MXPA01010883A - Proteinas gil-19/ae289 humanas y polinucleotidos que las codifican. - Google Patents

Proteinas gil-19/ae289 humanas y polinucleotidos que las codifican.

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MXPA01010883A
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Abstract

Se divulga una proteina GIL-19/AE289 humana novedosa que muestra un alto grado de homologia con interleucina-10 (IL-10). Se divulgan tambien polinucleotidos que codifican dicha proteina.

Description

PROTEÍNAS GIL-19/AE289 HUMANAS Y POLINUCLEÓTIDOS QUE LAS CODIFICAN REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS La presente solicitud, reclama el beneficio de la solicitud provisional presentada con anterioridad, solicitud de Patente Norteamericana No. de Serie 60/131,473, titulada "Human TIF/AE289 Proteins and Polynucleotides Encoding Same" (Proteínas TIF/AE289 humanas y polinucleótidos que las codifican) , presentada el dia 28 de Abril de 1999 (pendiente) . El contenido de la solicitud de patente mencionada arriba se incorpora aqui por referencia en su totalidad. CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención ofrece proteínas novedosas que muestran homología con interleucina-10 (IL-10) y polinucleótidos que codifican tales proteínas, junto con utilidades terapéuticas, de diagnóstico y de investigación para estos polinucleótiaos y proteínas. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La tecnología enfocada al descubrimiento de factores de proteina (incluyendo, por ejemplo, citocinas, tales como linfocinas, interferones, CSFs e interleucinas) se ha desarrollada rápidamente durante la última década. Las técnicas ahora rutinarias de clonación por hibridación y clonación por expresión clonan "directamente" polinucleótidos novedosos en el sentido que se basan en información directamente relacionada con la proteina descubierta (es decir, secuencia parcial de ADN/aminoácidos de la proteina en el caso de la clonación por hibridación; actividad de la proteina en el caso de la clonación por expresión) . Más recientemente, técnicas "indirectas" de clonación tales como clonación de secuencias de señales, que aisla secuencias de ADN con base en la presencia de un motivo de secuencia lider secretorio bien reconocido, asi como varias técnicas de clonación por hibridación pasadas en reacción en cadena de polimerasa o bien con bajo nivel de estrictez, han hecho progresar el estado de la técnica haciendo disponible grandes números de secuencias de ADN/a inoácidos para pro teinas de las cuales se sabe que tienen una actividad biológica en virtud de su naturaleza secretada en el caso de clonación de secuencia lider o bien en virtud de la fuente de célula o tejido en el caso de técnicas basadas en reacción en cadena de polimerasa. La presente invención se enfoca a estas proteínas y a los polinucleótidos que las codifican. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN En una modalidad, la presente invención ofrece una composición que comprende un polinucleótido aislado seleccionado dentro del grupo que consiste de: (a) un polinucleótido que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1; (b) un polinucleótido que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1, desde el nucleótido 65 hasta el nucleótido 601; (c) un polinucleótido que comprende la secuencia de 5 nucleótidos de la secuencia codificadora de proteina de longitud completa del clon hGIL-19/AE289 depositada bajo el número de acceso ATCC 207231; (d) un polinucleótido que codifica la proteina de longitud completa codificada por el inserto de ADNc del clon hGIL- 10 19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231; • (e) un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos de una secuencia codificadora de proteina madura del clon hGIL-19/AE289 depositado bajo número de acceso ATCC 297231; 15 (f) un polinucleótido que codifica una proteina madura codificada por el inserto de ADNc de clon hGIL-19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 2CP231; • (g) un polinucleótido que codifica una proteina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; 20 (h) un polinucleótido que codifica una proteina que comprende un fragmento de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 que tiene actividad biológica, el fragmento comprende 8 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 2; (i) un polinucleótido que es una variante alélica de un 25 polinucleótido de (a)-(f) arriba; (j) un polinucleótido que codifica una especie homologa de la proteina de (g) o (h) arriba; ( ) un polinucleótido que se hibrida en condiciones estrictas con cualesquiera de los polinucleótidos especificados en (a)- 5 (h); y (1) un polinucleótido que se hibrida en condiciones estrictas con cualesquiera de los polinucleótidos especificados en (a)- (h) y que tiene una longitud que es por lo menos el 25% de la longitud de SEQ ID NO: 1. 10 De preferencia, dicho polinucleótido comprende la secuencia • de nucleótidos de SEQ ID NO: 1 desde el nucleótido 65 hasta ei nucleótido 601; la secuencia de nucleótidos de la secuencia codificadora de proteina de longitud completa de clon hGIL-19AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 15 207231; o bien la secuencia de nucleótidos de una secuencia codificadora de proteina madura de clon hGIL-19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231 (por • ejemplo, los nucleótidos 1-1177 de SEQ ID NO:l). En otras modalidades preferidas, el polinucleótido codifica la 20 proteina de longitud total o madura codificada por el inserto de ADNc de clon hGIL-19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231 (por ejemplo, los aminoácidos 1-179 de SEQ ID NO: 2) . En modalidades preferidas adicionales, la presente invención ofrece un polinucleótido que codifica una proteina 25 que comprende un fragmento de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 que tiene actividad biológica, el fragmento comprende de preferencia ocho (con mayor preferencia veinte, especialmente treinta) aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 2, o bien un polinucleótido que codifica una proteina que comprende un fragmento de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 que tiene actividad biológica, el fragmento compren de la secuencia de aminoácidos del aminoácido 84 hasta el aminoácido 93 de SEQ ID NO: 2. Otras modalidades proporcionan el gen que corresponde a la secuencia de ADNc de SEQ ID NO: 1. Modalidades adicionales de la invención ofrecen polinucleótidos aislados producidos de conformidad con un proceso seleccionado dentro del grupo que consiste de: (a) un proceso que comprende los pasos de: (i) preparar una o varias sondas de pclinucleótidos que se hibridan en 6X SSC a una temperatura de 65° C con una secuencia de nucleótidos selecciona dentro del grupo que consiste de: (aa) SEQ ID NO: 1, pero excluyendo la cola poli (A) en el extremo 3' de SEQ ID NO: 1; y (ab) la secuencia de nucleótidos del inserto de ADNc del clon hGIL-19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231; (ii) hibridar dicha (s) sonda (s) con ADN genómico humano en condiciones por lo menos tan estrictas como 4 X SSC a una temperatura de 50° C; y • (iii) aislar los polinucleótidos de ADN detectados con 5 l (s) sonda (s) ; y (b) un proceso que comprende los pasos de: (i) preparar uno o varios iniciadores de polinucleótidos que se hibridan en 6X SSC a una temperatura de 65° C con 10 una secuencia de nucleótidos seleccionada dentro del grupo • que consiste de: (ba) SEQ ID NO: 1, pero excluyendo la cola poli (A) en el extremo 3' de SEQ ID NO: 1; y (bb) la secuencia de nucleótidos del inserto de ADNc del 15 clon hGIL-19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231; (ii) hibridar dicho (s) iniciador (es) con ADN genómico • humano en condiciones por lo menos tan estrictas como 4X SSC a una temperatura de 50° C; 20 (iii) amplificar secuencias de ADN de ser humano; y (iv) aislar los productos de polinucleótidos del paso (b) (iii) . De preferencia, el polinucleótido aislado de conformidad con el proceso anterior comprende una secuencia de 25 polinucleótidos que corresponde a la secuencia de ADNc de SEQ ID NO: 1, y que se extiende de manera contigua desde la secuencia de nucleótidos que corresponde al extremo 5' de SEQ ID NO: 1 hasta una secuencia de nucleótidos que corresponde al extremo 3' de SEQ ID NO: 1, pero excluyendo la cola poli (A) en el extremo 3' de SEQ ID NO: 1. Se prefiere también el polinucleótido aislado de conformidad con el proceso anterior que comprende una secuencia de nucleótidos que corresponde a la secuencia de ADNc de SEQ ID NO: 1 desde el nucleótido 65 hasta el nucleótido 601, y que se extiende contiguamente desde la secuencia de nucleótidos que corresponde al extremo 5' de dicha secuencia de SEQ ID NO: 1 desde el nucleótido 65 al nucleótido 601, hasta una secuencia de nucleótidos que corresponde al extremo 3' de dicha secuencia de SEQ ID NO: 1 desde el nucleótido 65 hasta el nucleótido 601. En otras modalidades, la presente invención ofrece una composición que comprende una proteina, en donde dicha proteina comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada dentro del grupo que consiste de: (a) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; (b) un fragmento de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, el fragmento comprende ocho aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 2; y (c) la secuencia de aminoácidos codificada por el inserto de ADNc del clon hGIL-19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231; la proteina se encuentra sustancialmente libre de otras proteínas de mamífero. De preferencia, dicha proteina comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. En modalidades preferidas adicionales, la presente invención ofrece una proteina que comprende un fragmento de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, que tiene actividad biológica, el fragmento comprende de preferencia ocho (con mayor preferencia veinte, especialmente treinta) aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 2. En ciertas modalidades preferidas, el polinucleótido es enlazado de manera operativa con una secuencia de control de expresión. La invención ofrece también una célula huésped, que incluye células bacterianas, de levadura, de insecto y de mamíferos, transformadas con tales composiciones de polinucleótidos. Se proporcionan también a través de la presente invención organismos que tienen una expresión incrementada, reducida, o modificada del (de los) gen (es) que corresponde (n) a las secuencias de polinucleótidos divulgadas aqui . Se proporcionan también procesos para producir una proteina, que comprenden: (a) cultivar un cultivo de la célula huésped transformada con tales composiciones de polinucleótidos en un medio de cultivo adecuado; y (b) purificar la proteina a partir del cultivo. La proteina producida de conformidad con tales métodos se proporciona también a través de la presente invención. Composiciones de proteina de la presente invención pueden comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. La presente invención proporciona también composiciones que comprenden un anticuerpo que reacciona especificamente con dicha proteina. Se proporcionan también métodos para prevenir, tratar o mejorar una condición médica, dichos métodos comprenden la administración a un sujeto mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende una proteina de la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. DESCRIPCIÓN DETALLADA Proteínas y Polinucleótidos Aislados Secuencias de nucleóticos y aminoácidos, de conformidad con lo determinado actualmente, son reportadas a continuación para cada clon y proteina divulgados en la presente solicitud. La secuencia de nucleótidos de cada clon puede ser fácilmente determinada mediante el secuenciamiento del clon depositado de conformidad con métodos conocidos. La secuencia predicha de aminoácidos (tanto de longitud completa como formas maduras) puede ser determinada a partir de dicha secuencia de nucleótidos. La secuencia de aminoácidos de proteina codificada por un clon particular puede también ser determinada por la expresión del clon en una célula huésped adecuada, recogiendo la proteina y determinando su secuencia. Como se emplea aqui, una proteina "secretada" es una proteina que, cuando se expresa en una célula huésped adecuada, es transportada a través de una membrana, incluyendo transporte como resultado de secuencia de señal en subsecuencia de aminoácidos. Las proteínas "secretadas" incluyen sin limitación proteínas secretadas total (por ejemplo proteínas solubles) o parcialmente (por ejemplo, receptores), a partir de la célula en la cual se expresan. Proteínas "secretadas" incluyen también, sin limitación, proteínas transportadas a través de la membrana del retículo endoplásmico. Clon "hGIL-19/AE289" Un polinucleótido de la presente invención ha sido identificado inicialmente como el clon "hGIL-19/AE289" renombrado posteriormente y conocido aqui como "hGIL-19/AE289" y "hGIL-19". El clon "hGIL-19/AE289" fue aislado de conformidad con el siguiente método. Se identificó un EST de murino a partir de una biblioteca de ADNc de murino elaborada a partir de esplenocitos activados tanto con ConA como con médula ósea, derivados de células dendriticas. El EST fue identificado empleando métodos que son selectivos para ADNc que codifican proteínas secretadas (véase patente norteamericana número 5,536,637). La secuencia de EST de murino fue empleada para aislar un clon de murino de longitud completa a partir de la misma biblioteca de ADNc (SEQ ID No.4; la figura 1 muestra la secuencia del ADNc de GIL-19 de • murina) . El análisis de la secuencia del clon de murino 5 indicó una homología significativa con la interleucina-10 (IL-10) . Con el objeto de aislar un homologo humano del clon de murino, iniciadores de reacción en cadena de polimerasa fueron construidos con base en la región de la secuencia de 10 murino que presentó homología con IL-10. el uso de tales iniciadores para amplificación en una biblioteca de PBMC de ser humano produjo un producto de reacción en cadena de polimerasa de un tamaño significativo. El análisis de la secuencia del producto de reacción en cadena de polimeraza 15 confirmó que era un homologo del ADNc de murino. Oligonucleótidos fueron construidos a partir de la secuencia del clon humano parcial y utilizados para aislar un clon de ser humano de longitud completa a partir de la biblioteca de PBMC. 20 hGIL-19/AE289 es un clon humano de longitud completa, que incluye la secuencia codificadora entera de una proteina secretada (se conoce también aqui como "proteina de hTIF/AE289", "proteina de hGIL-19/AE289" y "proteina de hGIL- 19") . El análisis de subsecuencia confirma su homología con 25 IL-10.
La secuencia de nucleótidos de hGIL-19 de conformidad con lo determinado actualmente es reportada en SEQ ID No.l, e incluye una cola poli (A) . el cuadro de lectura abierto y la • secuencia de aminoácidos de la proteina de hGIL-19 de 5 longitud completa que corresponde a la secuencia de nucleótidos antes mencionada es reportado en SEQ ID No. 2. la secuencia de aminoácidos de hGIL-19 maduro corresponde a los aminoácidos 34-179 de SEQ ID No.2. "hGIL-19/AE289" de clon fue depositado el día 28 de abril de 10 1999 con la American Type Culture Collection (10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110-2209, Estados Unidos de América) como un depósito original de conformidad con el Tratado de Budapest y recibió el número de acceso ATCC 207231. todas las restricciones en cuanto a la disponibilidad 15 para el público del material depositado serán irrevocablemente removidas al otorgarse la patente, excepto en cuanto a los requerimientos especificados en 37 C.F.R. § 1.8008 (b) , y el término del depósito cumplirá con 37 C.F.R. § 1.806. 20 fragmento de las proteínas de la presente invención, por ejemplo, fragmentos capaces de presentar una actividad biológica, están también abarcados por la presente invención. Fragmentos de la proteina pueden encontrarse en forma lineal o bien pueden ser ciclados utilizando métodos conocidos como 25 por ejemplo, de conformidad con lo establecido en H. U.
