MXPA05004629A - Formulacion oral de toxina botulinica y uso de la misma para el tratamiento de ulceras pepticas y enfermedad por reflujo gastroesofagico. - Google Patents

Abstract

La presente invencion describe metodos para el tratamiento de ulceras pepticas y metodos para el tratamiento de enfermedad por reflujo gastroesofagico mediante la administracion oral de una toxina botulinica. Tambien se describe una formulacion oral de la toxina botulinica A, B, C, D, E, F o G junto con un vehiculo, por ejemplo, harina, azucar, gelatina.

Description

FORMULACION ORAL DE TOXINA BOTULINICA Y USO DE LA MISMA PARA EL TRATAMIENTO DE ULCERAS PEPTICAS Y ENFERMEDAD POR REFLUJO GASTROESOFAGICO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a métodos para el tratamiento de úlceras y/o para el tratamiento de la enfermedad por reflujo gastroesofágico . En particular, la presente invención se relaciona con métodos para el tratamiento de úlceras pépticas y para el tratamiento de enfermedad por reflujo gastroesofágico con una toxina botulinica . ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Úlceras Durante la digestión normal, el alimento se mueve desde la boca hacia el esófago hacia el estómago. El estómago produce ácido clorhídrico y la enzima pepsina para digerir los alimentos. Desde el estómago, el alimento pasa a la parte superior del intestino delgado, el duodeno, donde continúa la digestión y la absorción de nutrientes. Una úlcera es una llaga o lesión que se forma en el recubrimiento del estómago o duodeno donde están presentes ácido y pepsina. Las úlceras en el estómago son llamadas úlceras gástricas o estomacales. Las úlceras en el duodeno son llamadas úlceras duodenales. De manera colectiva, las úlceras en el estómago y el duodeno son llamadas úlceras REF. : 163002 pépticas . Las úlceras raramente se presentan en el esófago o en la primera porción del duodeno, el bulbo duodenal. Cerca de 20 millones de norteamericanos han desarrollado por lo menos una úlcera durante su vida. Además, las úlceras afectan cerca de 4 millones de personas y más de 40,000 personas se han sometido a cirugía cada año debido a los síntomas o problemas persistentes de las úlceras y, trágicamente, cerca de 6,000 personas mueren cada año de úlceras o complicaciones relacionadas con las úlceras. Las úlceras pueden desarrollarse en cualquier edad, pero son raras entre los adolescentes y aún menos comunes en los niños. Las úlceras duodenales se presentan por primera vez, por lo regular, entre las edades de 30 y 50. Las úlceras estomacales son más probables de desarrollarse en personas de alrededor de 60. Las úlceras duodenales se presentan más a menudo en hombres que en mujeres, mientras que las úlceras estomacales se desarrollan más frecuentemente en mujeres que en hombres . Se cree que tres factores, el estilo de vida, el ácido y la pepsina, y la bacteria Helicobacter pylori juegan un papel en el desarrollo de la úlcera. De esta manera, los factores del estilo de vida, tales como el estrés y la dieta pueden contribuir a las formaciones de úlceras. Además, un desequilibrio entre los fluidos digestivos (ácido clorhídrico y pepsina) y la capacidad del estómago de defenderse contra estas sustancias poderosas puede provocar las úlceras. Finalmente, una úlcera puede desarrollarse como resultado de la infección con H. pylori. La incapacidad del estómago de defenderse contra los poderosos fluidos digestivos, ácido y pepsina, contribuye a la formación de la úlcera. Así, los fluidos digestivos excesivos, el ácido y/o la pepsina presentes en el estómago, o la cantidad normal de estas sustancias en un estómago comprometido pueden ser factores causales en la formación de la úlcera. El estómago se defiende por si mismo de estos fluidos de diferentes maneras. Una manera es produciendo moco, un recubrimiento similar a lubricante que protege los tejidos estomacales. Otra manera es produciendo bicarbonato que neutraliza y desglosa los fluidos digestivos en sustancias menos dañinas para el tejido estomacal. Por último, la circulación sanguínea hacia el recubrimiento estomacal, la renovación celular y la reparación celular también ayudan a proteger el estómago. H. pylori es una bacteria en forma de espiral encontrada en el estómago. Se ha mostrado que esta bacteria (junto con las secreciones de ácido) puede dañar el estómago y el tejido duodenal, causando inflamación y úlceras. La H. pylori sobrevive en el estómago porque produce la enzima ureasa. La ureasa genera sustancias que neutralizan el ácido estomacal, por lo que se permite que la bacteria sobreviva. Debido a su forma, y la manera en que se mueve, H. pylori puede penetrar el recubrimiento de la mucosa protectora del estómago. Allí, puede producir sustancias que debilitan el moco protector del estómago y hacen a las células del estómago más susceptibles a los efectos dañinos del ácido y la pepsina. La bacteria también puede adherirse a las células estomacales debilitando adicionalmente los mecanismos de defensa del estómago y produciendo inflamación local . Por razones que no se entienden completamente, H. pylori también puede estimular al estómago para producir más ácido. El exceso de ácido en el estómago y otros factores irritantes pueden causar inflamación del extremo superior del duodeno, el bulbo duodenal. En algunas personas, durante largos periodos de tiempo, esta inflamación resulta en la producción de células similares a las del estómago lo que se denomina como metaplasia gástrica duodenal. H. pylori después ataca a estas células causando daño e inflamación adicional del tejido, lo que puede resultar en una úlcera. Dentro de semanas de infección con H. pylori, la mayoría de las personas desarrollan gastritis, una inflamación del recubrimiento estomacal. Sin embargo, la mayoría de las personas nunca tendrán síntomas o problemas relacionados con la infección. No es conocido lo que es diferente en las personas que desarrollan síntomas o úlceras relacionados con H. pylori . Los factores hereditarios o ambientales pueden causar que algunos individuos presenten problemas. De manera alternativa, los síntomas y úlceras pueden resultar de la infección con cepas de bacterias más virulentas . El síntoma más común de la úlcera es un dolor de retortijón o quemazón en el abdomen entre el esternón y el ombligo. El dolor a menudo se presenta entre comidas y en las horas previas de la mañana. Puede durar desde unos cuantos minutos hasta unas cuantas horas y puede aliviarse comiendo o tomando antiácidos. Los síntomas menos comunes de la úlcera incluyen náusea, vómito y pérdida del apetito y peso. La hemorragia de las úlceras se puede presentar en el estómago y el duodeno. Algunas veces los pacientes no saben que pueden tener hemorragias por úlceras, porque la pérdida de sangre es lenta y la sangre no puede ser evidente en la evacuación. Estos pacientes pueden sentirse cansados y débiles. Si la hemorragia es fuerte, la sangre aparecerá en el vómito o evacuación. La evacuación que contiene sangre parece alquitranada o negra. Las úlceras pueden diagnosticarse realizando examinaciones endoscópicas y de rayos X, y también mediante la prueba para H. pylori. Puede usarse una serie GI superior para diagnosticar las úlceras . Una serie GI superior involucra tomar rayos X del esófago, estómago y duodeno para localizar una úlcera. Para hacer la úlcera visible en la imagen por rayos X, el paciente ingiere un líquido gredoso llamado bario. Una prueba de diagnóstico alternativa es la endoscopia, durante la cual el paciente es ligeramente sedado y el doctor inserta un pequeño instrumento flexible con una cámara en el extremo a través de la boca en el esófago, estómago y duodeno. Con este procedimiento, puede visualizarse el tracto GI superior completo. Las úlceras u otras condiciones pueden diagnosticarse y fotografiarse y el tejido puede tomarse para biopsia, si es necesario. Las úlceras estomacales y duodenales pueden tratarse con bloqueadores H2 , inhibidores de la bomba de ácido (protones) y agentes protectores de la mucosa. Cuando se trata H. pylori , estas medicaciones se usan en combinación con antibióticos . Los bloqueadores H2 reducen la cantidad de ácido que produce el estómago bloqueando la histamina, un poderoso estimulante de la secreción de ácido. Desgraciadamente, los bloqueadores H2 requieren de varias semanas para reducir significativamente el dolor por úlceras. Además, el tratamiento con los bloqueadores H2 dura de 6 a 8 semanas . La Nizatidina (Axid®) está aprobada para el tratamiento de las úlceras duodenales, pero aún no está aprobada para el tratamiento de las úlceras estomacales. Los bloqueadores H2 que están aprobados para tratar las úlceras estomacales y duodenales incluyen Cimetidina (Tagamet®) , Ranitidina (Zantac®) y Famotidina (Pepcid®) . Los bloqueadores similares a H2 , los inhibidores de la bomba de ácido (protones) modifican la producción de ácido en el estómago. Sin embargo, los inhibidores de la bomba de ácido bloquean más completamente la producción de ácido en el estómago deteniendo la bomba de ácido del estómago, la etapa final de la secreción de ácido. La EDA ha aprobado el uso de omeprazol para el tratamiento a corto plazo de la enfermedad por úlcera. Las medicaciones protectoras de la mucosa protegen el recubrimiento de la mucosa del estómago del ácido. A diferencia de los bloqueadores H2 y los inhibidores de la bomba de ácido, los agentes protectores no inhiben la liberación de ácido. Estas medicaciones protegen el recubrimiento de la mucosa del estómago del daño por el ácido. Dos agentes protectores prescritos comúnmente son: Sucralfato (Carafate®) . Esta medicación se adhiere a la úlcera, proporcionando una barrera protectora que permite que la úlcera cicatrice e inhibe el daño adicional por el ácido del estómago. El sucralfato está aprobado para el tratamiento a corto plazo de las úlceras duodenales y para el tratamiento de mantenimiento. Misoprostol (Cytotec®) . Esta prostaglandina sintética, una sustancia que se produce naturalmente por el cuerpo, protege el recubrimiento del estómago aumentando el moco y la producción de bicarbonato y mejorando el flujo sanguíneo hacia el estómago. Está aprobado únicamente para la prevención de las úlceras inducidas por NSAID. Dos medicaciones comunes protectoras sin prescripción son: Antiácidos. Los antiácidos pueden ofrecer el alivio temporal del dolor por úlcera neutralizando el ácido estomacal . También pueden tener una función protectora de la mucosa. Muchas marcas de antiácidos están disponibles sin prescripción. Subsalicilato de bismuto. El subsalicilato de bismuto tiene un efecto protector y un efecto antibacteriano contra H. pylori . El descubrimiento del enlace entre las úlceras y H. pylori ha resultado en una nueva opción de tratamiento. Ahora, además del tratamiento que ayuda a disminuir la producción de ácido estomacal, los doctores pueden prescribir antibióticos para pacientes con H. pylori. Este tratamiento es un avance médico dramático porgue elimina H. pylori, lo que significa que la úlcera puede curarse ahora y muy probablemente ya no se presentará. Pueden usarse varios regímenes de tratamiento, que duran de dos a ocho semanas. De esta manera, es conocido el uso de una terapia triple, de dos semanas. Este régimen puede erradicar la mayoría de las bacterias de H. pylori y puede reducir el riesgo de recurrencia de una úlcera duodenal. Los pacientes con úlceras estomacales que están asociados con NSAIDs también pueden beneficiarse de la erradicación bacteriana. Mientras que la terapia triple es muy efectiva, a menudo es difícil de seguir porque el paciente debe tomar tres medicaciones diferentes cuatro veces al día durante 2 semanas . Además, el tratamiento causa comúnmente efectos secundarios, tales como infección por levaduras en las mujeres, malestar estomacal, náusea, vómito, mal sabor, movimientos del intestino sueltos u oscuros y desvanecimiento. La terapia triple, de 2 semanas, combina dos antibióticos, tetraciclina (por ejemplo, Achromycin® o Sumycin®) y metronidazol (por ejemplo Flagyl®) con subsalicilato de bismuto (Pepto-Bismol®) . Algunos doctores pueden agregar un fármaco supresor de ácido para aliviar el dolor por úlceras y promover la curación de la úlcera. En algunos casos, los doctores pueden sustituir la amoxicilina (por ejemplo Amoxil® o Trimox®) por tetraciclina o si se espera resistencia bacteriana al metronidazol, otros antibióticos tales como claritromicina (Biaxin®) . Como una alternativa para la terapia triple, también se conocen terapias dobles, de dos semanas. La terapia doble es más simple para que la sigan los pacientes y causa menos efectos secundarios. Una terapia doble puede incluir un antibiótico, tal como amoxicilina o claritromicina, con omeprazol, un fármaco que detiene la producción de ácido.

