AGONISTAS DEL ADRENOCEPTOR ALFA 2B O 2B/2C PARA TRATAMIENTO DE NEUR.ODEGENERACION
Campo de la invención La presente invención se refiere a métodos para la protección de las células nerviosas, particularmente aquellas del sistema nervioso central de los mamíferos, del daño debido a los ataques nocivos, incluyendo la toxicidad del glutamato y la apoptosis. Los métodos de la presente invención emplean agonistas selectivos del receptor adrenérgico alfa 2, para prevenir del daño y de la muerté a las células nerviosas, tales como aquellas observadas en la enfermedad de Parkinson y la enfermedad de Alzheimer. Antecedentes de la Invención La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas, y particularmente a composiciones farmacéuticas que incorporan compuestos que son capaces de afectar los receptores adrenérgicos alfa 2. La presente invención también se refiere a métodos para el tratamiento de una amplia variedad de condiciones y trastornos, y particularmente a condiciones y trastornos asociados con la disfunción del sistema nervioso central. Los receptores adrenérgicos humanos son proteínas de membrana integral que han sido clasificados en dos clases amplias, los receptores adrenérgicos alfa y beta. Ambos tipos Ref.163005 tienen una función mediadora en la acción del sistema nervioso simpático periférico durante la aglutinación de las catecolaminas, norefinefriña y epinefrina. La norepinefriña es producida por las terminaciones nerviosas adrenérgicas , mientras que la epinefrina es producida por la médula adrenal. La afinidad de aglutinación de los receptores adrenérgicos hacia estos compuestos forma una base de la clasificación: los receptores alfa tienden a aglutinarse a la norefinefriña más fuertemente que la epinefrina y mucho más fuertemente que las mismas se aglutinan al isoprotenerol del compuesto sintético. La afinidad de aglutinación preferida de estas hormonas es invertida para los receptores beta. En muchos tejidos, las respuestas funcionales, tales como la contracción de los músculos lisos, inducida por la activación del receptor alfa, son opuestas a las respuestas inducidas por la aglutinación del receptor beta. Consecutivamente, la distinción funcional entre los receptores alfa y beta fue destacada y refinada adicionalmente por la caracterización farmacológica de estos receptores de varias fuentes de mamíferoes y tejidos. Como resultado, los receptores adrenérgicos alfa y beta fueron subdivididos adicionalmente en los subtipos alfa 1, alfa 2, beta 1 , y beta 2. Adicionalmente, después de esto se ha reconocido que cada uno de estos receptores tiene un número de subtipos; por consiguiente,- el receptor alfa 2 humano puede ser dividido adicionalmente en los subtipos del receptor alfa 2A, alfa 2B y alfa 2C. Las diferencias funcionales entre los receptores alfa 1 y alfa 2 ha sido reconocida, y los compuestos que exhiben una aglutinación selectiva entre estos dos subtipos ya ha sido descrita. Por consiguiente, en WO 92/00073, la capacidad del enantiómero R(+) de la terazosina para aglutinarse selectivamente a los receptores del subtipo alfa 1 fue reportada. La selectividad de alfa l/alfa 2 de este compuesto se describe que es significativa a causa de que la estimulación agonista de los receptores alfa 2 se dice que inhibe la secreción de la epinefrina y norepinefriña, mientras que el antagonismo del receptor alfa 2 se dice que incrementa la secreción de estas hormonas. Por consiguiente, el uso de bloqueadores alfa-adrenérgicos no selectivos, tales como fenoxibenzamina y fentolamina, se dice que va a ser limitada por su inducción mediada por el receptor adrenérgico a2 de la concentración incrementada de catecolamina del plasma y las secuelas fisiológicas concomitantes (velocidad incrementada del corazón y contracción de los músculos lisos) . Es significativo que la selectividad de los compuestos llamados "alfa 1 selectivo" o "alfa 2 selectivo" haya estado basada tradicionalmente en los datos de ¾, la cual está limitada a la comparación de los afinidades de aglutinación a los receptores, y no compara las actividades biológicas reales en los receptores comparados . En contraste, un método para medir la selectividad del agonista del receptor alfa comprende el ensayo de RSAT
(Tecnología de Selección y Amplificación del Receptor) como se reporta en Messier et al, High Throughput Assays of Cloned Adrenergic, Muscarinic, Neurokinin And Neurotrophin Receptors in Living Mammalian Cells, Pharmacol . Toxicol . 76:308-11
(1995) y ha sido adaptado para su uso con los receptores alfa 2. Esta publicación es incorporada aquí para referencia. El ensayo mide una inhibición de pérdida de contacto mediada por el receptor que conduce a una proliferación selectiva de las células que contienen el receptor en una población mezclada de células confluentes. El incremento en- el número de células es evaluado con un gen marcador transfectado apropiado tal como la b-galactosidasa, la actividad de la cual puede ser medida fácilmente en un formato de 96 pozos. Los receptores que activan la proteína G, Gq, producen esta respuesta. Los receptores alfa2, los cuales normalmente se unen a Gi, activan la respuesta . de RSAT cuando son coexpresados con una proteína Gq híbrida que tiene un dominio de reconocimiento del receptor Gi, llamado Gq/i52. Véase Conklin et al, Substitution Of Three Amino Acids Switches Receptor Specificity Of Gqa To
