADN específicos (Patente de E.U.A. No. 4,683,195 y 4,800,159). El ADN recombinante estándar y las técnicas de clonación molecular usadas aquí son bien conocidas en la técnica y se describen por Sambrook, J. , Fritsch, E. F. y aniatis, T. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989) (de aquí en adelante "Maniatis"); y por Silhavy, T. J., Bennan, M. L. y Enquist, L. W. , Experiments with Gene Funsions, Cold Spring Harbor Laboratory Cold Press Spring Harbor, NY (1984); y por Ausubel, F. M. y colaboradores, Current Protocols in Molecular Biology, Publisher by Greene Publishing Assoc. And Wiley-Interscience (1987). La presente invención comprende péptidos que se enlazan al cabello, que se enlazan a la piel, y que se enlazan a las uñas específicos y su uso en acondicionadores y agentes de coloración para el cabello, piel y uñas.

Cabello, Piel y Uñas. Las muestras de cabello humano están disponibles comercialmente , por ejemplo de International Hair Importers and Products (Bellerose, NY) , en diferentes colores, tales como café, negro, rojo y rubio, y en varios tipos, tales como Afro-Americano, Caucásico, y Asiático. Además, las muestras de cabello se pueden tratar por ejemplo usando peróxido de hidrógeno para obtener cabello decolorado. La piel de cerdo, disponible de tiendas de carnicería y supermercados, Vitro-Skin®, disponibles de IMS Inc. (Milford, CT) , y EpiDerm ™, disponible de MatTec Corp. (Ashland, MA) , son buenos sustitutos para piel humana. Las Uñas de dedos y de pies humanos pueden ser obtenidas de voluntarios.

Péptidos que se Enlazan al Cabello, que se Enlazan a la Piel, y que se Enlazan a las Uñas . Los péptidos que se enlazan al cabello (HBP) , los péptidos que se enlazan a la piel (SBP) y los péptidos que se enlazan a las uñas (NBP) como se definió aquí son secuencias de péptido que específicamente se enlazan con alta afinidad al cabello, piel y uñas, respectivamente. Los péptidos que se enlazan al cabello, que se enlazan a la piel y que se enlazan a las uñas de la presente invención son desde alrededor de 7 aminoácidos hasta alrededor de 45 aminoácidos, más preferiblemente desde alrededor de 7 hasta alrededor de 20 aminoácidos, más preferiblemente desde alrededor de 7 hasta alrededor de 12 aminoácidos . Los péptidos que enlazan de la invención tienen una afinidad de enlace para su respectivo sustrato, como se midió por valores de MBSo, de menores que o iguales a alrededor de 10"2 M, menores que o iguales a alrededor de 10"4 M, menores que o iguales a alrededor de 10"5 M, menores que o iguales a alrededor de 10"6 M, y más preferiblemente menores que o iguales a alrededor de 10"7 M. Las secuencias de péptido que se enlazan al cabello, que se enlazan a la piel y que se enlazan a las uñas apropiadas pueden ser seleccionadas usando métodos que son bien conocidos en la técnica. Los péptidos de la presente invención se generan aleatoriamente y luego se seleccionan contra una muestra de cabello, piel, o uñas basado en su afinidad de enlace para el sustrato de interés . La generación de bibliotecas aleatorias de péptidos es bien conocida y puede lograrse por una variedad de técnicas que incluyen, despliegue bacteriano (Kemp, D. J. ; Proc. Nati. Acad. Sci E.U.A. 78 (7) :4520-4524 (1981), y Helfman y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci E.U.A. 80(l):31-35, (1983)), despliegue de levadura (Chien y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci E.U.A. 88 (21) :9578-82 (1991)), síntesis de péptido de fase sólida combinatoria (Patente de E.U.A. No. 5,480,971, Patente de E.U.A. No. 5,585,275, Patente de E.U.A. No. 5,639,603), y tecnología de despliegue de fagos (Patente de E.U.A. No. 5,223,409, Patente de E.U.A. No. 5,403,484, Patente de E.U.A. No. 5,571,698, Patente de E.U.A. No. 5,837,500). Las técnicas para generar las bibliotecas de péptido biológicas se describen en Dani, M. , J. de Receptor & Signal Transduction Res . , 21 (4) : 47-468 (2001). Un método preferido para generar aleatoriamente péptidos es por despliegue de fagos. El despliegue de fagos es una técnica de selección in vitro en la cual un péptido o proteina se fusiona genéticamente a una proteína de recubrimiento de un bacteriófago, resultando en despliegue del péptido fusionado en el exterior del virión de fago, mientras que el ADN que codifica la fusión reside dentro de virión. Esta ligadura física entre el péptido exhibido y el ADN que codifica permite la separación por exclusión de enormes números de variantes de péptidos, ligado cada uno a una secuencia de ADN que corresponde, por un procedimiento de selección in vitro simple llamado "bioinmunoplaqueteo" . En su forma más simple, el bioinmunoplaqueteo se lleva a cabo por incubación del acumulado de variantes de fago exhibido con un objetivo de interés que se inmoviliza en una placa o cápsula, sacando por lavado el fago no enlazado, y eluyendo específicamente el fago enlazado por ruptura de las interacciones de enlace entre el fago y el objetivo. El fago eluido se amplifica luego in vitro y el proceso se repite, resultando en una forma de paso de enriquecimiento del fago acumulado a favor de las secuencias de enlace más herméticas. Después de 3 o más ciclos de selección/amplificación, los clones individuales se caracterizan por secuenciamiento de ADN. Después de que se ha generado una biblioteca aceptable de péptidos, son contactados luego con una cantidad apropiada del sustrato de prueba, específicamente una muestra de cabello, piel, o uña. El sustrato de prueba se presenta a la colección de péptidos mientras están suspendidos en solución. Una solución preferida es una solución salina acuosa amortiguada que contiene un agente tensoactivo. Una solución aceptable es la solución salina amortiguada Tris (TBS) con 0.5% de Tween® 20. Adicionalmente la solución puede ser agitada por cualquier medio con el propósito de incrementar el grado de transferencia de masa de los péptidos a la fuente de cabello, piel o uñas, acortando de esa manera el tiempo requerido para conseguir el máximo enlace. En el contacto, un sinnúmero de los péptidos generados aleatoriamente se enlazará al sustrato de cabello, piel, o uña para formar un complejo péptido-cabello, péptido-piel o péptido-uña. El péptido no enlazado se puede remover por lavado. Después que todo el material se remueve, los péptidos que tienen diferentes grados de afinidades de enlace para el sustrato de prueba pueden ser fraccionados por lavados seleccionados en soluciones amortiguadoras que tienen diferentes severidades . El incremento de la severidad de la solución amortiguadora usada aumenta la fuerza requerida del enlace entre el péptido y el sustrato en el complejo péptido-sustrato . Un sinnúmero de sustancias se pueden usar para variar la severidad de la solución amortiguadora en la selección del péptido incluyendo, pero no limitada a, pH ácido (1.5-3.0); pH básico (10-12.5); concentraciones altas de sal tales como gCl2 (3-5M) y Lic. (5-10 M) ; agua, etilen glicol (25-50%); dioxano (5-20%) ; tiocianato (1-5 M) ; guanidina (2-5 M) ; urea (2-8 M) ; y varias concentraciones de diferentes agentes tensoactivos tales como SDS (sulfato de dodecil sodio) , DOC (deoxicolato de sodio), Nonidet P-40, Tritón X-100, Tween® 20, en donde se prefiere Tween® 20. Estos sustratos se pueden preparar en soluciones amortiguadoras que incluyen, pero no están limitadas a, Tris-HCl, solución salina amortiguada Tris, borato Tris, ácido acético Tris, trietilamina, solución amortiguadora de fosfato, y glicina HCl, en donde se prefiere la solución salina amortiguada Tris. Será palpable que los péptidos que tienen incremento de afinidades de enlace para sustratos de cabello, piel o uñas pueden ser eluidos por repetición del proceso de selección usando soluciones amortiguadoras con incremento de severidades. Los péptidos eluidos se pueden identificar y secuenciar por cualquier medio conocido en la técnica. Así, se usó el siguiente método para la generación de los péptidos que se enlazan al cabello, péptidos que se enlazan a la piel, o péptidos que se enlazan a las uñas de la presente invención. Se contactó una colección de fago-péptidos generados por combinación con el sustrato de interés, específicamente, una muestra de cabello, piel o uña, para formar los complejos de fago-péptido-cabello, fago-péptido-piel, o fago-péptido-uña . El complejo de fago-péptido-sustrato se separó de los péptidos que no formaron complejo y del sustrato no enlazado, y los fago-péptidos enlazados de los complejos fago-péptido-sustrato se eluyó del complejo, preferiblemente por tratamiento ácido. Luego, los péptidos eluidos se identifican y secuencian. Para identificar las secuencias de péptido que enlazan a un sustrato pero no a otro, por ejemplo péptidos que enlazan a cabello, pero no a piel o péptidos que enlazan a piel, pero no a cabello, se agrega un . paso de inmunoplaqueteo sustractivo. Específicamente, la colección de fago-péptidos generados por combinación se contacta primero con el no objetivo para remover los fago-péptidos que se enlazan a este. Luego, los fago-péptidos de no enlace se contactan con el sustrato deseado y se continúa el proceso anterior. Alternativamente, la colección de fago-péptidos generados por combinación se puede poner en contacto con el no objetivo y el sustrato deseado simultáneamente. Luego, los complejos de fago-péptido-sustrato se separan de los complejos de fago-péptido-no-obj etivo y se sigue el método descrito arriba para los complejos de f go-péptido-sustrato deseados. Una modalidad de la presente invención provee un método de separación por exclusión de despliegue de fagos modificado para aislamiento de péptidos con una afinidad más alta para el cabello, piel o uñas. En el método modificado, los complejos de fago-péptido-sustrato se forman como se describió anteriormente. Luego, estos complejos se tratan con una solución amortiguadora de elusión. Se puede usar cualquiera de las soluciones amortiguadoras de elución descritas anteriormente. Preferiblemente, la solución amortiguadora de elución es una solución ácida. Luego, los complejos de fago-péptido-sustrato resistentes a la elución que permanecen se usan para infectar directamente una célula hospedadora bacterial, tal como E. coli ER2738. Las células hospedadoras infectadas se crecen en un medio de crecimiento apropiado, tal como medio LB (Luria-Bertani) , y este cultivo se rocía sobre el agar, que contiene un medio de crecimiento apropiado, tal como medio LB con IPTG (isopropil ß-D-tiogalactopiranosida) y S-Gal™. Después de crecimiento, las placas se seleccionan para aislamiento de ADN y secuenciamiento para identificar las secuencias de péptido con una afinidad de enlace alta para el sustrato de cabello, piel , o uña . En otra modalidad, la PCR se puede usar para identificar los fago-péptidos resistentes a elución del método de separación por exclusión de despliegue de fagos modificado, descrito anteriormente, llevando a cabo la PCR directamente en los complejos de f go-péptidos-sustrato usando los cebadores apropiados, como se describió por Janssen y colaboradores, en la Publicación de Solicitud de Patente de E.U.A. No. 2003/0152976, la cual está incorporada aquí por referencia . Los péptidos que se enlazan al cabello, que se enlazan a la piel, que se enlazan a las uñas han sido identificados usando los métodos anteriores. Específicamente, se aislaron aquellos péptidos de enlace que tienen una alta afinidad para cabello café normal, dando como SEQ ID NO: 3-18, 28-38, 40-56, y 64; resistentes al lavado, cabello café normal, dados como SEQ ID NO: 66, 69 y 70; cabello decolorado, dado como SEQ ID NO: 7, 8, 19-27, 38-40, 43, 44, 47, 57, 58 y 59, a uñas de la mano, dados como SEQ ID NOs : 53 y 60; y piel, dados como SEQ ID NO: 61. Adicionalmente los péptidos que se enlazan a dedos de la mano se . encontró que enlazan a- cabello decolorado y pueden ser usados en los acondicionadores para cabello a base de péptidos y colorantes de cabello de la invención. Los péptidos que se enlazan al cabello decolorado se enlazarán a uñas de los dedos de la mano y se pueden usar en los colorantes de uñas a base de péptido de la invención.

Producción de péptidos de enlace Los péptidos de enlace de la presente invención se pueden preparar usando los métodos de síntesis de péptido estándar, los cuales son bien conocidos en la técnica (ver por ejemplo Stewart y colaboradores, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, IL, 1984; Bodansky, Principies of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, New York, 1984; y Pennington y colaboradores, Peptide Synthesis Protocols, Humana Press, Totowa, NJ, 1994) . Adicionalmente, muchas compañías ofrecen servicios de síntesis de péptido a la medida. Alternativamente, los péptidos de la presente invención se pueden preparar usando el ADN recombinante y técnicas de clonación molecular. Los genes que codifican los péptidos que se enlazan al cabello, que se enlazan a la piel o que se enlazan a las uñas se pueden producir en células hospedadoras heterólogas, particularmente en las células de hospedadores microbianos . Las células hospedadoras heterólogas preferidas para expresión de los peptidos de enlace de la presente invención son hospedadores microbianos que se pueden encontrar generalmente dentro de las familias de hongos o bacterias y las cuales crecen en un amplio rango de temperatura, valores de pH, y tolerancias de solvente. Debido a que los aparatos de transcripción, traducción, y biosintéticos de proteíria no toman en cuenta el alimento celular, los genes funcionales se expresan sin tener en cuenta el alimento de carbono usado para generar biomas celular. Ejemplos de variedades de hospedadores incluyen, pero no están limitados a, especies de hongos o levadura tales como Aspergillus, Trichoderma, Saccharomyces, Pichia, Candida, Hansenula, o especies bacterianas tales como Sal onella, Bacillus, Acinetobacter, Rhodococcus, Streptomyces, Escherichia, Pseudomonas, Methylomonas, Methylobacter, Alcaligenes, Synechocystis, Anabaena, Thiobacillus, Methanobacterium y Klebsiella. Se pueden usar una variedad de sistemas de expresión para producir los peptidos de la presente invención. Tales vectores incluye, pero no están limitados a, vectores cromosomales, episomales y derivados de virus, por ejemplo, vectores derivados de plásmidos bacteriales, de bacteriófago, de transposones, de elementos de inserción, de episomas de levadura, de virus tales como baculovirus, retrovirus y vectores derivados de combinaciones de estos tales como aquellos derivados de plásmidos y elementos genéticos de bacteriófago, tales como cósmidos y fagémidos. Los constructos del sistema de expresión pueden contener regiones reguladoras que regulen así como que generen expresión. En general, cualquier sistema o vector apropiado para mantener, propagar o expresar polinucleótido o polipéptido en una célula hospedadora se puede usar para expresión en esta consideración. Los sistemas de expresión microbiana y los vectores de expresión contienen secuencias reguladoras que dirigen la expresión del alto nivel de proteínas externas relativas al crecimiento de la célula hospedadora. Las secuencias reguladoras son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica y los ejemplos incluyen, pero no están limitados a, aquellos que provocan la expresión de un gen para ser encendido o apagado en respuesta a un estímulo químico o físico, incluyendo la presencia de elementos reguladores en el vector, por ejemplo, secuencias mej oradoras. Cualquiera de estos podría ser usada para construir genes quiméricos para producción de cualquiera de los péptidos de enlace de la presente invención. Estos genes quiméricos pueden luego ser introducidos en microorganismos apropiados mediante transformación para proveer expresión de alto nivel de los péptidos. Los vectores o casetes útiles para la transformación de células hospedadoras apropiadas son bien conocidos en la técnica. Comúnmente el vector o cásete contiene secuencias que dirigen transcripción y traducción del gen relevante, uno o más marcadores apropiados, y secuencias que permiten replicación autónoma o integración cromosomal . Los vectores apropiados comprenden una región 5' del gen. Cuya iniciación transcripcional de puertos controla y una región 3' del fragmento de ADN la cual controla la terminación transcripcional . Se prefiere más cuando ambas regiones de control están derivadas de genes homólogos para la célula hospedadora transformada, a pesar de que se entiende que tales regiones de control necesitan no ser derivadas de los genes nativos a las especies específicas seleccionadas como un hospedador de producción. Los genes marcadores seleccionables proveen un rasgo fenotipico para selección de las células hospedadoras transformadas tales como resistencia de tetraciclina o ampicilina en E. coli. Las regiones de control de iniciación o promotores que son útiles para conducir la expresión del gen quimérico en la célula hospedadora deseada son numerosas y familiares para aquellos expertos en la técnica. Virtualmente.. cualquier promotor capaz de conducir al gen es apropiado para la producción de los péptidos de enlace de la presente invención incluyendo, pero no limitados a: CYC1, HIS3, GAL1, GALIO, ADH1, PGK, PH05, GAPDH, ADC1 , TRP1, URA3, LEU2 , ENO, TPI (útil para la expresión en Saccharomyces) ; A0X1 (útil para expresión en Pichia) ; y lac, ara, tet, trp, IPL, IPR, T7, tac, y trc (útil para expresión en Escherichia coli) además de los promotores amy, apr, npr y varios promotores de fago útiles para expresión en Bacillus . Las regiones de control de terminación también pueden ser derivadas de varios genes nativos para los hospedadores preferidos. Opcionalmente, un sitio de terminación puede ser innecesario, sin embargo, es más preferido si se incluye. El vector que contiene la secuencia de ADN apropiada como se describió supra, además de un promotor apropiado o secuencia de control, puede ser empleado para transformar un hospedador apropiado para permitir al hospedador expresar al péptido de la presente invención. Los sistemas de traducción libres de células también se pueden emplear para producir tales péptidos que usan ARN derivados de las construcciones de ADN de la presente invención. Opcionalmente se puede desear producir el producto de gen actual como un producto de secreción del hospedador transformado. La secreción de proteínas deseadas en el medio de crecimiento tiene las ventajas simplificadas y procesos de purificación menos •costosos. Es bien conocido en el arte que las secuencias de señal de secreción a menudo son útiles para facilitar el transporte activo de proteínas expresables a través de membranas de célula. La creación de un hospedador transformado capaz de secreción se puede lograr por la incorporación de una secuencia que codifica para una señal de secreción la cual es funcional en el hospedador de producción. Los métodos para selección de secuencias de señal apropiadas son bien conocidos en la técnica (ver por ejemplo EP 546049 y O 9324631) . El ADN de señal de secreción o facilitador se puede localizar entre el ADN de expresión-control y el gen actual o fragmento de gen, y en el mismo fragmento de lectura con el último.