Desgraciadamente, puede requerir de cuatro a ocho semanas (es decir, usando bismuto, metronidazol, tetraciclima) o aún más (es decir, usando H2 o inhibidor de la bomba de ácido) para tratar efectivamente una úlcera péptica con las terapias actuales. En la mayoría de los casos, las medicinas anti-úlcera curan las úlceras rápida y efectivamente. La erradicación de H. pylori previene que recurran la mayorías de las úlceras. Sin embargo, los pacientes que no responden a la medicación o que desarrollan complicaciones pueden requerir de cirugía. Mientras que la cirugía es por lo regular exitosa en la curación de úlceras y la prevención de su ocurrencia y futuras complicaciones, a menudo se pueden originar problemas . En la actualidad, la cirugía abierta estándar se realiza para tratar las úlceras. En el futuro, los cirujanos pueden usar métodos laparoscópicos . Un laparoscopio es un instrumento similar a un tubo largo con una cámara que permite que el cirujano opere a través de incisiones delgadas mientras que observa por un monitor de video. Los tipos más comunes de cirugía para las úlceras son vagotomía, piloroplastia y antrectomía. Una vagotomía involucra el corte del nervio vago, un nervio que transmite mensajes desde el cerebro hacia el estómago. La interrupción de los mensajes enviados hacia el nervio vago reduce la secreción de ácido. Sin embargo, la cirugía también puede interferir con el vaciado estomacal . La variación más nueva de la cirugía involucra el corte únicamente de partes del nervio que controlan las células de secreción de ácido del estómago, evitando de esta manera las partes que influyen en el vaciado estomacal . En una antrectomía se retira la parte inferior del estómago (antro) que produce una hormona que estimula que el estómago secrete jugos digestivos. En ocasiones un cirujano también puede retirar una parte adyacente del estómago que secreta pepsina y ácido. Una vagotomía por lo regular se hace en conjunto con una antrectomía. La piloroplastia es otro procedimiento quirúrgico que puede realizarse junto con una vagotomía. La piloroplastia alarga la abertura en el duodeno y el intestino delgado (píloro) , permitiendo que los contenidos pasen más libremente desde el estómago . Las complicaciones de las úlceras pueden incluir hemorragia, perforación de las paredes del órgano y estrechamiento y obstrucción de los pasos del tracto digestivo. Conforme una úlcera desgasta los músculos del estómago o la pared duodenal, los vasos sanguíneos también pueden dañarse lo que causa hemorragia. Si los vasos sanguíneos afectados son pequeños, la sangre puede rezumarse en el tracto digestivo. Durante un periodo prolongado, una persona puede llegar a ser anémica y sentir debilidad, desvanecimiento o cansancio. Si un vaso sanguíneo es grande, la hemorragia es peligrosa y requiere de la pronta atención médica. Los síntomas incluyen sensación de debilidad y desvanecimiento cuando se está en reposo, vómito de sangre o desmayos. La evacuación de la sangre puede llegar a ser de color negro alquitranado. La mayoría de las hemorragias de las úlceras pueden tratarse de forma endoscópica. La úlcera se localiza y el vaso sanguíneo se cauteriza con un dispositivo de calentamiento o se inyecta con material para detener la hemorragia. Si el tratamiento endoscópico no es exitoso, puede requerirse cirugía. A menudo una úlcera perfora un orificio en la pared del estómago o duodeno. Las bacterias y los alimentos parcialmente digeridos pueden derramarse a través de la abertura en la cavidad abdominal estéril (peritoneo) . Esto causa peritonitis, una inflamación de la cavidad y la pared abdominal . Una úlcera perforada que puede causar dolor repentino, agudo, grave requiere por lo regular hospitalización y cirugía inmediata. Las úlceras localizadas en el extremo del estómago donde se une el duodeno, pueden causar hinchazón y cicatrización, lo cual puede estrechar o cerrar la abertura intestinal . Esta obstrucción puede evitar que el alimento salga del estómago y entre en el intestino delgado. Como resultado, una persona puede vomitar los contenidos del estómago. Puede realizarse la dilatación con balón endoscópico, un procedimiento que usa un balón para forzar a abrir un paso estrecho. Si la dilatación no alivia el problema, entonces puede ser necesaria la cirugía. Enfermedad por reflujo gastroesofágico . La enfermedad por reflujo gastroesofágico (GERD, por sus siglas en inglés) (también llamada esofagitis péptica y esofagitis por reflujo) es una inflación del esófago que resulta de la regurgitación de los contenidos gástricos en el esófago. Algo de reflujo gastroesofágico es una condición normal que a menudo se presenta sin síntomas después de las comidas. Sin embargo, el reflujo puede llegar a ser más grave cuando es debido a un esfínter esofágico inferior incompetente (debilitado) , una banda de las fibras musculares que cierra el esófago del estómago. Cuando esto ocurre, los contenidos ácidos o gástricos alcalinos del estómago pueden regresar al esófago a través del esfínter esofágico inferior y causar los síntomas de GERD. Las condiciones que pueden causar un esfínter esofágico incompetente con el resultado de GERD incluyen embarazo, hernia hiatal, obesidad, vómito recurrente o persistente y tubos nasogástricos . La GERD también es un factor de riesgo de cirugía esofágica y estrechez esofágica. Los síntomas de GERD incluyen pirosis, eructo, regurgitación del alimento, náusea, vómito, ronquera de la voz, mal de garganta, dificultad para deglutir y tos. El diagnóstico de la GERD es positivo en la evacuación para guayacol, monitoreo del pH esofágico continuo que muestra reflujo, endoscopia que muestra esofagitis o ulceración, manometría esofágica que muestra presión del esfínter anormal, deglución de bario que muestra reflujo y una prueba de Bernstein positiva para el reflujo ácido gástrico. El tratamiento para las medidas de la GERD incluyen reducción de peso, evitar acostarse después de las comidas, dormir con la cabeza elevada, tomar medicación con abundante agua, evitar grasa en la dieta, chocolate, cafeína, menta (esta puede causar presión esofágica inferior) , evitar alcohol y tabaco. Las medicaciones que pueden aliviar los síntomas de GERD incluyen antiácidos después de las comidas y en el momento de acostarse, bloqueadores del receptor H2 de histamina, agentes de promotilidad, inhibidores de la bomba de protones. Además, las operaciones anti-reflujo (Nissen fundoplication) pueden indicarse para pacientes con GERD farmacológicamente intratable. La GERD no tratada puede provocar esofagitis, úlcera esofágica, broncoespasmo, enfermedad pulmonar crónica y, esófago de Barrett, siendo el último un cambio en el recubrimiento del esófago que puede aumentar el riesgo de cáncer. De esta manera, hay numerosas deficiencias e inconvenientes asociados con las terapias actuales para las úlceras , pépticas y para la enfermedad por reflujo gastroesofágico .

