MXPA04011646A - Secuencias cdr3 de receptor de celula t y metodos para deteccion. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se relaciona generalmente con el campo de tratar enfermedades autoinmunes, tales como esclerosis multiples (MS), artritis reumatoide (RA) y otras. Se describen metodos para tratar y supervisar una enfermedad autoinmune utilizando peptidos receptores de celula T. Tambien se describen secuencias de acido nucleico y peptido de receptores de celula T encontrados en una poblacion de pacientes de MS.

Description

SECUENCIAS CDR3 DE RECEPTOR DE CÉLULA T Y MÉTODOS PARA DETECCIÓN CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona generalmente con el campo de tratamiento de enfermedad autoinmune, tal como esclerosis múltiple (MS) . Más particularmente, se relaciona con ácidos nucleicos y péptidos de receptor de célula T encontrados e algunos pacientes de MS, y métodos para detectar las secuencias. Además, la presente invención se relaciona con el uso de secuencias de péptido de receptor de célula T para el tratamiento de enfermedad autoinmune, tales como MS* ANTECEDENTES Los complejos de reconocimiento intercelular formados por receptores de célula T (TCR) en linfocitos T citotóxicos o células asistentes de T y complejos de MHC/péptido en células que presentan antigeno (APC) son un componente de reconocimiento común en un juego diverso de encuentros de célula-célula que activan el TCR tanto durante el desarrollo del repertorio de células T dentro de un organismo individual (selección positiva; selección negativa; supervivencia periférica) como durante el control (asistente de T) y etapas de efector (exterminador de T) de una respuesta inmune de adaptación. En la respuesta inmune de adaptación, los antigenos son reconocidos por moléculas hipervariables, tales como anticuerpos o TCRs, que se expresan con estructuras suficientemente diversas para ser capaces de reconocer cualquier antigeno. Los anticuerpos se pueden ligar a cualquier parte de la superficie de un antigeno. Los TCRs, sin embargo, están restringidos a percibir la presencia de antigenos que se ligan a péptidos cortos de los antigenos que se presentan sobre la superficie de APCs ligados a las moléculas clase í o clase II del complejo de histocompatibilidad mayor (MHC) . El reconocimiento de TCR de complejos de péptido/MHC disparan la activación (expansión clonal) de la célula T. Los TCRs son eterodímeros compuestos de dos cadenas que pueden ser ß (alfa-beta) o ?d (gamma-delta) . La estructura de los TCRs es muy similar a aquella de ínmunoglobulinas (Ig) . Cada cadena tiene dos dominios extracelulas, que son dobleces de inmunoglobulina . El dominio aminoterminal es altamente varilla y se llama el dominio variable (V) . El dominio más cercano a la membrana es el dominio constante (C) . Estos dos dominios son análogos a aquellos de ínmunoglobulinas, y se parecen a fragmentos de Fab. El dominio C de cada cadena tiene tres regiones de terminación de complementaridad (CDR) . Próxima a la membrana, cada cadena de TCR tiene una secuencia de conexión corta con un residuo de cisteína que forma un doblez de disulfuro entre ambas cadenas. La codificación de genes heterodimeros de ß y ?d solamente se expresa en el linaje de célula T. Las cuatro ubicaciones de TCR (a, ß, ?,, y d) tienen una organización de linea de germen muy similar a aquella de Ig. Las cadenas alfa y gamma se producen mediante redisposiciones de segmentos V y J, mientras que las cadenas de beta y delta se producen mediante redisposiciones de segmentos V, D, y J. Los segmentos de gene para cadenas de TCR están ubicados en diferentes cromosomas, excepto los segmentos de cadena delta que están entre los segmentos de gene V y J de la cadena alfa. La ubicación de los segmentos de cadena delta tiene un significado: una redisposición productiva de los segmentos de gene de cadena alfa omite los genes C de la cadena delta, de manera que en una celda determinada el heterodimero aß no se puede coexpresar con el receptor ?d. En ratones, hay aproximadamente 100 segmentos de genes Va y 50 Ja y solamente un segmento Ca. La familia de gene de cadena delta tiene aproximadamente 10 segmentos de gene V, 2 D y 2 J. La familia de gene de cadena beta tiene -30 segmentos V y dos repeticiones idénticas que contienen un ?ß, seis jp y un ?ß. Finalmente, la familia de gene de cadena gamma contiene 7 repeticiones V y tres repeticiones diferentes J-C. En los humanos la organización es similar a aquella de los ratones, pero el número de segmentos varia.

Las redisposiciones de segmentos de gene en cadenas alfa y beta son similares a aquella de Igs. La cadena alfa, como la cadena ligera de Ig se codifica por segmentos de gene V, J, y C. La cadena beta, como la cadena pesada de Ig, se codifica mediante segmentos de gene V, D, y J. Las redisposiciones de segmentos de gene de cadena alfa resultan en unión VJ y las redisposiciones de cadena beta resultan en unión de VDJ. Después de transcripción de genes redispuestos, procesamiento de RNA, y traslación, las cadenas alfa y beta se expresan enlazadas por un enlace de disulfuro en la membrana de células T. Los segmentos de gene TCR están flanqueados mediante secuencias de señal de reconocimiento (RSS) que contienen un heptámero y un nonámero con una secuencia interveniente de ya sea 12 nucleótidos (vuelta uno) o 23 nucle'ótidos (vuelta dos) . Como en igs, las enzimas codificadas mediante genes de activación de recombinación (FAG-1 y RAG-2) son responsables de los procesos de recombinación. RAG1/2 reconocen las RSS y unen segmentos V-J y V-D-J de la misma manera que en redisposiciones de Ig. Brevemente, estas enzimas cortan una hebra de ADN entre el segmento de gene y la RSS y catalizan la formación de una horquilla en la secuencia de codificación. La secuencia de señal se corta subsecuentemente. La junta de combinación de segmentos V y J en una cadena alfa y segmentos V, D y J en cadena beta produce un número grande de posibles moléculas, creando de esta manera una diversidad de TCRs. La diversidad también se logra en TCRs mediante junta alternativa de segmentos de gene. En contraste con Ig, los segmentos de gene beta y delta se pueden unir en formas alternativas. La RSS que flanquea los segmentos de gene en segmentos de gene beta y delta puede generar VJ y VDJ en la cadena beta, y VD, VDJ, y VDDJ en la cadena delta. Como e el caso de Ig, la diversidad también se produce por la variabilidad en la junta de segmentos de gene . Los lazos hipervariables del TCR conocidos como regiones de determinación de conplementaridad (CDRs) reconocen la superficie compuesta hecha de una molécula de MHC y un péptido enlazado. Los lazos CDR2 de alfa y beta hacen contacto solamente con la molécula MHC en la superficie de APC, mientras que los lazos CDR1 y CDR3 hacen tanto con el péptido como la molécula de MHC. Comparado con Ig, los TCRs tienen diversidad más limitada en el CDRl y CDR2. Sin embargo, la diversidad de CDR3 en TCRs es superior que aquella de Ig, debido a que los TCRs pueden unir más de un segmento D conduciendo a diversidad de junta aumentada. La patogenésis de un número de enfermedades autoinmunes se cree que es ocasionada por respuestas de célula T autoinmune de auto antigenos presentes en el organismo. No todas las células T auto reactivas se omiten en el timo, en contradicción con el paradigma de selección clonal. Aquellas células T con TC s para un espectro amplio de auto antigenos representan parte del repertorio de célula T normal y circular naturalmente en la periferia. No es claro por qué las células T auto reactivas se dejan, durante su evolución someterse a diferenciación en el timo y se acomodan en la periferia. Mientras que su papel fisiológico no se entiende, estas células T auto reactivas, cuando se activan, presentan un riesgo potencial en la inducción de patologías autoinmunes . Las células T auto reactivas también se pueden aislar de individuos normales sin las consecuencias de enfermedades autoinmunes. Se ha establecido que el reconocimiento de antígeno de auto reactividad en sí no es suficiente para mediar el proceso auto destructor. Uno de los requisitos previos para que las células T auto reactivas sean patógenas es que se deben activar. Las células T auto reactivas se indican en la patogenésis de enfermedades autoinmunes, tales como esclerosis múltiples (MS) y artritis reumatoide (RA) . La patogenésis de células T auto reactivos en MS se retiene generalmente para elevar las respuestas de célula T a antígenos de lelina, en particular proteína básica de mielina (MBP) . Las células T reactivas a MBP se encuentra que se someten a activación en vivo, y ocurren a una frecuencia de precursor superior en sangre y fluido cerebroespinal en pacientes con MS en oposiciones con individuos controlados. Estas células T reactivas de MBP producen citoquinas Thl, v.gr., IL-2, TNF, y gamma-interferón, que facilitan la migración de células inflamatorias hacia el sistema nervioso central y exacerban las respuestas inflamatorias destructivas de mielina en MS. Las células T reactivas de MBP también han mostrado que están involucradas en la patogénesis de encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) en animales, que se parece a la esclerosis múltiple. La EAE se puede inducir activamente en animales susceptibles inyectando MBP emulsionado en un adyuvante o pasivamente inyectando lineas de célula T reactivas de MBP y clones derivados de animales sensibilizados con MBP. Cuando se activan in vitro, se requieren números muy pequeños de células T reactivas de MBP para inducir EAE, mientras que 100 veces más de células T restantes con la misma reactividad son incapaces de mediar las enfermedades. Se ha demostrado que la vacuna con células T reactivas de MBP inactivadas agota las células T reactivas de MBP en EAE, un procedimiento llamado vacunación de célula T, que se ha utilizado para prevenir y tratar EAE. Ben-Nun y col., Nature 292: 60-61 81981). Aún cuando el mecanismo que yace bajo la vacunación de célula T no se entiende completamente, se cree que involucra las redes reguladoras idiotipicas a través de interacciones con el TCR y las respuesta de célula T llamadas anti ergotipicas que reaccionan probablemente con los marcadores de activación de célula T. Las redes reguladoras idiotipicas y anti-ergotípicos se cree que son esenciales para la inmunidad protectora inducida por la vacunación de célula T, debido a que la inmunidad protectora conferida por vacunación de célula T es especifica para la enfermedad que las células T autoinmunes usadas para vacunación son capaces de inducir.

