MXPA04003624A - Mezclas analogas de ciclosporina y su uso como agentes inmunolomoduladores. - Google Patents

Mezclas analogas de ciclosporina y su uso como agentes inmunolomoduladores.

Info

Publication number
MXPA04003624A
MXPA04003624A MXPA04003624A MXPA04003624A MXPA04003624A MX PA04003624 A MXPA04003624 A MX PA04003624A MX PA04003624 A MXPA04003624 A MX PA04003624A MX PA04003624 A MXPA04003624 A MX PA04003624A MX PA04003624 A MXPA04003624 A MX PA04003624A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
isomer
cyclosporin
isomeric mixture
mixture
analogous
Prior art date
Application number
MXPA04003624A
Other languages
English (en)
Inventor
T Foster Robert
Original Assignee
Isotechnika Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Isotechnika Inc filed Critical Isotechnika Inc
Publication of MXPA04003624A publication Critical patent/MXPA04003624A/es

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/645—Cyclosporins; Related peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A61K38/13—Cyclosporins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/4858—Organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)

Abstract

El invento esta dirigido hacia mezclas isomeras de analogos de ciclosporina que son estructuralmente similares a la ciclosporina A. Las mezclas poseen eficacia afianzada y reducida toxicidad con respecto a los isomeros individuales y por sobre ciclosporinas que ocurren naturalmente y derivados de ciclosporina actualmente conocidos. Las presentaciones del presente invento estan dirigidas hacia cis y trans-isomeros de analogos de ciclosporina A que se mencionan como ISATX247, y sus derivados. Las mezclas de isomeros ISATX247 exhiben una combinacion de mayor potencia y menor toxicidad con respecto a ciclosporinas que ocurren naturalmente y que se conocen actualmente. Los isomeros ISATX247 y derivados alcalinados, arilados y deuterados se sintetizan mediante vias estereo selectivas en las que las condiciones particulares de una reaccion determina el grado de estereo-selectividad. Las vias estereo-selectivas podran utilizar una reaccion Wittig, o un reactivo organo-metalico que comprende elementos inorganicos tales como boro, silicon titanio, y litio. La tasa de isomeros en una mezcla podra variar de entre alrededor de 10 a 90 por ciento segun peso del somero (E) hasta alrededor de 90 a 10 por ciento segun peso de somero (Z), de acuerdo al peso total de la mezcla.