Toxina botulínica El género Clostridium tiene más de ciento veintisiete especies, agrupadas de acuerdo con su morfología y funciones. La bacteria Clostridium botulinum gram positiva, anaeróbica produce una toxina botulínica, neurotoxina polipeptídica potente, que causa una enfermedad neuroparalítica en humanos y animales llamada botulismo. Las esporas de Clostridium botulinum se encuentran en el suelo y pueden crecer en recipientes alimenticios esterilizados y sellados de manera inapropiada de fábricas de conservas de base doméstica, que son la causa de muchos de los casos de botulismo. Los efectos del botulismo aparecen por lo regular 18 a 36 horas después de comer los productos alimenticios infectados con un cultivo de Clostridium botulinum o esporas. La toxina botulínica puede pasar aparentemente no atenuada a través del recubrimiento del intestino y atacar las neuronas motoras periféricas. Los síntomas de intoxicación de la toxina botulínica pueden progresar desde dificultad para caminar, deglutir y hablar hasta parálisis de los músculos respiratorios y muerte. La toxina botulínica de tipo A es el agente biológico natural más letal conocido por el hombre. Aproximadamente 50 picogramos de una toxina botulínica de tipo A comercxalmente disponible (complejo de neurotoxina purificada) (disponible en Allergan, Inc., of Irvine, California bajo la marca comercial BOTOX® en ampolletas de 100 unidades) es una LD50 en ratones (es decir, 1 unidad) . Una unidad de BOTOX® contiene cerca de 50 picogramos (aproximadamente 56 attomoles) del complejo de tipo A de la toxina botulínica. De forma interesante, sobre una base molar, la toxina botulínica de tipo A es aproximadamente 1.8 mil millones de veces más letal que la difteria, cerca de 600 millones de veces más letal que el cianuro de sodio, cerca de 30 millones de veces más letal que la toxina de cobra y cerca de 12 millones de veces más letal que el cólera. Singh, Critical Aspects of Bacterial Protein Toxins, páginas 63-84 (capítulo 4) of Natural Toxins II, editado por B.R. Singh et al., Plenum Press, New York (1996) (donde la IDSo establecida de la toxina botulínica de tipo A de 0.3 ng igual a 1 U se corrige porque cerca de 0.05 ng de BOTOX® es igual a 1 unidad) . Una unidad (U) de la toxina botulínica se define como la LD5o en la inyección intraperitoneal en ratones Swiss Webster hembra que pesan 18 a 20 gramos cada uno. Se han caracterizado siete neurotoxinas botulínicas inmunológicamente distintas, siendo éstas respectivamente los serotipos A, B, C, D, E, F y G de la neurotoxina botulínica, cada uno de los cuales se distingue por la neutralización con los anticuerpos de tipo específico. Los diferentes serotipos de la toxina botulínica varían en las especies de animales que afectan y en la gravedad y duración de la parálisis que producen. Por ejemplo, se ha determinado que la toxina botulínica de tipo A es 500 veces más potente, medido por la velocidad de parálisis producida en la rata, que la toxina botulinica de tipo B. Además, la toxina botulinica de tipo B se ha determinado que no es tóxica en los primates a una dosis de 480 U/kg que es aproximadamente 12 veces la LD50 del primate para la toxina botulinica de tipo A. Moyer E et al., Botulinum Toxin Type B: Experimental and Clinical Experience, capítulo 6, páginas 71-85 de "Therapy ith Botulinum Toxin", editado por Jankovic, J. et al. (1994), Marcel Dekker, Inc. La toxina botulínica se enlaza aparentemente con alta afinidad a las neuronas motoras colinérgicas, se desplaza en la neurona y bloquea la liberación de acetilcolina. Con respecto al serotipo, el mecanismo molecular de la intoxicación por la toxina parece que es similar y que involucra por lo menos tres pasos o etapas . En la primera etapa del proceso, la toxina se enlaza a la membrana presináptica de la neurona blanco a través de una interacción específica entre la cadena pesada, la cadena H y un receptor de superficie celular; el receptor se cree que es diferente para cada tipo de toxina botulínica y para la toxina de tétanos. El segmento final de carboxilo de la cadena H, Hc, parece que es importante para dirigir la toxina hacia la superficie celular. En la segunda etapa, la toxina cruza la membrana plasmática de la célula envenenada. La toxina se rodea primero por la célula por medio de endocitosis mediada por el receptor y se forma un endosoma que contiene la toxina. La toxina después se escapa del endosoma en el citoplasma de la célula. Esta etapa se cree que se media por el segmento amino terminal de la cadena H, HN, que desencadena un cambio conformacional de la toxina en respuesta a un pH de aproximadamente 5.5 o menor. Los endosomas se conoce que poseen una bomba de protones que disminuye el pH intra-endosomal . El cambio conformacional expone a los residuos hidrofóbicos en la toxina, lo que permite que la toxina se fije por si misma en la membrana endosomal . La toxina (o a un mínimo de la cadena ligera) después se desplaza a través de la membrana endosomal en el citoplasma. La última etapa del mecanismo de la actividad de la toxina botulínica parece que involucra la reducción del enlace de disulfuro que une la cadena pesada, cadena H y la cadena ligera, cadena L. La actividad tóxica completa de las toxinas botulinicas y tétanos está contenida en la cadena L de la holotoxina; la cadena- L es una endopeptidasa de zinc (Zn++) que corta selectivamente las proteínas esenciales para el reconocimiento y corta la vesícula que contiene el neurotransmisor con la superficie citoplásmica de la membrana plasmática y la fusión de las vesículas con la membrana plasmática. La neurotoxina de tétanos, la toxina botulínica de los tipos B, D, F y G causan degradación de la sinaptobrevina (también llamada proteína de membrana asociada con la vesícula (VAMP, por sus siglas en inglés) ) , una proteína de membrana sinaptosomal . La mayoría de las VAMP presentes en la superficie citoplásmica de la vesícula sináptica se remueven como resultado de cualquiera de estos eventos de corte. El serotipo de la toxina botulínica A y E cortan SNAP-25. El serotipo Ci de la toxina botulínica se pensó originalmente que cortaba la sintaxina, pero se encontró que cortaba la sintaxina y SNAP-25. Cada una de las toxinas botulínicas corta específicamente un enlace diferente, excepto la toxina botulínica de tipo B (y la toxina de tétanos) que cortan el mismo enlace. Aunque todos los serotipos de la toxina botulínica inhiben aparentemente la liberación del neurotransmisor acetilcolina en la unión neuromuscular, lo hacen afectando las diferentes proteínas neurosecretoras y/o cortando estas proteínas en diferentes sitios. Por ejemplo, la botulina de tipos A y E cortan la proteína asociada sinaptosomal (SNAP-25) de 25 kiloDalton (kD) , pero son el blanco de diferentes secuencias de aminoácidos dentro de esta proteína. La toxina botulínica de tipos B, D, F y G actúan sobre la proteína asociada con la vesícula (VAMP, por sus siglas en inglés, también llamada sinaptobrevina) , cortando cada serotipo la proteína en un sitio diferente. Finalmente, la toxina botulínica de tipo Ci se ha mostrado que corta la sintaxina y SNAP-25. Estas diferencias en el mecanismo de acción pueden afectar la potencia relativa y/o duración de la acción de los diferentes serotipos de la toxina botulínica. Evidentemente, se puede encontrar un sustrato para una toxina botulínica en una variedad de diferentes tipos celulares. Ver por ejemplo, Gonelle-Gispert , C. et al., SNAP-25a y -25b isoforms are both expressed . in insulin-secreting cells and can function in insulin secretion, Biochem J. 1;339 (pt 1) : 159-65: 1999, y Boyd R.S. et al., The effect of botulinum neurotoxin-B on insulin reléase frcm a 3-cell line, y Boyd R.S. et al., The insulin secreting 3-cell line, HIT-15, contains SNAP-25 vihich is a target for botulinum neurotoxin-A, ambos publicados en Mov Disord, 10(3) : 376: 1995 (células B de islote pancreático contienen por lo menos SNAP-25 y sinaptobrevina) . El peso molecular de la molécula proteínica de la toxina botulínica, para los siete serotipos de la toxina botulínica conocidos, es de aproximadamente 150 kD . De manera interesante, las toxinas botulínicas se liberan por la bacteria Clostridial como complejos que comprenden la molécula proteínica de la toxina botulínica de 150 kD junto con las proteínas sin toxinas asociadas. De esta manera, el complejo de la toxina botulínica de tipo A puede producirse por la bacteria Clostridial como formas de 900 kD, 500 kD y 300 kD. La toxina botulínica de tipos B y Ci se produce aparentemente únicamente como un complejo de 700 kD ó 500 kD. La toxina botulínica de tipo D se produce como los complejos de 300 kD y 500 kD. Por último, las toxinas botulínicas de tipo E y F se producen únicamente como complejos de aproximadamente 300 kD. Los complejos (es decir, peso molecular mayor de aproximadamente 150 kD) se cree que contienen una proteina de hemaglutinina sin toxina y una proteína sin hemaglutinina sin toxina y no tóxica. Estas dos proteínas sin toxinas (que junto con la molécula de la toxina botulínica comprenden el complejo de la neurotoxina relevante) pueden actuar para proporcionar estabilidad contra la desnaturalización a la molécula de la toxina botulínica y protección contra los ácidos digestivos cuando se ingiere la toxina. Además, es posible que los complejos de la toxina botulínica más grandes (mayores de aproximadamente 150 kD de peso molecular) pueden resultar en una velocidad de difusión más lenta de la toxina botulínica lejos del sitio de inyección intramuscular de un complejo de la toxina botulínica. Todos los serotipos de la toxina botulínica se sintetizan por las bacterias Clostridium botulinum como proteínas de cadena simple inactivas que deben cortarse o romperse por las proteasas para llegar a ser neuroactivos . Las cepas bacterianas que sintetizan a los serotipos A y G de la toxina botulínica poseen proteasas endógenas y los serotipos A y G, por lo tanto pueden recuperarse de los cultivos bacterianos en su forma predominantemente activa. Por el contrario, los serotipos Clf D y E de la toxina botullnica se sintetizan por las cepas no proteolíticas y por lo tanto, se inactivan típicamente cuando se recuperan del cultivo . Los serotipos B y F se producen por las cepas proteolitica y no proteolítica y por lo tanto, pueden recuperarse ya sea en la forma activa o inactiva. Sin embargo, aunque las cepas proteolíticas que producen, por ejemplo, el serotipo de tipo B de la toxina botulínica sólo cortan una porción de la toxina producida. La proporción exacta de las moléculas cortadas a no cortadas depende de la longitud de la incubación y la temperatura del cultivo. Por lo tanto, un cierto porcentaje de cualquier preparación de, por ejemplo, la toxina de tipo B de la toxina botulínica es probablemente que sea inactiva, lo que representa posiblemente una potencia menor de la toxina botulínica de tipo B comparado con la toxina botulínica tipo A. La presencia de las moléculas de la toxina botulínica inactivas en una preparación clínica contribuirá a la carga de la proteína global de la preparación, que se ha enlazado para aumentar la antigenicidad, sin contribuir a su eficacia clínica. Las toxinas botulínicas y los complejos de toxinas pueden obtenerse de, por ejemplo, List Biological Laboratories, Inc., Campbell, California; t e Centre for Applied Microbiology and Research, Portón Down, U.K.; Wako (Osaka, Japón) , así como de Sigma Chemicals of St Louis, Missouri. Las toxinas botulínicas comercialmente disponibles que contienen composiciones farmacéuticas incluyen BOTOX® (complejo de neurotoxina de tipo A de toxina botulínica con albúmina de suero de humano y cloruro de sodio) disponible en Allergan, Inc., of Irvine, California en ampolletas de 100 unidades como un polvo liofilizado que se reconstituye con cloruro de sodio al 0.9% antes del uso), Dysport® (complejo de hemaglutinina de toxina de Clostridium botulinx i de tipo A con albúmina de suero de humano y lactosa en la formulación) , disponible en Ipsen Limited, Berkshire, U.K. como un polvo que se reconstituye con cloruro de sodio al 0.9% antes del uso) y MyoBloc™ (una solución inyectable que comprende la toxina botulínica de tipo B, albúmina de suero de humano, succinato de sodio y cloruro de sodio a aproximadamente pH 5.6, disponible en Elan Corporation, Dublin, Irlanda) . El éxito de la toxina botulínica de tipo A para tratar una variedad de condiciones clínicas, ha conducido a interesarse en otros serotipos de la toxina botulínica. Adicionalmente , la toxina botulínica pura se ha usado para tratar a los humanos. Ver, por ejemplo, Kohl A., et al., Comparison of the effect of botulinum toxin A (Botox (R) ) with the highly-purified neurotoxin (NT 201) in the extensor digitorum Jbrevis muscle test, Mov Disord 2000; 15 (Suppl 3): 165. De esta manera, puede tratarse una composición farmacéutica usando una toxina botulínica pura.

La toxina botulínica de tipo A se conoce que es soluble en soluciones acuosas diluidas a pH 4-6.8. A pH por encima de aproximadamente 7, las proteínas no tóxicas estabilizadoras se disocian de la neurotoxina, lo que resulta en una pérdida gradual de la toxicidad, particularmente conforme el pH y la temperatura aumentan. Schantz E.J. et al Preparation and characterization of botulinum toxin ype A for human treatment (en particular páginas 44-45) , siendo el capítulo 3 de Jankovic, J. , et al, Iherapy with Botulinum Toxin, Marcel Dekker, Inc. (1994) . La molécula de la toxina botulínica (cerca de 150 kDa) , así como los complejos de la toxina botulínica (aproximadamente 300-900 kDa) , tal como el complejo tipo A de la toxina también son extremadamente susceptibles de la desnaturalización debido a la desnaturalización superficial, calor y condiciones alcalinas. La toxina inactivada forma proteínas toxoides que pueden ser inmunogénicas . Los anticuerpos resultantes pueden hacer a un paciente refractario a la inyección de la toxina. Los estudios in vitro han indicado que la toxina botulínica inhibe la liberación inducida por el catión de potasio de la acetilcolina y la norepinefrina de los cultivos de células primarias del tejido encefálico.' Además, se ha reportado que la toxina botulínica inhibe la liberación producida de la glicina y glutamato en los cultivos primarios de las neuronas de la médula espinal y que en las preparaciones de sinaptosoma del cerebro la toxina botulínica inhibe la liberación de cada uno de los neurotransmisores acetilcolina, dopamina, norepinefriña (Haberraann E. , et al., Tetanus Toxin and Botulinum A and C Neurotoxins Inhibit Noradrenaline Reléase From Cultured Mouse Brain, J Neurochem 51(2); 522-527: 1988) CGRP, sustancia P y glutamato (Sánchez-Prieto, J., et al., Botulinum Toxin A Blocks Glutamate Exocytosis From Guinea Pig Cerebral Cortical Synaptosornes, Eur J. Biochem 165; 675-681: 1987). De esta manera, cuando se usan concentraciones adecuadas, la liberación producida por el estímulo de la mayoría de los neurotransmisores se bloquea por la toxina botulínica. Ver por ejemplo, Pearce, L.B., Pharmacologic Characterization of Botulinum Toxin For Basic Science and Medicine, Toxicon 35(9); 1373-1412 a 1393; Bigalke H. , et al., Botulinum A Neurotoxin Inhibits Non-Cholinergic Synaptic Transmission in Mouse Spinal Cord Neurons in Culture, Brain Research 360; 318-324: 1985; Habermann E . , Inhibition by Tetanus and Botulinum A Toxin of the reléase of [3H]Noradrenaline and [3H] GABA From Rat Brain Homogenate, Experientia 44; 224-226: 1988, Bigalke H. et al., Tetanus Toxin and Botulinum A Toxin Inhibit Reléase and Uptake of Various Transmitters, as Studied with Particulate Preparations From Rat Brain and Spinal Cord, Naunyn-Schmiedeberg' s Arch Pharmacol 316; 244-251: 1981 y Jankovic J. et al., Therapy With Botulinum Toxin, Marcel Dekker, Inc., (1994), página 5.