Saragovi et al., Bio/Technology 10. 773-778 (1992) y en R.S. McDowell, et al., J. Amer. Chem. Soc. 114, 9245-9253 (1992), ambos incorporándose aqui por referencia. Tales fragmentos • pueden ser fusionados sobre moléculas portadoras tales como 5 inmunoglobulinas para muchos propósitos, incluyendo para incrementar la valencia de los sitios de enlace de proteína. Por ejemplo, fragmentos de la proteína pueden ser fusionados a través de secuencias de "enlazador" con la porción Fc de una inmunoglobulina. Para una forma bivalente de la proteína, jA 10 dicha fusión podría estar en la fusión Fc de una molécula de IgG. Otros isotipos de inmunoglobulina pueden ser también empleados para generar tales fusiones. Por ejemplo una fusión Proteína-IgM generaría una forma decavalente de la proteína de la invención. 15 La presente invención ofrece también formas de longitud completa y maduras de las proteínas divulgadas. La forna de longitud completa de tales proteínas se identifica en la • lista de secuencia por el traslado de la secuencia de nucleótidos de cada clon divulgado. la(s) forma (s) madura (s) 20 de dicha proteína puede (n) ser obtenida (s) por expresión del polinucleótido de longitud completa divulgado (de preferencia los depositados ante ATCC) en una célula de mamífero adecuada o bien en otra célula huésped. La(s) secuencia (s) de la(s) forma (s) madura (s) de la proteina puede (n) ser determinada (s) 25 también a partir de la secuencia de aminoácidos de la forma de longitud completa y se establece (n) a continuación, por ejemplo, como aminoácidos 1-179 de SEQ ID No.2. La presente invención ofrece también genes que corresponden a • las secuencias de polinucleótidos divulgadas aquí, "genes 5 corresponding" son las regiones del genoma que son transcritas para producir los ARNm a partir de los cuales se derivan secuencias de polinucleótidos de ADNc y pueden incluir regiones contiguas del genoma necesarias para la expresión regulada de tales genes. Gentes correspondientes 10 pueden incluir por consiguiente, sin limitación, secuencias codificadoras, regiones no trasladas 5' y 3' exones alternativamente empalmados, intrones, promotores, realzadores, y elementos silenciadores o supresores. Los genes correspondientes pueden ser aislados de conformidad con 15 métodos conocidos empleando la información de secuencia divulgada aquí. Tales métodos incluyen la preparación de sondas o iniciadores a partir de la información de secuencia divulgada para identificación y/o amplificación de genes en bibliotecas genómicas apropiadas o bien otras fuentes de 20 materiales genómicos. Un "gen aislado" es un gen que ha sido separado de las secuencias codificadoras adyacentes, si están presentes, que se encuentran en el genoma del organismo a partir del cual se aisló el gen. La ubicación cromosomal que corresponde a las secuencias de 25 polinucleótidos divulgadas aquí puede también ser determinada, como por ejemplo mediante la hibridación de polinucleótidos marcados apropiadamente de la presente invención con cromosomas in situ. Puede también ser posible identificar la ubicación cromosomal correspondiente para un polinucleótido divulgado mediante la identificación de secuencias de nucleótidos significativamente similares en bases de datos públicas, tales como marcadores de secuencia expresados (ESTs) , que ya han sido cartografiados sobre ubicaciones cromosómicas particulares. Por lo menos para algunas de las secuencias de nucleótidos divulgadas aqui, secuencias de base de datos públicas que tienen por lo menos una cierta similaridad con el polinucleótido de la presente invención han sido listadas por número de acceso de base de datos. Búsquedas utilizando los números de acceso de GenBank de estas secuencias de base de datos públicas pueden por consiguiente ser efectuadas en un sitio Internet proporcionado por el National Center for Biotechnology Information que tiene la dirección http://www.ncbi.nlm.nih.gov/UniGene/, con el objeto de identificar "grupos UniGene" de secuencias que se empalman. Muchos de los grupos de "UniGene" identificados de esta forma ya han sido cartografiados sobre sitios cromosómicos particulares. Organismos que tienen una expresión incrementada, reducida o modificada del (de los) gen (es) que corresponde (n) a la secuencia (s) de polinucleótidos divulgadas aqui se proporcionan. El cambio deseado en cuanto a la expresión del gen puede lograrse a través del uso de polinucleótidos de • antisentido o ribozimas que unen y/o disocian el ARNm 5 transcrito a partir del gen (Albert and Morris, 1994, Trends Pharmacol. Sci. 15(7): 250-254: Lavarosky et al., 1997, Biochem. Mol. Med. 62(1): 11-22; y Ha pel. 1998, Prog. Nucleic Acid Res. Mol Biol. 58: 1-39; que se incorporan aquí por referencia) . Animales transgénicos que tienen múltiples 10 copias del (de los) gen (es) que corresponda (n) a las • secuencias de polinucleótidos divulgadas aquí, producidos de preferencia por transformación de células por constructos genéticos mantenidos establemente dentro de las células transformadas y su progenie, se proporcionan. Animales 15 transgénicos que tienen regiones de control genético modificadas que incrementan o reducen los niveles de expresión de gen o que cambian patrones temporales o espaciales de expresión de gen se proporcionan también (véase patente europea número 0649 464 Bl, que se incorpora por 20 referencia aquí) . Además, se proporcionan organismos en los cuales el (los) gen (es) que corresponde (n) a las secuencias de nucleótidos divulgadas aqui han sido parcial o totalmente desactivados mediante la inserción de secuencias extrañas en el (los) gen (es) correspondiente (s) o bien a través de la 25 remoción de la totalidad o de una parte del (de los) gen (es) correspondiente (s) . la desactivación parcial o completa de gen puede üograrse a través de la inserción, de preferencia seguida por excisión imprecisa de elementos transferibles • (Plasterk, 1992, Bioessays 14(9); 629-633; Zwaal et al., 5 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(16): 7431-7435; Clark et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91(2) : 719-722; que se incorpora aquí por referencia) , o bien a través de recombinación homologa, detectada de preferencia por estrategia de selección genético positiva/negativa (Mansour 10 et al., 1988. Nature 336: 348-352; Patentes Norteamericanas • números 5,464,764; 5,487,992; 5,627,059; 5,631,153; 5,614,396; 5,616,491; y 5,679,523; que se incorporan aquí por referencia) . Estos organismos con una expresión génica alterada son de preferencia eucariotas y con mayor 15 preferencia mamíferos. Tales organismos son útiles para el desarrollo de modelos no humanos para el estudio de enfermedades que involucran el (los) ge (es) • correspondiente (s) y para el desarrollo de sistemas de ensayo para la identificación de moléculas que interactúan con el 20 (los) producto (s) de proteina del (de los) gen (es) correspondiente . Cuando la proteína de la presente invención es unida a membrana (por ejemplo, en un receptor) , la presente invención ofrece también forma solubles de dicha proteína. En tales 25 formas, una parte o la totalidad de los dominios intracelulares y de transmembrana de la proteína son removidos de tal manera que la proteina es totalmente secretada a partir de la célula en la cual es expresada. Los dominios intracelulares y de transmembrana de la proteínas de la invención pueden ser identificados de conformidad con técnicas conocidas para la determinación de tales dominios a partir de información de secuencia. Por ejemplo el programa de cómputo TopPredlI puede ser utilizado para predecir la localización de dominios de transmembrana en una secuencia de aminoácidos, dominios que son descritos por la ubicación del centro del dominio de transmembrana, con por lo menos 10 aminoácidos de transmembrana en cada lado del (de los) residuo (s) central (es) reportado (es) . Proteínas y fragmentos de proteínas de la presente invención incluyen proteínas con longitudes de secuencia de aminoácidos que representan por lo menos 25% (con mayor preferencia por lo menos 50%, y especialmente por lo menos 75% de la longitud de una proteina divulgada y tienen por lo menos 60% de identidad de secuencia (con mayor preferencia, por lo menos 75% de identidad; especialmente por lo menos 90% o 9% de identidad) con la proteína divulgada, en donde la identidad de secuencia es determinada comparando la secuencias de aminoácidos de las proteínas cuando están alineadas con el objeto de optimizar el empalme y la identidad mientras se minimizan los espacios de secuencia. Se incluyen también en la presente invención proteínas y fragmentos de proteínas que contienen un segmento que contiene de preferencia 8 o más (con mayor preferencia 20 o más, especialmente 30 o más) • aminoácidos contiguos que comparten una identidad de 5 secuencia de por lo menos el 75% (con mayor preferencia por lo menos una identidad de secuencia del 85%; especialmente por lo menos del 95% } con cualquier segmento de este tipo de cualesquiera de las proteínas divulgadas. En otra modalidad, proteínas, fragmentos de proteína, y áFk 10 proteínas recombinantes de la presente invención incluyen las proteínas o fragmentos que pueden ser identificados con base en la presencia de por lo menos un "motivo de enlace con receptor de hGIl-19/AE289" . Como se emplea aqui el término "motivo de enlace como receptor de hGIL-19/AE289" incluye 15 secuencias de aminoácidos o residuos que son importantes para la unión de hGIL-19 sobre su receptor requerido. En una modalidad preferida una proteína de hGIL-19 contiene un motivo de enlace como receptor de hGIL-19/AE289 que incluye aproximadamente 50-60 aminoácidos de SEQ ID No.2. en otra 20 modalidad, una proteína de hGIL-19 contiene un motivo de enlace con receptor de hGIL-19/AE289 que incluye aproximadamente los aminoácidos 23-81 de SEQ ID No.2. en otra modalidad, una proteína de GIL-19 contiene motivo de enlace de receptor de hGIL-19/AE289 que incluye aproximadamente los 25 aminoácidos 168-167 de SEQ ID No.2. en una modalidad preferida una proteína de GIL-19 contiene un motivo de enlace de receptor de hGIL-19AE/289 que incluye por lo menos uno de los aminoácidos 50-60, aminoácidos 63-81 y/o aproximadamente • aminoácidos 168-177 de SEQ ID No.2. 5 En otra modalidad, un motivo de enlace de receptor de hGIL- 19/AE289 tiene una secuencia de amino-ácidos que presenta un nivel de identidad de por lo 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más con una secuencia de aminoácidos seleccionada dentro del grupo que consiste de los aminoácidos 50-60 de SEQ ID No. 2, ét 10 aminoácidos 63-81 de SEQ ID No.2, y aminoácidos 168-177 de SEQ ID No.2. En otra modalidad, proteínas, fragmentos de proteínas, y proteínas recombinantes de la presente invención incluyen las proteínas y fragmentos que pueden ser identificados con base 15 en la presencia de por lo menos 1, 2, 3, 4 o más sitios para la glicocilación enlaza por N. En particular, la identidad se secuencia puede ser • determinada empleando la programática WU-BLAST (BLAST de la Universidad de Washington) versión 2.0, que se basa en WU- 20 BLAST versión 1.4, que se basa a su vez en la versión 1.4 de NCBI-BLAST de dominio público (Altschul and Gish, 1996, Local alignment statistics, Doolittle ed., Methods in Enzymology 266: 460-480; Altschul et al., 1990, Basic local alignment search tool, Journal of Molecular Biology 215: 403-410; Gish 25 and States, 1993, Identification of protein coding reinos by datábase similarity search, Nature Genetics 3: 266-272; Karlin and Altschul. 1993, Applications and statistics for múltiple high-scoring segments in molecular sequences. Proc • Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877; que se incorporan aquí por 5 referencia). Los programas ejecutables de la versión 2.0 de WU-BLAST para varias plataformas UNÍS pueden ser descargados a partir de ftp://blast.wustl.edu/blast/executables. La serie completa de programas de búsqueda (BLASTP, BLASTIN, BLSTX, TBLASTIN, y TBLASTX) se proporciona en este sitio además de 10 varios programas de soporte. WU-BLAST 2.0 está protegido por • derechos de autor y no puede ser vendido ni redistribuido de ninguna manera sin el consentimiento expreso por escrito del autor, pero, los ejecutables mencionados pueden ser por otra parte utilizados libremente para propósitos comerciales, no 15 lucrativos o bien para propósitos académicos. En todos los programas de búsqueda en la serie - BLASTP, BLASTN, BLASTX, TBLASTN y TBLASTX - las rutinas de alineación espaciadas son integrales para la búsqueda de base de datos misma, y por consiguiente proporcionan una mucho mejor sensibilidad y 20 selectividad mientras producen las salidas más fácilmente interpretadas. El espaciado puede ser opcionalmente cancelado en la totalidad de estos programas, si se desea. La penalidad por omisión (Q) para un espacio de longitud 1 es Q=9 para proteínas y BLASTP, y Q=10 para BLASTN, pero puede ser 25 cambiada a un valor entero que incluye 0, de 1 a 8, 9, 10, 11, 12 a 20, 21 a 50, 51 a 100, etc. la penalidad por residuo por omisión para extender un espacio (R) es R=2 para proteínas y BLASTP, R= 10 para BLASTN, pero puede ser • cambiada a cualquier valor entero incluyendo 0, 1, 2, 3, 4, 5 5, 6, 7, 8, 9 , 10, 11, 12 a 20, 21 a 50, 51 a 100, etc. cualquier combinación de valores para Q y R puede emplearse con el objeto de alinear secuencias con el objeto de optimizar el empalme y la identidad mientras se minimizan los espacios de secuencia. La matriz de comparación de ^^ 10 aminoácidos por omisión es BLOSUM62, pero se pueden utilizar otras matrices de comparación de aminoácidos como PAM. Homólogos de especie de los productos de proteínas divulgadas se proporcionan también a través de la presente invención. Como se emplea aquí, un homólogo de especie es una proteína o 15 un polinucleótido con una especie diferente de origen de la especie de una proteína dada o de un polinúcleo dado, pero con una similaridad de secuencias significativa con la ^ proteína o el polinucleótido. De preferencia, los homólogos de especie de polinucleótidos tienen una identidad de 20 secuencia de por lo menos el 60% (con mayor preferencia, por lo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%) con el polinucleótido dado, y homólogos de especies de proteínas tienen una identidad de secuencia de por lo menos el 30% (con mayor preferencia, por lo menos 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 25 80%, 85%, 90%) con la proteína dada, en donde la identidad de secuencia es determinada comparando la secuencia de nucleótidos de los polinucleótidos o las secuencias de aminoácidos de las proteínas cuando están alineadas con el • objeto de optimizar el empalme y la identidad mientras 5 minimizan los espacios de secuencias. Homólogos de especies pueden ser aislados o identificados mediante la elaboración de sondas o iniciadores adecuados a partir de las secuencias proporcionadas aqui y tamizando una fuente adecuada de ácidos nucleicos a partir de las especias deseadas. De preferencia, áfc 10 homólogos de especie son los aislados a partir de especies de mamífero. Con mayor preferencia, homólogos especie son los aislados a partir de ciertas especies de mamíferos como por ejemplo Pan troglodytes, Gorilla gorilla , Pongo pygmaeus, Hylobates concolor, Macaca muí att a, Papio papio, Papio, Papio 15 hamadryas, Cercopi thecus aethiops, Cebus capucin?s, Aotus trivirgatus, Sanguinus oedipus, Microcebus murinus, Mus musculus, Rattus norvegicus, Cricetulus griseus, Felis catus, Mustela visión, Canis familiaris, Oryctolagus cunicul us, Bos taurus, Ovi s aries, Sus scrofa, y Equus caball us, para los 20 cuales mapas genéticos han sido creados lo que permite la identificación de relaciones sintéticas entre la organización genómica de genes en una especie y la organización genómica de genes relacionados en otra especie (O'Brien y Seuánez, 1988, Ann. Rev. Genet 22:323-351; O' Brien et al., 1993, 25 Nature Genetics 3:103-112; Johansson et al., 1995, Genomics 25: 628-690; Lyons et al., 1997. Nature Genetics 15: 47-56; O Brien et al., 1997, Trends in Genetics 13(10) 393-399; Carver y Stubbs, 1997, Genome Research 7:1123-1137; que se • incorporan aquí por referencia) . 5 La invención abarca también variantes alélicas de los polinucleótidos o proteínas divulgados; es decir, formas alternativas que ocurren naturalmente de los polinucleótidos aislados que codifican también proteínas que son idénticas o tienen secuencias significativamente similares a las 10 codificadas por los polinucleótidos divulgados. De preferencia, las varias alélicas tienen una identidad de secuencia de por lo menos el 60% (con mayor preferencia por lo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%), con el polinucleótido dado, en donde la identidad de secuencia es determinada 15 comparando las secuencias de nucleótidos de los polinucleótidos cuando están alineados con el objeto de optimizar el empalme y la identidad mientras se minimizan los espacios de secuencia. Variantes alélicas pueden aislados e identificadas elaborando sondas o iniciadores adecuados a 20 partir de las secuencias proporcionadas aquí tamizando una fuente adecuada de ácido nucleico a partir de individuales de las especias apropiadas. La invención incluye también polinucleótidos con secuencias complementarias a las secuencias de los polinucleótidos divulgadas aquí. 25 La presente invención incluye también polinucleótidos que se inclinan bajo condiciones estrictas reducidas, con mayor preferencia condiciones estrictas y especialmente condiciones altamente estrictas, con polinucleótidos descritos aquí. Ejemplos de condiciones estrictas se muestran en la siguiente tabla: las condiciones altamente estrictas son las condiciones que son por lo menos tan estrictas, que por ejemplo, las condiciones G-L; y condiciones con reducción de estrictez son por lo menos tan estrictas como las condiciones M-R. Condición Híbrido de Longitud temperatura de hibridación de polinucleótido de y amortiguador (+) estrictez híbrido (pares de bases) ( ++ ) A AD :ADN > 50 65° C; lxSSC - o - 42° C; lxSSC, formamida al 50% * B AND:ADN < 50 TE*; lxSSC C ADN:ARN > 50 67° C; lxSSC - o- 45° C; lxSSC, formamida al 50% D ADN:ARN < 50 TD*; lxSSC E ARN:ARN > 50 70° C; lxSSC - o- 50° C; lxSSC, formamida al 50% F ARN:ARN < 50 TF*; lxSSC G AD :ADN > 50 65° C; 4xSSC - o- 42° C; 4xSSC, formamida • al 50% H H A ADDNN::AADDNN < < 5 500 T THH**;; 44xXSSSSCC I ADN:ARN > 50 67° C; 4xSSC -- o - 45° C; 4xSSC, formamida al 50% 10 K ARN:ARN > 50 70° C; 4xSSC -- o - • 50° C; 4xSSC, formamida al 50% L ARN:ARN < 50 TL*; 2xSSC M AD :ADN > 50 50° C; 4xSSC -- o - 15 40° C; dxSSC, formamida al 50% N ADN:ADN < 50 TN*; 6xSSC 0 AD :ARN > 50 55° C; 4xSSC - o - 42° C; 6xSSC, formamida 20 al 50% P ADN:ARN < 50 TP*; 6xSSC Q ARN:ARN > 50 60° C; 4xSSC - o - 45° C; 6xSSC, formamida al 50% 25 R ARN:ARN < 50 TR*; 4xSSC Condición de estrictez Temperatura de Lavado (+) A 65° C; 0.3Xssc B TB*; lxSSC • C 67° C; 0.3xSSC 5 D TD*; lxSSC E 70° C; 0.3xSSC F TF*; lxSSC G 65° C; lxSSC H TH*; 4XSSC A 10 I 67° C; lxSSC K 67° C; lxSSC L TL*; 2xSSC M 50° C; 2xSSC 15 N TN*; 6xSSC O 55° C; 2xSSC P TP*; 6xSSC • Q 60° C; 2xSSC R TR*; 4XSSC 20 (++) : la longitud del híbrido es la longitud anticipada para (a) región (es) hibridada(s) de los polinucleótidos de hibridación. Cuando se híbrida un polinucleótido sobre un polinucleótido blanco de secuencia desconocida, se considera que la longitud del híbrido es la longitud del polinucleótido 25 sobre un polinucleótido blanco de secuencia desconocida, se considera que la longitud del híbrido es la longitud del polinucleótido de hibridación. Cuando se hibridan polinucleótidos de secuencia conocida, la longitud de híbrido puede ser determinada mediante la alineación de las 5 secuencias de los polinucleótidos e identificando la región o las regiones de complementaridad óptima de secuencia. (+) SSPE (lxSSPE e NaCl 0.15, lOmM NaH2P02, y 1.25 mM EDTA, pH 7.4} puede ser substituido por SSC (lx SSC es NaCl 0.15M y 15mM citrato de sodio) en la hibridación y amortiguadores de 10 lavado; los lavados se efectúan durante 15 minutos después de • una hibridación completa. * TB-TR : la temperatura de hibridación para híbridos de los cuales se anticipa que tienen una longitud inferior a 50 pares de base debe de ser de 5 a 10°C menos que la 15 temperatura de fusión (Tm) del híbrido, en donde Tm es determinado de conformidad con las siguientes ecuaciones, para híbridos de menos de 18 pares de bases de longitud, Tm • (°C) = 2 (# de bases A + T) + 4(# de mases G + C) . para híbridos que contienen entre 18 y 49 pares de bases de 20 longitud, T^ (°C) = 81.5 + 16.6 (logio (Na+) ) + 0.41 (%G+C) - (600 /N) , en donde N es el número de bases en el híbrido, (Na+) es la concentración de iones sodio en el amortiguador de hibridación ( (Nat) para 1 x SSC = 0.165 M) . ejemplos adicionales de condiciones estrictas para 25 hibridación de polinucleótidos se proporcionan en Sambrook, J. E.F. Fritsch, y T. Maniatis, 1989, Molecular Cloning:; A Laboratory Manual (Clonación Molecular: Un Manual de Laboratorio) , Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. Chapters 9 y 11, y Current Protocols in Molecular Biology (Protocolos Actuales en Biología Molecular) , 1995, F.M. Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons. Inc. secciones 2.10 y 6.3-6.4, que se incorporan aquí por referencia. De preferencia, cada uno de estos polinucleótidos de hibridación tiene una longitud que es por lo menos 25% (con mayor preferencia por lo menos 50% y especialmente por lo menos 75%) de la longitud del polinucleótido de la presente invención con el cual se híbrida, y tiene una identidad de secuencia de por lo menos el 60% (con mayor preferencia por lo menos una identidad del 75%; especialmente por lo menos una identidad del 90% o 95%) con el polinucleótido de la presente invención con el cual se híbrida, en donde la identidad . de secuencia es determinada comparando las secuencias de los polinucleótidos de hibridación cuando están alineadas con el objeto de optimizar el empalme y la identidad mientras se minimiza los espacios de secuencia. El polinucleótido aislado de la presente invención puede ser enlazado de manera operativa sobre una secuencia de control de expresión como por ejemplos los vectores de expresión pMT2 o bien pED divulgados en Kaufman et al., Nucleic Acids Res. 19, 4485-4490 (1991) con el objeto de producir la proteína de manera recombinante. Muchas secuencias de control de expresión adecuadas son conocidas en la técnica. Métodos generales de expresión de proteínas recombinantes son también conocidos y son ejemplificados en R. Kaufman, Methods in Enzymology (Métodos en Enzi ología) 185, 537-566 (1990) . De conformidad con lo definido aquí, la expresión "enlazado de manera operativa" significa que el polinucleótido aislado de la invención y una secuencia de control de expresión se localizan dentro de un vector o célula de tal manera que la proteína es expresada por una célula huésped que ha sido transformado (transfectada) con el polinucleótido/secuencia de control de expresión ligada. Numerosos tipos de células pueden actuar como células huéspedes adecuadas para la expresión de la proteína. Células huéspedes de mamífero incluyen, por ejemplo, células COS de mono, células de ovarios de hámster Chino (CHO) , células 293 de riñon de ser humano, células A431 epidérmica de ser humano, células Colo205 de ser humano, células 3T3, células CV-1, otras líneas de células de primates transformadas, células diploides normales, cepas de células derivadas del cultivo subrayado in vitro de tejido primario, explantes primarios, células HeLa, células L de ratón, células BHK, HL-60, U937, HaK o Jurkat. Alternativamente, puede ser posible producir la proteína en eucariotas tales como levadura o en procariotas tales como bacterias. Cepas de levadura potencialmente adecuadas incluyen Saccharomyces cerevisiae, Shi zosaccharomyces pombe, cepas de Kl uyveromyces, Candida, o cualquier cepa de levadura que puede expresar proteínas heterólogas, cepas bacterianas potencialmente adecuadas incluyen Escherichia coli , Bacill us subtilis, Salmonella typhimuri um, o cualquier cepa bacteriana capaz de expresar proteínas heterólogas. Si la proteina es elaborada en levadura o bacterias, puede ser necesario modificar la proteína producida, por ejemplo, por fosforilación o glicosilación de los sitios apropiados, con el objeto de obtener la proteina funcional. Tales uniones covalentes pueden ser logradas utilizando métodos químicos o enzimáticos conocidos. La proteína puede también ser producida mediante el enlace operativo del polinucleótido aislado de la invención sobre secuencias de control adecuadas en uno o varios vectores de expresión de insecto, y empleando un sistema de expresión de insecto. Materiales y métodos para sistemas de expresión de baculovirus/célula de insecto están comercialmente disponibles en forma de conjuntos de elementos en, por ejemplo Invitrogen, San Diego, California, Estados Unidos de América (el conjunto de elementos MaxBac®) , y tales métodos son bien conocidos en la técnica, de conformidad con lo descrito en Summers and Smith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No. 1555 (1987) que se incorpora aquí por referencia. Como se emplea aquí, una célula de insecto capaz de expresar un polinucleótido de la presente invención es "transformada" . La proteína de la presente invención puede ser preparada mediante el cultivo de células huéspedes transformadas en condiciones de cultivo adecuadas para expresar la proteína recombinante. La proteína expresada resultante puede ser purificada a partir de dicho cultivo (es decir, a partir del medio de cultivo o extractos de células) utilizando procesos de purificación conocidos, por ejemplo cromatografía de intercambio de iones y filtración en gel. La purificación de la proteína puede también incluir una columna de afinidad que contiene agentes que se unen con la proteina; uno o varios pasos en columna en tales resinas de afinidad como concanavalina A-agarosa, heparina-toyopearl® o bien Cibacrom blue 3GA Sepharose®; uno o varios pasos que involucran cromatografía de interacción hidrofóbica utilizando tales resinas como éter fenílico, éter butílico, o éter propílico; o bien cromatografía de inmunoafinidad. Alternativamente, la proteína de la invención puede s.er expresada también en forma que facilita su purificación, por ejemplo, puede ser expresada como proteína de fusión, tales como las de la proteína de enlace de maltosa (MBP) , glutatión-S-transferasa (GST) o bien tioredoxina (TRX) conjuntos de elementos para expresión y purificación de tales proteínas de fusión están comercialmente disponibles en New England BioLabs (Beverly, MA) Pharmacia (Piscataway, NJ) , e Invitrogen Corporation (Carlsbad, CA) , respectivamente. La proteína puede ser también marcada con un epítopo y subsecuentemente purificada mediante el uso de un anticuerpo específico dirigido hacia dicho epítopo. Un epítopo de este tipo ("Flag") se encuentra disponible en el comercio en Eastman Kodak Company (New Haven, CT) . Además, uno o varios pasos de cromatografía de líquidos de alto desempeño de fase reversa (RP-HPLC) que emplean medios RP-HPLC hidrofóbicos, por ejemplo, gel de silice que tienen grupos metilo o bien otros grupos alifáticos pendientes pueden ser empleados para purificar adicionalmente la proteína. Algunos o la totalidad de los pasos de purificación anteriores, en varias combinaciones, pueden también ser empleados para proporcionar una proteína recombinantes substancialmente homogéneamente aislada. La proteína purificada de esta forma es substancialmente exenta de otras proteínas de mamífero y se definen de conformidad con la presente invención como una "proteína aislada". La proteína de la invención puede también ser expresada como un producto de animales transgénicos, como por ejemplo, como un componente de la lecha de vacas, cabras, cerdas u ovejas transgénicas que se caracterizan por células somáticas o germinales que contienen una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína. La proteína puede ser producida también por síntesis química convencional conocida. Métodos para la construcción de las proteínas de la presente invención por medios sintéticos son conocidos, de los expertos en la materia. Las secuencias de proteína construidas sintéticamente en virtud de que comparten características estructurales y/o conformacionales primarias, secundarias o terciarias con proteínas pueden poseer propiedades biológicas en común, incluyendo actividad de proteína. Por consiguiente, pueden emplearse como sustitutos biológicamente activos o inmunológicos para proteínas naturales purificadas en el tamizado de compuestos terapéuticos y en proceso inmunológicos para el desarrollo de anticuerpos . Las proteínas proporcionadas aquí incluyen también proteínas caracterizadas por secuencias de aminoácidos similares a las secuencias de proteínas purificadas pero en las cuales modificaciones son naturalmente proporcionadas o bien deliberadas manipuladas. Por ejemplo modificaciones en el péptido o secuencias de ADN pueden ser efectuadas por expertos en la materia utilizando técnicas conocidas. Modificaciones de interés en las secuencias de proteina pueden incluir la alteración, substitución, reemplazo, inserción o remoción de un residuo de aminoácidos seleccionado en la secuencia codificadora. Por ejemplo, uno o varios de los residuos de cisteína pueden ser removidos o reemplazados por otro aminoácido con el objeto de modificar la conformación de la molécula. Técnicas para dicha alteración, substitución, reemplazo, inserción, o remoción son bien conocidos por parte de los expertos en la materia (véase, por ejemplo patente norteamericana número 4,518,584). De preferencia, dicha alteración, substitución, reemplazo, inserción o remoción conserva la actividad deseada de la proteína. Otros fragmentos o derivados de las secuencias de proteína con relación a los cuales podria esperarse que conserven la actividad de proteína en su totalidad o en parte y por consiguiente que pueden ser útiles para tamizado o bien para otras metodologías inmunológicas pueden también efectuarse fácilmente por parte de los expertos en la materia a partir de las divulgaciones del presente documento. Tales modificaciones se encuentran dentro del marco de la presente invención. USOS Y ACTIVIDAD BIOLÓGICA Los polinucleótidos y proteínas de la presente invención pueden presentar uno o varios de los usos o actividades biológicas (incluyendo los asociados con ensayos mencionados aquí) identificados a continuación. Usos o actividades descritos para proteínas de la presente invención pueden ser proporcionados por la administración o el uso de tales proteínas o por la administración o el uso de polinucleótidos que codifican tales proteínas (como por ejemplo en terapias génicas o vectores adecuados para la introducción de ADN) . Usos de hGL-19 5 Debido a su homología con IL-10, GIL-19/AE289 de ser humano puede ser considerado miembro de la familia general de las citocinas y, como tal puede presentar actividades similares a IL-10. las citocinas desempeñan funciones importantes tanto en la salud como en la enfermedad y tienen múltiples 10 indicaciones clínicas. Por consiguiente, esta molécula (y • otras moléculas de la presente invención) será útil como agonista en ciertas indicaciones clínicas y antagonistas de esta molécula serán útiles en otras situaciones clínicas, especialmente en situaciones en las cuales IL-10 actúa como 15 un agonista o antagonista de IL-10 actúan como antagonista. Que el agonista o antagonista sea el fármaco preferido depende de los aspectos particulares de la patología de la enfermedad, como por ejemplo los tipos de células involucrados, la naturaleza del estímulo y el microentorno 20 celular. En una modalidad preferida, una actividad de hGIL-19 es por lo menos una o varias de las siguientes actividades: (1) modulación, por ejemplo, antagonización de una vía de transducción de señales (por ejemplo, una vía dependiente de 25 HIL-19) ; (2) modulación de producción y/o secreción de citocinas (por ejemplo, producción y/o secreción de una citocina proinflamatoria) ; (3) modulación de producción y/o secreción de linfocinas; (4) modulación de la producción de • moléculas de adhesión y/o adhesión celular; (5) modulación de 5 la expresión o actividad de factores de transcripción nuclear; (7) modulación de la secreción de IL-1; (8) competencia con receptores para otras citocinas; (9) competencia con otra proteína miembro de la familia de hGIL- 19 para unirse con un receptor de hGIl-19; (10) modulación de J h 10 la translocación nuclear de receptor internalizado para hGIL- 19 o bien otra citocina o bien receptor que forma complejo con ligando; (11) modulación de la proliferación, o desarrollo o diferenciación celular, por ejemplo, proliferación, desarrollo o diferenciación estimulado por 15 citocinas o una proteína hGIL-19 (por ejemplo, de una célula epitelial, por ejemplo una célula epitelial escamosa del esófago, o bien una célula cutánea, por ejemplo, queratinocitos) ; (12) modulación de la proliferación, desarrollo o diferenciación celular de una célula osteogénica 20 (por ejemplo, de una célula precursora de osteoblasto, osteoblasto y/o osteoblasto); (13) modulación de la formación de huesos, metabolismo de huesos y/o homeostasis ósea (por ejemplo inhibición de la resorción ósea); (15) modulación de respuestas inmunes celulares; (16) modulación de acciones 25 proinflamatorias mediadas por citocinas (por ejemplo inhibición de la síntesis de fase aguda por los hepatocitos, fiebre y/o síntesis de prostaglandina, por ejemplo síntesis de PGE2) ; y (17) promoción y/o potenciación de la curación de las heridas. Considerando su función inmunomoduladora aparente, las proteínas GIL-19/AE289 de ser humano pueden actuar sobre los siguiente tipos de células: células T, células B, células dendríticas, macrófagos/monocitos, neutrofilos, células de mástil, basofilos, eosinófilos, células de presentación de antigenos del sistema nervioso y células de presentación de antígenos del riñon. Con base en su homología IL-10, las proteínas GIL-19/AE289 de ser humano (o bien agonistas o antagonistas) de las mismas pueden tener las siguiente actividades y uso: (a) regulación ascendente de respuesta inmunes humorales y atenuar reacciones inmunes mediadas por células; (b) funcionan como un agente antiinflamatorio mediante la inhibición de la síntesis de citocinas y quimiocinas proinflamatorias; (c) modulación de respuestas inflamatorias asociadas con lesión, sepsis, enfermedad gastrointestinal y cardiovascular así como inflamación después de una intervención quirúrgica; (d) Tratamiento de leucemia mielógena aguda, linfoma Non-Hodgkin, transplante de médula ósea para tratar receptores antes de un injerto, transplante de médula • ósea para tratar células madres de donador antes de 5 transplante, o para mejorar la enfermedad de injerto vs huésped después de un transplante de médula ósea; (e) Tratamiento de enfermedades autoinmunes mediadas por células tales como esclerosis múltiples, diabetes, artritis reumatoide, miastenia, lupus sistemático 10 eritematoso, nefrotoxicidad asociada con glomerulonefritis, enfermedad de intestinos inflamados, enfermedad de Crohn, pancreatitis, y asma. Agonistas de GIL-19/AE289 de ser humano, incluyen sin limitación, proteínas GIL-19/AE289 de ser humano y fragmentos 15 de las mismas, mutantes por remoción y mutantes por adición de las mismas; así como péptido y compuestos de pequeñas moléculas que interactúan con el receptor o bien otro blanco al cual GIL-19/AE289 de ser humano va enfocada. Antagonistas de GIL-19/AE289 de ser humano incluyen, sin limitación, 20 anticuerpo enfocados a hacia proteínas GIL-19/AE289 de ser humano; formas solubles del receptor o bien otro blanco al cual GIL-19/AE289 de ser humano está enfocado; anticuerpos dirigidos hacia el receptor o bien otro blanco al cual GIL- 19/AE289 de ser humano está enfocada; y péptido y compuestos 25 de pequeñas moléculas que inhiben o interfieren con la interacción de GIL-19/AE289 de ser humano con su receptor o bien otro blanco. Usos y utilizaciones en investigación • Los polinucleótidos proporcionados en la presente invención 5 pueden ser utilizados por la comunidad investigadoras para varios propósitos. Los polinucleótidos pueden ser empleados para expresar proteína recombinante para análisis, caracterización o uso terapéutico; como marcadores para tejidos en los cuales la proteína correspondiente es 10 expresada de manera preferente (ya sea de manera constitutiva • o bien en una etapa particular de la diferenciación tisular o desarrollo o bien en estados de enfermedad) ; como marcadores de pesos moleculares de pesos moleculares en geles Southern; como marcadores de cromosoma o etiquetas (cuando están 15 marcados) para identificar cromosomas o bien para cartografiar las posiciones de genes relacionados; Para comparar consecuencias de ADN endógeno en pacientes para identificar enfermedades genéticas potenciales; por ejemplo sondas para hibridar y por consiguiente descubrir secuencias 20 de ADN relacionadas novedosas; Como fuente de información para derivar iniciadores de reacción en cadena de polimeraza para determinar la huella digital genética; como sonda para "restar" secuencias conocidas en el proceso de descubrimiento de otros 25 polinucleótidos novedosos; para seleccionar y elaborar oligómeros para fijación de un "chip" génico o bien otro soporte, incluyendo el examen de patrones de expresión; para elevar anticuerpos anti-proteína utilizando técnicas de • inmunización de ADN; y como antígeno para elevar anticuerpo 5 anti-ADN o para provocar otra respuesta inmune. Cuando el polinucleótido codifica una proteína que se une o se une potencialmente con otra proteína (como por ejemplo en una interacción receptor-ligando) el polinucleótido puede también emplearse en ensayo de trampa de interacción como por ejemplo 10 lo descrito en Gyuris et al., 1993. Cell 75:791-803 y en Rossi et al., 1997, Proc. Natl. Acad Sci. USA 94: 8405-8410, todos los cuales se incorporan aquí por referencia) para identificar polinucleótidos que codifican la otra proteína con la cual ocurre el enlace o para identificar mhioidores 15 de la interacción de enlace. Las proteínas proporcionadas por la presente invención pueden ser empleadas de manera similar en ensayos para determinar la actividad biológica, incluyendo un panel de proteínas múltiples para tamizado de alto rendimiento; para formar 20 anticuerpos o para provocar otra respuesta inmune; como reactivo, incluyendo el reactivo marcado en ensayos diseñados para determinar cuantitativamente los niveles de la proteína o su receptor en fluidos biológicos; como marcadores para tejidos en los cuales la proteína correspondiente es 25 expresada de manera preferente (ya sea constitutivamente o bien en una etapa particular de diferenciación tisular o desarrollo o en un estado de enfermedad) ; y, evidentemente, para aislar receptores o ligandos correlativos. Cuando la proteína se une o se une potencialmente con otra proteína 5 (como por ejemplo en una interacción receptor-ligando) la proteína puede ser empleada para identificar la otra proteína con la cual ocurre el enlace o bien para identificar inhibidores de la interacción de enlace. Proteínas involucradas en estas interacciones de enlace pueden también j 10 ser empleadas para tamizar péptido o inhibidores de pequeñas moléculas o antagonistas de la interacción enlace. Cualesquiera de estas utilizaciones en investigación puede ser desarrollada en grado de reactivo o formato de conjunto de elementos para comercialización como productos de 15 investigación. Métodos para efectuar los usos mencionados arriba son bien conocidos por parte de los expertos de la materia. Referencias que divulgan estos métodos, incluyen, sin limitación "Molecular Cloning; A Laboratory Manual" 20 (clonación molecular : un manual de laboratorio) segunda edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press Sambrook, J. E.F. Fritsh and T. Maniatis eds., 1989, y 2Methods in Enzymology: Guide to Molecular Cloning Techniques" (Métodos en Enzimología: Guía para Técnicas de Clonación Molecular), 25 Academic Press, Berger, S.L. y A.R. Kimmel Eds. 1987.