Description

MEZCLAS ANÁLOGAS DE CICLOSPORINA Y SU USO COMO AGENTES INMUNOMODULADORES SOLICITUDES RELACIONADAS CON REFERENCIA CRUZADA Esta solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud de los Estados Unidos, Nos. de Serie 60/346,201 presentada el 19 de Octubre del 2001 , y 60/370,596 presentada el 5 de Abril del 2002. La divulgación de cada una de estas solicitudes queda incorporada por referencia en este documento, en su integridad.
CAMPO DE LA INVENCIÓN El presente invento está orientado hacia mezclas isómeras de análogos de ciclosporina, que se relacionan con la ciclosporina A. Se contempla que las mezclas poseen una eficacia afianzada y/o menor toxicidad con respecto a los isómeros individuales y sobre las ciclosporinas que se producen naturalmente y que se conocen en la actualidad y sus derivados. Además, el presente invento se relaciona con las vías sintéticas disponibles para producir isómeros de análogos de ciclosporina A, donde dichas vías varían en el grado de estéreo-selectividad, dependiendo de las condiciones específicas de reacción. Referencias: Las siguientes referencias se citan mediante números de patentes o de solicitudes o en paréntesis según autor y año en las partes pertinentes de esta especificación: 1. Bennet, W.M., "The nephrotoxicity of new and oíd immunosuppressive drugs," Falla renal, Vol. 20, páginas 687-90 (1998). 2. J.-F. Biellmann, J.-B. Ducep en "Allylic and benzylic carbanions sustituted by hereoatoms," Ogranic Reactions, Vol. 27 (Wiley, New York, 1982), p.9. 3. H.J. Carlsen et al. en "A Greatly Improved Procedure for Ruthenium Tetroxide Catalyzed Oxidations of Organic Compounds," J. Org. Chem. Vol. 46, No. 19, páginas 3736-3738 (1981 ).
- - . T. Chang, L.Z. Benet, M.F. Hebert, "The effect of water-soluble vitamin E on cyclosporine pharmacokinetics in healthy volunteers," Clin. Pharmacol. Ther., Volumen 59, páginas 297-303 (1996). 5. M.K. Eberle, F. Nuninger, "Synthesis of the main metabolite (OL-17) of cyclosporin A," J. Org. Chem. Vol. 57, páginas 2689-2691 (1992). 6. E. Ehlinger, P. Magnus en "Silicon in synthesis. 10. The (trimethylsilyl)allyl anión: A ß-acyl anión equivalent for the conversión of aldehydes and ketones into ?-lactones." J. Am. Chem. Soc, Vol. 102, No. 15, páginas 5004-501 1 (1980). 7. D.S. Fruman, C.B. Klee, B.E. Bierer, S.J. Burakoff, "Calcineurin phosphatase activity in T lymphocytes is inhibited by FK506 and cyclosporin A," Proc. Nati. Acad. Sci., Estados Unidos, Volumen 89, páginas 3686-90 (1992). 8. Granelli-Piperno, L. Andrus, R.M. Steinman, "Lymphokine and nonlymphokine mRNA levéis in stimulated human cells: kinetics, mitogen requirements, and effects of cyclosporin A," J. Exp. Med., Vol. 163, página 922 (1986). 9. J.R. Hanson, 'The Protection of Alcohols," Grupos Protectores en Síntesis Orgánica, Capítulo 2, páginas 24-25 (Sheffieid Academic Press, Sheffieid, Inglaterra, 1999). 10. M.F. Hebert, J.P. Roberts, T. Prueksaritanont, L.Z. Benet, "Bioavailability of cyclosporin with concomitant rífampin administration is markedly less than predicted by hepatic enzyme induction," clin. Pharmacol. Ther., Vol. 52, páginas 453-7 (1992). 1 1. R.W. Hoffmann, H.-J Zei, "Stereoselective synthesis of alcohols. 8.
Diastereoselective synthesis of ß-methylhomoallyl alcohols via crotylboronates," J. Org. Chem. Vol. 46, páginas 1309-1314 (1981 ). 12. P.F. Hurdlik y D. Peterson en "Stereospecific Olefin-Forming Elimination Reactions of ß-Hydroxisilanes," J. Am. Chem. Soc, Vol. 97, No. 6, páginas 1464-1468 (1975). - - 13. Y. Ikeda, J. Ukai, N. Ikeda, H. Yamamoto, "Steroselectíve synthesis of (Z)-and (E)-1 ,3-alkadienes from aldehydes using organotitanium and lithium reagents." Tetrahedron, Vol. 43, No. 4, páginas 723-730 (1987). 14. Kobel et al., Europ. J. Applied Microbiology and Biotechnology, Vol. 14, páginas 237-240 (1982) 15. .T. Hertz en Organotitanium Reagents in Organic Synthesis (Springer-Verlag, Berlín, 1986), páginas VII, 148-149, y 164-165. 16. Rich et al. (J. Med. Chem., Vol. 29, página 978 (1986) 17. J.McMurry, Organic Chemistry, 5ta. edición (Brooks/Cole, Pacific Grave, 2000), páginas 780-783. 18. S.L. Schreiber, G.R. Crabtree, "The mechanism of action of cyclosporin A and FK506," Immunol. Today, Vol. 13, páginas 136-42 (1992). 19. Sketris, R. Yatscoff, P. Keown, D.M. Canafax, M.R. First, D.W. Holt, T.J. Schroeder, M. Wright, "Optimizing the use of cyclosporine" 20. M.B. Smith y J. March, March's Advanced Organic Chemistry (Wiley, New York, 2001 ), páginas 144-147. 21. Streitwieser, C.H. Heat cock, Introduction to Organic Chemistry, segunda edición ( acMillan, New York, 1981), páginas 845-846. 22. J.A. Thliveris, R.W. Yatscoff, M.P. Lukowski, K.R. Copeland, J.R. Jeffery, G.F. urphy, "Chronic ciclosporin nephrotoxicity: A rabbit model," Nefron. Vol 57, páginas 470-6 (1991 ) 23. J.A. Thliveris, R.W. Yatscoff, M.J. Mihatsch, "Chronic cyclosporine- induced nephrotoxicity: A rabbit model," Transplantes. Vol 57, página 774-6 (1994) 24. S.E. Thomas en Organic Synthesis: The Roles of Boron and Silicon (Oxford University Press, New York, 1991 ), páginas 84-87. 25. Traber et al., Helv. Chim. Acta, Vol 60, páginas 1247-1255 (1977) 26. Traber et al., Helv. Chim. Acta, Vol 65, páginas 1655-1667 (1982). 27. D.S. Tsai, D.S. Matteson, "A stereocontrolled synthesis of (Z) and (E) terminal dienes from pinacol (E)-1-trimethylsilyl-1-propene-3- - - boronate/Tefrafretfron Letters, Vol. 22, No. 29, páginas 2751 -2752 (1981 ). 28. H.A. Valantine, J.S. Schroeder, "Recent advances in cardiac transplantation" [editorial, comentario], N. Engl. J. Meó., Vol. 333, No. G0, páginas 660-1 (1995). 29. von Wartburg et al., Progress in Allergy, Vol. 38, páginas 28-45 (1986). 30. Wenger, Transpl. Proce., Volumen 15, Suplemento 1 , página 2230 (1983) 31. Wenger, Angew. Chem. Int. Ed., Vol. 24, página 77 (1985) 32. Wenger, Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, Vol. 50, p. 125 (1986). 33. Patente de los Estados Unidos No. 4,108,985. 34. Patente de los Estados Unidos No. 4,160,452 35. Patente de los Estados Unidos No. 4,210,581 36. Patente de los Estados Unidos No. 4,220,641 37. Patente de los Estados Unidos No. 4,256,108 38. Patente de los Estados Unidos No. 4,265,874. 39. Patente de los Estados Unidos No. 4,288,431 40. Patente de los Estados Unidos No. 4,384,996 41. Patente de los Estados Unidos No. 4,396,542 42. Patente de los Estados Unidos No. 4,554,351 43. Patente de los Estados Unidos No. 4,771 ,122 44. Patente de los Estados Unidos No. 5,284,826 45. Patente de los Estados Unidos No. 5,525,590 46. Publicación de Patente Europea No. 0 034 567 47. Publicación de Patente Europea No. 0 056 782 48. Publicación de Patente Internacional No. WO 86/02080 49. Publicación de Patente Internacional No. WO 99/18120. La divulgación de cada una de las anteriores patentes, solicitudes de patentes y publicaciones queda incorporada por referencia en su integridad en este documento.
- - ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los derivados de la ciclosporina comprenden una clase de polipéptidos cíclicos consistentes de once amino ácidos que se producen a manera de metabolitos secundarios por las especies de hongos Tolypocladium inflatum Gams. Se ha observado que inhiben reversiblemente linfocitos inmuno-competentes, en particular linfocitos T, en la fase G0 o Gi del ciclo celular. Se ha observado también que los derivados de la Ciclosporina inhiben reversiblemente la producción y liberación de linfocinos (Granelli-Piperno et al., 1986). Aunque se conoce cierto número de derivados de la ciclosporina, la ciclosporina A es la que más ampliamente se utiliza. Los efectos supresores de la ciclosporina se relacionan con la inhibición de eventos de activación mediados por células T. Esta supresión se logra enlazando la ciclosporina con la proteína intracelular ubicua, ciclofilina. Este complejo a su vez, inhibe la actividad serina-treonina fosfatasa que depende del calcio y calmodulín de la calcineurina de la enzima. La inhibición de calcineurina evita la activación de factores de transcripción tales como NFATp c y NF-xB, que son necesarios para la inducción de los genes citocinos (IL-2, IFN-y, IL-4, y GM-CSF) durante la activación de células T. La ciclosporina también inhibe la producción de linfocinos por parte de células asistentes T in vitro y detiene el desarrollo de células CD8 y CD4 maduras en el timo (Granelli-Piperno et al., 1986). Otras propiedades in vitro de la ciclosporina incluyen la inhibición de linfocitos T y linfocitos T citotóxicos que producen IL-2, inhibición de IL-2 liberado por células T activadas, inhibición de linfocitos T de descanso en respuesta a linfocino aloantígeno y exógeno, inhibición de la producción de IL-2, e inhibición de la activación mitógena de linfocitos T productores de IL-2 (Granelli-Piperno, et al., 1986). La ciclosporina es un potente agente inmuno-supresor que demostradamente suprime la inmunidad humoral y reacciones inmunes mediadas por células, tales como rechazo a los injertos, retardo de la hipersensibilidad, encefalomielitis alérgica experimental, artritis adyuvante de Freund e injerto versus enfermedad anfitriona. Se utiliza en la profilaxis del - - rechazo de órganos con posterioridad al transplante de un órgano; para el tratamiento de artritis reumatoide; para el tratamiento de soriasis; y para el tratamiento de otras enfermedades auto-inmunes que incluyen a la diabetes tipo I, enfermedad de Crohn, lupus y similares. Desde el descubrimiento original de la ciclosporina, se han aislado e identificado una amplia gama de ciclosporinas que ocurren naturalmente, y muchas otras ciclosporinas no-naturales se han preparado a través de medios enteramente sintéticos o parcialmente sintéticos, o mediante la aplicación de técnicas de cultura modificadas. La clase comprendida por las ciclosporinas es por lo tanto ahora substancial e incluye, por ejemplo, las ciclosporinas A hasta Z que ocurren naturalmente [c.f. Traber et al. (1977); Traber et al. (1982); Kobel et al. (1982); y von Wartburg et al. (1986)], así como varios derivados no-naturales de la ciclosporina y ciclosporinas artificiales o sintéticas que incluyen dehidro e iso-ciclosporinas; ciclosporinas derivadas (por ejemplo, en las que el átomo 3'-0 del residuo MeBmt es acilado o se introduce un substituto ulterior en el átomo a de carbono del residuo sarcosil en posición 3); las ciclosporinas en las que el residuo MeBmt está presente en forma isómera (es decir, en la que la configuración en todas las posiciones 6' y T del residuo MeBmt es cis en lugar de trans); y ciclosporinas en las que los amino ácidos variantes son incorporados en posiciones específicas dentro de la secuencia péptida empleando, por ejemplo, el método sintético total para la producción de ciclosporinas desarrolladas por R. Wenger — véase por ejemplo Traber et al. (1977), Traber et al. (1982) y Kobel et al. (1982); Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,108,985, 4,210,581 , 4,220,641 , 4,288,431 , 4,554,351 , y 4,396,542; Publicaciones de Patentes Europeas Nos. 0 034 567 y 0 056 782; Publicación de Patente Internacional No. WO 86/02080; Wenger (1983); Wenger (1985); y Wenger (1986). Los análogos a la ciclosporina A que contienen amino ácidos modificados en la posición 1 son reportados por Rich er al. (1986). Análogos inmuno-supresores, anti-inflamatorios y anti-parasíticos de la ciclosporina A se describen en las patentes de los Estados Unidos Nos. 4,384,996; 4,771 ,122; 5,284,826; y 5,525,590, todas asignadas a Sandoz. Otros análogos de la ciclosporina fueron revelados en WO 99/18120 asignada - - a Isotechnika. Los términos Ciclosporin, ciclosporin, ciclosporina, y Ciclosporina son intercambiables y se refieren a la ciclosporina. Existen numerosos efectos perjudiciales asociados con la terapia que emplea ciclosporina A, incluyendo nefrotoxicidad, hepatotoxicidad, cataratogénesis, hirsutismo, paretesis, e hiperplasia gingival para nombrar unos cuantos (Sketris et al, 1995). De estos, la nefrotoxicidad es uno de los más serios efectos perjudiciales relacionados con la dosificación, que resultan de la administración de ciclosporina A. Productos médicos de liberación inmediata de la ciclosporina A (por ejemplo Neoral® y Sandimmune®) pueden causar nefrotoxicidades y otros efectos tóxicos colaterales debidos a su rápida liberación y la absorción de altas concentraciones del medicamento en la sangre. Se postula que las concentraciones máximas de la droga están asociadas con efectos colaterales (Bennet, 1998). Se desconoce cuál es el mecanismo exacto mediante el cual la ciclosporina A ocasiona daños renales; sin embargo, se propone que un incremento en los niveles de substancias vasoconstrictoras del riñon conducen a la vasoconstricción de las arteriolas glomerulares aferentes. Esto puede resultar en isquemia renal, una disminución en la tasa de filtración glomerular y, a largo plazo, fibrosis intersticial. Cuando la dosis se reduce u otro agente inmuno-supresor se sustituye, la función renal mejora (Valantine y Schroerder, 1995). Consecuentemente, existe necesidad de agentes inmuno-supresores que sean eficaces y disminuyan la toxicidad. En WO 99/18120 se divulgan análogos de ciclosporina que contienen amino ácidos modificados en la posición 1 , que han sido asignados al solicitante de la presente aplicación, los mismos que quedan incorporados en este documento en su integridad. También asignados a ese solicitante es la Solicitud de Patente Provisional de los Estados Unidos No. 60/346,201 , en la que los aplicantes divulgan un análogo preferido de la ciclosporina A en particular, al que se denomina "ISATx247." Este análogo es estructuralmente idéntico a la ciclosporina A, con la excepción de la modificación del residuo 1 de amino ácido. Los aplicantes descubrieron que ciertas mezclas de isómeros cis y trans del ISATx247 exhibieron una combinación de potencia afianzada, y/o - - disminuyeron la toxicidad con respecto a las ciclosporinas que ocurren naturalmente y que son conocidas en este momento. Ciertos derivados alquilados, arilados y deuterados del ISATx247 también fueron divulgados. Típicamente, las mezclas divulgadas en la Solicitud de Patente Provisional de los Estados Unidos No. 60/346,201 cubren la gama comprendida entre alrededor del 10 a alrededor del 90 por ciento por peso del frans-isómero y alrededor del 85 al 15 por ciento del c/'s-isómero; en otra presentación, la mezcla contiene alrededor del 25 al 75 por ciento según peso del frans-isómero y alrededor del 75 a alrededor del 25 por ciento según peso del c/'s-isómero; en otra presentación, la mezcla contiene alrededor del 35 al 65 por ciento según peso del frans-isómero y alrededor del 65 al 35 por ciento según peso del cis-isómero; en otra presentación, la mezcla contiene alrededor del 45 al 55 por ciento según peso del frans-isómero y alrededor del 55 al 45 por ciento del c/s-isómero. En otra presentación, la mezcla isómera es una mezla de ISATx247 que comprende alrededor del 45 al 50 por ciento según peso del frans-isómero y alrededor del 50 al 55 por ciento según peso del c/'s-isómero. Estos porcentajes según peso se basan en el peso total de la composición. En otras palabras, una mezcla pudiera contener el 65 por ciento según peso del isómero (E) y 35 por ciento según peso del isómero (Z), o viceversa. En una nomenclatura alterna, el c/s-isómero también podrá ser descrito como un (Z)-isómero, y el frans-isómero podría también denominarse un (E)-isómero. Concordantemente, existe una necesidad en el arte de contar con métodos de preparación de análogos de ciclosporina, incluyendo isómeros de ISATX247. Se precisa contar con vías sintéticas que produzcan compuestos enriquecidos de los isómeros individuales, así como mezclas de los isómeros que tengan una tasa deseada de los dos isómeros. También se precisa contar con métodos para preparar derivados del ISATx247.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN La ciclosporina y sus análogos son miembros de una clase de polipéptidos cíclicos que tienen una potente actividad inmuno-supresora. Pese - - a las ventajas que estas drogas ofrecen con respecto a su actividad inmuno-supresora, anti-inflamatoria y anti-parasítica, existen numeroso efectos adversos asociados con la terapia de ciclosporina A, que incluyen nefrotoxicidad y hepatotoxicidad. Consecuentemente, existe una necesidad de contar con nuevos agentes inmuno-supresores que retengan la actividad farmacológica que tiene un compuesto de la ciclosporina A que ocurre naturalmente, pero sin uno o más de los efectos colaterales tóxicos asociados.
Las presentaciones del presente invento proporcionan ciertas mezclas de cis y frans-isómeros de análogos de ciclosporina A, que son farmacéuticamente útiles. Un análogo preferido se denomina ISATx247. Mezclas de isómeros ISATx247 exhiben una combinación de potencia afianzada y reducida toxicidad sobre las ciclosporinas que se producen naturalmente y que se conocen en la actualidad. El presente invento se basa, en parte, en el descubrimiento de que ciertas mezclas isómeras de análogos de ciclosporina proporcionan efectos inmuno-supresores superiores sin uno o más de los efectos perjudiciales asociados con la ciclosporina A. En particular, hemos encontrado inesperadamente que las mezclas isómeras (es decir, mezlas tanto de cis como trans-isómeros) que varían entre 10:90 hasta 90:10 (trans y cis) de análogos de ciclosporina modificada en el residuo 1 de amino ácido proporcionan superior eficacia y seguridad. Ejemplos de tales análogos fueron divulgados en WO 99/18120, e incluyen compuestos deuterados y no-deutrados. En particular, se ha encontrado que las mezclas en el rango de alrededor de 45:55 a alrededor de 50:50 (trans- a cis-) y en el rango de alrededor del 50% hasta alrededor del 55% trans y alrededor del 45% hasta alrededor del 50% cis son particularmente eficaces. Más aún, se ha demostrado que estas mezclas de isómeros exhiben una combinación de potencia superior y menor toxicidad con respecto a aquellas ciclosporinas que se producen naturalmente y otras que se conocen así como sus derivados. Un análogo particularmente preferido (que se menciona aquí como "ISATx247") es estructuralmente similar a la ciclosporina A excepto por un grupo funcional modificado en la periferia de la molécula, en el residuo 1 de amino - - ácido. La estructura de esta mezcla análoga isómera en particular comparada con la estructura de la ciclosporina A es: H H HC H H3C H / ISATx247 CICLOSPORINA Se pueden utilizar las mezclas isómeras, entre otras, para inmuno-supresión, y la atención de varios desórdenes inmunológicos, enfermedades y condiciones, incluyendo la prevención, control, atenuación y tratamiento de los mismos. De acuerdo con las presentaciones de este invento, los isómeros ISATx247 (y sus derivados) se sintetizan mediante vías estéreo-selectivas que podrían variar en su grado de selectividad. Las vías estéreo-selectivas rinden compuestos que están enriquecidos ya sea por cualquiera de los isómeros (E) y (Z), y estos compuestos pueden combinarse de tal manera que la mezcla resultante tenga una tasa deseada de los dos isómeros. Como alternativa, las condiciones de las reacciones de una vía estéreo-selectiva podrá ser diseñada para producir la tasa deseada directamente en una mezcla preparada. El - - porcentaje de un isómero u otro en una mezcla puede verificarse mediante la utilización de espectroscopia de resonancia magnética (NMR) u otras técnicas bien conocidas en el arte. Cada una de las vías procede típicamente con la aplicación de un grupo protector para un sensitivo grupo funcional de alcohol. En una presentación el alcohol se protege a manera de acetato; en otras presentaciones los grupos protectores son esteres de benzoato o ésteres de sililo. El compuesto protegido podría entonces servir como un precursor para una serie de vías sintéticas estéreo-selectivas que incluyen algunas que utilizan agentes de reacción que contienen fósforo como los que participan en una reacción Wittig, y elementos orgánicos como miembros de agentes de reacción organometálicos. Este último tipo puede proceder a través de seis estados de transición anillados en los que la obstaculización estérica dicta el resultado configurativo. Muchos agentes de reacción organometálicos están disponibles, incluyendo aquellos que exhiben elementos inorgánicos tales como boro, silicón, titanio, litio y sulfuro. Los isómeros independientes pueden ser preparados a partir de precursores únicos o múltiples. La tasa de isómeros (E) a (Z) en cualquier mezcla, hayan sido éstos producidos estéreo-selectivamente o no, podrán adoptar un amplio rango de valores. Por ejemplo, la mezcla podría comprender desde alrededor del 10 al 90 por ciento del isómero (E) hasta alrededor del 90 hasta el 10 por ciento del isómero (Z). En otras presentaciones, la mezcla podría contener desde aproximadamente 15 a 85 por ciento según peso del isómero (E) alrededor de 85 a 15 por ciento del isómero (Z); en otra presentación, la mezcla contiene alrededor del 25 al 75 por ciento según peso de isómero (E), y alrededor del 75 al 25 por ciento según peso del isómero (Z); en otra presentación, la mezcla contiene alrededor del 35 al 65 por ciento según peso del isómero (E) y alrededor 65 a 35 por ciento según peso del isómero (Z); en otra presentación, la mezcla contiene alrededor del 45 al 55 por ciento según peso del isómero (E) y alrededor de 50 a 55 por ciento según peso del isómero (Z). Estos porcentajes según peso se basan en el peso total de la composición, y se entenderá que la suma del porcentaje de peso del isómero (E) y del isómero - 12 - (Z) corresponde al 100 por ciento de peso. En otras palabras, una mezcla podría contener el 65 por ciento según peso del isómero (E) y el 35 por ciento según peso del isómero (Z), o vice-versa. En un aspecto, el invento está dirigido hacia un compuesto que comprende una mezcla isómera de un análogo de la ciclosporina modificado en el residuo 1 de amino ácido, en el que el rango de la mezcla isómera corresponde a desde alrededor de 10:90 hasta alrededor de 90:10 (trans- a c/'s-). Un compuesto preferido (mencionado aquí como "ISATx247") comprende una mezcla isómera de isómeros E- y Z-: MeLe MeLe Isómero E Isómero Z Típicamente, la mezcla isómera comprende alrededor del 10% hasta alrededor del 90% del isómero E y alrededor del 90% hasta alrededor del 10% del isómero Z, preferentemente, la mezcla contiene alrededor del 15% hasta alrededor del 85% del isómero E y alrededor del 85% hasta alrededor del 15% del isómero Z, más preferentemente la mezcla contiene alrededor del 25% hasta alrededor del 75% del isómero E y alrededor del 75% hasta alrededor del 25% del isómero Z, aún más preferentemente la mezcla contiene alrededor del 35% hasta alrededor del 65% del isómero E y alrededor del 65% hasta - - alrededor del 35% del Isómero Z, y aún más preferentemente la mezcla contiene alrededor del 45% hasta alrededor del 55% del Isómero E y alrededor del 55% hasta alrededor del 45% del isómero Z. En las presentaciones más preferidas, la mezcla isómera puede comprender mezclas de ISATx247 que constituyan: alrededor del 45 hasta alrededor del 50% del isómero E y alrededor del 55% a alrededor del 50% de isómero Z, alrededor del 50% hasta alrededor del 55% del isómero E y alrededor del 45% hasta alrededor del 50% del isómero Z, alrededor del 55% hasta alrededor del 6% del isómero E y alrededor del 35% hasta alrededor del 45% del isómero Z, alrededor del 65% hasta alrededor del 75% del isómero E y alrededor del 25% hasta alrededor del 35% del isómero Z, alrededor del 75 hasta alrededor del 85% del isómero E y alrededor del 15% hasta alrededor del 25% del isómero Z, alrededor del 85% hasta alrededor del 90% del isómero E, y alrededor del 10% hasta alrededor del 15% del isómero Z. Mezclas isómeras ulteriores preferidas comprenden aquellas de alrededor del 75% hasta alrededor del 65% de isómero Z y alrededor del 25% hasta alrededor del 35% de isómero E, y de alrededor del 65% hasta alrededor del 55% de isómero Z, y alrededor del 35% hasta alrededor del 25% de isómero E. (Los porcentajes se basan en el peso.) En otro aspecto, el invento está dirigido hacia compuestos farmacéuticos que comprenden una mezcla análoga de ciclosporina isómera según se describe anteriormente y un excipiente farmacológicamente aceptable. La mezcla análoga isómera es preferentemente una mezcla de ISATx247. En un aspecto ulterior, el invento está dirigido hacia un método para producir inmuno-supresión, que comprende la administración a un animal en necesidad de ello, de una cantidad eficaz de una mezcla análoga de ciclosporina isómera según se describe anteriormente o un compuesto que comprenda la mezcla análoga isómera. En una presentación preferida, la mezcla es una mezcla de ISATx247. El método puede usarse para tratar o aliviar rechazos de transplante, una enfermedad o condición auto-inmune, o una enfermedad o condición inflamatoria. En un aspecto aún ulterior, el invento está dirigido hacia un método para reducir la toxicidad de un análogo inmuno-supresor de ciclosporina al preparar - - una mezcla isómera del análogo para uso como agente inmuno-supresor. En una presentación preferida, la mezcla es una mezcla de ISAjx247. En un aspecto aún ulterior, el invento está dirigido hacia un método para incrementar la eficacia de un análogo inmuno-supresor de ciclosporina al preparar una mezcla isómera del análogo para uso a manera de agente inmuno-supresor. En una presentación preferida, la mezcla constituye una mezcla de ISATx247. Y en un aspecto aún ulterior, se proporcionan métodos para la síntesis de mezclas análogas isómeras.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1A muestra la estructura de la ciclosporina A, ilustrando los 11 residuos amino ácidos que comprenden el anillo cíclico péptido de la molécula, así como la estructura de la cadena lateral del residuo amino ácido 1; La figura 1B es otra ilustración de la estructura de la ciclosporina A con particular énfasis en la definición del término "CsA" y se la utiliza en la presente descripción; La figura 2A muestra la estructura del isómero E (o frans-isómero) del análogo de ciclosporina A denominado ISATx247; La figura 2B muestra la estructura del isómero Z (o c/s-isómero) del análogo ISAjx247 de ciclosporina A. La figura 3 muestra una visión general de las vías sintéticas ejemplares que pueden utilizarse para preparar los análogos de ciclosporina del presente invento, donde las vías estéreo-selectivas se agrupan de acuerdo con las condiciones reactivas; La figura 4 ilustra una vía sintética que produce una mezcla de isómeros (E) y (Z) de ISATx247 partiendo de un precursor de bromo; La figura 5 ilustra otra vía sintética que produce una mezcla de isómeros (E) y (Z) de ISATx247 partiendo de un precursor aldehido. La figura 6 ¡lustra un esquema de reacción estéreo-selectiva ejemplar que puede utilizarse para preparar compuestos enriquecidos con ya sea - - isómeros (E) o (Z) de ISATX247, en los que cualquier isómero puede prepararse a partir del mismo alcohol precursor; La figura 7 ilustra un esquema de reacción alterna para la síntesis estéreo-selectiva de un compuesto enriquecido en el isómero (Z) de ISATX247; La figura 8 ilustra un esquema de reacción alterna para la síntesis estéreo-selectiva de un compuesto enriquecido en el isómero (E) de ISATX247; Las figuras 9A-C ilustran vías sintéticas ejemplares para producir una mezcla de isómeros (E) y (Z) de ISATX247, siendo que las condiciones de cada reacción han sido especialmente diseñadas para producir una tasa de relación ejemplar y particular de los dos isómeros; La figura 10 ¡lustra vías estéreo-selectivas ejemplares para producir una mezcla de isómeros (E) y (Z) de ISAT, en las que los compuestos enriquecidos en uno de los dos isómeros se preparan primero y luego se mezclan concordantemente en proporciones predeterminadas para lograr la tasa de relación deseada; La figura 1 1 proporciona los resultados de un ensayo que muestra que la inhibición de la actividad de fosfatasa de calcineurina por el ISATX247 (45-50% de isómero E y 50-55% de isómero Z) fue hasta 3 veces más potente (según se determinó mediante IC50) en comparación con la ciclosporina A. La figura 12 establece la estructura y composición isómera de algunas mezclas isómeras análogas deuteradas y no deuteradas. La figura 13 proporciona los resultados de un ensayo que demuestra que la inhibición de la actividad de fosfatasa de calcineurina por varias mezclas isómeras análogas deuteradas y no-deuteradas fue por lo menos igual de potente (según se determinó mediante IC50) al compararse con ciclosporina A.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS INVENCIÓN Síntesis La ciclosporina y sus análogos son miembros de una clase de polipéptidos cíclicos que tienen potente actividad inmuno-supresora. A pesar de las ventajas que estos medicamentos ofrecen con respecto a sus actividades - - ¡muno-supresoras, anti-inflamatorias y anti-parasíticas, existen numerosos efectos adversos asociados con la terapia con ciclosporina A que incuyen nefrotoxicidad y hepatoxicidad. Concordantemente, existe necesidad de contar con nuevos agentes inmuno-supresores que sean tan activos farmacológicamente como el compuesto de ciclosporina A que se produce naturalmente, pero sin los efectos tóxicos colaterales asociados. Los solicitantes han divulgado con anterioridad un análogo de la ciclosporina A al que lo han denominado "ISATx247". Este análogo es estructuralmente similar a la ciclosporina A, excepción hecha de la modificación al residuo 1 de amino ácido. Los solicitantes descubrieron que ciertas mezclas cis y trans isómeras de ISAjx247 exhibieron una combinación de potencia afianzada, y redujeron la toxicidad con respecto a lo que actualmente se conoce como ciclosporinas que se producen naturalmente, De acuerdo con las presentaciones del presente invento, los isómeros ISATx247 (y derivados de los mismos) se sintetizan mediante vías estéreo-selectivas que pueden variar en su grado de estéreo-selectividad. Las vías estéreo-selectivas producen compuestos que son enriquecidos ya sea con isómeros (E) y (Z) y estos compuestos pueden ser combinados de tal manera que la mezcla resultante tenga una tasa de relación deseada de los dos isómeros. Como alternativa, las condiciones de reacción de una vía estéreo-selectiva podrá ser específicamente diseñada para producir la tasa de relación deseada directamente en una mezcla preparada, El nombre químico de uno de los análogos inmuno-supresores de la ciclosporina del presente invento, denominado ISATx247, queda descrito químicamente por el nombre de ciclo{(E,Z)-(2S,3R,4R)-3-hidroxi-4-metil-2(metilamino)-6,8-nonadiennoil)-L-2-aminobutiril-N-met¡l-glicil-N-metil-L-leucil-L-valil-N-metil-L-leucil-L-alanil-D-alanil-N-metil-L-leucil-N-metil-L-leucil-N-metil-L-valil}. Su fórmula empírica es C-63H111 N11O12, y tiene un peso molecular de alrededor de 1214.85. El términos "ISATx247" es una designación comercial dada a este compuesto farmacológicamente activo. La estructura de ISATx247 ha sido verificada primariamente a través de espectroscopia de resonancia magnética (NMR). Tanto el espectro 1H como el - - 13C fueron asignados utilizando una serie de uno y dos experimentos dimensionales NMR, y por comparación a las asignaciones MMR de la ciclosporina A. La asignación absoluta de los isómeros (E) y (Z) de ISATx247 fue confirmada mediante experimentos de Efecto Nuclear Overhauser (NOE). Un análisis de masa espectral proporcionó evidencia de respaldo adicional, que confirmó el peso molecular, y por el espectro infrarrojo, que se encontró era muy similar a la ciclosporina A. Dada la similitud entre los dos compuestos, este último resultado se esperaba. La estructura de ciclosporina A queda ilustrada en la FIG 1A. La estructura incluye identificación de los 11 residuos amino ácidos que comprenden el anillo cíclico de péptidos de la molécula. Estos 11 residuos de amino ácidos han sido denominados con números crecientes en una dirección que sigue el sentido del reloj, comenzando por el amino ácido que consta en el centro superior del anillo (e identificado con la referencia identificativa "1 -amino ácido"). El primer amino ácido está circunscrito en una caja de guiones para mayor claridad. La cadena lateral del residuo 1 -amino ácido ha sido extraída químicamente ya que es en esta ubicación general donde las reacciones sintéticas aquí descritas tienen lugar. Convencionalmente, el carbono adyacente al grupo carbonilo de un amino ácido queda identificada como -carbono, con letras progresivas del alfabeto Griego utilizadas para identificar los carbonos adyacentes en una dirección cadena abajo, lejos del anillo péptido. En el caso de la ciclosporina A, según consta en la Fig. 1A, el ß-carbono de la cadena lateral es unido a un grupo hidróxilo, y existe un doble enlace trans-orientado entre los carbonos e y ? de la cadena lateral. Otro esquema de la estructura de ciclosporina A consta en la FIG 1 B, donde una porción diferente de la molécula ha sido circunscrita en una caja de guiones. Esta cifra define la nomenclatura que deberá usarse en la presente descripción, en la que el término "CsA" se refiere a la parte de la ciclosporina A que queda circunscrita en la caja. La presente nomenclatura proporciona una definición breve para exhibir la región donde las reacciones sintéticas aquí descritas tendrán lugar (es decir, la cadena lateral del residuo 1 -amino ácido, - - que ha sido dibujado por fuera de la caja de guiones en la FIG 1 B), sin tener que volver a dibujar el resto de la molécula cada vez que se describe una reacción. Será obvio para los diestros en el arte que el enlace entre los carbonos a y ß de la cadena lateral es de tamaño normal, y ha sido exagerada únicamente en este gráfico con el propósito de ayudar con la definición del término "CsA." Según se ha anotado anteriormente, un análogo particularmente preferido de la ciclosporina A se denomina ISATx247, y sus dos estéreo-isómeros E (o trans) y Z (o cis) se muestran en las FIGS 2A y 2B, respectivamente. La naturaleza cis y trans de estos estéreo-isómeros se refiere a la configuración del doble enlace que existe entre los carbonos e y ? de la cadena lateral; es decir, el enlace doble que está más cerca del anillo péptido, contrario al doble enlace al extremo terminal de la cadena. Debe hacerse mención de la nomenclatura estereoquímica. En la presente descripción los términos cis y (Z) serán utilizados intercambiablemente, y los términos trans y (E) serán utilizados intercambiablemente. El uso de los términos "eritro" y "treo" se mantendrán a un mínimo debido a la aparente confusión que existe en la literatura con respecto a su significado. Véase R. W. Hoffmann y H.