Acondicionadores de cabello a base de péptido Los acondicionadores de cabello a base de péptido de la presente invención están formados por acoplamiento de un péptido que enlaza cabello (HBP, por sus siglas en inglés) con un agente de acondicionamiento de cabello (HCA, por sus siglas en inglés) . La parte del péptido que enlaza cabello del acondicionador se . enlaza fuertemente al cabello, manteniendo asi al agente de acondicionamiento anexado al cabello para un efecto de acondicionamiento de larga duración. Los péptidos que se enlazan al cabello incluyen, pero no están limitados a, péptidos que se enlazan al cabello seleccionados por los métodos de separación por exclusión descritos anteriormente, que incluyen las secuencias de péptido que se enlazan al cabello de la invención, dad por SEQ ID Nos: 3-59, 64, 66, 69 y 70, más preferiblemente los péptidos dados por SEQ ID NO: 46 y SEQ ID NO: 66, los cuales se enlazan fuertemente al cabello, pero no a la piel. Adicionalmente, cualquier peptido que enlaza cabello conocido se puede usar, incluyendo pero no limitados a SEQ ID NO: 1, y SEQ ID Nos: 76-98, descritos por Janssen y colaboradores, en la Publicación de Solicitud de Patente de E.U.A. No. 2003/0152976 y por Janssen y colaboradores, en WO 04048399, respectivamente, ambas incorporadas aquí por referencia. Para el cabello decolorado, se puede usar el peptido que enlaza uñas de los dedos de la mano, dado como SEQ ID NO: 60. Los agentes de acondicionamiento de cabello como se definieron aquí son agentes que mejoran la apariencia, textura, y brillo del cabellos además de incrementar el cuerpo del cabello o flexibilidad. En los acondicionadores de cabello a base de péptido de la presente invención, se puede usar cualquier agente acondicionador de cabello conocido. Los agentes acondicionadores son bien conocidos en la técnica', ver por ejemplo Green y colaboradores, (WO 0107009) , incorporado aquí por referencia, y están disponibles aquí comercialmente de varias fuentes. Los ejemplos apropiados de agentes acondicionadores de cabello incluyen, pero no están limitados a, polímeros catiónicos, tales como goma de guar cationizada, copolímeros de sal de amonio dialil cuaternaria/acrilamida, polivinilpirrolidona cuaternizada y derivados de esta, y varios compuestos de policuaternario; agentes tensoactivos catiónicos, tales como cloruro de estearalconio, cloruro de centrimonio, y clorohidrato de Sapamin; alcoholes grasos, tales como alcohol behenílico; aminas grasas, tales como amina de estearilo; ceras; esteres, polímeros noniónicos, tales como polivnilpirrolidona, alcohol de polivinilo, y glicol de polietileno; silicones; siloxanos, tales como decametilciclopentasiloxano; emulsiones de polímero, tales como amodimeticona; y agentes de voluminización, tales como por ejemplo quitosán. Los agentes acondicionadores de cabello preferidos de la presente invención contienen amina o grupos funcionales de hidroxilo para facilitar el acoplamiento a los péptidos que se enlazan al cabello, como se describe a continuación. Ejemplos de agentes acondicionadores preferidos son octilamina (CAS No. 111-86-4) , amina de estearilo (CAS No. 124-30-1) , alcohol venlo (CAS No. 661-19-8, Cognis Corp., Cincinnati, OH), siloxanos terminados en grupo de vinilo, silicón terminado en grupo de vinilo (CAS No. 68083-19-2) , siloxano de vinilo metilo terminados en grupo vinilo, metil vinil silicón terminado en grupo de vinilo (CAS No. 68951-99-5), siloxanos terminados en hidroxilo, silicón terminado en hidroxilo (CAS No. 80801-30-5) , derivados de silicón modificado de amino, [ (aminoetil) amino] propil hidroxil dimetil siloxanos, [ (aminoetil) amino] propil hidroxil dimetil silicones, y alfa-tridecil-omega-hidroxi-poli (oxi-1, 2-etanodiilo) (CAS No. 24938-91-8) . Los acondicionadores de cabello a base de péptido de la presente invención están preparados por acoplamiento covalente de un péptido que enlaza cabello específico a un agente acondicionador de cabello, ya sea directamente o mediante un espaciador. Se puede usar cualquier química de conjugación de péptido o proteína conocida para formar los acondicionadores de cabello a base de péptido de la presente invención. Las químicas de conjugación son bien conocidas en la técnica (ver por ejemplo, Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academia Press, New York (1996)) . Los agentes de acoplamiento apropiados incluyen, pero no están limitados a, agentes de acoplamiento de carbodiimida, cloruros de diácido, diisocianatos y otros reactivos de acoplamiento difuncional que son reactivos hacia amina Terminal y/o grupos terminales de ácido carboxílico en los péptidos y para grupos de amina, ácido carboxílico, o alcohol en el agente acondicionador de cabello. Los agentes de acoplamiento preferidos son agentes de acoplamiento de carbodiimida, tales como l-etil-3- (3-dimetilaminopropil) -carbodiimida (EDC) y ?,?' -diciclohexil-carbodiimida (DCC) , los cuales se pueden usar para activar los grupos de ácido carboxílico para acoplamiento a grupos de alcohol y amina. Adicionalmente, puede ser necesario proteger los grupos de amina o ácido carboxílico reactivos en el péptido para producir la estructura deseada para el acondicionador de cabello a base de péptido. El uso de grupos de protección para aminoácidos, tales como t-butiloxicarbonilo (t-Boc) , son bien conocidos en la técnica (ver por ejemplo Stewart y colaboradores, supra; Bodanszky, supra; y Pennington y colaboradores, supra) . En algunos casos puede ser necesario introducir grupos reactivos, tales como grupos de ácido carboxílico, alcohol, amina, o aldehido, en el agente acondicionador del cabello para acoplamiento al péptido que enlaza cabello. Estas modificaciones se pueden hacer usando química rutinaria tal como oxidación, reducción y lo similar, lo cual es bien conocido en la técnica. También puede ser deseable acoplar el péptido que enlaza cabello al agente acondicionador de cabello mediante un espaciador. El espaciador sirve para separar al agente acondicionador del péptido para asegurarse que el agente no interfiere con el enlace del péptido al cabello. El espaciador puede ser cualquiera de una variedad de moléculas, tales como cadenas de alquilo, compuestos de fenilo, glicol etileno, amidas, ésteres y lo similar. Los espaciadores preferidos son hidrofílicos y tienen una longitud de cadena desde 1 hasta alrededor de 100 átomos, más preferiblemente desde 2 hasta alrededor de 30 átomos. Ejemplos de espaciadores preferidos incluyen, pero no están limitados a etanol amina, glicol de etileno, polietileno con una longitud de cadena de 6 átomos de carbono, glicol de polietileno con 3 a 6 unidades de repetición, fenoxietanol , propanolamida, glicol de butileno, butilenoglicolamida, propil fenilo, y etilo, propilo, hexilo, esterilo, cetilo y cadenas de alquil palmitoilo . El espaciador puede ser enlazado covalentemente al péptido y al agente acondicionador de cabello usando cualquiera de las químicas de acoplamiento descritas anteriormente. Con el propósito de facilitar la incorporación del espaciador, se puede usar un agente de enlace reticular bifuncional que contiene un espaciador y grupos reactivos en ambas terminaciones para acoplamiento al péptido y al agente acondicionador. Los agentes de enlace reticular bifuncional apropiados son bien conocidos en la técnica e incluyen, pero no están limitados a diaminas, tales como 1, 6-diaminohexano; dialde ídos , tales como glutaraldehído; bis esteres de N-hidroxisuccinimida, tales como etilén glicol-bis (éster de N-hidroxisuccinimida de ácido succínico) , glutarato de disuccinimidilo, suberato de disuccinimidilo, y etilén glicol-bis (succinimidilsuccinato) diisocianatos, tales como hexametilendiisocianato; bis oxiranos, tales como éter de diglicidil 1,4 butanodiilo; ácidos dicarboxílieos , tales como succinildisalicilato; y lo similar. También se pueden usar os agentes de enlace reticular heterobifuncional , los cuales contienen un grupo reactivo diferente en cada terminación. Ejemplos de agentes de enlace reticular heterobifuncional incluyen, pero no están limitados a compuestos que tienen la siguiente estructura: donde: ¾. es H o un grupo substituyente tal como -S03Na, -N02, o -Br; y R2 es un espaciador tal como -CH2CH2 (etilo) , - (CH2) 3 (propilo) , o -(CH2)3CsH5 (prolil fenilo) . Un ejemplo de un agente de enlace reticular heterobifuncional es el éster de N-hidroxisuccinimida de ácido 3-maleimidopropiónico. El grupo de éster N-hidroxisuccinimida de estos reactivos reacciona con los grupos amina o alcohol en el acondicionador, mientras que el grupo maleimida reacciona con los grupos tiol presentes en el péptido. Un grupo tiol puede estar incorporado en el péptido por adición de un grupo de cisteína a por lo menos una terminación de la secuencia del péptido de enlace. Varios residuos de aminoácido espaciador, tales como glicina, se pueden incorporar entre la secuencia del péptido que enlaza y la cisteína Terminal para separar al grupo tiol que reacciona de la secuencia que enlaza. Adicionalmente, el espaciador puede ser un péptido compuesto de cualquier aminoácido y mezclas de estos. Los espaciadores de péptido preferidos están compuestos de los aminoácidos de glicina, alanita, y serina, y mezclas de estos. Además, el espaciador de peptido puede contener un sitio de desdoblamiento de enzima específica, tal como el sitio de proteasa Caspasa 3, dado por SEQ ID NO: 65, el cual permite la remoción enzimática del agente acondicionador del cabello. El espaciador de peptido puede ser desde 1 hasta alrededor de 50 aminoácidos, preferiblemente desde 1 hasta alrededor de 20 aminoácidos. Estos espaciadores de péptido pueden estar ligados a la secuencia de péptido que enlaza por cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, el dibloque de péptido que enlaza-espaciador de péptido completo puede se preparado usando los métodos de síntesis de péptido estándar descritos supra. Además, el péptido que enlaza y los bloques espaciadores de péptido se pueden combinar usando agentes de acoplamiento de carbodiimida (ver por ejemplo, Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, New York (1996) ) , cloruros de diácido, diisocianatos y otros reactivos de acoplamiento difuncional que son reactivos para grupos de amina Terminal y/o Terminal de ácido carboxílico en los péptidos. Alternativamente, el dibloque de péptido que enlaza-espaciador de péptido completo se puede preparar usando el ADN recombinante y técnicas de clonación molecular descritas supra. El espaciador también puede ser una combinación de un espaciador de péptido y una molécula espaciadora orgánica, la cual se puede preparar usando los métodos descritos anteriormente.

También puede ser deseable tener peptidos múltiples que se enlazan al cabello acoplados al agente acondicionador de cabello para mejorar la interacción entre el acondicionador de cabello a base de péptido y el cabello. Se puede usar cualquiera de las copias múltiples del mismo péptido que enlaza cabello o una combinación de diferentes peptidos que se enlazan al cabello. En el caso de partículas , de acondicionamiento grandes (por ejemplo, emulsiones de partícula) , un gran número de péptidos que se enlazan al cabello, esto es, hasta alrededor de 1,000, puede estar anexados al agente acondicionador. Un número más pequeño de péptidos que se enlazan al cabello puede estar acoplados a las moléculas acondicionadoras más pequeñas, esto es, hasta alrededor de 50. Por lo tanto, en una modalidad de la presente invención, los acondicionadores de cabello a base de péptido son composiciones dibloque que consisten de un péptido que enlaza cabello (HBP) y un agente acondicionador de cabello (HCA) que tienen la estructura general (HBP)n-HCA, donde n varía desde 1 hasta alrededor de 1,000 preferiblemente desde 1 hasta alrededor de 50. En otra modalidad, los acondicionadores de cabello a base de péptido contienen un espaciador (S) que separa el péptido que enlaza cabello del agente acondicionador de cabello, como se describió anteriormente. Se pueden anexar copias múltiples del péptido que enlaza cabello a una molécula espadadora única. En esta modalidad, los acondicionadores de cabello a base de péptido son composiciones tribloque que consisten de un péptido que enlaza cabello, un espaciador, y un agente acondicionador de cabello, que tiene la estructura general [ (HBPJm-Sln-HCA, donde n varía desde 1 hasta alrededor de 1,000 preferiblemente n es 1 hasta alrededor de 50, y m varía desde 1 hasta alrededor de 50, preferiblemente m es 1 hasta alrededor de 10. Los acondicionadores de cabello a base de péptido de la presente invención se pueden usar en composiciones para el cuidado del cabello. También debe reconocerse que los mismos péptidos que se enlazan al cabello pueden servir como agentes acondicionadores para el tratamiento del cabello. Las composiciones para el cuidado del cabello están definidas aquí como composiciones para el tratamiento del cabello, incluyendo pero no limitadas a champús, acondicionadores, lociones, aerosoles, geles, espumas, y tintes para cabello que comprenden una cantidad efectiva de un acondicionador de cabello a base de péptido o una mezcla de acondicionadores de cabello a base de diferentes péptidos en un medio aceptable cosméticamente. Una cantidad efectiva de un acondicionador de cabello a base de péptido o péptido que enlaza cabello para uso en una composición para el cuidado del cabello se define aquí como una proporción de desde alrededor de 0.01% hasta alrededor de 10%, preferiblemente alrededor de 0.01% hasta alrededor de 5% en peso relativo al peso total de la composición. Los componentes de un medio aceptable cosméticamente para composiciones para el cuidado del cabello se describen por Philippe y colaboradores, en la Patente de E.U.A. No. 6,280,747 y por Omura y colaboradores, en la Patente de E.U.A. No. 6,139,851 y Cannell y colaboradores, en la Patente de E.U.A. No. 6,013,250, todas las cuales están incorporadas aquí por. referencia. Por ejemplo, estas composiciones para el cuidado del cabello pueden ser soluciones acuosas, alcohólicas o acuosas-alcohólicas , siendo preferiblemente el alcohol etanol o isopropanol, en una proporción de desde alrededor de 1 hasta alrededor de 75% en peso relativo al peso total, para las soluciones alcohólicas acuosas. Adicionalmente, las composiciones para el cuidado del cabello pueden contener uno o más aditivos o adyuvantes cosméticos o dermatológicos convencionales que incluyen pero no están limitados a, antioxidantes, agentes de preservación, rellenos, agentes tensoactivos, filtros solares de UVA y/o UVB, fragancias, espesantes, agentes de humectación y polímeros aniónicos, no iónicos o anfotéricos, y tintes o pigmentos .

Acondicionadores para la piel basados en peptidos Los acondicionadores para la piel a base de péptidos de la presente invención están formados para acoplar un péptido que enlaza piel (SBP, por sus siglas en inglés) con un agente acondicionador de piel (SCA, por sus siglas en inglés) . La parte del péptido acondicionador de piel del acondicionador se enlaza fuertemente a la piel, manteniendo así al agente acondicionador anexado a la piel para un efecto de acondicionamiento de duración prolongada. Los péptidos que se enlazan a la piel incluyen, pero no están limitados a, péptidos que se enlazan a la piel seleccionados por los métodos de separación por exclusión descritos anteriormente, que incluyen la secuencia de péptido que enlaza piel de la invención, dada como SEQ ID NO: 61. Adicionalmente, cualquier péptido que enlaza piel conocido se puede usar, incluyendo pero no limitado a SEQ ID NO: 2, y SEQ ID Nos: 99-104, descritos por Anisen y colaboradores, en la Publicación de Solicitud de Patente de E.U.A. No. 2003/0152976 y por Janssen y colaboradores, en WO 04048399, respectivamente. Los agentes acondicionadores para la piel como se definieron aquí incluyen, pero no ' están limitados a astringentes, los cuales cierran la piel; exfoliantes, los cuales remueven células de piel muertas; emolientes, los cuales ayudan a mantener una apariencia lisa, suave, flexible; humectantes, los cuales incrementan el contenido de agua de la capa superior de la piel; oclusivos, los cuales retardan la evaporación de agua de la superficie de la piel; y compuestos misceláneos que mejoran la apariencia de piel reseca o dañada o reducen el despellej amiento y restaura la flexibilidad. En los acondicionadores para la piel a base de péptido de la presente invención, se puede usar cualquier agente acondicionador de piel conocido. Los agentes acondicionadores son- bien conocidos en la técnica, ver por ejemplo Green y colaboradores, supra, y están disponibles comercialmente de varias fuentes. Ejemplos apropiados de agentes acondicionadores para la piel incluye, pero no están limitados a, ácidos alfa-hidroxi, ácidos beta-hidroxi , polioles, ácido hialurónico, D, L-pantenol , polisalicilatos , palmitato de vitamina A, acetato de vitamina E, glicerina, sorbitol, silicones, derivados de silicón, lanolina, aceites naturales y esteres de triglicéridos . Los agentes acondicionadores para la piel preferidos de la presente invención son polisalicilatos, glicol de propileno (CAS No. 57-55-6, Dow Chemical, Midland, MI), glicerina (CAS No. 56-81-5, Procter & Gamble Co., Cincinnati, OH), ácido glicólico (CAS No. 79-14-1, DuPont Co., Wilmington, DE), ácido láctico (CAS No. 50-21-5, Alfa Aesar, Ward Hill, MA) , ácido maléico (CAS No. 517t48-,1, Alfa Aesar), ácido cítrico (CAS No. 77-92-9, Alfa Aesar), ácido tartárico (CAS No. 133-37-9, Alfa Aesar), ácido glucárico (CAS No. 87-73-0), ácido galáctarico (CAS No. 526-99-88), ácido 3-hidroxivalérico (CAS No. 10237-77-1) , ácido salicílico (CAS No. 69-72-7, Alfa Aesar), y 1,3 propanodiol (CAS No. 504-63-2, DuPont Co., Wilmington, DE).