That of Gja, Nature 363:274-6 (1993). Esta fuente de información es incorporada aquí para referencia. Varios agonistas del receptor adrenérgico alfa se ha reportado que son útiles para el tratamiento de una amplia variedad de condiciones y trastornos. Por consiguiente, los agonistas del receptor adrenérgico alfa tales como clonidina han sido descritos y utilizados como agentes hipotensivos sistémicos y oculares, como agentes útiles en el tratamiento por el retiro de los comportamientos adictivos tales como fumar y el abuso de las drogas, y como agentes antidisminorrea . Otro agonista del receptor adrenérgico alfa, la tizanidina, ha sido utilizado para el tratamiento de los síntomas de espasticidad en los pacientes de esclerosis múltiple por la reducción del tono muscular. Estos agentes también se ha reportado que tienen ciertas actividades analgésicas . Estos agentes, aunque son útiles, han sido importunados con efectos secundarios algunas veces serios incluyendo sedación, efectos cardiovasculares tales como hipotensión y la velocidad reducida del corazón, y el desvanecimiento, que han limitado su aplicabilidad para ciertas indicaciones. En particular, estos agentes tienden a tener curvas de respuesta de la dosis de sedación y terapéutica superpuestas, de tal modo que la actividad sedante empieza a ser apreciable a las mismas dosis que la aparición de la actividad terapéutica (por ejemplo, hipotensiva o analgésica) in vi o. Los compuestos tales como, sin limitación, clonidina, tizanidina, y dexmedetomidina han sido caracterizados en la literatura como "agonistas del receptor adrenérgico alfa 2", basado ampliamente en estudios de aglutinación. Véase también Hieble et al, J. Med Chem. 38:3415 (1 de septiembre de 1995); Ruffolo, et al, J. Med. Chem. 38: 3681 (15 de septiembre de 1995), ambas de las cuales son incorporadas por el presente para referencia aquí . Aunque es verdadero que estos agentes son agonistas del receptor alfa 2, generalmente no es apreciado que estos agentes también contienen cantidades significativas de actividad agonista del receptor alfa 1. Nada que tenga el efecto de tal actividad del receptor alfa 1 sobre la actividad de alfa 2 ha sido apreciado o conocido generalmente . En contraste, la brimonidina compuesta y sus derivados de 2-imidazolin-l-ilimino funcionalmente semejantes (como se describe posteriormente) son agonistas alfa 2 los cuales exhiben una actividad agonista marcadamente más grande hacia los receptores alfa 2 que hacia los subtipos del receptor de alfa 1. Adicionalmente, se sabe que estos compuestos son "agonistas pan" alphaz significando que poco o nada de selectividad funcional es observada en la estimulación de los subtipos del receptor alfa 2A, alfa 2B y alfa 2C. Recientemente, los compuestos selectivos o epecíficos para los subtipos del receptor alfa 2?, alfa 2B y/o alfa 2C, y ciertas ventajas de tales compuestos, han sido descritos. Así, por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos de América Nos. 6,329,369 y 6,313,172 y las solicitudes de patente U.S. co-poseídas, pendientes Nos. 09/778975, 09/794874 y 10/153328 describen tales compuestos, y su uso, para condiciones que incluyen dolor, espasticidad muscular; dolor; enfermedades neurodegenerativas, isquemia espinal y apoplejía; falta de memoria y cognición; psicosis, ansiedad y depresión; hipertensión; falla congestiva del corazón, isquemia cardiaca y congestión nasal. Estas referencias todas son incorporadas aquí para referencia en su totalidad. En estas patentes, los compuestos son considerados agonistas alfa 2B o alfa 2B/2C selectivos si esta diferencia del compuesto en la eficacia como un agonista del (de los) subtipo (s) del receptor alfa 2B o alfa 2B/2C comparada con la del subtipo del receptor alfa 2A es mayor que 0.3 y su eficacia en el subtipo del receptor alfa 2A es al menos aproximadamente 10 veces menos potente que en el subtipo del receptor alfa 2B y/o alfa 2C. Los trastornos del SNC son un tipo de trastorno neurológico. Varios trastornos del SNC pueden ser atribuidos a una deficiencia colinérgica, una deficiencia dopaminérgica, una deficiencia adrenérgica y/o una deficiencia serotonérgica . Los trastornos del SNC de presentación relativamente común incluyen demencia presenil (ataque inicial de la enfermedad de Alzheimer) , demencia senil (demencia del tipo de Alzheimer) , y el Parkinsonismo incluyendo la enfermedad de Parkinson. El fundamento del entendimiento de ahora de la enfermedad de Alzheimer está basada en la observación de que ciertas regiones del cerebro de las personas afectadas, tales como el hipocampo y la corteza cerebral, mostraron evidencia de uña pérdida de células nerviosas . Puesto que los investigadores de los años 1970 han reconocido que algunas de estas neuronas teñidas son colinérgicas - es decir, las mismas se comunican utilizando la acetilcolina neurotransmisora, las cuales son descompuestas finalmente por una enzima llamada acetilcolinesterasa . Véase, Jones, et al, Intern. J. Neurosci . 