Además, las células T anti idiotipicas aisladas forman roedores inmunizados específicamente reconocen los clones/líneas de célula T de inmunización, pero no las células T que expresan particularidades estructurales de TCR distantes. Se cree que los determinantes de TCR reconocidos por células T anti idiotipicas más probablemente residen dentro de CDR3 o CDR2, como se predijo por diversidad de secuencia característica dentro de estas regiones. En EAE, las células T reactivas de MBP encefalitogénicas se restringen a epítopes muy limitados en MBP. Estas restricciones en la diversas de respuestas de célula T patógenas permiten intervención inmune específica. Diversas estrategias terapéuticas se han diseñado consecuentemente para dirigir la región ?ß del TCR al prevenir el desarrollo de EAE en animales sensibilizados.

Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales se han dirigido al producto de gene ?ß y vacunas de péptido se han basado en la región CDR2 del gene ?ß responsable. Algunos de los estudios sobre EAE se han extendido a enfermedades autoinmunes humanas. Por ejemplo, un péptido correspondiente a TCR ?ß 5.2 se ha utilizado en pruebas clínicas para tratar pacientes con MS y un péptido ?ß 14 se ha utilizado para vacunar pacientes con RA. La Patente de E.U.A. No. 5,614,192 (Vandenbark) describe el tratamiento de enfermedades autoinmunes mediante el uso de pépticos TCR inmunogénicos de 15 a 30 aminoácidos que comprenden cuando menos parte de CDR2. La Patente de E.U.A. No. 6,303,314 (Zhang) describe el tratamiento de enfermedades autoinmunes utilizando ciertos péptidos de TCR inmunogénicos en combinación con péptidos de marcador de activación de célula T inmunogénicos. Una área en la que la vacunación con péptidos de TCR se puede mejorar es determinan qué, si los hay, motivos comunes se encuentran en los TCRs auto reactivos de un paciente con una enfermedad autoinmune tal como MS. Estos motivos comunes se pueden utilizar ya sea como una base para una vacuna de péptico para activar una respuesta inmune anti idiotípica en pacientes de MS para el propósito de agotar las células T que tienen TCRs que comprenden dichos motivos, o como una meta para la preparación de anticuerpos que pueden bloquear funcionalmente o agotar directamente las células T que tienen TCRs que comprenden dichos motivos. Por lo tanto, es deseable determinar las secuencias de aminoácido de motivos comunes específicamente encontrados en los TCRs de células T auto reactivas de pacientes con enfermedades autoinmunes. También es deseable poder detectar fácilmente dichos motivos en una muestra de paciente mediante un método conveniente, tal como PCR. Además, es deseable utilizar péptidos idénticos a o derivados de los motivos detectados para tratar pacientes con la enfermedad autoinmune. También es deseable utilizar anticuerpos que se ligan específicamente a dichos motivos para tratar a un paciente con una enfermedad autoinmune. La Patente de E.U.A. No. 6,303,314 (Zhang) describe dicho motivo común encontrado en los TCRs de un sujeto de células T ?ß 13.1, el "motivo LOGRAGL Y", que tiene la secuencia de aminoácido Leu Gly Arg Ala Gly Leu Thr Tyr (SEQ D NO: 10), así como un método para su fácil detección mediante PCR. Este motivo se encuentra en algunos TCRs de algunas células T auto reactivas que reconocen aminoácidos 83-99 de MBP (a continuación "MBP83-99") . Los péptidos basados en el motivo LGRAGLTY se pueden utilizar para vacunar a algunos pacientes a fin de tratar o prevenir las enfermedades autoinmunes con las que está asociado V(313.1-LOGRAGLTY (v.gr. , MS) .

Como el motivo LGRAGLTY está presente solamente en algunos TCRs que reconocen MBP83-99, permanece la necesidad de identificar otras secuencias de TCR y más particularmente secuencias de CDR comúnmente expresadas por células T reactivas de MBP. Además, existe la necesidad de poder detectar otras secuencias de TCR, incluyendo secuencias de CDR, que se expresan comúnmente mediante células T reactivas de MBP. Finalmente, existe la necesidad de desarrollar tratamientos para enfermedades autoinmunes asociadas con otras secuencias de TCR y, más particularmente secuencias de CDR. DESCRIPCIÓN DETALLADA Para ayudar en el entendimiento de la presente invención, se definen abajo varios términos. "PCR" significa la reacción de cadena de polimerasa, por ejemplo, como se describe generalmente en la Patente de E.U.A. No. 4,683,202 (expedida el 28 de julio de 1987 a Mullís), que se incorpora en la presente por referencia. PCR es una técnica de amplificación en donde oligonucleótidos seleccionados, o imprimadores, se pueden híbridizar a plantillas de ácido nucleico en presencia de un agente de polimerización (tal como polimerasa de DNA o RNA) o trifosfatos de nucleótido, mediante lo cual se pueden formar productos de extensión de los imprimadores . Estos productos pueden luego desnaturalizarse y utilizarse como plantillas en una reacción de ciclos que amplifica el número y cantidad de ácidos nucleicos existentes que pueden facilitar su detección subsecuente. Una variedad de técnicas de PCR se conoce en el ramo y se pueden utilizar en conexión con la exposición en la presente. "Péptido" significa un péptido, ya sea natural, sintético, o una modificación del mismo, capaz de producir una respuesta inmune a una secuencia especifica de péptido o polipéptido . "Imprimador" significa un oligonucleótido, ya sea natural, sintético, o una modificación del mismo, capaz de actuar como un punto de inicio de síntesis de nucleótido suficientemente complementaria a una secuencia de nucleótido específica en una molécula de plantilla. "Sonda" significa un oligonucleótido, ya sea natural, sintético, o una modificación del mismo, capaz de ligarse específicamente a una secuencia de nucleótido suficientemente complementaria. "Derivado de," en el contexto de secuencias de nucleótido significa que la secuencia de nucleótido no está limitada a la secuencia específica descrita, sino también incluye variaciones en esa secuencia, que pueden incluir adiciones de nucleótido, omisiones, substituciones o modificaciones hasta el grado de que las variaciones a la secuencia descrita retienen la capacidad de ligarse específicamente al complemento de la secuencia descrita. En el contexto de secuencias de péptido o polipéptido, "derivado de" significa que el péptido o polipéptido no está limitado a la secuencia específica descrita, sino que también incluye variaciones en esa secuencia, que pueden incluir adiciones de aminoácido, omisiones, substituciones o modificaciones hasta el grado de que las variaciones en las secuencias enumeradas retienen la capacidad de producir una respuesta inmune a la secuencia descrita. "Inmunogénico", cuando se utiliza para describir un péptido o polipéptido, significa que el péptido o polipéptido es capaz de inducir una respuesta inmune, ya sea mediada por célula T, anticuerpo, o ambos. "Antigénico" significa que el péptido o polipéptido se puede reconocer e una forma libre por anticuerpos y/o en el contacto de moléculas de MHC en el caso de células T específicas de antígeno. "Enfermedad inmuno relacionada" significa una enfermedad en la que el sistema inmune está involucrado en la patogénesis de la enfermedad. Un su uego de enfermedades inmuno relacionadas son enfermedades autoinmunes. Las enfermedades autoinmunes incluyen, pero no están limitadas a, artritis reumatoide, miastenia grave, esclerosis múltiples lupus eritomatosa sistémica, tiroiditis autoinmune (Hashimoto's thyroiditis ) , enfermedad de Graves, enfermedad de intestino inflamatorio, uveoretinitis autoinmune, polimiositis, y ciertos tipos de diabetes. En vista de la presente exposición, uno experto en el ramo puede percibir fácilmente otras enfermedades autoinmunes tratables por las composiciones y métodos de la presente invención. "Enfermedad mediada por célula T" significa que enfermedad que se suscita como resultado de células T que reconocen péptidos normalmente encontrados en el organismo. "Tratamiento" o "tratar", cuando se refiere a protección de un animal de una enfermedad, significa prevenir, suprimir, reprimir, o eliminar completamente la enfermedad. Prevenir la enfermedad involucra administrar una composición de la presente invención a un animal antes del principio de la enfermedad. Suprimir la enfermedad involucra administrar una composición de la presente invención a un animal después de la inducción de la enfermedad, pero antes de su aparición clínica. Reprimir le enfermedad involucra administrar una composición de la presente invención a un animal después de la aparición clínica de la enfermedad. En un primer aspecto, la presente invención está dirigida a un péptido que comprende aproximadamente 4 a 20 aminoácidos de longitud, que comprende cuando menos 4 aminoácidos contiguos de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. El péptido también puede ser de aproximadamente 4 a 12 aminoácidos de longitud, comprendiendo ya sea (i) 4, 5, 6, o 7 aminoácidos contiguos de SEC ID NOS: 4 o 6, o secuencias derivadas de las mismas, (ii) 4, 5, 6, 7 u 8 aminoácidos contiguos de SEC ID NO: 5, o secuencias derivadas de la misma. El péptido también puede ser de a oximadamente 4 a 20 aminoácidos de longitud, que comprende las secuencias de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. El péptido puede ser natural, sintético o derivado de los mismos. El péptido se puede utilizar