Los polisacáridos se pueden preparar por los métodos descritos por White y colaboradores, en la Patente de E.U.A. No. 4,855,483 incorporada aquí por referencia. El ácido glucárico se puede sintetizar usando el método descrito por Merbouh y colaboradores, (Carbohydr. Res. 336:75-78 (2001). El ácido 3 -hidroxivalérico se puede preparar como se describió por Bramucci en O 02012530. Los acondicionadores para la piel a base de péptido de la presente invención están preparados por enlace covalente a un péptido que enlaza piel específico al agente acondicionador de piel, ya sea directamente o mediante un espaciador. Cualquiera de los métodos de acoplamiento descritos arriba se puede usar. Puede ser necesario introducir grupos reactivos, tales como grupos de ácido carboxílico, alcohol, amina, o aldehido, en el agente acondicionador de piel para acoplamiento al péptido que enlaza cabello, como se describió anteriormente. También puede ser deseable tener acoplados péptidos que se enlazan a la piel múltiples al agente acondicionador de piel para mejorar la interacción entre el acondicionador de piel a base de péptido y la piel . Se puede usar cualquiera de las copias múltiples del mismo péptido que enlaza piel o una combinación de diferentes péptidos que se enlazan a la piel. En el caso de partículas de acondicionamiento grandes, pueden ser anexados un gran número de péptidos que se enlazan a la piel, esto es, hasta alrededor de 1,000 al agente acondicionador. Un número de péptidos que acondicionan piel se puede anexar a las moléculas acondicionadoras más pequeñas, esto es, hasta alrededor de 50. Por lo tanto, en una modalidad de la presente invención, los acondicionadores para la piel a base de péptido son composiciones dibloque que consisten de un péptido que enlaza piel (SBP) y un agente acondicionador de piel (SCA) , que tiene la estructura general (SBP)n-SCA, donde n varía desde 1 hasta alrededor de 1,000 preferiblemente desde 1 hasta alrededor de 50. En otra modalidad, los acondicionadores para la piel a base de péptido contienen un espaciador (S) que separa el péptido que enlaza piel del agente acondicionador de piel, como se describió anteriormente. Se pueden anexar copias múltiples del péptido que enlaza piel a - una molécula espaciadora única. En esta modalidad, los acondicionadores para la piel a base de péptido son composiciones tribloque que consisten de un péptido que enlaza piel, un espaciador, y un agente acondicionador de piel, que tiene la estructura general [ (SBP) m-S] n-SCA, donde n varia desde 1 hasta alrededor de 1, 000, preferiblemente n es 1 hasta alrededor de 50, y m varia desde 1 hasta alrededor de 50, preferiblemente es 1 hasta alrededor de 10. Los acondicionadores de la piel basados en péptidos de la presente invención pueden usarse en composiciones para cuidado de la piel . También deberá reconocerse que los péptidos enlazados al piel por si mismo pueden servir como agentes acondicionadores para la piel . Las composiciones de cuidado de la piel se definen en la presente como composiciones que comprenden una cantidad efectiva de un acondicionador de piel basado en péptido o una mezcla de diferente acondicionadores de la piel basados en péptidos en un medio cosméticamente aceptable . Los usos de estas composiciones incluyen, pero no se limitan a, cuidado de la piel, limpieza de la piel, maquillaje, y productos antiarrugas. Una cantidad efectiva de un acondicionador de piel basado en péptido o un péptido enlazado a la piel para composiciones de cuidado de la piel en la presente, se define como una proporción desde alrededor de 0.001% hasta alrededor de 10%, preferiblemente alrededor de 0.015 hasta alrededor de 5% en peso con relación al peso total de la composición. Esta proporción puede varias como una función del tipo de composiciones de cuidado de la piel . Las composiciones apropiadas para un medio cosméticamente aceptable se describen por Philippe et al. supra. Por ejemplo, el medio cosméticamente aceptable pueden ser una composición anhidra que contiene una substancia grasa en una proporción generalmente desde alrededor de 10 hasta alrededor del 90% en peso con relación al peso total de la composición, donde la fase grasa contiene al menos una substancia grasa, líquida, sólida o semisólida. La substancia grasa incluye, pero no se limitan a, aceites, ceras, gomas, y las llamadas substancias de pasta grasa. Alternativamente, las composiciones pueden estar en forma de una dispersión estable tal como una emulsión agua en aceite o aceite en agua. Adicionalmente, las composiciones pueden contener uno o más cosméticos convencionales o aditivos o adyuvantes dermatológicos, incluyendo pero no limitados a, antioxidantes, agentes conservadores, rellenos, agentes tensoactivos , bloqueadores de sol UVA y/o UVB, " fragancias, espesantes, agentes humectantes y polímeros aniónicos, no iónicos, o anfotéricos, y tintes o pigmentos .

Colorantes de cabellos con base en péptido Los colorantes de cabello con base en péptidos de la presente invención se forman al acoplar un péptido que se enlaza al cabello (HBP) con un agente colorante (C) . La parte del péptido que se enlaza al cabello del colorante de cabello con base n péptido se enlaza fuertemente al cabello, manteniendo de esta manera el agente colorante unido al cabello durante un efecto colorante de cabello de larga duración. Los péptidos enlazados al cabello, incluyen pero no se limitan a, péptidos que se enlazan al cabello seleccionado por los métodos de separación por exclusión descritos arriba, que incluyen las secuencias de péptido que se enlazan al cabello de la invención, dadas por SEQ ID NOs : 3-59, 64, 66, 69 y 70, más preferiblemente los péptidos dados por SEQ ID NO: 46 y SEQ ID NO: 66, que se unen fuertemente al cabello, pero no a la piel. Adicionalmente, cualquier péptido que se enlaza al cabello conocido puede usarse, incluyendo pero no se limitándose a, SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NOs: 76-98, descritas por Janssen et al. , en la publicación de solicitud e patente E.U.A. No. 2003/0152976 y por Janssen et al. en O 04048399, respectivamente. Para aclarar el cabello, el péptido que se enlaza a la uñas de los dedos, se da como SEQ ID NO: 60, también puede usarse. Los agentes colorantes como se definen en la presente en cualquier tinte, pigmento, y similares que puedan usarse para cambiar el color del cabello, piel, o uñas. En los colorantes de cabello basados en péptido de la presente invención, cualquier agente colorante conocido puede usarse. Los agentes colorantes de cabello son bien conocidos en el arte (ver por ejemplo, Green et al. supra, CPTA International Color Hanbook, 2nd ed. , Michelle Press, Inglaterra (1992) y Cosmetic Handbook, US Food and Drug Administration, FDA/lAS Booklet (1992) ) y están comercialmente disponibles de varias fuentes (por ejemplo, Bayer, Pittsburg, PA; ciba-Geigy, Tarrytown, NY; ICI, Bridgewater, NJ; Sandoz, Vienna, Austria; BASF, Mount Olive, NJ, and Hoechst, Frankfurt, Alemania) . Los agentes colorantes de cabello apropiados incluyen pero no se S7 limitan a, pigmentos, tales como -hidroxipropilamino-3 -nitrofenol, 4-amino-3 -nitrofenol , 2-amino-6-cloro-4-nitrofenol, 2-nitro-parafenilendiamina, N,N-hidroxietil-2-nitro-fenilendiamina, 4-nitro-indol , ENA, HC azul 1, HC azul 2, HC amarillo 4, HC rojo 3, HC rojo 5, morado disperso 4, negro disperso 9, HC azul 7, HC azul 12, HC amarillo 2, HC amarillo 6, HC amarillo 8, HC amarillo 12, HC café 2, D&C amarillo 1, D&C amarillo 3, D&C azul 1, azul disperso 3, morado disperso 1, derivados de eosina tales como D&C rojo No. 21 y derivados de fluoresceína halogenados tales como D&C rojo No. 27, D&C anaranjado rojo No. 5 en combinación con D&C rojo No. 21 y D&C anaranjado No. 10; y pigmentos, tales como D&C rojo No. 36 y D&C anaranjado No. 17, las lacas de calcio de D&C rojo Nos. 7, 11, 31 y 34, la laca de bario de D&C rojo No. 12, la laca de estroncio de D&C rojo No'. 13, las lacas de aluminio de FD & C amarillo No. 5, de FD&C amarillo No. 6, de D&C rojo No. 27, de D&C rojo No. 21 y de FD&C azul No. 1, óxidos de hierro, violeta de manganeso, óxido de cromo, dióxido de titanio, óxido de zinc, óxido de bario, azul ultramarino, citrato de bismuto, y partículas de negro de humo. Los agentes colorantes de cabellos preferidos de la presente invención son D&C amarillo 1 y 3, HC amarillo 6 y 8, D&C azul 1, HC azul 1, HC café 2, HC rojo 5, 2-nitro-parafenilendiamina, N,N, -hidroxietil-2-nitro-fenilendiamina, 4-nitro-indol y negro de humo.

Las nanopartículas metálicas y semiconductoras también pueden usarse como agentes colorantes de cabello debido a su fuerte emisión de luz (Vic et al . publicación de solicitud de patente E.U.A. No. 2004/0010864) . "Nanopartículas" se definen en la presente como partículas metálicas o semiconductoras con un diámetro de partícula promedio de entre 1 y 100 nm. Preferiblemente, el diámetro de partícula promedio de las partículas esta entre alrededor de 1 y 40 nm. Como se usa en la presente, "tamaño de partícula" y "diámetro de partícula" tienen el mismo significado. Las nanopartículas metálicas incluyen, pero no se limitan a, partículas de oro, plata, platino, iridio, rodio, osmio, hierro, cobre, cobalto, y aleaciones compuestas de estos materiales . Una "aleación" se define en la presente como una mezcla homogénea de dos o más metales . Las "nanopartículas semiconductoras" incluyen, pero no se limitan a, partículas de cadmio, selenuro, sulfuro de cadmio, sulfuro de plata, sulfuro de cadmio, óxido de zinc, sulfuro de zinc, selenuro de zinc, sulfuro de plomo, arseniuro de galio, silicio, óxido de estaño, óxido de hierro, y fosfuro de indio. Las nanopartículas se estabilizan y se hacen solubles en agua por el uso de una recubierta o mono capa orgánica apropiada. Como se usa en la presente, las nanopartículas protegidas por monocapa son un tipo de nanopartículas estabilizadas. Los métodos para la preparación de nanopartículas estabilizadas, solubles en agua metálicas y semiconductoras se conoce en el arte, y se describen por Huang et al. en la solicitud de patente copendiente No. 10/622889, la cual se incorpora en la presente para referencia. El color de la nanopartículas depende del tamaño de las partículas. Por lo tanto, al controlar el tamaño de las nanopartículas, pueden obtenerse colores diferentes. Por ejemplo, las nanopartículas de CdSe recubiertas con ZnS cubren el espectro visible completo sobre un rango de tamaño de partícula de 2 hasta 6 nm. Específicamente, las nanopartículas de CdSe con un tamaño de núcleo de 2.3, 4.2, 4.8 y 5.5 nm emiten luz a una longitud de onda centrada alrededor de 485, 565, 590 y 625 mm, respectivamente. Las nanopartículas solubles en agua de tamaños diferentes pueden obtenerse de una amplia distribución de tamaño de nanopartículas usando el método de fraccionamiento de tamaño descrito por Huang, supra. Tal método comprende la adición regulada de un solvente orgánico miscible en agua a una solución de nanopartículas en presencia de un electrolito. Las adiciones incrementadas del solvente orgánico miscible en agua resultan en la precipitación de nanopartículas de tamaño reducido . Los colorantes de cabello basados en péptido de la presente invención se preparan al unir covalentemente un péptido enlazado al cabello específico a un agente colorante, ya sea directamente o por medio de un espaciador.

Cualesquiera de los métodos de acoplamiento descritos arriba, pueden usarse . Puede ser necesario introducir grupos reactivos tales como ácido carboxilico, alcohol, amina, o grupos aldehido, en el agente colorante para acoplarse al péptido enlazado al cabello. Estas modificaciones pueden darse usando la química de rutina, que es bien conocida en el arte. Por ejemplo, la superficie de las partículas de negro de humo puede oxidarse usando ácido nítrico, un peróxido tal como un peróxido de hidrógeno, o un iniciador inorgánico tal como persulfato de amonio, para generar grupos funcionales. Preferiblemente, la superficie de negro de humo se oxida usando persulfato de amonio como se describe por Carrasco-Marín et al. (J. Chem. Soc, Faraday Trans. 93: 2211-2215 (1997) ) . Los grupos funcionales amino pueden introducirse a la superficie de negro de humo usando iniciador orgánico tal como 2 , 2 ' -Azobis (2 -metilpropionamida) -diclorohidrato. Los pigmentos inorgánicos y las nanopartículas pueden derivarse al introducir ácido carboxilico o grupos funcionales amino de la misma manera. También puede desearse tener múltiples péptidos que se enlazan al cabello unidos al agente colorante para aumentar la interacción entre el colorante de cabello basado en péptido y el cabello. Ya sea las copias múltiples del mimos péptido que se enlaza al cabello o una combinación de diferentes péptidos que se enlazan al cabello puede usarse.

En el caso de partículas de pigmento grandes, un gran número de péptidos que se enlazan al cabello, esto es, hasta alrededor de 10,000, pueden unirse al pigmento. Un número más pequeño de péptidos que se enlazan al cabello pueden unirse a las moléculas de pigmento más pequeñas, esto es, hasta alrededor de 50. Por lo tanto, en una modalidad de la presente invención, los colorantes de cabellos basados en péptido son composiciones de dibloque que consisten de un péptido que se enlaza al cabello (HBP) y un agente colorante (C) , que tiene la estructura general (HBP)n~C, donde n está en rango desde 1 hasta alrededor de 10,000, preferiblemente n es 1 hasta alrededor de 500. En otra modalidad, los colorantes de cabellos basados en péptido contienen un espaciador (S) que separa el péptido que se enlaza del agente colorante de cabello, como se describe arriba. Pueden unirse copias múltiples del péptido que se enlaza al cabello a una molécula espadadora sencilla. En esta modalidad, los colorantes de cabello basados en péptido son composiciones tribloque que consisten de un péptido que se enlaza al cabello, un espaciador, y un agente colorante, que tiene la estructura general [ (HBP) m - S]n - C donde n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000, preferiblemente n es 1 hasta alrededor de 500, y m esta en el rango desde 1 hasta alrededor de 50, preferiblemente M es 1 hasta alrededor de 10.

Los colorantes de cabello con base en péptidos de la presente invención pueden usarse en composiciones colorantes de cabello para teñir el cabello. Las composiciones colorantes de cabello se definen en la presente como composiciones para colorear, teñir, o decolorar el cabello, que comprenden una cantidad efectiva de un colorante de cabello basado en peptido o una mezcla de diferentes colorantes de cabello basados en péptido en un medio herméticamente aceptable. Una cantidad efectiva de un colorante de cabello basado en péptido para usarse en una composición colorante de cabello se define en la presente como una proporción desde alrededor de 0.001% hasta alrededor de 20% en peso con relación al peso total de la composición. Los componentes de un medio cosméticamente aceptable para composiciones colorantes de cabello se describen por Dias et al., en la patente E.U.A. No. 6,398,821 y por Deutz et al., en la patente E.U.A. No. 6,129,770, ambas de las cuales se incorporan en la presente para referencia. Por ejemplo, las composiciones colorantes de cabello pueden contener secuestrantes, estabilizantes, espesantes, agentes amortiguadores, portadores, agentes tensoactivos , solvente, antioxidantes, polímeros y acondicionadores. Los acondicionadores pueden incluir los acondicionadores de cabello basados en péptido y los péptidos que se enlazan al cabello de la presente invención en una proporción desde alrededor de 0.01% hasta alrededor de 10%, preferiblemente alrededor de 0.01% hasta alrededor de 5% en peso con relación al peso total de la composición colorante del cabello. Los colorantes de cabello con base en péptido de la presente invención también pueden usarse como agentes colorantes en composiciones cosméticas que se aplican a las pestañas o cejas incluyendo, pero no se limitadas a, máscaras, y lápices para cejas. Estos pueden ser productos de maquillaje anhidro que comprenden un medio cosméticamente aceptable que contiene una substancia grasa en una proporción generalmente desde alrededor de 10 hasta alrededor ¦ de 90% en peso con relación al peso total de la composición, donde la fase grasa contiene al menos una substancia liquida, sólida o semisólida grasa, como se describe arriba. Las substancia grasa, incluye pero no se limitan a, aceites, ceras, gomas y las llamadas substancias de pasta grasa. Alternativamente, estas composiciones pueden estar en forma de una dispersión estable tal como emulsión agua en aceite o aceite en agua como se describe arriba. En estas composiciones, la proporción del colorante de cabello basado en péptido generalmente es desde alrededor de 0.001% hasta alrededor de 205 en peso con relación al peso total de la composición. Colorantes de uñas basados en péptidos Los colorantes de uñas basados en péptidos de la presente invención se forman al acoplar un péptido que se enlaza a la uñas (NBP, por sus siglas en inglés) con un agenté colorante (C) . La parte del péptido que se enlaza a la uña del colorante de uña basado en péptido se une fuertemente a las uñas de los dedos o a las uñas de los pies, manteniendo de esta manera el agente colorante unido a las uñas durante un efecto colorante de larga duración. Los péptidos que se enlazan a la uña incluyen pero no se limitan a, péptidos que se enlazan a la uña seleccionados por métodos de separación por exclusión descritos arriba, que incluyen las secuencias de péptido que se enlazan a la uña de la invención, dadas por SEQ ID NOs : 53 y 60, más preferiblemente el péptido dado por SEQ ID NO: 60. Adicionalmente, los péptidos que se enlazan a la uña blanqueadores, dados como SEQ ID NO: 7, 8, 19-27 38, 39, 40, 43-45, 47, 57, 58 y 59 pueden usarse. Los colorantes de uña basados en péptido de la presente invención se preparan al unir covalentemente el péptido que se enlaza a la uñas específico a un agente colorante, ya sea directamente o por medio de un espaciador, usando cualesquiera de los métodos de acoplamiento descritos arriba. En los colorantes de uña basados en péptidos de la presente invención, cualesquiera de los agente colorantes descritos arriba pueden usarse. Los agentes colorantes preferidos para usarse en los colorantes de uñas basados en péptidos de la presente invención incluyen D&C rojo Nos. 8, 10, 30 y 36, las lacas de bario de D&C rojo Nos. 6, 9 y 12 , las lacas de calcio de D&C rojo Nos. 7, 11, 31 y 34, la laca de estroncio de D&C rojo No. 30 y D&C anaranjado No. 17 y D&C azul No. 6.