-J Zei en "Síntesis estéreo-selectiva de los Alcoholes. 8. Síntesis Diastereo-selectiva de ß-Metilhomoalil Alcoholes vía crotilboronatos," J. Org. Chem., Vol. 46, páginas 1309-1314 (1981 ); A. Streitwieser y C.H. Heathcock, Introducción a la Química Orgánica, 2da. Edición (Macmillan, New York, 1981 ), páginas 845-846; y M.B. Smith y J. March, March's Advanced Organic Chemistry (Wiley, New York, 2001 ), páginas 144-147. En los pocos casos en los que la terminología tre/eritro se emplea en este documento, se utiliza la convención de Streitweiser y Heathcock, en la que isómeros "eritro" se refieren a configuraciones (R, S) y (S, R), e isómeros "treo" se refieren a configuraciones (R.R) y (S,S). Un comentario final sobre la nomenclatura tiene que ver con el doble enlace terminal de carbono-carbono constante en las FIGS 2A y 2B. En un esquema numeral alterno, la cadena de carbonos del residuo 1-amino ácido - - puede ser numerado comenzando con el carbono terminal (T), y trabajando hacia atrás hacia el anillo de péptidos. En este sistema los isómeros ISATx247 pueden pensarse a manera de 1 ,3-dienos según la nomenclatura convencional de la química orgánica, en los que cada doble enlace se identifica por su carbono de menor numeración. Ahora se discutirán las vías sintéticas ilustradas en las FIGS 3-8. Según las presentaciones del presente invento, las mezclas isómeras pueden prepararse directamente, en las que las condiciones de reacción de una vía sintética en particular se diseñan para lograr la tasa deseada de isómeros en la mezcla. Como alternativa, pueden prepararse compuestos que son enriquecidos en uno de los dos isómeros geométricos de un análogo de la ciclosporina A, y los compuestos combinados en una tasa predefinida para alcanzar la mezcla deseada. Una visión general de las vías sintéticas según las presentaciones de este invento consta en la FIG 3, donde se otorga énfasis particular a las vías de reacción que agrupa según la química y la estéreo-selectividad. En referencia a la FIG 3, las vías sintéticas que utilizan las reacciones Wittig constan generalmente a mano derecha del diagrama según queda indicado por referencia en el numeral 31 , mientras que las vías 32 y 33 que utilizan reactivos que se piensa forman estados de transición de anillos de seis miembros constan en la mitad y lado izquierdo del diagrama. Cualquiera de las vías sintéticas podría rendir una mezcla de los isómeros, o podrían producir compuestos enriquecidos en uno de los dos isómeros. Las presentaciones del presente invento proporcionan una serie de maneras de llegar a la mezcla deseada de isómeros. La flexibilidad y versatilidad de las estrategias sintéticas aquí divulgadas podrían ser reflejadas en parte por las simetrías y asimetrías de la FIG 3. Una reacción que es común a cada una de las vías es la protección de un grupo funcional en la ciclosporina A34; en esta presentación ejemplar esa reacción es la conversión de ciclosporina A34 a acetil ciclosporina A35. Una asimetría en la FIG 3 es el uso del compuesto 51 de acetil ciclosporina A aldehido como precursor de todas las - - vías órgano-metálicas reactivas de titanio y litio, pero únicamente parte de las vías de reacción Wittig que contienen fósforo. En general, las vías sintéticas de la FIG 3 cuyas condiciones de reacción pueden sintonizarse para producir una mezcla que tenga la relación deseada de isómeros utiliza reactivos que contienen fósforo como participantes de una reacción Wittig. Otras vías estéreo-selectivas podrán hacer uso de componentes inorgánicos también, típicamente como miembros de reactivos órgano-metálicos que proceden a través de estados de transición de anillos de seis miembros, donde el impedimento estérico dicta los resultados de la configuración. Una plétora de reactivos órgano-metálicos resultan útiles al presente invento, incluyendo aquellos que contienen elementos inorgánicos tales como boro, silicón, titanio litio y sulfuro. Podrán prepararse compuestos enriquecidos en uno u otro de un par de isómeros a partir de un precursor único; como alternativa, los dos compuestos podrán prepararse partiendo de distintos precursores. En una de las vías estéreo-selectivas de la FIG 3 (vía 32), un precursor único conduce a ambos isómeros de ISATx247, dependiendo de las condiciones de reacción que se hayan elegido. En otra de las vías estéreo-selectivas (vía 33), dos distintos precursores se precisan para producir cada uno de los compuestos enriquecidos. Las reacciones de la FIG 3 se discutirán ahora en detalle. Una reacción que es común para cada una de las vías, es la protección del alcohol en la posición p de la cadena lateral del residuo 1-amino ácido. Dicho esquema de protección soluciona un problema que normalmente se encuentra durante la síntesis orgánica, en el que un primer grupo funcional se modifica inadvertidamente a través de una reacción que tiene intención de ser usada por un segundo grupo funcional (similar y/o idéntico) ubicado en otro sitio de la molécula. Para llevar a cabo el esquema del primer grupo funcional se reacciona con un grupo protector, la reacción deseada se lleva a cabo sobre el segundo grupo funcional y el grupo protector es luego retirado del primer grupo funcional.
- - Los grupos protectores son bien conocidos en la síntesis orgánica, y han sido tratados por J. R. Hanson en el Capítulo 2, "La Protección de los Alcoholes," de la publicación Protecting Groups in Organic Synthesis (Sheffield Academic Press, Sheffield, Inglaterra, 1999), páginas 24-25. Hanson enseña cómo proteger a los grupos hidroxil al convertirlos ya sea en ásteres o éteres. Los ésteres de acetato son quizás el tipo más frecuentemente utilizado de química para proteger a grupos hidróxilos. Existe una amplia gama de condiciones que pueden emplearse para introducir el grupo de acetatos. Estos reactivos y disolventes incluyen anhídrido acético y piridina; el anhídrido acético, piridina y dinnetilanninopiridina (DMAP); anhídrido acético y acetato de sodio; anhídrido acético y ácido p-sulfónico de tolueno, acetil cloruro, piridina y DMAP; y quetona. El DMAP es un útil catalizador de acilación debido a la formación de una sal altamente reactiva de N-acilpiridinium proveniente del anhídrido. En una presentación de este invento, el ß-alcohol de ciclosporina A34 está protegida a manera de un acetato al hacer reaccionar a 34 con cloruro acetilo, etilo acetato o combinaciones de los mismos, formando el compuesto acetil ciclosporina A35. En otra presentación el ß-alcohol sufre una adición núcleofilia de anhídrido acético, formando acetilo ciclosporina A35 y ácido acético. Estas reacciones pueden llevarse a cabo en presencia de dimetilaminopiridina (DMAP) donde un exceso de anhídrido acético actúa a manera de disolvente. En estos casos el prefijo "acetil" podrá utilizarse en la nomenclatura a lo largo de la vía sintética, o hasta que el grupo acetil sea retirado. Por ejemplo, la última intermediaria en una vía que tiene un grupo acetil en el carbono ß se denomina "acetil-(E)-1 ,3-dieno." Aunque la preparación de acetil ciclosporin ha sido bien establecida en la literatura, los diestros en el arte apreciarán que grupos protectores aparte de ésteres de acetato podrán utilizarse para proteger el ß-alcohol del residuo de 1-amino ácido de ciclosporina A 34. Estos grupos protectores podrán incluir ésteres de benzoato, ésteres sustituidos de benzoato, éteres, y silil éteres. Bajo ciertas condiciones de reacción, el grupo protector de acetatos es proclive a - - producir reacciones colaterales indeseadas, tales como eliminación e hidrólisis. Como a menudo los ésteres de benzoato, éteres y silil éteres son más resistentes a tales reacciones colaterales bajo esas mismas condiciones de reacción, a menudo resulta ventajoso emplear tales grupos protectores en lugar de acetato. La ciclosporina o los derivados de la ciclosporina que han sido protegidos por un grupo acetil o cualquier otro grupo protector se conocen como "ciclosporina A protegida". De igual manera, la mejor intermediaria en la vía ejemplar a que se ha hecho referencia anteriormente sería denominada "dieno (E)-1 ,3 protegido" en lugar de "dieno acetil-(E)-1 ,3." La naturaleza del grupo protector elegido podría tener influencia sobre el curso deseado de pasos ulteriores en las secuencias de reacción. Con referencia a la FIG 3, la acetil ciclosporina A35 tiene en su vía ejemplar un ß-alcohol protegido, y este compuesto sirve como precursor para la síntesis de isómeros ISATx247 en varias de las vías sintéticas. La vía para la reacción de Wittig será discutida primero. Síntesis de mezclas de los isómeros (E) y (Z) de ISATX247 vía la reacción de Wittig Las vías para la reacción Wittig ejemplificadas aquí se identifican por referencia numeral 31 en la FIG 3. El método 1 procede a través de intermediario acetil-n-bromociclosporina 41 de bromo, mientras que el método 2 utiliza el aldehido de acetil ciclosporina A como el punto de partida. Los métodos ejemplares descritos a continuación utilizan una reacción Wittig para introducir una funcionalidad de alqueno con una mezcla de configuraciones estereoquímicas. Las reacciones Wittig utilizadas en las presentaciones ejemplares divulgadas aquí para sintetizar mezclas de los isómeros (E) y (Z) de ISATx247 podrán ser opcionalmente llevadas a cabo en presencia de un haluro de litio. La presencia de haluros de litio en reacciones Wittig es bien conocida como que tiene un efecto sobre la tasa de isómeros geométricos producidos, y por ende, la adición de dicho compuesto puede coadyuvar a producir la mezcla deseada de isómeros (E) y (Z) de ISATx247.
- - Método 1 En una presentación de este invento, una mezcla de isómeros (E) y (Z) de ISATX247 se prepara según se muestra en la FIG 4. El uso de la línea ondeada e la representación de la FIG 4 (véase especialmente los compuestos 45 y 44) denota que la secuencia de reacción ejemplar produce una mezcla de isómeros (E) y (Z). En una de las presentaciones el porcentaje de isómeros (E) a (Z) produjo rangos que cabían de entre alrededor del 10 al 90 por ciento del isómero (E) hasta alrededor del 90 al 10 por ciento del isómero (Z), pero estos rangos son únicamente ejemplares, y muchos otros rangos son posibles. Por ejemplo, la mezcla podría contener desde alrededor del 15 hasta 85 por ciento según peso del isómero (E) y alrededor de 85 a 15 por ciento del isómero (Z). En otras presentaciones, la mezcla contiene alrededor del 25 hasta 75 por ciento según peso del isómero (E) y alrededor del 75 al 25 por ciento según peso del isómero (Z), alrededor de 35 a 65 por ciento según peso del isómero (E), y alrededor de 65 al 35 por ciento según peso del isómero (Z), y alrededor del 45 al 55 por ciento según peso del isómero (E), y alrededor de 55 al 45 por ciento del isómero (Z). En todavía otra presentación, la mezcla isómera constituye una mezcla de ISATX247, que comprende alrededor del 45 al 50 por ciento según peso del isómero (E) y alrededor del 50 al 55 por ciento según peso del isómero (Z). Estos porcentajes según peso se basan en el peso total de la composición, y se entenderá que el monto del porcentaje de peso del isómero (E) y el isómero (Z) corresponde a 100 por ciento del peso. En otras palabras, una mezcla podrá contener el 65 por ciento según peso del isómero (E) y 35 por ciento según peso del isómero (Z), o vice-versa. Con referencia a la FIG 4, el ?-carbono terminal de la cadena lateral del residuo 1-amino ácido de acetil-ciclosporina A es brominado en el siguiente paso de la reacción a través del reflujo de acetil ciclosporina A35 con N-bromosuccinamida, y azo-bis-isobutironitrilo en un disolvente tal como tetracloruro de carbono, produciendo la acetil- -bromociclosporina A41 intermediaria. La N-bromosuccinamida es un reactivo que se utiliza a menudo para remplazar a los hidrógenos alílicos con bromo, y se cree que lo logra mediante un mecanismo radical libre. La preparación del intermedio 41 fue - - esencialmente descrito por M. K. Eberle y F. Nuninger en "Synthesis of the Main Metabolite (OL-17) de Ciclosporina A," J. Org. Chem., Vol. 57, páginas 2689-2691 (1992). El nuevo intermediario bromuro de trifenilfosfonio de acetil ciclosporina A41 puede ser preparado a partir de acetil-r|-bromociclosporin A 41 al calentar éste último compuesto con trifenilfosfina en un disolvente semejante al tolueno.
Se considera que el nuevo intermediario 42, y otros similares, son intermediarios clave en la síntesis de una multiplicidad de análogos de ciclosporinas A que contienen un sistema dieno conjugado en el residuo 1-amino ácido. Por ejemplo, además de trifenilfospina, compuestos tales como triarilfosfinas, trialquilforsfinas, arilalquilfosfinas, y triarilarsinas pueden hacerse reaccionar con acetil-r)-bromociclosporina A41 para preparar otros compuestos activados similares al 42. Refiriéndonos nuevamente a la FIG 4, una mezcla de los isómeros (E) y (Z) de dieno acetil-1 ,3 42 puede prepararse al agitar el bromuro de trifenilfosfonio de acetil ciclosporina A 42 con un exceso de formaldehído en tolueno a temperatura ambiental. Siguiendo a la adición de formaldehído, se añade gota a gota una base tal como hidróxido de sodio, y la mezcla isómera de dienos se extrae con etilo acetato. Numerosos libros de texto de química orgánica describen la reacción Wittig. Una desripción en particular es ofrecida por J. McMurry, Organic Chemistry, 5ta. edición. (Brooks/Cole, Pacific Grove, 2000), páginas 750-783. Una reacción Wittig se puede utilizar para convertir una quetona o un aldehido en un alqueno. En dicho proceso, se puede propiciar la reacción de un ilido de fósforo, también denominado un fosforano, con el aldehido o quetona para rendir un intermediario bipolar denominado betaína. Típicamente el intermediario de betaína no es aislado; más bien, se descompone espontáneamente a través de un anillo de cuatro miembros para producir un alqueno y óxido trifenilfosfino. El resultado neto es el reemplazo del átomo de carbonilo oxígeno por el grupo R2C= originalmente enlazado con el fósforo.
- - Los diestros en el arte apreciarán que es amplia la variedad de reactivos que pueden sustituirse por los reactivos ejemplares de la reacción de Wittig que se han citado anteriormente. Por ejemplo, numerosos compuestos de alquil, aril, aldehido y quetona pueden ser sustituidos por formaldehído para preparar un vasto número de derivados de ciclosporina. Los solicitantes han llevado a cabo la anterior síntesis con formaldehído, y en lugar de formaldehído, se han utilizado compuestos tales como acetaldehído, formaldehído deuterado, acetaldehído deuterado, 2-clorobenzaldehído, benzaldehído, y butiraldehído. Tales reacciones Wittig podrán llevarse a cabo con compuestos que no constituyan derivados de trifenilfosfonio, tales como triarilfosfinas, trialquilfosfinas, arilalquilfosfinas y triarilarsinas. En lugar de utilizar hidróxido de sodio, pueden utilizarse varias otras bases tales como carbonato de sodio, buril-litio, hexi-litio, amida sódica, bases impedidas por litio tales como dilsopropilamida de litio, y alcóxidos de metales alcalinos. Además de variar con estos reactivos, la reacción puede ser llevada a cabo en varios disolventes orgánicos o mezclas de disolventes orgánicos y agua, en la presencia de varias sales, particularmente haluros de litio, y a varias temperaturas. Todos estos factores enumerados pueden seleccionarse razonablemente por quien sea diestro en el arte común para obtener el efecto deseado sobre la estereoquímica del doble enlace formado; es decir, el efecto deseado sobre la tasa de relación de isómeros cis y frans-isómeros. En un paso final de esta síntesis, el grupo protector del ß-carbono se retira utilizando el siguiente procedimiento. La mezcla de dieno acetil-(E)-1 ,3 y dieno acetil-(Z)-1 ,3 43 se disuelve en metanol y luego se añade agua. Una base semejante a carbonato de potasio se añade, y la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiental. Bases que no sean carbonato de potasio que podrían utilizarse incluyen hidróxido de sodio, carbonato de sodio, alcóxido de sodio y alcóxido de potasio. Entonces se utiliza etilo acetato para extraer la mezcla final del producto de isómeros (E) y (Z) de ISATx247 44. Método 2 En una vía alterna de reacción para sintetizar una mezcla de isómeros (E) y (Z) de ISATx247 mediante una estrategia de reacción Wittig, una vía - - sintética de cuatro pasos puede utilizarse como sigue: 1 ) protección del ß-alcohol, como en el método 1 ; 2) oxidación de la acetil-ciclosporina A producida a partir del primer paso para producir un aldehido; 3) una reaccióin Wittig; y 4) de-acetilación del producto de la reacción Wittig, o equivalentemente, hidrólisis del éster de acetato para recuperar el alcohol. Esta secuencia de reacción queda ilustrada en la FIG. 5. Esta vía sintética inicia de una manera similar a la vía de reacción Wittig de la FIG 4 en el sentido de que el primer paso protege al ß-alcohol con un grupo de ésteres de acetato. Sin embargo, las dos vías difieren en adelante, en el sentido de que el próximo paso del método 2 convierte a la acetil-cyclosporina A 35 en un aldehido, el aldehido 51 de acetil ciclosporina A. Esta reacción utiliza un agente oxidizante lo suficientemente fuerte para distanciar el enlace C = C y producir dos fragmentos. La división alquina es conocida en el arte. Quizás el ozono sea el reactivo de separación de doble enlace que más comúnmente se utilice, pero otros reactivos oxidizantes tales como permanganato de potasio (KMnÜ4) o tetróxido de osmio puedan utilizarse para separar el doble enlace también. El uso de agentes oxidantes con base en rutenio ha sido discutido con H. J. Carlsen et al., en "A Greatly Improved Procedure for Ruthenium Tetroxide Catalyzed Oxidations of Organic Compounds," J. Org. Chem., Vol. 46, No. 19, páginas 3736-3738 (1981). Carlsen et al. Enseñan que, históricamente, el desgaste del metal rutenio proporcionó un incentivo para desarrollar procedimientos catalíticos, el más popular de los cuales utilizó periodato o hipoclorito como oxidantes estoiquimétricos. Estos investigadores encontraron una pérdida de actividad catalítica durante el curso de la reacción con el uso convencional de rutenio que ellos habían postulado se debían a la presencia de ácidos carboxílicos. Se encontró que la adición de nitrilos a la mezcla de reacción, especialmente acetonitrilo afianzaba importantemente la tasa y alcance de separación oxidante de los alquenos en un sistema CCI4/H20/I04. Según una de las presentaciones del presnete invento, el aldehido 51 de acetil ciclosporina A podrá ser producido a partir de acetil ciclosporina A35 al - - disolverla en una mezcla de acetonitrilo y agua, y luego añadir primero el periodato de sodio y luego el hidrato de cloruro de rutenio. El aldehido 51 puede ser extraido con etilo acetato. Se notará que la síntesis del aldehido 51 por esta estrategia de separación oxidante es importante para muchas de las vías estéreo-selectivas a ser tratadas a continuación, y consiguientemente al lector se le refiere de vuelta a esta sección concordantemente. El tercer paso del método 2 involucra la conversión del aldehido 51 a una mezcla de dienos (E) y (Z) mediante una reacción Wittig, de manera similar a como se hace con e método 1. Al igual que en el método 1, se añade un Mido de fósforo al aldehido para lograr una betaína (que no se encuentra aislada), con el resultado neto de que el átomo de carbonilo oxígeno del aldehido queda reemplazado por el grupo R2C= originalmente enlazado con el fósforo. Nuevamente, tales reacciones Wittig podrán llevarse a cabo con compuestos que contengan fósforo que no sean derivados de trifenilfosfonio, como sería el caso de triarilfosfinas, trialquilfosfinas, arilalquilfosfinas y triarilarsinas a varaias temperaturas y utilizando una variedad de soluciones y disolventes básicos o la adición de varias sales inorgánicas que pueden utilizarse para influir sobre la estereoquímica del recientemente formado doble enlace. En una presentación, el aldehido 51 de acetil ciclosporina A se disuelve en tolueno, al que se añade una base tal como hidróxido de sodio en agua. Luego se añade el bromuro 52 de trifenilfosfonio, y la reacción se agita durante algún tiempo. El 'workup' o trabajo de activación de la mezcla del producto de dienos 53 acetil (E9 y (Z)-1 ,3 involucra la extracción con hexano y/o etilo acetato, donde el término 'workup' tiene intención de significar el proceso de extraer y/o aislar los productos de reacción de una mezcla de reactivos, productos, disolventes, etc. En un paso final del método 2, similar al paso final del método 1 , el grupo de éster acetato que protege el alcohol en la posición de ß-carbono se retira con carbonato de potasio, rindiendo una mezcla de isómeros (E) y (Z) de ISATx247 54. Las bases que no sean carbonato de potasio que puedan ser utilizadas para retirar el grupo protector incluyen a hidróxido de sodio, carbonato de sodio, alcóxido de sodio y alcóxido de potasio.
- - Síntesis de composiciones enriquecidas ya sea de los isómeros (E) y (Z) de ISAjx247 mediante rutas órgano-metálicas Según las presentaciones de este invento, las vías sintéticas estéreo-selectivas pueden emplear el uso de reactivos inorgánicos que contienen elementos tales como silicón, boro, titanio, sulfuro, fósforo, y/o litio. Esas vías podrán proceder a través de un estado de transición de anillo de seis miembros en el que uno de los miembros del anillo es el elemento inorgánico del reactivo órgano-metálico. En algunas presentaciones, los efectos de impedimento estérico relacionados con el estado de transición podrán influir sobre el resultado estéreoquímico de la reacción. Dos esquemas estéreo-selectivos ejemplares serán tratados en la presente divulgación. En el primer esquema estéreo-selectivo (método 3, también mostrado como Vía 32 en la Fig. 3), un compuesto que contiene silicón pasa por una reacción de eliminación para producir ya sea el isómero (E) o (Z), dependiendo de si la reacción de eliminación se lleva adelante bajo condiciones acéticas o básicas. Este es un ejemplo de una oleofinación Peterson. En el segundo esquema estéreo-selectivo (método 4, también mostrado como Via 33 en la Fig. 3), cada uno de los isómeros se produce a partir de un precursor disitnto. El siómero (Z) se produce a partir de un intermediario que contenga titanio y fósforo, mientras que el isómero (E) se produce a través de un intermediario que contiene litio. Método 3 Esta vía procede a través del aldehido 51 de acetil ciclosporina A. Un esquema similar de reacción ha sido discutida en general por D.J.S. Tsai y D.S. Matteson en "A Stereocontrolled Synthesis of (Z) and (E) Terminal Dienes from Pinacol(E)-1-Trimethylsilyl-1-Propene-3-Boronate," Tetrahedron Letíers, Vol. 22, No. 29, páginas 2751-2752 (1981 ). El método queda ilustrado en la FIG 6. En general, la síntesis involucra la preparación de un reactivo éster 62 de trimetilsililalilboronato, y luego tratar el aldehido 51 de acetil ciclosporina A con 62 para formar un alcohol ß- trimetilsilil 64. Se cree que este alcohol se forma mediante un estado de transición que contiene boro 63. Como los ésteres de boronato son de reacción lenta en reacciones de aliboración, los - - diestros en el arte apreciarán que el uso de un reactivo de borano de reacción más rápida, tal como E-D-trimetilsililalil)-9-BBN tiene ventajas. El alcohol ß-trimetilsilil 64 podrá entonces sufrir una oleofinacion Peterson para preparar un alqueno, en este caso ya sea el dieno 65 o el dieno 67. La formación del alqueno sigue una o dos vías distintas, dependiendo de si la reacción de eliminación (la oleofinacion) se lleva a cabo bajo condiciones acéticas o básicas. Bajo condiciones acéticas ocurre una aní/'-eliminación que da lugar a la formación del isómero (E), mientras que bajo condiciones básicas, una c/s-eliminación tiene lugar para formar el isómero (Z). Los diestros en el arte apreciarán que al usar esta vía sinstétíca, cualquier isómero podrá ser preparado a partir del mismo precursor. El producto de cada reacción de eliminación comprende una composición enriquecida en uno de los dos isómeros. En una presentación, enriquecer significa que el compuesto contiene un porcentaje mayor o igual que aproximadamente el 75 por ciento según peso de un isómero. En otras presentaciones, la composición enriquecida podrá comprender el 80, 85 y 90 por ciento según peso de uno de los isómeros. Los compuestos enriquecidos en un isómero podrán entonces combinarse en una tasa predeterminada para llegar a alcanzar la mezcla deseada, según se ilustra en la FIG 10. Las reacciones de la FIG 6 se discutirán ahora en detalle, comenzando con la preparación del reactivo 62 que contiene boro. Una investigación general del uso de reactivos de silicón en la síntesis del enlace carbono-carbono que dan lugar a reacciones ha sido discutida por E. Ehlinger y P. Magnus en "Silicon in Synthesis. 10. e (Trimethulsilyl)allyl Anión: A ß-Acyl Anión Equivalent for the Conversión ofAldehydes and Ketones into -? Lactones," J. Am. Chem. Soc, Vol. 102, No. 15, páginas 5004-501 1 (1980). En particular, estos investigadores enseñan la reacción que existe entre el anión (trimetilsilil)alil y un aldehido. El anión podrá ser preparado mediante la desprotonación de aliltrimetilsilano con sec-butilitio en tetrahidrofurán, a -76° C conteniendo 1 equivalente de tetrametiletileno-diamina (TMEDA).
- - La desprotonación de aliltrimetilsilano (este paso no consta en la FIG 6) ha sido tratada por J.F. Biellmann y J.B. Ducep en "Allylic and Benzylic Carbanions Substituted by Heteroatoms," Organic Reactions, Vol. 27 (Wiley, New York, 1982), página 9. Un alfa protón al heteroátomo en sistemas sustituidos por alílicos puede ser retirado con un agente más básico. Una gran variedad de tales agentes está disponible, siendo quizás el n-butilitio el más común. N-butilitio es utilizado en una cantidad estoiquiométrica con el compuesto paa ser metalada en solución con tetrahidrofurán (THF). Usualmente la temperatura se la mantiene por debajo de 0° C (a menudo por debajo de -76° C) donde el n-butilitio tiene una baja reactividad debido a su naturaleza polímera. La adición de un agente quelante tal como ?,?,?',?'-tetrametiletilenodiamina (TMEDA) causa la disociación del polímero. Sin embargo, la reacción también puede realizarse a temperatura ambiental, aún en ausencia del TMEDA. Los alilsilanes se desprotonizan fácilmente debido a que el anión que se genera queda estabilizado no solamente a través de conjugación con el doble enlace adyacente, sino también por el vecino grupo sililo. El anión podrá reaccionar con electrofilos ya sea a través de su a-carbono o su ?-carbono. El resultado regioquímico y estéreoquímico de estas reacciones depende de varios factores, siendo uno de los más importantes la identidad del contra-ión. Véase el tratado de alilsilanes por S.E. Thomas en Organic Synthesis: The Roles of Boron and Silicon (Oxford University Press, New York, 1991 ), páginas 84-87. En este esquema de reacción, el alilsilano desprotonado sufre entonces una captura electrofílica por trimetilborato para producir un intermedio que, al ser reaccionado con pinacol rinde el compuesto trans-(trimetilsilil) boronato 62. El boronato 62 puede también denominarse un "alilborano" (éster de alilboronato). Como alternativa, si se utiliza 9-methoxi-9-dialquilborano en la captura electrofílica, conduciría a un boronato complejo que puede ser demetoxilado utilizando para ello un reactivo de trifluoruro de boro (como sería - - FB3Et20) para generar el correspondiente 9-(y-irans-trimetilsilalil)-9-dialquilborano. La adición de un aldehido a un alilborano ha sido tratada por S.E. Thomas en la reerencia anterior, páginas 34-35. La adición de un aldehido a un alilborno, en el que el último es asimétricamente sustituido en el extremo distal del doble enlace carbono-carbono ("distal" significando el más distante con respecto al átomo de boro) produce un alcohol homoalílico que contiene dos centros quirales. (E)-alilboranos dan lugar a los .reo-diastereosómero, mientras que los (Z)-alilboranos dan lugar al er/'ro-diastereoisómero. Una reacción ejemplar de un (E)-alilborano 62 con aldehido 51 de ciclosporina A queda demostrado en la Fig 6, en la que el intermedio 63 de boro se forma luego de agitar los reactivos en una solución THF durante un periodo de varios días. El número de referencia 69 en el intermedio 63 de boro (FIG. 6) tiene intención de indicar que cualquier número de estructuras esposible en la posición del boro. Por ejemplo, si el reactivo 62 de boronato es un éster trialquilsililalil de boronato, entonces la estructura en 69 debería comprender un anillo de 5 miembros que incluye dos átomos de oxígeno. Sustituciones en los reactivos de boronato o borano empleados en 63 e ilustrados en la FIG 6. Únicamente los dos átomos de carbonilo del aldehido (el carbono y el oxígeno que tiene doble enlace) se convierten en miembros de la transición en anillo de seis miembros; el resto del aldehido se extiende por fuera del anillo. La porción CsA del aldehido que extiende hacia fuera del anillo de seis miembros se postula para existir en una posición ecuatorial en lugar de axial relativa al anillo debido a que la última configuración darían lugar a un impedimento estérico desfavorable entre ese sustituto y un átomo de oxígeno del alilborano 62. También será apreciado por los diestros en el arte que la posición del grupo SiMe3 desde el anión (trimetilsilil)alil se muestra ocupando una posición ecuatorial en la FIG 6 debido a que este ejemplo comenzó con el (E)-diastereómero del alilborano. Como alternativa, el grupo SiMe3 podrían haber sido dibujado en una posición axial si es que el alilborano inicial hubiese sido el (Z)-diastereómero.