La toxina botulínica de tipo A puede obtenerse estabilizando y desarrollando cultivos de Clostridium botulinum en un termentador y después cosechando y purificando la mezcla fermentada de acuerdo con los procedimientos conocidos. Todos los serotipos de la toxina botulínica se sintetizan inicialmente como proteínas de cadena simple inactiva que deben cortarse o romperse por las proteasas para llegar a ser neuroactivas . Las cepas bacterianas que sintetizan los serotipos A y G de la toxina botulínica poseen proteasas endógenas y los serotipos A y G, por lo tanto, pueden recuperarse de los cultivos bacterianos en su forma predominantemente activa. Por el contrario, los serotipos Ci, D y E de la toxina botulínica se sintetizan por las cepas no proteolíticas y por lo tanto, se inactivan típicamente cuando se recuperan del cultivo. Los serotipos B y F se producen por las cepas proteolítica y no proteolítica y por lo tanto, pueden recuperarse ya sea en la forma activa o inactiva. Sin embargo, aunque las cepas proteolíticas que producen, por ejemplo, el serotipo de tipo B de la toxina botulínica sólo cortan una porción de la toxina producida. La proporción exacta de las moléculas cortadas a no cortadas depende de la longitud de la incubación y la temperatura del cultivo. Por lo tanto, un cierto porcentaje de cualquier preparación de, por ejemplo, la toxina de tipo B de la toxina botulínica es probablemente que sea inactiva, lo que representa posiblemente la potencia significativamente menor de la toxina botulinica de tipo B comparado con la toxina botulínica de tipo A. La presencia de las moléculas de la toxina botulinica inactivas en una preparación clínica contribuirá a la carga de la proteína global de la preparación, que se ha enlazado para aumentar la antigenicidad, sin contribuir a su eficacia clínica. Además, se conoce que la toxina botulínica de tipo B, en la inyección intramuscular, tiene una duración de actividad más corta y también menos potente que la toxina botulínica de tipo A al mismo nivel de dosis. La toxina botulínica de tipo A cristalina de alta calidad puede producirse de la cepa Hall A de Clostridium botulinum con características de =3X10' U/mg, una A26o/A27s menor de 0.60 y un patrón distinto de bandeo en electroforesis en gel . El proceso Schantz conocido puede usarse para obtener la toxina botulínica de tipo A cristalina, como se establece en Schantz, E.J., et al., Properties and use of Botulinum toxin and Other Microbial Neurotoxins in Medicine, Microbiol Rev. 56; 80-99: 1992. En general, el complejo de la toxina botulínica de tipo A puede aislarse y purificarse de una fermentación anaeróbica cultivando Clostridium botulinum de tipo A en un medio apropiado. El proceso conocido también puede usarse, en la separación de las proteínas sin toxinas, para obtener toxinas botulínicas puras, tales como por ejemplo: toxina botulínica de tipo A con un peso molecular de aproximadamente 150 kD con una potencia específica de 1-2X108 LD50 U/mg o mayor; toxina botulínica de tipo B purificada con un peso molecular de aproximadamente 150 kD con una potencia especifica de 1-2 X 108 LDS0 U/mg o mayor, y; toxina botulínica de tipo F purificada con un peso molecular de aproximadamente 155 kD con una potencia específica de 1-2 X 107 LD50 U/mg o mayor. Ya sea la toxina botulínica pura (es decir, la molécula de la toxina botulínica de 150 kilodalton) o el complejo de la toxina pueden usarse para preparar una composición farmacéutica. La molécula y el complejo son susceptibles de desnaturalización debido a su desnaturalización superficial, calor y condiciones alcalinas. La toxina inactivada forma proteínas toxoides que pueden ser inmunogénicas . Los anticuerpos resultantes pueden hacer a un paciente refractario a la inyección de la toxina. En general, como con las enzimas, las actividades biológicas de las toxinas botulínicas (que son peptidasas intracelulares) son dependientes, por lo menos en parte, de su conformación tridimensional. De esta manera, la toxina botulínica de tipo A se destoxifica mediante calor, diferentes estiramientos superficiales químicos y secado superficial. Además, es conocido que la dilución del complejo de toxina obtenido por el cultivo conocido, fermentación y purificación, resulta en concentraciones de toxina menores usadas para la formulación de composición farmacéutica en la destoxificación rápida de la toxina, a- menos que esté presente un agente de estabilización. La dilución de la toxina de cantidades en miligramos a una solución que contiene nanogramos por mililitro presenta dificultades significativas debido a la pérdida rápida de la toxicidad especifica en tal gran dilución. Dado que la toxina puede usarse meses o años después de que se formula la composición farmacéutica que contiene la toxina, la toxina puede estabilizarse con un agente de estabilización tal como albúmina y gelatina. Una toxina botulinica comercialmente disponible que contiene la composición farmacéutica se vende bajo la marca comercial BOTOX® (disponible en Allergan, Inc., of Irvine, California) . BOTOX® consiste de un complejo de toxina botulinica de tipo A purificada, albúmina y cloruro de potasio envasada en la forma secada al vacío, estéril. La toxina botulinica de tipo A se sintetiza de un cultivo de la cepa Hall de Clostridium botulinum que crece en un medio que contiene la amina N-Z y extracto de levadura. El complejo de la toxina botulinica de tipo A se purifica de la solución de cultivo mediante una serie de precipitaciones acidas a un complejo cristalino que consiste de la proteína de toxina activa de alto peso molecular y una proteína de hemaglutinina asociada. El complejo cristalino se re-disuelve en una solución que contiene solución salina y albúmina y se filtra estéril (0.2 micrómetros) antes del secado al vacío. El producto secado al vacío se almacena en un congelador en o debajo de -5°C. Puede reconstituirse BOTOX® con solución salina estéril, no preservada antes de la inyección intramuscular. Cada ampolleta de BOTOX® contiene cerca de 100 unidades (U) del complejo de neurotoxina de la toxina Clostridium botulinum de tipo A, 0.5 miligramos de albúmina de suero humano y 0.9 miligramos de cloruro de sodio en una forma secada al vacío, estéril sin un conservador. Para reconstituir BOTOX® secado al vacío, se usa solución normal estéril sin un conservador (inyección de cloruro de sodio al 0.9%) extrayendo la cantidad apropiada de diluyente en la jeringa de tamaño apropiado. Dado que BOTOX® puede desnaturalizarse por burbujeo o agitación violenta similar, el diluyente se inyecta suavemente en la ampolleta. Por razones de esterilidad, BOTOX® se administra de preferencia dentro de cuatro horas después de que la ampolleta se retira del congelador y se reconstituye. Durante estas cuatro horas, BOTOX® reconstituido puede almacenarse en un refrigerador de aproximadamente 2°C a aproximadamente 8°C. BOTOX® reconstituido, refrigerado se ha reportado que mantiene su potencia durante por lo menos aproximadamente dos semanas. Neurology, 48:249-53: 1997.