También puede ser deseable tener múltiples péptidos que se enlazan a la uña unidos al agente colorante para aumentar la interacción entre el colorante de uñas basado en péptido y las uñas. Ya sea las copias múltiples del mismo péptido que se enlaza a la uña o una combinación de diferentes péptidos que se enlazan a la uña pueden usarse. En caso de partículas de pigmento grandes, un gran número de péptidos que se enlazan a la uña, esto es, hasta alrededor de 10,000, pueden unirse al pigmento. Un número más pequeño de péptidos que se enlazan a la uña pueden unirse a las moléculas de pigmento más pequeñas, esto es, hasta alrededor de 50. Por lo tanto, en una modalidad de la presente invención, los colorantes de uña basados en péptidos son composiciones dibloque que consisten de un péptido que se enlaza a la uña (NBP) y un agente colorante (C) , que tiene la estructura general (NBP)n - C, donde n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000, preferiblemente n es 1 hasta alrededor de 500. En otra modalidad, los colorantes de uña basados en péptido contienen un espaciador (S) que separar el péptido unido del agente colorante, como se describe arriba. Las copias múltiples del péptido que se enlaza a la uña pueden unirse a una molécula espadadora sencilla. En esta modalidad, los colorantes de uña basados en péptidos son composiciones tribloque que consisten de un péptido que se enlaza a la uña, un espaciador y un agente colorante, que tiene la estructura general [(NBP)m - S]n - C, donde n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000, preferiblemente n es 1 hasta alrededor de 500, y m esta en el rango desde 1 hasta 50, preferiblemente m es 1 hasta alrededor de 10. Los colorantes de uña con base en péptido de la presente invención pueden usarse en composiciones de brillo de uñas para colorear uñas de los dedos y uñas de los pies. Las composiciones abrillantadoras de uña se definen en la presente como composiciones para tratamiento y coloraciones de uñas, que comprenden una cantidad efectiva de un colorante de uña basado en péptido o una mezcla de diferentes colorantes de uñas basados en péptidos en un medio cosméticamente aceptable. Una cantidad efectiva de un colorante de uñas basado en péptido para usarse en la composición abrillantadora de uñas se define en la presente como una proporción desde alrededor de 0.001% hasta alrededor de 20% en peso con relación al peso total de la composición. Los componentes del medio cosmé icamente aceptables para abrillantar uñas se describen por Philippe et al. supra. La composición abrillantadora de uñas típicamente contiene un solvente y una substancias que forma una película, tal como derivados de celulosa, derivados de polivinilo, polímeros acrílicos o copolímeros, copolímeros de vinilo y polímero de poliéster. Adicionalmente, el abrillantador de uña puede contener un plastificante tal como fosfato de tricresilo, benzoato de bencilo, fosfato de tributilo, acetil ricinoleato de butilo, citrato de trietilo, acetil citrato de tributilo, ftalato de dibutilo o alcanfor. Colorantes de piel basados en péptidos Los colorantes de la piel basados en péptidos de la presente invención se forman al acoplar un péptido que se enlaza a la piel (SBP) con un agente colorante (C) . La parte del péptido que se enlaza a la piel, el colorante de piel basado en péptido se enlaza fuertemente a la piel, manteniendo de esta manera el agente colorante unido a la piel durante un efecto colorante de larga duración. Los péptidos que se enlazan a la piel incluyen, pero no se limitan a, péptidos que se enlazan a la piel seleccionados por métodos de separación por exclusión descritos arriba, que incluyen la secuencia del péptido que se enlaza a la piel de la invención, dada como SEQ ID NO: 61. Adicionalmente, cualesquiera de los péptidos que se enlazan a la piel conocidos pueden usarse, incluyendo pero limitados a SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NOs : 99-104, descritos por Janssen et al. en la publicación de solicitud de patente E.U.A. No. 2003/0152976 y por Janssen et al. en WO 04048399, respectivamente. Los colorantes en la piel basados en péptidos de la presente invención se preparan al unir covalentemente un péptido que se enlaza a la piel un agente colorante, ya sea directamente o por medio de un espaciador, usando cualquiera de los métodos de acoplamiento descritos arriba. Cualesquiera de los colorantes descritos arriba pueden usarse. Los agentes colorantes preferidos para usarse en los colorantes en piel basados en péptidos de la presente invención incluyen los siguientes pigmentos : derivados de eosina tales como D&C rojo No. 21 y derivados de fluoresceina halogenados tales como D&C rojo No. 27, D&C anaranjado rojo No. 5 en combinación con D&C rojo No. 21 y D&C anaranjado No. 10 y los pigmentos: dióxido de titanio, óxido de zinc, D&C rojo No. 36 y D&C anaranjado No. 17, las lacas de calcio D&C rojo Nos. 7, 11, 31 y 34, las lacas de bario de D&C rojo No. 12, la laca de estroncio D&C rojo No. 13, las lacas de aluminio de FD&C amarillo No. 5, de FD&C amarillo No. 6, de D&C rojo No. 27, de D&C rojo No. 21, de FD&C azul No. 1, óxidos de hierro, morado de manganeso, óxido de cromo, azul ultramarino y negro de humo. El agente colorante también puede ser un agente bronceador protector del sol tal como dihidroxiacetona, que produce una apariencia bronceada a la piel sin la exposición al sol. También puede ser deseable tener múltiples péptidos que se enlazan a la piel unidos al agente colorante para aumentar la interacción entre el colorante de piel basado en péptido y la piel . Ya sea las copias múltiples del mismo péptido que se enlaza a la piel o una combinación de diferentes péptidos que se enlazan a la piel pueden usarse . En casos de partículas de pigmentos grandes, un gran número de péptidos que se enlazan a la piel, esto es hasta alrededor de 10,000, pueden unirse al pigmento. Un número más pequeño que se enlazan a la piel puede unirse a las moléculas de tinte más pequeño, esto es alrededor de 50. Por lo tanto, en una modalidad de la presente invención, los colorantes de piel basados en péptidos son composiciones di-bloque que consisten de un péptido que se enlazan a la piel (SBP) y un agente colorante (C) , que tiene la estructura general (SBP)n-C, donde n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000, preferiblemente n es 1 hasta alrededor de 500. En otra modalidad, los colorantes de la piel basados en péptido contienen un espaciador (S) que separa el péptido enlazado del agente colorante, como se describe arriba. Pueden unirse copias múltiples del péptido que se enlaza a la piel a una molécula espaciadora sencilla. En esta modalidad, los colorantes de piel basados en péptido son composiciones tribloque que consisten de un péptido que se enlaza a la piel, un espaciador y un agente colorante, que tiene la estructura general [ (SBP)m-S]n-C, donde n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000, preferiblemente n es 1 hasta alrededor de 500, y m esta en el rango desde 1 hasta alrededor de 50, preferiblemente m es 1 hasta alrededor de 10.

Los colorantes de piel basados en peptido de la presente invención pueden usarse como agentes colorantes en productos de maquillaje y cosméticos, que . incluyen pero no limitan a, bases para maquillaje, rubores, lápiz labial, delineadores de labios, abrillantadores de labios, sombras de ojos y delineadores de ojos. Estos pueden ser productos de maquillaje anhidros que comprenden un medio cosméticamente aceptable que contiene una substancia grasa o pueden estar en forma de una dispersión estable tal como una emulsión, agua en aceite o aceite en agua, como se describe arriba. En estas composiciones la proporción del colorante de piel basado en peptido generalmente es desde alrededor de 0.001% hasta alrededor de 40% en peso con relación al peso total de la composición. Métodos para el tratamiento de cabello, piel y uñas En otra modalidad, se proporcionan métodos para el tratamiento de cabello, piel y uñas, con los acondicionadores y colorantes basados en peptido de la presente invención. Específicamente, la presente invención también comprende un método para formar una película protectora de acondicionador basado en peptido en la piel, cabello o labios al aplicar una de las composiciones descritas arriba que comprende una cantidad efectiva de un acondicionador para piel basado en péptido o un acondicionador para cabello basado en péptido a la piel, cabello o labios y permitir la formación de la película protectora. Las composiciones de la presente invención pueden aplicarse a la piel, cabello o labios por varios medios, que incluyen pero no se limitan a rocío, con brocha y aplicación manual. La composición acondicionadora basada en péptido se deja en contacto con la piel, cabello o labios durante un periodo de tiempo suficiente para formar la película protectora, preferiblemente desde al menos de alrededor de 0.1 hasta 60 minutos. La presente invención también proporciona un método para colorear el cabello al aplicar una composición colorante de cabello que comprende una cantidad efectiva de un colorante de cabello basado en péptido al cabello por los medios descritos arriba. La composición colorante de cabello se permite que este en contacto con el cabello durante un periodo de tiempo suficiente para que cause la coloración del cabellos, preferiblemente alrededor de 5 hasta 50 minutos, y luego la composición colorante de cabello puede enjuagarse del cabello. La presente invención también proporciona un método para colorear la piel o los labios al aplicar una composición colorante de piel que comprende una cantidad efectiva de un colorante de piel basado en péptido a la piel o los labios por los medios descritos arriba. La presente invención también proporciona un método para colorear las uñas de las dedos de las manos o las uñas de los dedos de los pies al aplicar una composición abrillantadora de uñas al aplicar una cantidad efectiva de un colorante de uñas basado en péptido a las uñas de^ los dedos de las manos o uñas de los dedos de los pies por los medios descritos arriba . La presente invención también proporciona un método para colorear las pestañas y las cejas al aplicar una composición cosmética que comprende una cantidad efectiva de un colorante de cabello basado en péptido a las cejas y pestañas por los medios descritos arriba. EJEMPLOS La presente invención se define además en los siguientes ejemplos. Se entenderá que estos ejemplos, que aunque indican modalidades preferidas de la invención se dan a modo de ilustración únicamente. De la discusión anterior y estos ejemplos, alguien experto en el arte podrá acertar las características esenciales de esta invención y sin salirse del espíritu y alcance de la invención, puede hacer varios cambios y modificaciones a la invención para adaptarla a varios usos y condiciones. El significado de las abreviaturas es como sigue: "min" significa minutos, "sec" significa segundos, "h" significa horas, "µ??" significa microlitros, "mL" significa mililitros, "L" significa litros, "nm" significa nanómetros, "mm" significa milímetros, "cm" significa centímetros, "µp?" significa raicrómetros , "mM" significa milimolar, "M" significa molar, "mmol" significa milimol, "µp???" significa micromol, "g" significa gramos, "µ " significa microgramos, "mg" significa miligramos, ¾g" significa la constante de gravitación, "rpm" significa revoluciones por minuto, "pfu" significa unidad que forma plaga, "BSA" significa albúmina de suero de bovino, "ELISA" significa ensayo inmunosorbente enlazado a la encima, "IPTG" significa isopropil ß-D-tiogalactopiranosida, "A" significa absorbancia, "A50" significa la medición de absorbancia a una longitud de onda de 450 nm, "TBS" significa solución salina amortiguada en Triis, "TBST-X" significa solución salina amortiguada que contiene Tween° 20 donde "X" es el porcentaje en peso de Tween° 20, "Xgal" significa 5-bromo-4-cloro-3-indolil-beta-D-galactopiranosida, "SEM" significa error estándar del medio, "ESCA" significa espectroscopia de electrón para análisis clínico, "eV" significa voltios de electrón, "TGA" significa análisis termogravimétrico, "GPC" significa cromatografía de permeación en gel, "PM" significa peso molecular, "Mw" significa peso molecular promedio en peso, "% vol" significa porcentaje de volumen. Métodos generales: Las técnicas de recombinación molecular y ADN recombinante estándar usadas en los ejemplos son bien conocidas en el arte y se describen por Sambrook, J. , Fritsch, E. F. And Maniatis, T. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., 1989 por T. J. Silhavy, M. L. Venían, y L. W. Enquist, Experimente with Gene Fusions, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y., 1984 y por Ausubel, F. M. Et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc. Y iley-Interscience, N. Y., 1987. Los materiales y métodos apropiados para mantenimiento y crecimiento de cultivos bacteriales también son bien conocidos en el arte. Las técnicas apropiadas para usarse en los siguientes ejemplos pueden encontrarse en Manual of Methods for General Bacteriology, Phillipp Gerhardt, R. G. E. Murria, Ralph N. Costilow, eugene W. Nester, illis A. ood, Noel R. Krieg y G. BriggsPhillips , Eds . , American Society for Microbiology, Washington, DC, 1994, o por Thomas D. Brock in Biotechnology: A Textbook of industrial Microbiology, Second Edition, Sinauer Associates, Inc., Sunderland, MA, 1989. Todos los reactivos, enzimas de restricción y materiales usados para el crecimiento y mantenimiento de células bacteriales se obtienen de Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) BD Diagnostic Systems (Sparks, MD) . Life Technologies (Rockville, MD) o Sigma Chemical Company (St. Louis, MO) . Salvo que se especifique de otra manera.

EJEMPLO 1 Selección de fago-péptidos que se enlazan al cabello usando bioinmunoplaqueteo estándar El propósito de este ejemplo es identificar los fago-péptidos que se enlazan al cabello que se enlazan al cabello normal y para el cabello blanqueado usando el bioinmunoplaqueteo que exhibe el fago estándar. Colecciones de péptido que exhiben el fago Las colecciones de fago usadas en la presente invención, el kit de colección de péptido que exhibe el fago Ph. D. -12™ y el kit de colección que exhibe el fago Ph. D. -7™ se adquieren de New England BioLabs (Beverly, MA) . Estos kits se basan en una colección de combinación de los péptidos 7 o 12 aleatorios fusionados a una proteina de recubierta menor (plll) del fago M13. El péptido exhibido se expresa en la terminación N de plll, de tal manera que después de que el péptido de señal se desdobla el primer residuo de la proteína recubierta es el primer residuo del péptido exhibido. Las colecciones Ph. D. -7 y Ph. D -12 consisten de aproximadamente de 2.8 x 109 y 2.7 x 109 secuencias, respectivamente. Un volumen de 10 µL contiene alrededor de 55 copias de cada secuencia de péptido. Cada ronda inicial de experimento se lleva a cabo usando la colección original proporcionada por el fabricante con objeto de evitar introducir cualquier sesgo en los resultados . 8d Preparación de Muestras de Cabello: Las muestras usadas como cabello normal fueron cabellos humanos castaños medios de 6 pulgadas (15.24 cm) obtenidas de International Hair Importers and Products (Bellerose, NY) . Los cabellos se colocan en isopropanol al 90% durante 30 minutos a temperatura ambiente y luego se lavan 5 veces durante 10 minutos cada vez con agua desionizada. Los cabellos se secan al aire durante la noche a temperatura ambiente. Para preparar las muestras de cabellos blanqueadas, los cabellos humanos castaño medio se colocan en ¾02 al 6% que se ajusta hasta pH 10.2 con hidróxido de amonio, durante 10 minutos a temperatura ambiente y luego se lavan 5 veces durante 10 minutos cada vez con agua desionizada. Los cabellos se secan al aire durante la noche a temperatura ambiente . Las muestras de cabellos normales y blanqueadas se cortan en longitudes de 0.5 hasta 1 cm y alrededor de 5 hasta lOmg de los cabellos se colocan en pozos de un aparato de bioinmunoplaqueteo de 24 pozos regular que tiene un fondo de piel de cerdo. Un número igual de los pozos de piel de cerdo se dej a vacío . El aparato de fondo de piel de cerdo se usa como un procedimiento substractivo para remover los péptidos-fago que tienen afinidad para la piel . Este aparato se crea al modificar un aparato de manchado de punto (obtenido de Schieicher & Schuell, eene, NH) para establecer el proceso de bioinmunoplaqueteo . Específicamente, la parte superior del bloque de 96 pozos del aparato de manchado de punto se reemplaza por un bloque de 24 pozos. Se coloca 4 6 pulgadas (10.16 x 15.24 cm) de piel de cerdo tratada bajo un bloque de 24 pozos y el inmunoplaqueteo de los pozos con el fondo de la piel de cerdo se forma al ajustar el aparato. La piel de cerdo se adquiere de un supermercado local y se almacena a -80 °C. Antes de usarse la piel se coloca en agua desionizada para descongelar, y luego se agrupa en seco usando una toalla de papel. La superficie de la piel se remoja con isopropanol al 90%, y luego se enjuaga con agua desionizada. El aparato de 24 pozos se rellena con solución amortiguadora de bloqueo que consiste de 1 mg/mL BSA en TBST que contiene Tween*8 20 al 0.5% (TBST-0.5%) y se incuba durante 1 hora a 4°C. Los pozos y los cabellos se lavan 5 veces con TBST-0.5%. Un mililitro de TBST-0.5% que contiene 1 mg/mL BSA se agrega a cada pozo. A continuación, 10 uL de la colección de fago original ( 2 x 1011 pfu) ya sea de la colección 12-mer o 7-mer se agrega a los pozos del fondo de piel de cerdo que no contiene la muestra de cabello y la colección de fago se incuba durante 15 minutos a temperatura ambiente. Los fagos sin unir se transfieren entonces a los pozos de fondo de piel de cerdo que contiene las muestras de cabello y se incuban durante 15 minutos a temperatura ambiente. Las muestras de cabellos y los pozos se enjuagan 10 veces con TBST-0.5%. Los cabellos se transfieren entonces a pozos de fondo plásticos, limpios de una placa de 24 pozos y 1 mL de una solución amortiguadora de elución no específica que consiste de 1 mg/mL BSA en glicina HCl 0.2 M, ph 2.2 se agrega a cada pozo y se incuba durante 10 minutos para eluir los fagos unidos. A continuación 160 µ]_? de la solución amortiguadora de neutralización que consiste de Trsi-HCl 1 M, pH 9.2, se agrega a cada pozo. Los fagos eluidos de cada pozo se transfieren a un tubo nuevo para titular y procesar por secuencia. Para titular los fagos unidos, el fago eluido se diluye con solución amortiguadora SM (100 mM NaCl, 12.3 mM MgS04-7 H20, 50 mW Tris-HCl, pH 7.5, y 0.01 % en péso/vol de gelatina) para preparar diluciones en serie 10 veces de 101 hasta 104. Una alícuota de 10 µL de cada dilución se incuba con 200 µL de E. Coli ER2738 de fase log media (New England BioLabs), se hace crecer en un medio LB durante 20 minutos y luego se mezcla con 3 mi de agarosa superior (medio LB con 5 mM MgCl2, y agarosa al 0.7%) a 45°C. Esta mezcla se expande en una placa de agar S-Gal™/LB (Sigma Chemical Co . ) y se incuba durante la noche a 37°C. La mezcla de agar S-Gal™/LB contiene 5 g de triptona, 2.5 g de extracto de levadura, 5 g de cloruro de sodio, 6 g de agar, 150 de 3 , 4-ciclohexenoesculetin-ß-D-galactopiranosida (S-Gal™) , 250 mg de citrato de amonio férrico y 15 mg de isopropil ß-D-tiogalactosida (IPTG) en 500 mL de agua destilada. Las placas se preparan por autoclave de S-Gal™/LB durante 15 hasta 20 minutos a 121-124°C. Las placas negras sencillas se hinchan aleatoriamente para aislado de ADN y análisis de secuencia. El resto de los fagos eluidos se amplifica al incubar con E. Coli ER2738 diluido, de un cultivo durante la noche diluido 1:100 en medio LB a 37°C durante 4.5 horas. Después de este tiempo el cultivo celular se centrifuga durante 30 segundos y el 80% superior del sobrenadante se transfecta a un tubo fresco, 1/6 volumen de PEG/NaCl (polietileno glico-800 al 20%, cloruro de sodio 2.5 M) se agrega y el fago se permite que se precipite durante la noche a 4°C. el precipitado se colecta por centrifugado a 10,000 x g a 4°C y el extruido resultante se vuelve a suspender en 1 mL de TBS . Esta fue la primer ronda de reserva amplificada. La primera ronda de reserva de fago amplificada se titula entonces de conformidad con el mismo método descrito arriba. Para la siguiente ronda de bioinmunoplaqueteo , más de 2 x 1011 de reserva de fago de la primera ronda se usa. El proceso de bioinmunoplagueteo se repite durante 3 hasta 6 rondas dependiendo de los experimentos. Los lisados de placas sencillos se preparan siguiendo las instrucciones del fabricante (New England Labs) y el ADN genómico de fago de hebra sencilla se purifica usando el kit QIAprep Spin MI3 (Qiagen, Valencia, CA) y se procesa en secuencia en la instalación de proceso de secuencia de Dupont usando el cebador de procesador de secuencia -96 glll (5'-CCCTCATAGTTAGCGTAACG-3 ' ) , dado como SEQ ID NO: 62. el péptido exhibido se encuentra inmediatamente después del péptido de señal del gen III. La secuencia de aminoácidos de los fago-péptidos que se enlazan al cabello normal de la colección 12-mer aislada de la quinta ronda de bioinmunoplaqueteo se dan en la Tabla 1. Las secuencias de aminoácido de los fago-péptidos que se unen al cabello blanqueado de la colección 12-mer aislada de la quinta ronda del bioinmunoplaqueteo se dan en la Tabla 2. Las secuencias de aminoácido repetidas de los fago-péptidos que se enlazan al cabello normal eluidas de la colección 7-mer de 95 clones aleatoriamente seleccionados, aislados de la tercera ronda de bioinmunoplaqueteo, se dan en la Tabla 3.