- - Como alternativa, se contempla preparar el alcohol er/'íro-silil para el cual la eliminación de ácido rendiría el c/s-isómero y la eliminación de la base rendiría el írans-isómero, de una manera opuesta a las reacciones de eliminación que se han tratado con anterioridad. Será obvio para los diestros en el arte que los mismos productos podrían obtenerse al final de la síntesis. El tratamiento del producto 63 del estado de transición con trietanolamina rinde el alcohol 64 ß-trimetilsilil al momento de oxidación empleando NaOH/H202 o 'workup' acuoso. El alcohol 64 que consta en la FIG 6 es el freo-diastéreisómero es el freo-diastéreoisómero, ya que el alilborano 63 del estado de transición se encontraba en la configuración (E), aunque los diestros en el arte apreciarán que el otro diastéreoisómero podría haber sido preparado también si se comenzaba a partir del reactivo Z-alilborano. La diastereo-selectividad en los nuevos centros quirales creados no se determina en esta etapa debido a la remoción de estos centros quirales en una etapa más tardía de la síntesis. La estructura del alcohol 64 ß-trimetilsilil que se muestra en la FIG 6 ha sido confirmada por los solicitantes, utilizando para ello técnicas espectrales. En un método de síntesis de alquenos conocido como una oleofinación Peterson, la eliminación del grupo trialquilsilil y del grupo hidróxilo del alcohol 64 ß-trimetilsilil conduce a un alqueno; en este caso un dieno, debido al doble enlace que ya se encuentra presente entre los dos carbonos terminales de la cadena. Una discusión de la conversión de ß-hidroxisilanos a alquenos ha sido presentada en la referencia de S. E. Thomas, páginas 68-69. Una discusión ulterior de esta reacción ha sido presentada por P. F. Hurdlik y D. Peterson en "Stereospecific Olefín-Forming Elimination Reactions of ß-Hydroxysilanes," J. Am. Chem. Soc, Vol. 97, No. 6, páginas 1461-1468 (1975). En referencia a la FIG 6, la reacción a la eliminación que convierte el alcohol 64 en un dieno podría seguir una de las dos vías mecanísticas distintas dependiendo de si la reacción se lleva a cabo bajo condiciones acéticas o básicas. Una vía conduce al dieno 65, mientras que la otra vía conduce al dieno 67. Bajo condiciones acéticas, ocurre la anti-eliminación, mientras que - - bajo condiciones básicas ocurre una sin-eliminación. En otras palabras, las reacciones de eliminación de ß-hidroxisilanes son estéreo-específicas, y las reacciones promovidas por el ácido y base toman cursos estereoquímicos opuestos. Típicos ácidos para la reacción promovida por ácidos podrían incluir al ácido acético, ácido sulfúrico y varios ácidos Lewis; las bases típicas incluyen hidruro de sodio e hidruro de potasio, o tertibutóxido de potasio. Podría darse el caso de que las reacciones de eliminación que emplean hidruro de sodio en THF sean lentas a temperatura ambiental, mientras que las reacciones de eliminación que emplean hidruro de potasio se producen más rápidamente. La estéreo-especificidad ocurre en esta etapa de la vía de reacción debido a que la eliminación bajo condiciones acéticas precisa de los grupos trimetilsilil e hidroxi en una relación antiperiplanar. Por contraste, la eliminación bajo condiciones básicas precisa que los grupos trimetilsililos e hidróxilos adopten una relación sinperiplanar. Esta última condición facilita la formación de un fuerte enlace silicón-oxígeno y un intermedio de anillo de cuatro miembros que se descompone de una manera análoga con el paso final de la reacción Wittig. Los diestros en el arte apreciarán que un fuerte enlace de silicón-oxígeno reemplaza un enlace más débil de silicón-carbono, que tiene más fuerza que el reemplazo de un fuerte enlace carbono-oxígeno con un enlace carbono-carbono p más débil. Por ende, los productos de la eliminación estéreo-específica de un alquilsilano de ß-hidroxi son el compuesto 7 acetil-(E)-1 ,3-dieno y el compuesto 65 acetil-(Z)-1 ,3-dieno. Al igual que en los métodos previos, el grupo protector podrá ahora ser removido de cada uno de estos dienos mediante tratamiento con K2C03 en metanol y agua. Esto retira el grupo de acetato enlazado con el ß-carbono del residuo 1-amino ácido, volviendo a convertir el grupo funcional en ese carbono en un alcohol. Otras bases que no sean carbonato de potasio que pudieran haberse utilizado para retirar el grupo protector incluyen hidróxido de sodio, carbonato de sodio, alcóxido de sodio y alcóxido de potasio.
- - En esta etapa de la preparación, la síntesis está substancialmente completa. Los compuestos enriquecidos en uno u otro de los isómeros podría ser mezclada para alcanzar la tasa de isómeros deseadas en la mezcla. Por "enriquecida" se quiere decir un producto que comprende por lo menos alrededor del 75 por ciento según peso de ese isómero; en otras palabras, el producto puede contener hasta el 25 por ciento según peso del isómero "no deseado". La mezcla está diseñada para lograr el resultado farmacológico previsto. Método 4 Esta vía también procede a través del aldehido 51 de acetil ciclosporina A. Un esquema alterno para producir isómeros estéreo-selectivo queda ilustrado en las FIGS 7-8. Esta vía sintética difiere de aquellas discutidas anteriormente en que 1 ) la vía sintética para producir el (E)-isómero de ISATx247 procede a través de diferentes intermediarios que aquellos para el isómero (Z), y 2) estas vías sintéticas hacen uso de reactivos y/o intermediarios que contienen titanio y litio. Se sabe que los reactivos de titanio son particularmente útiles en la síntesis orgánica debido a que son regio- y estéreo-selectivos en sus reacciones con aldehidos y quetonas. La naturaleza general del titanio en química estéreo-selectiva ha sido tratada por M. T. Hertz en Organotitanium Reagents in Organic Synthesis (Springer-Verlag, Berlín, 1986), páginas VII, 148-149, y 164-165. Aquí se declara que la naturaleza de la ligadura de titanio puede ser diversa de tal manera que la identidad electrónica y esteárica del reactivo puede ser manipulada, y los resultados estéreo-químicos de muchas reacciones que forman enlaces C-C predecirse. Segúne sta química, la unión de dos centros proquirales de moléculas aquirales crean dos centros de quiralidad. Una regla general que gobierna los resultados estéreo-selectivos es que los enolatos Z-configurados o compuestos metálicos de crotil preferentemente forman ayn-aductos, mientras que los reactivos E-configurados favorecen los anti-diastéreomeros. Las tendencias pueden ser - - nuevamente explicadas al asumir estados transicionales cíclicos de seis miembros, que tienen una geometría en forma de silla. Un ejemplo específico de este tipo de síntesis estéreo-selectiva ha sido tratada por Y. Ikeda et al. En "Stereoselective Synthesis of (Z)- and (E)-1,3-Alkadienes from Aldehydes Using Organotitanium and Lithium Reagents," Tetrahedron, Vol. 43, No. 4, páginas 723-730 (1987). Esta referencia revela que la alildifenilfosfina puede ser utilizada para producir un reactivo [3-(Difenilfosfino)alil] de titanio, que a su vez puede condensarse con un aldehido seguido por la formación de sal de fosfonio para rendir un alcadieno (Z)-1 ,3 de una manera altamente regio- y estéreo-selectiva. Por contraste, un óxido litiado de alildifenilfospina pueden condensar con un aldehido para rendir un alcadieno (E)-1 ,3 directamente, nuevamente de acuerdo con la estéreo-selectividad deseada. Con referencia a la FIG 7, la síntesis del isómero (Z) del ISATx247 procede (al igual que en esquemas previos) al generar aldehido 51 de acetil ciclosporina A partiendo de ciclosporína A34. El reactivo 72 de [3-(difenilfosfino)alil] de titanio se prepara al desprotonar la alildifenilfosfina 71 con una fuerte base semejante a f-Bul_i, y luego haciendo reaccionar el producto con tetraisopropóxido de titanio. Un estado de transición 73 teóricamente tiene el propósito de conducir al aducto 74 de eritro-ß, que entonces puede ser convertido en la sal 75 de ß- óxidofosfonio mediante tratamiento de 74 con yodometano (Mel). Se ha postulado que la existencia del estado de transición 73 es por lo menos en parte responsable de la estéreo-selectividad de esta vía sintética. De acuerdo con los métodos ejemplares delineados en la presente divulgación, el sitio metálico del reactivo órgano-metálico puede ser la entidad que controla la regio-selectividad (Ikeda, página 725). Esto significa que el aldehido 52 de la FIG 7 reacciona con el compuesto 72 de difenilfosfina en su posición a para otorgar el correspondiente a-aducto 74, ya que el ?-carbono del grupo difenilfosfina es coordinado con el metal, que en este caso es titanio. La selectividad Z observada en el producto dieno se explica considerando el - - estado de transición 73 de seis miembros. Como tanto la cadena lateral abultada de la ciclosporina A del aldehido 35 y el grupo de difenilfosfina están postulados a ocupar posiciones ecuatoriales en el estado de transición, el eritro -aducto 74 se forma selectivamente, dando lugar al dieno 76 (Z)-1 ,3 En contraste con la vía de reacción reflejada en FIG 7, en la que el isómero (Z) de ISAjx247 se produce a través de un estado de transición del titanio, el isómero (E) no es tan fácilmente producido por este método. De hecho, se ha reportado en general que intentos de sintetizar el isómero (E) mediante este método resultan en bajos rendimientos. Más bien, y según se demuestra en la FIG 8, puede causarse una reacción en el derivado 82 de litio con el aldehido 51 para producir el estado de transición 83 que contiene litio, que forma el dieno 1 ,3 y tasas de relación E/Z de un rango mayor que alrededor de 75:25. Al igual que en la FIG 7, la alta estéreo-selectividad del producto de reacción se debe posiblemente al estado de transición 83, en el que el grupo vinilo del reactivo 82 de litio y la cadena colateral de ciclosporina A del aldehido 51 se postulan para ocupar posiciones ecuatoriales, produciendo así el dieno 84 (E)-1 ,3 de una manera estéreo-selectiva. Según se había tratado anteriormente, ciertos efectos colaterales indeseables que involucran el grupo acetato protector puede evitarse en todas las síntesis estéreo-selectivas a través del uso de los grupos protectores tales como ésteres de benzoato o éteres de sililo. Preparación de mezclas Como se había mencionado anteriormente, se encontró que ciertas mezclas de cis y frans-isómeros de ISATx247 exhibían una combinación de mayor potencia y/o menor toxicidad por sobre las ciclosporinas que se conocen en la actualidad y que ocurren naturalmente. Según las presentaciones de este invento, los isómeros de ISATx247 (y derivados de los mismos) se sintetizan mediante vías estéreo-selectivas que pueden variar en su grado de estéreo-selectividad. Las vías estéreo-selectivas pueden producir un primer material o composición enriquecida en el isómero (E), y un segundo material o composición enriquecida en el isómero (Z), y estos materiales podrán entonces combinarse de tal manera que la mezcla resultante - - tenga una tasa deseada en los dos isómeros. Como alternativa, se contempla que el primer material puede ser preparado mediante la separación de un producto de reacción para aislar y enriquecer el isómero (E), y el segundo material pude ser preparado mediante la separación de un producto de reacción para aislar y enriquecer el isómero (Z). Aún en otra presentación, las condiciones de reacción de una vía estéreo-selectiva puede adecuarse para producir la tasa de relación deseada directamente en una mezcla preparada. Estos principios quedan ilustrados en las FIGS 9A-C y 10. En las FIGS 9A-C, se muestran tres reacciones sintéticas hipotéticas que producen tasas de relación del isómero (E) al isómero (Z) de aproximadamente 65 a 35 por ciento según peso, 50 a 50 por ciento según peso, y 35 a 65 por ciento según peso, respectivamente. Desde luego, estas tasas de relación son ejemplares y cumplen fines únicamente ilustrativos, y cualquier disposición hipotética de números podrían haber sido escogidos. Será obvio para los diestros en el arte que las condiciones de reacción utilizadas para producir la tasa de relación de la FIG 9A podrán ser diferentes de aquellos de las FIGS 9B y 9C a fin de lograr una tasa de relación diferente de isómeros en la mezcla del producto. Las condiciones de cada reacción han sido diseñadas para producir una tasa en particular de los dos isómeros para ese caso. En contraste con algunas vías sintéticas, cuando una mezcla de isómeros se produce, los isómeros podrán primero ser preparados individualmente, y luego mezclarse en proporciones pre-determinadas para alcanzar la tasa deseada. Este concepto queda ilustrado en la FIG 10, donde el producto de una vía estéreo-selectiva queda enriquecida en uno de los isómeros de manera que el producto comprenda más de alrededor del 75 por ciento según peso del isómero (E), y el producto de la otra vía estéreo-selectiva se enriquece en el otro isómero de manera que este producto comprenda más de alrededor del 75 por ciento según peso del isómero (Z). Estas cifras también sirven de ejemplo, y la pureza del isómero deseado resultante de una vía estéreo-selectiva podría ser mayor que o igual a alrededor del 75 por ciento según peso en una presentación. En otras presentaciones el isómero deseado - - podrá comprender más o alrededor del 80, 85, 90 y 95 por ciento según peso, respectivamente. Luego de sintetizar los isómeros individualmente, pueden entonces ser mezclados para alcanzar la tasa deseada, según queda ¡lustrado en la FIG. 10. para fines ilustrativos, las mismas tasas hipotéticas se eligen en la FIG 10 que aquellas utilizadas en las FIGS 9A-C. En referencia a la FIG 10, los isómeros (E) y (Z) se mezclan para rendir tres diferentes mezclas que comprenden tasas del isómero (E) al isómero (Z) de aproximadamente 65 a 35 por ciento según peso, 50 a 50 por ciento según peso, y 35 a 65 por ciento según peso, respectivamente. En una presentación alterna, una mezcla de los isómeros (E) y (Z) de ISATx247 puede ser separada de tal manera que la mezcla sea enriquecida en un isómero con respecto al otro. Por ejemplo, una reacción Diles-Alder podrá ser utilizada para convertir el cis-isómero a un compuesto de anillo cerrado al hacerlo reaccionar con un alqueno. Si el alquero está enlazado a un subestrato que es sujeto a aislamiento (es decir, filtrable), el cis-isómero podrá ser substancialmente removido de la mezcla, dejando un compuesto enriquecido en el trans-isónero. El cis-isómero puede ser re-constituido partiendo del compuesto de anillo cerrado mediante la aplicación de calor, produciendo un compuesto enriquecido en el cis-isómero. Por ende, de esta manera, los cis y trans isómeros pueden ser separados. En la práctica el tasa de relación de los isómeros (E) a (Z) en una mezcla, sin importar el grado de estéreo-selectividad del método a través del cual fuera producido, podrá adoptar una amplia gama de valores Por ejemplo, la mezcla podría comprender desde alrededor del 10 al 90 por ciento del isómero (E) hasta alrededor del 90 a 10 por ciento del isómero (Z). En otras presentaciones, la mezcla podrá contener desde alrededor del 15 al 85 por ciento según peso del isómero (E) y alrededor del 85 al 15 por ciento del isómero (Z); o alrededor del 25 al 75 por ciento según peso del isómero (E) y alrededor del 75 al 25 por ciento según peso del isómero (Z), o alrededor del 35 al 65 por ciento según peso del isómero (E) y alrededor del 65 al 35 por ciento según peso del isómero (Z), o alrededor del 45 al 55 por ciento según peso del - - isómero (E) y alrededor del 55 al 45 por ciento del isómero (Z). En aún otra presentación, la mezcla isómera constituye una mezcla de ISATX247 que comprende alrededor del 45 al 50 por ciento según peso del ¡somero (E) y alrededor del 50 al 55 por ciento según peso de la composición, y se comprenderá que la suma del porcentaje de peso del isómero (E) y el isómero (Z) corresponde al 100 por ciento del peso. En otras palabras, una mezcla podrá contener el 65 por ciento según peso del isómero (E) y el 35 por ciento según peso del isómero (Z), o vice-versa. El porcentaje de un isómero u otro en una mezcla puede ser verificado utilizando resonancia magnética nuclear (NMR), u otras técnicas bien conocidas en el arte. Compuestos farmacéuticos Este invento también se relaciona con un método para el tratamiento de pacientes que precisan de inmuno-supresión, que involucra la administración de compuestos farmacéuticos que comprenden la mezcla inventiva a manera de constituyentes activos. Las indicaciones para las cuales esta combinación resulta de interés incluyen en particular condiciones auto-inmunes e inflamatorias y condiciones asociadas con rechazo de transplante o que ocasionan dicho rechazo, por ejemplo tratamiento (que incluye mejoramiento, reducción, eliminación o cura de etiología o síntomas) o prevención (incluyendo restricción substancial o completa, profilaxis o evitación) de lo siguiente: a) Rechazo agudo a transplante de órgano o tejidos, es decir, tratamiento de quienes los reciben, ej. corazón, pulmón, combinación de corazón y pulmón, hígado, riñon, transplante pancreático, piel, intestinos, o de cornea, así como injerto versos enfermedad de anfitrión, tal como la que sucede después de un transplante de médula. b) Rechazo crónico de un órgano transplantado, particularmente, la prevención de la enfermedad de receptor de injerto, que por ejemplo se caracteriza por estenosis de las arterias del injerto como resultado de engrasamiento íntimo debido a la proliferación de células de músculo uniforme y sus efectos asociados.
- - Rechazo a injerto ajeno, que incluye el rechazo agudo, hiperagudo o crónico de un órgano que se produce cuando el órgano donante es de una especie distinta de la del receptor, más especialmente rechazo mediado por células B o rechazo a causa de anticuerpos. Enfermedad auto-inmune y condiciones inflamatorias, en particular condiciones inflamatorias acompañadas de etiología que incluye un componente inmunológico o auto-inmune tal como artritis (por ejemplo artritis reumatoide, artritis crónica progradiente y artritis deformante) y otras enfermedades reumáticas. Las enfermedades auto-inmunes específicas para las cuales la combinación sinérgica del invento puede emplearse incluyen, desórdenes hematológicos auto-inmunes (incluyendo por ejemplo anemia hemolítica, anemia aplástica, anemia pura de células rojas y trombo-citopenia idiopática), lupus sistémico eritematoso, policondritis, esclerodoma, granulomatosis Wegener, dermatomiositis, hepatitis crónica activa, miastenia grave, soriasis, síndrome de Steven-Johnson, estomatitis idiopática (auto-inmune), enermedad inflamatoria del intestino incluyendo por ejemplo colitis ulcerativa y la enfermedad de Crohn), oftalmopatía endocrina, enfermedad de Graves, sarcoidosis, esclerosis múltiple, cirrosis biliar primaria, diabetes juvenil (diabetes mellitus tipo I), uveítis (anterior y posterior), quertoconjuntivitis sicca y queratoconjuntivisits vernal, fibrosis intersticial del pulmón, artritis soriásica, nefritis glomerular (con o sin el síndrome nefrótico, es decir incluyendo síndrome nefrótico idiopático o cambio nefropático mínimo) y dermatomiositis juvenil. También se consideraron condiciones auto-inmunes e inflamatorias de la piel como susceptibles a tratamiento y prevención con el uso de una combinación sinergética del invento, por ejemplo soriasis, dermatitis por contacto, dermatitis atópica, alopecia areata, eritema multiforme, dermatitis herpetoforme, escleroderma, - - vitíligo, hipersensibilidad angitis, urticaria, ampolla pénfigoide, lupus eritematoso, pénfigo, epidermolisis ampollosa adquirida, y otras condiciones inflamatorias o alérgicas de la piel, así como condiciones inflamatorias de los pulmones y vías respiratorias que incluyen asma, alergias y neumo-coniosis. Las mezclas isómeras análogas de este invento pueden ser administradas en forma pura o con un vehículo farmacológico a un animal de sangre caliente que la precise. El vehículo farmacéutico puede ser sólido o líquido. La mezcla inventiva puede ser administrada oralmente, tópicamente, parenteralmente, mediante inhalación de nebulizador o por el recto en fórmulas de unidades dosificadas que contienen vehículos no-tóxicos convencionales que sean farmacológicamente aceptables, adyuvantes y excipientes. El término parenteral, según se lo emplea en este documento, incluye inyecciones subcutáneas, intravenosas, intramusculares, inyección intraesternal o técnicas de infusión. Los compuestos farmacéuticos que contienen la mezcla del invento podrían venir preferentemente en forma idónea para uso oral, por ejemplo, como serían tabletas, pastillas, grageas, suspensiones en agua o aceite, polvos dispersables o gránulos, emulsiones, cápsulas duras y suaves, o jarabes o elíxires. Los compuestos para administración oral pueden ser preparados de acuerdo con métodos conocidos en el arte para la fabricación de composiciones farmacéuticas y tales composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados de entre el grupo consistente de agentes edulcorantes, saborizantes, colorantes y preservantes a fin de proporcionar una preparación farmacológicamente elegante y agradable al paladar. También pueden fabricarse mediante métodos conocidos tabletas que contengan el ingrediente activo en ad-mezclas con excipientes no-tóxicos y farmacológicamente aceptables. Los excipientes utilizados podrían ser, por ejemplo, (1 ) diluyentes inertes tales como carbonato de calcio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; (2) agentes granulantes y desintegrantes tales como almidón de maíz, o ácido algínico; () agentes aglutinantes tales como almidón, gelatina o acacia, y (4) agentes lubricantes tales como estearato de - - magnesio, ácido esteárico o talco. Las tabletas podrán no ser revestidas o podrían revestirse mediante técnicas conocidas para retrasar la desintegración y absorción dentro del tracto gastrointestinal y proporcionar así una acción sostenida durante un período más largo. Por ejemplo, podría emplearse un material retardante semejante al mono-estearato de glicerina, bi-estearato de glicerina. También pueden venir revestidas utilizando las técnicas descritas en la Patente de los Estados Unidos Número 4,256,108; 4,160,452; y 4,265,874 para formar tabletas terapéuticas osmóticas para liberación controlada. En algunos casos, las fórmulas para uso oral pueden venir en forma de cápsulas de gelatina dura en las que el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte; por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín. También pueden venir en forma de cápsulas de gelatina suave, en las que el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio aceitoso, por ejemplo aceite de maní, parafina líquida, o aceite de olivas. Las suspensiones acuosas normalmente contienen los materiales activos en ad-mezcla con excipientes idóneos para la fabricación de suspensiones acuosas. Dichos excipientes podrán incluir: (1) agentes de suspensión tales como carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, gomas de tragacanto y acacia; o (2) agentes dispersantes o humedificantes que podrían constituir fosfátido como lecitina, un producto de condensación de un óxido alcalino con un ácido graso, por ejemplo estearato de polioxietileno, un producto de la condensación de óxido etileno con una larga cadena de alcohol alifático, por ejemplo, heptadecaetilenoxicetanol, un producto de condensación de óxido etileno con un éster parcial derivado de un ácido graso y un hexitol como sería un mono-oleato de polioxietileno sorbitol, o un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial derivado de un ácido grado y un anhídrido hexitol, por ejemplo mono-oleato de polioxietileno sorbitan. Las suspensiones acuosas también podrán contener uno o más preservantes, por ejemplo, etilo o n-propil p-hidroxibenzoato; uno o más - - agentes colorantes; uno o más agentes savorizantes, y uno o más agentes edulcorantes tales como sucrosa, aspartame o sacarina. Las suspensiones aceitosas pueden formularse al mantener en suspensión el ingrediente activo en un aceite vegetal, por ejemplo aceite arachis (aráceo), aceite de oliva, aceite de ajonjolí, o aceite de coco, un aceite de pescado que contenga ácido grado omega 3, o en un aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones aceitosas podrán contener un agente de expansión, por ejemplo cera de abejas, parafina dura o alcohol cetil. Los agentes edulcorantes y saborizantes podrán añadirse para proporcionar una preparación oral agradable al paladar. Estas composiciones pueden ser preservadas por la adición de un antioxidante semejante al ácido ascórbico. Polvos y gránulos dispersables son idóneos para la preparación de una suspensión acuosa. Proporcionan el ingrediente activo en una mezcla con agente dispersante o humed ¡ficante, un agente de suspensión y uno o más preservantes. Agentes dispersantes o humedificantes idóneos y agentes de suspensión quedan ejemplificados por aquellos que ya se han mencionado anteriormente. Excipientes adicionales, por ejemplo aquellos agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes descritos antes también pueden estar presentes. Los compuestos farmacéuticos que contienen la mezcla inventiva también podrán venir en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase aceitosa puede corresponder a un aceite vegetal semejante al aceite de oliva o aceites arachis, o a un aceite mineral tal como parafina líquida o una mezcla de los mismos. Agentes emulsificadores idóneos pueden ser (1 ) gomas naturales tales como goma de acacia y tragacanto, (2) fosfátidos naturales tales como soya y lecitina, (3) ésteres o éster parcial 30 derivados de ácidos grasos y anhídridos hexitoles, por ejemplo, mono-oleato de sorbitan, (4) productos de condensación de tales ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo mono-oleato de polixosietileno sorbitan. Las emulsiones también podrán contener agentes edulcorantes y saborizantes. Jarabes y elíxires pueden ser formulados con agentes edulcorantes, por ejemplo, glicerol, glicol propileno, sorbitol, aspartame o sucrosa. Tales fórmulas - - también podrán contener un emoliente, un preservante y agentes saborizantes y colorantes. Los compuestos farmacéuticos podrán venir en forma de suspensión acuosa estéril inyectable o suspensión oleaginosa. Esta suspensión puede formularse de acuerdo a métodos conocidos, utilizando aquellos agentes de dispersión o humedifcación ¡dóneos y agentes de suspensión que han sido mencionado anteriormente. La preparación estéril inyectable también podrá constituir una solución o suspensión estéril inyectable en un diluyente o disolvente no tóxico que sea aceptable para administración parenteral, por ejemplo a manera de una solución en 1 ,3-butanediol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse se encuentran el agua, solución de Ringer y solución ¡sotónica de cloruro de sodio. Además, aceites estériles fijos se utilizan convencionalmente a manera de medios de disolución o suspensión. Para este fin, cualquier aceite blando y fijo podrá emplearse, incluyendo mono- o bi-glicéridos sintéticos. Además, ácidos grasos tales como ácido oleico encuentran uso en la preparación de inyectables. La mezcla inventiva también puede ser administrada en forma de supositorios para administración rectal de la droga. Estos compuestos pueden prepararse al mezclar la droga con un excipiente no-irritable idóneo que se encuentra en forma sólida a temperaturas ordinarias pero que se tornan líquidos a temperaturas rectales y por ende se derretirán en el recto para liberar la droga. Dichos materiales son manteca de cacao y glicoles de polietileno. Para uso tópico, se emplean cremas, ungüentos, gelatinas, soluciones o suspensiones, etc., que contienen las ciclosporinas que están siendo divulgadas. En una presentación particularmente preferida, se utiliza una solución líquida que contiene un surfactante, etanol, un lipofílico y/o un disolvente ampifílico a manera de ingredientes no-activos. Específicamente, una fórmula de emulsión oral múltiple que contiene la mezcla análoga isómera y los siguientes ingredientes no-medicinales: succinado d-alfa tocoferil polietileno glicol 1000 (Vitamina E TPGS), aceite triglicérido de cadena media (MCT), Tween 40, y etanol. Con preferencia también se puede utilizar una cápsula de - - gelatina suave (que comprende gelatina, glicerina, agua y sorbitol), que contiene una mezcla análoga isómera y los mismos ingredientes no-medicinales que la solución oral. Los niveles de dosificación de la orden desde alrededor de 0.05 mg hasta alrededodr de 50 mg por kilogramo de peso corporal por día son útiles en el tratamiento de las condiciones anteriormente indicadas. El nivel de dosis y calendario de administración podrá variar dependiendo de la mezcla isómera particular que está siendo utilizada, la condición a ser tratada, y tales factores adicionales como la edad y condición del sujeto. Las dosis preferidas varían de entre alrededor de 0.5 hasta alrededor de 10 mg/kg/día y desde alrededor de 0.1 hasta alrededor de 10 mg/kg/día. En una presentación preferida, desde alrededor de 2 hasta alrededor de 6 mg/kg/día se administran oralmente b.i.d. EN una presentación particularmente preferida, alrededor de 0.5 hasta alrededor de 3 mg/kg/día se administran oralmente b.i.d. La cantidad de ingrediente activo que puede ser combinado con los materiales conductivos para producir una forma de unidades de dosificación variará dependiendo del anfitrión que esté siendo tratado y del modo particular de administración. Por ejemplo, una fórmula que tiene intención de usar por administración oral a humanos podría contener desde 2.5 mg hasta 2.5 g de agente activo combinado con una cantidad apropiada y conveniente de material conducente que podría variar desde alrededor de 5 hasta alrededor del 95 por ciento de la composición total. Las formas de unidades de dosificación contendrán en general entre desde alrededor de 5 hasta alrededor de 500 mg de ingrediente activo. En una presentación preferida, se emplean cápsulas que contienen alrededor de 50 mg de mezcla isómera para administración oral. En otra presentación preferida, las soluciones orales que contienen alrededor de 50 mg/ml de mezcla isómera se utilizan para administración oral. Sin embargo, quedará entendido que el nivel específico de dosis para cualquier paciente en particular dependerá de una serie de factores que incluyen la actividad del compuesto específico que se emplee, la edad, peso corporal, estado general de salud, sexo, dieta, tiempo de administración, ruta de administración, tasa de excreción, combinación de medicamento y la - - naturaleza y gravedad de la enfermedad en particular o condición por la que se está sometiendo a terapia. Metodología El uso de derivados de ciclosporina, una clase de polipéptidos cíclicos producidos por el hongo Tolypocladium inflatum Gams, va en aumento en la terapia inmuno-supresora, debido a sus efectos preferenciales sobre las reacciones mediadas por células T. Se ha observado que los derivados de la ciclosporina inhiben reversiblemente los linfocitos inmuno-competentes, particularmente los linfocitos T, y también inhiben la producción de linfocinos y su liberación. Esta acción es principalmente medidada a través de la inhibición de calcineurina, una enzima fosfatasa que se encuentra en el citoplasma de las células, inducida por la ciclosporina A (Schreiber y Crabtree, 1992). Un indicio de la eficacia de la ciclosporina A o un derivado de una ciclosporina A es su capacidad de inhibir la actividad fosfatasa de la calcineurina. El ensayo de inhibición de la calcineurina mide la actividad del medicamento en su sitio de acción, y como tal, es la evaluación más exacta y directa in vi'tro de la potencia de los análogos de la ciclosporina A (Fruman et al., 1992). La ISATx247 es un análogo de la ciclosporina A que es similar a la ciclosporina A, excepción hecha de una nueva modificación de un grupo funcional sobre el residuo del amino ácido 1 de la molécula. Ahora hemos encontrado que el ISAjx247 exhibe hasta 3 veces mayor potencia que la ciclosporina A en el ensayo in vitro de inhibición de la calcineurina. Estudios farmacodinámicos (tanto in vivo como in vitro) han demostrado que la ISATx247 tiene más potencia que los demás compuestos de ciclosporina que existen. La eficacia de mezclas isómeras de análogos de ciclosporina que varían entre alrededor de 10:90 hasta alrededor de 90:10 (trans- a cis-), en particular ISATx247 que tienen 50-55% isómero Z y 45-50% isómero E, a manera de agente ¡nmuno-supresor (frente a la ciclosporina A) ha sido demostrada en un ensayo in vitro de la actividad de la calcineurina, un modelo de transplante de corazón en rata, un modelo de alotransplante de célula aislada en ratón, un modelo de artritis inducida por colágeno en ratón, y/o un modelo de artritis inducida por antígenos en el conejo. Los datos demuestran - - que estas mezclas isómeras son equivalentes o más potentes que la ciclosporina A, y por lo tanto útiles para el tratamiento de desórdenes inmuno-reguladores. Existen numerosos efectos perjudiciales asociados con la terapia a base de ciclosporina A, que incluyen nefro-toxicidad, hepato-toxicidad, catarata-génesis, hirsutismo, parátesis e hiperplasia gingival para mencionar unos cuantos (Sketris et al., 1995). De éstos, la nefrotoxicidad es uno de los más serios efectos perjudiciales relacionados con la dosis, resultante de la administración de ciclosporina A. Se desconoce el mecanismo exacto a través del cual la ciclosporina A causa daños renales. Sin embargo, se propone que un incremento en los niveles de substancias vasoconstrictoras en el riñon conduce a la vasoconstricción local de las arteriolas glomerulares aferentes. Esto puede resultar en isquemia, una disminución en la tasa de filtración glomerular, y a largo plazo, fibrosis intersticial. La seguridad no-clínica de ISATx247 ha sido evaluada en una serie de especies animales. Estudios realizados en ratas, perros y primates respecto de la toxicidad de dosis orales reiteradas, demostró que el ISATx247 era bien tolerado y producía efectos que eran consistentes con la inmuno-supresión. El único efecto toxicológico anotado en todas las especies fue diarrea y heces flojas. ISATx247 no exhibe actividad mutagénica según se ha demostrado en ensayos ¡n vitro de mutación bacteriana revertida y aberración cromosómica, y en un ensayo en vivo en micro-núcleos de rata. Hasta la fecha no se han realizado estudios de cáncerogenicidad. Se han realizado estudios de toxicidad reproductiva con ISATx247 en ratas y conejos preñados. No hubo malformaciones o alteraciones relacionadas con el tratamiento. En dosis que resultaron en toxicidad maternal se observó la correspondiente toxicidad para el embrión. EJEMPLOS - - Ejemplo 1: Acetilación de la Ciclosporina A A la Ciclosporina A se le añadió anhídrido acético (140 mililitros) (50.0 gramos, 41.6 milimoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiental bajo una atmósfera N2 hasta que toda la Ciclosporina A se había disuelto. Se añadió dimetilaminopirridina (7.62 g, 62.4 mmol) y la reacción agitada a temperatura ambiental bajo una atmósfera N2 durante 3 horas o hasta que la reacción fue completa. La mezcla de reacción fue enfriada a 5°C y luego fue filtrada. Los sólidos recolectados fueron lavados con hexano para retirar los vestigios adicionales de anhídrido acético. El resultante sólido pastoso fue lentamente transferido a una solución acuosa de bicarbonato de sodio al 5% agitada vigorosamente (1.5 litros). La suspensión resultante fue agitada hasta que se obtuvo una lechada fina y la evolución de CO2 había cesado. Los sólidos fueron recogidos por filtración y lavados con agua hasta que lo filtrado tenía un pH neutro. El producto sólido fue secado en un horno al vacío durante la noche (55°C) para rendir 44.0g (85%) del producto a manera de un sólido incoloro.