50:147 (1990); Perry, Br. Med. Bull . 42:63 (1986); y Sitaram, et al, Science 201:274 (1978). Los fármacos que llegaron a estar disponibles en la década pasada, tales como tacrina y donepezilo, son inhibidores de la acetilcolinesterasa. Mediante la descomposición de la acetilcolina, estos compuestos retardan el desarrollo de las etapas iniciales de la enfermedad de Alzheimer. Sin embargo, una vez que las neuronas colinérgicas se degeneran totalmente y ya no pueden producir el neurotransmisor de acetilcolina, estos fármacos llegan a ser inútiles . Además de notarse la pérdida de células nerviosas, los cerebros de los pacientes que sufren de la enfermedad de Alzheimer contienen característicamente grupos de proteínas. Estas acumulaciones ocurren en dos formas: aquellas encontradas dentro de las neuronas y aquellas encontradas en el espacio intercelular. Los grupos intracelulares son llamados enredamientos neurofibrilares, y parecen semejantes a pares de fibras enrolladas una alrededor de la otra en una hélice. Los análisis han mostrado que los enredamientos consisten de la proteína tau. Tau es significativa a causa de que la misma se aglutina a la tubulina, la cual es responsable de la formación del microtúbulo. El número de enredamientos neurofibrilares parece que se correlaciona con la severidad de la enfermedad. Los grupos o placas de proteínas intercelulares están compuestas de depósitos de proteína ß-amiloide. Las neuronas cercanas frecuentemente parecen hinchadas y deformadas, y las placas amiloides están acompañadas usualmente por microglia inflamatoria. La microglia, la cual es parte del sistema inmune del cerebro, puede estar presente en un intento para degradar y remover las neuronas dañadas o quizás las propias placas. Es poco claro si las neuronas en o cerca de estas placas funcionan normalmente, a causa de que la densidad de las placas solamente está correlacionada débilmente con la severidad de la demencia. Además, tales placas están presentes en la mayoría de la gente anciana, ya sea que las mismas tengan la enfermedad de Alzheimer o no. Sin embargo, su presencia extensa en el hipocampo y la corteza cerebral es específica para los pacientes de Alzheimer, y las mismas parecen largas antes que se hagan los enredamientos neurofibrilares . Las placas ß-amiloides contienen un fragmento de 42 aminoácidos de una proteína de membrana integral llamada proteína precursora ß-amiloide (BAPP) . Este fragmento es generado por una segmentación de dos etapas de la proteína de BAPP, primero por una proteasa llamada la secretasa ß y luego por la secretasa gamma. El producto de escisión normal de la secretasa ß y la secretasa gamma es un péptido de 40 aminoácidos, el cual, a diferencia del derivado de 42 aminoácidos, no parece que vaya a estar involucrado en el inicio o progreso de la enfermedad de Alzheimer. La enfermedad de Parkinson (PD) es una enfermedad neurodegenerativa debilitante, actualmente de etiología desconocida, caracterizada por temblores y rigidez muscular. Una característica de la enfermedad parece que involucra la degeneración de neuronas dopaminérgicas (es decir, las cuales secretan dopamina) , particularmente en las regiones de la substantia negra y tegmental ventral -del cerebro medio. Véase, Rinne, et al, Brain Res. 54:167 (1991) y Clark, et al, Br. J. Pharm. 85:827 (1985). La substantia negra está involucrada en la coordinación de las señales neurales para el movimiento y la postura. El área tegmental vental (VTA) del cerebro medio contiene neuronas que se proyectan a los sitios que incluyen la corteza prefrontal, el área del cerebro asociada con las funciones cognitivas más elevadas . Ciertos intentos se han hecho para tratar la PD. Un tratamiento propuesto para PD es SINEMET®, el cual es una tableta de liberación sostenida que contiene una mezcla de carbidopa y levodopa, disponible de The DuPont Merck Pharmaceutical Co . Otro tratamiento propuesto para PD es ELDEPRYL®, el cual es una tableta que contiene clorhidrato de selefilina, disponible de Somersert Pharmaceuticals, Inc. Otro tratamiento propuesto para PD es PARLODEL®, el cual es una tableta que contiene mesilato de bromocriptina, disponible de Sandoz Pharmaceuticals Corporation. Otro método para el tratamiento de PD y una variedad de otras enfermedades neurodegenerativas por medio de terapia con melanina ha sido propuesto en la Pat . U.S. No. 5,210,076 de Berliner et al. Sin embargo, ninguno de estos tratamientos parece que protege las neuronas de la muerte celular.