Tabla 1 Secuencias de aminoácido de péptido de fago que se enlazan al cabello normal eluidos de la colección de 12 -Meros 1La frecuencia representa el número de secuencias idénticas que se presentan fueran de 23 clones procesados en secuencia .

Tabla 2 Secuencias de aminoácido de fago-péptidos que se en lazan al cabello blanqueado eluidos de la colección de 12 -Meros La frecuencia representa e número de secuencias idénticas que se presentan fueran de 24 clones procesados en secuencia .

Tabla 3 Secuencias de aminoácido de fago-péptidos que se enlazan al cabello normal eluido de la colección de 7-Meros 1Fue una intersión de fragmento de ADN múltiple en estos clones EJEMPLO 2 Selección de fago-péptidos que se enlazan al cabello de alta afinidad usando un método modificado El propósito de este ejemplo fue identificar fago-péptidos que se enlazan al cabello con una afinidad de enlace mayor . Los cabellos que se trataron con la solución amortiguadora de elución ácida como se describe en el ejemplo 1, se lavan 3 veces más con la solución amortiguadora de elución y luego se lavan 3 veces con TBST-0.5%. Estos cabellos que tienen fago-péptidos resistentes al ácido todavía unidos, se usan para infectar directamente 500 µ?. de células hospedadoras de fase log media, E. Coli ER2738 (New England BioLabs) , que se hacen crecer entonces en medio LB durante 20 minutos y luego se mezclan con 3 mL de agarosa superior (medio LB con 5 m MgCl2, y agarosa al 0.7%) a 45 °C. Esta mezcla se extiende en una placa de medio LB/IPTG/S-Gal™ (medio LB con 15 g/L agar, 0.05 g/L IPTG, y 0.04 g/L S-Gal™) y se incuba durante la noche a 37°C. Las placas negras se cuentan para calcular la titulación de fagos. Las placas negras sencillas se pinchan aleatoriamente para aislado- de ADN y análisis de secuenciado como se describe en el Ejemplo 1. Este proceso se realiza en las muestras de cabello normal y blanqueadas que se separan por exclusión con las colecciones que exhiben fago con el 7-mero y 12-mero,, como se describe en el ejemplo 1. La secuencia de aminoácido de estos fago-péptidos que se enlazan al cabello de alta afinidad se dan en las Tablas 4-7.

Tabla 4 Secuencias de aminoácido de fago-péptidos que se enlaza al cabello normal, de alta afinidad a partir de la colección de 7-Meros 1Fue una intersión de fragmento de ADN múltiple en este clon Tabla 5 Secuencias de aminoácido de fago-péptidos que se enlaza al cabello blanqueado, de alta afinidad a partir de la colección de 7-Meros Clón ID Secuencia de aminoácido SEQ ID NO: D39 LGIPQNL 39 B1 TAATTSP 38 Tabla 6 Secuencias de aminoácido de fago-péptidos que se enlaza al cabello normal, de alta afinidad a partir de la colección de 12 -Meros Clon ID Secuencia de aminoácido SEQ !D NO: C2 AKPISQHLQRGS 40 A3 APPTPAAASATT 41 F9 DPTEGARRTI T 42 A19 EQISGSLVAAPW 43 F4 LDTSFPPVPFHA 44 F35 LPRIANTWSPS 45 D21 RTNAADHPAAVT 46 C10 SLNWVTIPGPKI 47 C5 TDMQAPTKSYSN 48 D20 TIMTKSPSLSCG 49 C18 TPALDGLRQPLR 50 A20 TYPASRLPLLAP 51 C13 AKTHKHPAPSYS 52 G-D20 YPSFSPTYRPAF 53 A23 TDPTPFSISPER 54 F67 SQNWQDSTSYSN 55 F91 WHDKPQNSSKST 56 G-F1 LDVESYKGTSMP 4 Tabla 7 Secuencias de aminoácido de fago-péptidos que se enlaza al cabello blanqueado, de alta afinidad a partir de la colección de 12-Meros EJEMPLO 3 Selección de fago-péptidos que se enlazan a las uñas de los dedos de alta afinidad El propósito de este ejemplo fue identificar fago-péptidos que tienen una afinidad de enlace superior a las uñas de los dedos de las manos . El método de bioinmunoplaqueteo modificado descrito en el ejemplo 2 se usó para identificar clones de péptido-fago que se enlazan a las uñas de los dedos de las manos, de alta afinidad. Se colectan uñas de los dedos de las manos humanas de sujetos de pruebas. Las uñas se limpian al cepillar con una solución jabonosa, enjuagar con agua desionizada, y permitir que se sequen al aire a temperatura ambiente. Las uñas se muelen en polvo luego bajo N2 líquido y se agrega a 10 mg de las uñas a cada pozo de la placa filtro de 96 pozos. Se tratan las muestras de uña durante una hora con solución amortiguadora de bloqueo que consiste de 1 mg/mL en BSA en TBST-0.5% y luego se lavan con TBST-0.5%. Las muestras de uñas se incuban con la colección de fago (kit de colección de péptido que sigue en fago Ph. D-12) , y se lavan 10 veces usando las mimas condiciones descritas en el ejemplo 1. Después de la etapa de elución ácida, descrita, en el ejemplo 1 las muestras de uñas se lavan tres veces más con solución amortiguadora de elución y luego se lavan tres veces más con TBST-0.5%. Las uñas tratadas con ácido, tiene fago-péptidos resistentes al ácido todavía enlazado, se usan para infectar directamente células E. coli ER2738 como se describen el ejemplo. Este proceso de bioinmunoplaqueteo se repite tres veces. Un total de 75 placas de fago negras sencillas se pinchan aleatoriamente para aislado de ADN y análisis de secuenciado y se identifican dos clones repetidos. La secuencia de aminoácidos de estos f go-péptidos se enlistan en la tabla 8. Estos péptidos que se enlazan a las uñas también se encuentran que se enlazan bien al cabello blanqueado.

Tabla 8 Secuencias de aminoácidos de péptido de fago que se enlazan a las uñas de los dedos de alta afinidad. xLa frecuencia representa el numero de secuencias idénticas que se presentan f era de los 75 clones secuenciados .

Ejemplo 4 Selección de péptido de fago que se enlazan a la piel de lata afinidad El propósito de este ejemplo puede identificar fago-péptidos que tiene una alta afinidad de enlace a la piel. El método de bioinmunoplaqueteo modificado descrito en los ejemplos 2 y 4 se usó para identificar los clones de péptido-fago que se enlazan a la piel como de alta afinidad. La piel de cerdo sirve como un modelo para la piel humana en este proceso. Se prepara la piel de cerdo como se describe en el ejemplo 1. Se realizan tres rondas de separaciones por exclusión con el aparato de bioinmunoplaqueteo de fondo de piel de cerdo, regular, usando el mismo procedimiento descrito en el ejemplo 4. Un total de 28 placas de fago negro sencillas se pinchan aleatoriamente para aislado de ADN y análisis de secuenciado y un clon repetido se identifica. La secuencia de aminoácidos de este péptido de fago, que aparece nueve veces de las 28 secuencias, fue TPFHSPENAPGS , dado como SEQ ID NO: 61. Ejemplo 5 Caracterización cuantitativa de enlace de los clones de fago que se enlazan al cabello El propósito de este ejemplo de cuantificar la actividad de enlace de los clones de fago por titulación y ELISA. Titulación de clones de fago que se enlazan al cabello: Los clones de fago exhiben péptidos específicos se usaron para comparar las características de enlace de diferentes secuencias de péptido. Un ensayo basado en la titulación se usó para cuantificar el enlace del fago. Este ensayo mide la pfu de salida mantenida por 10 mg de superficie de cabello que tiene una señal a la relación de ruido de 103 hasta 104. La entrada para todos los clones de fago fue 1014 pfu. Se deberá hacer énfasis en que este ensayo mide la partícula de fago que expresa el péptido, en vez del enlace péptido. Los cabellos normales se cortaron en longitudes 0.5 cm y 10 mg del cabello cortado se colocó en cada pozo una placa filtro de 96 pozos (Qiagen) . Luego, los pozos se rellenaron con solución amortiguadora de bloqueo que contiene Img/mL BSA en TBST-0.5% y se incubo durante 1 hora a 4°C. Los cabellos se lavan 5 veces con TBST-0.5%. Los pozos se rellenan entonces con 1 mL de TBST-0.5% que contiene 1 mg/mL BSA y luego los clones de fago purificados (1014 pfu) se agregaron a cada pozo. Las muestras de cabello se incuban durante 15 minutos a temperatura ambiente y luego se lavan 10 veces con TBST-0.5%. Los cabellos se transfectan a pozos limpios y se agrega 1.0 mL de una solución amortiguadora no específica que consiste de 1 mg/mL BSSA en 0.2 M Glicina-HCI a pH 2.2 a cada pozo. Las muestras se incuban durante 10 minutos y luego se agrega 160 µL de una solución amortiguadora de neutralización (1 M Tris-HCI, pH 9.2) a cada pozo. Los fagos eluidos de cada pozo se transfectan a un tubo nuevo para titulación y análisis de secuenciado. Para titular fagos enlazados, el fago eluido se diluye con solución amortiguadora SM para preparar diluciones en serie de 10 veces de 101 hasta 108. Una alícuota de 10µL de cada dilución se incuba con 200 µL de log media E. coli ER2738 (New England BioLabs) , y se hace crecer en medio LB durante 20 minutos y luego se mezcla con 3 mL de agarosa superior (medio de LB con 5Mm MgCl2 y 0.7%) a 45°C. Esta mezcla se expande en una placa de medio LB/PTG/Xgal (medio LB con 15 g/L agar, 0.05 g/L IPTG, y 0.04 g/L Xgal) y se incubo durante noche a 37°C. Las placas azules se cuentan para calcular las titulaciones del fago, que se dan en tabla 9.

Tabla 9 Titulación de clones de fago que se enlazan al cabello.

Caracterización de clones de fago que se enlazan al cabello por ELISA: Se usó el ensayo inmunosorbente enlazado a la enzima (ELISA) para evaluar la especificidad del enlace del cabello de clones de péptido de fago seleccionado. Los clones de péptido-fago identificado en los ejemplos 1 y 2 juntos con un control aleatoriamente elegido G-F9, HGPDLLRSAPR (dado como SEQ ID NO: 63) se amplifica. Se agregaron más que 1014 pfu fagos a la superficie de cabello prebloqueada. La misma cantidad de fagos también se agregó la superficie de piel de cerdo prebloqueadas como un control para demostrar las especificidad del enlace al cabello.