Ejemplo 2: Oxidación del Producto a partir del Ejemplo 1 Se añadió acetonitrilo (320 mL) y agua (80 mL) a acetil Ciclosporina A (42.97 g, 34.54 mmol) y la mezcla fue agitada hasta que todo el material fue disuelto. Se añadió periodato de sodio (14.77 g, 69.08 mmol), seguido por la adición de hidrato de cloruro de rutenio (0.358 g. 1.73 mmol) y luego la reacción fue agitada a temperatura ambiental durante 3 horas bajo una atmósfera N2. Se añadió agua (300 mL) y la mezcla fue transferida a un embudo de separación. La mezcla fue extraída dos veces con acetato de etilo (300 mL y luego 250 mL). Los obscuros extractos de acetato de etilo fueron combinados y lavados con 250 mL de agua, seguido por 250 mL de salmuera.
La solución orgánica fue entonces secada sobre MgSO4 y el disolvente evaporado para rendir un sólido verde-negrusco. El producto crudo fue cromatografiado sobre gel de sílice utilizando un 40% de acetona/60% de hexano como levigador a fin de obtener el producto (29.1 g, 68%) a manera de un sólido incoloro.
- - Ejemplo 3: Preparación de Acetil ISATX247 i) Generación ¡n situ de ilide: Se añadió aldehido de actetil Ciclosporina A (31 .84 g, 25.84 mmol) y la agitación continuó hasta que el material se encontraba enteramente disuelto. A la solución resultante se le añadió 340 mL de 1 hidróxido de sodio acuoso normal. La mezcla resultante fue agitada vigorosamente y luego el bromuro de alil trifenilfosfonio (53.22 g, 151 .90 mmol). La reacción fue agitada durante 24 horas a temperatura ambiental y luego se añadió bromuro de alil trifenilfosfonio adicional (16.54 g, 43.42 mmol) y la agitación continué durante otras 24 horas. La mezcla fue transferida a un embudo separador y la fase de tolueno separada. La fase acuosa fue extraída con 200 mL adicionales de tolueno. Los dos extractos de tolueno fueron combinados y lavados en secuencia con 200 mL de agua de-ionizada y 200mL de solución acuosa de cloruro de sodio saturada. La solución fue secada sobre MgS04, filtrada y luego el tolueno evaporado para rendir un gel muy viscoso. Este material fue tratado con 142 mL de acetato de etilo y agitado hasta que se formó una fina lechada. El hexano (570 mL) fue lentamente añadido con rápida agitación. La agitación fue continuada durante 30 minutos y luego la suspensión resultante fue filtrada y los sólidos recogidos y lavados con 160 mL de 5:1 hexano/etil acetato. El filtrado combinado fue concentrado en un evaporador rotativo hasta convertirse en un semi-sólido viscoso. Este material fue tratado con 75 mL de etil acetato y agitado hasta que se obtuvo una fina lechada. Se añadió lentamente hexano (225 mL) con agitación rápida. La agitación continuó durante 30 minutos y entonces la suspensión resultante fue filtrada y los sólidos recogidos y lavados con 100 mL de 5:1 hexano/etil acetato. Lo filtrado fue concentrado en un evaporador rotativo para rendir un sólido color verde pálido. El producto crudo fue cromatografiado sobre gel de sílice utilizando 40% de acetona/60% de hexano como levigador para otorgar al producto (14.09g) una apariencia sólida e inodora. ii) generación y reacción de ilido pre-formado en presencia de LiBr: ¦ - A una suspensión agitada de bromuro de aliltrifenil fosfonio (7.67 g, 20 mmol) en THF (20 mL) enfriada a 0°C, se añadió una solución de KOBu' en tetrahidrofurán (20 mL, 20 mmol, 1 M de solución). La agitación fue continuada a esta temperatura durante 30 minutos y se añadió una solución de LiBr en THF (10 mL, 10 mmol, 1 M). La mezcla de reacción fue entonces agitada durante 30 minutos y se añadió mediante cánula una solución de acetil aldehído-CsA (4.93 g, 4 mmol) en THF (10 mL). Luego de agitar durante 15 minutos a temperatura ambiental, la mezcla de reacción fue saciada con solución saturada de NH4CL (25 mL). El procedimiento ('workup') y cromatografía según lo anterior rindió ISATx247 acetilado a manera de un sólido incoloro (3.5g).
Ejemplo 4: Preparación de ISATV247 El acetilo ISATx247 (14.6 g, 1 1 .62 mmol) fue disuelto en 340 mL de metanol y luego se añadió 135 mL de agua de-ionizada. El carbonato de potasio (13.36g, 96.66 mmol) fue añadido y la mezcla agitada a temperatura ambiental durante 24 a 48 horas hasta que la reacción fue completa. La mayoría del metanol se evaporó y luego se añadió 250 mL de etil acetato con agitación. Una solución acuosa de ácido cítrico al 10% (120 mL) fue lentamente añadida y luego la fase de etil acetato separada. La fase acuosa fue extraída con una porción adicional de 200 mL de etil acetato. Los extractos combinados de etil acetato fueron lavados en secuencia con 150 mL de agua de-ionizada, 100mL de solución acuosa de ácido cítrico y 150mL de cloruro de sodio acuoso saturado y luego secado sobre MgS04. El etil acetato fue evaporado para rendir un sólido color amarillo pálido. El producto crudo fue cromatografiado sobre gel de sílice utilizando 40% de acetona/ 60% de hexano como levigador para rendir ISATx247 (10.51 g, 75%) a manera de un sólido incoloro. EL ISATx247 contiene 45-50 de isómero E y 50-55% de isómero Z. Los productos constantes en los Ejemplos 1-4 se caracterizaron por espectrometría de masa y/o espectroscopia de resonancia magnética nuclear.
Ejemplo 5: Preparación de Acetil- Tibromociclosporina A - - La acetil ciclosporina A (41.48 g, 33.3 mmol) preparada como en el Ejemplo 1 , N-bromosuccinamida (10.39g, 58.4 mmol) y azo-bis-isobutiironitrilo (1.09 g, 6.67 mmol) fueron disueltos en 250 mL de tetracloruro de carbono y la mezcla resultante fue calentada para producir reflujo durante 2.5 horas. La mezcla fue enfriada y el disolvente evaporado. El residuo fue tratado con 350 mL de dietil éter y filtrado para remover el material insoluble. Lo filtrado fue lavado en secuencia con 50 nL de agua y 150 mL de salmuera, luego secado sobre sulfato de magnesio y el disolvente fue evaporado. El material crudo fue cromatografiado sobre gel de sílice con acetona/hexano (2:3) para rendir 28.57 g (65) de acetil-y-bromociclosporina A a manera de un sólido amarillo.
Ejemplo 6: Preparación de Bromuro Trifenilfosfonio de Acetil Ciclorporina A En 210 mL de tolueno se disolvió acetil-y-bromociclosporina A (28.55 g, 21.6 mmol) y trifenilfosfina (7.55 g, 28.8 mmol) y la solución resultante fue calentada a 100° C durante 21 horas. La solución fue enfriada y el tolueno evaporado. El semi-sólido aceitoso resultante fue tratado con 250 mL de hexano/ éter (1 :4), mezclado enteramente y el disolvente decantado. Este proceso fue repetido 3 veces más con 150 mL éter. El residuo fue entonces disuelto en 10 mL de etil acetado y precipitado con 220 mL de hexano. El sólido resultante fue entonces recogido por filtración para rendir 22.5g (66%) de bromuro de trifenilfosfonio de acetil ciclosporina A a manera de un sólido de color tostado.
Ejemplo 7: Reacción Wittiq El bromuro trifenilfosfonio de acetil ciclosporina (100mg, 0.06 mmol), un exceso del 375 de formaldehído (0.25 mL) y tolueno (2mL) fueron agitados rápidamente a temperatura ambiental. El hidróxido de sodio acuoso a manera de una solución 1 N (2 mL) fue añadido gota a gota y la agitación continuó durante 3.5 horas. La mezcla de reacción fue diluida con etil acetato (20 mL) y agua (10 mL). La fase de etil acetato fue separada, lavada en secuencia con agua (10 mL) y salmuera (10 mL), secada sobre sulfato de magnesio y el - - disolvente evaporado. El material crudo fue cromatografiado sobre gel de sílice con acetona/ hexano (2:3) para rendir 70 mg (88%) de una mezcla de isómeros (E) y (Z) de acetil ISATx247 a manera de un sólido incoloro.
Ejemplo 8: De-acetilación del Producto de la Reacción Wittiq La mezcla de isómeros tomados del Ejemplo 7 (70mg, 0.056mmol) fue disuelta en metanol (5 ml_) y luego se añadió agua (1 ml_). Se añadió carbonato de potasio (75 mg) y la reacción agitada a temperatura ambiental durante 19 horas. La mayor parte del metanol fue evaporado y 15 mL de etil acetato añadidos al residuo seguido por 10 mL de ácido cítrico acuoso al 10%. La fase de etil acetato fue separada y la fase acuosa extraída con 10 mL adicionales de etil acetato. Los extractos combinados de etil acetato fueron lavados en secuencia con 10 mL de agua, 10 mL de ácido cítrico acuoso al 10% y 10 mL de salmuera antes de ser secado sobre sulfato de magnesio y evaporar el disolvente. El material crudo fue cromatografiado sobre gel de sílice con acetona/hexano (2:3) para rendir 37 mg (54%) de ISATx247 a manera de un sólido incoloro que contiene alrededor del 85% de isómero E y alrededor del 5% de isómero Z. Los productos de los Ejemplos 5-8 fueron caracterizados por espectrometría de masa y/o espectrometría de resonancia magnética nuclear.
Ejemplo 9: Preparación de los Isómeros Geométricos de ISAjx247 Los cis y trans-isómeros de ISAjx247 pueden sintetizarse independientemente utilizando el siguiente esquema de reacción. La secuencia involucra metalatión conocido de aliltrimetilsilano, la captación electrofílica por un trimetilborato, seguida por la hidrólisis y luego transesterificación para generar el éster de frans-(trimet¡lsilill)alilboronato. La alilboración del aldehido de ciclosporina proporcionó un intermediario de boro, que se convierte en el alcohol ß-trimetilsilil deseado, por secuestro. La di-estéreo-selectividad en la creación de nuevos centros quirales no ha sido determinada a esta etapa debido a la remoción de estos centros durante una etapa posterior. Cabe - - anotarse que la estereoquímica relativa de los dos centros en el alcohol ß-trimetilsilil es anti según las expectativas y se debe al doble enlace trans en el precursor de boronato írans-(trimetilsilil). La eliminación promovida por una base (Huddrlick et al., 1975) del alcohol ß-trimetilsilil proporcionó una composición enriquecida en acetil-(Z)-1 ,3-dieno mientras que la eliminación promovida por un ácido rindió una composición enriquecida en acetil-(E)-1 ,3-dieno. La desprotección conduce a los respectivos dieno alcoholes, los isómeros (Z) y (E) del ISATx247, respectivamente. Un enfoque alterno a los dienos utiliza alilfosforanes. La metalación de alildifenilfosfina y luego la transmetalación con Ti(Opri)4 rinde el intermediario de titanio. La aliltitanación seguida por eliminación estéreo-específica generaría un compuesto enriquecido en dieno (Z). Por otra parte, cuando el óxido de alildifenilfosfina es sometido a una secuencia similar (FIG. 8), el isómero E es generado preominantemente (75%). i) Alilboración de Acetil CsA-CHO: El boronato (E)-1-trimetilsilil-1-propeno-3 fue preparado de acuerdo con métodos previamente reportados (Ikeda et al., 1987). A una solución agitada de boronato (E)-1-trimetilsilill-1-propeno-3 (0.2 g, 0.832 mmol) en THF (3 mL) bajo nitrógeno se añadió aldehido de acetil Ciclosporina A (1.026 g, 0.832 mmol). La mezcla de reacción fue monitoreada por cromatografía líquida de alto desempeño (columna C-8, fase en reversa) y agitada durante un período total de 7 días. Luego se añadió la trietanolamina (0.196 g, 1.3 mmol) y la agitación continuó durante un período ulterior de 4 días. El alcohol ß-trimetilsilil fue obtenido mediante purificación sobre una columna de gel de sílice. MS(ES) m/z 1368.9 (M + Na+). A Una suspensión de KG (3.5 mg, 26.4 µ????, 30% de una dispersión de aceite mineral lavado con hexanos anhidrosos) en THF anihidroso (1 mL) se añadió alcohol ß-trimetilsilil (10 mg, 7.4 micromol) y se la agitó a temperatura ambiental durante 10 minutos. La mezcla de reacción fue diluida con éter dietil (10 mL) y luego lavada con solución saturada de NaHC03 (2x5 mL). E, secado - - (Na2S04) y remoción de disolvente rindió el dieno enriquecido (Z)-acetil-l ,3. MS (ES) m/z 1294.8 (M + K+) ii) Aliltitanación de Acetil CsA-CHO: A una solución agitada y enfriada (-78° C) de alildifenilfosfina (0.54 g, 2.4 mmol) en THF anhidroso (8 mL) se añadió una solución de t-BuLi (1.42 mL, 2.4 mmol, 1 .7 M, en pentano). La solución color ladrillo-naranja fue agitada durante 15 minutos a esta temperatura y luego a 0°C durante 30 minutos. Luego volvió a enfriarse nuevamente a -78° C y se añadió ??(??G4)4 (0.71 mL, 2,4 mmol). La solución color café fue agitada a esta temperatura durante 15 minutos y luego se añadió una solución de actil CsA-CHO (2.5 g, 2 mmol) en THF (10 mL) mediante una cánula. La solución color amarillo claro fue agitada durante un período ulterior de 30 minutos y luego calentada a temperatura ambiental durante la noche. A la mezcla de reacción se añadió Mel (0.15 mL, 2.4 mmol) a 0!C. La agitación fue continuada durante 1 hora a esta temperatura y luego a temperatura ambiental durante 2 horas. La mezcla de reacción fue vertida sobre 1 % de HCI helado (100 mL). La capa acuosa fue extraída con EtOAc (3 x 50 mL). El extracto orgánico combinado fue lavado con agua (2 x 25 mL) y salmuera (25 mL). La remoción del disolvente rindió un sólido amarillo que fue cromatografiado sobre una columna de gel de sílice. Levigación con una mezcla 1 :3 de acetona-hexanos rindió el isómero (Z) enriquecido de ISATx247. La desprotección según el Ejemplo 4 rindió un isómero (Z) enriquecido de ISATx247 (tasa de relación Z/E, 75:25).
Ejemplo 10: Preparación de una Mezcla (E) Enriquecida de isómeros de A una solución de óxido de alildifenilfosfina (1 mmol) hexametilfosforamida (2mmol) en tetrahidrofurán (5ML) a -78° C se añadió n-butillitio (1 mmol, en hexanos). La mezcla fue agitada a -78°C durante 30 minutos. Se añadió una solución de aldehido de actil ciclosporian A (0.8 mmol) en tetrahidrofurán (7 mL) y se permitió que la mezcla de reacción gradualmente se caliente a temperatura ambiental y luego se agitó durante 18 horas. La mezcla fue vertida sobre ácido 1 N hidroclórico (50mL) helado y luego extraído - - en etil acetato. El extracto orgánico fue lavado con agua, secado sobre sulfato de magnesio y el disolvente evaporado. El residue fue cromatografiado sobre el de sílice utilizando 25% de acetona y 75% de hexanos como levigador para rendir una mezcla de isómeros (E) y (Z) de acetil ISATx247. La remoción del grupo acetato protector según se describe en el Ejemplo 4 rindió una mezcla (E) enriquecida de los isómeros ISATx247. Espectroscopia de protón nmr indicó que la mezcla estaba comprendida por 75% del isómero (E) y 25% del isómero (Z) de ISATx247. Esta reacción también fue llevada a cabo según la modificación de Schlosser (R. Liu, M. Schlosser, Synlett, 1996, 1195). A una solución agitada y enfriada (-78°C) de óxido de alildifenilfosfina (1.21 g, 5 mmol) en THF (20 mL) se añadió n-BuLi (2 ml_, 5 mmol, 2.5 de solución en hexanos). La solución de color rojo fue agitada durante 40 minutos a -78°C. Luego se añadió una solución de acetil CsA-CHO (1.25 g, 1.02 mmol) en THF (12 mL) mediante una cánula, durante 15 minutos. La mezcla de reaccón fue agitada a temperatura ambiental durante 2 horas. El proceso ('workup') y cromatografía según lo anterior rindió acetil ISAjx247 (tasa Z:E, 40:60 por análisis H NMR).
Ejemplo 11 : Preparación de Ciclosporina A Protegida por Benzoil Se disolvieron Ciclosporina A (6.01 g, 5mmol) y 4-dimetilaminopiridina (305 mg, 2.5 mmol) en piridina (5 mL). Se añadió anhídrido benzoico (3.4 g, 15 mmol) y la mezcla se agitó durante 19 horas a 50!C. Se añadió anhídrido benzoico adicional (1.7 g, 7.5mmol) y DMAP (305 mg, 2.5mmol) y la agitación a 50°C continuó durante otras 24 horas. Se añadió anhídrido benzoico (0.85 g, 3.8 mmol) y la reacción fue agitada durante 23 horas adicionales. La mezcla de reacción fue entonces lentamente vertida en agua mientras se agitaba. Benzoato de Ciclosporina A precipitada fue filtrada y lavada con agua. La torta recolectada fue disuelta en un volumen mínimo de metanol y añadida a una solución de ácido cítrico al 10% y agitada durante 1 hora. El producto precipitado fue recogido por filtración y lavado con agua hasta que el pH de lo filtrado igualó el pH del agua. El benzoato de Ciclosporina A sólido fue secado a 50°C bajo vacío para rendir un sólido incoloro.
- - Ejemplo 12: Preparación de Ciclosporina A protegida por éter de trietilsilil La Ciclosporina A (3.606 g, 3mmol) fue disuelta en piridina seca (8 mL) y luego se añadió DMAP (122 mg, 1 mmol). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y luego se añadió gota a gota trifluorometanosulfonato de trietilsilil (3.6 mm). Se permitió que la mezcla se entibie a temperatura ambiental y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción fue entonces vertida lentamente en agua con agitación. El éter de trietilsilil precipitado fue filtrado y lavado con agua. La torta recogida fue disuelva en un volumen mínimo de metanol y fue añadida a una solución de ácido cítrico al 5% y fue agitada durante 30 minutos. El producto precipitado fue recogido por filtración y lavado con agua hasta que el pH de lo filtrado alcanzó el pH del agua. El éter de trietilsilil sólido fue secado a 50°C al vacío para rendir un sólido incoloro. Los grupos protectores de trisopropilsilil y fert-butildimetilsilil fueron también introducidos siguiendo un procedimiento análogo.
Ejemplo 13: Actividad Inmuno-supresora Utilizando el Ensayo de Inhibición de Calcineurina Un indicio de la eficacia de la Ciclosporina A o un derivado de ciclosporina A es su capacidad de inhibir la actividad fosfatasa de la calcineurina. El ensayo de inhibición de la calcineurina mide la actividad del medicamento en su sitio de acción y como tal es la evaluación directa in vitro de la potencia que tienen los análogos de la ciclosporina A (Fruman et al., 1992). La actividad inmuno-supresora de ISATx247 (45-50% de isómero E y 50- 55% de isómero Z) frente a la ciclosporina A ha sido evaluada utilizando en ensayo de inhibición de la calcineurina (CN). Los resultados de este ensayo demuestran que la inhibición de la actividad fosfatasa de la calcineurina por ISATx247 (45-50% isómero Z y 50-55% isómero E) fue de hasta 3 veces más potente (según lo determinado por IC50) al ser comparada con ciclosporina A (Figura 1 1 ).
- - La actividad inmuno-supresora de varias mezclas análogas isómeras deuteradas y no deuteradas frente a la ciclosporina A ha sido evaluada utilizando para ello el ensayo de inhibición de calcineurina (CN). La estructura y composición isómera de estos análogos consta en la Figura 12. En la Figura 12, la designación "14" corresponde a la estructura de ISATx247. I4-M2 denota ISATx247 producida por el método descrito en los Ejemplos 5-8 (designado como Método 2 en esta figura). I4-D4 denota ISATx247 deuterado producido según el método descrito en los Ejemplos 1-4. I4-D2 denota ISAT 247 deuterada producida por el método descrito en los Ejemplos 5-8. Otras mezclas isómeras son como constan en la figura. Los resultados de este ensayo muestran que la inhibición de la actividad fosfatasa de la calcineurina por estas mezclas isómeras análogas fueron por lo menos tan potentes (según se determina mediante IC5o) al ser comparadas con la ciclosporina A (Figura 13). CsA denota Ciclosporina A; lsociclo4 denota ISATx247 producida por el método descrito en los Ejemplos 1-4. lsociclo5 corresponde a 15-M1 de la Figura 12. lsociclo4-d4 corresponde a 14-D4 de la Figura 12. Isociclo 5-d5 corresponde a 15-D5 de la Figura 12. lsociclo4-d2 corresponde a I4-D2 de la Figura 12. Isociclo 4-M2 corresponde a 14-M2 de la Figura 12. lsociclo5-m2 corresponde a 15-M5 de la Figura 12.
Ejemplo 14: Actividad Inmuno-supresora Utilizando el Modelo de Transplante de Corazón en Rata La eficacia de ISATx247 (45-50% de isómero E y 50-55% de isómero Z) para prevenir el rechazo de corazones transplantados entre diferentes variedades de ratas fue evaluada y comprada con aquellos de ciclosporina A. El modelo de transplante de corazón de rata ha sido el modelo que más frecuentemente se ha utilizado para evaluar la potencia in vivo de nuevos medicamentos inmuno-supresores, ya que la supervivencia prolongada de un injerto es difícil de lograr en este modelo debido a rechazo inmune. El procedimiento involucró el transplante heterotópico (a la aorta abdominal y vena cava inferior) del corazón desde ratas Wistar Furth hasta ratas Lewis. Las inyecciones intraperitoneales de ya sea ciclosporina A o una - - mezcla isómera análoga fueron administrados a los receptores de transplante comenzando 3 días antes del transplante y continuaron durante 30 días con posterioridad al transplante. Si se notaba disfunción en el injerto durante los 30 días posteriores al período del transplante, el animal era sacrificado. Si el animal sobrevivía por sobre los 30 días después del transplante, la prueba y artículos de control se descontinuaban y al animal se le permitía vivir hasta que se producía disfunción del injerto o hasta 100 días posteriores al transplante. Las tasas de supervivencia promedio para cada grupo de animales receptores quedan resumidas en la Tabla 1. Estos resultados demuestran que ISATx247 (45-50% de isómero E y 50-55% de isómero Z) a una dosis óptima de 1.75 mg/kg/día incrementaron el tiempo de supervivencia por aproximadamente 3 veces más con respecto a la Ciclosporina a. Un número de animales que recibieron ISATx247 todavía tenían injertos que funcionaban a los 100 días posteriores al transplante (70 días posteriores a la descontinuación de dosificación). Estos datos demuestran la actividad inmuno-supresora que esta mezcla isómera análoga tiene para evitar el rechazo a injertos.
Tabla 1 Efecto del ISATx247 y Ciclosporina A Administradas por vía Intraperitoneal sobre los Tiempos Promedios de Supervivencia para Corazones Transplantados en Ratas (promediados partiendo de dos estudios independientes, n 13) Dosis Tiempo Promedio de Supervivencia (días post- (mg/kilogramo/día) operatorios) Media + SEM (microscopio electrónico de escaneo) Control de Ciclosporina A ISATx247 Vehículo 0 9 + 1 0.5 13a + 4 1 1a + 2 1.75 18b + 7 57b + 32 3 50c + 8 55° + 12 a' 0 No es significativamente diferente Significativamente diferente (<p0.01) - - La eficacia de varias mezclas análogas isómeras deuteradas y no-deuteradas (cuyas estructuras constan en la Figura 12) para prevenir el rechazo de corazones transplantados a varias variedades de ratas fue también evaluada y comparada con respecto a la ciclosporina A. Las dosis correspondieron a 1.75 mg/kg/día durante 30 días. Los resultados quedan resumidos en la Tabla 2. Estos resultados muestran que las mezclas isómeras a razón de 1.75 mg/kg/día incrementaron el tiempo de supervivencia en por lo menos tanto como la Ciclosporina A y demuestran actividad inmuno-supresora de estas mezclas isómeras análogas para prevenir el rechazo a injertos. Tabla 2 Efecto de Varias Mezclas Isómeras Análogas y de la Ciclosporina A administradas por vía intraperitoneal, a razón de 1.75 mg/kg/día sobre los Tiempos Promedio de Supervivencia de Corazones Transplantados en Ratas) Compuesto de Tiempo Promedio de Supervivencia (días post-operatorios) Prueba [00216] Control de 9 Vehículo 20 Ciclosporina A 20 15-M1 20+ 14-M2 30 14-D2 Ejemplo 15: Actividad Inmuno-supresora en Alotransplante de Célula Aislada Se investigó la capacidad del ISATx247 (45-50% de isómero E y 50-55% de isómero Z) versus ciclosporina A para prolongar la supervivencia de células aisladas transplantadas en un modelo con ratones durante el curso de un estudio que involucró el transplante de 500 células aisladas de un ratón CBA/J en la cápsula renal de diabético Balb/c en receptores ratones.
- - Luego del transplante se administró ISATX247 O Ciclosporina A mediante inyección intraperitoneal (i.p.) a un nivel de dosificación de 0 (vehículo), 1 .75, 10, 20 o 25 mg/kg/día durante un total de 30 días. La glucosa de la sangre fue monitoreada a diario hasta el momento en que el injerto falló, según se define por un nivel de glucosa superior a 17 mmol/L durante dos días consecutivos. Los resultados indican que el ISATX247 incrementó el largo re desempeño correspondiente al 40% a una dosis de 20 mg/kg/día (Tabla 3). También se anotó que el ISATX247 resultaba menos tóxico que la ciclosporina A a medida que el nivel de dosis aumentaba. Esto se hizo especialmente aparente al nivel de dosificación de 25 mg/kg/día. Tabla 3 La Supervivencia de Aloinjertos de Células Aisladas de Ratón en Ratones diabéticos que Recibieron ya sea ISATx247 o Ciclosporina A mediante Inyección Intraperitoneal a un Nivel de Dosificación de 1.75, 10, 20 o 25 mg/kg/día Dosis Tratamiento N Supervivencia Supervivei (mg/kg/día) Media (días) Media (días 0 Vehículos 7 17 16.8 1 .75 CsA 9 17 17.4 1 .75 ISA 9 18 18.7 10 CsA 6 21 25.3 10 ISA 5 18 19.2 0 Vehículo 12 16 15.9 20 CsA 9 19 20.2 20 ISA 9 >28 >28 0 Vehículo 5 21 2.1 7 de 10 animales en este grupo murieron a causa de toxicidad CsA. Por lo tanto, únicamente 3 animales completaron en este grupo y no se levantaron estadísticas.
Ejemplo 16: Actividad Inmuno-supresora en Artritis A lo largo del curso de las tres últimas décadas, tres modelos animales de artritis reumatoide humana han sido examinados extensamente y ampliamente aplicados en la selección pre-clínica y desarrollo de novedosos agentes anti-reumáticos. Éstos incluyen los inducidos por adyuvantes, inducidos por colágeno y modelos de artritis inducidas por antígenos. Los - - siguientes estudios fueron designados para evaluar la eficacia anti-inflamatoria de ISATx247 (45-50% de isómero E y 50-55% de isómero Z) tanto en el modelo de artritis inducida por colágeno en el ratón así como el modelo de artritis inducida por antígenos en el conejo. La histopatología e ¡nmunopatología observados en estos dos modelos se asemejan a los hallazgos de la enfermedad humana. En ambos modelos se examinó la eficacia del ISATx247 para prevenir el inicio de artritis (protocolo de prevención) y para tratar la artritis (protocolo de tratamiento). Estos estudios apoyan la acción inmuno-supresora de las mezclas isómeras análogas que están siendo reivindicadas.
A. Artritis Inducida por Colágeno Ratones machos DBA/1 Lac J mantenidos bajo condicione libres de anticuerpos a virus, fueron inmunizados subcutáneamente a las 8 a 10 semanas de edad con 100 microgramos de colágeno de pollo tipo II, emulsificado en adyuvante completo de Freund. Se administró a diario por vía intraperitoneal (inyección i.p.) ISATx247, ciclosporina A, o vehículo (Cremophor EL/etanol 7:28, volumen/volumen) en soluciones de 1 a 50 veces de medicamento en existencia(0.25, 0.5 o 1 mg/mL) en salina para rendir concentraciones de 0 (vehículo); 125, 250, o 500 µg/ratón en el caso de ISATx247; y 250, o 500 µg ratón en el caso de ciclosporina A. Los animales asignados al protocolo de prevención (12/grupo) fueron dosificados a partir del día de la inmunización con colágeno (Día 0) hasta su sacrificio en el Día 40. Los animales asignados al protocolo de tratamiento (12/grupo) fueron dosificados a partir del día de inicio de la enfermedad (-Día 28) hasta su sacrificio en el Día 38. Los parámetros evaluados incluyeron mortalidad, creatinina en el suero, histología y evaluaciones de resultados tales como calificación clínica (visual), hinchazón de pata trasera, calificación histológica, calificación de erosión e ¡nmunohistoquímica.
- - La calificación de erosión fue realizada de manera ciega al examinar secciones sagitales de la coyuntura interfalangeal próxima del dedo medio para detectar la presencia o ausencia de erosiones (definidas como defectos demarcados en el cartílago o hueso llenos de tejido inflamatorio). Este enfoque permitió la comparación de la misma coyuntura. Estudios previos han demostrado erosiones en >90% de animales con artritis en esta coyuntura, que no habían sido tratados. Los resultados indican que la calificación de erosión negativa en el grupo de tratamiento con altas dosis de ISATx247 (500 µg/ratón) fueron importantemente más altas que las calificaciones de erosión negativas en el grupo de tratamiento con vehículo (p<0.05). Tanto la dosis media de ISATx247 (250 µg/ratón) como la alta dosis de ciclosporina A (500 µg/ratón) en los grupos de tratamiento tuvieron mayor erosión negativa al compararse con el grupo de tratamiento con vehículo (p<0.1 ). Lo que es más, los grupos de control de tratamiento con baja dosificación de ISATx247 (125 g/ratón) y dosis media de ciclosporina A (250 µg ratón) tuvieron calificaciones de erosión negativa más altas, aunque no estadísticamente importantes que el grupo de control de vehículo. El único tratamiento que significativamente previene el desarrollo de erosiones de las coyunturas fue el de ISATx247 a razón de 500µg/ratón. Esta importante reducción en la proporción de las coyunturas PIP que exhibieron cambios de erosión en los ratones tratados con ISAJx247 relativos al grupo de control de vehículo demuestra que el ISATx247 tiene propiedades modificadoras de la enfermedad.
B. Artritis Inducida por Antíqenos A conejos New Zealand White mantenidos bajo condiciones específicamente libres de patóneos se les inmunizó con 10 mg de ovalbúmina en salina emulsificada con adyuvante completa de Freund, que fue administrada intramuscularmente y subcutáneamente en varios sitios de la nuca del cuello. Catorce días después, todos los animales comenzaron a recibir - - dos inyecciones intra-articulares diarias de 5 mg de ovalbúmina y 65 ng de factor humano de crecimiento recombinante de transformación 2 en salina. ISATx247, ciclosporina A, o vehículo (Chremophor EL/etanol 72:28, VA/) fueron administrados a diario mediante inyección subcutánea de soluciones de 1 a 4 veces de medicina en stock (en vehículo) en salina para rendir concentraciones de 0 (vehículo); 2.5, 5.0, ó 10 mg/kg/día para ISATx247; y 5.0, 10, ó 15 mg/kg/día de ciclosporina A. Los animales asignados al protocolo de prevención (8/grupo) fueron dosificados a partir del día de vacunación o inmunización con ovalbúmina (Día 0) hasta su sacrificio en el Día 42. Los animales asignados al protocolo de tratamiento (8/grupo) fueron dosificados comenzando en el día del inicio de la enfermedad (-Día 28) hasta su sacrificio en el Día 42). Los parámetros evaluados incluyeron mortalidad, peso corporal, creatinina en el suero, histología y evaluaciones de resultados tales como hinchazón de la articulación de la rodilla, conteo de fluido sinovial, análisis grueso post-mortem, e histología. Se observó una importante disminución en las calificaciones histopatológicas sinoviales en animales ISATx247 (P 0.05) y ciclosporina A (P 0.05) luego de 28 días de terapia(protocolo de prevención) comparado con los animales del control de vehículo. Esto fue acompañado por importantes reducciones en el conteo de fluido sinovial (ISATx247 (P 0.05; ciclosporina A, P 0.05). También fue evidente la significativa mejoría en las calificaciones histopatológicas sinoviales de animales con artritis establecida luego de 14 días de tratamieinto con ISATx247 (P 0.05) y reducción en la calificación de artritis macroscópica fue evidente en ISATx247 (P=0.01 ), mas no así en animales tratados con ciclosporina A. El tratamiento fue bien tolerado sin toxicidad importante al momento de analizar la creatinina del suero o histología post-mortem. Los datos demuestran que el ISATx247 es equivalente o potencialmente más potente que la ciclosporina A en el tratamiento y prevención de artritis reumatoide en un modelo con conejos.