como un antigeno para producir una respuesta inmune a un péptido o polipéptido que comprende SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. Como se describe más completamente abajo, una respuesta inmune producida por el péptido se puede utilizar como una base para tratamiento, la producción de anticuerpos, la purificación de anticuerpos, y en ensayos de diagnóstico. El péptido se puede modificar covalentemente en un número de formas conocidas por aquellos experimentados en el ramo. Las cadenas laterales seleccionadas o residuos terminales del péptido se pueden modificar utilizando agentes de derivación comunes. Los residuos de cisteina se pueden hacer reaccionar con a-haloacetatos (y aminas correspondientes) , tales como ácido cloracético o cloroacetamida, para proporcionar carboximetilo o derivados de carboxiamidometilo . Los residuos de cisteina también se pueden derivar mediante reacción con bromotrifluoracetona, ácido cc-bromo-ß- (5-imidozoil) propiónico, fosfato de cloroacetilo, N-alquilmaleimidas, disulfuro de 3-nitro-2-piridilo, disulfuro de metil-2-piridilo, p-cloromercuribenzoato, 2-cloromercuri-4-nitrofenol, o cloro-7-nitrobenzo-2-oxa-l, 3-diazol. Los residuos de histidina se pueden derivar mediante reacción con el dietilprocarbonato de reactivo especifico a histidina a pH 5.5-7.0. El bromuro de para-brornofenacilo también se puede usar en cacodilato de sodio 0.1 M a pH 6.0. Los residuos terminales de lisina y amino se pueden hacer reaccionar con anhídridos de ácido succínico u otro carboxilico. La derivación con estos agentes puede tener el efecto de invertir la carga de los residuos de lisina. Otros reactivos para derivar residuos que contienen a-amino incluyen imidoésteres tales como picolinimidato de metilo; fosfato de piridoxal; piridoxal; clorohoborohidruro; ácido trinitrobencensulfónico; O-metilissurea; 2, 4-pentanodiona, y reacción catalizada con transaminasa con glioxilato. Los residuos de arginina se pueden modificar mediante reacción con uno o varios reactivos convencionales, entre ellos, fenilgioxal, 2, 3-butandiona, 1, 2-ciclohexandiona, y ninhidrina. La derivación de residuos de arginina se puede realizar en condiciones alcalinas debido al elevado pKa del grupo funcional de guanidina. Además, estos reactivos pueden reaccionar con los grupos de lisina asi como el grupo epsilon-amino de arginina. Los residuos de tirosina se pueden hacer reaccionar con compuestos de diazonio aromático o tetranitrometano . N-acetilimidizol y tetranitrometano se pueden utilizar para formar especies de tirosilo de O-acetilo y derivados 3-nitro, respectivamente. Los residuos de tirosina se pueden yodar utilizando 125I o 131I para preparar proteínas etiquetadas para uso en radioinmunoensayos . Los grupos laterales de carboxilo de ácido aspártico y ácido glutámico se pueden modificar mediante reacción con carbodiimidas (R' —N—C— —R' } tales como carbodiimida de l-ciclohexil-3- {2-morfilinil- (4-etilo) o carbodiimida de l-etíl-3 ( 4-azonia- , -dimetilpentilo) . Adicionalmente, residuos de aspartilo y glutamilo se pueden convertir en residuos de asparaginilo y glutaminilo mediante reacción con iones de amonio. Los residuos de glutaminilo y asparaginilo se pueden desamidar a los residuos de glutamilo y aspartilo correspondientes. Alternativamente, estos residuos se pueden desamidar bajo condiciones suavemente acídicas . La derivación del péptido con agentes bifuncionales puede ser útil para reticular el péptido a una matriz de soporte insoluble en agua o a otros portadores macromoleculares . Los agentes de reticulación comúnmente utilizados incluyen, pero no están limitados a 1, 1-bis (diazoacetil) -2-feniletano, glutaraldehido, ásteres de N-hidroxisuccinimida, ésteres con ácido 4-azidósalicílico, imidoésteres homobifuncionales, incluyendo ésteres de disuccinimidilo tales como 3, 3r-ditiobis (succinimilpropionato) , y maleimidas bifuncionales tales como N-maleimido-1 , 8-octano . Los agentes de derivación tales como metil-3- ( (p-azidofanil)ditio)propioimidato pueden proporcionar intermediarios fotoactivables que son capaces de reticularse en presencia de luz. Alternativamente, matrices insolubles en agua reactivas, tales como carbohidratos activados con bromuro de cianógeno y los substratos reactivos descritos en las Patentes de E.U.A. Nos. 3,969,287; 3,691,016; 4,195,128; 4,247,642; 4,229,537; y 4,330,440 se pueden emplear para inmovilización de proteina. El péptido también se puede modificar mediante hidroxilación de residuos de prolina y Usina, forforilación de grupos hidroxilo de residuos de serina o treonina, metilación de los grupos alfa-amino de cadenas laterales de lisina, arginina e histidina (T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecule Properties, W. H. Freeman & Col., San Francisco, pág. 79-86 (1983)), acetilación de amina N-terminal y, en algunos casos, amidación de grupos carboxilo C-terminales .

La derivación del péptido puede mejorar la solubilidad, absorción, vida media biológica, y lo semejante del péptido. La derivación también puede eliminar o atenuar cualquier efecto lateral no deseado del péptido y lo semejante, como se describen en Remington' s P armaceutical Sciences, 16a ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa. (1980), que se incorpora por la presente como referencia. La modificación química del péptido puede proporcionar ventajas adicionales bajo ciertas circunstancias, tales como aumentar la estabilidad y tiempo de circulación del péptido y aumentar la inmunogenicidad. Para más información sobre la derivación química de péptidos, ver la Patente de E.U.A. No. 6,350,730 (Friedman), que se incorpora por la presente en su totalidad. La inmunogenicidad del péptido se puede mejorar incluyendo el péptido en un péptido o polipéptido más largo o conjugando el péptido a portadores "inmunológicos", tales como CLH, albúmina de suero, toxoide de tétano, y lo semejante, usando técnicas de enlace convencionales. Una variedad de estos métodos se conoce en el ramo, v.gr., uso de agentes de condensación tales como diciclohexilcarbodiimida o uso de reticuladores, tales como aquellos comercialmente disponibles de Pierce Chemical Col., Rockford, 111. El péptido también se puede formular para administración intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, intravenosa, oral, nasal, rectal, bucal, intracisternal, itratecal, sublingual, pulmonar, tópica, transdérmica u otras rutas de administración. El péptido también se puede utilizar para activar células T con TCRs que se ligan específicamente a péptidos o polipéptidos que comprenden SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. Las células T se pueden obtener de un paciente con una enfermedad autoinmune utilizando cualquiera de un número de métodos conocidos en el ramo. Las células T también se pueden enriquecer para una subpoblación particular, tal como células T auto reactivas. Las células T aisladas luego se pueden estimular con el péptido in vitro, que puede activar y/o expandir el número de células T con TCRs que se ligan- específicamente a péptidos o polipéptidos que comprenden SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. Las células T activadas y/o expandidas luego se pueden administrar al paciente del que se derivaron las células T, mediante lo cual se pueden ligar a células T auto reactivas con TCRs que comprenden SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas, agotando de esta manera las células T auto reactivas. En un segundo aspecto, la presente invención está dirigida a un anticuerpo que se liga específicamente a un epítope que comprende una secuencia SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. El anticuerpo puede ser de clases IgG, IgM, IgA, I (gD e IgE, y fragmentos y derivados de las mismas, incluyendo Fab, f(ab')2, Fd, y anticuerpos de cadena sencilla (scFv) . El anticuerpo puede ser un anticuerpo monoclonal, anticuerpo policlonal, anticuerpo purificado por afinidad, o mezclas de los mismos, que exhibe suficiente especificidad de enlace a un epitope que comprende una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. El anticuerpo se puede derivar mediante la fijación de una o más fracciones químicas, de péptido o polipeptido conocidas en el ramo, como se describió arriba en el primer aspecto de la presente invención. El anticuerpo se puede identificar y aislar utilizando técnicas conocidas en el ramo, tal como presentación de fajo, como se describe en las Patentes de E.Ü.A. Nos. 5,565,332 (Hyoogenboom y col.), 5,858,657 (Winter y col.), 5,871,907 (Winter y col.), 5,969,108 (McCafferty y col.), y 6,172,197 (McCafferty y col.), todas las cuales se incorporan por la presente en su totalidad. El anticuerpo también se puede aislar de un mamífero incluyendo, pero no limitado a ratones, rata, cabra, conejo, oveja, porcino o bovino inmunizados con un antigeno capaz de producir una respuesta inmune a una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. El anticuerpo también puede ser un anticuerpo humano o humanizado, como se describe en las Patentes de E.U.A. Nos. 5,565,332 (Hoogenboom y col.) 5,858,657 (Winter y col,), 5,871,9071 (Winter y col.), 5,969,108 (McCafferty y col.), y 6,172,197 (McCafferty y col.), que se incorporan por la presente en su totalidad. Como se describe más completamente abajo, el anticuerpo se puede utilizar como una base para tratamiento o en ensayos de diagnóstico. El anticuerpo también se puede utilizar para el enriquecimiento o purificación de células T auto reactivas que tienen TCRs que comprenden una secuencia de SEC IB NOSr 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las-mismas . Células T auto reactivas enriquecidas o purificadas que tienen TCRs que comprenden SEC ID NOS: 4, 5 o 6yf o secuencias derivadas de las mismas, se pueden utilizar en una vacuna de célula T para un paciente con una enfermedad autoinmune de conformidad con la Solicitud de Patente expendiente de E.