Breve Descripción de la Invención Aunque ya se sabe que ciertos compuestos, incluyendo ciertos agonistas adrenérgicos alfa tales como brimonidina, son capaces de proporcionar actividad neuroprotectora a las células ópticas y retínales y a las células nerviosas de la espina cuando se aplican tópicamente o se inyectan en el sitio del daño del nervio, hasta ahora no se había pensado que tales agentes podrían ser agentes efectivos para el tratamiento de las condiciones neurodegenerativas del cerebro, tales como la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson, puesto que no se había pensado previamente que los receptores alfa 2B y/o alfa 2C fueran abundantes en estas áreas del cerebro. Adicionalmente, aunque los agonistas del receptor adrenérgico alfa se ha mostrado que tienen actividades neuroprotectoras útiles cuando son administrados para el tratamiento tópico, los efectos sedantes de estos compuestos observados a las dosis terapéuticas han limitado severamente su utilidad como un asunto práctico para los agentes sistémicos o no tópicos. Los presentes Solicitantes han descubierto sorprendentemente que ciertos agentes adrenérgicos alfa son capaces, cuando son administrados sistémicamente, de proteger las células nerviosas de la substantia negra y el área tegmental ventral del cerebro. Además, estos agentes tienen una ventana terapéutica dramáticamente más amplia entre su actividad neuroprotectora y su actividad sedante que la mayoría de los agonistas adrenérgicos alfa caracterizados previamente . Entre esta clase de fármacos están varios derivados de quinaxolina que tienen actividad agonista alfa 2 los cuales fueron sugeridos originalmente como agentes terapéuticos por Danielewicz, et al, en las Pat. U.S. Nos. 3,890,319 y 4,029,792. Estas patentes describen compuestos como reguladores del sistema cardiovascular que tiene la siguiente fórmula:
en donde el grupo 2-imidazolin-2-ilamino puede estar en cualquiera de las posiciones 5, 6, 7 u 8 del núcleo de quinoxalina; x, y y z pueden estar en cualquiera de las posiciones 5, 6, 7 u 8 restantes y pueden ser seleccionados de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-5 , alcoxi de C1-5 o trifluorómetxlo; y R es un substituyente opcional en cualquiera de las posiciones 2 ó 3 del núcleo de quinoxalina y puede ser hidrógeno, alquilo de Ci_5 , o alcoxi de Ci_5. Los compuestos actualmente útiles pueden ser preparados de acuerdo con los procedimientos descritos en las Patentes Nos.
3,890,319 y 4,029,792. En Ocular Effects of a Relatively Selective Alpha-2 Agonist (UK-14, 304-18) in Cats , Rabbits and Monkeys, J. A. Burke, et al, Current Eye Rsrch., 5, (9), pp. 665-676 (1986) el derivado de quinoxalina mostrado posteriormente y que tiene el nombre genérico de brimonidina se mostró que va a ser efectiva en reducir la presión infraocular en los conejos, gatos y monos. Los compuestos en este estudio fueron administrados tópicamente a las córneas de los mamiferoes de estudio.
Brimonidina
Se sabe que el agonista del receptor alfa 2, la brimonidina, puede proteger las células neurales retínales, incluyendo las células fotorreceptoras y de los ganglios retínales, del daño en condiciones tales como glaucoma, retinitis pigmentosa, y la degeneración macular relacionada con la edad cuando se administran tópica o sistémicamente . En un primer aspecto, la presente invención está dirigida a métodos para el tratamiento de una condición neurodegenerativa del cerebro que comprende administrar al cerebro de un mamífero que tenga la necesidad del mismo, una cantidad efectiva terapéuticamente de un agonista del receptor adrenérgico alfa 2 selectivo. Cuando se utilice aquí, un "agonista del receptor adrenérgico alfa 2 selectivo" o un "agonista alfa 2 selectivo" significará un agente que tiene una relación de eficacia en un receptor alfa 2 con respecto a la eficacia en un receptor alfa 1 mayor que aquella provista por el agente de dexmedatomidina . Preferentemente la eficacia es al menos 12 veces más grande en un receptor alfa 2 que en un receptor alfa 1; aún más preferentemente la eficacia en el (los) receptor (es) alfa 2 es al menos 25 veces mayor que en un receptor alfa 1. En una modalidad, el agonista alfa 2 selectivo es un compuesto de 2-imidazolin-2-ilamino que tiene la estructura mostrada en la Estructura I, anterior. En una modalidad preferida, el agonista alfa 2 selectivo es brimonidina o sus sales. En otra modalidad, el agonista alfa 2 selectivo también es un agonista alfa 2B selectivo o alfa 2B/2C selectivo. Cuando se utilice aquí, un agonista alfa 2B o 2B/2C selectivo" o "agonista del receptor adrenérgico alfa 2B o 2B/2C selectivo" significa un compuesto que tiene al menos 10 veces (preferentemente al menos 50 veces, aún más preferentemente al menos 100 veces) mayor eficacia en el receptor alfa 2B, o en ambos de los subtipos del receptor alfa 2B y alfa 2C que en el subtipo del receptor alfa 2A. Preferentemente un compuesto "selectivo" es "específico", lo que significa que el compuesto tiene al menos 100 veces (preferentemente al menos 500 veces; aún más preferentemente al menos 1000 veces; todavía más preferentemente al menos 5000 veces) mayor eficacia en el (los) receptor (es) indicado (s) o en el (los) subtipo (s) del receptor que los mismos tienen en el (los) receptor (es) o en el (los) substipo(s) del receptor con los cuales los mismos están siendo comparados. La eficacia de un receptor o subtipo de receptor dado de acuerdo con la presente