- - Ejemplo 17: Propiedades Fármaco-cinéticas v Tóxico-cinéticas Los parámetros fármaco-cinéticos y tóxico-cinéticos de ISATx247 (45-50% de isómero E y 50-55% de isómero Z) y de ciclosporina A fueron probados en un modelo con conejos. El conejo también ha sido utilizado como un modelo para estudiar la nefrotoxicidad de ciclosporina A, pero mucho menos frecuentemente que en la rata. Los estudios han encontrado que la ciclosporina A administrada al conejo ocasiona cambios estructurales y funcionales a una dosificación que no solamente es menor de lo que previamente había sido reportado en otros modelos animales, sino también dentro de por lo menos el nivel superior de rango terapéutico en humanos (Thliveris et al., 1991 , 1994). Además, el hallazgo de fibrosis intersticial y arteriolopatía, además de los cambios citológicos en los túbulos, sugiere que el conejo es un modelo más apropiado para el estudio de nefrotoxicidad, ya que estas entidades estructurales constituyen hitos de nefrotoxicidad observada en humanos. Durante los primeros 7 días se administró ISATx247 intravenosamente (i.v.) y subcutáneamente (s.c.) durante 23 días adicionales, de acuerdo al siguiente programa.
- - Tabla 4 El Programa de Administración de Dosis para la investigación de las Propiedades Fármaco- cinéticas y Tóxico-cinéticas del ISATx247 en el Modelo con Conejos Grupo de Tratamiento Días 1-7: Días 8-30: Número de Animales Dosis i.v. Dosis s.c. Machos Hembras (mg/kg) (mg/kg) 1 . Control de vehículo 0 0 4 4 3. Baja Dosis 10 10 4 4 4. Dosis Media 15 15 4 4 5. Alta Dosis Se utilizaron conejos libres de patógenos (SPF) para asegurarse de que cualquier cambio renal observado se debiera al efecto del ISATX247 y no a los patógenos. En los Días 1 a 7, se recogieron muestras de sangre antes de administrarles el medicamento a las 0.5, 1 , 2, 4, 8, 12, 18 y 24 horas posteriores a la dosis, con el fin de generar un perfil fármaco-cinético. Otros parámetros evaluados incluyeron observaciones clínicas, peso corporal, consumo de alimentos, hematología, química clínica, patología gruesa, y examen histopatológico de ciertos tejidos u órganos. Las muestras de sangre fueron analizadas mediante cromatografía líquida de alto desempeño acompañada por espectrometría de masas (LCMS). La Tabla 5 que consta a continuación resume los parámetros fármaco-cinéticos promedio en conejos que recibieron 10 mg/kg de ciclosporina A o ISATX247. Tabla 5 Parámetros Fármaco-cinéticos de la Administración Intravenosa de Ciclosporina A e ISATx247 en Conejos Machos que Recibieron 10 mg/kg/día. Los resultados se expresan a manera de SD + Media Ciclosporina A ISATx247 Parámetro Medido Día 1 Día 7 Día 1 Día 7 tmax (horas) 0.5 0.5 0.5 0.5 Cmax (µ9/?) 1954 + 320 2171 +612 1915 + 149 1959 + 470 1 1/2 (horas) 7.4± 2.8 9.0 ± 4.0 7.4 ± 1 .7 9.2 ± 1 .1 Área bajo la curva 6697 ± 1 717 6685 ± 5659 ± 5697 ± ^g=hora/L) 1247 1309 1373 - - No hubo diferencias estadísticamente importantes en los parámetros fármaco-cinéticos para la ciclosporina a e ISATx247 en conejos machos que recibieron 10 mg/kg/día. Los parámetros fármaco-cinéticos de ISATx247 en conejas hembras que recibieron la misma dosis no fueron importantemente diferentes de aquellos observados en conejos machos, excepción hecha de la concentración máxima en el Día 7. No se anotaron cambios importantes en los parámetros hematológicos de conejos que recibían un control de vehículo, ciclosporina a, o ISATx247. Se notó una diferencia en los niveles de creatinina en los varios grupos a lo largo del estudio, según consta en la Tabla 6 que consta a continuación. Estas diferencias indicaron que la Ciclosporina A había tenido efectos negativos significativamente mayores sobre los ríñones que ya sea el control de vehículo o ISATx247. Cabe anotar que aún a una dosis 50% más alta de 15 mg/kg/día, al compararse con 10 mg/kg/día de ciclosporina A, el ISATx247 no trajo como resultado ningún aumento importante en los niveles de creatinina en el suero.
Tabla 5 Cambios Porcentuales en Niveles de Creatinina del Suero Sobre la Línea Base en Conejos Machos que Recibieron Vehículo, Ciclosporina a o ISATx247 Durante 30 Días Grupo de Tratamiento Día 15 Día 30 Vehículo + 6% -3% Ciclosporina A (10 mg/kg) + 22% +33% ISATx247 (10 mg/kg) +1 % +10%+ ISATx247 (15 mg/kg) -19% -11 % El examen de órganos en todos los conejos que recibieron el control de vehículo, 10 mg/kg de ciclosporina a, 5 mg/kg de ISATx247, o 10 mg/kg de ISATx247 no revelaron anormalidades importantes. Esto fue verdaderamente cierto en cuanto a ríñones, en los que no se evidenció fibrosis intersticial, normalmente visto en los animales tratados con ciclosporina A (Thliveris et al., 1991 , 1994). En los conejos machos que recibieron 15 mg/kg de ISATx247, se anotó una disminución en la espermatogénesis. No se notó cambio alguno en - - las 3 conejas hembras que completaron el estudio a esta dosificación de 15 mg/kg de ISATx247.
Ejemplo 18: Efectos Inmuno-supresores del ISAjx247 Se incubó sangre íntegra de monos cinomolgos (n=4) con ISATx247 ó ciclosporina y se la estimuló con diferentes mitógenos en medio de cultura. La proliferación de linfocitos fue evaluada mediante la incorporación de timidina identificada con tritium y mediante análisis flujo-citométrico de expresión de proliferación de antígeno nuclear de las células (PCNA) sobre células en fase SG2M. También e empleó citometría de flujo para evaluar la producción de citocinas intra-celu lares por células T y expresión de antígenos de aactivación de infocitos T. Subsiguiente se calculó la EC5o (concentración de medicamento para alcanzar el 50% del efecto máximo) empleando el software WinNonlin™. Los resultados demostraron que la proliferación de linfocitos, producción citosina, y expresión de antígenos superficiales de la célula T fueron inhibidos más potentemente por el ISATx247 que por la ciclosporina, según consta en el EC50 (expresado en ng/mL9 según consta en la Tabla 7 a continuación. Tabla 7 Parámetro ISATx247 Ciclosporina Toma de 3H-timidina 160.54 565.52 Expresión PCNA 197.72 453.88 Producción de IL-2 103.35 504.80 Producción de IFN- 102.67 456.65 Producción de TNF 90.58 508.29 Expresión de CD 71 149184 486.82 Expresión de CD 25 121.00 431.53 Expresión de CD 1 1 a 204.40 598.90 Expresión de CD 95 129.98 392.97 Expresión de CD 154 160.87 975.10 - - Por ende, utilizando un ensayo de sangre íntegra ex vivo, hemos encontrado que el ISATx247 suprime diversas funciones inmunes 2.3 a 6 veces más potentemente que la ciclosporina.
Ejemplo 19: Reacción Wittiq Usando Bromuro de Tributil Alil Fosfonio Se disolvió butóxido tert de potasio (0.31 g, 2.8 mmol) en 20 mL de tetrahidrofurán. A alrededor de -40°C se añadió lentamente bromuro de tributil alil fosfonio (0.99 g, 3.1 mmol) disueltos en 3 mL de tetrahidrofurán. La mezcla amarilla resultante fue agitada durante 10 minutos a alrededor de -40°C antes de que se añadiera lentamente una solución de aldehido de acetil ciclosporina A (1.5 g 1.2 mmol) en 6 mL de tetrahidrofurán. Luego de agitar la mezcla de reacción amarillo-naranja durante 1.5 horas, la reacción se completó. Para aplacar, la mezcla de reacción fue transferida a ácido fosfórico acuoso (1.2 g 1.0 mmol). La solución acuosa resultante fue extraída con 100 mL de tolueno, seguido por 50 mL de tolueno. Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con agua y concentradas bajo presión reducida para secarse. El producto, ISAjx247 acetilado, se obtuvo a manera de un sólido ligeramente amarillo con un rendimiento de alrededor del 90%. La tasa de isómeros correspondió a alrededor del 875% de isómero E y alrededor de 13% de isómero Z (según lo determino la espectroscopia 1H-NMR).
Ejemplo 20: Reacción Wittig, utilizando bromuro de tributil alil fosfonio y un base de litio El bromuro de tributil alil fosfonio (1.38 g, 4.3 mmol) fue disuelto en una mezcla de 20 mL de tolueno y 3 mL de tetrahidrofurán. A alrededor de - 78°C se añadió lentamente butil litio (1.6 M en hexano, 2.43 MI, 3.9 mmol). La mezcla resultante amarilla fue agitada durante alrededor de 10 minutos a alrededor de -78°C antes de que se añadiera lentamente una solución de aldehido acetil ciclosporina (1.5, 1.2 mmol) en 6 mL de tolueno. Luego de agitar la mezcla de reacción amarillo-naranja durante 3.5 horas, la reacción fue - - aplacada al transferir la mezcla de reacción a una mezcla de 50 mL de tolueno y ácido fosfórico acuoso (0.25 g, 2.2 mmol). Se permitiió que la resultante mezcla bifásica se entibiara a temperatura ambiental antes de que se separaran las dos capas. La capa de tolueno fue lavada con 2 mL de agua y concentró bajo presión reducida hasta que se secó. El producto, ISATx247 acetilado, fue obtenido a manera de un sólido ligeramente amarillo con aproximadamente 80% de rendimiento. La tasa de isómero correspondió a alrededor del 70% isómero E y alrededor de 30% isómero z (según lo determinó la espectroscopia 1H-NMR).
Ejemplo 21 : Reacción Wittiq utilizando bromuro de tributil alil fosfonio v una base de litio Activando SAP018 según lo que se describe anteriormente, pero únicamente a alrededor de -40°C. Las condiciones experimentales del Ejemplo 20 fueron repetidas, esta vez utilizando una temperatura de reacción de alrededor de -40°C. Bajo estas condiciones la tasa isómera del producto aislado, ISATx247 acetilado, correspondió a alrededor del 75% según peso de isómero E y hasta alrededor del 26% según peso del isómero Z, según lo determinó la espectroscopia H-NMR.
Ejemplo 22: Reacción Wittiq utilizando bromuro de tributil alil fosfonio Una solución de aldehido de acetil ciclosporina A (1.5 g, 1.2 mmol) y bromuro de tributil alil fosfonio (0.99 g 3.1 mmol) en 15 mL de tetra h id rofurán fue enfriada hasta alrededor de -80°C. Se añadió lentamente tert- butóxido de potasio (0.19 g 1.7 mmol) disuelto en 9 mL de tetrahidrofurán. La mezcla amarilla resultante fue agitada durante una hora a alrededor de -80°C para completar la reacción antes de añadir lentamente una solución de 6 mL de tegrahidrofurán. Luego de ser agitada la mezcla de reacción amarillo-naranja durante 1.5 horas, la reacción estuvo completa. Para aplacar la mezcla de reacción se añadió ácido fosfórico acuoso (0.15 g 1.3 mmol). La mezcla resultante fue concentrada y el residuo fue disuelto en 5 mL de metanol. Luego se añadió lentamente la mezcla a 5 mL de agua. El precipitado resultante fue - - filtrado, lavado con 4 mL de metanol/ aga (1/1 ), y secada al vacío. El producto, ISATx247 acetilado fue obtenido a manera de un sólido incolor con aproximadamente el 90% de rendimiento. La tasa de isómeros correspondió a alrededor del 91 % según peso de isómero E y 9% según peso de isómero Z (determinado mediante espectroscopia 1H-N R).
Ejemplo 23: Ozonolisis de acetil CsA Una solución de acetil ciclosporina A (15 g, 12.1 mmol) den 200 mL de metanol fue ozonizada a -78°C, utilizando un generador de ozono Sander, a alrededor de 1.1 bars con un flujo corriente de 300 L 02/hora hasta que la reacción fue completa (alrededor de 5 minutos). La solución fue gaseada con argón y aplacada con dimetilsulfuro disuelto en metanol. Para completar la reducción, la mezcla fue agitada durante la noche a temperatura ambiental. Luego de la concentración hasta alrededor de 50 mL la solución fue añadida lentamente a 500 mL de agua. El precipitado resultante fue filtrado, lavado con 60 mL de agua y secado al vacío. El producto, aldehido de CsA acetilada fue obtenido a manera de un sólido incoloro con aproximadamente 95% de rendimiento y una pureza de alrededor del 98% (determinada por HPLC).
Ejemplo 24: Preparación de Ciclosporina A protegida por Trimetilsilil Se disolvió ciclosporina A (40 g 1 equivalencia) en diclorometano (100 ml) a 30°C. Se añadió urea N,N-bis-(trimet¡lsil¡l) (1.1 equivalencia). Luego de 5 minutos de agitación a 30°C, se añadió ácido sulfónico de p-tolueno (0.02 equivalencias). La mezcla de reacción fue calentada a reflujo hasta completar la reacción, según se midió mediante cromatografía de capa delgada (TLC), cromatografía líquida de alta presión o alto desempeño (HPLC) o espectrometría (MS) y luego enfriada a temperatura ambiental. Se añadió una solución acuosa medio saturada de bicarbonato de sodio (100 mi). La fase acuosa fue separada y re-extraída con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2S04 anhidroso, y filtradas. El disolvente fue removido bajo presión reducida, proporcionando la Ciclosporina A cruda protegida por trimetilsilil.
- - Ejemplo 25: Preparación de aldehido de Ciclosporina A protegida por trimetilsilil La Ciclosporina A protegida por trimetilsilil (5 g, 1 equivalencia) fue disuelta en diclorometano (50ml). La solución fue entonces enfriada a una temperatura de alrededor de -78°C, luego de lo cual se burbujeó ozono en toda la solución hasta que se tornó de un color azul. Luego, se burbujeó argón en toda la solución hasta que se obtuvo un solución incolora a fin de retirar el exceso de ozono; este paso fue llevado a cabo para retirar el exceso de ozono, Se añadió trietilamina (5 equivalencias) y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiental durante 17 horas. Se obtuvo aldehido de Ciclosporina A protegida por trimetilsilil después de un work-up acuoso.
Eiemplo 26: Preparación de una mezcla 2:1 de isómeros Z a E de doble enlace de dieno Ciclosporina A protegida por trimetilsilil vía reacciones Wittig A una mezcla de íert-butóxido de potasio (3 equivalencias) y bromuro de alil trifenilfosfonio en tolueno (10 mi) previamente agitada durante 60 minutos, se añadió el aldehido de Ciclosporina A protegida por trimetilsilil (1 g, 1 equivalencia). El work-up de la mezcla de reacción después de 1 hora de reacción a temperatura ambiental proporcionó una mezcla de 3:1 (mediante NMR) de isómeros Z y E de doble enlace del dieno de Ciclosporina A protegida por trimetilsilil.
Ejemplo 27: Preparación de una mezcla 1.1 de isómeros Z a E de doble enlace de dieno de Ciclosporina A protegida por trimetilsilil vía reacciones Wittig. El aldehido de Ciclosporina A protegida por trimetilsilil (2.5 g) fue diesulto en 25 mi de tolueno y tratado con solución 1 N acuosa de hidróxido de sodio (10 equivalencias). La mezcla de reacción fue vigorosamente agitada y se añadió bromuro de aliltrifenilosfonio (7.5 equivalencias, por porción). EL work-up de la mezcla de reacción fue llevado a cabo y luego de varias horas de reacción a temperatura ambiental proporcionó una mezcla ca 1 :1 (por NMR) de isómeros Z y E de doble enlace del dieno de Ciclosposrina a protegida por trimetilsilil.
- - Ejemplo 28: Preparación de una mezcla 1 :2 de isómeros Z a E de doble enlace, de dieno de Ciclosporina A protegida por triimetilsilil via reacciones Wittiq El aldehido de Ciclosporina A protegida con trimetilsilil (1 g) fue disuelto en 5 mi de tolueno junto con carbonato de potasio (1.5 equivalencias) y y bromuro de aliltrifenilfosfonio (1.5 equivalencias). EL work-up de la mezcla de reazcción después de 4 horas de reacción a reflujo bajo agitación vigorosa rindió una mezcla ca 1 :2 (según (NMRI) de isómeros Z y E de doble enlace del dieno de Ciclosporina A protegida por trimetilsilil.
Ejemplo 29: Preparación de una mezcla 1 :3 de isómeros Z a E de doble enlace de dieno de Ciclosporina A protegida por trimetilsilil vía reacciones Wittiq Bromuro de aliltributilfosfonio (3 equivalencias, preparado de alilbromuro y tributilfoffina) fue disuelto en THF (3.5 mi). Se añadió Tolueno (7.5 mi) seguido por terf-butóxido de potasio (4 equivalencias). Luego de 1 hora de agitación a temperatura ambiental, la solución fue enfriada a ca -30°C. Una solución de aldehido de Ciclosporina a protegida por trimetilsilil (1 g, 1 equivalencia) en tolueno (5 mL) fue añadida gota a gota. Luego de 45 minutos a alrededor de -30°C, la mezcla de reacción fue trabajada, proporcionando una mezcla de aproximadamente 1 :3 (según NMR) de isómeros Z y E de doble enlace del dieno de Ciclosporina a protegida por trimetilsilil. Los siguientes dos ejemplos, Ejemplos 30 y 31 , se dirigen hacia alilmetalaciones.
Ejemplo 30: Preparación de ß— trimetilsilil alcohol de Ciclosporina A protegida por acetilo A una solución de aliltrimetilsilano (10.1 equivalencias) en THF (15 mi) se añadió butil litio (1.6 en hexanos, 10 equivalencias) a tempertura ambiental. Luego de 30 minutos de reacción, la solución fue enfriada a -75°C, y tratada con dietil-B-metoxiborano (10.1 equivalencias). Luego de 1 hora, se añadió complejo de borontrifluoruro dietileter (10.1 equivalencias) para generar - - el reactivo B-(y-trimetilsil-alil)-dietilborano. Después de 1 hora se añadió gota a gota una solución de aldehido de Ciclosporina A protegida por acetilo (5 g, 1 equivalencia) en THF (15 mi). Luego de 20 minutos, la mezcla de reacción fue calentada a -10°C y se añadió una solución saturada acuosa de NH4CI. Luego de agitar durante una hora a temperatura ambiental, se añadió agua (45 mi) y la mezcla de reacción fue extraída 3 veces con 25 mi de etilo acetato. Las fases orgánicas fueron lavadas en secuencia con agua (25 mi) y una solución acuosa saturada de NH4CI (25 mi). Las fases orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2S04, filtradas y concentradas bajo presión reducida. EL producto crudo fue cromatografiado (gel de sílice, diclorometano/metanol o etil acetato/heptano) para rendir el ß-trimetilsililalcohol de Ciclosporina A protegida por acetilo.
Ejemplo 31 : Preparación de ß-trimetilsililalcohol de ciclosporina A protegida por trimetilsilil A una solución de aliltrimetilsilano (10.1 equivalencias) en THF (15 mi), se añadió butil litio (1 .6 M en hexanos, 10 equivalencias) a temperatura ambiental. Luego de permitir que la reacción proceda durante alrededor de 30 minutos, la solución fue enfriada a -65°C, y tratada con dietil-B-metoxiborano (10.1 equivalencias). Luego de 1 hora, se añadió complejo borontrifluoruro dietiléter para generar el reactivo b-(y-trimetilsilil-alil)-dietilborano. Luego de 1 hora, se añadió gota a gota una solución de aldehido de ciclosporina A protegida por trimetilsilil (5 g. 1 equivalencia) en THF (15 mi). Luego de 15 minutos, se calentó la mezcla de reacción a 10°C y se añadió una solución acuosa saturada de NH4CI. La mezcla de reacción fue extraída dos veces con 25 mi de éter de metil-t-butil. Las fases orgánicas fueron lavadas dos veces en secuencia con agua (2 x 25 mi) y una solución acuosa saturada de NaCI (25 mi). Las fases orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2So4, filtradas y concentradas bajo presión reducida. El producto crudo fue cromatografiado (gel de sílice, acetato de heptano/etilo) para rendir el ß-trimetilsililalcohol de Ciclosporina A protegida por trimetilsilil.
- - A continuación se presentan tres ejemplos, los Ejemplos 32, 33, y 34, que están orientados hacia las reacciones de eliminación Peterson.
Ejemplo 32: Preparación de dieno de Ciclosporina A protegida por E-acetilo El ß-trimetilsililalcohol de ciclosporina A protegida por acetilo (100 mg, 1 equivalencia) fue disuelta en THF (1 mi). H2SO4 concentrado (10 µ?_) fue añadido y la mezcla de reacción fue agitada durante la noche a temperatura ambiental. Se añadió agua (10 m) y la mezcla de reacción fue extraída con diclorometano (10 mi). La fase acuosa fue re-extraída con diclorometano (10 mi). Las fases orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2S04l filtradas y concentradas bajo presión reducida para rendir el dieno de ciclosporina A protegida por acetilo (ISATx247 protegido por acetilo). El producto crudo fue cristalizado a partir de éter de metil-t-butil/THF y luego vuelto a cristalizar a partir de éter de metil-t-butil/DCM para rendir dieno de ciclosporina A protegida por acetilo (ISATx247 protegido por acetilo) a manera de una mezcla a 99-97%:1-3% de isómeros E y Z de doble enlace (según 400MHZNMR, 2% de error en la medida). Se condujo la hidrólisis de dieno de ciclosporina A protegida por Acetilo de la siguiente mantera: el dieno de acetil ciclosporina A (4 g, 1 equivalencia) fue disuelto en metanol (80 mi) y agua (32 mi). Se añadió carbonato de potasio (3.65 g, 8.3 equivalencias). Luego de agitar durante 15 horas a temperatura ambiental, la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C durante 4 horas. La mezcla de reacción fue concentrada bajo presión reducida y el residuo fue tomado en etilo acetato (70 mi). Se añadió lentamente una solución acuosa de ácido cítrico al 15% (30 mi), seguida por agua (10 mi). La capa acuosa fue separada y re-extraída con etil acetato (56 mi). Las fases orgánicas fueron lavadas con agua (30 mi), solución de ácido cítrico al 15% (40 mi) y solución saturada de NaCI (30 mi). Las capas orgánicas fueron combinadas, secadas sobre Na2SP4 y y concentradas bajo presión reducida para rendir dieno de ciclosporina A (ISATx247).
- - Ejemplo 33: Preparación de dieno de ciclosporina A protegida por Z-trimetilsilil y su conversión a dieno de Z-ciclosporina A (ISAT 247) El ß-trimetilsililalcohol de ciclosporina A protegida por trimetilsilil (2 g. 1 equivalencia) fue disuelta en THF (20 mi). La solución fue enfriada a 0-2°C y se añadió t-butóxido de potasio (4 equivalencias). Luego de 1.5 horas de reacción, se añadieron etil acetato (20 mi) y agua (40 mi). La capa acuosa fue separada y re-extraída con etil acetato (20 mi). Las fases orgánicas fueron lavadas con una solución acuosa saturada de NaCI (20 mi). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, filtradas y concentradas bajo presión reducida para rendir una mezcla de dieno de ciclosporina A protegida por Z-trimetilsilil (ISATx247 protegida por trimetilsilil), y dieno de Z-ciclosporina A (el isómero Z de ISATx247). Se cumplió la destilación disolviendo la mezcla del producto crudo en metanol (10% según peso en la solución) y añadiendo una solución 1 M acuosa de ácido hidroclórico (1 equivalencia). Transcurridos 15 minutos a temperatura ambiental, se añadieron agua y etil acetato. La capa acuosa fue separada y re-extraída con etil acetato. Las fases orgánicas fueron lavadas con una solución acuosa saturada de NaCI. Las fases orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2S04, filtradas y concentradas bajo presión reducida, rindiendo dieno de ciclosporina A (ISATx247) a manera de una mezcla de 94:6 de isómeros A y E de doble enlace (mediante NMR).
Ejemplo 34: Preparación de dieno de E-ciclosporina A (ISAjx247 El ß-trimetilsililalcohol de ciclosporina A protegida por trimetilsilil (500 mg, 1 equivalencia) fue disuelto en diclorometano. Esta solución fue enfriada dentro de un rango de alrededor de 0-2°C, y tratada con complejo borontrifluoruro dietiléter (5 equivalencias). Después de 1 hora, se añadió agua (20 ml( y diclorometano (20 mi). La capa orgánica fue separada y lavada con agua (20 mi), secada sobre Na2S04, filtrada y concentrada bajo presión reducida para proporcionar directamente dieno de ciclosporina A (ISAjx247) a manera de una mezcla 91 :9 según peso de los isómeros E y Z de doble enlace (mediante NMR).
- - Ejemplo 35: Desprotección del dieno de ciclosporína A protegida por trimetilsilil El dieno de ciclosporína A protegida por trimetilsilil fue disuelto en metanol (10% según peso en la solución). Esta solución fue tratada con una solución 1 M acuosa de ácido hidroclórico (1 equivalencia). Transcurridos 15 minutos a temperatura ambiental, se añadió agua y etil cetato. La capa acuosa fue separada y re-extraída con etil acetato. Las fases orgánicas fueron lavadas con una solución acuosa saturada de NaCI. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, filtradas y concentradas bajo presión reducida, rindiento el dieno de ciclosporína A (ISATx247).
Ejemplo 36: Epoxidación de acetil ciclosporína A Acetíl ciclosporína A (2.0 g, 1.61 mmol) fue disuelta en acetonitrilo (30 mL). Se añadió 1 ,3-díacetoxi-acetona (0.14 g, 0.8 mml), seguido por sal disodio (20 mL) de 0.004 M de ácido tetra-acético de etílenodiamina acuoso y bicarbonato de sodio (0.405 g, 4.82 mmol). A la mezcla agitada se añadió ozono (43.8% KHS05)(2.23 g, 6.43 mmol) por porción a lo largo de 2 horas. El pH se mantuvo a 8.2 por adición constante de N NaOH (cantidad total 6.4 mL) utilizando un pH estático. La temperatura se mantuvo 22-26°C por enfriamiento ocasional, utilizando un baño de agua fría. Después de 2.5 horas la mezcla de reacción fue aplacada con unas cuantas gotas de solución de bisulfito de sodio. Se añadió agua (100 mi) y la mezcla fue extraída dos veces con éter de tert-butíl metil (100 mL, luego 75 mL). Los extractos fueron lavados con cloruro de sodio acuoso diluido (100 mL), combinados, secados sobre Na2S04 y concentrados para rendir epóxido de actil ciclosporína A cruda (1.92 g, 95%; HPLC: área 99.4%) a manera de una espuma blanca y sólida.
Ejemplo 37: Preparación de aldehido de acetil ciclosporína A Epóxido de acetil ciclosporína A crudo (1.92 g, 1.52 mmol) fue disuelto en acetronitrilo (25 mL). Se añadió agua (20 mL), seguido por periodato de sodio (489 mg, 2.28 mmol) y 0.5 M de ácido sulfúrico (3.05 mi, 1.52 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a 40°C durante 18 horas, luego el exceso de - - periodato de sodio fue aplacado mediante la adición de bisulfito acuoso de sodio. Se añadió cloruro de sodio acuoso diluido (100 mL) y la mezcla fue exctraída dos veces con éter de terí-butil metil (100 mL cada uno). Los extractos orgánicos fueron lavados con cloruro de sodio acuoso diluido (100 mL), combinados, secados sobre Na2S04, y concentrado para obtener el aldehido de acetil ciclosporina A crudo (1.74 g, 92%; HPLC:área 95.7%) a manera de una espuma blanca y sólida.
Ejemplo 38: Preparación de aldehido de acetil ciclosporina A, utilizando un procedimiento de un solo recipiente Se disolvió acetil ciclosporina A (2.0 g, 1.61 mmol) en acetonitrilo (30 mL). Se añadió 1 ,3-diacetoxi-acetona (0.084 g, 0.48 mmol), seguido por sal disodio de 0.0004 M de ácido tetra-acético de etilenodiamina (20 mL) y bicarbonato de sodio (0.405 g, 4.82 mmol). A la mezcla agitada se le añadió ozono (43.8% KHS05) (1.67 g, 4.82 mmol) porción a porción durante 2 horas. El pH se mantuvo a 8.2 mediante la adición constante de 1 N NaOH (cantidad total 3.4 mL) utilizando un pH stático. La temperatura se mantuvo a 20-25°C. Luego de 3.5 horas, se añadió 0.5 M de ácido sulfúrico (5 mL, 2.5 mmol) a la mezcla de reacción, seguido por unas cuantas gotas de ácido sulfúrico concentrado, hasta que se alcanzó un pH de 1.3. Luego, se añadió el periodato de sodio (516 mg, 2.41 mmol), y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiental durante 2 horas y a 40°C durante 22 horas. Se añadió agua (100 mL) y la mezcla fue extraída dos veces con éter de terf-butil metil (100 mL, luego 75 mL). Los extractos orgánicos fueron lavados con cloruro de sodio acuoso diluido (100 mL), combinados, secados sobre Na2S04 y concentrados para lograr el aldehido de acetil ciclosporina A crudo (1.9, 96%; HPLC, (3.4% de acetona /60% de hexano como levigador para rendir el producto (1.35 g, 68% basado en acetil ciclosporina A; HPLC: área 100%) a manera de una espuma blanca y sólida.
Ejemplo 39 (ISO): Reacción Wittiq de aldehido de aceetil ciclosporina A. con 3-dimetilaminopropiltrifenilfosforilideno - - El aldehido I de ciclosporina A acetilado fue obtenido por reacción con el ilido 2 libre de sales, que fue generado a partir de la reacción de bromuro de 3-dimetilaminopropiltrifenilfosfonio con hexametildisilazuro de potasio (Corey, E.J. y Desai, M.C. Tetrahedron Letters, 1985, 26, 5757). La oxidación N selectiva del cis compuesto 3 fue lograda utilizando ácido m-cloroperbenzoico a 0°C. La eliminación por recorte del óxico N a temperatura elevada al vacío rindió el isómero Z acetilado. La desprotección según se ha descrito anteriormente rindió el isómero Z de ISATx247. El espectro H NMR (500 MHz) de este compuesto confirmó la geometría Z al exhibir un dúo o tripleta a razón de ? 6.58 con valores J, 169.99 y 10.5 Hz, característico del isómero Z en una mezcla ISATx247. La pureza isómera es de >99% ya que el dúo o tripleta característicos del isómero E en la mezcla a D 6.28 ( =17.5, 10.0 Hz) no fue detectable. A una suspensión agitada de bromuro 3-dimetilaminopropiltrifosfonio (2.5 g, 5.83 mmol) en tolueno anhidroso (20 mL) se añadió hexametildisilazuro de potasio ( 1.6 mL, .8 mmol, solución de 0.5M en tolueno) mediante una jeringa. Luego de agitar durante 1 hora a temperatura ambiental, la solución de color rojo fue centrifugada y el supernatante transferido a un frasco de reacción a través de cánula. Se añadió tolueno anhidroso al sólido (10 mL), que fue agitado y centrifugado. El supernatante fue transferido al frasco de reacción y al ilido combinado de color rojo se le añadió Oac-CsA-CHO (1.44 g 1.17 mmol). La agitación fue continuada durante un período ulterior de 2 horas a temperatura ambiental cuando el color se volvlió amarillo pálido. La mezcla de reacción fue diluida con EtOAc (50 mL) y lavada subsiguientemente con una solución saturada de NaHC03 (50 mL) y salmuera (50 mL). El secado y remoción del disolvente rindió un sólido de color amarillo pálido. La cromatografía realizada sobre una columna de gel de sílice y levigado con mezcla de acetona y hexanos (gradiente: 10 a 75% de acetona y 90 a 25% de hexanos) removió todas las impurezas relacionadas con el fósforo. Una levigación ulterior con acetona rindió el producto deseado a manera de un sólido incoloro (1.28 g, 84% de rendimiento). 1H NMR (300 MHz, CDCI3): 2.23 - - (s, 6H), .03 (s,3H). 3C NMR (300 MHz, CDCI3): 129.33, 126.95; MS m/z; 1301 (M+), 1324 (M+Na+).
Conversión a Óxido N A una solución agitada y enfriada (0°C) del compuesto dimetilamino obtenida mediante reacción Wittig (0.44 g 0.34 mmol) en CHCI3 (3 mL) se añadió una solución de m-CPBA (0.07 g, 0.405 mmol) en CHCL3 (2mL). Luego de agitar durante 30 minutos, se añadió sulfuro de dimetil (0.5 mL) seguido por CH2CI2 (50 mL). Se realizó el 'work-up' mediante lavado con solución de NaHCC>3 (25 mL) y agua (25 mL), secado y remoción de disolvente rindió un sólido (0.43 g). 1H NMR (300 MHz, CDCI3): 3.19 (s, 3H), 3.18 (s, 3H), 2.03 (s,3H). 13C NMR (300 MHz, CDCL3): 131.89, 124.13; MS m/z: 1340 (M+Na+).
Eliminación por Recorte de Óxido N, Preparación de Isómero (Z) de Acetil ISAT*247 El óxido N (350 mg) fue agitado nítidamente y calentado a 100°C al vacío durante 2 horas. Esto fue entonces pasado a través de una columna de gel de sílice. La levigación con mezcla de acetona-hexanos (gradiente, 5 a 25% de acetona y 95 a 75% de hexanos) rindió un sólido incoloro (314 mg). 1H NMR (500 MHz, CDCI3): 6.49 (dt,J=16.99, 10.5 Hz, 1 H); 13C NMR (400 MHz, CDCI3); 132.20, 131.09, 129.70, 116.85; MS m/z; 1279 (M+Na+).
Isómero (Z) de ISATV247 A una solución de (Z) acetil ISATx247 (50 mg) en MeOH (4 mL) se añadió agua (1.5 mL) y K2C03 (60 mg) y se agitó durante 48 horas a temperatura ambiental. A la mezcla de reacción se le despojó de los disolventes y se le extrajo con E50ac (20 mL). La capa orgánica fue lavada con agua (10 mL) y salmuera (10 mL). El secado y remoción de disolvente rindió un sólido incoloro. 1H NMR (500 MHz, CDCI3): 6.58 (dt,J=16.99, 10.5 Hz, 1 H); MS m/z; 1236.8 (M+Na+). El compuesto resultante correspondió a Z-isómero de ISATx247. Mediante NMR se observó un isómero E no sujeto a medición.
- - Aunque solamente se han divulgado específicamente las presentaciones preferidas del invento según se ha descrito anteriormente, se apreciará que muchas modificaciones y variaciones del preesente invento son posibles a la luz de las enseñanzas y dentro de la esfera de visión que ofrecen las reivindicaciones de apertura sin desviarse del espíritu e intención del alcance del invento.