Se creó un aparato de 96 pozos de fondo de piel de cerdo o cabello único al aplicar una capa de Parafil8 bajo el bloque de 96 pozos superior de un sistema Minifold I Dot-Blot (Schleicher & Schuell, Inc., Keene, NH) , agregando cabello o una capa de piel de cerdo sin cabello a la superficie de la cobertura Parafilm° y luego se sella el aparato. Para cada clon a probarse, el pozo recubierto con cabello se incubo durante 1 hora a temperatura ambiente con 200 ul solución amortiguadora de bloqueo, que consiste de leche en polvo sin grasa al 2% (Schleicher & Schuell, Inc.) en TBS. Un segundo sistema Minifold con piel de cerdo al fondo de los pozos de trato con solución amortiguadora de bloqueo simultáneamente para servir como control . La solución amortiguadora de bloqueo se removió al invertir los sistemas y secarlos con toallas de papel. Los sistemas se enjuagaron 6 veces con solución amortiguadora de lavado que consiste de TBST-0.05%. Los pozos se rellenan con 200 uL de TBST-0.5%. que contienen 1 mg/mL BSA y luego 10 uL (durante 1012 copias) de reserva de fago purificada se agregó a cada pozo. Las muestras se incuban a 37°C durante 15 minutos con agitación lenta. El fago no enlazado se remueve no lavando los pozos 10 a 20 veces con TBST-0.5%. Luego, se agregan 100 uL de peroxidasa de raíz de rábano conjugado de anticuerpo anti-M13 (Amershan USA, Piscataway, NJ) , diluida 1:500 en la solución amortiguadora de bloqueo a cada pozo y se incuba durante 1 hora a temperatura ambiente, La solución de conjugado se removió y los pozos se lavan 6 veces con TBST-0.05%. El substrato TMB (200 uL) obtenido de Pierce Biotechnology (Rockford, IL) se agrega a cada pozo y el color se permite que desarrolle por entre 5 hasta 30 minutos, típicamente por 10 minutos a temperatura ambiente. Luego se agrega la solución de detección (200 uL de ¾S042 ) a cada pozo y la solución se transfiere a una placa de 96 pozos y el ?450 se mide usando una espectrofotometro de microplacas (Molecular Devices, Sunnyvale, CA.) . Los valores de absorbancia resultante, reportados como el medio de al menos tres replicaciones, y el error estándar del medio (SEM) de dan en la tabla 10. Tabla 10 Resultados del ensayo ELISA con piel y cabello Como puede observarse de los datos en el Tabla 10, todos los clones que se enlazan al cabello tiene una afinidad de enlace significativamente más alta para el cabello que los de control . Por otro lado los clones que se enlazan al cabello exhiben varios grados de selectividad para cabello comparado con la piel de cerdo. El clon D21 tiene una selectividad más alta para el cabello, que tiene una muy fuerte afinidad para el cabello y una muy baja afinidad para la piel del cerdo. Ej emplo 6 Confirmación de la especificidad y afinidad de enlace de péptido El propósito de este ejemplo fue probar la especificidad y afinidad del ciclo de enlace péptido del péptido D21 que se enlaza al cabello usando el ELISA del competencia. El ensayo ELISA sólo detecta partículas de fago que se mantienen unidas a la superficie del cabello. Por lo tanto si el péptido sintético compite con la partícula del fago por el mismo sitio de enlace en la superficie del cabello, la adición del péptido sintético en el sistema ELISA reduce significativamente los resultados ELISA debido a la competencia de péptido. El péptido D21 que se enlaza al cabello sintético, dado como SEQ ID NO: 46, se sintetizó por SynPep (Dublin, CA) . Como un control un péptido que se enlaza a la piel sintético sin relación dado como SEQ ID NO: 61, se agregó al sistema. Las condiciones experimentales fueron similares a aquellas usadas en el método ELISA descrito en el Ejemplo 5. Brevemente, 100µL de solución amortiguadora de enlace (1 X TBS con 0.1% Tween° 20 y 1 mg/mL BSA) y 1011 pfu de las partículas de fago D21 puras, se agregaron a cada pozo de la placa filtro de 96 pozos, que contiene una muestra del cabello normal. El péptido sintético (100 se agregó a cada pozo correspondiente en una concentración de 0.8 mM. Las reacciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente durante 1 hora con agitación suave, seguido por 5 lavados con TBST-0.5%. Las etapas restantes con idénticas a aquellas usada en el método ELISA descrito en el ejemplo 5. Los resultados ELISA presentados como la absorbancia a 450 nm (A50) , se muestran en la Tabla 11. Cada prueba ELISA individual se realizó en triplicado; los valores en la Tabla 11 son los medios de las determinaciones por triplicado. Tabla 11 Resultados de la competencia de péptido ELISA Muestra A450 SEM Conjugado del anticuerpo 0.199 0.031 Fago D21 1.878 0.104 Fago D21 y 1.022 0.204 D21 Fago D21 y Péptido 2.141 0.083 de control Estos resultados demuestran que el péptido D21 sintético no compite con el clon de fago por los mismo sitios de enlace en la superficie del cabello. Ej emplo 7 Selección de péptidos - fago que se enlazan al cabello resistentes al champú usando bioinmunopla ueteo El propósito de este ejemplo fue seleccionar péptidos -fago que se enlazan al cabello resistentes al champú usando bioinmunoplaqueteo con lavado de champú. Con objeto de seleccionar los péptidos que se enlazan al cabello resistentes al champú, se realizó un experimento de bioinmunoplaqueteo usando las colecciones de péptido fago 12-mero contra cabellos normales y blanqueados, como se describe en el ejemplo 2. En lugar de usar solución amortiguadora TBST normal para lavar completamente los fagos sin enlazar, los cabellos en complejo con el fago se lavaron con soluciones de champú al 10%, 30%, y 50% (Pantene Pro-V shampoo, Volumen Fino, Procter & Gamble, Cincinnati, OH) , durante 5 minutos en tubos separados, seguido por seis lavados con solución amortiguadora con TBS . Los cabellos lavados se usaron directamente para infectar células bacteriales hospedadoras como se describe en el método de bioinmunoplaqueteo modificado, descrito en el ejemplo 2. Un problema potencial con este método es el efecto del champú en la capacidad del fago para infectar células hospedadoras bacteriales. En un experimento de control una cantidad conocida de partículas de fago se agregó a una solución de champú al 10% durante 5 minutos, y luego una porción de la solución se usó para infectar células bacteriales . La titulación del fago tratado con champú fue de 90% menor que la fago sin tratar. Los tratamientos de champú al 30% y 50% dan aún un daño más severo a la capacidad del fago para infectar células hospedadoras. No obstante, dos péptidos de un fago que se enlazan al cabello resistentes al champú se identificaron, como se muestra en la Tabla 12. Tabla 12 Secuencias de péptido de péptidos fago que se enlazan al cabellos resistentes al champú identificadas usando el método de bioinmunoplaqueteo E emplo 8 Selección de péptidos - fago que se enlazan al cabellos resistentes al champú usando PCR El propósito de este ejemplo fue seleccionar los péptidos - fago que se enlazan al cabello resistentes al champú usando el método PCR para evitar el problema del daño inducido por el champú o en el fago. Este principio del método PCR es que los fragmento de ADN dentro de la partícula del fago pueden recuperarse usando PCR, sin tener en cuenta la viabilidad del fago, y que los fragmentos de ADN recuperados, que corresponden a las secuencias de péptido que se enlazan al cabello, pueden entonces clonarse en el vector fago y empacarse en partículas de fago saludables. Los experimentos de bioinmunoplaqueteo se realizaron usando las colecciones de péptido-fago de 7-mero y 12-mero contra cabellos normales y blanqueados, como se describe en el ejemplo 1. Después del lavado final los cabellos tratados con el fago se sometieron a 5 minutos de lavados de champú, seguido por 6 lavados de solución amortiguadora de TBS. Los cabellos lavados con champú se colocaron en un tubo nuevo rellenado con 1 mL de agua, y se hirvió durante 15 minutos para liberar el ADN. Esta solución hervida que contiene el ADN, se usó como la plantilla de ADN para las reacciones PCR. Los cebadores usados en la reacción PCR fueron cebadores: M13KE-1412 delantero 5 ' -CAAGCCTCAGCGACCGAATA -3', dados como SEQ ID NO: 67 y M13KE-1794 inverso 5'- CGTAACACTGAGTTTCGTCACCA-3 ' , dado como SEQ ID NO: 68. Las condiciones PCR fueron: 3 minutos de desnaturalizado a 96°C, seguido por 35 ciclos de 94 °C durante 30 segundos, 50°C durante 30 segundos y 60°C durante 2 minutos. Los productos PCR (-400 bp) y de vector M13K (New England BioLabs) se digirieron con enzimas de restricción Eag I y Acc65 I. Las condiciones de ligado y transformación, como se describe en el sistema de clonación que exhibe péptido Ph.D.™ (New England Biolabs) , se usaron. La secuencia de aminoácidos del péptido-fago que se enlaza al cabello resistente al champú es NTSQLST, dado como SEQ ID NO: 70. Ejemplo 9 Determinación de la afinidad de péptidos que se enlazan a la piel y que se enlazan del cabello El propósito de este ejemplo fue determinar la afinidad de los péptidos que se enlazan a la piel y que se enlazan al cabello por sus substratos respectivos, medido como valores MB50 usando un ensayo ELISA. Los péptidos que se enlazan a la piel que se enlazan al cabello se sintetizaron por Synpep Inc. (Dublin, CA) . Los péptidos se biotinilan al agregar un residuo de lisina biotinilado en la terminación C de la secuencia de enlace de aminoácido para propósitos de detección y se agrega una cistina aminada a la terminación C de la secuencia. Las secuencias de aminoácidos de los péptidos probados serán como SEQ ID NO: 71-74 como se muestra en la Tabla 13. Para muestras de cabello, el procedimiento usado fue como sigue. La estructura del sistema de 96 pozos específico en la superficie usada fue la misma como la que se describe en el ejemplo 5. Brevemente, los 96 pozos con superficies con cabello o piel de cerdo se bloquearon con solución amortiguadora de bloqueo (SuperBlock™ de Pierce Chemical Co. , Rockford, IL) a temperatura ambiente durante 1 hora, seguido por 6 lavados con TBST-0.5%, 2 minutos cada uno a temperatura ambiente. Varias concentraciones de péptido enlazados, biotinilado, se agregaron a cada pozo se incubaron durante 15 minutos a 37°C y se lavaron seis veces a TBST-0.5% dos minutos cada vez a temperatura ambiente. Luego, se agregó conjugado de peroxidasa de raíz de rábano-estreptavidina (HRP) (Pierce Chemical Co.,) a cada pozo (10 µg por pozo) , y se incubo durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la incubación los pozos se lavaron 6 veces con TBST-0.5%, 2 minutos cada vez a temperatura ambiente. Finalmente, el desarrollo de color y la medición se realizaron como se describe en el ejemplo 5. Para la medición de MB50 los complejos péptidos - piel, se usó el siguiente procedimiento. Primero se trató la piel de cerdo para bloquear la biotina endógena de la piel. Esto se da al agregar estreptavidina y la solución amortiguadora de bloqueo . Después de bloquear la muestra de piel de cerdo la piel se trató con D-biotina para bloquear el acceso de sitio enlazados de estreptavidina. Las etapas restantes fueron idénticas a aquellas usadas para las muestras de cabello . Los resultados se grafican como A450 contra la concentración de péptidos usando GraphPad Prism 4.0 (GraphPad Software, Inc., San Dieg, CA) . Los valores MB50 se calculan de agrupaciones Scatchard y se resumen en la tabla 13. Los resultados de muestran que la afinidad de enlace los péptidos que se enlazan al cabello (D21, F35, y 1-35) y el péptido que se enlaza a la piel (SEQ ID NO: 61) para cada substrato respectivo fue alta, mientras que la afinidad de enlace de los péptidos que se enlazan al cabello (D-21 y I-B5) para la piel fue relativamente baja.

Tabla 13 Resumen de valores MB50 para péptidos que se enlazan a la piel y al cabello * Los péptidos probados se biotinilaron en la terminación C de la secuencias que se enlazan en el aminoácido y se agregó una cisteína amidada a la terminación C de la secuencia de enlace . Ejemplo 10. Preparación de un colorante de cabello de negro de humo basado en péptido El propósito de este ejemplo fue preparar un colorante de cabello de negro de humo basado en péptido por un covalente del péptido D21 que se enlaza al cabello, dado como SEQ ID NO: 46, a la superficie de las partículas de negro de humo. La superficies de las partículas de negro de humo se funcionalizó por la reacción con 2 , 2 ' -azobis (2-metilpropionamida- ) diclorohidrato para introducir grupos amino libres. Las partículas de negro de humo funcionalizadas se enlazan se unen entonces covalentemente al péptido que se enlaza al cabello específico.

Funcionalización de la superficie de negro de humo: El negro de humo (Nipex® 160-IQ de Degussa, Allendale, NJ) , 2,0 g, y 1.0 g de 2 , 2 ' -Azobis- (2-metilpropionamida) diclorohidrato (Aldrich, Mileaukee, WI) se agregaron a un matraz de fondo redondo de 100 mL y 30 mL de dioxano se agregó. El matraz se purga con nitrógeno durante 5 minutos. A continuación, el . matraz se sella con un septo de hule y la mezcla de reacción se agita a 65 °C durante 14 horas. Después de este tiempo se agrega 50 mL de agua desionizada, preparada con un sistema de purificación de agua Nanopure (Barnstead/Tremolina, Dubuque, IA) , a la mezcla. La solución diluida se centrífuga para colectar las partículas de negro de humo funcionalizadas y para removerle solvente orgánico y los reactivos que no reaccionaron. Se lavan las partículas de negro de humo con agua desionizada y se centrifugan. Este proceso de lavado y centrifugado se repite 2 veces más. Las partículas de negro de humo funcionalizadas se secan entonces por liofilización.

Síntesis de péptido que se enlaza al cabello protegido por t-Boc del clon de fago D21 El propósito de esta reacción fue proteger el grupo final amino del péptido enlazado al cabello. El péptido que se enlaza al cabello del con de fago D21 (0.25 g) dado como SEQ ID NO: 46 (9% de pureza, obtenido de SynPep Dublín, CA) se mezclo con 2.5 mL de agua desionizada en un matraz de fondo redondo de 25 mL. Luego, se agregaron 20 mg de NaOH y 0.25 mL de alcohol t-butílico. Después de agitar la mezcla durante 5 minutos, 0.12 g de bicarbonato de di-tert-butilo (anhídrido t-BOC) (Aldrich) se agregó gota a gota. El matraz se selló con un septo de hule y la mezcla de reacción se agito durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue clara al inicio de la reacción y se volvió turbia y luego se precipitó durante 1 hora. Durante la adición de agua (10 mL) , la mezcla de reacción formó una emulsión lechosa que luego se extrajo 3 veces con porciones de 5 mL de cloruro de metileno. La capa orgánica se lavó 2 veces con porciones de 5 mL de agua desionizada. Las capas de agua claras se combinaron todas y se secaron por liofilización, proporcionando 0.20 g de un polvo blanco espon oso (80% de rendimiento) . El producto se analizó por espectrometría de masa/cromatografía líquida (CL-EM) y se encontró que tiene un peso molecular de 1323 g/mol, con una pureza de 90% en peso.

Acoplamiento del negro de humo funcionalizado de amino con el péptido t-Boc-D21: El negro de humo funcionalizado por amino (87 mg) , el péptido t-Boc-D21 (80 mg) y diciclohexil carbodiimida (22 mg) se agregaron a 3 mL de tetrahidrofurano (THF) . Una solución de dimetil aminopiridina (17 µL) en varias gotas de THF se agregó gota a gota a esta mezcla con agitación. La suspensión resultante se calentó hasta 40 °C durante 6 horas con agitación, seguido por agitación durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó ácido trifluoroacético (0.6 mL) al producto y la mezcla se agitó durante otras 6 horas . A continuación, se agregó 5 mL de agua desionizada a la mezcla de reacción. La mezcla se centrifugó a 3,500 rpm durante 2 minutos y el sobrenadante se decantó. El sólido restante en el tubo centrífugo se lavó con agua desionizada y se centrifugó de nuevo. Este lavado se repitió hasta que el pH del sobrenadante alcanzó aproximadamente 6.0. el residuo oscuro se secó entonces usando un liofilizador durante 2 días proporcionando un polvo oscuro .

EJEMPLO 11 Teñido de cabello usando el colorante de cabello de negro de humo basado en péptido El propósito de este ejemplo fue teñir una muestra de cabello blanco natural usando el colorante de cabello de negro de humo basado en péptido preparado en el ejemplo 10. Un manojo de cabello blanco natural (aproximadamente 100 piezas) (de International Hair Importers and Products Inc., Bellerose, NY) se limpió al mezclarse con 10 mL de isopropanol al 50% durante 30 minutos y luego se lavó al menos 5 veces con agua destilada. Después de secar al aire, el cabello limpio se sumergió durante 5 minutos en una solución que contiene 50 mg del colorante de cabello de negro de humo-péptido D21 que se enlaza al cabello descrito en el Ejemplo 10, disuelto en 10 mL de agua destilada. Después de secar, el cabello se lavó al menos 5 veces con agua destilada. El cabello blanco natural original se volvió negro ligero. El cabello pigmentado se lavó 3 veces con una solución de champú al 30% (champú Pantene Pro-V) al sumergir el cabello en la solución de champú y agitar con una pipeta de vidrio. El cabello se enjuagó al menos 10 veces con agua destilada. El color final del cabello blanco natural, pigmentado fue negro muy ligero.

EJEMPLO 12 Preparación de un acondicionador de cabello basado en péptido El propósito de este ejemplo fue preparar un acondicionador de cabello basado en péptido al unir covalentemente el péptido D21 que se enlaza al cabello, dado como SEQ ID NO: 46, con alcohol behenílico usando un acoplamiento de carbodiimid . El alcohol behenílico (Aldrich) , 81.7 mg, y 62.0 mg de diciclohexil carbodiimida (DCC) se disolvieron en 2.0 nL de THF en un matraz de fondo redondo de 25 mL. Una solución que contiene 0.25 g del 9-fluorenilmetiloxicarbonil (Fmoc) protegido en la terminal N de la SEQ ID NO: 46 (95% de pureza obtenido de SynPep, Dublín, CA) en 2.0 mL de dimetilformamida (DMF) , se agregó a la mezcla anterior. Luego, 50 µL de dimetilaminopiridina (DMAP) se agregó a la mezcla de reacción. Con agitación la mezcla de reacción se mantiene a 40°C durante 3 horas., y luego a temperatura ambiente durante la noche. Luego se evapora el solvente bajo vacío a temperatura ambiente durante 4 horas. Después de este tiempo la mezcla se disolvió en 25 mL de acetato de etilo, y le péptido que no reacciona se extrajo 3 veces con agua usando 10 mL de agua desionizada para cada extracción. La fase de acetato de etilo se aisló y el acetato de etilo se removió usando un evaporador rotatorio. El producto sólido resultante se disolvió en un solvente que consiste de 2.5 mL de THF y 2.5 de DMF y 1.5 mL de piridina se agregó para desbloquear el grupo amino del péptido D21. este mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente y luego los solventes se removieron por evaporación rotatoria bajo vacío. El producto final se caracterizó por CL/EM. EJEMPLO 13 Preparación de un acondicionador de cabello basado en péptido El propósito de este ejemplo fue preparar un acondicionador de cabello basado en péptido al unir covalentemente el péptido D21 pegado a la cisterna que se enlaza al cabello dado como SEQ ID NO: 64, con una octilamina usando el agente reticulante heterobifuncional éster de N-hidroxisuccinimida del ácido 3-maleimidopropiónico . La octilamina obtenida de Aldrich (Milwaukee, WI) se diluyó al agregar 11.6 mg a 0.3 mL de DMF. Esta solución diluida se agregó a una solución agitada que contiene 25 mg del éster de N-éster de hidroxisuccinimida del ácido 3-maleimidopropiónico (Aldrich) y 5 mg de diisopropiletilamina (Aldrich) en 0.2 mL de DMF en un matraz de fondo redondo de 5 mL. La mezcla de reacción se volvió turbia inmediatamente y luego se volvió clara varios minutos más tarde . La solución se agitó durante otra 4 horas. La solución se secó bajo alto vacío. El producto, maleimidopropionato enlazado a la octilamina, se purificó por cromatografía de columna usando una columna de gel de sílice 60 (EMD Chemicals, antiguamente EM Science, Gibbstown, NJ) y DMF/éter como el eluyente Aproximadamente 12 mg del producto anterior se colocaron en un matraz de fondo redondo de 5 mL y 50 mg del péptido D21 enlazado a la cisteína (obtenido de SynPeP, Dublín, CA) , dado como SEQ ID NO: 64, y 0.5 mL de solución amortiguadora de fosfato 0.1 M a 7.2 pH se agregaron. El péptido D21 enlazado a la cisteína tiene 3- residuos de glicina y una cisteína enlazada al final de la secuencia de enlace del péptido D21 que se enlaza al cabello (SEQ ID NO: 46) . Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas . El producto final, el acondicionador de cabello péptido C8-D21 se purificó con extracción de agua/éter. EJEMPLO 14 Preparación de un colorante de cabello de negro de humo basado en péptido El propósito de este ejemplo fue preparar un colorante de colorante de negro de humo basado en péptido usando el negro de humo que se funcionalizó con etanol amina. El número de péptidos enlazados a la superficie de negro de humo se estimó a análisis químicos. Preparación de partículas de negro de humo funcionalizadas con ácido En un vaso de precipitados de 1,000 mL se agregaron 25.5 g de negro de humo (Nipex-160-IQ de Degussa, 100 g de persulfato de amonio [( H4)2S208] (98% de Aldrich) y 333 mL de H2S04 1.0 M (98%, grado GR de E D Chemicals) solución acuosa. La mezcla se agitó con una placa de agitación magnética durante 24 horas a temperatura ambiente. Después de este tiempo la mezcla de reacción se transfirió a un tubo centrífugo plástico 500 mL y se centrifugó a 8,500 rpm durante 20 minutos. El sobrenadante se volvió claro y se removió el producto se lavó 6 veces con agua desionizada usando centrifugación para colectar el producto después de cada lavado. El producto final fue neutral (pH= 6.0) y se secó por liofilización durante 24 horas. El tamaño promedio de las partículas de negro de humo funcionalziadas fue 100 nm, como se mide usando un analizador de tamaño de partícula (Microtrac Ultrafine Particle Analyzer, Microtrac, Inc., Montgomeryville , PA) . Preparación de negro de humo funcionalizado por amino usando etanolamina : 2 gramos del negro de humo funcionalizado ácido, secado, 25 de etanolamina (99% de Aldrich) y 1 mL de H2S04 concentrado (98% grado Gr de EMD Chemicals) se mezclaron en un matraz de fondo redondo de 100 mL . La mezcla se agitó rápidamente con un agitador magnético y se colocó a reflujo durante 6 horas. Después de que la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se agregó una cantidad suficiente de hidróxido de amonio (28.0-3.0% de NH3 de EMD Chemicals) para neutralizar la mezcla. Luego, la mezcla se centrifugó y se lavó con agua, como se describe en el ejemplo 6. El producto final fue neutral (pH=6.0) y se secó por liofilización durante 24 horas. El negro de humo funcionalizado por amino, secado, se dispersó rápidamente en agua. La composición de superficie de negro de humo funcionalizado se analizó por ESCA en el Dupont Corporate Center Analytical Science. En ESCA, los rayos X monoenergéticos se enfocaron en la superficie del material para excitar los átomos de superficie. Los electrones de protección de núcleo y valencia con energías características de los elementos en la parte superior 10 nm de la superficie se sacaron y su energía se analizó para obtener información cualitativa y cuantitativa sobre la composición de superficie. La energía cinética de los electrones emitidos proporciona información acerca de los grupos funcionales y estados de oxidación de las especies de superficie. En este ejemplo, la fuente de rayos X usada fue un ánodo de magnesio con una energía de 1253.6 eV. Las muestras se analizan a un ángulo de salida de grado 45 (aproximadamente de 5 hasta 10 nm de profundidad de muestreo) . Los resultados del análisis ESCA se muestran en la Tabla 14. Para el negro de humo funcionalizado por etanolamina, la superficie se compuso principalmente de grupos -COOH no reactivos y grupos -C (=0) -OCH2CH2NH2. para calcular la relación amina (y) a grupos de ácido carboxílico (x) , se usa una ecuación simple, específicamente y/ (x+y) = (N%/14 ) (0%/32) para etanolamina. Los resultados se dan en la tabla 14. Tabla 14 Resultados del análisis ESCA de negro de humo funcionalizado *ND significa no detectable.

