MXPA04009410A - Uso de toxina botulinica para tratar enfermedades cardiovasculares. - Google Patents

Abstract

La presente invencion proporciona metodo para tratar enfermedades cardiovasculares en un mamifero. Los metodos incluyen una etapa de administrar una cantidad eficaz de una toxina botulinica directamente a un vaso sanguineo de un mamifero por lo que se trata la enfermedad cardiovascular.

Description

USO DE TOXINA BOTÜLINICA PARA TRATAR ENFERMEDADES CARDIOVASCULARES ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con métodos para evitar o reducir restenosis que se puede presentar en vasos sanguíneos después de expandir mecánicamente el diámetro de un vaso sanguíneo ocluido. La aterosclerosis es una enfermedad progresiva en donde los depósitos grasos, fibrosos, de calcio o trombóticos producen placas ateromatosas dentro y debajo de la íntima la cual es la capa más interior de las arterias. La aterosclerosis tiende a involucrar arterias de tamaño grande y medio. Las afectadas más comúnmente son las arterias aorta, ilíaca, femoral, coronaria y cerebral. Los síntomas clínicos se presentan debido a que la masa de la placa aterosclerosis reduce el flujo sanguíneo a través de la arteria dañada, por lo que perjudica la función del tejido u órgano distal a la misma . La angioplastia coronaria transluminal percutánea es un método no quirúrgico para el tratamiento de aterosclerosis coronaria. En este procedimiento se inserta un globo inflable en una arteria coronaria en la región de estrechamiento arterial. El inflado del globo durante 15-30 segundos resulta en la expansión de la luz o el pasaje REF. : 158108 estrechado. Debido a que habitualmente está presente un estrechamiento residual después de que se infla el globo por primera vez, habitualmente se realizan inflados múltiples o prolongados para reducir la gravedad del estrechamiento del tubo residual . Con frecuencia se utilizan endoprótesis en combinación con angioplastia coronaria con globo. Típicamente, se utiliza una endoprótesis para abrazar el vaso sanguíneo abierto después de una expansión inicial del vaso sanguíneo estrechado, por medio de un globo. Las endoprótesis que se expanden a sí misma, también se utilizan para expandir y sostener abiertos los vasos sanguíneos ocluidos . Diversas endoprótesis y su uso se describen en las patentes de E.U.A. Nos. 6,190,404; 6,344,055; 6,306,162; 6,293,959; 6,270,521; 6,264,671; 6,261,318; 6,241,758; . 6,217,608; 6,196,230; 6, 183,506; 5,989,280. La descripción de cada una de estas patentes se incorpora en su totalidad en la presente como referencia. Un problema con la angioplastia es que después del procedimiento puede presentarse restenosis o recurrencia de la obstrucción. Los desgarres en la sangre expuesta a la pared, a material extraño en proteínas, tales como colágeno, los cuales son altamente trombogénicos . Los coágulos resultantes pueden contener hormonas de crecimiento que pueden ser liberadas por plaquetas dentro del coágulo.

Adicionalmente, -la trombosis puede provocar liberación de hormonas del crecimiento y citocinas por células desde los macrófagos . Las hormonas del crecimiento pueden provocar que las células de músculo liso y los fibroblastos se agreguen en la región y se multipliquen. Además, después de la angioplastia con frecuencia hay una pérdida de una capa única de células que habitualmente cubren la superficie interna de los vasos sanguíneos lo que genera trombosis. La combinación del desgarre de la pared del vaso sanguíneo y la pérdida de la capa endotelial con frecuencia genera una superficie interna en el vaso sanguíneo la cual es muy trombogénica . La restenosis puede resultar de la proliferación de célula de músculo liso, la cual habitualmente reside dentro de la pared arterial, en el área de daño en respuesta a la trombosis. Los procedimientos de angioplastia también producen daños en la pared arterial que se asocian con inflamación. Cualquier clase de respuesta inflamatoria puede provocar el crecimiento de tejido nuevo, por ejemplo tejido de cicatrización, lo que puede contribuir a la restenosis. Una de las causas principales de restenosis después de angioplastia puede ser que la pared arterial dañada posiblemente muestre hemocompatibilidad reducida en comparación con aquella asociada con una pared arterial normal . Las respuestas adversas las cuales se asocian con hemocompatibilidad reducida incluyen adhesión plaquetaria, agregación y activación; trombosis; reacciones de células inflamatorias tales como adhesión y activación de monocitos o macrófagos; y la infiltración de leucocitos en la pared arterial . La restenosis es un problema grave que se puede presentar hasta en más de un tercio de todos los pacientes con angioplastia coronaria. Por lo tanto, existe la necesidad de métodos para reducir o eliminar la presentación de restenosis la cual puede seguir a los procedimientos para expandir mecánicamente un vaso sanguíneo ocluido.