Claims (67)

- 81 - REIVINDICACIONES
1. Un compuesto que comprende una mezcla isómera de un análogo de ciclosporina modificado en el residuo 1-amino ácido con un dieno 1 ,3 sustituyente, en el que la gama de la mezcla isómera por el dieno sustituyente corresponde de entre alrededor del 10% hasta alrededor del 90% del isómero E y alrededor del 90% hasta alrededor del 10% del isómero Z. 2. El compuesto de la Reivindicación 1 , en la que los isómeros no-deuterados constituyen los isómeros E y Z, según se especifica a continuación:
Isómero E Isómero Z
3. El compuesto de la Reivindicación 1 ó 2, en el que la mezcla isómera comprende alrededor del 15% hasta alrededor del 85% del isómero E y alrededor del 85% hasta alrededor del 15% del isómero Z. 4. El compuesto de la Reivindicación 1- ó 2, en el que la mezcla isómera comprende alrededor del 25% hasta alrededor del 75% del isómero E y alrededor del 75%. hasta alrededor del 25% del isómero Z. - 82 -
4. El compuesto de la Reivindicación 1 ó 2, en el que la mezcla isómera comprende alrededor del 25% hasta alrededor del 75% del isómero E y alrededor del 75% hasta alrededor del 25% del isómero Z.
5. El compuesto de la Reivindicación 1 ó 2, en el que la mezcla isómera comprende alrededor del 35% hasta alrededor del 65% del isómero E y alrededor del 65% hasta alrededor del 35% del isómero Z.
6. El compuesto de la Reivindicación 1 ó 2, en el que la mezcla isómera comprende alrededor del 45% hasta alrededor del 55% del isómero E y alrededor del 55% hasta alrededor del 45% del isómero Z.
7. El compuesto de la Reivindicación 1 ó 2, en el que la mezcla isómera comprende alrededor del 45% hasta alrededor del 50% del isómero E y alrededor del 50% hasta alrededor del 55% del isómero Z.
8. El compuesto de la Reivindicación 1 ó 2, en el que la mezcla isómera comprende alrededor del 50% hasta alrededor del 55% del isómero E y alrededor del 55% hasta alrededor del 50% del isómero Z.
9. El compuesto de la Reivindicación 1 ó 2, en el que la mezcla isómera comprende alrededor del 55% hasta alrededor del 65% del isómero E y alrededor del 35% hasta alrededor del 45% del isómero Z.
10. El compuesto de la Reivindicación 1 ó 2, en el que la mezcla isómera comprende alrededor del 65% hasta alrededor del 75% del isómero E y alrededor del 25% hasta alrededor del 35% del isómero Z.
11. El compuesto de la Reivindicación 1 ó 2, en el que la mezcla isómera comprende alrededor del 75% hasta alrededor del 85% del isómero E y alrededor del 15% hasta alrededor del 25% del isómero Z.
12. El compuesto de la Reivindicación 1 ó 2, en el que la mezcla isómera comprende alrededor del 85% hasta alrededor del 90% del isómero E y alrededor del 10% hasta alrededor del 15% del isómero Z.
13. Un compuesto farmacéutico que comprende una mezcla isómera análoga de ciclosporina según cualquiera de las Reivindicaciones de 1 a 12 y un excipiente que sea farmacológicamente aceptable. ¦ 83 -
14. El compuesto farmacéutico de la Reivindicación 13, que comprende una solución líquida que contiene un surfactante, etanol, un disolvente lipofílico y/o anfifílico.
15. El compuesto farmacéutico de la Reivindicación 14, que comprende succinato d-alfa tocoferil polietileno glicol 1000 (vitamina E TPGS), aceite de cadena media de triglicéridos (MCT), Tween 40, y etanol.
16. El compuesto farmacéutico de la Reivindicación 13, que comprende una cápsula de gelatina que contiene mezcla isómera análoga, una solución líquida que contiene un surfactante, etanol, un disolvente lipofílico y/o anfifílico.
17. El compuesto farmacéutico de cualquiera de las Reivindicaciones 15 a 16, que consta en forma de dosis unitaria.
18. El compuesto farmacéutico de la Rivindicación 17, que contiene entre desde alrededor de 5 mg hasta alrededor de 500 mg de ingrediente activo.
19. El compuesto farmacéutico de la Reivindicación 16, que contiene alrededord e 50 mg. De mezcla isómera.
20. El compuesto farmacéutico de la Reivindicación 14 ó 15, en el que la solución contiene 50 mg/mL de mezcla isómera.
21. El compuesto farmacéutico de la Reivindicación 13, que ha sido adaptado para administración oral
22. Un método para producir inmuno-supresión, que comprende la administrción a un animal en necesidad de ello, de una cantidad eficaz de una mezcla isómera análoga de la ciclosporina de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 12 o un compuesto farmacéutico según cualquiera de las Reivindicaciones 13 a 21.
23. El método de la Reivindicación 22, en el que dicho animal es un humano.
24. El método de la Reivindicación 22, en el que la cantidad de una mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 0.05 mg hasta alrededor de 50 mg por kilogramo de peso corporal por día.
25. El método de la Reivindicación 24, en el que la cantidad de una mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 0.1 mg hasta alrededor de 10 mg por kilogramo de peso corporal por día. - 84 -
26. El método de la Reivindicación 25, en el que la cantidad de una mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 0.05 mg hasta alrededor de 10 mg /kg/día.
27. El método de la Reivindicación 26, en el que la cantidad de mezcla isómera análoga a la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 2 hasta alrededor de 6 mg/kg/día, administrada oralmente b.i.d.
28. El método de la Reivindicación 27, en el que la cantidad de mezcla isómera análoga a la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 0.5 hasta alrededor de 3 mg/kg/día, administrada oralmente b.i.d.
29. Un método para reducir la toxicidad de un análogo inmuno-supresor de ciclosporina al preparar una mezcla isómera del análogo para uso a manera de agente inmuno-supresor.
30. El método de la Reivindicación 29 en la que dicha mezcla isómera comprende el compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 12.
31. El método de la Reivindicación 29 ó 30 en el que la cantidad de la mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 0.05 mg hasta alrededor de 50 mg por kilogramo de peso corporal por día.
32. El método de la Reivindicación 31 en el que la cantidad de la mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 0.1 mg hasta alrededor de 10 mg por kilogramo de peso corporal por día.
33. El método de la Reivindicación 32 en el que la cantidad de la mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 0.05 mg hasta alrededor de 10 mg/kg/día.
34. El método de la Reivindicación 33 en el que la cantidad de la mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 2 hasta alrededor de 6 mg/kg/día, administrados oralmente b.i.d.
35. El método de la Reivindicación 34 en el que la cantidad de la mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 0.5 hasta alrededor de 3 mg/kg/día, administrados oralmente b.i.d. - 85 -
36. Un método para incrementar la eficacia de un análogo inmuno-supresor de la ciclosporina mediante la preparación de una mezcla Isómera del análogo para uso a manera de agente inmuno-supresor.
37. El método de la Reivindicación 36 en el que dicha mezcla isómera comprende la composición o compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 12.
38. El método de la Reivindicación 36 ó 37 en el que la cantidad de la mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 0.05 mg hasta alrededor de 50 mg por kilogramo de peso corporal por día.
39. El método de la Reivindicación 38 en el que la cantidad de la mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 0.1 mg hasta alrededor de 10 mg por kilogramo de peso corporal por día.
40. El método de la Reivindicación 39 en el que la cantidad de la mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 0.5 hasta alrededor de 10 mg/kg/día.
41. El método de la Reivindicación 40 en el que la cantidad de la mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 2 hasta alrededor de 6 mg/kg/día, administrados oralmente b.i.d.
42. El método de la Reivindicación 41 en el que la cantidad de la mezcla isómera análoga de la ciclosporina administrada corresponde a alrededor de 0.5 hasta alrededor de 3 mg/kg/día, administrados oralmente b.i.d.
43. El método de cualquiera de las Reivindicaciones 22 a 42 en el que dicha inmuno-supresión o agente inmuno-supresor se realiza para tratar o aliviar rechazo agudo de transplante de órgano o de tejidos.
44. El método de la Reivindicación 43 en el que dicho rechazo a transplane ha sido seleccionado de entre el grupo consistente de transplantes de corazón, pulmón, combinación de corazón y pulmón, hígado, riñon, pancreático, piel, intestinos y cornea.
45. El método de cualquiera de las Reivindicaciones 22 a 42 en el que dicha inmuno-supresión o agente inmuno-supresor se hace para tratar o aliviar el rechazo mediado por células T. - 86 -
46. El método de cualquiera de las Reivindicaciones 22 a 42 en el que dicha inmuno-supresión o agente inmuno-supresor se hace para tratar o aliviar la enfermedad de injerto versus anfitrión.
47. El método de la Reivindicación 46 en el que dicha enfermedad sigue a 5 un transplante de médula.
48. El método de cualquiera de las Reivindicaciones 22 a 42 en el que dicha inmuno-supresión o agente inmuno-supresor se hace para tratar o aliviar el f rechazo crónico de un órgano transplantado.
49. El método de la Reivindicación 48 en el que dicho rechazo crónico se ío trata de la enfermedad de las arterias en el injerto.
50. El método de cualquiera de las Reivindicaciones 22 a 42 en el que dicha inmuno-supresión o agente inmuno-supresor es el de tratar o aliviar el rechazo a injerto ajeno.
51. El método de la Reivindicación 50 en el que dicho rechazo a injerto 15 ajeno se selecciona de entre el grupo comprendido por rechazo agudo, hiperagudo y crónico que se produce cuando el donante del órgano pertenece a una especie distinta de la del receptor.
52. El método de la Reivindicación 51 en el que dicho rechazo a injerto ajeno está mediado por células B o rechazo mediado por anticuerpos. 20
53. El método de cualquiera de las Reivindicaciones 22 a 42 en el que dicha inmuno-supresión o agente imuno-supresor se hace para tratar o aliviar una enfermedad o condición auto-inmune o una enfermedad o condición inflamatoria.
54. El método de la Reivindicación 53 en el que dicha enfermedad o 25 condición se selecciona a partir del grupo consistente de artritis, artritis reumatoide, artritis crónica progresiva, artritis deformante y demás enfermedades reumáticas.
55. El método de la Reivindicación 53 en el que dicha enfermedad o condición se selecciona a partir del grupo comprendido por desórdenes 30 hematológica, anemia hemolítica, anema aplástica, anemia pura de células rojas, tranbocitopenia idiopática), lupus sistémico eritomatoso, policondritis, selerodoma, granulomatosis de Wegener, dermatomiositis, hepatitis crónica - 87 - activa, miastenia grave, soriasis, síndrome de Steven-Johnson, estomatitis idiopática, enfermedad inflamatoria de los intestinos (auto-inmune), colitis ulcerativa, enfermedad de Crohns, oftalmopatía endocrina, enfermedad de Graves, sarcoidosis, esclerosis múltiple, cirrosis biliar primaria, diabetes juvenil (diabetes mellitus tipo I), uveítis (anterior y posterior), queratoconjuntivitis sicca, queratoconjuntivitis vernal, fibrosis intersticial de pulmón, artritis soriática, nefritis glomerular, síndrome nefrótica idiopática, cambio mínimo en nefropatía y dermatomiositis juvenil.
56. El método de la Reivindicación 53 en el que la enfermedad o condición se selecciona del grupo consistente de psoriasis, dermatitis por contacto, dermatitis atópica, alopecia areata, eritema multiforme, dermatitis herpetiforme, escleroderma, vitíligo, hípersensibilidad angitis, urticaria, ampolla penfigoide, lupus eritomatoso, pénfigo, epidermolisi ampollosa adquirida, otras condiciones inflamatorias o alérgicas de la piel, condiciones inflamatorias de los pulmones y vías respiratorias, asma, alergias y neumoconiosis.
57. Un compuesto según lo reivindicado en cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 12 a manera de compuesto terapéutico.
58. EL uso de un compuesto según lo reivindicado en cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 12 para la preparación de un medicamento para proporcionar inmuno-supresión para la prevención de alo-rechazo a injerto o rechazo a injerto ajeno (xenoinjerto), preferentemente del riñon, corazón, hígado o prevención o tratamiento a condiciones auto-inmunes, específicamente artritis reumatoide o soriasis.
59. El método de cualquiera de las Reivindicaciones 22 a 42 en elque dicha inmuno-supresión o agente inmuno-supresor se hace para prevenir rechazo agudo de transplantes de órganos o tejidos.
60. El método de cualquiera de las Reivindicaciones 22 42 en el que dicha inmuno-supresión o agente inmuno-supresor se hace para prevenir una enfermedad o condición auto-inmune o una enfermedad o condición inflamatoria.
61. El uso de una mezcla isómera análoga de la cíclosporina según cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 12 o el compuesto farmacéutico según - 88 - cualquiera de las Reivindicaciones 13 a 21 en la fabricación de un medicamento para producir inmuno-supresión al ser administrados a un animal.
62. El uso de la Reivindicación 61 en el que el animal es un humano.
63. El uso de la Reivindicación 61 en el que el monto de la mezcla isómera 5 análoga de ciclosporina a administrarse corresponde a alrededor de 0.05 mg hasta alrededor de 50 mg por kilogramo de peso corporal por día.
64. El uso de la Reivindicación 63 en el que el monto de la mezcla isómera análoga de ciclosporina a administrarse corresponde a alrededor de 0.1 mg hasta alrededor de 10 mg por kilogramo de peso corporal por día. ío
65. El uso de la Reivindicación 64 en el que el monto de la mezcla isómera análoga de ciclosporina a administrarse corresponde a alrededor de 0.5 mg hasta alrededor de 10 mg/kg/día.
66. El uso de la Reivindicación 65 en el que la cantidad de mezcla isómera 15 análoga de ciclosporina a ser administrada corresponde a alrededor de 2 hasta alrededor de 6 mg/kg/día, administrados oralmente b.i.d.
67. El uso de la Reivindicación 66 en el que la cantidad de mezcla isómera análoga de ciclosporina a ser administrada corresponde a alrededor de 0.5 hasta alrededor de 3 mg/kg/día, administrados oralmente b.i.d. 20 •
MXPA04003624A 2001-10-19 2002-10-17 Mezclas analogas de ciclosporina y su uso como agentes inmunolomoduladores. MXPA04003624A (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US34620101P 2001-10-19 2001-10-19
PCT/CA2002/001560 WO2003033527A2 (en) 2001-10-19 2002-10-17 Cyclosporine analogue mixtures and their use as immunomodulating agents