Acoplamiento de negro de humo funcionalizado por amino con el péptido t-Boc-D21: Las partículas de negro de humo funcionalizadas con amino se enlazan entonces covalentemente al péptido D21 que se enlaza al cabello específico dado como SEQ ID NO: 46. El péptido D21 protegido por t-Boc se sintetiza como se describe en el Ejemplo 10. luego, el negro de humo funcionalizado por amino (87 mg) , péptido D21 t-Boc (80 mg) y diciclohexil carbodiimida (DCC) (22 mg) se agregaron a 3 mL de tetrahidrofurano (THF) . La solución de dimetilaminopiridina (DMAP) (17 µ]1) en varias gotas de THF se agregó gota a gota a esta mezcla con agitación. La suspensión oscura resultante se calentó a 40 °C durante 6 horas con agitación, seguido por agitación durante la noche a temperatura ambiente . Para remover el grupo protector t-Boc del péptido D21 se agregó ácido trifluoroacético (TFA) (0.6 mL) al producto y la mezcla se agitó durante otras 6 horas. Luego, se agregó 5 mL de agua desionizada a la mezcla de reacción. La mezcla se centrifugó a 3,500 rpm durante 2 minutos y el sobrenadante se decantó. El sólido restante en el tubo centrífugo se lavó con agua desionizada y se centrifugó nuevamente. Este lavado se repitió hasta que el pH del sobrenadante alcanzó aproximadamente 6.0. El residuo oscuro se secó entonces usando un liofilizador durante 2 días, proporcionando un polvo oscuro. Las partículas de negro de humo funcionalizadas por amino y las partículas de negro de humo enlazadas al péptido se analizaron por ESCA, análisis elemental y TGA (análisis termogravimétrico) . Los resultados analíticos muestran que la capa orgánica en el negro de humo modificado con etanolamina fue aproximadamente 12% del peso total. Después de que los péptidos D21 se unieron a las partículas de negro de humo, el porcentaje en peso del péptido esta en el rango de 18-30%. Por lo tanto, para una partícula de negro de humo de 100 nm, un total de 9.5 x 104 moléculas se unen a la superficie después de hacerse reaccionar con etanolamina y un total de 7,700 moléculas de péptido D21 se unen a la superficie de negro de humo después de la reacción con el péptido. Un calculo de la densidad del péptido en la superficie de negro de humo, revela que cada péptido D21 ocupa 4 nm2 el cual es comparable con la densidad del péptido unida al fago aproximadamente 12 nm2. EJEMPLO 15 Especificidad del colorante de cabello de negro de humo basado en péptido El propósito de este ejemplo fue demostrar la especificidad del colorante de cabello de negro de humo-D21.

El colorante de negro de humo basado en el péptido D21 se preparó como se describe en el Ejemplo 14. Una pieza de piel de cerdo (10 cm x 10 cm) , obtenida de un supermercado local, se limpió al mezclarse con 30 mL de isopropanol al 30% durante 10 minutos y luego se lavó al menos 5 veces con agua destilada. Después de secar al aire, la piel de cerdo limpia se sumergió en una placa mantenida con pozos múltiples que contienen una solución de 50 mg de colorante de negro de humo-péptido D21 disuelto en 10 mL de agua destilada. Después de aplicar el colorante durante 15 minutos, la piel de cerdo se lavó 3 veces con una solución de champú al 30% (Pantene Pro-V) al gotear la solución de champú en los pozos y decantarlos. Luego, la piel de cerdo se enjuagó 5 veces con agua destilada. Una muestra de cabello blanco normal, obtenida de International Hair Importers and Products (Bellerose, Y) , se trató de la misma manera que la piel de cerdo. Después de lavar la piel de cerdo muestra un color oscuro insignificante, mientras que el cabello fue negro fue ligero. Estos resultados demuestran que el colorante de negro de humo-péptido D21 tiene un enlace específico al cabello, pero no a la piel . EJEMPLO 16 Preparación de un acondicionador de cabello de péptido- polisiloxano El propósito de este ejemplo fue sintetizar un acondicionador de cabello de péptido D21-polisiloxano . Los grupos funcionales laterales reactivos del péptido D21 dados como SEQ ID NO: 46, se protegieron completamente de manera que la reacción con el polisiloxano solo procede con el grupo de la terminal C del péptido. Además un espaciador tripeptido que consiste residuos de glicina, se agregó al extremo de la terminal C la secuencia de enlace. 50 miligramos del péptido D21 protegido completamente Fmoc- (Pbf) (tBu) N (Trt)AAD (OtBu) H (Trt) PAAVT (tBu) GGG (donde Fmoc significa fluorenilmetoxicarbonil ,- Pbf significa 2,2,6,4, 7-pentametildihidrobenzofuran-5sulfonil ; tBU significa t-butilo; Trt significa tritilo; y OtBu significa t-butoxilo) (PM 2522, 0.02 mmol, 95% de pureza de SynPep, Dublin, CA) , dado como SEQ ID NO: 78 se disolvió en 1 mL de dimetilformamida (DMF, de E. Merck, Darmstadt, Alemania) , en un matraz de fondo redondo de 5 mL. El fluido de polisiloxano 2-8566 (77 mg) (N%=0.875%, 0.024 mmol de -NH2, de Dow Corning, Midland, MI) se disolvió en 2 mL de THF (E. Merck) en un vial de muestra,- luego se transfirió en el matraz de fondo redondo que contiene la solución de péptido. Luego, 5 mg de diclohexil carbodiimida (DCC, 0.024 mmol) y 5 µL de dimetilaminopiridina (DMAP) se agregaron al matraz. El matraz se selló con un parador de hule y la mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 5 horas y luego, a temperatura ambiente durante la noche. Después de que la reacción se completó, el solvente se bombeo bajo vacío. Después de secar 122 mg del producto sólido se obtiene. El rendimiento fue de alrededor de 90%. El producto sólido se disolvió en N, N-dimetilacetamida (DMAC, de EMD Chemicals) y 5 mg/mL de la solución del producto en DMAC se prepara para análisis GPC (cromatografía de permeación en gel) con una detección de índice refractivo para determinar el peso molecular. El polisiloxano original (Dow Corning 2-8566)- no fue soluble en DMAC y no se observa en la región de separación del cromatógrafo . El péptido D21 tiene un pico de peso molecular bajo, exacto, y la muestra de producto tiene 2 picos una del péptido D21 libre y un pico amplio que se atribuye al polisiloxano injertado con péptido D21. El peso molecular en peso (PM) se calcula de los estándares de polimetilmetacrilato (PMMA) . El PM del péptido D21 y el acondicionador péptido-polisiloxano fueron 4.7 x 103 y 4.4 x 104 respectivamente. Un reactivo de desdoblamiento (que se llama reactivo K por SynPeP) tiene la siguiente composición: Ácido trifluoroacético/H20/tioanisol/etanditiol/fenol (85:5:2.5:2.5, por volumen) se usó para desdoblar los grupos protectores de los grupos laterales del péptido D21. El reactivo K (1 mL) se pre-enfrió hasta -20°C y luego, se agregó a 100 del acondicionador péptido D21-polisiloxano. La mezcla se agitó durante 3-4 horas a temperatura ambiente y luego el Reactivo K se removió bajo alto vacío. Luego, el grupo protector Fmoc se removió de la terminación N del péptido al agregar 61.2 mg de piperidina al 20% en volumen en DMF a la mezcla y se agitó durante 30 minutos, seguido por bombeo bajo alto vacío. El producto final no fue completamente soluble en THF, DMF o DMAC. El análisis GPC del producto final no fue posible debido a la baja solubilidad.

EJEMPLO 17 Efectividad del acondicionador de cabello basado en péptido El propósito de este ejemplo fue demostrar la efectividad de un acondicionador de cabello basado en péptido para reducir las fuerzas de fricción en las fibras del cabellos humano y comparar su desempeño contra un agente acondicionador comercial . La fricción de fibra es un contribuyente significante para combinar el comportamiento de ensambles de fibra de cabello (esto es fibras múltiples) . La caracterización en una fibra de cabello sencilla de las fuerzas de fricción puede relacionarse con el compartimiento del peinado del ensamble de cabello. Los estudios de fricción entre fibras ilustran el mejoramiento de la superficie de cabello de las aplicaciones de acondicionador. Entre menor sea la fricción entre fibras más suave será la sensación y apariencia de cabellos, y más fácil será peinar. El método de combinación de fricción interfibra empleado en este ejemplo es uno de algunas de pruebas de cabello para dar datos cuantitativos duros, y acepta generalmente la industria. El acondicionador de cabellos basados en péptidos descrito en el ejemplo 12 que consiste del péptido que se enlaza al cabello dado como SEQ ID NO: 46 unido covalentemente al alcohol behenílico, se usa una formulación que consiste de una mezcla de 0.25% en peso del acondicionar basado en péptido y 1.5% por peso de Lecitina Perfomix™ (ADM Lecithin, Decatur, IL) en agua destilada. La solución acuosa se mezcla a 7000 rpm durante 4 minutos usando un mezclador Silverson L4RT-A High Shear Laboratory (Silverson Machines, Inc., East Longmeadow, MA) con un domo desintegrador de propósito general y una estructura tubular de 0.95 cm mini-micro. Una solución al 0.5% de la emulsión catiónica 929 Dow Dow Corning0 (Dow Corning Corp., Midlad, MI), en un agente de acondicionador comercial, en agua destilada se prepara las condiciones de mezclado idénticas. Postizos de cabello marrón obscuro europeo (International Hair Importers and Products) se limpian antes de probar al sumergir isopropanol durante 30 minutos, luego se lavan 10 veces con agua destilada. Las fibras de cabello sencillas de estos postizos se mandan a Textile Research Institute (TRI) , Princeton, NJ, para prueba de fricción. En TRI las fibras de cabello se sumergen en las soluciones acondicionadoras durante 5 minutos a aproximadamente 35°C sin agitación. Posteriormente se enjuagan durante 1 minuto en agua templada y luego se secan durante la noche a 21°C y se 65% de humedad relativa. Las mediciones de fuerza friccional de las fibras de cabello tratadas se miden con la fuerza de fricción interfibra usando un aparato de fricción de fibra sencilla, como se describe por Kamath et al. (J. Appl . Polymer Sci., 85:394-414 (2002)). Las fibras de cabello se evalúan a fuerzas normales altas (carga alta) (0.74 g) contra un alambre de acero cromado, velocidad crucero 1 mm/min, usando una maquina de prueba de tensión Instron. Y a fuerzas normales bajas (carga baja)' (8.5 mg) se miden contra otra fibra de cabello sencilla usando el analizador de fuerza de superficie T I/Scan™ (Textile Research Institute) . Estos aparatos miden las fuerzas pequeñas con una micro valencia Chan° de (solución masa de 0.1 mg) y presentan una etapa controlada. Los resultados de estas mediciones se dan en la Tabla 15. Tabla 15 Resultados de las Mediciones de Fricción El acondicionador basado en péptido tiene una fricción promedio más baja que el acondicionador de emulsión catiónica 929 Dow Corning" en ambos casos. Posteriormente una muestra de acondicionador de lecitina al 1.5% se provoca la fricción de fibra (carga baja) y la fuerza de fricción media por 3.366 mg, lo que indica los efectos acondicionadores observados en el acondicionador basado en péptido no se deben a la presencia de la lecitina en la formulación. Estos resultados demuestran la efectividad del acondicionador de cabello enlazado en péptido . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (54)

Reivindicaciones Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones.

1. Un péptido que se enlaza al cabello, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste de SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 y 70.

2. Un péptido que se enlaza a la uña, caracterizado porque es como se establece en SEQ ID NO: 60.

3. Un péptido que se enlaza a la piel, caracterizado porque es como se establece en SEQ ID NO: 61.

4. Un acondicionador de cabello basado en péptido, de dibloque, caracterizado porque tiene la estructura general (HBP)n-HCA, en donde a) HBP es un péptido que se enlaza al cabello, b) HCA es agente acondicionar del cabello; y c) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 1,000.

5. Un acondicionador de piel basado en péptido, de dibloque, caracterizado porque tiene la estructura general (SBP)n-SCA, en donde a) SBP es un péptido que se enlaza a la piel, b) SCA es agente acondicionar de la piel; y c) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 1,000.

6. Un colorante para el cabello basado en péptido, de diblogue, caracterizado porque tiene la estructura general (HBP)n-C, en donde a) HBP es un péptido que se enlaza al cabello, b) C es agente colorante; y c) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 1,000.

7. Un colorante de uñas basado en péptido, de dibloque, caracterizado porque tiene la estructura general (NBP)n-C, en donde a) NBP es un péptido que se enlaza a la uña, b) C es agente colorante; y c) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 1,000.

8. Un colorante de piel basado en péptido, de dibloque, caracterizado porque tiene la estructura general (SBP)n-C, en donde a) SBP es un péptido que se enlaza a la piel; b) C es agente colorante; y c) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 1,000.

9. Un acondicionador de cabello basado en péptido, de tribloque, caracterizado porque tiene la estructura general [ (HBP ) m- 5]n -HCA; en donde a) HBP es un péptido que se enlaza al cabello, b) HCA es agente acondicionador del cabello; y c) S es un espaciador; d) m está en el rango desde 1 hasta alrededor de 50 ; e) n está en el .rango desde 1 hasta alrededor de 1,000.

10. Un acondicionador de piel basado en péptido, tribloque, caracterizado porque tiene la estructura general [ ( SBP ) m- S ] n- SCA , en donde a) SBP es un péptido que se enlaza al cabello; b) SCA es un agente acondicionador de la piel; c) S es un espaciador; d) m está en el rango desde 1 hasta alrededor de 50; y e) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 1,000.

11. Un colorante de cabello basado en péptido, tribloque, caracterizado porque tiene la estructura general [ (HBP ) m- S ] n- C , en donde a) HBP es un péptido que se enlaza al cabello; b) C es un agente colorante; c) S es un espaciador; d) m está en el rango desde 1 hasta alrededor de 50; y e) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000.

12. Un colorante de uñas basado en péptido, triblogue, caracterizado porque tiene la estructura general [ (NBP ) m- S] n- C , en donde a) NBP es un péptido que se enlaza al cabello; b) C es un agente colorante; c) S es un espaciador; d) m está en el rango desde 1 hasta alrededor de 50; y e) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000.

13. Un colorante de la piel basado en péptido, tribloque, caracterizado porque tiene la estructura general [ ( SBP ) m- S] n- C , en donde a) SBP es un péptido que se enlaza al cabello; b) C es un agente colorante; c) S es un espaciador; d) m está en el rango desde 1 hasta alrededor de 50; y e) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000.

14. El acondicionador o colorante de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 4, 6, 9, u 11, caracterizado porque el péptido que se enlaza al cabello es desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tiene una afinidad de enlace para el cabello, medida como MB50, igual a o menor que 10"5M.

15. El acondicionador o colorante de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 5, 8, 10, Ó 13, caracterizado porque el péptido que se enlaza a la piel es desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tiene una afinidad de enlace para la piel, medida como MB50, igual a o menor que 10"5 M.

16. El colorante de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 7 ó 12 caracterizado porque el péptido que se enlaza a las uñas es desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tiene una afinidad de enlace para las uñas, medida como MB50, igual a o menor que 10"5 M.

17. Un acondicionador o colorante de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el • péptido que se enlaza al cabello se aisla por un proceso que comprende las etapas de: (i) proporcionar una colección de fago-pépt idos generados de combinación; (ü) poner en contacto la colección de (i) con una muestra de cabello para formar una solución de reacción que comprende: (A) un complejo cabello-péptido- fago ; (B) cabello no enlazado, y (C) péptidos sin complejos; (iii) aislar el complejo cabello-péptido-fago de (ii) ; (iv) eluir los péptidos débilmente enlazados del complejo péptido de (ii) ; (v) identificar los fago-péptidos enlazados restantes usando ya sea la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo cabello-péptido-fago que se mantiene después de la etapa (iv) , o al infectar células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo cabello-péptido-fago que se mantiene después de la etapa (iv) , hacer crecer las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislar e identificar los fago -péptidos de las células de crecimiento.

18. Un acondicionador o colorante de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el péptido que se enlaza a la piel se aisla por un proceso que comprende las etapas de: (i) proporcionar una colección de fago-péptidos generados de combinación; (ii) poner en contacto la colección de (i) con una muestra de piel para formar una solución de reacción que comprende : (A) complejo piel-péptido-f go; (B) piel sin enlazar, y (C) péptidos sin complejos; (iii) aislar el complejo piel-péptido-fago de (ii) ; (iv) eluir los péptidos débilmente enlazados del complejo péptido de (II) ; (v) identificar los fago-péptidos enlazados restantes usando ya sea la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo piel -péptido-fago. que se mantiene después de la etapa (iv) , o al infectar células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo piel -péptido-fago que se mantiene después de la etapa (iv) , hacer crecer las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislar e identificar los fago-péptidos de las células de crecimiento .