Las toxinas botulínicas se han usado en las instalaciones clínicas para el tratamiento de trastornos neuromusculares caracterizados por músculos esqueléticos hiperactivos . La toxina botulínica de tipo A (Botox®) se aprobó por la U.S. Food and Drug Administration en 1989 para el tratamiento de blefarospasmo esencial, estrabismo y espasmo hemifacial en pacientes de alrededor de 12 años de edad. En el 2000 la FDA aprobó las preparaciones comerciales de los serotipos de la toxina botulínica de tipo A (Botox®) y de tipo B (MyoBloc™) para el tratamiento de distonía cervical, y en el 2002 la EDA aprobó una toxina botulínica de tipo A (Botox®) para el tratamiento cosmético de algunas arrugas faciales hipercinéticas (glabelares) . Los efectos clínicos de la toxina botulínica de tipo A intramuscular periférica se observan por lo regular dentro de una semana de inyección y algunas veces dentro de unas cuantas horas. La duración típica del alivio sintomático (es decir, parálisis del músculo fláccido) de una sola inyección intramuscular de la toxina botulínica de tipo A puede ser de aproximadamente tres meses, aunque en algunos casos los efectos de una toxina botulínica indujeron la desnervación de una glándula, tal como una glándula salival, se han reportado que durante duran por varios años. Por ejemplo, es conocido que la toxina botulínica de tipo A puede tener una eficacia de hasta 12 meses (Naumann M. , et al . , Botulinum toxin type A in the treatment of focal, axillary and palmar hyperhidrosis and other hyperhidrotic conditions, European J. Neurolcgy 6 (Supp 4) : S111-S115: 1999), y en algunas circunstancias durante tanto como 27 meses. Ragona, R.M. , et al., Management of parotid sialocele with botulinum toxin, The Laryngoscope 109:1344-1346:1999. Sin embargo, la duración usual de una inyección intramuscular de Botox® es por lo regular de aproximadamente 3 a 4 meses . Se ha reportado que una toxina botulínica de tipo A se ha usado en diversos establecimientos clínicos, incluyendo por ejemplo como sigue: (1) aproximadamente 75-125 unidades de BOTOX® por inyección intramuscular (músculos múltiples) para tratar la distonía cervical; (2) 5-10 unidades de BOTOX® por inyección intramuscular para tratar las líneas glabelares (surcos de la frente) (5 unidades inyectadas intramusculármente en el músculo prócero y 10 unidades inyectadas intramuscularmente en cada músculo superciliar corrugador) ; (3) aproximadamente 30-80 unidades de BOTOX® para tratar constipación por inyección intrasfínter del músculo puborrectal; (4) aproximadamente 1-5 unidades por músculo de BOTOX® inyectado intramuscularmente para tratar blefarospasmo inyectando el músculo oculus orbicularis pre-tarsal lateral del párpado superior y el oculus orbicularis pre-tarsal lateral del párpado inferior. (5) parar tratar estrabismo, los músculos extraoculares se han inyectado intramuscularmente con aproximadamente 1-5 unidades de BOTOX®, la cantidad inyectada varía con base en el tamaño del músculo que va a inyectarse y el grado de parálisis muscular deseada (es decir, la cantidad de corrección de dioptría deseada) . (6) para tratar espasticidad del miembro superior después de ataque por inyección intramusculares de BOTOX® en cinco diferentes músculos flexores del miembro superior, como sigue : (a) músculo flexor digitorum profundus: 7.5 U a 30 U (b) músculo flexor digitorum sublimus: 7.5 U a 30 U (c) músculo flexor carpi ulnaris : 10 U a 40 U (d) músculo flexor carpi radialis: 15 U a 60 U (e) músculo bíceps brachii: 50 U a 200 U. Cada uno de los cinco músculos indicados se ha inyectado en la misma sesión de tratamiento, de modo que el paciente recibe de 90 U a 360 U de BOTOX® en el músculo flexor de miembro superior por inyección intramuscular en cada sesión de tratamiento . (7) para tratar migraña, la inyección pericranial (inyectada de forma simétrica en los músculos glabelar, frontalis y temporalis) de 25 U de BOTOX® ha mostrado beneficio significativo como un tratamiento profiláctico de la migraña, comparado con el vehículo medido por la disminución de las medidas de la frecuencia de migraña, gravedad máxima, asociada con vómito y el uso de medicación aguda durante el periodo de tres meses después de la inyección de 25 U. Además, la toxina botulínica intramuscular se ha usado en el tratamiento del temblor en pacientes con enfermedad de Parkinson, aunque se ha reportado que los resultados han sido imprecisos. Mar ama-Lyons , J. et al., Tremor-Predominant Parkinson's Disease, Drugs & Aging 16(4); 273-278:2000. Es conocido el tratamiento de algunos trastornos gastrointestinales y del músculo liso con una toxina botulínica. Ver, por ejemplo, las patentes U.S. 5,427,291 y 5,674,205 (Pasricha) . Además, se conoce la inyección transuretral de una toxina botulínica en un esfínter de la vejiga para tratar la micción (ver por ejemplo Dykstra, D.D., et al, Treatment of detrusor-sphincter dyssynergia with botulinum A toxin: A double-blind study, Arch Phys Med Rehabil 1990 Jan; 71:24-6) , como es la inyección de una toxina botulínica en la próstata para tratar hiperplasia prostética. Ver, por ejemplo patente U.S. 6,365,164 (Schmidt) . La patente U.S. 5,766,605 (Sanders) propone el tratamiento de diferentes trastornos autonómicos, tales como hipersalivación y rinitis, con una toxina botulínica. Además, es conocido que la hipersecreción nasal es causada predominantemente por la sobre-actividad de las glándulas nasales, que están principalmente bajo el control colinérgico y se ha demostrado que la aplicación de la toxina botulínica de tipo A al tejido de la mucosa nasal de mamíferos de los turbinados del - seno maxilar puede inducir una apoptosis temporal en las glándulas nasales. Rohrbach S., et al., Botulinum toxin type A induces apoptosis in nasal glands of guinea pigs, Ann Otol Rhinol Laryngol 2001 Nov; 110 (11) : 1045-50. Además, la aplicación .local de la toxina botulínica de tipo A a un paciente femenino humano con rinitis intrínseca resultó en una clara disminución de la hipersecreción nasal dentro de cinco días . Rohrbach S . , et al., Minimally invasive application of botulinum toxin type A in nasal hipersecretion, J Oto-Rhino-Laryngol 2001 Nov-Dec;63 (6) :382-4. Las diferentes aflicciones, tales como hiperhidrosis y dolor de cabeza, tratadas con una toxina botulínica se describen en la WO 95/17904 (PCT/US94/14717) (Aoki) . EP 0 605 501 Bl (Graham) describe el tratamiento de parálisis cerebral con una toxina botulínica y la patente U.S. 6,063,768 (First) describe el tratamiento de inflamación neurogénica con una toxina botulínica. Además de tener acciones f rmacológicas en la localización periférica, las toxinas botulínicas también pueden tener efectos inhibidores en el sistema nervioso central. El trabajo de Weigand et al, (125l-labelled botulinum A neurotoxin:pharmacokinetics in cats after intramuscular injection, Nauny-Schmiedeberg' s Aren. Pharmacol . 1976; 292, 161-165) y Habermann, (125l-labelled Neurotoxin f om Clostridium botulinum A: preparation, binding to synaptosomes and ascent to the spinal cord, Nauny-Schmiedeberg' s Aren. Pharmacol. 1974; 281, 47-56) mostró que la toxina botulínica es capaz de ascender al área espinal por transporte retrógrado. Como tal, una toxina botulínica inyectada en una localización periférica, por ejemplo intramuscularmente, puede ser transportada de forma retrógrada a la médula espinal . Los estudios in vitro han indicado que la toxina botulínica inhibe la liberación inducida por el catión potasio de la acetilcolina y la norepinefriña de los cultivos de células primarias del tejido encefálico. Además, se ha reportado que la toxina botulínica inhibe la liberación producida de la glicina y glutamato en cultivos primarios de las neuronas de la médula espinal y que en las preparaciones sinaptosoma cerebral la toxina botulínica inhibe la liberación de cada uno de los neurotransmisores acetilcolina, dopamina, norepinefriña, CGRP y glutamato. La patente U.S. No. 5,989,545 describe que una neurotoxina clostridial modificada o fragmento de la misma, de preferencia una toxina botulínica, conjugada químicamente o fusionada de manera recombinante a un radical blanco particular, puede usarse para tratar el dolor por la administración del agente a la médula espinal. Una toxina botulínica también se ha propuesto para el tratamiento de hiperhidrosis (sudoración excesiva, patente U.S. 5,766,605), dolor de cabeza (patente U.S. 6,458,365, dolor de cabeza por migraña (patente U.S. 5,714,468), dolor post-operativo y dolor visceral (patente U.S. 6,464,986), dolor por administración intraspinal (patente U.S. 6,113,915), enfermedad de Parkinson por administración intracranial (patente U.S. 6,306,403), crecimiento de cabello y retención de cabello (patente U.S. 6,299,893), psoriasis y dermatitis (patente U.S. 5,670,484), músculos lesionados (patente U.S. 6,423,319), diferentes cánceres (patente U.S. 6,139,845), trastornos pancreáticos (patente U.S. 6,143,306), trastornos del músculo liso (patente U.S. 5,437,291, que incluye inyección de una toxina botulínica en el esófago superior e inferior, esfínteres pilórico y anal) ) , trastornos de la próstata (patente U.S. 6,365,164), inflamación, artritis y gota (patente U.S. 6,063,768), parálisis cerebral juvenil (patente U.S. 6,395,277), trastornos del oído interno (patente U.S. 6,265,379), trastornos de la tiroides (patente U.S. 6,358,513), trastornos de la paratiroides (patente U.S. 6,328,977). Además, son conocidos los implantes de toxina de liberación controlada (patentes U.S. 6,306,423 y 6,312,708). Se ha reportado que la inyección intravenosa de una toxina botulínica causa una disminución del ácido simulado por pentagastrina y secreción de pepsina en ratas. Kondo T., et al., Modification of the action of pentagastrin on acid secretion by botulinum toxin, Experientia 1977; 33:750-1. Además, se ha especulado que una toxina botulínica puede usarse para reducir una secreción gastrointestinal, tal como una secreción gástrica. Ver las páginas 16-17 de WO 95/17904. Además, una toxina botulínica se ha propuesto para el tratamiento de los trastornos del músculo gastrointestinal en el trastorno del sistema nervioso entérico (patente U.S. 5,437,291) y también para tratar diferentes trastornos autonómicos (patente U.S. 5,766,605). La toxina botulínica se ha inyectado en el fondo del estómago de perros. Wang Z., et al., Effects of botulinum toxin on gastric myoelectrical and vagal activities in dogs, Gastroenterology 2001 Apr; 120 (5 Suppl 1) : A-718. Además, la inyección intramuscular de una toxina botulínica en el antro gástrico se ha propuesto como un tratamiento para la obesidad. Ver, por ejemplo, Gui D., et al., Effects of botulinum toxin on gastric emptying and digestive secretions . A possible tool for correction of obesity?, Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 2002 Jun; 365 (Suppl 2) : 22; Albanese A., et al., The use of botulinum toxin on smooth muscles, Eur J Neurol 1995 Nov; 2 (Suppl 3) : 29-33, y; Gui D., et al., Botulinum toxin injected in the gastric wall reduces body weight and food intake in rats, Aliment Pharmacol Ther 2000 Jun; 14(6): 829-834. Además, la toxina botulínica de ¦ tipo A se ha propuesto como una aplicación terapéutica para el control de la secreción en el estómago. Rossi S., et al . , Imnunohistochemical localization of SNAP-25 protein in the stomach of rat, Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 2002; 365 (Suppl 2): R37. De manera significativa, se ha reportado que la inyección de una toxina botulínica en el esfínter esofágico inferior para el tratamiento de acalasia resulta en la formación de úlceras en el esófago. Eaker, E.Y., et al., Untoward effects of esophageal botulinum toxin injection in the treatment of achalasia, Dig Dis Sci 1997 Apr; 42(4): 724-7. Se conoce inyectar una toxina botulínica en un esfínter pilórico espástico de un paciente con una úlcera prepilórica para permitir que el músculo pilórico se abra. Wiesel P.H. et al., Botulinum toxin for refractory postoperative pyloric spasm, Endoscopy 1997; 29 (2): 132. La toxina de tétanos, así como sus derivados (es decir, con un radical blanco no nativo) , fragmentos, híbridos y quimeras de los mismos también pueden tener utilidad terapéutica. La toxina de tétanos tiene muchas similitudes con las toxinas botulínicas. Así, la toxina del tétanos y las toxinas botulínicas son polipéptidos sintetizados por especies estrechamente relacionadas de Clostridium (Clostridium tetani y Clostridium botulinum, respectivamente) . Además, la toxina del tétanos y las toxinas botulínicas son proteínas de dos cadenas compuestas de una cadena ligera (peso molecular de aproximadamente 50 kD) unidas covalentemente por un enlace de disulfuro simple a una cadena pesada (peso molecular de aproximadamente 100 kD) . Por esto, el peso molecular de la toxina del tétanos y de cada una de las siete toxinas botulínicas (no acomplejadas) es de aproximadamente 150 kD. Además, para la toxina del tétanos y las toxinas botulínicas, la cadena ligera porta el dominio que exhibe actividad biológica intracelular (proteasa) , mientras que la cadena pesada comprende la unión del receptor (inmunogénico) y los dominios translocacionales de la membrana celular. Además, la toxina del tétanos y las toxinas botulínicas exhiben una afinidad específica alta para los receptores de gangliocida sobre la superficie de las neuronas colinergicas presinápticas . La endocitosis mediada por el receptor de la toxina del tétanos por las neuronas colinérgicas periféricas resulta en el transporte axonal retrógrado, que bloque la liberación de los neurotxansmisores inhibidores de la sinapsis central y una parálisis espástica. Por el contrario, la endocitosis mediada por el receptor de la toxina botulínica por las neuronas colinérgicas periféricas resulta en poco si no es que nada de transporte retrógrado, inhibición de la exocitosis de la acetilcolina de las neuronas motoras periféricas intoxicadas y una parálisis fláccida.

Por último, la toxina del tétanos y las toxinas botulínicas se parecen entre si con respecto a la biosíntesis y arquitectura molecular. De esta manera, hay una identidad 34% global entre las secuencias de proteínas de la toxina del tétanos y la toxina botulínica de tipo A y una identidad de secuencia tal alta como 62% para algunos dominios funcionales. Binz T. et al., The Complete Sequence of Botulinum Neurotoxin Type A and Comparison with Other Clostridial Neurotoxins, J Biological Chemistry 265(16): 9153-9158: 1990. Acetilcolina Por lo regular, sólo un tipo de neurotransmisor de molécula pequeña se libera por cada tipo de neurona en el sistema nervioso de mamífero. El neurotransmisor de acetilcolina se secreta por las neuronas en muchas áreas del cerebro, pero específicamente por las células piramidales largas de la corteza motora, por diferentes neuronas en los ganglios básales, por las neuronas motoras que inervan los músculos esqueléticos, por las neuronas preganglionares del sistema nervioso autonómico (ambas simpático y parasimpático) , por las neuronas post-ganglionares del sistema nervioso parasimpático y por algunas neuronas post-ganglionares del sistema nervioso simpático. Esencialmente, únicamente las fibras nerviosas simpáticas post-ganglionares para las glándulas sudoríparas, los músculos piloerectores y unos cuantos vasos sanguíneos son colinérgicos, ya que la mayoría de las neuronas post-ganglionares del sistema nervioso simpático secretan la norepinefriña neurotransmisora . En la mayoría de los casos, la acetilcolina tiene- un efecto excitativo. Sin embargo, la acetilcolina es conocida por tener efectos inhibidores en algunas de las terminales del nervio parasimpático periférico, tal como inhibición de la frecuencia cardiaca por el nervio vagal . Las señales aferentes del sistema nervioso autonómico se transmiten hacia el cuerpo a través del sistema nervioso simpático o el sistema nervioso parasimpático. Las neuronas preganglionares del sistema nervioso simpático se extienden desde los cuerpos de las células neuronales simpáticas preglanglionares localizados en el cuerno intermediolateral de la médula espinal. Las fibras del nervio simpático preganglionar, que se extienden desde el cuerpo celular, forman sinapsis con las neuronas post-ganglionares localizadas en un ganglio simpático paravertebral o en un ganglio prevertebral . Dado que las neuronas preganglionares del sistema nervioso simpático y parasimpático son colinérgicas, la aplicación de acetilcolina a los ganglios excitará las neuronas post-ganglionares simpáticas y parasimpáticas . La acetilcolina activa dos tipos de receptores, los receptores muscarínico y nicotínico. Los receptores muscarínico y nicotínico se encuentran en todas las células efectoras estimuladas por las neuronas post-ganglionares del sistema nervioso parasimpático asi como en las estimuladas por las neuronas colinérgicas post-ganglionares del sistema nervioso simpático. Los receptores nicotínicos se encuentran en la médula adrenal, así como dentro de los ganglios autonómicos, esto es sobre la superficie celular de. la neurona post-ganglionar en la sinapsis entre las neuronas preganglionares y post-ganglionares de los sistemas simpático y parasimpático. Los receptores nicotínicos también se encuentran en muchas terminales nerviosas no autonómicas, por ejemplo en las membranas de las fibras del músculo esquelético en la unión neuromuscular. La acetilcolina se libera de las neuronas colinérgicas cuando las vesículas pequeñas, claras, intracelulares se fusionan con la membrana celular neuronal presináptica. Una amplia variedad de células secretoras no neuronales, tales corro la médula adrenal (así como la línea celular PC12) y las catecolarrdnas de liberación de células de islotes pancráticos y la hormona paratiroides, respectivamente, de vesículas de centro muy denso. La línea celular PC12 es un clon de células de feocromocitoma de rata usadas ampliamente como un modelo de cultivo de tejido para estudios del desarrollo simpatoadrenal . La toxina botulínica inhibe la liberación de ambos tipos de compuestos de los tipos de células in vitro, permeabilizadas (como por electroporación) o por inyección directa de la toxina en la célula desnervada.