Usos Nutricionales Los polinucleótidos y proteínas de la presente invención pueden también emplearse como fuentes o complementos nutricionales. Tales usos incluyen, sin limitación, el uso 5 como complemento de proteina o aminoácidos, uso como fuente de carbono, uso de cómo fuente de nitrógeno, y uso como fuente de carbohidrato. En tales casos, la proteína o polinucleótido de la invención puede agregarse a la alimentación de un organismos particular o bien puede fc 10 administrarse como preparación líquida o sólida separada, como por ejemplo en forma de polvo, pildoras, soluciones, suspensiones o cápsulas. En el caso de microorganismos, la proteína o polinucleótido de la invención pueden agregarse en el medio en el cual se cultiva el microorganismo. 15 Actividad de Citocina y Proliferación/diferenciación Celular Una proteína de la presente invención puede presentar una actividad de citocina, proliferación celular (ya sea induciendo o inhibiendo) o bien diferenciación celular (ya sea induciendo o inhibiendo) o bien puede inducir la 20 producción de otras citocinas en otras poblaciones de células. Muchos factores de proteína descubiertos a la fecha incluyendo todas las citocinas conocidas, han presentado actividad en ensayos de proliferación celular dependiente de uno o varios factores y por consiguiente los ensayos sirven 25 como una confirmación conveniente de la actividad de citocina. La actividad de una proteína de la presente invención es evidenciada por cualesquiera de varios ensayos de proliferación de células dependiente de factores originarios para líneas de células, incluyendo, sin limitación 32D, DA2, DAIG, TÍO, B9, B9/11, BaF3, MC9/G, M+(pre B M+), 2E8, RB5, DA1, 123, T1165, HT2, CTLL2, TF-1, Mo7e y CMK. La actividad de una proteína de la invención puede, entre otros medios medirse a través de los siguientes métodos: Ensayos para proliferación de células T o timocitos que incluyen, sin limitación los descritos en : Current Protocols in Immunology (Protocolos Actuales en Inmunología) editado por J.E. Coligan. A.M. Kruisbeek D.H. Margulies, E.M. Shevach E. Strober. Pub. Greene Publishing Associates and Wiley -Interscience (Capítulo 3, ensayos in vitro para la función linfocitos de ratón 3.1-3.19; capítulo 7, estudios inmunológicos en seres humanos); Takai et al., J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Bertagnolli et al., J Immunol 145:1706-1712, 1990; Bertagnolli et al., Cellular Immunology 133:327-341, 1991; Bertagnolli et al., J. Immunol. 149:3778-3783, 1992; Bowman et al., J. Immunol. 152: 1756-1761, 1994. Ensayos para la producción de citocinas y/o proliferación de células del bazo, células de nodo linfático o timocitos incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Polyclonal T cell stimulation (estimulación de células T policlonales), Kruisbeek, A.M. y Schevach, E.M. en Current Protocols in Immunology (protocolos actuales en inmunología), J.E. Coligan eds. volumen 1, páginas 3.12.1-3.12.14, John Wiley and Sons, Toronto, 1994; y Measurement of mouse and human Interferon ?) medición de interferón ? de ratón y ser humano), Schreiber, R.D. en Current Protocols in Immunol ogy (protocolos actuales en inmunología), J.E. Coligan eds. volumen 1 páginas 6.8.1-6.8.8, John Wiley and Sons, Toronto, 1994. Ensayos para la proliferación y diferenciación de células hematopoyéticas y linfopoyéticas incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Measurement of Human and Murine Interleukin 2 and Interleukin 4, (medición de la interleucina 2 e interleucina 4 de ser humano y murino), Bottomly, K., Davis, L.S. and Lipsky, P.E. en Current and Protocol s in Immunology (protocolos actuales en inmunología) J.E. e.a. Coligan eds. volumen 1 páginas 6.3.1-6.3.12, John Wiley and Sons, Toronto, 1991; de Vries et al., J. Exp. Med. 173:1205-1211, 1991; Moreau et al., Nature 336:690-692, 1988; Greenberger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:2931- 2938, 1983; Measurement of mouse and human interleukin 6 (medición de la interleucina 6 de ser humano y de ratón) - Nordan, R. en Current Protocols in Immunology (protocolos actuales en inmunología) J.E. e.a. Coligan eds. volumen 1 páginas 6.6.1-6.6.5, John Wiley and Sons, Toronto, 1991; ?í?"m, ?~ -Smith et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83:1857-1861, 1986; Measurement of human Interleukin 11 (medición de la interleucina 11 humana) - Bennett, F., Giannotti, J., Clark, S.C. and Turner, K.J. en Current Protocols in Immunol ogy (protocolos actuales en inmunología) J.E. e.a. Coligan eds. volumen 1, páginas 6.15.1 John Wiley and Sons, Toronto, 1991; Measurement of mouse and human Interleukin 9 (medición de interleucina 9 de ser humano y de ratón) - Ciarletta, A., Giannotti, J. Clark, S.C. and Turner, K.J. en Current Protocols in Immunology (protocolos actuales en inmunología) J.E. e.a. Coligan eds. volumen 1 páginas 6.13.1, John Wiley and Sons, Toronto, 1991. Ensayos para respuestas de clon de célula T a antígenos (que identificarán, entre otras cosas, proteínas que afectan las interacciones APC-células T asi como efectos directos de células T mediante la medición de la proliferación y producción de citocinas) incluyen, sin limitación, los descritos en Current Protocols in Immunology, (protocolos actuales en inmunología), editado por J.E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Schevach, W Strober, Pub. Greene Publishing Associates y Wiley-Interscience (capítulo 3, In Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function (ensayos in vitro para función de linfocitos de ratón) ; capítulo 6, Cytokines and their cellular receptors; (citocinas y sus receptores celulares); capítulo 7; Immunologic studies in Humans) ; (estudios inmunológicos en seres humanos) ; Weinberger et al.; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 ¡6091-6095, 1980; Weinberger et al., Eur. J. Immun. 11:405-411, 1981; • Takai et al., J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Takai et al., 5 J. Immunol. 140:508-512, 1988. Actividad inmune de estimulación o supresión Una proteína de la presente invención puede también presentar una actividad de estimulación inmune o supresión inmune, que incluye, sin limitación, las actividades para las cuales 10 ensayos se describen aquí. Una proteína puede ser útil para • el tratamiento de varias insuficiencias inmunes así como enfermedades inmunes (incluyendo inmunodeficiencia combinada severa (SCID)), por ejemplo, para regular (de manera ascendente o descendente) el crecimiento y la proliferación 15 de linfocitos T y/o B, así como para efectuar la actividad citolítica de células NK y otras poblaciones de células. Estas deficiencias inmunes pueden ser genéticas o bien pueden • ser provocadas por infecciones virales (por ejemplo, VIH), bacterianas o fúngales, o bien pueden resultar de trastornos 20 autoinmunes. Más específicamente, enfermedades infecciosas causadas por infecciones virales, bacterianas, fúngales o bien de otros tipos pueden ser tratadas utilizando una proteína de la presente invención, incluyendo infecciones por VIH, virus de hepatitis, herpes virus, micobacterias, 25 Leishmania spp., malaria spp., y varias infecciones fúngales tales como candidiasis. Evidentemente, en cuanto a este aspecto, una proteína de la presente invención puede ser útil cuando puede ser deseable un refuerzo del sistema inmune en general, por ejemplo, en el caso del tratamiento del cáncer. Trastornos autoinmunes que pueden ser tratados utilizan una proteína de la presente invención incluyen, por ejemplo, enfermedad de tejido conectivo, esclerosis múltiple, lupus sistémico eritematoso, artritis reumatoide, inflamación pulmonar autoinmune, síndrome de Guillain-Barre, tiroiditis autoinmune, diabetes mellitus insulinodependiente, miastenia, enfermedad de injerto versus huésped así como enfermedad ocular inflamatoria autoinmune. Dicha proteína de la presente invención puede también ser útil para el tratamiento de reacciones y condiciones alérgicas, tales como asma (en particular asma alérgica) o bien otros problemas respiratorios. Otras condiciones, en las cuales se desea una supresión inmune (incluyendo, por ejemplo, transplante de órgano) pueden también ser tratadas utilizando una proteína de la presente invención. La utilización de proteínas de la invención permite también regular respuestas inmunes de varias maneras. Una regulación descendente puede obtenerse mediante la inhibición o el bloqueo de una respuesta inmune ya en progreso o bien puede involucrar la prevención de la inducción de una respuesta inmune. Las funciones de células T activadas pueden ser inhibidas mediante la supresión de respuestas de células T o bien mediante la inducción de tolerancia específica en células T, o ambas cosas. La inmunosupresión de respuestas de • células T es generalmente un proceso activo no específico 5 para antígeno que requiere de una exposición continua de las células T al agente supresor. La tolerancia, que incluye la inducción de ausencia de respuesta o bien ausencia de energía en células T, se distingue de la inmunosupresión en la medida en que es generalmente específica para antígeno y persiste 10 después de la suspensión de la exposición al agente que • fomenta la tolerancia. Opcionalmente, la tolerancia puede ser demostrada por la falta de una respuesta de células T al efectuarse una nueva exposición a antígeno específico en ausencia del agente que fomenta la tolerancia. 15 La regulación descendente o la prevención de una o varias de las funciones de antígeno (incluyendo, sin limitación, funciones de antígeno de linfocito B (como por ejemplo B7)), por ejemplo, la prevención de síntesis de linfocinas de alto nivel por células T activadas, será útil en situaciones de 20 transplante de tejido, piel u órgano y en enfermedad de injerto versus huésped (GVHD) . Por ejemplo, el bloqueo de la función de células T resultaría en una destrucción reducida de tejido en el caso de transplante de tejido. Típicamente, en el caso de transplantes de tejido, el rechazo del 25 transplante es iniciado a través de su reconocimiento como foráneo por células T, seguido por una reacción inmune que destruye el transplante. La administración de una molécula que inhibe o bloquea la interacción de un antígeno de linfocito B7 con su(s) ligando (s) natural (es) en células 5 inmunes (como por ejemplo forma soluble, monomérica de un péptido que tiene una actividad B7-2 solo o en combinación con una forma monomérica de un péptido que tiene una actividad de otro antígeno de linfocito B (por ejemplo, B7-1, B7-3) o anticuerpo de bloqueo), antes del transplante puede 10 provocar la unión de la molécula sobre el (los) ligando (s) natural (es) en las células inmunes sin transmitir la señal co-estimuladora correspondiente. El bloqueo de la función de antígeno de linfocito B en este asunto impide la síntesis de citocinas por células inmunes, tales como células T, y por 15 consiguiente actúa como un inmunosupresor. Además, la falta de coestimulación puede también ser suficiente para remover energía de lasa células T, induciendo por consiguiente la tolerancia en un sujeto. La inducción de tolerancia de largo plazo por reactivos de bloqueo de antigeno de linfocito T 20 puede evitar la necesidad de la administración repetida de estos reactivos de bloqueo. Para lograr una inmunosupresión suficiente o tolerancia adecuada en un suieto, puede ser también necesario bloquear la función de una combinación de antígenos de linfocitos B. 25 La eficacia de reactivos de bloqueo particulares para prevenir rechazos de transplante de órgano o GVHD puede evaluarse utilizando modelos animales que son predictivos de la eficacia en seres humanos. Ejemplos de sistemas apropiados que pueden ser empleados incluyen injertos cardiacos 5 alogeneicos en ratas e injertos de células de isletas pancreáticas xenogeneicas en ratones, ambos empleándose para examinar los efectos inmunosupresores de proteínas de fusión CTLA4Ig in vivo de conformidad con lo descrito en Lenschow et al., Science 257:789-792 (1992) y Turka et al., Proc. Natl. 10 Acad. Sci. USA, 89: 11102-11105 (1992). Además, modelos de • murino de GVHD (véase Paul ed., Fundamental Immunology, (Inmunología fundamental) Raven Press, New York, 1989, páginas 846-847) pueden emplearse para determinar el efecto de bloquear la función de antígeno de lir.focito B in vivo 15 sobre el desarrollo de esta enfermedad. El bloqueo de la función de antígeno puede también ser útil terapéuticamente para el tratamiento de enfermedades • autoinmunes. Muchos trastornos autoinmunes son el resultado de una activación inapropiada de células T que reaccionan 20 contra tejido mismo y que promueven la producción de citocinas y autoanticuerpos involucrados en la patología de las enfermedades. La prevención de la activación de células T autoreactivas puede reducir o eliminar síntomas de enfermedad. La administración de reactivos que bloquean la 25 coestimulación de células T trastornando las interacciones receptor: ligando de antígenos de linfocito B puede emplearse para inhibir la activación de células T y prevenir la producción de autoanticuerpos o citocinas derivadas de células T que pueden estar involucrados en el proceso de 5 enfermedad. Además, reactivos de bloqueo pueden inducir una tolerancia específica a antígeno de células T autoreactivas lo que podría provocar un alivio de largo plazo de la enfermedad. La eficacia del bloqueo de reactivos para prevenir o mitigar trastornos autoinmunes puede ser 10 determinada utilizando numerosos modelos de animales bien • caracterizados de enfermedades autoinmunes de ser humano. Ejemplos incluyen encefalitis autoinmune experimental de murino, eritematoso sistémico en ratones MRL/lpr/Ipr o bien ratones híbridos NZB, artritis de colágena autoinmune de 15 murino, diabetes mellitus en ratones NOD y ratas BB, asi como miastenia experimental de murino (véase Paul, ed., Fundamental Immunology, Raven Press, New York, 1989, páginas • 840-856) . La regulación ascendente de una función de antígeno (de 20 preferencia una función de antígeno de linfocito B) , como medio para regular hacia arriba respuestas inmunes, puede también ser útil en terapia. La regulación ascendente de respuestas inmunes puede tomar la forma de incrementar una respuesta inmune existente o provocar una respuesta inmune 25 inicial. Por ejemplo, el incremento de una respuesta inmune a través de la estimulación de la función de antígeno de linfocitos B puede ser útil en casos de infección viral. Además, enfermedades virales sistémicas tales como influenza, resfriado común, y encefalitis pueden ser mitigadas por la administración sistémica de formas estimuladores de antígenos de linfocitos B. Alternativamente, respuestas inmunes antivirales pueden ser incrementadas en un paciente infectado mediante la remoción de células T del paciente, la coestimulación de las células T in vivo con APCs pulsados por antígenos virales que expresan ya sea un péptido de la presente invención o bien juntos con una forma estimuladora de un péptido soluble de la presente invención y que reintroducen las células T activadas in vitro en el paciente. Otro método para incrementar las respuestas inmunes antivirales sería aislar células infectadas de un paciente, transfectarlas con un ácido nucleico que codifica la proteína de la presente invención de conformidad con lo descrito aquí de tal manera que las células expresen la totalidad o una parte de la proteína en su superficie, y reintroducir las células transfectadas en el paciente. Las células infectadas podrían suministrar la señal coestimuladora y por consiguiente activar células T in vivo. En otra aplicación, la regulación ascendente o el incremento de la función de antígeno (de preferencia función de antígeno de linfocito B) puede ser útil para inducir inmunidad contra tumor. Las células tumorales (por ejemplo, sarcoma, melanoma, linfoma, leucemia, neuroblastoma, carcinoma) , transfectadas con un ácido nucleico que codifica por lo menos un péptido de • la presente invención pueden ser administradas a un sujeto 5 para superar la tolerancia específica para tumor en el sujeto. Si se desea, la célula tumoral puede ser transfectada para expresar una combinación de péptidos. Por ejemplo, células tumorales obtenidas de un paciente pueden ser transfectadas ex vivo con un vector de expresión que dirige 10 la expresión de un péptido que tiene una actividad de tipo • B7-2 solo, o bien en combinación con un péptido que tiene una actividad de tipo B7-1 y/o una actividad de tipo B7-3. Las células tumorales transfectadas son devueltas al paciente para obtener la expresión de los péptidos en la superficie de 15 la célula transfectada. De manera alternativa, técnicas de terapia génica pueden emplearse para enfocarse hacia una célula tumoral para transfección in vivo. La presencia del péptido de la presente invención que tiene la actividad de un (os) antígeno (s) de linfocito B en la 20 superficie de la célula tumoral proporciona la señal de coestimulación necesaria a las células 1 para inducir una respuesta inmune mediada por célula T contra las células tumorales transfectadas. Además, células tumorales que no tienen las moléculas MHC de clase I o MHC de clase II, o bien 25 que no reexpresan cantidades suficientes de moléculas MHC de clase I o MHC de clase II, pueden ser transfectadas con ácido nucleico que codifica la totalidad o una parte de una proteína de cadena a de MHC de clase I (por ejemplo una porción truncada de dominio citoplásmico) y proteína de microglobulina ß2 o bien una proteína de cadena a de MHC de clase II y una proteína de cadena ß de MHC de clase II para expresar de esta forma proteínas MHC de clase I o MHC de clase II en la superficie de la célula. La expresión de MHC de clase I o de clase II apropiado en combinación con un péptido que tiene la actividad de un antígeno de linfocito B (por ejemplo B7-1, B7-2, B7-3) induce una respuesta inmune mediada por célula T contra la célula tumoral transfectada.