invención es determinada utilizando en procedimiento del ensayo de SAT descrito anteriormente . Los agonistas de alfa 2B y 2B/2C selectivos son de uso particular en los métodos de la presente invención. Los agonistas de alfa 2 selectivos exhiben un índice terapéutico mejorado debido a la disminución de la ED5'0 de tales compuestos (que conduce a un efecto terapéutico a una concentración inferior del fármaco) cuando se compara con compuestos semejantes que tienen la actividad del receptor alfa 1, sin cambio en la curva de respuesta de la dosis-sedación. Los agonistas alfa 2B o 2B/2C selectivos adicionalmente tienen una actividad sedante disminuida en virtud de la actividad del receptor alfa 2A reducida, el cual han descubierto los inventores que es responsable de la sedación y los efectos cardiovasculares tales como velocidad del corazón y presión sanguínea reducidas . Estos efectos son maximizados particularmente cuando los compuestos son específicos en lugar de solamente selectivos para su objetivo especificado . En otro aspecto, la presente invención está dirigida a métodos para la prevención de la muerte o degeneración de las células neurales que se proyectan hasta o desde una región del cerebro seleccionada del grupo que consiste de la substantia negra, el locus caeruleus y el área tegmental ventral que comprende la administración de un agonista del receptor adrenérgico alfa 2 selectivo a las células. En una modalidad, el agonista alfa selectivo también es un agonista alfa 2B selectivo o 2B/2C selectivo. Preferentemente, los agentes son específicos para su objetivo especificado. En todavía otro aspecto, la invención está dirigida a métodos para el tratamiento de una condición neurodegenerativa del cerebro que comprenden la administración al cerebro de un mamífero que tenga la necesidad del mismo, de una cantidad efectiva terapéuticamente de un agonista del receptor adrenérgico alfa 2 y un antagonista del receptor alfa 1. El uso de un antagonista del receptor alfa en conjunción con un agonista del receptor alfa 2 conducirá a un medicamento combinado que tiene actividad alfa 2 selectiva, logrando así las ventajas del uso como un agonista alfa 2 selectivo único. Véase la Solicitud de Patente U.S. No. 10/152,424, incorporada aquí para referencia. Este nuevo método es particularmente efectivo cuando se administra como un tratamiento profiláctico, es decir antes que el daño al nervio se haya llevado a cabo, o antes que el progreso a largo plazo del estado de enfermedad, tal como la enfermedad de Alzheimer o de Parkinson, se haya llevado a cabo. Sin desear que esté limitado a una teoría particular con respecto al papel que los compuestos de la presente invención desempeñan en la neuroprotección, los Solicitantes tienen la hipótesis de que los compuestos y métodos descritos pueden estimular la producción de ciertos factores de la familia de bel-2; la expresión incrementada de tales factores ha sido medida por la expresión incrementada del ARNm que codifica su producción; estos factores (bcl-2 y bcl-XL pueden suprimir el programa apoptotico. Estos factores pueden contrarrestar la presencia o inducción de los factores de apoptosis de bcl-2 tales como bad y bax que pueden ser producidos como resultado de provocaciones nocivas a las células nerviosas. Por consiguiente, se contempla además que los compuestos de la presente invención que proporcionan señales de supervivencia de la célula al nervio pueden ser utilizados ventajosamente en combinación con los compuestos que inhiben la muerte celular. Tales compuestos inhibidores de la muerte celular incluyen antagonistas de MDA, especialmente memantina, la cual bloquea los efectos excitotóxicos del glutamato en exceso, inhibidores de óxido nítrico sintetasa; depuradores de radicales libres y bloqueadores del canal de calcio. Cualquier método adecuado de administración del/de los presente (s) compuesto o compuestos útiles al mamífero que va a ser tratado, puede ser utilizado. En todos los métodos, el mamífero preferido es un ser humano. El método particular de administración elegida es preferentemente uno que permite que el compuesto o compuestos útiles actualmente tengan el efecto terapéutico deseado de una manera efectiva, por ejemplo, una concentración efectiva baja y una incidencia baja de efectos secundarios. La administración de los presentes compuestos útiles para su uso en los métodos de esta invención puede incluir, ' pero no está limitada a administración oral, parenteral, intravenosa, subcutánea y otros modos de administración sistémica. Los compuestos son administrados en una cantidad terapéuticamente efectiva ya sea solos o en combinación con un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable . Dependiendo del modo propuesto de administración, el compuesto o compuestos útiles actualmente pueden ser incorporados en cualquier forma de dosificación farmacéuticamente aceptable, tal como por ejemplo, tabletas, supositorios, pildoras, cápsulas, polvos, líquidos, soluciones, infusiones, suspensiones, emulsiones, aerosoles o semejantes, preferentemente las formas de dosificación adecuadas para la administración única de dosificaciones precisas, o formas de dosificación de liberación sostenida para administración controlada continua. Preferentemente, la forma de dosificación incluirá un excipiente farmacéuticamente aceptable y el compuesto o compuestos útiles actualmente y, además, puede contener otros agentes medicinales, agentes