ü.A. No. 03-/952,532 (Eliang), que se incorpora por la presente en su totalidad. En un tercer aspecto, la presente invención está dirigida a un oligonucleótido que codifica un péptido o polipéptido que comprende un péptido de conformidad con la primera invención de ejemplo, o un fragmento del mismo. El oligonucleótido puede ser de aproximadamen e 15 a 30 nucleótidos de longitud, que comprende cuando menos 10 nucleótidos contiguos que codifican un fragmento de SEC ID NOSr 4re 5 o 6, las secuencias de nucleótido complementarias a las mismas, o secuencias derivadas de las mismas. El oligonucleótido también puede ser de aproximadamente 15 a 30 nucleótidos de longitud, que comprende ya sea (i) 11, 12, 13, 14, 15, 16", 17, 18 19 o 20 nucleótidos contiguos que codifican un fragmento de SEC ID NOS: 4 o 6, las secuencias de nucleótido complementarias a las mismas, o secuencias derivadas de las mismas, (ii) 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o 26 nucleótidos contiguos que codifican un fragmento de SEC ID NO: 5, la secuencia de nucleótido complementaria a la misma, o secuencias derivadas de la misma. El oligonucleótido también puede ser de aproximadamente 15 a 30 nucleótidos de longitud, comprendiendo una secuencia de nucleótido que codifica SEC ID NOS: 4, 5 o 6, las secuencias de nucleótido complementarias a las mismas, o secuencias derivadas de las mismas . Debido a la degeneración del código genético, un número de secuencias de nucleótido puede codificar el péptido del primer aspecto de la presente invención. Por ejemplo, el oligonucleótido puede ser de aproximadamente 15 a 30 nucleótidos de longitud, comprendiendo cuando menos 10 nucleótidos contiguos de SEC ID NOS: 1, 2 o 3, las secuencias complementarias a las mismas, o secuencias derivadas de las mismas. El oligonucleótido también puede ser de aproximadamente 15 a 30 nucleótidos de longitud, comprendiendo ya sea (i) 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleótidos contiguos de SEC ID NOS: 1 o 3, las secuencias complementarias a las mismas, o las secuencias derivadas de las mismas, (ii) 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o 26 nucleótidos contiguos de SEC ID NO: 2, las secuencias complementarias a la misma, o las secuencias derivadas de la misma. El oligonucleótido también puede ser de aproximadamente 15 a 30 nucleótidos de longitud, comprendiendo una secuencia de nucleótido de SEC ID NOS: 1, 2 o 3, las secuencias complementarias a las mismas, o las secuencias derivadas de las mismas. Como se describe más completamente abajo, el oligonucleótido se puede usar como imprimador para PCR» El oligonucleótido también se puede utilizar como una sonda para ligarse a, y también detectar, un gene TCR, o fragmento del mismo, que comprende una secuencia de nucleótido complementario o una secuencia de nucleótido derivada d la misma. El oligonucleótido se puede etiquetar con una fracción detectable. Muchos ejemplos de fracciones detectables se conocen en el ramo incluyendo, pero no limitado a 32P, 35S, biotina o digoxigenina . En un cuarto aspecto, la presente invención está dirigida a un par de imprimador que comprende un primer imprimador que es un oligonucleótido de conformidad con el tercer aspecto de la presente invención y un segundo imprimador que es un oligonucleótido de aproximadamente 15 a 30 nucleótidos de longitud que no comprenden una secuencia del primer imprimador y es un fragmento de la región de ?ß a CP del gene TCR en células T, o secuencias derivadas de la misma, en donde el primer y segundo imprimadores se ligan específicamente a hebras diferentes del gene TCR. El segundo imprimador puede ser complementario a una secuencia de la región tal que aproximadamente 400 pb, incluyendo la región Vp-D -jp del gene TCR, separado del primero y segundo imprimadores . Como se describe más completamente abajo, el par de imprimador se puede utilizar para amplificar una secuencia de nucleótido que codifica un TCR de una célula T humana que comprende la secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. En un quinto aspecto, un TCR que comprende una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de la misma,., se puede detectar en una muestra realizando u inmunoensayo que utiliza un anticuerpo de conformidad con el segundo aspecto de la presente invención. Mediante el término "inmunoensayo"", se da a entender que incluye inmunoensayos de emparedado simultáneo, emparedado hacia adelante y emparedado de reversa, que son bien entendidos por aquellos expertos en el ramo. La muestra que se va a probar para la presencia de un TCR que comprende una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de la misma, se puede aislar, directa o indirectamente, de cualquier tejido animal o humano que expresa genes de cadena beta de receptor de célula T, tales como células mononucleares de sangre periférica (PBMC) . En un sexto aspecto, un gene TCR que comprende una secuencia de nucleótido que codifica SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas (la "Secuencia de Meta"'), se puede detectar en una muestra amplificando un fragmento del gene TCR que comprende la Secuencia de Meta, en donde la amplificación se realiza utilizando un par de imprimador de conformidad con el cuarto aspecto de la presente invención. El fragmento de un gene de TCR que comprende la Secuencia de Meta que codifica SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de la misma, se puede amplificar mediante la reacción de cadena de polimerasa (PCR) utilizando cualquier técnica de PCR o equipo particular conocido en el ramo. Por ejemplo, la amplificación de PCR puede seguir un procedimiento en donde una mezcla de reacción se prepara que contiene los siguientes ingredientes: 5 uL lOxPCR tampón II (100 mM Tris-HCl, pH 8.3, 500 mM KC1), 3 uL 25 mM de MgCl2, 1 uL 10 mM mezcla de d TP, 0.3 uL de polimerasa Taq (5 U/ul) (AmpliTaq Gold, Perkin Elmer, Norwalk, Conn.), 30 pmol de un primer imprimador, 30 pmol de un segundo imprimador, y 1 uL de muestra de ADN. La polimerasa puede ser estable a temperaturas de cuando menos 95°C, tener una procesividad de 50-60 y tener un régimen de extensión mayor de 50 nucleótidos por minuto. La reacción de PCR se puede realizar con un perfil de amplificación de 1 min a 95°C (desnaturalización) , 20 seg a 56°C (recocido), y 40 seg a 72°C (extensión) para un total de 40 ciclos. Antes de que empiece el primer ciclo, la mezcla de reacción se puede someter a desnaturalización inicial durante un periodo de aproximadamente 5 min. a 15 min. De manera similar, después de que completa el ciclo final, la mezcla de reacción se puede someter a una extensión final durante un periodo de aproximadamente 5 min a 10 min. Ciertas reacciones de PCR pueden trabajar con tan pocos como 15 a 20 ciclos o tantos como 50 ciclos. Dependiendo de la reacción de PCR especifica, tiempos de incubación más prolongados o más cortos y temperaturas superiores o inferiores para cada paso del perfil de amplificación se pueden utilizar. L muestra que se va a probar para la presencia de un gene de TCR que comprende la Secuencia de Meta, puede ser un ácido nucleico, tal como ADN genómico, cADN, ADN previamente amplificado por PCR, o cualquier otra forma de ADN. La muestra se puede aislar, directa o indirectamente, de cualquier tejido animal o humano que exprese genes de cadena beta de receptor de célula T, tal como células mononucleares de sangre periférica (PBMC) . El ADN genómico se puede aislar directamente de un tejido que expresa genes de cadena beta de receptor de célula T. El cADN se puede aislar indirectamente mediante transcripción invertida de mRNA aislado directamente de un tejido que expresa genes de cadena beta de receptor de célula . La capacidad de detectar la presencia de un gene receptor de célula T que comprende una secuencia de nucleótido que codifica SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas, se puede mejorar aislando el ADN de muestra indirectamente mediante amplificación de ADN genómico, cADN, o cualquier otra forma de ADN, por una reacción de PCR de dos pasos. Por ejemplo, una primera reacción de amplificación de PCR se puede realizar para amplificar un fragmento preliminar que es mayor que, y comprende, un fragmento al que el primer y segundo imprimadores son capaces de ligarse selectivamente en hebras opuestas. Una segunda reacción de amplificación de PCR se puede realizar luego, utilizando el fragmento preliminar como una plantilla con el primero y segundo imprimadores, para amplificar un fragmento que comprende la Secuencia de Meta. Si cualquiera del primero o segundo imprimador se utiliza en la primera reacción de PCR para amplificar el fragmento preliminar, la segunda reacción de PCR es "semiestablecida" . Si ninguno del primero o segundo imprimador se utiliza en la primera reacción de PCR para amplificar el fragmento preliminar, la segunda reacción de PCR es "establecida"'.