Toxina botulínica La bacteria grampositiva anaeróbica, Clostridium botulinum, produce una potente neurotoxina polipeptídica, la toxina botulínica que provoca enfermedad neuroparalítica en humanos y animales denominada como botulismo. Se encuentran esporas de Clostridium botulinum en el suelo y pueden crecer en recipientes de alimentos esterilizados inapropiadamente sellados o en conservas elaboradas en casa, las cuales son la causa de muchos casos de botulismo. Los efectos del botulismo típicamente aparecen 18 a 36 horas después de ingerir los productos alimenticios infectados con cultivo o esporas de Clostridium botulinum. La toxina botulínica aparentemente pasa sin atenuarse a través del revestimiento del intestino y ataca las neuronas motoras periféricas. Los síntomas de intoxicación con toxina botulínica pueden progresar desde dificultad al caminar y dificultad para deglutir y para hablar hasta parálisis de los músculos respiratorios y muerte . La toxina botulínica tipo A ("BoNT/A") es el agente biológico natural más mortal conocido por el hombre. Aproximadamente 50 picogramos de toxina botulínica (complejo de neurotoxina purificado) serotipo A es la DL50 en ratones. Una unidad (U) de toxina botulínica se define como la DL50 administrada por inyección intraperitoneal en ratones Swiss Webster hembra con un peso de 18-20 gramos cada uno. Se han caracterizado siete neurotoxinas botulínicas inmunológicamente distintas, y estas son respectivamente las neurotoxinas botulínicas serotipos A, B, Ci, D, E, F y G, cada una de las cuales se diferencia por neutralización con anticuerpos específicos para el serotipo. Los diferentes serotipos de toxina botulínica pueden variar en la especie animal a la que afectan y en la gravedad y duración de la parálisis que inducen. Por ejemplo, se ha determinado que BoNt/A es 500 veces más potente, medida por la tasa de parálisis producida en rata, que la toxina botulínica serotipo B (BoNT/B) . Adicionalmente, la toxina botulínica tipo B ("BoNT/B") se ha determinado que es no tóxica en primates a una dosis de 480 U/kg, lo cual es aproximadamente 12 veces la DLS0 en primate para BoNt/A. La toxina botulínica aparentemente se- une con gran afinidad a las neuronas motoras colinérgicas, es transferida a la neurona y bloquea la liberación de acetilcolina. Las toxinas botulinicas se han utilizado en despachos clínicos para el tratamiento de desórdenes neuromusculares caracterizados por músculo esquelético hiperactivo. BoNt/A se ha aprobado por la Food and Drug Administration de Estados Unidos para el tratamiento de blefaroespasmo, estrabismo, espasmo hemifacial y distonia cervical. De manera adicional, se ha aprobado una toxina botulínica tipo B por la FDA para el tratamiento de distonia cervical. Los serotipos de toxina botulínica que no son el serotipo A aparentemente tienen una potencia menor o una duración más corta de actividad en comparación con BoNt/A. Los efectos clínicos de BoNt/A intramuscular periférica habitualmente se observan a la siguiente semana de inyección. La duración típica del alivio sintomático de una inyección intramuscular única de BoNt/A promedia aproximadamente tres meses . Aunque todos los serotipos de toxinas botulinicas aparentemente inhibe la liberación del neurotransmisor acetilcolina en la unión neuromuscular, lo hacen de esta manera al alterar las diferentes proteínas neurosecretoras o la separación de estas proteínas en sitios diferentes. Por ejemplo, las toxinas botulinicas de los serotipos A y E separan la proteína asociada al sinaptosoma de 25 kiloDaltons (kD) (SNAP-25) , pero tienen como objetivo secuencias de aminoácidos diferentes dentro de esta proteína. BoNT/B, D, F y G actúan sobre proteínas asociadas a vesícula (VA P, también denominada sinaptobrevina) , en donde cada serotipo separa la proteína en un sitio diferente. Finalmente, se ha demostrado que la toxina botulínica serotipo Ci (BoNT/Ci) separa tanto la sintaxina como SNAP-25. Estas diferencias en el mecanismo de acción pueden alterar la potencia relativa o la duración de acción de los diversos serotipos de toxina botulínica . Sin importar el serotipo, el mecanismo molecular de intoxicación por toxina parece ser similar e involucrar por lo menos tres estadios o etapas. En la primera etapa del proceso, la toxina se une a la membrana presináptica de una neurona objetivo a través de una interacción específica entre la cadena H y un receptor de superficie celular; se considera que el receptor es diferente para cada serotipo de toxina botulínica y para la toxina del tétanos. El segmento del extremo carboxilo de la cadena H, Hc, parece ser importante para dirigir a la toxina hacia la superficie celular. En la segunda etapa, la toxina atraviesa la membrana plasmática de la célula envenenada. La toxina primero es englobada por endocitosis mediada por receptor a través de la célula, y se forma un endosoma que contiene la toxina. La toxina después escapa del endosoma al citoplasma de la célula. Se considera que esta última etapa es mediada por el segmento del extremo amino de la cadena H, HN/ el cual activa un cambio conformacional de la toxina en respuesta a un pH de aproximadamente 5.5 o menor. Se sabe que los endosomas poseen una bomba de protones que disminuyen el pH intraendosómico . El desplazamiento de conformación expone los residuos hidrofóbicos en la toxina que permite que la toxina sea embebida en sí misma en la membrana endosómica. Después, la toxina se desplaza a través de la membrana endosómica al interior del citosol . La última etapa del mecanismo de la actividad de la toxina botulínica parece involucrar la reducción de la unión disulfuro que une a las cadenas H y L. La totalidad de la actividad tóxica de las toxinas botulínicas y tetánica está contenida en la cadena L de la holotoxina; la cadena L es una endopeptidasa de zinc (Zn++) la cual para selectivamente proteínas esenciales para el reconocimiento y anclaje de vesículas que contienen neurotransmisor con la superficie citoplasmática de la membrana plasmática y la fusión de las vesículas con la membrana plasmática. La neurotoxina tetánica, las toxinas botulínicas/B/D/F y /G provocan degradación de sinaptobrevina (también denominada proteína de membrana asociada a vesícula (VAMP, por sus siglas en inglés)), una proteína de membrana sinaptosómica . La mayor parte de la VAMP presente en la superficie citosólica de la vesícula sináptica se desprende como resultado de cualquiera de estos sucesos de separación. Cada toxina separa específicamente una unión diferente. El peso molecular de la molécula de proteína de toxina botulínica, para la totalidad de los siete serotipos de toxina botulínica conocidos, es de aproximadamente 150 kD. De manera interesante, las toxinas botulínicas se liberan por la bacteria Clostridial como complejos que comprenden a la molécula de proteína de toxina botulínica de 150 kD junto con proteínas no toxinas asociadas. Por lo tanto, el complejo BoNt/A se puede producir por bacterias clostridiales como formas de 900 kD, 500 kD y 300 kD. Aparentemente BoNT/B y Cx se producen únicamente como un complejo de 500 kD. BoNT/D se produce en complejos de 300 kD y de 500 kD. Finalmente, BoNT/E y F se producen como complejos de únicamente aproximadamente 300 kD. Se considera que los complejos (es decir, el peso molecular mayor de aproximadamente 150 kD) para contener una proteína de hemaglutinina que no sea toxina y una proteína que no es hemaglutinina que no es toxina y no tóxica. Estas dos proteínas que no son toxina (las cuales junto con la molécula de toxina botulínica comprenden el complejo de neurotoxina relevante) pueden actuar para proporcionar estabilidad contra la desnaturalización para la molécula de toxina botulínica y protección contra los ácidos digestivos cuando se ingiere la toxina. Adicionalmente, es posible que puedan resultar complejos más grandes (mayores de aproximadamente 150 kD de peso molecular) de toxina botulínica a una velocidad de difusión más lenta de la toxina botulínica alejándose de un sitio de inyección intramuscular de un complejo de toxina botulínica. Los estudios in vitro han demostrado que la toxina botulínica inhibe la liberación inducida por catión de potasio tanto de acetilcolina como de noradrenalina de cultivos de células primarios en tejido del tallo cerebral. Adicionalmente, se ha informado que la toxina botulínica inhibe la liberación inducida tanto de glicina como de glutamato en cultivos primarios de neuronas de médula espinal y que en el cerebro las preparaciones de sinaptosoma de toxina botulínica inhibe la liberación de cada uno de los neurotransmisores acetilcolina, dopamina, noradrenalina, CGRP y glutamato. Se puede obtener BoNt/A al establecer y hacer crecer cultivos de Clostridium botulinum en un fermentador y después cosechar y purificar la mezcla fermentada de acuerdo con procedimientos conocidos. Todos los serotipos de toxina botulínica inicialmente se sintetizan como proteínas de cadena única inactivos las cuales deben ser separados o cortadas por proteasas para volverlas neuroactivas. Las cepas bacterianas en elaborar la toxina botulínica serotipos A y G poseen proteasas endógenas y los serotipos A y G por lo tanto se pueden recuperar de los cultivos bacterianos en su forma predominantemente activa. En contraste, los serotipos de toxina botulínica Ci, D y E sintetizan por cepas no proteolíticas y por lo tanto típicamente no están activados cuando se recuperan del cultivo. Los serotipos B y F se producen tanto por cepas proteolíticas como por no proteolíticas por lo tanto se pueden recuperar ya sea en forma activa o inactiva. No obstante, incluso las cepas proteolít icas que producen, por ejemplo el serotipo BoNt/B únicamente separan una porción de la toxina producida. La proporción exacta de moléculas cortadas o no cortadas depende de la longitud de incubación y la temperatura del cultivo. Por lo tanto, cierto porcentaje de cualquier preparación, por ejemplo de toxina BoNt/B es probable que sea inactiva, posiblemente tomando en consideración la potencia significativamente menos conocida de BoNt/B en comparación con BoNt/A. La presencia de moléculas inactivas de toxina botulínica en una preparación clínica contribuirá a la carga de proteína total de la preparación, la cual se ha unido para antigenicidad aumentada, sin que contribuya a su eficacia clínica. De manera adicional, se sabe que BoNt/B tiene, cuando se inyecta por vía intramuscular, una duración de actividad más corta y también es menos potente que BoNt/A al mismo nivel de dosis.

Se ha- reportado (como ejemplos ejemplares) que BoNt/A se ha utilizado clínicamente como sigue: (1) aproximadamente 75-125 unidades de BOTOX" 1 (disponible de Allergan, Inc., de Irvine, California bajo el nombre comercial BOTOX^) por inyección intramuscular (músculos múltiples) para tratar distonia cervical; (2) 5-10 unidades de BOTOX" por inyección intramuscular para tratar líneas glabelares (suero café) (5 unidades inyectadas intramuscularmente en el músculo piramidal de la nariz y 10 unidades inyectadas intramuscularmente en cada músculo superciliar corrugador) ; (3) aproximadamente 30-80 unidades de BOTOX^ para tratar extrañamiento por inyección dentro del esfínter del músculo tuborrectal ; (4) aproximadamente 1-5 unidades por músculo de BOTOX" inyectada intramuscularmente para tratar blefaroespasmo al inyectar el músculo ocular o bicular pretarsal lateral del párpado superior y el músculo ocular orbicular pretarsal lateral del párpado inferior. (5) para tratar estrabismo, los músculos extraoculares se han inyectado intramuscularmente con aproximadamente 1-5 unidades de BOTOX"11, la cantidad inyectada varía en base en el tamaño del músculo que se va a inyectar y el grado de parálisis muscular deseado (es decir, la cantidad de corrección de dioptría deseada) . (6) Para tratar espasticidad de la extremidad superior después de apoplej £a en inyecciones intramusculares de BOTOX" , en cinco músculos flexores de la extremidad superior diferentes, como sigue: (a) digital profundo flexor: 7.5 U a 30 U (b) digital sublimus flexor: 7.5 U a 30 U (c) carpió ulnar flexor: 10 U a 40 U (d) carpió radial flexor: 15 U a 60 U (e) rama del bíceps: 50 U a 200 U. Cada uno de los cinco músculos indicados se ha inyectado en la misma sesión de tratamiento, de manera que el paciente recibe de 90 U a 360 U de BOTOX"11 en el músculo flexor de extremidad superior por inyección intramuscular en cada sesión de tratamiento. La neurotoxina del tétanos actúa principalmente en el sistema nervioso central, mientras que la neurotoxina botulínica actúa en la unión neuromuscular ; ambas actúan al inhibir la liberación de acetilcolina del axón de la neurona afectada en la sinapsis, lo que resulta en parálisis. El efecto de intoxicación en la neurona afectada es de larga duración y hasta recientemente se había considerado que es irreversible. La neurotoxina tetánica se sabe que existe en un serotipo inmunologicamente distinto.