19. El colorante de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el péptido que se enlaza a las uñas se aisla por un proceso que comprende las etapas de: (i) proporcionar una colección de fago-péptidos generados de combinación; (ii) poner en contacto la colección de (i) con una muestra de uñas para formar una solución de reacción que comprende : (A) complejo uñas-péptido-fago; (B) uña sin enlazar, y (C) peptidos sin complejos; (iii) aislar el complejo uñas-péptido-fago de (ii) ; (iv) eluir los peptidos débilmente enlazados del complejo péptido de (ii) ; (v) identificar los fago-péptidos enlazados restantes usando ya sea la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo uñas-péptido-fago que se mantiene después de la etapa (iv) , o al infectar células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo uñas-péptido-fago que se mantiene después de la etapa (iv) , hacer crecer las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislar e identificar los fago-péptidos de las células de crecimiento.

20. El acondicionador o colorante basado en péptido de conformidad con las reivindicaciones 4-13, caracterizado porgue el péptido que se enlaza al cabello, que se enlaza a la piel, o que se enlaza a las uñas es desde alrededor de 7 hasta alrededor de 20 aminoácidos.

21. El acondicionador o colorante basado en péptido de conformidad con las reivindicaciones 4-13 caracterizado porque el péptido que se enlaza al cabello, que se enlaza a la piel, o que se enlaza a las uñas es desde alrededor de 7 hasta alrededor de 12 aminoácidos .

22. El acondicionador o colorante basado en péptido de conformidad con las reivindicaciones 4-13, caracterizado porque el péptido que se enlaza al cabello, que se enlaza a la piel, o que se enlaza a las uñas comprende además un residuo de cisteína en al menos un extremo de la secuencia de péptido .

23. El acondicionador de cabello con base en péptido o el colorante de cabello con base en péptido de conformidad con la reivindicación 4, 6, 9 ó 11, caracterizado porque el péptido que se enlaza al cabello tiene la secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 1, 3-59, 64, 66, 69, 70, 76-97 y 98.

24. El acondicionador de la piel basado en péptido o el colorante de la piel basado en péptido de conformidad con la reivindicación 5, 8, 10 ó 13, caracterizado porque el péptido que se enlaza a la piel tiene la secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 2, 61, 99-103, y 104.

25. El colorante de uñas basado en péptido de conformidad con la reivindicación 7 ó 12, caracterizado porque el péptido que se enlaza a las uñas tiene la secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs : 7, 8, 19-27, 38-40, 43-45, 47, 53, 57, 58, 59 y 60.

26. El acondicionador de cabello con base en péptido de conformidad con la reivindicación 4 ó 9, caracterizado porque el agente acondicionador del cabello se selecciona del grupo que consiste de octilamina, estearil amina, alcohol behenílico, siloxanos terminados en grupo vinilo, silicón terminado en grupo vinilo, metil vinil siloxanos terminados en grupo vinilo, metil vinil silicón terminado en grupo vinilo, siloxanos terminados en hidroxilo, silicón terminado en hidroxilo, derivados de silicón modificados por amino, [ (aminoetil) amino] propil hidroxil dimetil siloxanos, [ (aminoetil) amino] propil hidroxil dimetil silicones, alfa-tridecil-omega-hidroxi-poli (oxi-1, 2-etandiil) , amodimeticona, y quitosán.

27. El acondicionador de la piel basado en péptido de conformidad con la reivindicación 5 ó 10, caracterizado porque el agente acondicionador de la piel se selecciona del grupo que consiste de polisalicilatos , propilen glicol, glicerina, ácido glicólico, ácido láctico, ácido málico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido gluc rico, ácido galactárico, ácido 3 -hidroxivalérico, ácido salicilico, y 1,3 propandiol .

28. El colorante de cabello con base en péptido de conformidad con la reivindicación 6 u 11, caracterizado porque el agente colorante es seleccionado del grupo que consiste de Amarillo D&C 1, Amarillo D&C 3, Amarillo HC 6, Amarillo HC 8, Azul D&C 1, Azul HC 1, Café HC 2, Rojo HC 5, 2-nitro-parafenilendiamina, N, N-hidroxietil-2-nitro-fenilendiamina, 4-nitro-indol , negro de humo, nanopartículas de metal, y nanopartículas semiconductoras.

29. El colorante de uñas basado en péptido de conformidad con la reivindicación 7 ó 12 caracterizado porque el agente colorante se selecciona del grupo que consiste de Rojo D&C Nos. 8, 10, 30, 36, las lacas de bario de Rojo D&C Nos. 6, 9, 12, las lacas de calcio de Rojo D&C Nos. 7, 11, 31, 34, las lacas de estroncio de Rojo D&C No. 30, las lacas de estronio de Anaranjado D&C No. 17 y las lacas de estroncio de Azul D&C No. 6.

30. El colorante de la piel basado en péptido de conformidad con la reivindicación 8 ó 13, caracterizado porque el agente colorante se selecciona del grupo que consiste de Rojo D&C No. 21, Rojo D&C No. 27, Rojo Anaranjado D&C No. 5, Rojo D&C No. 21, Anaranjado D&C No. 10, dióxido de titanio, óxido de zinc, Rojo D&C No. 36, Anaranjado D&C No. 17, las lacas de calcio de Rojo D&C Nos. 7, 11, 31, 34, la laca de bario de Rojo D&C No. 12, las lacas de estroncio de Rojo D&C No. 13, la laca de aluminio de Amarillo FD&C No. 5, la laca de aluminio de Amarillo FD&C No. 6, la laca de aluminio de Rojo D&C No. 27, la laca de aluminio de Rojo D&C No. 21, la laca de aluminio de Azul FD&C No. 1, óxidos de hierro, violeta de manganeso, óxido de cromo, azul ultramarino, negro de humo, y dihidroxiacetona .

31. El acondicionador o colorante basado en péptido de conformidad con la reivindicación 9, 10, 11, 12 ó 13, caracterizado porque el espaciador se selecciona del grupo que consiste de etanol amina, etilen glicol, polietileno con una longitud de cadena de 6 átomos de carbono, polietilen glicol con 3 hasta 6 unidades repetidas, fenoxietanol , propanolamida, butilen glicol, butilenglicolamida, propil fenil, cadena de etil alquilo, cadena de propil alquilo, cadena de hexil alquilo, cadenas de estéril alquilo, cadenas de cetil alquilo, y cadenas de palmitoil alquilo.

32. El acondicionador o colorante basado en péptido de conformidad con la reivindicación 9, 10, 11, 12 ó 13, caracterizado porque el espaciador es un péptido que comprende aminoácidos seleccionados del grupo que consiste de glicina, alanina, serina, y mezclas de los mismos.

33. El acondicionador o colorante basado en péptido de conformidad con la reivindicación 9, 10, 11, 12 ó 13, caracterizado porque el espaciador es un péptido que comprende la secuencia de aminoácido como se establece en SEQ ID NO: 65.

34. Una composición para el cuidado del cabello, caracterizada porque comprende una cantidad efectiva del acondicionador para el cabello basado en péptido de conformidad con la reivindicación 4 ó .

35. Una composición para el cuidado de la piel, caracterizada porque comprende una cantidad efectiva del acondicionador para la piel basado en péptido de conformidad con la reivindicación 5 ó 10.

36. Una composición colorante de cabello, caracterizada porgue comprende una cantidad efectiva del colorante de cabello con base en péptido de conformidad con la reivindicación 6 u 11.

37. Una composición cosmética, caracterizada porque comprende una cantidad efectiva del colorante de cabello basado en péptido de conformidad con la reivindicación 6 u 11.

38. Una composición abrillantadora de uñas, caracterizada porque comprende una cantidad efectiva del colorante de uñas basado en péptido de conformidad con la reivindicación 7 ó 12.

39. Una composición cosmética, caracterizada porque comprende una cantidad efectiva del colorante de la piel basado en el péptido de conformidad con la reivindicación 8 ó 13.

40. Una composición colorante de cabello, caracterizada porque comprende una cantidad efectiva del acondicionador de cabello con base en péptido de conformidad con la reivindicación 4 ó 9.

41. Un método para generar un péptido que se enlaza al cabello, la piel o las uñas, de alta afinidad caracterizado porque comprende : a) proporcionar una colección de fago-péptidos generados de combinación; b) poner en contacto la colección de (a) con una muestra de cabello, piel, o uñas para formar una solución de reacción que comprende : (i) complejos fago-péptido-cabello, fago-péptido- piel, o fago-péptido-uñas ; (ii) cabello, piel o uñas no enlazados, y (iii) péptidos no en complejo; c) aislar los complejos fago-péptido-cabello, fago-péptido-piel , o fago-péptido-uñas de (b) ; d) eluir los fago-péptidos débilmente enlazados del complejo fago-péptido de (b) ; e) infectar células hospedadoras bacteriales directamente con los complejos fago-péptido-cabello, fago-péptido-piel, o fago-péptido-uñas que se mantiene después de la etapa (d) ; f) hacer crecer las células infectadas de la etapa (e) en un medio de crecimiento apropiado; y g) aislar e identificar los fago-péptidos de las células de crecimiento de la etapa (f) , en donde los fago-péptidos tienen una alta afinidad de enlace para el cabello, la piel, o las uñas .

42. Un método para formar una capa protectora de un acondicionador basado en péptido en el cabello, caracterizado porque comprende aplicar la composición de conformidad con la reivindicación 28 al cabello y permitir la formación de la capa protectora.

43. Un método para formar una capa protectora de un acondicionador basado en péptido en la piel o los labios, caracterizado porque comprende aplicar la composición de conformidad con la reivindicación 29 a la piel o los labios y permitir la formación de la capa protectora.

44. Un método para colorear el cabello, caracterizado porque comprende aplicar la composición colorante de cabello de conformidad con la reivindicación 36 ó 40 al cabello durante un periodo de tiempo suficiente para causar la coloración al cabello.

45. El método de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque la composición se aplica al cabello durante un periodo de alrededor de 5 hasta alrededor de 50 minutos .

46. Un método para colorear las uñas, caracterizado porque comprende aplicar la composición abrillantadora de las uñas de conformidad con la reivindicación 38 a las uñas.

47. Un método para colorear la piel o los labios, caracterizado porque comprende aplicar la composición cosmética de conformidad con la reivindicación 39 a la piel o los labios .

48. Un método para colorear cejas o pestañas, caracterizado porque comprende aplicar la composición cosmética de conformidad con la reivindicación 37 a las cejas o pestañas. 49. Un método para colorear cabello, cejas o pestañas, caracterizado porque comprende las etapas de: a) proporcionar una composición colorante de cabello, que comprende un colorante de cabello seleccionado del grupo que consiste de: i) (HBP)n-C; y Ü) [ (HBP)m-S]k-C en donde 1) HBP es un péptido que se enlaza al cabello; 2) C es un agente colorante; 3) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000; 4) S es un espaciador; 5) m está en el rango desde 1 hasta alrededor de 50; y 6) k está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000; y en donde el péptido que se enlaza al cabello se selecciona por un método que comprende las etapas de: A) proporcionar una colección de fago-péptidos generados por combinación;

B) poner en contacto la colección de (A) con una muestra de cabello para formar una solución de reacción que comprende : (i) un complejo cabello-péptido-fago; (ii) cabello no enlazado, y (iii) péptidos sin complejos; C) aislar el complejo cabello-péptido-fago de (B) ; D) eluir los péptidos débilmente enlazados del complejo péptido de (B) ; E) identificar los fago-péptidos enlazados restantes usando ya sea la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo fago-péptido- cabello que se mantiene después de la etapa (D) , o al infectar células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo f go-péptido-cabello que se mantiene después de la etapa (D) , hacer crecer las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislar e identificar los fago-péptidos de las células de crecimiento, en donde los fago-péptidos son desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tiene una afinidad de enlace para el cabello, medida como MB50, igual a o menor que 10"5M; y b) aplicar el colorante de cabello de (a) al cabello, cejas o pestañas durante un tiempo suficiente para que el colorante basado en péptido se una al cabello, cejas o pestañas.

50. Un método para formar una capa protectora de un acondicionador basado en peptido en el cabello, caracterizado porgue comprende las etapas de: a) proporcionar una composición para el cuidado del cabello que comprende un acondicionador de cabello seleccionada del grupo que consiste de : i) (HBP) n-HCA; y ii) [ (HBP)ra-S]k-HCA en donde 1) HBP es un peptido que se enlaza al cabello; 2) HCA es un agente acondicionador del cabello; 3) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 1,000; 4) S es un espaciador; 5) m está en el rango desde 1 hasta alrededor de 50; y 6) k está en el rango desde 1 hasta alrededor de 1,000; y en donde el péptido que se enlaza al cabello se selecciona por un método comprende las etapas de: A) proporcionar una colección de fago-péptidos generados en forma de combinación; B) poner en contacto la colección de (A) con una muestra de cabello para formar una solución de reacción que comprende : (i) un complejo cabello-péptido-fago; (ii) cabello no enlazado, y (iii) péptidos sin complejos; C) aislar el complejo cabello-péptido-fago de (B) ; D) eluir los péptidos débilmente enlazados del complejo péptido de (B) ; E) identificar los fago-péptidos enlazados restantes usando ya sea la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo cabello- péptido-fago que se mantiene después de la etapa (D) , o al infectar células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo fago-péptido-cabello que se mantiene después de la etapa (D) , hacer crecer las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislar e identificar los fago-péptidos de las células de crecimiento, en donde los fago-péptidos son desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tiene una afinidad de enlace para el cabello, medida como MB50, igual a o menor que 10"5M; y b) aplicar el acondicionador de cabello de (a) al cabello y permitir la formación de la capa protectora.

51. Un método para formar una capa protectora en la piel o los labios, caracterizado porque comprende las etapas de: a) proporcionar una composición para el cuidado de la piel, que comprende el acondicionador de la piel seleccionado del grupo que consiste de : i) (SBP)n-SCA; y ii) [ (SBP)m-S]k-SCA en donde 1) SBP es un péptido que se enlaza a la piel; 2) SCA es un agente acondicionador de la piel; 3) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 1,000; 4) S es un espaciador; 5) m está en el rango desde 1 hasta alrededor de.50; y 6) k está en el rango desde 1 hasta alrededor de 1,000; y en donde el péptido que se enlaza a la piel se selecciona por un método comprende las etapas de : A) proporcionar una colección de fago-péptidos generados en forma de combinación; B) poner en contacto la colección de (A) con una muestra de piel para formar una solución de reacción que comprende : (i) complejo piel-péptido-fago; (ii) la piel sin enlazar, y (iii) péptidos sin complejos; C) aislar el complejo piel-péptido-fago de (B) ; D) eluir los péptidos débilmente enlazados del complejo péptido de (B) ; E) identificar los fago-p ptidos enlazados restantes usando ya sea la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo piel-péptido- fago que se mantiene después de la etapa (D) , o al infectar células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo fago-péptido-piel que se mantiene después de la etapa (D) , hacer crecer las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislar e identificar los fago-péptidos de las células de crecimiento, en donde los fago-péptidos son desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tienen una afinidad de enlace para la piel, medida como MB50, igual a o menor que 10"5 M; y b) aplicar el acondicionador de la piel de (a) a la piel o los labios y permitir la formación de la capa protector .

52. Un método para colorear la piel o los labios, caracterizado porque comprende las etapas de: a) proporcionar una composición cosmética, que comprende un colorante de la piel seleccionado del grupo que consiste de: i) (SBP)n-C; y Ü) [ (SBP)m-S]k-C en donde 1) SBP es un péptido que se enlaza a la piel; 2) C es un agente colorante ; 3) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000; 4) S es un espaciador; 5) ra está en el rango desde 1 hasta alrededor de 50; y 6) k está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000; y en donde el péptido que se enlaza a la piel se selecciona por un método comprende las etapas de: A) proporcionar una colección de fago-péptidos generados en forma de combinación; B) poner en contacto la colección de (A) con una muestra de piel para formar una solución de reacción que comprende: (i) complejo piel -péptido- fago; (ii) la piel sin enlazar, y (iii) péptidos sin complejos; C) aislar el complejo piel -péptido- fago de (B) ; D) eluir los péptidos débilménte enlazados del complejo péptido de (B) ; E) identificar los fago-péptidos enlazados restantes usando ya sea la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo piel-péptido- fago que se mantiene después de la etapa (D) , o al infectar células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo fago-péptido-piel que se mantiene después de la etapa (D) , hacer crecer las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislar e identificar los f go-péptidos de las células de crecimiento, en donde los fago-péptidos son desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tiene una afinidad de enlace para la piel, medida como MB50/ igual a o menor que 10"5 M; y b) aplicar el colorante de la piel de (a) a la piel o los labios.

53. Un método para colorear las uñas, caracterizado porque comprende las etapas de: a) proporcionar una composición abrillantadora de uñas que comprende un colorante de uñas seleccionado del grupo que consiste de: i) (NBP)n-C; y ii) [ (NBP)m-S]k-C en donde 1) NBP es un péptido que se enlaza a las uñas; 2) C .es un agente colorante; 3) n está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000; 4) S es un espaciador; 5) m está en el rango desde 1 hasta alrededor de 50; y 6) k está en el rango desde 1 hasta alrededor de 10,000; y en donde el péptido que se enlaza a las uñas se ecciona por un método comprende las etapas de : A) proporcionar una colección de fago-péptidos generados en forma de combinación; B) poner en contacto la colección de (A) con una muestra de uñas para formar una solución de reacción que comprende : (i) complejo uñas-péptido-fago; (ii) uñas sin enlazar, y (iii) péptidos sin complejos; C) aislar el complejo uñas-péptido-fago de (B) ; D) eluir los péptidos débilmente enlazados del complejo péptido de (B) ; E) identificar los fago-péptidos enlazados restantes usando ya sea la reacción de cadena de polimerasa directamente con el complejo uñas-péptido- fago que se mantiene después de la etapa (D) , o al infectar células hospedadoras bacteriales directamente con el complejo fago-péptido-uñas que se mantiene después de la etapa (D) , hacer crecer las células infectadas en un medio de crecimiento apropiado, y aislar e identificar los fago-péptidos de las células de crecimiento, en donde los fago-péptidos son desde alrededor de 7 hasta alrededor de 25 aminoácidos y tiene una afinidad de enlace para las uñas, medida como MB50, igual a o menor que 10~5M; y b) aplicar el colorante de uñas de (a) a las uñas.

54. Un método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 49-53, caracterizado porque la colección de fago-péptidos generados de combinación se selecciona del grupo que consiste de la colección de despliegue de fagos Ph.D. -12 y la colección de despliegue de fagos Ph.D. -7.