En una reacción de PCR de dos pasos de ejemplo, un fragmento de un gene de TCR que comprende una secuencia de nucleótido que codifica SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas, se puede amplificar realizando una primera reacción de PCR que utiliza un primer imprimador preliminar que se recuece a la región ?ß del gene TCR y un segundo imprimador preliminar que se recuece a la región ?ß del gene TCR, que amplifica un fragmento preliminar que se extiende de ?ß a través de la junta Vp-Dp-Jp a CP, seguido por una segunda reacción de PCR que puede ser establecida o semiestablecida. En la luz de la presente exposición, el artesano experto será capaz de seleccionar imprimadores y condiciones de reacción apropiados para amplificación de PCR de un fragmento de un gene de TCR de células T que comprenden un nucleótido de secuencia que codifica SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. Después de la amplificación de un fragmento de un gene de TCR que comprende una secuencia de nucleótido que codifica SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas del mismo, el producto amplificado se puede detectar por un número de procedimientos. Por ejemplo, una alícuota de producto de amplificación se puede cargar hacia un gel de electroforesis, al que se aplica un campo eléctrico para separar moléculas de ADN por tamaño. En otro método, una alícuota de producto de amplificación se puede cargar hacia un gel manchado con verde SYBR, bromuro de etidio, u otra molécula que se ligará a ADN y emitirá una señal detectable. Un gel seco puede contener un oligonucleótido etiquetado de conformidad con el tercer aspecto de la presente invención, a partir del . cual se puede tomar una autorradiografía exponiendo el gel a película. En un séptimo aspecto de la presente invención, un equipo de prueba comprende un anticuerpo de conformidad con el segundo aspecto de la presente invención. El equipo de prueba se puede utilizar para ensayar una muestra para la presencia de un TCR, o un derivado del mismo, que comprende una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivados del mismo. El equipo de prueba también puede comprender uno o más anticuerpos adicionales que se ligan específicamente a un epítope de un TCR en células T auto reactivas. El TCR al que uno o más anticuerpos adicionales se ligan puede comprender o no comprender una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas del mismo. Como una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6 o secuencias derivadas de las mismas, está presente solamente en algunos TCRs, puede comprobar ser benéfico utilizar anticuerpos que se ligan a otras secuencias de TCR y más particularmente otras secuencias de CDR. El equipo de prueba también puede comprender además uno o más reactivos que se pueden utilizar en la detección de un TCR, o derivado del mismo, que comprende una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. El reactivo puede ser un tampón, un control positivo, un control negativo, o combinaciones de los mismos. El control positivo puede ser una secuencia de péptido o polipéptido que comprende una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de la misma. El control negativo puede ser una secuencia de péptido o polipéptido que comprende una secuencia que no comprende una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de la misma. En un octavo aspecto de la presente invención, un equipo de prueba comprende un primer imprimador que es un oligonucleótido de conformidad con el tercer aspecto de la presente invención. El equipo de prueba también puede comprender un primer y segundo imprimador, que es un par de imprimador de conformidad con el cuarto aspecto de la presente invención. El equipo de prueba también puede comprender además uno o más reactivos que se pueden utilizar en la amplificación de un fragmento de un gene de TCR que comprende una secuencia de nucleótido que codifica SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. El reactivo puede ser un tampón, trifosfatos de desoxinucleótido, polimerasa de ADN estable al calor, un control positivo, un control negativo, o combinaciones de los mismos. La polimerasa de ADN estable al calor puede ser una polimerasa Taq. El control positivo puede ser una secuencia de nucleótido que comprende una secuencia de nucleótido que codifica SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. El control negativo puede ser una secuencia de nucleótido que no comprende una secuencia de nucleótido que codifica SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. El equipo de prueba también comprender un oligonucleótido etiquetado como se describe en el tercer aspecto de la presente invención. Otros reactivos que se pueden incluir en el equipo de prueba se conocen por uno experimentado en el ramo. En un noveno aspecto, un paciente con una enfermedad autoinmune puede ser diagnosticado obteniendo una muestra de un paciente, y ensayando la muestra para la presencia de células T auto reactivas que comprenden un TCR que comprende una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. La muestra se puede enriquecer para células T, células T auto reactivas, o células T MBP83-99. La enfermedad autoinmune en la que los TCRs que comprenden una secuencia de péptido de SEC ID NOS: 4, 5 o y, o secuencias derivadas de las mismas, se encuentran en las células T. La enfermedad autoinmune se puede diagnosticar comparando el nivel de células T que comprenden TCRs que comprenden una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas, con el nivel de las células T de controles. El nivel de células T se puede determinar detectando la presencia de TCRs que comprenden una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas, en un inmunoensayo de conformidad con el quito aspecto de la presente invención. El nivel de células T también se puede determinar detectando la presencia de un ácido nucleico que codifica una secuencia que comprende SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas, utilizando PCR de la manera descrita en el sexto aspecto de la presente invención. En un décimo aspecto, una enfermedad autoinmune se puede tratar en algunos pacientes con células T auto reactivas que comprenden TCRs que comprenden una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas, administrando una vacuna que comprende una cantidad inmunogénicamente efectiva de un péptido de conformidad con el primer aspecto de la presente invención. La administración de la vacuna puede conducir a una respuesta inmune, en donde el paciente puede desarrollar anticuerpos y que también induce una respuesta de célula T que reconoce y se enlaza a los TCRs que comprenden una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas, que pueden conducir al agotamiento de las células T auto reactivas . La vacuna puede comprender el péptido solo, o en combinación con cantidades inmunogénicamente efectivas de otras secuencias de péptido TCR, particularmente otras secuencias de CDR. Los estudios clínicos indican que pacientes autoinmunes que reciben vacuna de célula T autóloga pueden mostrar una declinación gradual en la inmunidad, contra células T reactivas de MBP. En algunos casos, las células T auto reactivas que reaparecen se originan de diferentes poblaciones clónales, sugiriendo que las células T reactivas de MBP se pueden someter a desplazamiento clonal o dispersión de epítope asociado potencialmente con el proceso de enfermedad en desarrollo. El desplazamiento clonal o dispersión de epítope puede ser un problema en enfermedades autoinmunes mediadas por células T auto reactivas. Una vacuna que comprende múltiples péptidos antígenos capaces de inducir una respuesta inmune a TCRs en poblaciones múltiples de células T auto reactivas puede evitar problemas con desplazamiento clonal o dispersión de epítope. Debido a que los TCRs que comprenden una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas, así como otras secuencias de TCR, particularmente secuencias de CDR, pueden estar presentes en ambos pacientes que sufren de una enfermedad autoinmune e individuos normales que no sufren de la enfermedad, una vacuna que comprende un péptido o combinación de péptidos capaces de producir una respuesta inmune a epítopes en TCRs, particularmente CDRs y más particularmente CDR3, pueden ser capaces de ser administradas a ambos pacientes con una enfermedad autoinmune e individuos normales. Otras secuencias de péptido pueden incluir el motivo LGRAGLTY (SEC ID NO: 7) y secuencias de CDR descritas en la Patente de E.U.A. No. 5,614,192 (Vandenbark) . La vacuna puede comprender además un péptido marcador de activación de célula T. El péptido marcador de activación de célula T puede ser un péptido marcador como se describe en la Patente de E.U.A. N. 6,303,314 (Zhang), que se incorpora en la presente por referencia. La vacuna también puede comprender además uno o más reactivos que se pueden utilizar para mejorar la respuesta inmune al inmunógeno. El reactivo puede ser un tampón, adyuvante o una combinación de los mismos. El adyuvante puede ser un adyuvante basado en quitosán, de conformidad con la Patente de E.U.A. No. 5,980,912 (Podolski), que se incorpora por la presente por referencia en su totalidad. En un aspecto décimo primero, una enfermedad autoinmune se puede tratar en algunos pacientes con TCRs que comprenden una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas, administrando una composición que comprende un anticuerpo de conformidad con el segundo aspecto de la presente invención. La administración de la composición puede conducir a agotamiento de TCRs que comprenden una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. La composición puede comprender el anticuerpo solo, o en combinación con otros anticuerpos que se ligan específicamente a otras secuencias de TCR, particularmente otras secuencias de CDR. Como se discutió arriba, la progresión de una enfermedad autoinmune puede incluir desplazamiento clonal o dispersión de epítope de células T auto reactivas. Una composición que comprende múltiples anticuerpos en donde cada anticuerpo se liga específicamente a un epítope diferente de TCRs, particularmente un CDR, en poblaciones múltiples de células T auto reactivas puede evitar problemas con desplazamiento clonal o dispersión de epítope . Debido a que los TCRs que comprenden una secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de la misma, así como otras secuencias de TCR, particularmente secuencias de CDR, pueden estar presentes en ambos pacientes que sufren de una enfermedad autoinmune e individuos normales que no sufren de la enfermedad, una composición que comprende un anticuerpo o combinación de anticuerpos que se ligan específicamente a epítopes en TCRs, particularmente CDRs y más particularmente CDR3, pueden ser capaces de administrarse a arabos pacientes con una enfermedad autoinmune e individuos normales. En un décimo segundo aspecto de la presente invención, una enfermedad autoinmune se puede supervisar detectando la presencia de un gene de TCR que comprende la secuencia de SEC ID NOS: 1, 2 o 3, o secuencias derivadas de las mismas, en una muestra de un paciente con una enfermedad autoinmune de conformidad con el sexto aspecto de la presente invención, y cuantificar la cantidad del gene de TCR que comprende la secuencia de SEC ID NOS: 1, 2 o 3, o secuencias derivadas de las mismas. La severidad de