Acetilcolina Típicamente solo se libera un tipo único de neurotransmisor de molécula pequeña por cada tipo de neurona en el sistema nervioso del mamífero. El neurotransmisor acetilcolina se secreta por neuronas en muchas áreas del cerebro, pero específicamente por las células piramidales grandes de la corteza motora, por varias neuronas diferentes en los ganglios básales, por las neuronas motoras que inervan los músculos esqueléticos, por neuronas preganglionares del sistema nervioso autónomo (tanto simpáticas como parasimpáticas) , por neuronas postganglionares del sistema nervioso parasimpático y por algunas de las neuronas postganglionares del sistema nervioso simpático. Esencialmente, únicamente las fibras nerviosas simpáticas postganglionares para las glándulas sudoríparas, los músculos piloerectores y algunos vasos sanguíneos son colinérgicos y la mayor parte de las neuronas postganglionares del sistema nervioso simpático secretan el neurotransmisor noradrenalina . En la mayor parte de los casos la acetilcolina tiene un efecto excitador. No obstante, se sabe que la acetilcolina tiene efectos inhibidores en algunas de las terminaciones nerviosas parasimpáticas periféricas, tales como la inhibición del corazón por el nervio vago. Las señales eferentes del sistema nervioso autónomo se transmiten al cuerpo a través del sistema nervioso simpático o del sistema nervioso parasimpático. Las neuronas preganglionares del sistema nervioso simpático se extienden desde los . cuerpos de las células neuronales simpáticas preganglionares que se localizan en el asta intermedio lateral de la médula espinal. Las fibras de nervios simpáticos preganglionares, que se extienden desde el cuerpo celular, la sinapsis con neuronas postanglionares que se localizan ya sea en un ganglio simpático paravertebral o en un ganglio prevertebral . Desde este lugar, las neuronas preganglionares del sistema nervioso simpático y parasimpático son colinérgicas, la aplicación de acetilcolina a los ganglios excitará las neuronas postganglionares simpáticas y parasimpáticas . La acetilcolina activa dos tipos de receptores, receptores muscarínicos y nicotínicos. Los receptores muscarínicos se encuentran en todas las células efectoras estimuladas por neuronas postanglionares del sistema nervioso parasimpático así como en aquellas estimuladas por neuronas colinérgicas postganglionares del sistema nervioso simpático. Los receptores nicotínicos se encuentran en las sinapsis entre las neuronas preganglionares y postganglionares de los sistemas tanto simpático como parasimpático. Los receptores nicotínicos también están presentes en muchas membranas de fibras de músculo esquelético en la unión neuromuscular. La acetilcolina se libera de neuronas colinérgicas cuando las vesículas intracelulares transparentes y pequeñas se fusionan con la membrana celular neuronal presináptica.

Una amplia variedad de células secretoras no neuronales tales como médula suprarrenal (así como la línea de células PC12) y las células de islote pancreático liberan catecolaminas e insulina, respectivamente, de vesículas de núcleo denso grande. La línea de células PC12 es un clon de células de feocromocitoma de rata utilizado extensamente como un modelo de cultivo de tejido para estudios del desarrollo simpático suprarrenal . La toxina botulínica inhibe la liberación de ambos tipos de compuestos de ambos tipos de células in vi tro, permeabilizado (por electroporación) o por inyección directa de la toxina a las células denervadas . También se sabe que la toxina botulínica bloquea la liberación del neurotransmisor glutamato de los cultivos de células de sinaptosomas corticales .

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona métodos para tratar enfermedades cardiovasculares en un mamífero, por ejemplo en un humano. Los métodos incluyen una etapa de administrar una cantidad eficaz de una toxina botulínica directamente a un vaso sanguíneo de un mamífero para tratar una enfermedad cardiovascular. En una modalidad, el tratamiento de la enfermedad cardiovascular evita restenosis. En una modalidad de la invención, el mamífero está experimentando o ha experimentado un procedimiento cardiovascular. . En una modalidad, el procedimiento cardiovascular es un procedimiento cardiovascular arterial, por ejemplo un procedimiento cardiovascular arterial coronario . En una modalidad, el procedimiento cardiovascular incluye el procedimiento de angioplastia. En una modalidad, la angioplastia incluye la etapa de insertar una endoprotesis en el vaso sanguíneo del mamífero. En otra modalidad, la angioplastia no incluye la etapa de insertar una endoprotesis en un vaso sanguíneo. El procedimiento de angioplastia puede ser, por ejemplo angioplastia con globo. En una modalidad, la angioplastia con globo incluye el uso de una endoprotesis. Por ejemplo, se puede insertar una endoprotesis en el vaso sanguíneo durante la angioplastia con globo. El procedimiento no se limita al uso de un globo -.

Cualquier dispositivo que se puede utilizar para abrir mecánicamente un vaso sanguíneo con constricción, por ejemplo, un resorte u otro dispositivo de expansión, se puede utilizar para llevar a cabo la angioplastia. La etapa de administrar la toxina botulínica puede incluir una etapa de inyectar la toxina botulínica en una pared del vaso sanguíneo. En particular, la toxina se puede inyectar dentro de la íntima, la capa media o adventicia del vaso sanguíneo. Además, la etapa de administración puede llevarse a cabo utilizando una endoprotesis la cual se ha recubierto o impregnado con toxina botulínica. En una modalidad de la presente invención la toxina botulínica reduce o elimina el daño a un vaso sanguíneo. Los ejemplos de daño que se pueden presentar son estiramiento o desgarre de un vaso sanguíneo o cualquier otro daño que se pueda presentar al vaso sanguíneo como resultado de expansión mecánica de diámetro interior de vaso sanguíneo. En una modalidad, la toxina botulínica reduce o elmina el daño del vaso sanguíneo, por lo menos en parte, al dilatar el vaso sanguíneo. En otra modalidad, la toxina botulínica reduce o elimina el daño al vaso sanguíneo, por lo menos en parte, al reducir o eliminar la inflamación del vaso sanguíneo. De acuerdo con la presente invención, la toxina botulínica puede ser cualquier toxina botulínica que incluye a las toxinas botulínicas tipos A, B, C, D, E, F, G o me2clas de las mismas o combinaciones de las mismas, que incluyen una toxina botulínica modificada, híbrida o quimérica. Además, de acuerdo con la presente invención, se proporcionan métodos para evitar restenosis en un vaso sanguíneo en un mamífero lo cual se puede presentar después de un procedimiento cardiovascular. En una modalidad, el método incluye una etapa de administrar al mamífero una cantidad eficaz de toxina botulínica y de esta manera evitar restenosis en un vaso sanguíneo. De manera adicional, de acuerdo con la presente invención, se proporcionan métodos para evitar restenosis en un mamífero al impedir el daño en un vaso sanguíneo el cual se puede presentar durante o después de un procedimiento cardiovascular. En una modalidad, el método incluye la etapa de admininistrar a un mamífero una cantidad eficaz de una toxina botulínica y de esta manera evitar el daño en el vaso sanguíneo e impedir restenosis . La presente invención también proporciona métodos para evitar restenosis en un mamífero al evitar la inflamación en un vaso sanguíneo lo cual se puede presentar durante o después de un procedimiento cardiovascular. En una modalidad, el método incluye la etapa de administrar a un mamífero una cantidad eficaz de la toxina botulínica y de esta manera impedir la inflamación en el vaso sanguíneo e impedir restenosis. Además, la presente invención, proporciona métodos para evitar restenosis en un mamífero al dilatar un vaso sanguíneo antes, durante o después de un procedimiento cardiovascular. En una modalidad, el método incluye la etapa de administrar a un mamífero una cantidad eficaz de la toxina botulínica y de esta manera dilatar el vaso sanguíneo y evitar restenosis . De manera adicional, la presente invención proporciona las composiciones para uso en procedimientos cardiovasculares. En una modalidad, estas composiciones incluyen una endoprótesis con una toxina botulínica unida a la endoprótesis o incrustada en la endoprótesis. La toxina botulínica puede ser cualquier toxina botulínica que incluye la toxina botulínica tipo A, B, C, D, E, F, G o combinaciones de las mismas o mezclas de las mismas. Cualquier característica o combinación de características descritas en la presente se incluyen dentro del alcance de la presente invención con la condición de que las características incluidas en cualquiera de tales combinaciones no sea mutuamente inconsistente como será evidente del contexto, esta especificación y el conocimiento de una persona habitualmente experta en la técnica. Las ventajas y aspectos adicionales de la presente invención son evidentes en la siguiente descripción detallada y reivindicaciones .