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MXPA04003624A true MXPA04003624A (es) 2004-12-06

Family

ID=23358378

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MXPA04003624A MXPA04003624A (es) 2001-10-19 2002-10-17 Mezclas analogas de ciclosporina y su uso como agentes inmunolomoduladores.

Country Status (38)

Country Link
US (2) US20110092669A1 (es)
EP (2) EP1436322B1 (es)
JP (4) JP2005511538A (es)
KR (1) KR100992850B1 (es)
CN (1) CN100344648C (es)
AR (1) AR036853A1 (es)
AT (1) ATE401339T1 (es)
AU (1) AU2002331510B2 (es)
BE (1) BE2022C547I2 (es)
BR (1) BR0213659A (es)
CA (2) CA2460685C (es)
CO (1) CO5570682A2 (es)
CY (2) CY1108410T1 (es)
DE (1) DE60227686D1 (es)
DK (1) DK1436322T3 (es)
EC (3) ECSP045060A (es)
ES (1) ES2310604T3 (es)
FI (1) FIC20220041I1 (es)
FR (1) FR22C1051I2 (es)
HK (1) HK1062567A1 (es)
HR (1) HRP20040353B1 (es)
IL (2) IL160762A0 (es)
LT (1) LTC1436322I2 (es)
MA (1) MA26337A1 (es)
ME (1) ME00487B (es)
MX (1) MXPA04003624A (es)
MY (1) MY187182A (es)
NL (1) NL301200I2 (es)
NO (2) NO331745B1 (es)
NZ (1) NZ531945A (es)
PL (1) PL210697B1 (es)
PT (1) PT1436322E (es)
RU (1) RU2337106C2 (es)
SI (1) SI1436322T1 (es)
TN (1) TNSN04069A1 (es)
UY (1) UY27502A1 (es)
WO (1) WO2003033527A2 (es)
ZA (1) ZA200402270B (es)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100992850B1 (ko) * 2001-10-19 2010-11-09 이소테크니카 인코포레이티드 시클로스포린 유사체 혼합물 및 면역조절제로서 이들의 용도
ES2326040T3 (es) 2001-10-19 2009-09-29 Isotechnika Inc. Sintesis de analogos de ciclosporina.
TW200505946A (en) * 2003-04-08 2005-02-16 Hoffmann La Roche Process for preparation of cyclosporin a analog
MX2007007262A (es) * 2004-12-17 2007-10-19 Isotechnika Inc Metabolitos de analogos de ciclosporina.
US7696166B2 (en) 2006-03-28 2010-04-13 Albany Molecular Research, Inc. Use of cyclosporin alkyne/alkene analogues for preventing or treating viral-induced disorders
US7696165B2 (en) 2006-03-28 2010-04-13 Albany Molecular Research, Inc. Use of cyclosporin alkyne analogues for preventing or treating viral-induced disorders
JP5668476B2 (ja) 2007-10-08 2015-02-12 オーリニア・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＡｕｒｉｎｉａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ． カルシニューリン阻害剤またはｍＴＯＲ阻害剤を含む眼科用組成物
CN102458370A (zh) 2009-06-09 2012-05-16 卢克斯生物科技公司 用于眼科用途的表面药物递送系统
GB0912584D0 (en) * 2009-07-20 2009-08-26 Ucl Business Plc Cyclosporin conjugates
RU2630690C9 (ru) 2010-12-15 2017-12-28 КонтраВир Фармасьютикалз, Инк. МОЛЕКУЛЫ АНАЛОГОВ ЦИКЛОСПОРИНА, МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ПО 1 и 3 АМИНОКИСЛОТЕ
GB201222455D0 (en) 2012-12-13 2013-01-30 Perioc Ltd Novel pharmaceutical formulations and their use in the treatment of periodontaldisease
EP3549051A4 (en) * 2016-11-30 2020-04-29 Schrodinger, Inc. GRAPHIC USER INTERFACE FOR CALCULATING CHEMICAL TRANSITIONAL STATES
EP4252629A3 (en) 2016-12-07 2023-12-27 Biora Therapeutics, Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
WO2018106928A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Contravir Pharmaceuticals, Inc. Treatment and prevention of hbv diseases by cyclosporine analogue molecules modified at amino acides 1 and 3
EP3554346B1 (en) 2016-12-14 2024-01-31 Biora Therapeutics, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immunosuppressant
US20190224275A1 (en) 2017-05-12 2019-07-25 Aurinia Pharmaceuticals Inc. Protocol for treatment of lupus nephritis
US10286036B2 (en) * 2017-05-12 2019-05-14 Aurinia Pharmaceuticals Inc. Protocol for treatment of lupus nephritis
US20230041197A1 (en) 2018-06-20 2023-02-09 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immunomodulator
EP4201952A1 (en) 2021-12-21 2023-06-28 Curia Spain, S.A.U. Process for the controlled synthesis of voclosporin
WO2024052941A1 (en) * 2022-09-09 2024-03-14 Dr. Reddy's Laboratories Limited Improved process for the preparation of voclosporin
WO2024157186A1 (en) * 2023-01-25 2024-08-02 Procos S.P.A. New process for the preparation of amorphous voclosporin
WO2024157132A1 (en) * 2023-01-25 2024-08-02 Indena S.P.A. Process for the preparation of an intermediate useful for the synthesis of voclosporin

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4278545A (en) * 1979-09-12 1981-07-14 The Bendix Corporation Apparatus for separating solids and liquid components
CH670644A5 (es) * 1986-12-18 1989-06-30 Lonza Ag
US5162540A (en) * 1986-12-18 1992-11-10 Lonza Ltd. Process for the production of (+) biotin
DE3884470T2 (de) * 1987-06-17 1994-03-10 Sandoz Ag Cyclosporine und deren Benutzung als Arzneimittel.
US5972630A (en) * 1991-08-19 1999-10-26 Dade Behring Marburg Gmbh Homogeneous immunoassays using enzyme inhibitors
US5750510A (en) * 1997-04-04 1998-05-12 Abbott Laboratories 3-descladinose-2,3-anhydroerythromycin derivatives
US5939406A (en) * 1997-07-21 1999-08-17 Wisconsin Alumni Research Foundation 18-substituted-19-nor-vitamin D compounds
ATE314388T1 (de) * 1997-10-08 2006-01-15 Isotechnika Inc Deuterierte und undeuterierte cyclosporin-analoga und ihre verwendung als immunmodulierende agentien
ES2326040T3 (es) * 2001-10-19 2009-09-29 Isotechnika Inc. Sintesis de analogos de ciclosporina.
KR100992850B1 (ko) * 2001-10-19 2010-11-09 이소테크니카 인코포레이티드 시클로스포린 유사체 혼합물 및 면역조절제로서 이들의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
NL301200I2 (nl) 2024-07-25
DK1436322T3 (da) 2008-11-03
CY2022030I2 (el) 2023-06-09
CN100344648C (zh) 2007-10-24
ZA200402270B (en) 2005-05-25
ECSP045060A (es) 2004-07-23
LTPA2022521I1 (es) 2022-11-10
US20140288266A1 (en) 2014-09-25
WO2003033527A3 (en) 2003-10-16
US20110092669A1 (en) 2011-04-21
HRP20040353A2 (en) 2005-04-30
IL160762A (en) 2010-11-30
RU2004110941A (ru) 2005-08-10
NZ531945A (en) 2006-01-27
PT1436322E (pt) 2008-10-23
CN1571794A (zh) 2005-01-26
CY1108410T1 (el) 2012-05-23
ME00487B (me) 2011-10-10
ATE401339T1 (de) 2008-08-15
CY2022030I1 (el) 2023-01-27
PL210697B1 (pl) 2012-02-29
JP2011006417A (ja) 2011-01-13
BE2022C547I2 (es) 2022-10-19
DE60227686D1 (de) 2008-08-28
RU2337106C2 (ru) 2008-10-27
CA2460685C (en) 2014-05-27
MA26337A1 (fr) 2004-10-01
SI1436322T1 (sl) 2008-12-31
ES2310604T3 (es) 2009-01-16
CA2460685A1 (en) 2003-04-24
HRP20040353B1 (hr) 2012-10-31
AU2002331510B2 (en) 2008-05-01
CO5570682A2 (es) 2005-10-31
BR0213659A (pt) 2004-10-26
NO2022042I1 (no) 2022-10-14
JP2013136597A (ja) 2013-07-11
KR100992850B1 (ko) 2010-11-09
UY27502A1 (es) 2003-04-30
EP1816138A1 (en) 2007-08-08
CA2727642A1 (en) 2003-04-24
IL160762A0 (en) 2004-08-31
LTC1436322I2 (es) 2023-06-26
PL370501A1 (en) 2005-05-30
MY187182A (en) 2021-09-08
JP2009197036A (ja) 2009-09-03
EP1436322A2 (en) 2004-07-14
FIC20220041I1 (fi) 2022-10-14
JP5272140B2 (ja) 2013-08-28
FR22C1051I1 (fr) 2022-12-16
KR20050037421A (ko) 2005-04-21
AR036853A1 (es) 2004-10-06
CA2727642C (en) 2014-02-04
ECSP045059A (es) 2004-07-23
WO2003033527A2 (en) 2003-04-24
NO20042029L (no) 2004-05-14
EP1436322B1 (en) 2008-07-16
HK1062567A1 (en) 2004-11-12
NO331745B1 (no) 2012-03-19
ECSP045061A (es) 2004-08-27
TNSN04069A1 (en) 2006-06-01
FR22C1051I2 (fr) 2023-11-17
JP2005511538A (ja) 2005-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10472394B2 (en) Cyclosporine analogue mixtures and their use as immunomodulating agents
US20140288266A1 (en) Synthesis of Cyclosporin Analogs
AU2002331509A1 (en) Synthesis of cyclosporin analogs
AU2002331510A1 (en) Cyclosporine analogue mixtures and their use as immunomodulating agents
AU2007221839B2 (en) Synthesis of cyclosporin analogs

Legal Events

Date Code Title Description
FG Grant or registration