Opcionalmente, un gen que codifica un constructo de antisentido que bloquea la expresión de una proteína asociada con MHC de clase II, como por ejemplo la cadena invariante, puede también ser cotransfectado con un ADN que codifica un péptido que tiene la actividad de un antigeno de linfocito B para promover la presentación de antígenos asociados con tumor e inducir inmunidad específica contra tumor. Así, la inducción de una respuesta inmune mediada por células T en un sujeto humano puede ser suficiente para superar la tolerancia específica para tumor en el sujeto. La actividad de una proteína de la invención puede medirse, entre otros medios, a través de los siguientes métodos: Ensayos adecuados para la citotoxicidad de timocitos o *- - *—8 * esplenocitos incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Current Protocols in Immunology, (protocolos actuales en inmunología) , Editado por J.E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, W Strober, Pub. Green Publishing Associates and Wiley-Interscience (capítulo 3, in vitro assays for mouse lymphocyte function (ensayos in vitro para función de linfocitos de ratón) 3.1-3.19; capítulo 7, immunologic studies in Humans) (estudios inmunológicos en seres humanos); Herrmann et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2488-2492, 1981; Herrmann et al., J. Immunol. 128:1968- 1974, 1982; Handa et al., J. Immunol. 135:1564-1572, 1985; Takai et al., J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Takai et al., J. Immunol. 140:508-512, 1988; Herrmann et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2488-2492, 1981; Herrmann et al., J. Immunol. 128:1968-1974, 1982; Handa et al., J. Immunol. 135:1564-1572, 1985; Takai et al., J. Immunol. 137:3494-3500; 1986; Bowmanet al., J. Virology 61:1992-1998; Takai et al., J. Immunol. 140:508-512, 1998; Bertagnolli et al., Cellular Immunology 133:327-341, 1991; Brown et al., J. Immunol. 153:3079-3092, 1994. Ensayos para respuestas de inmunoglobulina dependiente de células T y cambio de isotipo (que identifican, entre otras cosas, proteínas que modulan respuestas de anticuerpo dependiente de células T y que afectan perfiles Thl/Th2) incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Maliszewski, J. Im unol. 144:3028-3022; 1990; y Assays for B cell function: in vitro antibody production, (ensayos para la función de células B: producción de anticuerpo in vitro) Mond, J.J. and Brunswick, M. In Current Protocols in 5 Immunology (protocolos actuales en inmunología) J.E. e.a. Coligan eds. volumen 1 páginas 3.8.1-3.8.16 John Wiley and Sons, Toronto, 1994. Ensayos de reacción de linfocitos mixtos (MLR) (que identifican, entre otras cosas, proteínas que generan 10 predominantemente respuestas Thl y CTL) incluyen, sin • limitación, los ensayos descritos en: Current Protocols in Immunology (protocolos actuales en inmunología) editado por J.E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, W Strober, Pub. Greene Publishing Associates and Wiley 15 Interscience (capítulo 3, in vitro assays for mouse limphocyte function (ensayos in vitro para función de linfocitos de ratón) 3.1-3.19; capítulo 7, immunologic studies in humans) (estudios inmunológicos en seres humanos) ; Takai et al., J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Takai et al., 20 J. Im unol. 140:508-512, 1988; Bertagnolli et al., J. Immunol. 149:3778-3783, 1992. Ensayos dependientes de células dendríticas (que identifican, entre otras cosas, proteínas expresadas por células dendríticas que activan células T no preparadas) , incluyen, 25 sin limitación, los ensayos descritos en: Guery et al., J. rr Im unol. 134:536-544, 1995; Inaba et al., Journal of Experimental Medicine 173:549-559, 1991; Macatonia et al., Journal of Immunology 154:5071-5079, 1995; Porgador et al., Journal of Experimental Medicine 182:255-260, 1995; Nair et al., Journal of Virology 67:4062-4069, 1993; Huang et al., Science 264:961-965, 1994; Macatonia et al., Journal of Experimental Medicine 169:1255-1264. 1989; Bhardwaj et al., Journal of Clinical Investigation 94:797-807, 1994; y Inaba et al., Journal of Experimental Medicine 172:631-640, 1990. Ensayos para supervivencia/apoptosis de linfocitos (que identifican, entre otras cosas, proteínas que evitan la apoptosis, después de la inducción de superantígeno y proteínas que regulan la homeostasis de lmfocitos) incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Darzynkiewicz et al., Cytometry 13:795-808, 1992; Gorvczyca et al., Leukemia 7:659-670, 1993; Gorczyca et al Cáncer Research 53:1945-1951, 1993; Itoh et al., Cell 66:233-243, 1991; Zachrchuk Journal of Immunology 145:4037-4045, 1990; Zamai et al. Cytometry 14:891-897, 1993, Gorczuca et al., International Journal of Oncology 1:639-648, 1992. Ensayos para proteínas que influencian las etapas iniciales de la participación y desarrollo de células T incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Antica et al., Blood 84:111-117, 1994; Fine et al., Cellular Immunology 155:111-122, 1994; Galy et al., Blood 85:2770-2778, 1995; Toki et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:7548-7551, 1991. Actividad de regulación de la hematopoyesis Una proteína de la presente invención puede ser útil para • regular la hematopoyesis y, por consiguiente, para el 5 tratamiento de deficiencia de células mieloides o linfoides. Hasta una actividad biológica marginal de apoyo a las células formadoras de colonias o líneas de células dependientes de factores indica la participación en la regulación de la hematopoyesis, por ejemplo, en el soporte del crecimiento y 10 proliferación de células progenitoras de eritroides solas o • en combinación con otras citocinas, indicando por consiguiente utilidad, por ejemplo, en el tratamiento de varias anemias o bien para su uso en combinación con irradiación/quimioterapia para estimular la producción de 15 precursores de eritroides y/o células eritroides; para soportar el crecimiento y la proliferación de células mieloides tales como granulocitos y monocitos/macrófagos (es decir, actividad CSF tradicional) útiles, por ejemplo, con relación a quimioterapia para prevenir o tratar la 20 mielosupresión subsecuente; para apoyar el crecimiento y la proliferación de megacariocitos y por consiguiente de plaquetas permitiendo así la prevención o tratamiento de varios trastornos plaquetarios tales como trombocitopenia, y generalmente para su uso en lugar de trasfusiones de 25 plaquetas o como complemento a las transfusiones de plaquetas; y/o para soportar el crecimiento y proliferación de células madres hematopoyéticas que son capaces de madurar en cualesquiera de las células hematopoyéticas mencionadas • arriba y por consiguiente son útiles para la terapia de 5 varios trastornos de células madres (tales como los trastornos habitualmente tratados con trasplantes, incluyendo, sin limitación, anemia aplásica y hemoglobinuria nocturna paroxísmica) , así como en la repoblación del compartimiento de células madres después de 10 irradiación/quimioterapia, ya sea in vivo o ex vivo (es • decir, en combinación con transplante de médula ósea o bien con transplante de células progenitoras periféricas (homologas o heterólogas) ) como células normales o genéticamente manipuladas para terapia génica. 15 La actividad de una proteína de la invención puede, entre otros medios, medirse a través de los siguientes métodos: ensayos adecuados para la proliferación y diferenciación de • varias líneas hematopoyéticas se mencionan arriba. Ensayos para diferenciación de células madres embriónicas 20 (que identifican, entre otras cosas, proteínas que influencian la hematopoyesis de diferenciación embriónica) , incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Johansson et al. Cellular Biology 15:141-151, 1995; Séller et al., Molecular and Cellular Biology 13:473-486, 1993; McClanahan 25 et al., Blood 81;2903-2915, 1993.
Ensayos para supervivencia y diferenciación de células madres (que identifican, entre otras, proteínas que regulan la linfo-hematopoyesis) , incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: (ensayos de formación de colonias en 5 metilcelulosa), Freshney, M.G. In Cul ture of Hema topoietic Cells . (cultivo de células hematopoyéticas) R.I. Freshney, et al., vol. páginas 265-268, Wiley-Liss, Inc. New York, NY. 1994; Hirayama et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5907- 5911, 1992; Primitive hematopoietic colony forming cells with j 10 high proliferative potential (células formadoras de colonias hematopoyéticas primitivas con alto potencial proliferativo) , McNiece, I.K., and Briddell, R.A., en Cul ture of Hematopoietic Cells . (cultivo de células hematopoyéticas) R.I. Freshney, et al. eds. vol. páginas 23-39, Wiley-Liss, 15 Inc., New York, NY. 1994; Neben et al., Experimental Hematology (hematología experimental) 22:353-359, 1994; Cobblestone área forming cell assay, (ensayo de células • formadoras de áreas de tipo adoquín) Ploemacher, R.E. en Culture of Hema topoi etic Cells . (cultivo de células 20 hematopoyéticas) R.I. Freshney, et al. eds. vol. páginas 1- 21, Wiley-Liss, Inc., New York, NY. 1994; Long term bone marrow cultures in the presence of stromal cells, (cultivos de médula ósea de largo plazo en presencia de células estromales), Spooncer, E., Dexter, M. and Alien, T. en 25 Culture of Hematopoietic Cells . (cultivo de células hematopoyéticas) R.I. Freshney et al. eds. Vol. páginas 163- 179, Wiley-Liss, Inc. New York, NY. 1994; Long term culture initiating cell assay, (ensayo de cultivo de largo plazo de células iniciadoras) Sutherland, H.J. en Cul ture of 5 Hematopoietic Cell s . (cultivo de células hematopoyéticas) R.I. Freshney, et al. eds. vol. páginas 139-162, Wiley-Liss, Inc., New York, NY. 1994. Actividad de crecimiento tisular Una proteína de la presente invención puede también tener 10 utilidad en composiciones utilizadas para el crecimiento o la • regeneración de tejido óseo, cartílago, tendón, ligamento y/o nervio, así como para la curación de heridas y reparación y reemplazo de tejido, y en el tratamiento de quemaduras, cortaduras y úlceras. 15 Una proteina de la presente invención, que induce el crecimiento de cartílago y/o hueso en circunstancias en las cuales el hueso normalmente no se forma, tiene aplicación en • la curación de fracturas óseas y daño al cartílago o defectos en seres humanos y otros animales. Dicha preparación que 20 emplea una proteína de la presente invención puede tener uso profiláctico en reducción de fracturas cerradas asi como reducción de fracturas abiertas y también para mejorar la fijación de articulaciones artificiales. La formación ósea de novo inducida por una gente osteogénico contribuye a la 25 reparación de defectos craneofaciales inducidos por resección oncológica, trauma congénitos o inducidos y también es útil en intervención quirúrgicas plásticas cosméticas. Una proteína de esta invención puede también utilizarse en el tratamiento de enfermedad periodontal y en otros procesos de reparación dental. Tales agentes pueden proporcionar un entorno para atraer células que forman huesos, estimular el crecimiento de las células formadoras de huesos o inducir la diferenciación de progenitores de células formadoras de huesos. Una proteína de la presente invención puede también ser útil en el tratamiento de la osteoporosis o osteoartritis, como por ejemplo a través de la estimulación de reparación de hueso y/o cartílago o bien bloqueando inflamación o procesos de destrucción de tejido (actividad colagenasa, actividad osteoclasta, etc) mediadas por procesos inflamatorios. Otra categoría de actividad de regeneración de tejido que puede ser atribuida a la proteína de la presente invención es la formación de tendón/ligamento. Una proteína de la presente invención, que induce la formación de tejido de tipo tendón/ligamento o bien otros tipos de tejido en circunstancias en las cuales dicho tejido no es formado normalmente, tiene aplicación en la curación de desgarres de tendones o ligamentos, deformidades y otros defectos de tendón o ligamento en seres humanos y otros animales. Dicha preparación que emplea una proteína que induce la formación de tejido de tendón/ligamento puede tener uso profiláctico para prevenir daños a tejido de tendón o ligamento, así como uso en la fijación mejorada de tendón o ligamento a huesos u • otros tejidos, y para reparar defectos que afectan el tejido 5 del tendón o ligamento. La formación de novo de tejido de tipo tendón/ligamento inducida por una composición de la presente invención contribuye a la reparación de trauma congénito, inducido, o bien otros defectos de tendón o ligamento de otro origen, y es también útil en cirugía 10 plástica cosmética para la fijación o reparación de tendemos • o ligamentos. Las composiciones de la presente invención pueden ofrecer un entorno para atraer células formadoras de tendón o ligamento, estimular el crecimiento de células formadoras de tendón o ligamento, inducir la diferenciación 15 de progenitores de células formadoras de tendón o ligamento, o bien inducir el crecimiento de células de tendón/ligamento o progenitores ex vivo para retornar in vivo para efectuar reparación de tejido. Las composiciones de la presente invención pueden también ser útiles en el tratamiento de 20 tendinitis, síndrome de túnel de carpió y otros defectos de tendón o ligamento. Las composiciones pueden también incluir una matriz apropiada y/o agente de secuestro como vehículo como se sabe en la técnica. La proteína de la presente invención puede también ser útil 25 para la proliferación de células neurales y para la »*- ? ttKíMAm*?At regeneración de tejido nervioso y cerebral, es decir, para el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central y periférico y neuropatías, así como trastornos mecánicos y traumáticos que involucran la degeneración, muerte o trauma de células neurales o tejido nervioso. Más específicamente, una proteína puede ser empleada en el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso periférico, como por ejemplo lesión a nervios periféricos, neuropatía periférica y neuropatías localizadas, así como enfermedades del sistema nervioso central tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntir.gton, esclerosis lateral amiotrófica y síndrome de Shy-Drager. Condiciones adicionales que pueden ser tratadas de ccr.formidad con la presente invención incluyen trastornos mecánicos y traumáticos tales como trastornos de la médula espinal, trauma de la cabeza y enfermedades cerebrcvasculares tales como apoplejía. Neuropatías periféricas que resultan de quimioterapia o bien otras terapias médicas pueden también ser tratadas utilizando una proteína ie la presente invención. Proteínas de la presente invención pueden también ser útiles para promover un cierre mejor o más rápido de heridas que no sanan, incluyendo, sin limitación, úlceras de presión, úlceras asociadas con insuficiencia vascular, heridas quirúrgicas y traumáticas, y similares.