DEFINICIONES El término "agente" se define como una neurotoxina, por ejemplo una toxina botulínica, para uso de acuerdo con la presente invención. Un agente puede ser un fragmento de una neurotoxina, una neurotoxina modificada o una variante de neurotoxina que posea parte o la totalidad de la actividad biológica de una neurotoxina no modificada. El término "angioplastia" significa cualquier procedimiento en donde el diámetro interior de un vaso sanguíneo se expande mecánicamente. Una "toxina botulínica" se puede referir a una toxina botulínica nativa o a un fragmento funcional de una toxina botulínica o una toxina botulínica modificada. Además, las toxinas botulínicas con supresiones, adiciones, alteraciones o sustituciones de aminoácidos que suprimen, suman o alteran o sustituyen un único aminoácido o un porcentaje pequeño de aminoácidos (por ejemplo, menos de aproximadamente 5% o por ejemplo, menos de aproximadamente 1%) son variaciones modificadas conservadoras de toxinas botulínicas. Cuando se realizan una o más sustituciones de uno o más aminoácidos con un aminoácido químicamente similar en una toxina botulínica, esto también resulta en una variación modificada de manera conservadora de una toxina botulínica. Las tablas que proporcionan aminoácidos con funcionalidad similar son bien conocidas en la técnica. Los siguientes son cinco grupos, cada uno contiene aminoácidos que son sustituciones conservadoras entre sí: alifáticos: glicina (G) , alanina (A) , valina (V) , leucina (L) , isoleucina (I); aromáticos: fenilalanina (F) , tirosina (Y), triptofano ( ) ; que contienen azufre: (metionina ( ) , cisteina (C) ; básicos: arginina (R) , lisina (K) , histidina (H) , ácidos: ácido aspártico (D) , ácido glutámico (E) , asparagina (N) , glutamina (Q) . Véase también, Creighton (1984) Proteins, W.H. Freeman and Company. Las variaciones modificadas de manera conservadora de toxinas botulínicas nativas se incluyen dentro del alcance del significado de "toxina botulínica" . El término "cardiovascular" significa que pertenece a vasos sanguíneo, por ejemplos vasos sanguíneos del corazón. Los términos "toxina clostridial" o "neurotoxina clostridial" significa una toxina producida de manera natural por el género de bacteria Clostridium. Por ejemplo, las toxinas clostridiales incluyen, pero no se limitan a toxinas botulínicas, toxinas de tétanos, toxinas difíciles y toxinas butíricas. Una toxina clostridial también se puede elaborar por un medio recombinante conocido por una bacteria no clostridial. El término "combinación" significa una secuencia ordenada de elementos. Por ejemplo, una combinación de ¦ toxinas botulínicas puede significar la administración de una toxina botulínica E, seguido por administración de una toxina botulínica tipo A, seguido por administración de una toxina botulínica tipo B. Esto se opone a una "mezcla" en donde, por ejemplo, se combinan tipos diferentes de toxinas antes de su administración. El término "daño" significa desgasrre, raspado, estirado, rascado, magullado o inflamación de daño causado por inflamación u otro daño que se puede presentar en un vaso sanguíneo que experimenta un procedimiento, por ejemplo, un procedimiento en donde el diámetro interior del vaso sanguíneo se expande utilizando fuerza mecánica. El término "fragmento" significa una secuencia de aminoácidos que comprende cinco aminoácidos o más dé la secuencia de aminoácidos nativa hasta un tamaño de menos de por lo menos un aminoácido a partir de la secuencia nativa. Por ejemplo, un fragmento de una cadena ligera de toxina botulínica tipo A comprende cinco o más aminoácidos de la secuencia de aminoácidos de la toxina botulínica nativa tipo A de la cadena ligera hasta un tamaño de menos un aminoácido a partir de la cadena ligera nativa. El término "Hc" significa un fragmento que se obtiene de la cadena H de una toxina clostridial lo cual es equivalente, por ejemplo funcionalmente equivalente al fragmento con extremo carboxilo de la cadena H, o la porción correspondiente a dicho fragmento en la cadena H intacta involucrada en la unión a una superficie celular de un receptor de superficie celular. El término "HN" significa un fragmento o variante obtenida de una cadena H de una toxina clostridial la cual puede ser funcionalmente equivalente a la porción de una cadena H intacta involucrada en el desplazamiento de por lo menos la cadena L a través de una membrana endosómica intracelular al interior del citoplasma de una célula. Un HN puede resultar de un Hc que se separa de una cadena H. Un HN también puede resultar de una cadena H que se modifica de manera que su Hc ya no se une a superficies celulares colinérgicas . El término "cadena pesada" significa la cadena pesada de una neurotoxina clostridial o un fragmento o variante de una HN de una neurotoxina clostridial . Una cadena pesada puede tener un peso molecular de aproximadamente 100 kD y se le puede denominar como una cadena H o simplemente como H. El término "LHN" significa un fragmento que se obtiene de una neurotoxina clostridial que contiene la cadena L acoplada a una HN. LHN se puede obtener de neurotoxina clostridial intacta por proteólisis, de manera que separa o modifica el dominio Hc. El término "cadena ligera" significa la cadena ligera de una neurotoxina clostridial o... un fragmento o variante de una cadena ligera de una- neurotoxina clostridial . Una cadena ligera puede tener un peso molecular de aproximadamente 50 kD y se le puede denominar como cadena L, L, o como un dominio proteolítico de una toxina clostridial. El término "enlazante" significa una molécula la cual ocupa dos o más de otras moléculas o componentes juntos. Una "neurotoxina modificada" significa una neurotoxina que tiene un componente no nativo unido covalentemente a la neurotoxina o una porción nativa de la neurotoxina perdida. Por ejemplo, una toxina botulínica modificada puede tener una cadena ligera de una toxina botulínica con una molécula de sustancia P unida covalentemente . Los términos "neurotoxina" o "toxina" significa una sustancia que inhibe la función neuronal o la secreción celular. Las toxinas clostridiales son ejemplos de una neurotoxina . El término "evitar" significa evitar que se produzca en su totalidad o en parte. El término "reducir" significa hacer de una magnitud menor (por ejemplo tamaño, cantidad o número) . La reducción puede ser de aproximadamente 1% a aproximadamente 100%. Por ejemplo, la reducción puede ser entre aproximadamente 1% y aproximadamente 10%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 20% o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 30%, o ent e aproximadamente 10% y aproximadamente 40%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 50%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 60%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 70%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 80%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 90%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 100%. El término "separador" significa una molécula o un grupo de moléculas las cuales se separan físicamente o agregan distancia entre los componentes de agentes para uso de acuerdo con la invención. El término " sustancialmente" significan de manera principal, pero no completamente. Por ejemplo, sustancialmente puede significar aproximadamente 10% a aproximadamente 99.999%, aproximadamente 20% a aproximadamente 99.999%, aproximadamente 30% a aproximadamente 99.999%, aproximadamente 40% a aproximadamente 99.999% o aproximadamente 50% a aproximadamente 99.999%. El "componente dirigido" significa una molécula que tiene una afinidad de unión específica por una superficie celular o un receptor de superficie celular. El término "variante" significa una molécula o péptido el cual es sustancialmente el mismo que el de la molécula o péptido descrito en su estructura y función. Por ejemplo, una variante de una cadena ligera especificada puede tener diferencias en la secuencia de aminoácidos cuando se compara con la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera especificada. Las variantes se pueden considerar como equivalentes para las moléculas descritas específicamente y como tales están dentro del alcance de la invención.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención en parte, se basa en el descubrimiento de que una neurotoxina, por ejemplo toxina botulinica es útil para tratar enfermedades cardiovasculares, por ejemplo tratar enfermedades cardiovasculares en un paciente quien ha experimentado o experimenta un procedimiento cardiovascular. En una modalidad, la presente invención proporciona métodos para reducir o eliminar restenosis después de un procedimiento cardiovascular. Una persona experta en la técnica apreciará que los métodos descritos en la presente pueden encontrar aplicación en cualquier vaso sanguíneo en el cuerpo que incluyen, pero que no se limitan a vasos coronarios (cardíacos) , cerebrales (de cerebro) , carotídeos (del cuello) , renales (del riñon) , viscerales (abdominales) , ilíacos (de la cadera) , femoropoplíteos (del muslo) , infrapoplíteos (de la rodilla) . La invención comprende la aplicación de una neurotoxina, por ejemplo, una toxina botulinica a un vaso sanguíneo de un paciente quien este experimentando o experimentará o ha experimentado un procedimiento que puede llevar, directa o indirectamente a daño de un vaso sanguíneo, por ejemplo, una arteria coronaria. En una modalidad, la presente invención proporciona métodos para tratar a un paciente que experimenta un procedimiento de angioplastia tal como restenosis que se reduce o elimina después del procedimiento. En una modalidad, la angioplastia incluye el uso de una endoprótesis, por ejemplo, una endoprótesis autoexpandible . - En otra modalidad, la angioplastia es angioplastia por globo. En otra modalidad, la angioplastia es angioplastia por globo e incluye el uso de una endoprótesis . En otra modalidad, la angioplastia es angioplastia por globo que no incluye el uso de una endoprótesis. Sin desear limitar la presente invención a teoría o mecanismo de operación alguno, se considera que los presentes métodos evitan daño a un vaso sanguíneo el cual se puede presentar asociado con la expansión mecánica de un vaso sanguíneo ocluido de alguna otra manera u ocluido parcialmente. Por lo tanto, los métodos de la presente invención pueden evitar la restenosis que de otra manera se podría presentar como resultado de tal daño. Los ejemplos de daño que se pueden evitar son desgarre, raspado, estirado, rascado, magullado o inflamación o daño causado por inflamación u otro daño que se pueda presentar en un vaso sanguíneo que experimente un procedimiento, por ejemplo un procedimiento en donde el diámetro interior del vaso sanguíneo se expande utilizando fuerza mecánica. Aunque el mecanismo de operación de la toxina botulínica para evitar que se produzca daño en un vaso sanguíneo no se comprende por completo, sin desear limitar la invención a alguna teoría o mecanismo de operación particular, el inventor sugiere por lo menos dos posibles teorías de operación.