síntomas de la enfermedad autoinmune se puede correlacionar con la cantidad de ADN detectada en la muestra en vista del número de células T auto reactivas. Además, un aumento en la cantidad de ADN detectado en la muestra se puede utilizar como una indicación para aplicar tratamientos pretendidos para reducir al mínimo la severidad de los síntomas y/o tratar la enfermedad antes de que aparezcan los síntomas. En un décimo tercer aspecto de la presente invención, una enfermedad autoinmune se puede supervisar detectando la presencia de TCRs que comprenden la secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6y, o secuencias derivadas de las mismas, en una muestra de un paciente con una enfermedad autoinmune de conformidad con el séptimo aspecto de la presente invención, y cuantificar la cantidad de TCRs que comprenden la secuencia de SEC ID NOS: 4, 5 o 6, o secuencias derivadas de las mismas. La severidad de los síntomas de la enfermedad autoinmune se puede correlacionar con la cantidad de péptido o polipeptido detectado en la muestra en vista del número de células T auto reactivas. Además, un aumento en la cantidad de péptido o polipeptido detectado en la muestra se puede utilizar como una indicación para aplicar tratamientos pretendidos para reducir al mínimo la severidad de los síntomas y/o tratar la enfermedad antes de que aparezcan los síntomas . En un décimo cuarto aspecto, la presente invención está dirigida a la fabricación de composiciones farmacéuticas, tales como una vacuna descrita en el décimo aspecto de la presente invención y el anticuerpo descrito en el décimo primer aspecto de la presente invención. La composición farmacéutica se puede producir utilizando métodos bien conocidos en el ramo. Las composiciones farmacéuticas utilizadas como terapéuticos preclínicos y clínicos en el tratamiento de enfermedad o desórdenes se pueden producir por aquellos de experiencia, empleando principios aceptados de diagnóstico y tratamiento. Estos principios son conocidos en el ramo, y se exponen, por ejemplo, en Braunwald y col., eds . , Harrison's Principies of Internal Medicine, lia Ed. , McGraw-Hill, publisher, New York, N.Y. (1987), que se incorpora por referencia en la presente. La composición farmacéutica se puede administrar a cualquier animal que pueda experimentar los efectos benéficos de la composición. Los animales que reciben la composición farmacéutica pueden ser humanos u otros mamíferos. La composición farmacéutica se puede administrar por cualquier medio para lograr su propósito pretendido. Por ejemplo, la administración puede ser por ruta parenteral, subcutánea, intravenosa, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica o bucal. Alternativamente, o al mismo tiempo, la administración puede ser por la ruta oral. Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar parenteralmente mediante inyección de bolo o mediante perfusión gradual durante el tiempo. La dosificación administrada puede depender de la edad, sexo, salud, y peso del recipiente, clase de tratamiento concurrente, si lo hay, frecuencia de tratamiento, y la naturaleza del efecto deseado. Las escalas de dosis para la administración de las composiciones f rmacéuticas pueden ser suficientemente grandes para producir el efecto deseado, mediante lo cual, por ejemplo, una respuesta inmune al péptido, como se mide mediante DH o producción de anticuerpo, se logra, y la enfermedad autoinmune se impide, suprime, o trata significativamente. La dosis puede no ser tan grande como para ocasionar efectos laterales adversos, tales como reacciones cruzadas no deseadas, inmunosupresión generalizada, reacciones anafilácticas y lo semejante. La dosis para humanos puede variar entre aproximadamente 0.001-25 mg/kg de peso corporal. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender además portadores apropiados, farmacéuticamente aceptables que comprenden excipientes y auxiliares que pueden facilitar el procesamiento de los compuestos activos hacia preparaciones que se pueden utilizar farmacéuticamente. Los aditivos a las composiciones farmacéuticas pueden incluir la inclusión de un adyuvante, tal como alumbre, quitosán, u otros adyuvantes conocidos en el ramo. (Ver, por ejemplo Warren y col., Ann. Rev. Immunol . 4:369-388 (1986); Chedid, L., Feder. Proc. 45:2531-2560 (1986), que se incorporan en la presente por referencia) . Las composiciones farmacéuticas también pueden comprender además liposomas para mejorar la entrega o bioactividad, utilizando métodos y compuestos conocidos en el ramo. Las composiciones farmacéuticas también se pueden administrar oralmente en la forma de tabletas y cápsulas. Las composiciones farmacéuticas también se pueden administrar rectalmente en la forma de supositorios, y en la forma de soluciones para inyección o introducción oral. Las composiciones farmacéuticas pueden contener de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 99 por ciento, o de alrededor de 0.01 a alrededor de 95 por ciento de compuesto (s) activos, junto con el excipiente. Los excipientes apropiados pueden ser rellenos tales como sacáridos, por ejemplo lactosa o sucrosa, manitol o sorbitol, preparaciones de celulosa y/o fosfatos de calcio, por ejemplo fosfato de tricalcio o fosfato dé hidrógeno de calcio, así como aglutinantes tales como pasta de almidón, utilizando, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, y/o polivinilpirrolidona. Otras preparaciones farmacéuticas que se pueden utilizar oralmente incluyen cápsulas de ajuste por empuje hechas de gelatina, así como cápsulas selladas, suaves hechas de gelatina y un plastificante tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste por empuje pueden contener los compuestos activos en la forma de gránulos que se pueden mezclar con rellenos tales como lactosa, aglutinantes tales como almidones, y/o lubricantes tales como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizadores. En cápsulas suaves, los compuestos activos se pueden disolver o suspender en líquidos apropiados, tales como ácidos grasos, o parafina líquida. Además, se pueden añadir estabilizadores. Las preparaciones farmacéuticas que se pueden utilizar rectalmenté incluyen, por ejemplo, supositorios, que consisten de una combinación de uno o más de los compuestos activos con una base de supositorio. Las bases de supositorio apropiadas pueden ser, por ejemplo, triglicéridos naturales o sintéticos, o hidrocarburos de parafina. Además, se pueden utilizar cápsulas rectales de gelatina que consisten de una combinación de los compuestos activos con una base. Los materiales de base posibles incluyen, por ejemplo, triglicéridos líquidos, polietilenglicoles e hidrocarburos de parafina. Las formulaciones apropiadas para administración parenteral incluyen soluciones acuosas del péptido o anticuerpo en forma soluble en agua, por ejemplo, sales solubles en agua. Además, se pueden administrar suspensiones de péptido o anticuerpo como suspensiones de inyección oleosa apropiadas. Los solventes o vehículos lipofílicos apropiados incluyen aceites grasos, por ejemplo, aceite de ajonjolí, o esteres de ácido graso sintéticos, por ejemplo, oleato de etilo o triglicéridos. Las suspensiones de inyección acuosas pueden contener substancias que aumentan la viscosidad de la suspensión incluyen, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol y/o dextrano. La suspensión también puede contener estabilizadores.

El péptido y anticuerpo se pueden formular utilizando vehiculos parenterales farmacéuticamente aceptables convencionales para administración mediante inyección. Estos vehiculos pueden ser no tóxicos y terapéuticos, y un número de formulaciones de exponen en Remington's Pharmaceutical Sciences, (supra) . Ejemplos no limitativos de excipientes son agua, salina, solución de Ringer, solución de dextrosa y solución de sal equilibrada de Hank. Las composiciones farmacéuticas también pueden contener cantidades menores de aditivos tales como substancias que contienen la isotonicidad, pH fisiológico, y estabilidad. El péptido y anticuerpo se pueden formular en forma purificada substancialmente libre de agregados y otros materiales, a concentraciones que incluyen aproximadamente 1.0 ng/ml a 100 mg/ml. Las dosis efectivas del péptido y anticuerpo para uso al prevenir, suprimir, o tratar una enfermedad autoinmune pueden estar en una escala de aproximadamente 1 ng a 100 mg/kg de peso corporal. La escala de dosis también puede estar entre aproximadamente 10 ng y 10 mg/kg. La escala de dosis también puede ser entre aproximadamente 100 ng y 1 mg/kg . Los siguientes ejemplos se incluyen para demostrar modalidades preferidas de la invención. Se debe observar por aquellos de experiencia en el ramo que las técnicas descritas en los ejemplos que siguen representan técnicas descubiertas por el inventor para funcionar bien en la práctica de la invención, y de esta manera, se puede considerar que constituyen modos preferidos para su práctica. . Sin embargo, aquellos de experiencia en el ramo, en la luz de la presente exposición, deben apreciar que se pueden hacer muchos cambios en las modalidades especificas que se describen y todavía obtener un resultado semejante o similar sin abandonar el espíritu y alcance de la invención. EJEMPLO 1 Secuencias de ADN ?ß-?ß- ß de Receptor de Célula T Identificadas en Pacientes con MS Un juego de 20 secuencias CDR3 de células T reactivas con MBP que reconocen el epítope inmunodominante 83-99 de MBP se seleccionaron de Genbank. A fin de determinar si cualquiera de las 20 secuencias se expresaban comúnmente, especímenes de linfocito de sangre periférica de 40 pacientes de MS y 15 individuos de control se revisaron usando RT-PCR de dos pasos e imprimadores basados en la detección de RT-PCR descrita en la Patente de E.U.A. No. 6,303,314 (Zhang), que se incorpora por la presente en su totalidad. Brevemente, el RNA total extraído de células T de pacientes de MS y controles utilizando un mini juego Rneasi (Qiagen, Santa Clarita, CA) . El cADN de primera hebra transcrito en reversa del RNA total se somete a una primera vuelta de amplificación de PC usando un imprimador especifico de familia ?ß y un imprimador de ?ß, seguido por una segunda vuelta de PCR establecido o semi establecido usando un imprimador de vp-Dp-jp y un imprimador de cp. Los productos de PCR amplificados se separaron electroforéticamente en un gel de 1% de agarosa y se transfirieron a una membrana de nylon positivamente cargada (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN) utilizando mancha de vacio (Bio-Rad, Hercules, CA) a 5 mHg durante 90 min. El AND se fijó hacia la membrana mediante exposición de 3 minutos a reticulación de UV y se prehibridizó a 68 °C durante cuando menos 1 hora. Se añadió 0. 1 mg/ml de poli (A) a la solución de prehibridización (5xSSC, 1% de solución de bloqueo, 0. 1% de N-laurilsarcosina, 0.02% de SDS) para reducir el enlace no especifico de la sonda a ADN de no meta. La temperatura de hibridización y condiciones de lavado se optimizaron de conformidad con diferentes sondas especificas de CDR3 para asegurar una condición de hibridización exigente. La hibridización se llevó a cabo en un tapón que contiene 5xSSC, 1 % de solución de bloqueo, 0. 1% de N-Lauroilsarcosina, 0.02% de SDS, y 0.3 pinol/mi de una sonda etiquetada digoxigenina específica para la secuencia de nucleótído que codifica la región CDR3.