Se espera que una proteína de la presente invención pueda presentar también actividad para la generación o regeneración de otros tejidos como por ejemplo órganos (incluyendo, por ejemplo, páncreas, hígado, intestino, riñon, piel, endotelio), músculo (liso, esqueletal o cardiaco) y tejido vascular (incluyendo endotelio vascular) o bien para promover el crecimiento de células que comprenden tales tejidos. Parte de los efectos deseados puede ser por inhibición o modulación de lesión fibrótica para permitir la regeneración de tejido normal. Una proteína de la presente invención puede también presentar una actividad angiogénica. Una proteína de la presente invención puede también ser útil para la protección de los intestinos o bien para la regeneración y tratamiento de fibrosis pulmonar o hepática, lesión de reperfusión en varios tejidos, y condiciones que resultan de daño sistémico a la citocina. Una proteína de la presente invención puede también ser útil para promover o inhibir la diferenciación de tejidos descritos arriba a partir de tejidos o células precursoras; o bien para inhibir el crecimiento de los tejidos descritos arriba. La actividad de una proteína de la invención puede, entre otras maneras, medirse a través de los siguientes métodos: ensayos para la actividad de generación de tejido incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Publicación de Patente Internacional No. W095/16035 (hueso, cartílago, tendón); Publicación de Patente Internacional No. W095 /05846 (nervio, neuronal); Publicación de Patente Internacional No.
WO91/07491 (piel, endotelio) . Ensayos para actividad de curación de herida, incluyen sin limitación, os ensayos descritos en Winter, Ep dermal Wound Healing (curación de heridas epidérmicas;, páginas 71-112 (Maibach, Hl y Rovee, DT, eds.). Year Book Medical Publishers, Inc., Chicago, de conformidad con lo modificado por Eaglstein y Mertz, J. Invest. Dermatol. 71:382-84 (1978). Actividad de activina/inhibina Una proteína de la presente invención puede también presentar actividades relacionadas con activina o inhibina. Las inhibinas se caracterizan por su capacidad de inhibir la liberación de hormona estimuladora de folículos (FSH), mientras que las activinas se caracterizar, por su capacidad de estimulación de la liberación de la hormona estimuladora de folículos (FSH) . Así, una proteína de la presente invención, sola o en heterodímeros con un miembro de la familia de inhibina a, puede ser útil como agente contraceptivo con base en la capacidad de las inhibinas para disminuir la fertilidad en mamíferos hembras y disminuir la espermatogénesis en mamíferos machos. La administración de cantidades suficientes de otras inhibinae puede inducir la infertilidad en estos mamíferos. Alternativamente, la proteína de la presente invención, como homodímero o como heterodímero, con otras subunidades de proteína del grupo de inhibina-ß, puede ser útil como agente terapéutico que induce la fertilidad, con base en la capacidad de moléculas de activina de estimular la liberación de FSH a partir de células de la glándula pituitaria anterior. Véase, por ejemplo, Patente Norteamericana No. 4,798,885. Una proteína de la presente invención puede también ser útil para adelantar el inicio de la fertilidad en mamíferos sexualmente inmaduros, así como para incrementar el desempeño reproductivo de animales domésticos tales como vacas, ovejas y cerdas. La actividad de una proteína de la presente invención, puede, entre otras cosas, medirse a través de los siguientes métodos: ensayos para actividad activina/inhibina incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Vale et al., Endocrinology 91:562-572, 1972; Ling et al., Nature 321:779-782, 1986; Vale et al., Nature 321:776-779, 1986; Manson et al., Nature 318:659-663, 1985; Forage et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:3091-3095, 1986. Actividad quimiotáctica/quimiocinética Una proteína de la presente invención puede tener una actividad quimiotáctica o quimiocmética (por ejemplo, actuar como quimiocina) para células de mamífero, incluyendo, por ejemplo, monocitos, fibroblastos, neutrofilos, células T, células de mástil, eosinófilos, células epiteliales y/o endoteliales. Proteínas quimiotácticas y quimiocinéticas pueden emplearse para movilizar o atraer una población de células deseadas hacia un sitio de acción deseado. Las proteínas quimiotácticas o quimiocinéticas proporcionan ventajas particulares en el tratamiento de heridas y otros traumas a los tejidos, así como en el tratamiento de infecciones localizadas. Por ejemplo, la atracción de linfocitos, monocitos o neutrofilos hacia tumores o sitios de infección puede resultar en respuestas inmunes mejoradas contra el tumor o agente infeccioso. Una proteína o péptido tiene una actividad quimiotáctica para una población de células particulares si puede estimular, directa o indirectamente, la orientación dirigida o el movimiento de dicha población de células. De preferencia, la proteína o péptido tiene la capacidad de estimular directamente el movimiento dirigido de células. Si una proteína particular tiene una actividad quimiotáctica para una población de células puede ser determinado fácilmente mediante el empleo de dicha proteína o péptido en cualquier ensayo conocido para quimiotaxis celular. La actividad de una proteína de la invención puede, entre otros medios, ser medida a través de los siguientes métodos: Ensayos para actividad quimiotáctica (que identifican proteínas que inducen o previenen la quiíaiotaxis) consisten de ensayos que miden la capacidad de una proteína para inducir la migración de células a través de una membrana, así como la capacidad de una proteína para inducir la adherencia de una población de células sobre otra población de células. Ensayos adecuados para movimiento y adherencia incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Current Protocols in Immunology, (protocolos actuales en inmunología) editado por J.E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, W. Strober, Pub. Greene Publishing Associates y Wiley-Interscience (capítulo 6.12, Measurement of alpha and beta Chemokines 6.12.1-6.12.28; (medición de quimiocmas alfa y beta); Taub et al. J. Clin. Invest. 95:1370-1376, 1995; Lind et al. APMIS 103:140-146, 19 95; Muller et al Eur. J. Immunol. 25: 1744-1748; Griber et al. J. of Immunol. 152:5860-5867, 1994; Johnston et al. J. of Immunol. 153:1762-1768, 1994. Actividad hemostática y trombolítica Una proteína de la presente invención puede también presentar una actividad hemostática o trombolítica. Como resultado, se espera que dicha proteína sea útil en el tratamiento de varios trastornos de la coagulación (incluyendo trastornos hereditarios tales como hemofilias) o bien para incrementar la coagulación y otros eventos hemostáticos en el tratamiento de heridas que resultan de trauma, intervenciones quirúrgicas o bien de otras causas. Una proteína .de la invención puede ser útil para disolver o inhibir la formación de trombosis y para el tratamiento y la prevención de condiciones que resultan de las mismas (como por ejemplo infarto de vasos 5 cardiacos y del sistema nervioso central (por ejemplo, apoplejía) ) . La actividad de una proteína de la invención puede, entre otros medios, medirse a través de los siguientes métodos: ensayo para actividad hemostática y trombolítica incluyen, 10 sin limitación, los ensayos descritos en: Linet et al., J.
• Clin. Pharmacol. 26:131-140, 1986; Burdick et al., Thrombosis Res. 45:413-419, 1987; Humphrey et al., Fibrinolysis 5:71-79 (1991); Shaub, Prostaglandins 35:467-474, 1988. Actividad receptor/ligando 15 Una proteína de la presente invención puede también demostrar actividad como receptores, ligandos de receptor o inhibidores o agonistas de interacciones receptor/ligando. Ejemplos de • tales receptores y ligandos incluyen, sin limitación, receptores de citocina y sus ligandos, receptor quinasas y 20 sus ligandos, receptor fosfatasas y sus ligandos, receptores involucrados en interacciones célula-célula y sus ligandos (incluyendo, sin limitación, moléculas de adherencia celular (tales come selectinas, integrinas y sus ligandos), y pares receptor/ligando involucrados en la presentación de 25 antígenos, reconocimiento de antigenos y desarrollo de respuestas inmunes celulares y humorales) . Receptores y ligandos son también útiles para tamizar inhibidores de moléculas pequeñas o péptidos potenciales de la interacción receptor/ligando relevante. Una proteína de la presente 5 invención (incluyendo, sin limitación, fragmentos de receptores y ligandos) puede en sí ser útil como inhibidor de interacciones receptor/ligando. La actividad de una proteína de la invención puede, entre otros medios, medirse a través de los siguientes métodos: 10 ensayos adecuados para la actividad receptor-ligando • incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en Current Protocols in Immunology (protocolos actuales en inmunología) , editado por J.E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, W. Strober, Pub. Greene Publishing Associates 15 and Wiley-Interscience (capítulo 7.28, Measurement of Cellular Adhesión under static conditions (medición de adherencia celular en condiciones estáticas) 7.28.1-7.28.22), Takai et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:6864-6868, 1987; Bierer et al., J. Exp. Med. 168:1145-1156, 19 88; Rosenstein 20 et al., J. Exp. Med. 169:149-160, 1989; Stoltenborg et al., J. Immunol. Methods 175:59-68, 1994; Stitt et al., Cell 80:661-670, 1995. Actividad Antiinflamatoria Las proteínas de la presente invención pueden también 25 presentar una actividad antiinflamatoria. La actividad antiinflamatoria puede obtenerse proporcionando un estímulo en células involucradas en la respuesta inflamatoria mediante la inhibición de la promoción de interacciones células-célula • (por ejemplo adhesión celular), mediante la inhibición de la 5 quimiotaxis de células involucradas en el proceso inflamatorio inhibiendo o promoviendo la extravasación celular o bien estimulando o suprimiendo la producción de otros factores que inhiben o promueven más directamente una respuesta inflamatoria. Proteínas que presentan tales 10 actividades pueden emplearse para tratar condiciones inflamatorias (incluyendo condiciones crónicas o agudas), incluyendo sin limitación, una inflamación asociada con infección (choque séptico, sepsis, o síndrome de respuesta infamatoria sistémico (SIRS) ) , lesión de ísquemia- 15 reperfusión, letalidad de endotoxina, artritis, rechazo hiperagudo mediado por complemento, nefritis, lesión pulmonar inducida por citocinas o quimiocinas, la enfermedad intestinal inflamatoria, enfermedad de Crohn, o bien como resultado de la sobreproducción de citocinas tales como TNF o 20 IL-1. proteínas de la invención pueden también ser útiles para tratar la anafilaxis y la hipersensibilidad a una sustancia o material antigénico. Actividad de supresor de invasión de Cadherin/Tumor Las caderinas son moléculas de adhesión que dependen del 25 calcio que parecen desempeñar funciones importantes durante ..n-lto.. i. ^», el desarrollo, especialmente para definir los tipos específicos de células. La pérdida o alteración de la expresión normal de caderina pueden provocar cambios en las • propiedades de adhesión celular relacionadas con crecimiento 5 celular y metástasis. El mal funcionamiento de la caderina está también implicado en otras enfermedades humanas tales como pénfigo vulgar y pénfigo foliáceo (enfermedades cutáneas de ampollas autoinmunes) enfermedad de Crohn y ciertas anormalidades del desarrollo. 10 La superfamilia de las caderinas incluye más de 40 miembros, cada uno con un patrón de expresión distinto. Todos los miembros de la superfamilia tienen en común repeticiones extracelulares conservadas (dominios de caderina) , pero se encuentran diferencias estructurales de otras partes de la 15 molécula. Los dominios de caderina se uner. con el calcio para formar su estructura terciaria y por consiguiente se requiere de calcio para medir su presión. Solamente pocos aminoácidos en el primer dominio de caderina proporcionan la base de la adhesión homofílica; una modificación de este sitio de 20 reconocimiento puede cambiar la especificidad de una caderina de tal manera que en vez de reconocer solamente si misma, la molécula mutante puede unirse también con una caderina diferente. Además, ciertas caderinas se unen heterofílicamente con otras caderinas. 25 La E-caderina, un miembro de la Superfamilia de las caderinas, es expresada en tipos de células epiteliales. Patológicamente, si se pierde la expresión de E-caderina en un tumor, las células malignas se vuelven inversivas y el • cáncer produce metástasis. La transfección de líneas de 5 células cancerosas con polinucleótidos que expresan E- caderina a revertido cambios asociados con el cáncer, regresando las formas alterada de células a su forma normal, restaurando la capacidad de adherencia de las células entre ellas, y sobre su sustrato, disminuyendo la velocidad de ^h 10 crecimiento celular, y reduciendo drásticamente el crecimiento celular independiente del anclaje. Así, la reintroducción de expresión de E-caderina revierte los carcinomas a una etapa menos avanzada. Es probable que otras caderinas tengan la misma función supresora de invasión en 15 carcinomas derivados de otros tipos tisulares. Por consiguiente, proteínas de la presente invención con una actividad caderina y polinucleótidos de la presente invención que codifican tales proteínas, pueden utilizarse para tratar el cáncer. La introducción de tales proteínas o 20 polinucleótidos en células cancerosas pueden reducir o eliminar los cambios cancerosos observados en otras células proporcionando una expresión normal de caderinas. Se ha mostrado que células cancerosas expresan caderinas de un tipo tisular diferente que su tipo de origen, permitiendo 25 así que estas células invadan y formen metástasis en un tejido diferente en el cuerpo. Las proteínas de la presente invención con actividad caderina, y los polinucleótidos de la presente invención que codifican tales proteínas, pueden ser sustituidos en estas células por las caderinas expresadas inapropiadamente, restaurando las propiedades adhesivas de células normales y reduciendo o eliminando la tendencia de las células a formar metástasis. Además, proteínas de la presente invención con actividad caderina, y polinucleótidos de la presente invención que codifican tales proteínas pueden emplearse para generar anticuerpos que reconocen y unen con las caderinas. Tales anticuerpos pueden ser utilizados para bloquear la adhesión de caderinas de células tumorales expresadas inapropiadamente, evitando que las células formen un tumor en otra parte. Dicho anticuerpo anti-caderina puede también utilizarse como marcador para el grado, tipo patológico, el pronóstico de un cáncer, es decir, entre mayor este el avance del cáncer, menor es la expresión de caderina, y esta disminución en cuanto a la expresión de caderina puede ser detectada mediante el uso de un anticuerpo de enlace con caderina. Fragmentos de proteínas de la presente invención con actividad caderina, de preferencia un polipéptido que comprende un decapéptido del sitio de reconocimiento de caderina y polinucleótidos de la presente invención que codifican tales fragmentos de proteina, pueden también emplearse para bloquear la función de caderina mediante el enlace con caderinas y evitando la unión en formas que producen efectos indeseables. Además, fragmentos de proteínas de la presente invención con actividad caderina, de preferencia fragmentos dé caderina solubles truncados, que son estables en la circulación de pacientes con cáncer, y polinucleótidos que codifican tales fragmentos de proteina, pueden emplearse para trastornar la adhesión célula-célula. Ensayos para la actividad de supresor de invasión y