En un caso, se considera que las toxinas ejercen un efecto dilatante sobre los vasos sanguíneos y de esta manera se incrementa el diámetro de un vaso, que incluye el diámetro interior del vaso. Se puede utilizar topografía de coherencia óptica para proporcionar una medida del efecto de dilatación de la toxina. Se puede cuantificar el efecto de dilatación de la toxina como un factor del tamaño original de la abertura del vaso sanguíneo antes de la administración de la toxina. En una modalidad, la abertura del vaso sanguíneo se puede dilatar entre aproximadamente 1.5 veces y aproximadamente 100 veces el tamaño de la abertura antes de la administración de la toxina. Por ejemplo, la abertura del vaso sanguíneo se puede dilatar entre aproximadamente 2 veces y aproximadamente 5 veces el tamaño de la abertura antes de la administración de la toxina. En otro ejemplo, la abertura del vaso sanguíneo se puede dilatar entre aproximadamente 2 veces y aproximadamente 10 veces el tamaño de la abertura antes de la administración de la toxina. En otro ejemplo, la abertura del vaso sanguíneo se puede dilatar entre aproximadamente 2 veces y aproximadamente 30 veces el tamaño de la abertura antes de la administración de la toxina. En otro ejemplo, la abertura del vaso sanguíneo se puede dilatar entre aproximadamente 2 veces y aproximadamente 50 veces el tamaño de la abertura antes de la administración de la toxina. En otro ejemplo, la abertura del vaso sanguíneo se puede dilatar entre aproximadamente - 50 veces y aproximadamente 100 veces el tamaño de la abertura antes de la administración de la toxina . La dilatación de los vasos sanguíneos puede volver a los vasos más receptivos para procedimientos de intervecnión. Por ejemplo, la angioplastia por globo o la inserción de una endoprótesis u otra intervención mecánica es menos probable que dañe el vaso sanguíneo cuando el vaso sanguíneo se encuentre en su estado dilatado. Después de la administración de un agente al vaso sanguíneo, se pude permitir que el vaso sanguíneo se dilate antes del procedimiento, por ejemplo, antes de que se realice un procedimiento de angioplastia. Cuando se ha llevado a cabo la dilatación, se puede determinar el grado de dilatación que se ha producido por un médico o una persona habitualmente experta en la técnica. Por ejemplo, se puede utilizar topografía de coherencia óptica para realizar estas determinaciones . En otra teoría de operación no limitante, se considera que las toxinas descritas en la presente actúan sobre células que median inflamación, por ejemplo células endoteliales de vasos sanguíneos. Estas células presentan muchos mediadores de inflamación biológicamente activos los cuales pueden incluir bradicinina, óxido nítrico y un péptido intestinal vasoactivo. La liberación de este y otros mediadores puede contribuir a los sucesos que provocan la inflamación del vaso sanguíneo que puede contribuir a restenosis . Durante la secreción de exocitosis, los mediadores se pueden incluir en las vesículas las cuales se fusionan a la superficie interior de la membrana celular por lo que liberan el contenido de la vesícula al exterior de la célula. Se establece la teoría de que la interferencia con el procedimiento de exocitosis puede ser el modo de acción de las toxinas clostridiales . Se establece la teoría de que las toxinas clostridiales pueden funcionar evitando o reduciendo la secreción de moléculas productoras de inflamación en células de vasos sanguíneos u otras células por separación o al interferir de alguna otra manera con la función de las proteínas involucradas en el procedimiento secretor mediante el uso de un componente de cadena ligera, por ejemplo un componente de cadena ligera botulínico. Un componente de cadena pesada, por ejemplo HN puede también funcionar en ciertas modalidades de la presente invención, por ejemplo al ayudar en la liberación de un agente de la invención desde las vesículas intracelulares, por ejemplo, los endosomas. Sin desear limitar la invención a teoría o mecanismo de operación alguno, se establece la conjetura de que la inflamación puede contribuir, directa o indirectamente, - a restenosis. Al evitar o reducir la inflamación de los vasos sanguíneos que se pueden asociar con procedimientos cardiovasculares, por ejemplo, angioplastia por globo o inserción de una endoprótesis, la restenosis se puede reducir en un paciente quien ha experimentado un procedimiento cardiovascular. Otro mecanismo posible para la eficacia de la invención que se describe en la presente es un efecto de la toxina botulínica para inhibir la contracción de vasos sanguíneos mediado por las neuronas. El tratamiento previo con una toxina botulínica puede inhibir la constricción posterior al estirado. Dentro del alcance de la presente invención, es una toxina botulínica la cual es la toxina dirigida en donde la porción de unión nativa de la toxina sea sustituido en su totalidad o en parte por una porción de unión nueva que dirige la toxina a los receptores a2 en las neuronas simpáticas que inervan los vasos sanguíneos que van a ser tratados. Además, se puede inducir NO localmente para provocar dilatación. La neurotoxina para uso de acuerdo con la presente invención puede comprender un componente objetivo, un componente terapéutico y un componente de desplazamiento. En una modalidad, el componente objetivo comprende un fragmento de extremo carboxilo de una cadena pesada de una toxina butírica, una toxina tetánica o una toxina botulínica que incluye la toxina botulínica tipos A, B, C, D, E, F y G. En otra modalidad, el componente objetivo puede ser de origen de toxina no botulínica. Los ejemplos de componentes dirigidos que se pueden utilizar en la presente invención incluyen, pero no se limitan a anticuerpos, anticuerpos monoclonales, fragmentos de anticuerpos (Fab, F(ab) '2/ Fv, ScFv y otros fragmentos de anticuerpos o similares) , lectinas, hormonas, citocinas, factores de crecimiento, péptidos, carbohidratos, lípidos, gluconas (gliconas) y ácidos nucleicos. Otros componentes dirigidos que pueden ser útiles de acuerdo con la presente invención se describen en el documento WO 01/21213, el cual se incorpora en su totalidad en la presente como referencia. Un componente dirigido ejemplar para uso de acuerdo con la presente invención es la sustancia P o sustancias similares a la sustancia P. El uso de sustancia P, o sustancias similares a sustancia P como componentes dirigidos se describe en las solicitudes de patente de E.U. 09/489,667; 09/922,093 y 09/625,098, cada una de las cuales se incorpora en su totalidad en la presente como referencia. El componente terapéutico opera para separar selectivamente proteínas esenciales para reconocimiento y fijación de vesículas secretoras con la superficie citoplásmica de la membrana plasmática, y la fusión de las vesículas con la membrana plasmática. Un efecto del componente terapéutico puede ser interferir sustancialmente con la liberación de neurotransmisores desde una célula. Otro efecto para el componente terapéutico puede ser causar dilatación de los vasos sanguíneos. Otro efecto puede ser provocar parálisis fláccido de tejido de músculo liso. Otro efecto puede ser reducir o eliminar la secreción de las células, por ejemplo, células productoras de inflamación. En una modalidad, el componente terapéutico comprende una cadena ligera de una toxina butírica, una toxina tetánica, una toxina botulínica, por ejemplo, toxina botulínica tipo A, B, C, D, E, · F y G . El componente de desplazamiento puede facilitar la transferencia de por lo menos una parte de la neurotoxina, por ejemplo, el componente terapéutico dentro del citoplasma de la célula objetivo. En una modalidad, el componente de desplazamiento comprende un fragmento de extremo amino de una cadena pesada de una toxina butírica, una toxina tetánica, una toxina botulínica, por ejemplo toxina botulínica tipo A, B, C, D, E, F y G. De acuerdo con un aspecto amplio de esta invención, se pueden utilizar metodologías de ADN recombinante para producir componentes o agentes útiles de acuerdo con la invención. Estas técnicas pueden incluir etapas de obtención de genes clonados a partir de fuentes naturales o a partir de secuencias oligonucleotídicas sintéticas que pueden codificar para componentes de neurotoxina botulínica que incluyen cadenas pesadas de neurotoxina botulínica, cadenas ligeras o variantes de las mismas, cadenas modificadas de neurotoxina botulínica o fragmentos de las cadenas. Los genes clonados también pueden codificar para un componente objetivo. Los genes se pueden clonar, por ejemplo, en vectores de clonación, tales como fagos, plásmidos o fagémidos. Los vectores recombinantes se transforman en células hospedadoras, por ejemplo en una célula procariótica, por ejemplo, E. coli . Las proteínas se pueden expresar y después aislar utilizando técnicas convencionales. Se pueden utilizar genes de fusión que codifiquen para más de un componente de un agente. Por ejemplo, un componente dirigido y una cadena pesada de toxina botulínica o una cadena ligera, o un fragmento de una cadena pesada y un fragmento de una cadena ligera, se pueden producir a partir de un gen clonado único, como una proteína de fusión. De manera alternativa, los componentes individuales obtenidos a partir de técnicas recombinantes se pueden acoplar químicamente a otros componentes obtenidos a partir de fuentes similares u otras fuentes. Por ejemplo, un componente dirigido se puede acoplar a una cadena L recombinante o a una fusión recombinante LHN. Los enlaces entre los componentes botulínicos y las porciones dirigidas pueden incluir componentes separadores apropiados que también pueden ser codificados por ADN. En una modalidad, un LHN, el cual puede ser un híbrido de una cadena L y un HN de tipos diferentes de toxina botulínica, se expresa de manera recombinante como una proteína de fusión. De manera tal que un híbrido LHN se puede acoplar también a un componente objetivo. Se pueden incluir uno o más separadores entre L y ¾ o entre LHN y el componente dirigido . En otra modalidad de la invención, la cadena L de una neurotoxina botulínica o un fragmento de la cadena L que contiene la actividad de endopeptidasa se expresa de manera recombinante para producir un agente para uso de acuerdo con la presente invención. En otra modalidad de la invención, la cadena L de una neurotoxina botulínica, o un fragmento de la cadena L que contiene la actividad de endopeptidasa se expresa recombinantemente como una proteína de fusión con HN de la cadena H y el componente dirigido. La proteína de fusión expresada también puede incluir una o más regiones separadoras. Por ejemplo, la cadena L se puede fusionar a HN que a su vez se fusiona al componente dirigido. En otro ejemplo, el HN se puede fusionar a la cadena L que a su vez se fusiona al componente dirigido. Los componentes separadores se pueden expresar de manera recombinante entre parte o la totalidad de los componentes de un agente de la invención. En un ejemplo para producir un híbrido de LHN, la cadena L se obtiene a partir de la toxina botulínica tipo B y el segmento de extremo amina del fragmento de la cadena HN se obtiene a partir de la toxina botulínica tipo A. El fragmento HN de la toxina botulínica tipo A se produce de acuerdo con el método descrito por Shone C. C. , Hambleton, P., y Melling, J. (1987, Eur. J. Biochem. 167, 175-180) y la cadena L de la toxina botulínica tipo B de acuerdo con el método de Sathyamoorthy, V y DasGupta, B. R. (1985, J. Biol . Chem. 260, 10461-10466) . La cisteína libre en el segmento de extremo amina del fragmento de la cadena H de la toxina botulínica tipo A después se derivatiza por la adición de un exceso molar de 10 veces de disulfuro de dipiridilo seguido por incubación a 4°C durante la noche. El exceso de disulfuro de dipiridilo y el producto secundario de tiopiridina después se separan al extraer la sal de la proteína sobre una columna PD10 (Pharmacia) en PBS . La HN derivatizada después se concentra a una concentración proteínica que excede de 1 mg/ml antes de mezclarse con una porción equimolar de la cadena L de la toxina botulínica tipo B (>1 mg/ml en PBS) . Después de incubación durante la noche a temperatura ambiente, la mezcla se separa por cromatografía de exclusión de tamaño sobre Superóse 6 (Pharmacia) y las fracciones se analizan por SDS-PAGE. La LHN quimérica después está disponible para producir un agente conjugado que incluye un componente dirigido. El ejemplo descrito antes es simplemente ilustrativo de la invención. Al sintetizar los agentes, el acoplamiento de las porciones dirigidas a los componentes botulínicos, por ejemplo, las neurotoxinas botulínicas modificadas o fragmentos de las mismas, se puede obtener por medio de acoplamiento químico utilizando reactivos y técnicas conocidos por los expertos en la técnica. De esta manera, cualquier acoplamiento químico capaz de unir covalentemente las porciones dirigidas de los agentes de los componentes de neurotoxina botulínica y conocidos por los expertos en la técnica están abarcados por el alcance de esta solicitud. Las toxinas botulínicas modificadas las cuales tienen una persistencia biológica o una actividad biológica alterada se contemplan para uso en la presente invención. Las solicitudes de patentes de E.U.A. 09/620,840 y 09/910,346 incluyen ejemplos de composiciones y métodos para alterar la persistencia biológica de toxinas botulínicas. Estas dos solicitudes de patentes se incorporan en su totalidad en la presente como referencia. Se puede agregar un componente mejorador de persistencia biológica o un componente mejorador de actividad biológica, por ejemplo, un motivo basado en leucina, a una neurotoxina botulínica y de esta manera se puede incrementar la persistencia- biológica o la actividad biológica de la neurotoxina botulínica. De manera similar, se puede separar un componente mejorador de persistencia biológica de una neurotoxina botulínica y de esta manera se puede disminuir la persistencia biológica o la actividad biológica de la neurotoxina . La neurotoxina botulínica puede ser una neurotoxina híbrida. Por ejemplo, los componentes de direccionamíento, desplazamiento y terapéuticos de la neurotoxina se pueden derivar de serotipos de toxina botulínica diferentes. Por ejemplo, el polipéptido puede comprender una primera región de secuencia de aminoácidos derivada de Hc de una toxina botulínica tipo A, y una segunda región de secuencia de aminoácidos derivada de HN de toxina botulínica tipo B y una tercera región de secuencia de aminoácidos derivada de la cadena ligera de toxina botulínica serotipo E. Esto es únicamente un ejemplo y se incluyen dentro del alcance de la presente invención todas las otras posibles combinaciones. Los componentes de direccionamíento, desplazamiento y terapéutico de la neurotoxina se pueden modificar a partir de la secuencia que se presente de manera natural de la cual se deriva. Por ejemplo, la región de secuencia de aminoácidos puede tener por lo menos uno o más aminoácidos agregados, suprimidos o sustituidos, en comparación con una secuencia que se presente de manera natural.