La detección de productos híbridos de ADN se realizó usando el Digoxigenin Luminiscent Detection Kit(R) de conformidad con las instrucciones del fabricante (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN) . La membrana luego se expuso a película de rayos X durante 15-30 minutos a temperatura ambiente . De las 20 secuencias probadas, tres secuencias codificadas en CDR3 se detectaron en un porcentaje elevado de especímenes derivados de MS en oposición a especímenes de control. El Cuadro 1 indica el Número de Acceso de Genbank para los genes de TCR que comprenden cada una de las tres secuencias codificadas en CDR3 detectadas, así como la secuencia de nucleótido y aminoácido de la región de CDR3 para cada secuencia. El Cuadro 2 indica el porcentaje total de detección positiva de las secuencias codificadas en CDR3 en especímenes de PBL derivadas de MS y control. Cuadro 1 - Secuencias de CDR3 específicas para MBP83-99 Acceso a Gene B Secuencia CDR3 Genbank MS2002-DH BV17 gcc agt agt act gac tgg age (SEC ID NO:l) SEC ID NO.7) A S S T D W S (SEC ID NO: 4) MS2002-18 BR5.2 age age ttg agg ggg gcg cta aac att (SEC ID NO: 2) (SEC ID NO.8) S S L R G A L N I (SEC ID NO: 5) MSFRA S1 E3 BV9 age age caá gat cgt ttt tgg (SEC ID NO: 3) (SEC ID NO: 9) A S Q D R F W (SEC ID NO.6) Cuadro 2 - Porcentaje de detección positiva de ADN de CDR3 Acceso a Genbank % en pacientes de MS % en controles MS2002-DH 57.5% 33% MS2002-18 50% 6.7% MSFRANS1 E3 80% 20% Los resultados en el Cuadro 2 son sorprendentes, debido a que el número de estudios no soporta un uso preferencial de productos de gene ?ß-?ß-^ß particulares. Por ejemplo, el motivo LGARAGLTY descrito en la Patente de E.U.A. No. 6,303,314 (Zhang) solamente se encuentra en algunos individuos. Más bien, los clones de célula auto reactivos de MBP típicamente muestran un patrón heterogéneo del uso de gene V -D -jp que está relativamente restringido en individuos . Generalmente se creía en el ramo que la heterogeneidad de uso de gene ?ß-?ß-^ dañaría significativamente la factibilidad de usar un acercamiento basado en vacuna de péptido para eliminar las células T auto reactivas patógenas terapéuticamente. Los resultados en la presente describen por primera vez que una vacuna basada en uno o más péptidos puede comprobar ser benéfica en la eliminación de células T auto reactivas patógenas. EJEMPLO 2 Preparación de Anticuerpos Monoclonales Receptores de Célula T Reactiva con Anti-MBP El procedimiento para preparar una linea de célula híbrida que produce anticuerpos monoclonales de receptor de célula T reactiva con anti-MBP involucra fusión de células de mieloma de un ratón BALB/c con las células de bazo de ratones BALB/c imprimadas con motivos de péptido de proteína receptora de célula T reactiva con MBP específica. 1. Preparación de Células de Bazo para Fusión Los motivos de péptido de receptores de célula T reactiva de MBP específicos se pueden aislar de receptores de célula T recombinantes purificados, o mediante síntesis de péptido. El motivo de péptido se purifica a más de 95% de pureza y se usa para inmunizar ratones adultos BALB/c o machos C57B46 mediante administración subcutánea de aproximadamente 30 ug emulsionada en adyuvante completo de Freund. El ratón se reinmunizó 2 semanas después con una inoculación adicional del motivo de péptido en adyuvante incompleto proporcionada subcutáneamente. Después de 2-6 semanas adicionales, 20-40 ug del motivo de péptido se administraron intravenosamente, y 2-4 dias después los ratones se sacrificaron y se prepara una suspensión de célula de bazo en la manera enseñada por Gefter, y col., Somatic Cell Genetics 3:231, 1977: Las células de sangre roja se lisan para incubación de 15 minutos a 40°C en NH4CI (0.83%). La suspensión de célula resultante se lava mediante centrifugación (800xg) a través de suero de becerro inactivado con calor seguido por centrifugación en medio libre de proteina (RRMI 1640, tamponado con 7.5 inM HEPES, pH 7.2) . 2. Preparación de Células de Mieloma por Fusión Las células de mieloma derivadas de la linea P3ül y deficiente en HP T (E.C2.4.2.8) como se describen por Yelton, y col., Curr. Top. Microbiol. Immunal. 81:1-7 (lo978), se mantienen en medio esencial mínimo (MEM) de Eagle que contiene 10% de becerro fetal y 15% de suero de caballo. El crecimiento de células de mieloma se inhibe mediante medio de hepoxantina-aminopeterina-timidina (HAT) selectivo. 3. Producción de Híbridos La producción de híbridos se logra mezclando células de mieloma 107 BALB/c con 108 células de bazo del motivo de ratones BALB/c o C57B1/6 inmunizado de motivo de péptido. La mezcla de célula se somete a centrifugación a 800 xg y las células se resuspenden para fusión en una solución al 50% (p/v) de polietilenglicol (PEG 1000) diluido en medio esencial mínimo (MEM) sin suero siguiente el procedimiento descrito por Gefter y col. (1977). Las células de hibridoma resultantes se clonan en medio de hipoxantina-aminopeterina-timidia (HAT) limitando la dilución como se describe por Galfre y Milstein Meth. Enzymol. 73:3, 1975. Las líneas de célula de hibridoma se seleccionaron que producen un anticuerpo que reconoce el motivo de péptido. 4. Prueba de los Clones para Producción de Anticuerpo de Receptor de célula T Reactiva con MBP Placas de 96 pozos de microtitulo Linbro (Flow Lab) se revistieron con 50-10Q ug de motivo de péptido o proteina de receptor de célula T y se incubaron a 20°C durante la noche. Después de lavar los pozos tres veces con 0.1 M Tris (pH 7.5) —1% nonidet P-40, que contiene 5% de Leche Instantánea Carnation y 0.085 de azida de sodio, 0.05 mi de los sobrenadantes de cultivo se' añaden e incuban a 40 °C durante la noche. El sobrenadante se separa después de lavar tres veces con tampón RIA y los anticuerpos se detectan utilizando el Hibridoma Screening Kit (Bethesda Research Labs) . Los controles para enlace no específico se incluyen omitiendo cualquiera el segundo anticuerpo o el sobrenadante de cultivo. La invención habiéndose ahora descrito completamente, será evidente a uno de experiencia ordinaria en el ramo que se pueden hacer muchos cambios y modificaciones a la misma sin abandonar el espíritu o alcance de la invención como se expone abajo. Todas las composiciones y/o métodos descritos y reivindicados en la presente se pueden hacer y ejecutar sin experimentación indebida en la luz de la presente exposición. Mientras que las composiciones y métodos de esta invención se han descrito en términos de modalidades preferidas, será evidente a aquellos de experiencia en el ramo que se pueden aplicar variaciones a las composiciones y/o métodos y en los pasos o en la secuencia de pasos del método descrito en la presente sin abandonar el concepto, espíritu y alcance de la invención. Más específicamente, será evidente que ciertos agentes que están tanto química como fisiológicamente relacionados se pueden substituir por los agentes descritos en la presente mientras que se lograrían resultados iguales o similares. Todos estos substitutos y modificaciones similares aparentes a aquellos experimentados en el ramo se considera que están dentro del espíritu, alcance y concepto de la invención como se define mediante la reivindicaciones anexas . EJEMPLO 3 Identificación de una Vacuna Basada en Péptido Efectiva para Tratamiento de Pacientes de MS El criterio de inclusión para esta prueba es pacientes con MS clínicamente definida durante cuando menos dos años, la línea de base expandió la marca de escala de incapacidad (EDSS) de 1.5 a 6.5 para RR-MS y 4.0 a 8.0 para pacientes con MS progresiva secundaria (SP-MS), y cuando menos una exacerbación en los dos años pasados antes de entrada de estudio para el cohorte de MS de remisión de liberación (RR-MS) . Los pacientes no deben haber tomado ningunas drogas inmunosupresoras, incluyendo esteroides, cuando menos tres meses antes de enrolarse en el estudio. Los esteroides se permiten durante el estudio si ocurre una exacerbación. Los tratamientos sintomáticos por fatiga, espasticidad y quejas de vejiga no se prohiben. Los pacientes se van a probar para la presencia de células T auto reactivas con TCRs que comprenden SEC ID NOS: 4, 5, 6, 10 o las secuencias de CDR descritas en la Patente de E.U.A. No. 5,614,192 (Vandenbark) . Se preparan vacunas que comprenden una cantidad inmunogénicamente efectiva de antigenos a base de péptido con secuencias que comprenden SEC ID NOS: 4, 5, 6 o 10, o secuencias derivadas de las mismas. Un total de 15 vacunas se prueba como sigue; (i) una de los cuatro antigenos (4 total}, (ii) combinaciones de dos de los cuatro antigenos (6 total), (iii) combinación de tres de los cuatro antigenos (4 total), y (iv) combinación de cuatro de los antígenos (1 total) . Cada paciente recibe tres inyecciones subcutáneas de una de las vacunas de prueba a intervalos de dos meses. Los pacientes luego se observan para el tiempo de principio de progresión confirmada de incapacidad, EDSS, régimen de recaida y actividades de lesión de MRI. Los resultados se comparan con el propio curso de tratamiento previo del paciente asi como las armas de placebo de dos pruebas clínicas recientes en pacientes de RR-MS y SP-MS, que sirvieron como un cálculo de la historia natural de MS (Jacobs y col., 1996), European Study Group, 1998). El tiempo a progresión se determina por un aumento de cuando menos 1.0 en el EDSS (Poser y col., 1983) que persiste durante cuando menos 2 meses. En estudio de exacerbaciones se define por la aparición de nuevos síntomas neurológicos o empeoramiento de síntomas neurológicos previamente existentes que durante cuando menos 48 horas, acompañado por cambio objetivo en examen neurológico (empeoramiento de cuando menos 0.5 puntos en EDSS). Los pacientes se instruyen que reporten eventos entre las visitas regulares programadas, y se examinan por un neurólogo si los síntomas sugirieron una exacerbación. Las determinaciones de seguridad incluyen eventos adversos, signos vitales y exámenes físicos en visitas regulares. Las diferencias en las variables clínicas en pacientes de estudio antes y después de la vacunación basada en péptido se analizan usando la prueba de suma de rango de ilcoxon. EJEMPLO 4 Tratamiento de Pacientes de MS Usando una Vacuna Basada en Péptido. Vacunas identificadas en el Ejemplo 3 que son efectivas para hacer lenta la progresión de los síntomas clínicos de MS se administran a pacientes de MS. Los pacientes que reciben el tratamiento de vacuna pueden estar sufriendo de MS de cualquier duración o se pueden diagnosticar mediante cualquier criterio conocido.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> BAYLOR COLLEGE OF MEDICINE OPEXA PHARMACEUTICALS INC. Zhang, Jingwu <120> SECUENCIAS CDR3 DE RECEPTOR DE CÉLULA T Y MÉTODOS PARA DETECCIÓN <130> 05627.0007. OOPC00 <140> PGT/US2003/017873 <141> 2003-06-05 <150> US 60/386,287 <L51> 2002-06-05 <160> 7 <170> Patentln versión 3.2 <210> 1 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 1 gccagtagta ctgactggag c 21 <210> 2 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 2 agcagcttga ggggggcgct aaacatt <210> 3 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 3 agcagccaag atcgtttttg g <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Ala Ser Ser Thr Asp Trp Ser 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Ser Ser Leu Arg Gly Ala Leu Asn 1 ' 5 <210> 6· <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapi <í400 6 Ala Ser Gln Asp Arg Phe Trp 1 5 <210> 7 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Leu Gly Arg Ala Gly Leu Thr Tyr 1 5

Claims (20)

1. R E I V I N D I C A C I O N E S 1. - Un oligonucleótido de aproximadamente 15 a 30 nucleótidos de longitud, que comprende cuando menos 10 nucleótidos . contiguos de una secuencia que codifica una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NOS: 4, 5, y 6, el complemento a las mismas, o un derivado de las mismas .