La toxina botulinica también se conoce que bloquea la liberación del glutamato neurotransmisor de los cultivos celulares de las sinaptosomas corticales . Una unión neuromuscular se forma en el músculo esquelético por la proximidad de los axones a las células musculares. Una señal transmitida a través del sistema nervioso resulta en una acción potencial en el axón terminal, con activación de los canales iónicos y la liberación resultante de la acetilcolina neurotransmisora de las vesículas sinápticas intraneuronales , por ejemplo en la placa terminal motora de la unión neuromuscular. La acetilcolina cruza el espacio extracelular para unirse con las proteínas del receptor de acetilcolina sobre la superficie del músculo de la placa terminal . Una vez que se ha presentado suficiente unión, una acción potencial de la célula muscular causa cambios del canal iónico de la membrana específica, resultando en la contracción de la célula del músculo. La' acetilcolina después se libera de las células del músculo y se metaboliza por las colinesterasas en el espacio extracelular. Los metabolitos se reciclan nuevamente en el axón terminal para el reprocesamiento en la acetilcolina adicional. Por lo tanto, lo que se necesita son métodos para el tratamiento de úlceras pépticas y para el tratamiento de enfermedad por reflujo gastroesofágico con una toxina botulinica.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA FIGURA La Figura 1 ilustra ejemplos de localizaciones de úlceras gástricas (estómago) y duodenales . BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención satisface esta necesidad y proporciona métodos para el tratamiento de úlceras pépticas y para el tratamiento de enfermedad por reflujo gastroesofágico con una toxina botulínica. La presente invención excluye la inyección intramuscular o subcutánea de una toxina botulínica para tratar una úlcera o para el tratamiento de enfermedad por reflujo gastroesofágico porgue tales métodos son invasores (es decir, endoscopia) e inconvenientes para los pacientes . De acuerdo con la presente invención, la toxina botulínica está compuesta como una formulación oral para la liberación del ingrediente activo de la toxina en el estómago o el duodeno de un paciente con una úlcera péptica. La preparación de una formulación oral de una toxina botulínica puede realizarse fácilmente mezclando un polvo de toxina botulínica liofilizada o secada por congelado con un vehículo, tal como harina, azúcar o gelatina y después comprimiendo la mezcla para hacer una tableta ingerible. El vehículo y la cantidad de compresión se elige de modo que la tableta resultante (o alternativamente puede formularse una cápsula o cápsula de gelatina que contiene una cantidad terapéutica de la toxina mezclada con o sin un vehículo) se destina para deglutirse y el vehículo y las características del vehículo son tales que el vehículo se disuelve rápidamente en el estómago, liberando el ingrediente activo de la toxina botulínica. La toxina botulínica es una toxina botulínica de tipo A, B, Ci, D, E, F y G y es de preferencia la toxina botulínica de tipo A. La toxina botulínica puede asociarse con el vehículo en una cantidad de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10,000 unidades de la toxina botulínica. De preferencia, la cantidad de la toxina botulínica asociada con el vehículo es entre aproximadamente 5 unidades y cerca de 500 unidades de una toxina botulínica de tipo A. Cuando la toxina botulínica es la toxina botulínica de tipo B, de preferencia, la cantidad de la toxina botulínica asociada con el vehículo puede ser entre aproximadamente 250 unidades y cerca de 25,000 unidades de una toxina botulínica de tipo B.

Una modalidad detallada de la presente invención puede comprender una formulación oral que comprende un polímero rápidamente biodegradable o una sustancia natural (es decir, harina, azúcar o gelatina) y entre aproximadamente 5 unidades y cerca de 25, 000 unidades de una toxina botulínica encapsulada por el vehículo, por lo que se forma un sistema de liberación controlada, en donde las cantidades terapéuticas de la toxina botulínica pueden liberarse del vehículo en el sistema gastrointestinal de un paciente humano con una úlcera péptica.

Un método para hacer una tableta o cápsula ingerible de toxina botulínica dentro del alcance de la presente invención puede tener las etapas de: mezclar o dispersar una toxina botulínica en un vehículo apropiado para formar una mezcla de vehículo-toxina botulínica, y; comprimir la mezcla de vehículo-toxina botulínica en una tableta o rellenar la mezcla en una cápsula. Una modalidad alternativa de la presente invención puede ser un vehículo que comprende un polímero seleccionado del grupo de polímeros que consiste de polilacturos biodegradables y poliglicoluros y una toxina botulínica estabilizada asociada con el vehículo, por lo que se forma un sistema de liberación de la toxina botulínica, en donde las cantidades terapéuticas de la toxina botulínica pueden liberarse del vehículo en un sistema GI del paciente una vez la ingestión oral. El vehículo puede comprender una pluralidad de microesferas que incorporan la toxina botulínica . La toxina botulínica usada para preparar una formulación oral de acuerdo con la presente invención puede comprender: un primer elemento que comprende un elemento de unión capaz de unir específicamente a un receptor de superficie celular neuronal bajo condiciones fisiológicas, un segundo elemento que comprende un elemento de translocación capaz de facilitar la transferencia de un polipéptido a través de una membrana celular neuronal, y un tercer elemento que comprende un elemento terapéutico capaz de inhibir, cuando está presente en el citoplasma de una neurona, la exocitosis de la acetilcolina de la neurona. El elemento terapéutico puede cortar- una proteina SNARE, por lo que se inhibe la exocitosis de la acetilcolina de la neurona y la proteína SNARE puede seleccionarse del grupo que consiste de sintaxina, SNAP-25 y VAMP. En general, la neurona afectada por la toxina botulínica es una neurona presináptica, colinérgica que inerva, por ejemplo, un músculo del tracto GI (liso, estriado, liso mezclado y músculo GI estriado) o un tejido glandular secretor del tracto GI . Aunque una neurona colinérgica puede mostrar alta afinidad para una toxina botulínica (es decir, a través de un receptor para la toxina) , las células del músculo y las células de glándulas pueden tomar directamente la toxina a través de un mecanismo de baja afinidad (es decir, pínocitosis) . De esta manera, ambas neuronas y la célula no neuronal pueden ser los blancos para la toxina botulínica. La cantidad de una toxina botulínica administrada por una formulación oral, dentro del alcance de la presente invención durante un periodo dado puede ser entre aproximadamente 10"3 U/kg y aproximadamente 35 U/kg para una toxina botulínica de tipo A y hasta aproximadamente 2000 U/kg para las otras toxinas botulínicas, tal como una toxina botulínica de tipo B. 35 U/kg ó 2000 U/kg es un límite superior porque se aproxima a una dosis letal de algunas neurotoxinas, tales como la toxina botulínica de tipo A o la toxina botulínica de tipo B, respectivamente. De esta manera, se ha reportado que aproximadamente 2000 unidades/kg de una preparación de una toxina botulínica de tipo B comercialmente disponible se aproxima a una dosis letal para primates de la toxina botulínica de tipo B. Meyer K.E. et al, A Comparative Systemic Toxicity Study of Neurobloc in Adult Juvenile Cynomolgus Monkeys, Mov. Disord 15 (Suppl 2); 54; 2000. De preferencia, la cantidad de una toxina botulínica de tipo A administrada por una formulación oral está entre aproximadamente 10"2 U/kg y aproximadamente 25 U/kg. De preferencia, la cantidad de una toxina botulínica de tipo B administrada por una formulación oral durante un periodo dado está entre aproximadamen e 10"2 U/kg y aproximadamente 1000 U/kg, dado que se ha reportado que menos de aproximadamente 1000 U/kg de la toxina botulínica de tipo B puede administrarse intramusculármente a un primate sin efecto sistémico. Ibid. Más preferentemente, la toxina botulínica de tipo A se administra en una cantidad de entre aproximadamente 10"1 U/kg y aproximadamente 15 U/kg. Más preferentemente, la toxina botulínica de tipo A se administra en una cantidad de entre aproximadamente 1 U/kg y aproximadamente 10 U/kg. En muchos casos, una administración de aproximadamente 1 unidad a aproximadamente 500 unidades de una toxina botulínica de tipo A, proporciona alivio terapéutico de duración larga y efectiva. Más preferentemente, puede usarse de aproximadamente 5 unidades a aproximadamente 300 unidades de una toxina botulínica, tal como una toxina botulínica de tipo A, y más preferentemente, de aproximadamente 10 unidades a aproximadamente 200 unidades de una neurotoxina, tal como una toxina botulínica de tipo A, puede administrarse localmente en un tejido blanco con resultados eficaces. En una modalidad particularmente preferida de la presente invención, de aproximadamente 1 unidad a aproximadamente 100 unidades de una toxina botulínica, tal como la toxina botulínica de tipo A, puede administrarse localmente en un tejido blanco con resultados terapéuticamente efectivos. La toxina botulínica puede sintetizarse por Clostridium botulinu . Además, la toxina botulínica puede ser una toxina botulínica modificada, esto es, una toxina botulínica que tiene por lo menos uno de sus aminoácidos eliminados, modificados o reemplazados, comparado con la toxina botulínica de tipo nativa o silvestre. Además, la toxina botulínica puede ser una toxina botulínica producida de manera recombinante o un derivado o fragmento de la misma. De manera significativa, la toxina botulínica de lata se administra por ingestión oral (es decir, deglutiendo la tableta o la cápsula) por un paciente con una úlcera péptica mediante la colocación de una formulación oral de toxina botulínica. Cuando la toxina botulínica es la toxina botulínica de tipo A, la cantidad de toxina botulínica administrada oralmente puede estar entre aproximadamente 1 unidad y aproximadamente 500 unidades, de preferencia entre 10 y 300 unidades y más preferentemente entre 50 y 200 unidades de la toxina botulínica de tipo A. De manera notable, se ha reportado que el tejido glandular tratado con una toxina botulínica puede mostrar una actividad secretora reducida durante tanto como 27 meses post-inyección de la toxina. Laryngoscope 1999; 109:1344-1346, Laryngoscope 1998; 108:381-384'. Definiciones Las siguientes definiciones aplican en la presente. "Aproximadamente" significa más o menos diez por ciento del valor así calificado. "Biocompatible" significa que hay una respuesta inflamatoria significativa del uso de la formulación oral. "compuesto biológicamente activo" significa un compuesto que puede efectuar un cambio benéfico en el paciente al que se administra. Por ejemplo, los "compuestos biológicamente activos" incluyen las neurotoxinas . "Cantidad efectiva" como se aplica al compuesto biológicamente activo significa que la cantidad del compuesto la cual es en general suficiente para efectuar una cambio deseado en el paciente. Por ejemplo, cuando el efecto deseado es una cicatrización de una úlcera péptica, una cantidad efectiva del compuesto es la cantidad que causa por lo menos una cicatrización sustancial de la úlcera, y sin resultar en una reacción de toxicidad sistémica significativa. "Cantidad efectiva" como se aplica a un constituyente de ingrediente no activo de una formulación oral (tal como un vehículo usado para mezclarse con una toxina botulínica) se refiere a la cantidad de constituyente de ingrediente no activo que es suficiente para influir positivamente la liberación de un agente biológicamente activo a una velocidad deseada durante un periodo deseado en el tracto GI . Esta "cantidad efectiva" puede determinarse con base en la enseñanza de esta especificación y el conocimiento general en el arte. "Neurotoxina" significa un agente que puede interrumpir la transmisión del impulso nervioso a través de una unión neuromuscular o neuroglandular, bloquear o reducir la exocitosis neuronal de un neurotransmisor o alterar la acción potencial de la barrera de voltaje del canal de sodio de una neurona. Ejemplos de las neurotoxinas incluyen las toxinas botulínicas, toxinas de tétanos, saxitoxinas y tetrodotoxina .