Los aminoácidos que pueden ser sustituidos por aminoácidos contenidos en un componente mejorador de persistencia biológica incluyen alanina, asparagina, cisteína, ácido aspártico, ácido glutámico, fenilalanina, glicina, histidina, isoleucina, lisina, leucina, metionina, prolina, glutamina, arginina, serina, treonina, valina, triptofano, tirosina y otros aminoácidos que se presenten de manera natural así como aminoácidos que no son estándar. Los métodos de la presente invención proporcionan la reducción en la restenosis que varía de aproximadamente 1% a aproximadamente 100% en eficacia. Por ejemplo, la reducción puede ser entre aproximadamente 1% y aproximadamente 10%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 20%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 30%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 40%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 50%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 60%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 70%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 80%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 90%, o entre aproximadamente 10% y aproximadamente 100%. Generalmente, la dosis de neurotoxina que se va a administrar puede variar con la edad, la condición que se presenta y el peso del paciente que va a ser tratado. También se considerará la potencia de la neurotoxina. La potencia de la toxina se expresa como un múltiplo del valor DL50 para un ratón. Una "unidad" de toxina se puede definir como la cantidad de toxina que mata a 50% de un grupo de ratones que están libres de enfermedad antes de la inoculación con la toxina. Por ejemplo, la toxina botulínica A disponible comercialmente típicamente tiene una potencia tal que un nanogramo contiene aproximadamente 40 unidades de ratón. La potencia, o DL50 en humanos del producto de toxina botulínica A suministrada por Allergan Inc., bajo la marca comercial registrada "BOTOX" que se considera que es de aproximadamente 2,730 unidades de ratón. La neurotoxina se puede administrar en una dosis de aproximadamente 0.001 unidades hasta aproximadamente 100 unidades. En una modalidad se utilizan dosificaciones individuales de aproximadamente 0.01 unidades a aproximadamente 5 unidades. En otra modalidad se utilizan dosificaciones individuales de aproximadamente 0.01 unidades a aproximadamente 3 unidades. En una modalidad adicional, se utilizan dosificaciones individuales de aproximadamente 0.01 unidades a aproximadamente 1 unidad. En una modalidad adicional, se utilizan dosificaciones individuales de aproximadamente 0.05 unidades a aproximadamente 1 unidad. Aquellos habitualmente expertos en la técnica sabrán o podrán determinar fácilmente la manera de ajustar dosificaciones de neurotoxina de potencia mayor o menor en ciertas circunstancias. - Para toxinas botulínicas modificadas o variantes, la potencia se puede expresar como un múltiplo del valor DL50 de un agente de la invención para un ratón. Una "U" o una "unidad" de un agente se puede definir como la cantidad de toxina que mata al 50% de un grupo de ratones que están sin enfermedad antes de la inoculación con el agente. De manera alternativa, la potencia se puede expresar como el valor DL50 de un agente que puede producirse por una cantidad molar igual de una toxina botulínica no variante nativa. Preferiblemente, se administrará al paciente la menor dosificación terapéuticamente eficaz. La dosificación terapéutica más baja es aquella dosificación que resulta en el efecto deseado en el vaso sanguíneo del paciente al cual se le administra la toxina. Los métodos para determinar o cuantificar el efecto de una toxina en un vaso sanguíneo se pueden determinar por aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, el uso de topografía de coherencia óptica puede proporcionar una medida del efecto de dilatación de la toxina. En un tratamiento inicial, se puede administrar una dosificación baja para determinar la sensibilidad del paciente y la tolerancia a la neurotoxina. Se pueden realizar administraciones adicionales de la misma dosificación o de dosificaciones diferentes al vaso sanguíneo según sea necesario. Por ejemplo, se puede administrar una toxina a un vaso sanguíneo antes de un procedimiento, por ejemplo, antes de que se realice un procedimiento de angioplastia coronaria, o durante el procedimiento o bien después del procedimiento. El número de administraciones y la temporización de las administraciones se puede determinar por el médico que realice el tratamiento. Las neurotoxinas se pueden administrar, por ejemplo, por inyección en un vaso sanguíneo utilizando una aguja o por inyección sin aguja. La toxina también se puede administrar por aplicación de la toxina a la pared del vaso sanguíneo en una pomada, loción, ungüento, crema, emulsión o similar como sustratos de suministro. En una modalidad, se administra un agente de la invención al paciente por medio de inyección. Por ejemplo, el agente se puede inyectar en el sistema cardiovascular de un paciente. En particular, la inyección puede ser dentro de la arteria, por ejemplo la arteria coronaria. Típicamente, la inyección es dentro de la región del vaso sanguíneo en donde el vaso va a experimentar un procedimiento, por ejemplo un procedimiento para expandir mecánicamente el diámetro interno de un vaso sanguíneo ocluido. Se puede inyectar un agente dentro de la pared de un vaso sanguíneo desde el exterior del vaso sanguíneo o se puede inyectar un agente dentro de la pared de un vaso sanguíneo desde -el interior del vaso sanguíneo. Los métodos para inyección dentro de una pared de un vaso sanguíneo son bien conocidos por aquellos habitualmente expertos en la técnica. Por ejemplo, se puede inyectar un agente dentro de la pared del vaso sanguíneo desde el interior del vaso sanguíneo mediante el uso de un catéter que contenga una o más agujas para inyección. En los métodos de suministro de inyección sin aguja, las partículas de medicamento como microproyectiles se pueden recubrir con una neurotoxina y después se descargan en el vaso sanguíneo desde un dispositivo externo de administración. Dependiendo de la velocidad de descarga y la distancia desde el sitio de inyección, las partículas de medicamento penetran a través de las diferentes capas de los vasos sanguíneos. Conforme los microproyectiles penetran a través, o se depositan en las células de los vasos sanguíneos, se libera la neurotoxina. Se puede tener como objetivo de los microproyectiles capas individuales de los vasos sanguíneos . Las neurotoxinas también se pueden administrar utilizando una endoprótesis o un globo para angioplastia que está recubierto o impregnado con la toxina, por ejemplo toxina botulínica. Las patentes de E.U.A. Nos. 6,306,423 y 6,312,708 describen material que se puede impregnar, unir o incrustar con la toxina y el cual se puede utilizar para recubrir endoprótesis o globos para angioplastia. Además, el material se puede utilizar para formar endoprótesis que incluyen a la toxina. La descripción de cada una de estas dos patentes se incorpora en su totalidad en la presente como referencia. En una modalidad, el vaso sanguíneo que va a ser tratado primero se administra toxina botulínica antes de insertar la endoprótesis o globo que comprende toxina. En otra modalidad, el vaso sanguíneo que va a ser tratado no se le administra la toxina antes de insertar la endoprótesis o globo que comprende la toxina botulínica. Las administraciones se pueden repetir si es necesario. Como una línea de guía general, la toxina botulínica A administrada en un vaso sanguíneo puede producir un efecto de dilatación o antiinflamatorio, por ejemplo, durante aproximadamente 1 mes a aproximadamente 3 meses, o por ejemplo aproximadamente 3 a aproximadamente 6 meses, por ejemplo, de aproximadamente 6 meses a aproximadamente 1 año. Se puede permitir que el agente induzca su efecto en un vaso sanguíneo antes de un procedimiento, por ejemplo, antes de que se realice un procedimiento de angioplastia coronaria. Por ejemplo, se puede permitir que el agente dilate el vaso sanguíneo o impida la inflamación del vaso sanguíneo antes de que se inicie un procedimiento. Un médico habitualmente experto puede determinar el momento en que un agente ha ejercido su efecto en un vaso sanguíneo.