2. 2. - El oligonucleótido de conformidad con la reivindicación 1, que comprende cuando menos 15 nucleótidos contiguos de una secuencia que codifica una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NOS: 4, 5 y 6, el complemento de las mismas, o un derivado de las mismas.
3. 3. - El oligonucleótido de conformidad con la reivindicación 1, que comprende una secuencia que codifica una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NOS: 4, 5 y 6, el complemento a las mismas, o un derivado de las mismas.
4. 4. - Un par de imprimador, que comprende: (a) un primer imprimador de aproximadamente 15 a 30 nucleótidos de longitud, que comprende cuando menos 10 nucleótidos contiguos de una secuencia que codifica una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NOS: 4, 5 y 6, el complemento a las mismas, o un derivado de las mismas; y (b) un segundo imprimador que comprende un ácido nucleico de aproximadamente 15 y 30 nucleótidos de longitud que no comprende la secuencia del primer imprimador y se encuentra en la región de Vb a Cb del- gene receptor de célula T en células T, en donde las secuencias del primero y segundo imprimadores no se encuentran en la misma hebra del gene receptor de célula T.
5. 5. - El par de imprimador de conformidad con la reivindicación 4, en donde el segundo imprimador comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NOS: 7, 8 y 9.
6. 6. - Una sonda de oligonucleótido que comprende: (a) un oligonucleótido de aproximadamente 10 a 30 nucleótidos de longitud, que comprende cuando menos 10 nucleótidos contiguos de una secuencia que codifica una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NOS': 4, 5 y 6, el complemento a las mismas, o un derivado de las mismas, y (b) una fracción de etiquetado.
7. 7. - La sonda de oligonucleótido de conformidad con la reivindicación 6, en donde la fracción de etiquetado se selecciona del grupo que consiste en 32P, 35S, biotina y digoxingenina .
8. 8. - Un método para detectar células T de MBP83-99 que expresan un motivo de receptor de célula T, seleccionado del grupo gue consiste en SEC ID NOS: 4, 5 y 6, o un derivado de las mismas, que comprende: (a) obtener una muestra de ácido nucleico de células T MBP83-99; (i) poner en contacto la muestra de ácido nucleico con un par de imprimador seleccionado de: (ii) un primer oligonucleótido de aproximadamente 15 a 30 nucleótidos de longitud, que comprende cuando menos 10 nucleótidos contiguos de una secuencia que codifica una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NOS: 4, 5 y 6, el complemento a la misma, o un derivado de las mismas; y (iii) un segundo oligonucleótido de aproximadamente 15 a 30 nucleótidos de longitud que no comprende la secuencia del primer oligonucleótido y se encuentra en la región de Vb a Cb del gene receptor de célula T en células T, en donde las secuencias del primero y segundo oligonucleótidos no se encuentran en la misma hebra del gene receptor de célula T; y (b) detectar la presencia del ácido nucleico que codifica el motivo receptor de célula T. 9.- El método de conformidad con la reivindicación 8, en donde el segundo imprimador comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NOS: 7, 8 y
9. 9.
10. 10. - El método de conformidad con la reivindicación 8, en donde un fragmento de la muestra de ácido nucleico se amplifica mediante reacción en cadena de polimerasa (PCR) .
11. 11. - El método de conformidad con la reivindicación 10, en donde el paso de detección comprende explorar con una sonda de olxgonucleótido que comprende: (a) un oligonucleótido que comprende una secuencia que codifica una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NOS: 4, 5 y 6, el complemento a las mismas, o un derivado de las mismas, y (b) una fracción de etiquetado.
12. 12. - El método de conformidad con la reivindicación 10, en donde el paso de detección comprende autorradiografía .
13. 13. - Un equipo de prueba que comprende un primer oligonucleótido de aproximadamente 15-30 nucleótidos de longitud, el primer oligonucleótido comprendiendo cuando menos 10 nucleótidos contiguos de una secuencia que codifica una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NOS: 4, 5 y 6, el complemento a las mismas, o un derivado de las mismas.
14. 14. - El equipo de prueba de conformidad con la reivindicación 13, que comprende además un segundo oligonucleótido de aproximadamente 15 y 30 nucleótidos de longitud que no comprende la secuencia del primer oligonucleótido y se encuentra en la región de Vb a Cb del gene receptor de célula T en células T, en donde las secuencias del primero y segundo oligonucleótidos no se encuentran en la misma hebra del gene receptor de célula T.
15. 15. - El equipo de prueba de conformidad con la reivindicación 14, en donde el segundo imprimador comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NOS: 7, 8 y 9.
16. 16. - El equipo de prueba de conformidad con la reivindicación 13, que comprende además una fracción de etiquetado, en donde la fracción de etiquetado se selecciona del grupo que consiste .en 32P, 35S, biotina y digoxingenina .
17. 17. - Un método para supervisar una enfermedad--autoinmune, que comprende: (a) obtener células T MBP83-99 de un humano; (b) detectar la presencia de un ácido nucleico que codifica una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NOS: 4, 5 y 6, o un derivado de las mismas. (i) obtener una muestra de ácido nucleico de células T MBP83-99; (ii) poner en contacto la muestra de ácido nucleico con un par de imprimador seleccionado de: a. un primer oligonucleótido de alrededor de 15 a 30 nucleótidos de longitud, que comprende cuando menos 10 nucleótidos contiguos de una secuencia que codifica una secuencia seleccionada. del grupo que consiste en SEC ID NOS: 4, 5 y 6, el complemento a las mismas, o un derivado de las mismas; y b. un segundo oligonucleotido de alrededor de 15 a 30 nucleótidos de longitud que no comprende la secuencia del primer oligonucleotido y se encuentra en la región de Vb a Cb del gene receptor de célula T en células T, en donde las secuencias del primer y segundo oligonucleótidos no se encuentran en la misma hebra del gene receptor de célula T; y c. detectar la presencia del ácido nucleico que codifica el motivo receptor de célula T; y, si el ácido nucleico se detecta, (c) cuantificar la cantidad del ácido nucleico.
18. 18. - El método de conformidad con la reivindicación 17, en donde el primer imprimador comprende una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste en SEC ID NOS: 7, 8 y 9.
19. 19. - Una vacuna que comprende un primer péptido, el primer péptido comprendiendo una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste en SEC ID NOS: 4, 5 y 6, o un derivado de las mismas, y opcionalmente un portador farmacéuticamente aceptable. 20. - La vacuna de conformidad con la reivindicación 19, que comprende además cuando menos un segundo péptido que comprende una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste en SEC ID NOS: 4, 5, 6 y 7, o un derivado de las mismas, y opcionalmente un portador farmacéuticamente aceptable, en donde las secuencias del primer y segundo péptido son diferentes. 21. - Un método para tratar una enfermedad autoinmune que comprende administrar a un paciente con una enfermedad autoinmune, la vacuna de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19 o
20. 20.