"Tratamiento" significa cualquier tratamiento de una enfermedad en un mamífero e incluye: (i) prevenir que se presente la enfermedad o; (ii) inhibir la enfermedad, es decir, interrumpir su desarrollo; (iii) aliviar la enfermedad, es decir, reducir la incidencia de los síntomas o de causar la regresión de la enfermedad. Un método para usar una formulación oral dentro del alcance de la presente invención, puede comprender proporcionar un nivel terapéuticamente efectivo en el tracto GI de una neurotoxina biológicamente activa, en un paciente durante una ingestión de una formulación de una toxina botulínica oral por el paciente. En general, la presente invención abarca un método para tratar una úlcera péptica administrando una toxina botulínica para tratar de esta forma una úlcera gástrica. La toxina botulínica puede seleccionarse del grupo que consiste de las toxinas botulínicas de tipo A, B, C, D, E, F y G y la úlcera péptica puede ser una úlcera gástrica o una úlcera duodenal.

La administración de la toxina es por la ingestión oral de la toxina botulínica a un paciente con una úlcera péptica y la toxina botulínica se administra en una cantidad terapéuticamente efectiva. Una modalidad detallada de la presente invención puede abarcar un método para el tratamiento de una úlcera péptica por una ingestión oral por un paciente con una úlcera péptica de una cantidad terapéuticamente efectiva de una toxina botulínica de tipo A. La presente invención también abarca un método para el tratamiento de una enfermedad por reflujo gastroesof gico por la ingestión oral por un paciente con un trastorno de reflujo de ácido gástrico de una toxina botulínica. Una formulación oral de toxina botulínica dentro del alcance de la presente invención, puede comprender una toxina botulínica y un vehículo asociado con la toxina botulínica, por lo que se forma una formulación oral de toxina botulínica, en donde el vehículo se formula para liberar cantidades terapéuticas de la toxina botulínica en un tracto gastrointestinal de un paciente con una úlcera gástrica sin una respuesta del sistema inmune significativa. De preferencia, cantidades sustanciales de la toxina botulínica no tienen que transformarse en un toxoide botulínico antes de la asociación de la toxina botulínica con el vehículo. De esta manera, cantidades significativas de la toxina botulínica asociada con el vehículo tienen una toxicidad que sustancialmente no cambia con relación a la toxicidad de la toxina botulínica antes de la asociación de la toxina botulínica con el vehículo. Además, en tal formulación, el vehículo puede comprender una sustancia biocompatible, biodegradable seleccionada del grupo que consiste de harina, azúcar y gelatina. La toxina botulínica asociada con el vehículo puede estar entre aproximadamente 1 unidad y aproximadamente 10,000 unidades de la toxina botulínica. Una formulación oral detallada dentro del alcance de la presente invención puede comprender una toxina botulínica que tiene: un primer elemento que comprende un elemento de unión capaz de unirse específicamente a un receptor de superficie celular neuronal bajo condiciones fisiológicas; un segundo elemento que comprende un elemento de translocación capaz de facilitar la transferencia de un polipéptido a través de una membrana celular neuronal, y; un tercer elemento que comprende un elemento terapéutico, cuando está presente en el citoplasma de una neurona, capaz de inhibir la exocitosis de la acetilcolina de la neurona. Una modalidad alternativa dentro del alcance de la presente invención puede comprender una toxina botulínica de tipo ? y un vehículo asociado con la toxina botulínica de tipo A, por lo que se forma una formulación oral de toxina botulínica, en donde el vehículo se formula para liberar cantidades terapéuticas de la toxina botulínica de tipo A en un tracto gastrointestinal de un paciente con úlcera gástrica sin una respuesta del sistena inmune significativa, y en donde el vehículo comprende una sustancia biocompatible, biodegradable seleccionada del grupo que consiste de harina, azúcar y gelatina. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se basa en el descubrimiento de que una úlcera péptica puede tratarse exitosamente con una formulación oral de una toxina botulínica. La presente invención también se basa en el descubrimiento de que la enfermedad por reflujo gastroesofágico puede tratarse con una formulación oral de una toxina botulínica. De esta manera, se ha descubierto que la ingestión de una toxina botulínica, tal como una toxina botulínica de tipo A, mezclada con un vehículo apropiado que se disuelve en el estómago o el intestino superior, permite la liberación de cantidades terapéuticas de una toxina botulínica bioactiva hacia y en la vecindad de una úlcera péptica. Esto permite una reducción de las secreciones gástricas o dañinas desde la vecindad de la úlcera péptica. Por lo regular, dentro de unos cuantos días posteriores, la úlcera muestra signos inconfundibles de cicatrización (remisión de la úlcera) y la úlcera puede curarse completamente dentro de unas cuantas semanas después de la administración de la formulación de la toxina botulínica oral. Además, se ha descubierto que dentro de unos cuantos días después de la administración oral de la toxina, los síntomas de GERD se reducen debido a una reducción de las secreciones gástricas debido a la toxina botulínica administrada oralmente. Los efectos secundarios pueden incluir una reducción de la motilidad de los músculos gastrointestinales y la pérdida transitoria de peso. El descubrimiento de que una toxina botulínica administrada oralmente puede usarse para tratar una úlcera péptica y/o GERD es sorprendente porque se ha reportado que la inyección de una toxina botulínica en el esfínter esofágico inferior para el tratamiento de acalasia puede resultar en realidad en la formación de úlceras en el esófago (Eaker, E.Y., et al., Untoward effects of esophageal botulinum toxin injection in the treatment od achalasia, Dig Dis Sci 1997 Apr; 42(4): 724-7). La dosis terapéutica de la toxina botulínica administrada oralmente es tal que hay efectos sistémicos insignificantes debido a cualquier toxina botulínica que se absorbe a través del recubrimiento del intestino en el sistema circulatorio. Así, 200 unidades de la toxina botulínica pueden inyectarse en . el esfínter pilórico (estómago inferior) de pacientes con gastroparesia diabética sin ninguna toxicidad sistémica consiguiente. Crowell, .D. et al., Botulinum toxin reduces pyloric dysfunction in patients with diabetic gastroparesis, Gastroenterology 2002 Apr; 122(4 Suppl 1): A451-A452. Aunque no hay evidencia de un efecto teratogénico por una toxina botulínica, los métodos dentro del alcance de la invención descritos en la presente no se pretende para la aplicación hacia o por una paciente que está embarazada, lactante o que pretende embarazarse durante el periodo de tratamiento. Sin desear ser vinculado con la teoría, un mecanismo fisiológico puede proponerse para la eficacia de la presente invención. De esta manera, es bien conocido que la toxina botulínica actúa sobre los nervios colinérgicos, incluyendo los del tracto gastrointestinal responsables de la motilidad de los músculos GI . Pasricha, P.J., Botulinum toxin for spastic gastrointestinal disorders, Bailliere's Clin Gastroenterol 1999; 13 (1) : 131-143. Además, la secreción de gastrina y la producción de HCl por las células parietales gástricas son fuertemente dependientes de la actividad colinérgica de las fibras vagales y mientéricas que actúan sobre las uniones neuroglandulares en el tracto gastrointestinal. Rossi S., et al., Immunohistochemical localization of SNAP-25 protein in the stomach of rat. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 2002,-365 (Suppl 2): R37. Además, el sustrato intracelular (SNAP-25) para la toxina botulínica de tipo A BTX-A está presente en las células de la pared estomacal. Gui D., et al., Effects of botulinum toxin on gastric emptying and digestive secretions . A possible tool for correction of obesity?, Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 2002 Jun,- 365 (Suppl 2): R22. Por último, es bien conocido que la formación de la úlcera es debido a o es contribuido a la secreción de gastrina excesiva por las células de la pared estomacal y la toxina botulínica. De esta manera, una formulación oral de una toxina botulínica puede usarse para tratar una úlcera péptica sub-regulando las secreciones ácidas excesivas en el estómago y permitiendo de esta manera que cicatrice una úlcera. Parece claro que una toxina botulínica administrada oralmente pueda permanecer bioactiva en el ambiente agresivo del tracto GI . De esta manera, la toxina botulínica se secreta por una bacteria clostridial como un complejo que comprende la molécula de la toxina de proteína simple de aproximadamente 150 kD rodeada por una cantidad de moléculas proteínicas sin toxinas. De manera significativa, las proteínas sin toxinas actúan para proteger la toxina de la hidrólisis ácida y la degradación enzimática durante el paso del complejo a través del tracto GI, de modo que el complejo de la toxina es capaz de sobrevivir a las condiciones severas de pH extremo y las enzimas proteolíticas y aún funcionar como una neurotoxina altamente potente. Se ha demostrado que las proteínas sin toxinas que se acomplejan con la molécula de la toxina botulínica actúan para proteger la molécula de toxina de 150 kDA en el tracto gastrointestinal de los ácidos digestivos. Hanson, M.A. et al., Stxuctural view of botulinum neuxotoxin In numerous functional states, capítulo 2, páginas 11-27 de editores Brin .F. et al. , Scientific and therapeutic aspects of botulinum Toxin, Lippincott, Williams & Wilkins (2002) . Un sistema de liberación de la toxina botulínica dentro del alcance de la presente invención es capaz de liberar una cantidad terapéutica de una toxina botulínica en el tracto GI de un paciente con una úlcera péptica, como se muestra en la Figura 1. La cantidad de la toxina botulínica liberada puede comprender (para una toxina botulínica de tipo A) tan poco como aproximadamente 10 unidades (es decir, para tratar una pequeña úlcera en un adulto mayor) . La cantidad de la toxina botulínica requerida para la eficacia terapéutica puede variarse de acuerdo con la potencia clínica conocida de los diferentes serotipos de la toxina botulínica. Por ejemplo, varios órdenes de magnitud requieren por lo regular más unidades de una toxina botulínica de tipo B para alcanzar un efecto fisiológico comparable con el alcanzado mediante el uso de una toxina botulínica de tipo A. La toxina botulínica liberada en una cantidad terapéuticamente efectiva por una formulación oral dentro del alcance de la presente invención es de preferencia, una toxina botulínica sustancialmente biológicamente activa. En otras palabras, la toxina botulínica liberada por la formulación oral descrita en el tracto GI de un paciente es capaz de unirse con alta afinidad a una neurona colinérgica, que es translocalizada, por lo menos en parte, a través de la membrana neuronal, y a través de su actividad en el citosol de la neurona para inhibir la exocitosis de la acetilcolina de la neurona. El propósito de la presente invención es permitir la liberación en el tracto GI de una toxina botulínica de una formulación oral para inhibir la exocitosis in vivo y, de esta manera, alcanzar un efecto terapéutico deseado, esto es, la cicatrización de una úlcera. La formulación oral se prepara de modo que la toxina botulínica se dispersa sustancialmente de manera uniforme en un vehículo biodegradable . El grosor de la formulación oral puede usarse para controlar la absorción de agua, y de esta manera la velocidad de liberación de una neurotoxina de una composición de la invención, liberando las tabletas más gruesas de las cápsulas el polipeptido más lentamente que las más delgadas . El vehículo está comprendido de preferencia de un material no tóxico, no inmunológico, biocompatible . La liberación de la neurotoxina biológicamente activa de una formulación oral de la presente invención resulta en una neurotoxina terapéuticamente efectiva, con niveles en suero despreciables, biológicamente activa. De preferencia, la liberación in vivo de la neurotoxina biológicamente activa en el tracto GI no resulta en una respuesta significativa del sistema inmune. La formulación oral de la neurotoxina de la invención puede formarse en muchas formas tales como una película, una pelotilla, un cilindro o disco. La dosificación específica por la formulación oral apropiada para la administración se determina fácilmente por un experimentado en el arte de acuerdo con los factores discutidos anteriormente. La dosificación también puede depender del tamaño de la masa de tej ido que va a tratarse o dernervarse, y de la preparación comercial de la toxina. Además, los estimados para las dosificaciones apropiadas en los humanos pueden extrapolarse a partir de las determinaciones de las cantidades de botulina requerida para la desnervación efectiva de otros tejidos. De esta manera, la cantidad de botulina A que se inyectará es proporcional a la masa y nivel de actividad del tejido que se tratará. En general, entre aproximadamente 0.01 unidades por kilogramo a aproximadamente 35 unidades por kg del peso del paciente de una toxina botulínica, tal como la toxina botulínica de tipo A, puede liberarse por la presente formulación oral para realizar efectivamente una cicatrización de la úlcera deseada. Menos de aproximadamente 0.01 U/kg de una toxina botulínica no tiene un efecto terapéutico significativo en un músculo, mientras que más de aproximadamente 35 U/kg de una toxina botulínica alcanza una dosis tóxica -de una neurotoxina, tal como una toxina botulínica de tipo A. La preparación cuidadosa de la formulación oral evita que cantidades considerables de una toxina botulínica aparezcan sistémicamente . Un intervalo de dosificación más preferido es de aproximadamente 0.01 U/kg a aproximadamente 25 U/kg de una toxina botulínica, tal como la formulada como BOTOX® . La cantidad real de U/kg de una toxina botulínica que se administrará depende de factores, tales como el grado (masa) y el nivel de la actividad del tejido que va a tratarse y de la ruta de administración elegida. La toxina botulínica de tipo A es un serotipo de la toxina botulínica de tipo A para el uso en los métodos de la presente invención.