La invención ha sido descrita completamente y se establecen a continuación ejemplos que ilustran su práctica. No obstante, estos ejemplos no deben considerarse como limitantes del alcance de la invención, el cual se define por las reivindicaciones anexas.

EJEMPLOS Ejemplo 1 Uso de la toxina botulínica en angioplastia con globo en donde no se utiliza una endoprótesis Un paciente del género masculino de 54 años de edad se queja de dolores en el pecho en un cuarto de examen de urgencias . El paciente fuma 2 a 3 paquetes de cigarros al día, es de peso promedio y tiene antecedentes familiares de bloque arterial coronario. Se. le diagnostica al paciente con una oclusión de la arteria coronaria izquierda. Se utiliza un angiograma coronario para medir el estrechamiento de las arterias. Se calcula que el paciente padece de una oclusión al 80% de la arteria coronaria izquierda. Se programa a la persona para someterlo a un procedimiento de angioplastia con globo en la semana siguiente. El médico comienza el procedimiento al inyectar entre aproximadamente 0.05 unidades y aproximadamente 5 unidades de toxina botulínica tipo A dentro de la pared de la arteria coronaria izquierda del paciente. Después de la inyección, se - permite que la arteria se dilate. Posteriormente se inserta un catéter de globo no flexible de 3 milímetros dentro de la arteria femoral del paciente a través del área de la ingle/muslo superior. El catéter después se alimenta a través de la arteria hacia arriba dentro del corazón utilizando un monitor de video para guiar el procedimiento . Se hace avanzar un alambre de guía al lugar de la arteria bloqueada y el catéter de globo se hace pasar a través del alambre de guía dentro del área objetivo de bloqueo coronario. Cuando el catéter alcanza el área objetivo, se infla el globo durante un período de varios segundos a varios minutos. Después de desinflar el globo, la misma área se trata con uno o más inflados adicionales. El examen revela poco o nulo daño a la arteria tratada. Un año después del procedimiento no hay signos de restenosis y el paciente presenta buena salud.

Ejemplo 2 Uso de toxina botulínica en angioplastia con globo en donde se utiliza una endoprótesis Un paciente del género masculino de 62 años de edad quien tiene aproximadamente 30% de sobrepeso y presenta una concentración de colesterol sérico de aproximadamente 260 se queja de dolores en el pecho. Se le diagnostica al paciente con un bloqueo de la arteria coronaria y se programa para un procedimiento -de angioplastia coronaria transluminal percutánea . Se inyectan entre aproximadamente 0.01 unidades y aproximadamente 1 unidad de toxina botulínica directamente en la pared de la arteria en el área de bloqueo. Después de la inyección, se permite que la arteria se dilate. Se insertan posteriormente un catéter de globo flexible de 3 milímetros y una endoprotesis dentro de la arteria interósea del paciente a través de un área en la cintura. El catéter y la endoprotesis se suministran a través de la arteria interósea al área de bloqueo. Se hace avanzar un alambre de guía al lugar de la arteria bloqueada, y el catéter y la endoprotesis se hace pasar a través del alambre de guía dentro del área objetivo de bloqueo coronario. Cuando el catéter llega al área objetivo, se infla el globo y la endoprotesis se expande correspondientemente dejando abierta la arteria. Se desinfla el globo y se retira dejando en su lugar la endoprotesis expandida. No hay signos de daño a la arteria. Seis meses después del procedimiento no hay signo de restenosis y el paciente tiene una apariencia de buena salud.

E emplo 3 Uso de toxina botulínica y angioplastia con globo, con una endoprotesis para tratar un caso avanzado de restenosis A un paciente del género masculino de 49 años de edad se le diagnostica bloqueo arterial coronario como resultado de restenosis. El paciente tiene antecedentes de bloqueo arterial coronario y previamente ha experimentado un procedimiento de angioplastia con globo. Seis meses después del procedimiento al paciente se le diagnostica un caso avanzado de restenosis. El paciente experimenta un procedimiento de angioplastia coronaria transluminal percutánea en la cual se utiliza toxina botulínica tipo A, B, C, D, E, F o G. Entre aproximadamente 0.1 unidades y aproximadamente 4 unidades de toxina botulínica se inyectan en la pared del vaso sanguíneo en el área de restenosis. Después de la inyección, se permite que la arteria se dilate. Posteriormente se inserta un catéter de globo flexible de 4 mm y una endoprótesis dentro de la arteria femoral del paciente. El catéter y la endoprótesis después se suministran a través de la arteria al área de bloqueo utilizando un monitor de video para guiar el procedimiento. Se hace avanzar un alambre de guía al lugar de la arteria bloqueada y el catéter y la endoprótesis se hacen pasar a lo largo del alambre de guía dentro del área objetivo de bloqueo coronario. Cuando el catéter y la endoprótesis llegan al área objetivo, se infla el globo y la endoprótesis se expande de manera correspondiente manteniendo abierta la arteria. Se desinfla el globo y se retira dejando en su lugar a la endoprótesis expandida. Tres a seis meses después del procedimiento se reinyecta el vaso sanguíneo con la toxina botulínica en el área de la endoprótesis . Dos años después del procedimiento no hay signos de restenosis y el paciente presenta buena salud.