farmacéuticos, portadores, adyuvantes, etc . Para formas de dosificación sólida, los portadores sólidos no tóxicos incluyen, pero no están limitados a, grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, polialquilenglicoles , talco, celulosa, glucosa, sucrosa y carbonato de magnesio. Un ejemplo de una forma de dosificación sólida para llevar a cabo la invención es un supositorio que contiene propilenglicol como el portador. Las formas de dosificación que se pueden administrar farmacéuticamente, líquidas, pueden comprender, por ejemplo, una solución o suspensión de uno o más de los presentes compuestos útiles y adyuvantes farmacéuticos opcionales en un portador, tales como por ejemplo, agua, solución salada, dextrosa acuosa, glicerol, etanol y semejantes, para formar por medio de esto una solución o suspensión. Si se desea, la composición farmacéutica que va a ser administrada también puede contener cantidades menores de substancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes o emulsificantes , agentes amortiguadores del pH y semejantes. Los ejemplos típicos de tales agentes auxiliares son acetato de sodio, monolaurato de sorbitan, trietanolamina, acetato de sodio, oleato de trietanolamina, etc. Los métodos actuales de preparación de tales formas de dosificación ya son conocidas, o serán evidentes, para aquellos expertos .en .este arte; por ejemplo, véase Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 16/a. Edición, 1980, incorporada aquí para referencia. La composición de la formulación que va a ser administrada, en cualquier caso, contiene una cantidad de uno o más de los compuestos útiles actualmente en una cantidad efectiva para proporcionar el efecto terapéutico deseado. La administración parenteral está caracterizada generalmente por inyección, ya sea de manera subcutánea, intramuscular o intravenosa. Las substancias inyectables pueden ser preparadas en las formas convencionales, ya sea como soluciones o suspensiones líquidas, formas sólidas adecuadas para solución o suspensión en un líquido previo a la inyección, o como emulsiones o infusiones. Los excipientes adecuados son, por ejemplo, agua, solución salada, dextrosa, glicerol, etanol y semejantes. Además, si se desea, las composiciones farmacéuticas inyectables o infusionables que van a ser administradas también pueden contener cantidades menores de substancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes o emulsificantes , agentes amortiguadores del pH y semejantes. La cantidad del compuesto o compuestos útiles actualmente, por supuesto, depende del efecto o efectos terapéuticos precisos deseados, del mamífero específico que es tratado, de la severidad y naturaleza de la condición del mamífero, de la manera de administración, de la potencia y características farmacodinámicas del compuesto o compuestos particulares empleados, y del juicio del médico que hace la prescripción. En general, la dosificación efectiva terapéuticamente está preferentemente en el intervalo de aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 1 hasta aproximadamente 100 mg/kg/día. Descripción Detallada de la Invención Un aspecto la presente invención está dirigido con respecto a métodos para el tratamiento de una condición neurodegenerativa del cerebro que comprende la administración al cerebro de un mamífero que tenga la necesidad del mismo, de una cantidad efectiva terapéuticamente de un agonista del receptor adrenérgico alfa 2 selectivo. Con relación a la misma los Solicitantes han descubierto que los agonistas del receptor alfa 2 selectivo o específico tienen una eficacia inesperadamente incrementada sobre los compuestos que tienen una actividad agonista del receptor alfa 1. Los Solicitantes creen que la estimulación del receptor adrenérgico alfa 1 conduce a interferencia con la actividad neuroprotectora de tales agentes de tal modo que cualquier efecto sedante que tal agente pueda tener, tenga una EC50 semejante, o dentro de aproximadamente un intervalo de tres veces de la actividad neuroprotectora para tal compuesto. Por consiguiente, cualquier actividad neuroprotectora provista por tales agentes no selectivos, es observada a concentraciones que tenderán a sedar o ser tóxicas para el paciente. En parte por esta razón, los agentes alfa adrenérgicos no han sido utilizados generalmente como agentes neuroprotectores en el pasado, excepto en las aplicaciones tópicas o locales (tales como aplicaciones oftálmicas) en las cuales el agente no es administrado generalmente de manera sistémica. Además de los compuestos descritos aquí ya sea directamente o en virtud de las descripciones incorporadas de otra manera para referencia, otros tipos de compuestos que tienen actividad de alfa 2B o alfa 2B/2C, selectiva o específica, son descritos en las solicitudes de patente U.S. co-poseídas Nos. 09/794,874 y 10/153,328, ambas de las cuales son incorporadas aquí para referencia. Aunque no se desea que esté limitado por la teoría, los presentes solicitantes creen que la mayoría o la totalidad de la eficacia neuroprotectora de estos agentes es provista por la estimulación de los receptores alfa 2B y/o alfa 2C. El cerebro en general no se ha considerado que sea rico en receptores alfa 2B o 2C. Sin embargo, los solicitantes han encontrado que los agentes y métodos de la presente invención pueden proporcionar efectos neuroprotectores a las neuronas que se proyectan desde o hasta la substantia negra y el área tegmental ventral del cerebro, y se cree que estos