De preferencia, una neurotoxina usada para practicar un método dentro del alcance de la presente invención es una toxina botulínica, tal como una de las toxinas botulínicas de serotipo A, B, C, D, E, F o G. De preferencia, la toxina botulinica usada en la toxina botulínica de tipo A, debido a su alta potencia en humanos, disponibilidad efectiva y seguridad conocida y uso eficaz para el tratamiento de los trastornos del músculo esquelético y el músculo liso cuando se administra localmente por inyección intramuscular. La presente invención incluye dentro de su alcance, el uso de cualquier neurotoxina que tiene un efecto terapéutico de larga duración cuando se usa para tratar una úlcera péptica. Por ejemplo, las neurotoxinas sintetizadas por cualquiera de las especies de la toxina que produce las bacterias de Clostridium, tales como Clostridium botulinum, Clostridium butyricxm y Clostridium beratti pueden usarse o adaptarse para el uso en los métodos de la presente invención. Además, todos los serotipos botulinicos A, B, C, D, E, F y G pueden usarse de manera ventajosa en la práctica de la presente invención, aunque el tipo A es el serotipo más preferido, como se explicó anteriormente. La práctica de la presente invención por el método descrito en la presente, puede causar que cicatrice una úlcera péptica y desaparezca.

La presente invención incluye dentro de su alcance: (a) complejo de neurotoxina así como una neurotoxina pura obtenida o procesada por el cultivo bacteriano, extracción de la toxina, concentración, conservación, secado por congelado y/o reconstitución y; (b) neurotoxina modificada o recombinante, esto es la neurotoxina que ha tenido uno o más aminoácidos o secuencias de aminoácidos eliminadas, modificadas o reemplazadas deliberadamente por los procedimientos de modificación de aminoácidos anímicos/bioquímicos conocidos o mediante el uso de las tecnologías recombinantes de la célula huésped/vector recombinante, así como los derivados o fragmentos de las neurotoxinas así sintetizados, e incluye las neurotoxinas como uno o más radicales blanco unidos para un receptor de superficie celular presente en una célula. Las toxinas botulínicas para el uso de acuerdo con la presente invención pueden almacenarse en la forma liofilizada o secada al vacío en recipientes bajo presión al vacío. Antes de la liofilización de la toxina botulínica, puede combinarse con los excipientes, estabilizadores y/o vehículos farmacéuticamente aceptables, tal como albúmina. El material liofilizado o secado al vacío puede reconstituirse con solución salina o agua. Los métodos para determinar la dosificación apropiada en general se determinan sobre una base de caso por caso por el médico asistente. Estas determinaciones son rutinarias para un experimentado en el arte (ver, por ejemplo, fíarrison's Principies of internal Medicine (1998) , editado por Anthony Fauci et al., 14th edition, publicado por McGraw Hill .

También, dentro del alcance de la presente invención está una formulación oral en la forma de una suspensión para la ingestión preparada suspendiendo las microesferas encapsuladas con la neurotoxina en un líquido apropiado, tal como solución salina fisiológica. EJEMPLOS Los siguientes ejemplos establecen composiciones y métodos específicos abarcados por la presente invención y no se pretende que limiten el alcance de la presente invención. Ejemplo 1 Método para elaborar una tableta de toxina botulínica para la ingestión oral Una toxina botulínica puede componerse como una formulación oral para la liberación del ingrediente activo de la toxina en el estómago o el duodeno. Esto se realiza fácilmente mezclando con un mortero y pistilo (a temperatura ambiente sin la adición de agua ni solución salina) 50 unidades de un polvo de la toxina botulínica liofilizada comercialmente disponible, tal como BOTOX® no reconstituido (ó 200 unidades de polvo DYSPORT®) con un vehículo biodegradable, tal como harina o azúcar. De manera alternativa, la toxina botulínica puede mezclarse por homogeneización o sonicación para formar una dispersión fina de la toxina pulverizada en el vehículo. La mezcla después puede comprimirse con una máquina de formación de tabletas (tal como la prensa de tabletas disponible en Scheu & Kniss, 1500 W. Orsby Ave, Louisville, KY 40210) para hacer una tableta que se puede ingerir. De manera alternativa, la toxina puede formularse con gelatina por las metodologías bien conocidas para hacer una tableta de gelatina que se puede ingerir. Ejemplo 2 Método para el tratamiento de una úlcera péptica Un hombre de 52 años presenta dolor con quemazón en el abdomen entre el esternón y el ombligo y él relata que el dolor a menudo se presenta entre comidas y en las primeras horas de la mañana. El paciente también se queja de náusea y pérdida de apetito. La endoscopia, complementada con rayos X con bario, confirma la presencia de una úlcera gástrica. La úlcera demuestra que es intratable con bloqueadores H2 así como con antibióticos a H. pylori . El paciente se trata mediante la administración de la formulación oral de la toxina botulínica del Ejemplo 1. De esta manera, el paciente ingiere una tableta de 50 unidades de tipo A durante cada uno de cuatro días. Dentro de dos semanas, los síntomas de una úlcera péptica han desaparecido y la endoscopia revela que no hay trazas de úlcera. Ejemplo 3 Método para el tratamiento de enfermedad por reflujo gastroesofágico Una mujer obesa de 62 años de edad se admite con síntomas de acedía, eructación casi continua, regurgitación, mal de garganta, dificultad para deglutir y tos. La inspección indica esofagitis y la manometría esofágica indica presión baja (esfínter esofágico inferior (LES, por sus siglas en inglés)) . La prueba de Bernstein para el reflujo de ácido gástrico es positiva. De esta manera, se hace un diagnóstico para la GERD. El paciente no ha tenido éxito en diferentes programas de pérdida de peso y regularmente ingiere chocolates y fuma abundantemente. No han sido efectivos los antiácidos y los bloqueadores del receptor H2 de histamina. El paciente se trata mediante la administración de la formulación oral de la toxina botulínica del Ejemplo 1. De esta manera, el paciente ingiere una tableta de tipo B de 2000 unidades durante cada uno de cuatro días. Dentro de dos semanas, los síntomas de GERD han desaparecido o se han reducido de manera sustancial . Las composiciones y métodos de acuerdo con la invención descritos en la presente tienen muchas ventajas, que incluyen las siguientes : 1. una formulación oral de la toxina botulínica puede usarse para proporcionar un tratamiento terapéuticamente efectivo de una úlcera péptica. 2. se reduce la necesidad del cuidado continuo del paciente . 3. se aumenta la comodidad evidente debido a la remoción de la necesidad de inyecciones. 4. se mejora la conformidad del paciente. Una ventaja de las presentes formulaciones orales para las neurotoxinas incluye la remisión de la úlcera a largo plazo . Todas las referencias, artículos, publicaciones y patentes y solicitudes de patentes citados en la presente se incorporan por referencia en sus totalidades. Aunque la presente invención se ha descrito en detalle con respecto a algunos métodos preferidos, son posibles otras modalidades, versiones y modificaciones dentro del alcance de la presente invención. Por ejemplo, pueden usarse efectivamente una amplia variedad de neurotoxinas en los métodos de la presente invención. Además, la presente invención incluye formulaciones orales en donde se administran concurrente o consecutivamente dos o más neurotoxinas, tales como dos o más toxinas botulínicas. Por ejemplo, la toxina botulínica de tipo A puede administrarse por una formulación oral hasta que se desarrolle una pérdida de la respuesta clínica o se neutralizan los anticuerpos, seguido de la administración por la formulación oral de una toxina botulínica de tipo B o E. De manera alternativa, una combinación de cualquiera de dos o más de los serotipos botulínicos A-G puede administrarse localmente para controlar el inicio y la duración del resultado terapéutico deseado. Además, los compuestos sin neurotoxina pueden administrarse antes de, simultáneamente con o subsecuente a la administración de la formulación oral de neurotoxina para proporcionar' un efecto de unión, tal como inicio mejorado o más rápido de la desnervación antes de que la neurotoxina, tal como una toxina botulínica, comience a ejercer su efecto terapéutico . La presente invención también incluye, dentro de su alcance, el uso de una neurotoxina, tal como una toxina de botulina, en la preparación de un medicamento como una formulación oral para el tratamiento de una úlcera péptica. Por lo tanto, el espíritu y alcance de las siguientes reivindicaciones no deberá limitarse a las descripciones de las modalidades preferidas establecidas a continuación. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (6)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : l. Uso de una toxina botulínica para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de una úlcera péptica.
2. 2. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la toxina botulínica se selecciona del grupo que consiste de toxinas botulínicas de los tipos A, B, C, D, E, F y G.
3. 3. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la úlcera péptica es una úlcera gástrica.
4. 4. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la úlcera péptica es una úlcera duodenal.
5. 5. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la toxina botulínica es una toxina botulínica de tipo A.
6. 6. El uso de una toxina botulínica para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de una úlcera péptica o enfermedad por reflujo gastroesofágico por la ingestión oral de1 medicamento .