adhesión de caderina, incluyen sin limitación, los ensayos descritos en Hotsh et al. J. Biol Chem 270 (32): 18809-18817, 1995; Miyaki et al. Oncogene 11: 2547-2552, 1995; Ozawa et al. Cell 63: 1033-1038, 1990. Actividad de Inhibición de Tumor Además de las actividades descritas arriba para el tratamiento inmunológico o la prevención de tumores, una proteina de la presente invención puede presentar otras actividades antitumorales. Una proteina puede inhibir directamente o indirectamente el crecimiento de un tumor como por ejemplo una citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (DACC) ) . Una proteína puede presentar su actividad de inhibición tumoral actuando sobre tejido tumoral o bien tejido de precursor de tumor, mediante la inhibición de la formación de tejidos necesarios para soportar el '-* -rtJ'"-f crecimiento tumoral (como por ejemplo mediante la inhibición de la angiogénesis) provocando la producción de otros factores, agentes o tipos de células que inhiben el crecimiento tumoral o bien mediante la supresión eliminación 5 o inhibición de factores, agentes o tipos de células que promueven el crecimiento tumoral. Otras actividades Una proteína de la invención puede también presentar una o varias de las siguientes actividades adicionales o efectos 10 adicionales: inhibir el crecimiento, infección o función o matar agentes infecciosos, incluyendo, sin limitación, bacterias, virus hongos, y otros parásitos; afectar características corporales (suprimiendo o incrementado), incluyendo, sin limitación, estatura, color de cabello, color 15 de ojos, piel, proporción entre tejido graso y tejido magro o bien otra pigmentación tisular, o bien tamaño o forma de órgano o partes del cuerpo (como por ejemplo aumento o disminución de mama, cambio en cuanto a forma o tamaño de huesos) ; afectar biorritmos o ciclos o ritmos caricádicos; 20 afectar la fertibilidad de machos o hembras; afectar el metabolismo, catabolismo, anabolismo, procesamiento, utilización, almacenamiento o eliminación de grasa, lípido, proteína carbohidratos, vitaminas, minerales, cofactores de la dieta así como otros factores o componente (s) de la 25 nutrición, afectar características de comportamiento, . incluyendo, sin limitación, apetito, brillo, estrés, conocimiento (incluyendo trastornos del conocimiento), depresión (incluyendo trastornos depresivos) así como comportamiento violentos; proporcionar efectos analgésicos o bien otros efectos reductores del dolor; promover la diferenciación y crecimiento de células madres embriónicas en linajes otros que linajes hematopoyéticos, actividad hormonal o endocrina; en el caso de enzimas, corregir deficiencias de la encima y tratar enfermedades relacionadas con las deficiencias; tratamiento de trastornos hiperproliferativos (por ejemplo psoriasis) ; actividad de tipo inmunoglobulina (como por ejemplo la capacidad de enlazarse con antígenos o complementos) ; y la capacidad de actuar como antígeno en una composición de vacuna para elevar una respuesta inmune contra dicha proteína o bien otro material o entidad que reacciona de manera cruzada. Administración y dosificación Una proteína de la presente invención (cualesquiera que sea la fuente de donde se deriva, incluyendo sin limitación fuente recombinantes y fuentes no recombinantes) puede emplearse en una composición farmacéutica cuando se combina con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Dicha composición puede contener también (además de proteína y un vehículo) diluyentes, rellenadores, sales, amortiguadores, estabilizadores, solubilizadores, y otros materiales bien ^^ conocidos en la técnica. El término "farmacéuticamente aceptable" significa un material no tóxico que no interfiere con la efectividad de la actividad biológica del (de los) ingrediente (s) activo (s) . Las características del vehículo dependerá de la vía de administración. La composición farmacéutica de la invención puede contener también citocinas, linfocinas o bien otros factores hematopoyéticos tales como M-CSF, GM-CSF, TNF, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IFN, TNFO, TNF1, TNF2, G-CSF, Meg-CSF, trombopoyetina, factor de células madres y eritropoyetina. La composición farmacéutica puede contener además otros factores que incrementan la actividad de la proteína o bien complementan su actividad o uso en tratamiento. Tales factores y/o agentes adicionales pueden ser incluidos en la composición farmacéutica para producir un efecto sinérgico con proteína de la invención o bien para minimizar los efectos colaterales. A la inversa, una proteína de la presente invención puede estar incluida en formulaciones de la citosina, linfocina, otro factor hematopoyético, factor trombolítico o antitrombótico o bien agente antiinflamatorio particular con el objeto de minimizar los efectos colaterales de la citosina, linfocina, otro factor hematopoyético, factor trombolito o antitrombótico o agente antiinflamatorio. Una proteína de la presente invención puede ser activa entre -^-*^—"-^- . , multímeros, (por ejemplo, heterodímeros o bien homodímeros) o bien formar complejos consigo misma o bien con otras proteínas. Como resultado, composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden comprender una proteína de la presente invención en dicha fórmula ultimérica o en forma de complejo. La composición farmacéutica de la presente invención puede estar en forma de un compleja de la(s) proteína (s) de la presente invención junto con antígenos de proteína o péptido. El antígeno de proteína y/o péptido suministrará una señal estimuladora tanto a linfocitos B como a linfocitos T. Los linfocitos B responderán al antígeno a través de su receptor de inmunoglobulina superficial. Los linfocitos T responderán al antígeno a través del receptor de células T (TCR) después de la presentación del antígeno por proteínas MHC. Proteínas MHC y proteínas estructuralmente relacionadas incluyendo las codificadas por genes MHC de clase I y de clase II en células huéspedes servirán para presentar el (los) antígeno (s) de péptido a linfocitos T. Los componentes de antígeno podrían también suministrarse como complejo MHC-péptido purificados solos o bien con moléculas coestimuladoras que pueden señalar directamente las células T. Alternativamente, anticuerpos capaces de unir la inmunoglobulina superficial o bien otras moléculas en células B así como anticuerpos capaces de unir el TCR y otras moléculas en células T pueden ser combinados -*-*- ----'- | ?M ^ ll?IS¡¿i? tßáamií ui^itt^^M con la composición farmacéutica de la presente invención. La composición farmacéutica puede estar en forma de un liposoma en donde una proteina de la presente invención es • combinada, además de otros vehículos farmacéuticamente 5 aceptables, con agentes anfipáticos tales como lípidos que existen en forma agregada como micelas, monocapas insolubles, cristales líquidos, o bien capas lamínales en solución acuosa, lípidos adecuados para una formación liposomal, incluyen, sin limitación, monoglicéridos, diglicéridos, | k 10 sulfatidos, lisolecitina, fosfolípidos, saponina, ácidos biliares, y similares, la preparación de tales formulaciones liposomales está al alcance de la persona con ciertos conocimientos en la técnica y se divulga, por ejemplo, en la patente norteamericana número 4,235,871; patente 15 norteamericana número 4,501,728; patente norteamericana número 4,837,028; y patente norteamericana número 4,737,323, todas las cuales se incorporan aquí por referencia. • Como se emplea aquí, el término "cantidad terapéuticamente efectiva" indica la cantidad total de cada componente activo 20 de la composición farmacéutica o método que es suficiente para proporcionar a un paciente un beneficio significativo, es decir, tratamiento, curación, prevención o mejora de la condición médica relevante, o bien un incremento en cuanto al régimen de tratamiento, curación, prevención o mejora de 25 tales condiciones. Cuando se aplica a un ingrediente activo "* •*- -••*-* - - - i aüi individual, administrado solo, el término se refiere a este ingrediente solo. Cuando se aplica una combinación, el término se refiere a cantidades combinadas de los ingrediente activos que resultan en el efecto terapéutico, ya sea administrado en combinación, serie, o de manera simultánea. En la práctica en el método de tratamiento o uso de la presente invención, una cantidad terapéuticamente efectiva de proteína de la presente invención se administra a un mamífero que tiene una condición a tratar. Una proteína de la presente invención puede ser administrada de conformidad con el método de la invención ya sea sola o bien en combinación con otras terapias tales como tratamientos que emplean citocinas, linfocinas o bien otros factores hamatopoyéticos, cuando se coadministran con una o varias citocinas, linfocinas o bien otros factores hematopoyéticos, una proteína de la presente invención puede ser administrada ya sea simultáneamente con la(s) citosina (s) linfocina (s) , otro(s) factor (es) hematopoyético (s) factores tromboliticos o antitrombóticos, o secuencialmente. Si se administra secuencialmente, el médico decidirá en cuanto a la secuencia apropiada de administración de proteína de la presente invención con citosina (s), linfocina (s) otro(s) factor (es) hematopoyético (s) factores trombolíticos o antitrombóticos. La administración de proteína de la presente invención empleada en la composición farmacéutica o bien para practicar el método de la presente invención puede efectuarse en varias formas convencionales tales como ingesta oral, inhalación, aplicación tópica o inyección cutánea, subcutánea, • intraperitoneal, parenteral o intravenosa. Se prefiere la 5 administración intravenosa al paciente. Cuando una cantidad terapéutica efectiva de proteína de la presente invención es administrada oralmente, la proteína de la presente invención tendrá la forma de una tableta, cápsula, polvo, solución o elixir. Cuando se administra en • 10 forma de tableta, la composición farmacéutica de la presente invención puede contener además un vehículo sólido como por ejemplo gelatina o un adyuvante. La tableta, cápsula y polvo contienen de aproximadamente 5 a 97% de proteína de la presente invención, y de preferencia de aproximadamente 25 a 15 90% de proteína de la presente invención. Cuando se administra en forma liquida, un vehículo líquido, como por ejemplo agua, petróleo, aceite de origen animal vegetal tales como aceite de cacahuate, aceite mineral, aceite de soya o bien aceite de ajonjolí, o bien aceites sintéticos pueden 20 agregarse. La forma líquida de la composición farmacéutica puede contener además una solución salina fisiológica dextrosa o bien otra solución de sacárido o glicoles tales como etilenglicol, propilenglicol, o polietilenglicol. Cuando se administra en forma líquida, la composición farmacéutica 25 contiene de aproximadamente 0.5 a 90% de la proteína de la presente invención, y de preferencia de aproximadamente 1 a 50% de proteína de la presente invención. Cuando se administra una cantidad terapéuticamente efectiva de proteína de la presente invención, por inyección 5 intravenosa subcutánea o cutánea, una proteína de la presente invención estará en forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable, sin pirógenos. La preparación de dichas solución de proteína parenteralmente aceptables, tomando en cuenta el pH, y isotonicidad, estabilidad, y f 10 similares, se encuentra dentro del alcance de una persona con conocimientos normales en la materia. Una composición farmacéutica preferida para inyección intravenosa, cutánea o subcutánea, debe contener, además de la proteína de la presente invención, un vehículo isotónico como por ejemplo 15 inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de dextrosa, inyección de dextrosa y cloruro de sodio, inyección de Ringer lactada, o bien otro vehículo como se sabe en la técnica. La composición farmacéutica de la presente invención puede contener también estabilizadores, 20 conservadores, amortiguadores, antioxidantes y otros aditivos conocidos por parte de los expertos en la materia. La cantidad de proteína de la presente invención en la composición farmacéutica de la presente invención dependerá de la naturaleza y severidad de la condición en tratamiento, 25 y de la naturaleza de tratamiento previos a los cuales el paciente fue sometido. Finalmente, el médico decidirá la cantidad de proteína de la presente invención con la cual tratar cada paciente individual. Inicialmente, el médico administrará dosis bajas de la proteína de la presente invención y observará la respuesta del paciente. Dosis más grandes de proteína de la presente invención pueden ser administradas hasta obtener el efecto terapéutico óptimo para el paciente, y en ese momento la dosificación ya no es incrementada adicionalmente. Se contempla que varias composiciones farmacéuticas utilizadas para practicar el método de la presente invención deben contener de aproximadamente 0.01 micro g a aproximadamente 100 mg (de preferencia de aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 100 mg, con mayor preferencia de aproximadamente 01 en micro g a aproximadamente 1 mg) de proteína de la presente invención por kg de peso corporal. La duración de la terapia intravenosa utilizando la composición farmacéutica de la presente invención varía según la severidad de la enfermedad que se está tratando y según la condición y la respuesta ideosincrática potencial de cada paciente individual. Se contempla que la duración de cada aplicación de la proteina de la presente invención se encuentre dentro de un rango de 12 a 24 horas de administración intravenosa continua. Finalmente, el médico decidirá la duración apropiada de la terapia intravenosa ^^ gg¿ HßiÉSaaflMi|flaM|É|M| utilizando la composición farmacéutica de la presente invención. Una proteína de la presente invención puede también emplearse para inmunizar animales con el objeto de obtener anticuerpos policlonales y monoclonales que reaccionan específicamente con la proteína. Como se emplea aquí, el término "anticuerpo" incluye, sin limitación, un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo de cadena única, un anticuerpo injertado con CDR, un anticuerpo humanizado, o bien fragmentos del mismo que se unen con la proteína indicada. Dicho término incluye también otras especies derivadas de un anticuerpo o secuencia de anticuerpo que puede unirse con la proteína indicada. Anticuerpos para una proteína particular pueden ser producidos por métodos bien conocidos por parte de los expertos en la materia. Por ejemplo, anticuerpo monoclonales pueden ser producidos por medio de la generación de hibridomas que producen anticuerpos de conformidad con métodos conocidos (véase, por ejemplo, Goding, 1983, Monoclonal antibodies: principies and practice (anticuerpos monoclonales: principios y practica) Press Inc., New York; y Yokoyama, 1992, "Production of Monoclonal Antibodies" (producción de anticuerpos monoclonales) en Current Protocols in Immunology (protocolos actuales en inmunología) unidad 2.5 Greene Publishing Assoc. And John Wiley & Sons) . Sueros fctÉMÜurá kWlMkUl MMM— nmm ß?t?á ?t im *... policlonales y anticuerpos policlonales pueden ser producidos mediante la inoculación de un sujeto mamífero con la proteína relevante o con fragmentos de la misma de conformidad con métodos conocidos. Fragmentos de anticuerpos, receptores u otros péptidos reactivos pueden ser producidos a partir de los anticuerpos correspondientes por disociación de los fragmentos deseados y recolección de los fragmentos deseados de conformidad con métodos conocidos (véase, por ejemplo Goding, supr; and Andrew et al., 1992 "Fragmentation of Immunoglobulins" (Fragmentación de Inmunoglobulina en Current Protocols in Immunology (protocolos actuales en inmunología) , unidad 2.8, Greene Publishing Assoc., and John Wiley & Sons).