Ejemplo 4 Angioplastia con globo en donde se utiliza una endoprótesis impregnada con toxina botulínica A un paciente del género femenino de 58 años de edad se le diagnostica bloqueo arterial coronario. Se programa al paciente para un procedimiento de angioplastia coronaria transluminal percutánea en la cual se utiliza una endoprótesis impregnada con toxina botulínica tipo A, B, C, D, E, F o G. Se inyectan entre aproximadamente 0.1 unidades a aproximadamente 2 unidades de una toxina botulínica en la pared del vaso sanguíneo en el área de bloqueo. Después de la inyección se permite que se dilate la arteria. Posteriormente se inserta en la arteria femoral del paciente un catéter de globo flexible de 2 milímetros y una endoprótesis, la cual se recubre o se impregna con una toxina botulínica. El catéter y la endoprótesis se hacen pasar a través de la arteria femoral al área de bloqueo utilizando un monitor de video para guiar el procedimiento. Se hace avanzar un alambre de guía al lugar de la arteria bloqueada y se hacen pasar el catéter y la endoprotesis a lo largo del alambre de guía hacia el área objetivo de bloqueo coronario. Cuando el catéter y la endoprotesis llegan al área objetivo, se infla el globo y se expande de manera correspondiente la endoprotesis manteniendo abierta la arteria. Se desinfla el globo y se retira dejando en su lugar la endoprotesis expandida. Un año después del procedimiento no hay signos de restenosis y la paciente presenta buena salud.

Ejemplo 5 Angioplastia con globo en donde se utiliza una endoprotesis autoexpandible impregnada con toxina botulínica A un paciente del género masculino de 50 años de edad se le diagnostica bloqueo arterial coronario de la arteria coronaria izquierda y se programa para un procedimiento de angioplastia coronaria transluminal percutánea en el cual se utiliza una endoprotesis autoexpandible impregnada con toxina botulínica. El médico comienza el procedimiento al inyectar entre aproximadamente 0.1 unidades y aproximadamente 5 unidades de toxina botulínica tipo A en la pared de la arteria coronaria izquierda del paciente. Después de la inyección, se permite que la arteria se dilate. Después se inserta una endoprotesis autoexpandible impregnada con la toxina botulínica, con un catéter dentro de la arteria interósea común del paciente a través del área de la cintura. El catéter y la endoprótesis se hacen pasar a través de la arteria interósea de bloqueo. Se hace avanzar un alambre de guía al lugar de bloqueo de la arteria haciendo avanzar la endoprótesis autoexpandible impregnada con toxina botulínica dentro del área objetivo de bloqueo coronario. Cuando el catéter alcanza el área objetivo, la endoprótesis se expande dejando abierta la arteria. Dos años después del procedimiento no hay signo de restenosis y el paciente presenta buena salud.

Ejemplo 6 Inyección de toxina botulínica mediante el uso de sistema de inyección con catéter Una paciente del género femenino de 51 años de edad se queja de dolor en el pecho. La paciente presenta sobrepeso y tiene una concentración de colesterol sérico de aproximadamente 270. A la paciente se le diagnostica con bloqueo de arteria coronaria. Se utiliza un angiograma coronario para medir el estrechamiento de las arterias. Se calcula que el paciente sufre de 70% a 90% de oclusión de la arteria coronaria. Se le programa para un procedimiento de angioplastia coronaria transluminal percutánea. Se inyectan directamente entre aproximadamente 0.01 unidades y aproximadamente 3 unidades de toxina botulínica dentro de la pared de la arteria en el área del bloqueo. Para inyección, se inserta un catéter el cual incluye una o más agujas de inyección a través de la arteria femoral del paciente a través del área de la ingle/muslo superior dentro del área de bloqueo coronario. En ese lugar se inyecta la toxina botulínica dentro de la pared interior del vaso sanguíneo ocluido. Después de la inyección de la toxina botulínica, se permite que la arteria se dilate. Después se insertan en la arteria femoral del paciente un catéter con un globo flexible de 3 milímetros y una endoprótesis impregnada con toxina botulínica tipo A. El catéter y la endoprótesis se suministran a través de la arteria femoral al área de bloqueo utilizando un monitor de video para guiar el proceso. Se hace avanzar un alambre de guía al lugar de la arteria bloqueada y el catéter y la endoprótesis se hacen pasar a través del alambre de guía dentro del área objetivo de bloqueo coronario. Cuando el catéter alcanza el área objetivo, se infla el globo y la endoprótesis se expande correspondientemente dejando abierta la arteria. Se desinfla el globo y se retira, dejando en su lugar la endoprótesis expandida. No existen signos de daño al vaso sanguíneo. Un año después del procedimiento no hay signo de restenosis y la paciente presenta buena salud. Mi invención también incluye dentro de su alcance el uso de una neurotoxina, tal como una toxina botulínica, y la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad cardiovascular. Todas las referencias, artículos, patentes, solicitudes y publicaciones que se establecen en lo anterior se incorporan en la presente como referencia en su totalidad. En consecuencia, el espíritu y alcance de las siguientes reivindicaciones no debe estar limitado a las descripciones de las modalidades preferidas que se establecen en lo anterior. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (20)

1. REIVINDICACIONES
2. Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un método para tratar una enfermedad cardiovascular en un mamífero, el método está caracterizado porque comprende la etapa de administrar una cantidad eficaz de una toxina botulínica directamente a un vaso sanguíneo de un mamífero y de esta manera tratar una enfermedad cardiovascular. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el mamífero ha experimentado o experimentó un procedimiento cardiovascular.
3. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el tratamiento de la enfermedad cardiovascular evita la restenosis .
4. 4. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el procedimiento cardiovascular es un procedimiento cardiovascular arterial.
5. 5. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el procedimiento cardiovascular es un procedimiento cardiovascular arterial coronario .
6. 6. El método de conformidad con la reivindicación 27 caracterizado porque el procedimiento cardiovascular incluye angioplastia.
7. 7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la angioplastia no incluye la etapa de insertar una endoprótesis en el vaso sanguíneo .
8. 8. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la administración incluye la etapa de inyectar la toxina botulínica dentro de una pared del vaso sanguíneo.
9. 9. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la etapa de administración se lleva a cabo utilizando una endoprótesis recubierta o impregnada con la toxina botulínica.
10. 10. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la toxina botulínica reduce o elimina el daño a un vaso sanguíneo.
11. 11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la toxina botulínica reduce o elimina el daño a un vaso sanguíneo al dilatar el vaso sanguíneo .
12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la toxina botulínica reduce o elimina el daño a un vaso sanguíneo al reducir o eliminar la inflamación del vaso sanguíneo.
13. 13. E-1 método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la toxina botulínica se selecciona del grupo que consiste de la toxina botulínica tipos A, B, C, D, E, F, G mezclas de las mismas y combinaciones de las mismas.
14. 14. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la toxina botulínica es toxina botulínica tipo A.
15. 15. Un método para evitar restenosis en un vaso sanguíneo en un mamífero, que se puede presentar posterior a un procedimiento cardiovascular, el método está caracterizado porque comprende la etapa de administrar a un mamífero una cantidad eficaz de una toxina botulínica y de esta manera impedir la restenosis en un vaso sanguíneo.
16. 16. Un método para evitar restenosis en un mamífero al evitar el daño en un vaso sanguíneo el cual se puede presentar durante o posterior a un procedimiento cardiovascular, el método está caracterizado porque comprende la etapa de administrar a un mamífero una cantidad eficaz de una toxina botulínica y de esta manera impedir el daño en el vaso sanguíneo e impedir la restenosis.
17. 17. Un método para evitar restenosis en un mamífero al impedir la inflamación en un vaso sanguíneo, lo cual se puede presentar durante o posterior a un procedimiento cardiovascular, el método está caracterizado porque comprende la etapa de administrar a un mamífero una cantidad eficaz de una toxina botulínica y de esta manera impedir la inflamación en el vaso sanguíneo e impedir restenosis .
18. 18. Un método para evitar la restenosis en un mamífero al dilatar un vaso sanguíneo antes o durante un procedimiento cardiovascular, el método está caracterizado porque comprende la etapa de administrar a un mamífero una cantidad eficaz de una toxina botulínica y de esta manera dilatar el vaso sanguíneo e impedir restenosis.
19. 19. Una composición para uso en un procedimiento cardiovascular caracterizada porque comprende una endoprótesis con toxina botulínica unida o incrustada en la misma .
20. 20. La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada porque la toxina botulínica es toxina botulínica tipo A.