efectos también pueden ser observados en las neuronas del locus caeruleus, las cuales se proyectan hacia la corteza. Por consiguiente, los agentes descritos aquí son útiles en el tratamiento de condiciones tales como la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson. Ejemplo 1 Métodos : Prueba de Campo Abierto- Cada mamífero es colocado en una caja de campo abierto, de plástico, clara, con dos hileras de foto-haces montadas sobre los lados para distinguir entre los movimientos horizontal (es decir distancia recorrida) y vertical (es decir, "hacia atrás"). Las condiciones ambientales son de intensidad baja de ruido e iluminación débil. Los movimientos de los mamíferoes dentro de la caja son medidos durante 5 minutos, y se calculan de los registros del número y tipo de "rupturas del haz" o los cruces del "foto-haz". Al final de la prueba de Campo Abierto, solamente las movimientos hacia atrás son contados, y clasificados ya sea como "soportados" o "no soportados". Los movimientos hacia atrás soportados son cuando los mamíferoes colocan al menos una pata delantera sobre la pared lateral de la caja cuando un movimiento hacia atrás es registrado. En un movimiento hacia atrás no soportado, el ratón está soportado solamente por las patas delanteras. Estos movimientos hacia atrás son distinguidos por registro en video. El número de movimientos hacia atrás no soportados es la medida más confiable de la pérdida de neurona de dopamina en esta prueba . Prueba dé Colgado de la Cola Los ratones son colgados por sus colas 3 veces cada uno, durante aproximadamente 10 segundos cada vez. Cada ratón es colgado por la base de su cola aproximadamente 30 cm arriba de la superficie de una mesa hasta que el ratón da vueltas ya sea a la izquierda o a la derecha. Una vuelta a la izquierda proporciona un valor de 0 y una vuelta a la derecha proporciona un valor de 1. La colocación de la pata delantera también es anotada durante el colgado de la cola. La colocación de las patas proporciona un valor de 4 puntos de la escala. Las patas extendidas, o aquellas colocadas arriba de la cabeza proporcionan un valor de 0. Las patas que son sujetadas o mantenidas contra el cuerpo proporcionan un valor de 3. Los valores de 1 ó 2 son asignados a etapas relativas entre los dos extremos . La colocación de las patas traseras también es evaluada como se indica posteriormente. Construcción de Nidos 4 ratones del mismo sexo de un grupo son colocados en una tina de plástico. Ocho tiras de toallas de papel son colocadas en una pila ..limpia en el frente de la tina. La construcción de nidos de toallas de papel es evaluada a las 24 horas, 48 horas, 72 horas y 96 horas siguiendo el tratamiento. Los valores son asignados como sigue: 0 = papel hecho trizas y formado en un nido completo con cubierta superior; 1 = papel hecho trizas y formado en un nido total sin cubierta superior, 2 = papel ligeramente desmenuzado y masticado y recolectado de manera floja en un área; 3 = papel ligeramente masticado sin recolección aparente,- y 4 = ninguna agrupación aparente .
Conteo de Neuronas Entre 55 y 60 días post-inyección de MPTP, los ratones son sacrificados utilizando sodio nembutol . Los cerebros de los ratones son perfusionados con solución salada amortiguada con fosfato seguido por solución fijadora de Lana (paraformaldehído y ácido pícrico) . Los cerebros son removidos y colocados en solución fijadora de Lana durante 7 a 10 días. Los cerebros son seccionados entonces coronalmente a 50 micrómetros utilizando un vibratomo. Y las secciones teñidas con un anticuerpo para tirosina hidroxilasa, la enzima limitadora de la velocidad en la síntesis de dopamina. La sección fue examinada entonces bajo el microscopio a una amplificación 100X. Se seleccionaron rebanadas del tejido (-2.9 mm y -3.6 mm posteriores a Bregma para el conteo de células en el SN y VTA. Estas secciones están en el punto medio de la mitad rostral y el punto medio de la mitad cauldual del SN, respectivamente. Cada célula etiquetada con TH que es claramente visible que tiene entre 2 y 6 neuritas se considera una neurona. Un conteo promedio total para cada mamífero es calculado de las cuatro secciones (trostral y caudal, izquierda y derecha). Un promedio es obtenido para las cuatro secciones. Los análisis separados son efectuados sobre los conteos de neuronas desde SN y VTA. Estos conteos son analizados utilizando un ensayo ANOVA de mediciones repetidas, seguido por las pruebas del efecto entre grupos utilizando el método de HSD de Fisher. Procedimiento Experimental Los ratones que reciben inyecciones sistémicas de la toxina de piridina l-metil-4-fenil-l, 2, 3, 6-tetrahidropiridina (MPTP) pierden selectivamente grandes números de neuronas dopaminérgicas en la substantia negra (SN) y el área tegmental ventral (VTA) . La pérdida de células de dopamina en el SN imita la condición clínica observada en la enfermedad de Parkinson. La pérdida de tales células en el VTA puede contribuir a los déficits cognitivos observados en la enfermedad de Parkinson y de Alzheimer, debido a estas proyecciones de neuronas en la corteza frontal . 50 ratones del tipo C57B1/B6 (8-12 semanas de edad) se deja que se aclimaten durante 12-14 días antes del uso experimental. Los ratones son asignados entonces aleatoriamente a los siguientes grupos: MPTP más vehículo DMSO; vehículo solo, MPTP más brimonidina (3mg/kg/día) , MPTP más AGN 197075 (3mg/kg/día) , y MPTP más AGN 196923 (3mg/kg/día) ) . La estructura de 197075 es como sigue:
y la información de la síntesis para este compuesto puede ser encontrada en la Patente US No.: 6,313,172. La estructura de 196923 es como sigue:
y la información sintética que se refiere a este compuesto puede ser encontrada en la solicitud de patente US número de serie 09/815,362, la cual comparte propiedad con este solicitud de patente. Tanto la patente 6,313,172 como la solicitud 09/815,363 son incorporadas por el presente para referencia como parte de esta solicitud de patente. En los ensayos descritos actualmente, cada ratón es provisto entonces a una prueba de Campo Abierto inicial y a una prueba de Colgado de la Cola. La prueba de Campo Abierto es el ensayo del comportamiento utilizado más frecuentemente de los ratones tratados con MPTP, y parece que va a ser sensible a la pérdida de entrada dopaminérgica desde la substantia negra. La prueba de Colgado de la Cola es sensible al daño estratial directo; la prueba de Construcción de Nidos es sensible a la pérdida de entrada estriatal desde la corteza frontal. Cuatro de los 5 grupos de ratones recibieron una infusión de un compuesto de prueba (o del vehículo que no contiene el compuesto) . Estas infusiones son administradas por medio de una mini-bomba osmótica implantada subcutáneamente durante un período de 14 días a un flujo de 0.25 microlitros/hora . Tres días después de la implantación de las bombas, los ratones son sometidos a las pruebas de Campo Abierto y de Colgado de la Cola, en compañía del grupo de los ratones de control, quienes no son implantados con las mini-bombas. Inmediatamente después de la pruebas, los ratones que contienen bombas fueron provistos con una inyección de 40 mg/kg de MPTP subcutáneamente. Todos los grupos son sometidos entonces a las pruebas de Campo Abierto y de Colgado de la Cola a los 10-12 días y a los 30-40 días después del tratamiento con MPTP. Las pruebas de Campo Abierto y de Colgado de la Cola son realizadas a los 50-55 días de tratamiento post-MPTP. Para todas las pruebas de comportamiento, los resultados son analizados primero utilizando ANOVA de mediciones repetidas, seguido por pruebas del efecto entre grupos utilizando el método de HSD de Fisher. Resultados Prueba de Campo Abierto Previo al tratamiento con MPTP no existe diferencia significativa entre los tres grupos en la distancia recorrida o el número de movimientos hacia atrás .
El grupo del vehículo es significativamente más activo que los controles a los 10 y 30 días post-tratamiento con MPTP . Los ratones tratados con brimonidina no mostraron alteración en este incremento de actividad; por consiguiente no existe diferencia significativa entre este grupo y el grupo del vehículo. El AGN 196923 reduce significativamente la cantidad de actividad (cuando se compara con el vehículo) , y estos ratones son indistinguibles del grupo de control. El grupo de AGN 197075 muestra una tendencia semejante en la misma dirección. Ningún compuesto de AGN es significativamente diferente del vehículo a los 30 días post-MPTP. El tratamiento con MPTP parece que provoca una reducción en el número total de movimientos hacia atrás a los 10 días post-MPTP. A los 30 días ya no existe efecto de MPTP sobre el movimiento hacia atrás total (cuando se compara con el grupo del vehículo) , y solamente una reducción ligera en el movimiento hacia atrás contra el grupo de control . A los 50-60 días del tratamiento post-MPTP, los ratones que recibieron AGN 197075 hacen significativamente más movimientos hacia atrás no soportados que los que reciben el vehículo. El grupo del vehículo hace un número más pequeño de movimientos hacia atrás no soportados que los ratones normales. No existe efecto ya sea de MPTP o de los compuestos sobre el movimiento hacia atrás soportado.
Prueba de Colgado de la Cola Ninguna diferencia significativa del grupo es observada en la prueba de colgado de la cola previo al tratamiento con MPTP, y ninguna es observada post-MPTP en las patas posteriores. MPTPO dañó significativamente las extensiones de las patas delanteras en todos los tres puntos del tiempo post-lesión. Por consiguiente, este daño no es invertido durante el transcurso del tiempo. AGN 197075 reduce significativamente este daño durante el periodo que el compuesto es administrado. AGN 196923 y brimodina no muestran tal tendencia. Sin embargo, los tres compuestos tienden a reducir el daño cuando se mide post-dosificación (es decir después de 14 días de la administración del compuesto) . Conteo de Neuronas En la substantia negra, los mamíferoes tratados con MPTP tienen 58% menos neuronas que los mamiferoes no tratados. Sin embargo, aquellos que recibieron la brimodinina, AGN 196923, o AGN 197075 tienen una pérdida significativamente menor de neuronas.
Grupo de Tratamiento Conteo Promedio de Neuronas (error estadístico) Control 60 (+ 5) Vehículo + MPTP 25 (+ 2) AGN 196923 + MPTP 35 (+ 2) AGN 197075 + MPTP 37 (+ 2) Brimodinina 32 (+ 1) En el área Tegmental Ventral, el MPTP se encontró que conduce a una reducción promedio de 28 % menos neuronas que en el grupo de Control . Cada uno de los compuestos de prueba (AGN 197075, AGN 196923 y brimodinina) redujo esta pérdida en un promedio de aproximadamente 10%. Los ejemplos anteriores ilustran una modalidad preferida de la invención, y no están propuestos para restringir el alcance de las mismas. La invención está definida por las reivindicaciones que concluyen esta especificación. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.