Anticuerpos quiméricos y anticuerpos de cadena única pueden también ser producidos de conformidad con métodos recombinantes conocidos (véase, por ejemplo, 5,169,939, 5,194,594, y 5,576,184). Anticuerpos humanizados pueden también obtenerse a partir de anticuerpos de murino de conformidad con métodos bien conocidos (véase, por ejemplo patentes norteamericanas número 5,530,101, 5,585,089, y 5,693,762). Además, anticuerpos humanos pueden ser producidos en animales no humanos, por ejemplo ratones que han sido genéticamente para expresar moléculas de anticuerpo humano (véase por ejemplo, Fishwild et al., 1996 Nature Biotechnology 14: 845-851; Méndez et al., 1997, Nature Genetics 15: 146-156 (erratum Nature Genetics 16:410); y - patentes norteamericanas 5,877,397, y 5,625,126). Tales anticuerpos pueden ser obtenidos ya sea la proteína entera o fragmentos de la misma como inmunógeno. Los inmunógenos de • péptidos pueden contener además un residuo de cisteína en la 5 terminal carboxilo y están conjugados con un hapteno como por ejemplo hemocianina de lapa (KLH) . Métodos para sintetizar tales péptidos son conocidos en la técnica, como el R.P. Merrifield, J. AMER. Chem. Soc. 85, 2149-2154 /1963) ; J.L. Krstenansky, et al., FEBS Lett. 211. 10 (1987). B 10 Anticuerpos monoclonales que se unen con la proteína de la presente invención pueden ser agentes de diagnóstico útiles para inmunodetección de la proteína. La neutralización de anticuerpos monoclonales que se unen con la proteína puede ser terapéuticamente útil tanto en el caso de condiciones 15 asociadas con la proteína como en el caso del tratamiento de ciertas formas de cáncer en donde está involucrada la expresión anormal de la proteína. En el caso de células cancerosas o células de leucemia, la neutralización de anticuerpos monoclonales contra la proteína puede ser útil 20 para detectar y prevenir la difusión metastásica de células cancerosas, que puede ser mediada por la proteína. Para composiciones de la presente invención que son útiles para la regeneración de hueso, cartílago, tendón o ligamento, el método terapéutico incluye la administración de la 25 composición de manera tópica, sistémica o local en forma de un implante o dispositivo. Cuando se administra, la composición terapéutica para su uso en esta invención se encuentra evidentemente en forma fisiológicamente aceptable, • sin pirógenos. Además, la composición puede estar encapsulada 5 o bien inyectada en forma viscosa para su administración al sitio de la administración ósea de cartílago o de tejido. La administración tópica puede ser adecuada para la curación de heridas y reparación de tejidos. Agentes terapéuticamente útiles otros que una proteina de la invención que pueden 10 también estar incluidos opcionalmente en la composición de conformidad con lo descrito arriba, pueden alternativa o adicionalmente, ser administrados simultáneamente o secuencialmente con la composición en los métodos de la invención. De preferencia para la formación de hueso y/o 15 cartílago, la composición puede incluir una matriz capas de suministrar la composición que contiene la proteína al sitio de la lesión del hueso y/o cartílago, proporcionando una estructura para el desarrollo de hueso y cartílago y óptimamente puede resorberse en el cuero. Tales matrices 20 pueden ser formadas de materiales actualmente en uso para otras aplicaciones médicas implantadas. La elección de material de matriz se basa en la biocompatibilidad, biodegradabilidad, propiedades mecánicas, apariencia cosmética, así como propiedades de interfaz. La 25 aplicación particular de las composiciones definirá la formulación apropiada. Matrices potenciales para las composiciones pueden ser sulfato de calcio, fosfato tricálcico, hidroxiapatita, ácido poliláctico, ácido • poliglicólico, y polianhídridos químicamente definidos y 5 biodegradables. Otros materiales potenciales son materiales biodegradables y biológicamente bien definidos tales como hueso o colágena dérmica. Matrices adicionales consisten de proteínas puras o bien componentes de matriz extracelular otras matrices potenciales son no biodegradables y 10 químicamente definidas tales como hidroxiapatita sinterizada, biovidrio, aluminatos o bien otras cerámicas. Matrices pueden comprender combinaciones de cualesquiera de los tipos mencionados arriba de materiales tales como ácido poliláctico e hidroxiapatita o bien colágena y fosfato tricálcico. Las 15 biocerámicas pueden presentar alteraciones en cuanto a su composición como en el caso de calcio-aluminato-fosfato y procesamiento para alterar tamaño de poros, tamaño de partículas, forma de partículas y biodegradabilidad. Lo que se prefiere actualmente es un copolímero 50:50 (peso 20 molar) de ácido láctico y ácido glicólico en forma de partículas porosas que tiene diámetros dentro de un rango de 150 a 800 mieras. En algunas aplicaciones, será útil utilizar un agente de secuestro, como por ejemplo carboximetilcelulosa, o bien coágulo sanguineo autólogo, con 25 el objeto de evitar que las composiciones de proteína se separen de la matriz. Una familia preferida de agentes de secuestro es materiales celulósicos tales como alquilcelulosas (incluyendo hidroxialquilcelulosa) , incluyen metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, y carboximetilcelulosa. Lo que se prefiere especialmente son las sales catiónicas de carboxilmetilcelulosa (CMC) . Otros agentes de secuestro preferidos incluyen ácido hialurónico, alginato de sodio, (poli) etilenglicol, óxido de polioxietileno, polímero carboxivinílico y alcohol (poli) vinílico. La cantidad de agentes de secuestro útil aquí es de 0.5 a 20% en peso, de preferencia de 1 a 10% en peso con base en el peso total de la formulación, que representa la cantidad necesaria para evitar la desorción de la proteína a partir de la matriz polimérica y para proporcionar un maneno apropiado de la composición, sin embargo no tanto que las células progenitoras no puedan infiltrar la matriz, proporcionando así a la proteína la oportunidad de ayudar en la actividad osteogénica de las células progenitoras. En composiciones adicionales, proteínas de la presente invención pueden combinarse con otros agentes benéficos para el tratamiento del defecto de hueso y/o cartílago, herida, o bien tejido en cuestión. Estos agentes incluyen varios agentes de crecimiento tales como el factor de crecimiento )ít m iÉtÉßÉ ^ i É ?^^ ?i^i i^^í^^áá epidérmico (EGF) , factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) , factores de crecimiento transformantes (TGF-alfa y TGF-beta) y factor de crecimiento de tipo insulina (IGF) . Las composiciones terapéuticas son también actualmente valiosas para aplicaciones veterinarias. Particularmente en el caso de animales domésticos y caballos de pura sangre, además de seres humanos, son pacientes deseados para tales tratamientos con proteínas de la presente invención. El régimen de dosificación de una composición farmacéutica que contiene proteína a emplear en la regeneración tisular será determinado por el médico tomando en cuenta varios factores que modifican la acción de las proteínas, por ejemplo la cantidad de peso tisular que se desea formar, el sitio del daño, la condición del tejido dañado, el tamaño de una herida, el tipo de tejido dañado (por ejemplo hueso), la edad, sexo y dieta del paciente, la severidad de la infección, el tiempo de administración y otros factores clínicos, la dosificación puede variar con el tipo de matriz empleada en la reconstitución y con inclusión de otras proteínas en la composición farmacéutica. Por ejemplo la adición de otros factores de crecimiento conocidos tales como IGF I (factor de crecimiento de tipo insulina I) a la composición final puede también afectar la dosificación. Los avances pueden ser monitoreados por una evaluación periódica del crecimiento y/o reparación de tejido/hueso, por ejemplo, mediante Rayos X determinación histomorfométricas y marcados con tetraciclina. Los polinucleótidos de la presente invención pueden también utilizarse para terapia génica. Tales polinucleótidos pueden ser introducidos ya sea in vivo o bien ex vivo en células para expresión en un sujeto mamífero. Los polinucleótidos de la presente invención pueden también ser administrados por otros métodos conocidos para introducir ácido nucleico en una célula o bien en un organismo (incluyendo, sin limitación, en forma de vectores virales o bien ADN desnudo) . Se puede cultivar también células ex vivo en presencia de proteínas de la presente invención con el objeto de proliferación o bien para producir un efecto deseado en tales células o bien una actividad deseada en tales células. Las células tratadas pueden después ser tratadas in vivo para propósitos terapéuticos. La invención se ilustra adicionalmente a través de los siguientes ejemplos que no deben considerarse como limitativos. Los contenidos de todas las referencias, patentes, y solicitudes de patente publicadas mencionadas en esta solicitud, así como la Lista de Secuencias, se incorporan aquí por referencia. Ejemplos Identificación y caracterización de Clon "hGIL-19/AE289" Un polinucleótido de la presente invención ha sido ^.«fcfc.^^ . .^. haafcAtA identificado como el clon hGIL-19/AE289. El clon hGIL-19/AE289 fue aislado de conformidad con el método siguiente. Un EST de murino fue identificado a partir de una biblioteca de ADNc de murino formada de esplenocitos activados con células dendríticas derivadas de médula ósea ConA. El EST fue identificado utilizando métodos que son selectivos para ADNc que codifican proteínas secretadas (véase Patente Norteamericana número 5,536,637). La secuencia de EST de murino fue empleada para aislar un clon de murino de longitud completa a partir de la misma biblioteca de ADNc. El análisis de la secuencia del clon de murino reveló una homología significativa con la interleucina-10 (IL-10) . Con el- objeto de aislar un homólogo humano del clon de murino, se construyeron iniciadores de reacción en cadena de polimeraza con base en la región de la secuencia de murino que presentaba homología con IL-10. el uso de tales iniciadores para la amplificación de biblioteca PBMC humano produjo un producto de reacción en cadena de polimeraza de tamaño significativo. El análisis de la secuencia del producto de reacción en cadena de polimerasa confirmó que era homólogo del ADNc de murino. Oligonucleótidos fueron construidos a partir de la secuencia del clon humano parcial y utilizados para aislar un clon humano de longitud completa a partir de la biblioteca de PBMC. i-t-fi III n-^i^aüim hGIL-19/AE289 es un clon humano de longitud completa, que incluye la secuencia codificadora entera de una proteína secretal (se conoce también aquí como proteína hGIL- 19/AE289) . El análisis de subsecuencia de aminoácidos indicó 5 que tenía una homología de aproximadamente el 23% con hIL-10. con base en los motivos de enlace con receptor putativos en IL-10, involucrados con una función análoga han sido propuestos en hGIL-19/AE289 a través de modelado por computadora. Se trata de regiones de SEQ ID No.2, del residuo f 10 50 al 60, del residuo 63 al 81, y del residuo 168 al 177. Análisis de bases de datos revelaron que hGIL-19 muestra también niveles similar'es de homología con IL-10 de otras especies. La secuencia de nucleótidos de hGIL-19/AE289 de conformidad 15 con lo determinado actualmente es reportada en SEQ ID No. l e incluye una cola poli (A) . La secuencia de aminoácidos de la proteína hGIL-19/AE289 que corresponde a la secuencia de nucleótidos antes mencionada se reporta en SEQ ID No.2. Caracterización de proteína hGIL-19/AE289 20 Líneas de células que expresan y secretan de manera estable la proteína hGIL-19/AE289 de longitud completa fueron creadas por transfección de células CHO con ADNc de hGIL-19/AE289 en vectores de expresión apropiados. Las células COS transfectadas transcientemente utilizando vectores de 25 expresión de hGIL-19/AE289 apropiados han sido utilizadas para formar proteína hGIL-19/AE289 para análisis. Las transfecciones fueron logradas utilizando el reactivo Lipofectamine (Gibco) comercialmente disponible. Es • interesante observar que células COS que expresan hGIL- 5 19/AE289 fueron observadas desprendiéndose de manera no uniforme, formando hoyos en la monocapa de cultivo celular. Medio acondicionado por células COS transfectadas fue empleado para demostrar la actividad de tipo citosina de la proteína hGIL-19/AE289. un análisis Western blot de lisados 10 de células mostró que Stat-3 se vuelve fosforilado (activado) en una línea de células derivadas de tejido mesangial de riñon que muestra cualidades de tipo macrófago (MES-13, véase, Dumoutier et al (2000) J. of Immunology 164:1814-1819) a exponerse esta célula a medio acondicionado por células que 15 expresan hGIL-19/AE289. además, la fosforilación de Stat-3 es inducida en células COS no transfectadas tratadas con proteina hGIL-19. Un análisis electroforético de proteína hGIL-19/AE289 (derivada de las líneas de células COS transfectadas 20 descritas arriba) indicó que la proteína expresada existe en un rango de tamaños. El tratamiento de proteínas hGIL-19 derivada de COS con N-glicanas antes de la electroforesis resulta en una banda única que corresponde a la especie de movilidad mayor (por ejemplo peso molecular menor) observada 25 en hGIL-19/AE289 sin tratar. Esto es consistente con los - "-* -- ~* • * - • -— "• -eventos propuestos de glicosilación que pueden ocurrir en los sitios de glicosilación enlazados con N putativos identificados en la secuencia de aminoácidos de hGIL-19/AE289 (residuos de aminoácidos 54-56, 68-70, 97-99, y 176-178 de SEQ ID No.2) . El secuenciamiento de terminal de N Edman determinó que la terminal N de la proteína hGIL-19/AE289 madura empieza con el residuo en la posición 34 de SEQ ID No.2 (alanina) . Vectores de expresión fueron creados los cuales fusionan un marcador de afinidad "6x histidina" y un marcador de epítopo FLAG sobre la termina N de la proteína hGIL-19/AE289 madura, (el marcador de aminoácidos agregado se proporciona en SEQ ID No.3, y tiene la siguiente secuencia de aminoácidos: MKFLVNVALVFMWYISYIYAGSGJJJJJJJGSGDYKDDDDKAPISSHCR. Estos constructos marcados fueron utilizados para crear línea de células CHO de expresión estable y líneas de células de células COS de Expresión transiente. Los marcadores proporcionar un medio cómodo para detectar hGIL-19/AE289 (por ejemplo anticuerpo anti-6xhis; anticuerpo anti-FLAG) y para purificar la proteína del medio acondicionado (utilizando proteína Ni2+) . Una proteína GIL-19 humana purificada por este marcador a partir de las líneas de células COS que expresan hGIL-19/AE289 podría utilizarse para inducir la activación de Stat-3 en células MES-13. La comparación de transcritos de ARNm de hGIL-19 en células thl y Th2 activadas (véase por ejemplo Syrbe et al. (1999) Springer Seminary in Immunopathology, 21:263-85) indicó un nivel sustancialmente más alto de expresión de GIL-19 en # células Thl activadas que en células Th2 activadas. El 5 análisis de ARNm de GIL-19 fue logrado con ensayos de protección de ARNasa. Efectos inmunológicos de GIL-19. Los efectos inmunológicos de GIL-19 fueron investigados en un contexto de metazoarios por introducción viral de ADNc de 10 GIL-19 de murino en ratones. Un vector adenoviral fue • utilizado para expresado ADNc de GIL-19 de murino en ratones hembras C57/B6 de 8 semanas de edad por inyección de 5x1010 partículas virales. Los ratones de prueba fueron sacrificados 7 y 14 días después de la inyección y comparados con ratones 15 de control que recibieron inyección con amortiguador solamente o bien con adenovirus que expresa proteína fluorescente verde (GFP) . Los días 7 y 14, se observó que los pesos químicos absolutos y relativos fueron significativamente menores en el caso de los ratones que 20 expresaron GIL-19 de murino viral. El peso promedio absoluto del bazo fue menor el día 14 y los pesos de los hígados fueron ligeramente mayores el día 7. Una atrofia generalizada evidente del timo así como un agotamiento de linfoides (se observó a través del microscopio) fue aparente los días 7 y 25 14.
Además, se observaron numerosos efectos hematológicos que fueron aparentes el día 7, incluyendo un conteo disminuido de células sanguíneas rojas, hemoglobina y hematocritos . Estos • efectos, conjuntamente, indicaron anemia en los animales. 5 Además, se observó un incremento de las plaquetas así como un incremento del conteo de células sanguíneas blancas debido a un incremento de los neutrofilos. Tomando en cuenta estas observaciones no hay evidencia de una respuesta regeneradora, lo que indica que los efectos pueden encontrarse a nivel de 10 la médula ósea. • Además, se observa una ligera disminución de los niveles de albúmina el dia 7 y el día 14. Una causa posible de esta situación es la pérdida de moléculas pequeñas a través del riñon o de los intestinos. 15 Equivalentes Los expertos en la materia reconocerán o bien podrán determinar utilizando solamente experimentos de rutina, • muchos equivalentes a las modalidades específicas de la invención descrita aquí. Tales equivalentes están dentro del 20 alcance de las reivindicaciones siguientes. 25 LISTA DE SECUENCIAS <110> GENETICS INSTITUTE <120> PROTEÍNAS GIL-19/AE289 HUMANAS Y POLINUCLEÓTIDOS QUE LAS CODIFICAN 5 <130> GIN-5358CPPC <140> <141> <150> 60/131,473 <151> 1999-04-28 10 <160> 2 • <170> Patentln Ver. 2.0 <210> 1 <211> 1177 <212> ADN 15 <213> Homo sapiens <400> 1 ggccaaagag gcctacaggt tctccttccc cagtcaccag ttgctcgagt tagaattgtc 60 • tgcaatggcc gccctgcaga aatctgtgag ctctttcctt atggggaccc tggccaccag 120 ctgcctcctt ctcttggccc tcttggtaca gggaggagca gctgcgccca tcagctccca 180 20 ctgcaggctt gacaagtcca acttccagca gccctatatc accaaccgca ccttcatgct 240 ggctaaggag gctagcttgg ctgataacaa cacagacgtt cgtctcattg gggagaaact 300 gttccacgga gtcagtatga gtgagcgctg ctatctgatg aagcaggtgc tgaacttcac 360 ccttgaagaa gtgctgttcc ctcaatctga taggttccag ccttatatgc aggaggtggt 420 gcccttcctg gccaggctca gcaacaggct aagcacatgt catattgaag gtgatgacct 480 25 gcatatccag aggaatgtgc aaaagctgaa ggacacagtg aaaaagcttg gagagagtgg 540 aa* **** **^**»* *^, -•-****- -*— ^.a--^-.......- , .n . . *,£.., ., i -*mt??t" agagatcaaa gcaattggag aactggattt gctgtttatg tctctgagaa atgcctgcat 600 ttgaccagag caaagctgaa aaatgaataa ctaaccccct ttccctgcta gaaataacaa 660 ttagatgccc caaagcgatt ttttttaacc aaaaggaaga tgggaagcca aactccatca 720 tgatgggtgg attccaaatg aacccctgcg ttagttacaa aggaaaccaa tgccactttt 780 5 gtttataaga ccagaaggta gactttctaa gcatagatat ttattgataa catttcattg 840 taactggtgt tctatacaca gaaaacaatt tattttttaa ataattgtct ttttccataa 900 aaaagattac tttccattcc tttaggggaa aaaaccccta aatagcttca tgtttccata 960 atcagtactt tatatttata aatgtattta ttattattat aagactgcat tttatttata 1020 tcattttatt aatatggatt tatttataga aacatcattc gatattgcta cttgagtgta 1080 JBt 10 aggctaatat tgatatttat gacaataatt atagagctat aacatgttta tttgacctca 1140 ataaacactt ggatatccta aaaaaaaaaa aaaaaaa 1177 <210> 2 <211> 179 <212> PRT 15 <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ala Ala Leu Gln Lys Ser Val Ser Ser Phe Leu Met Gly Thr Leu • 1 5 10 15 Ala Thr Ser Cys Leu Leu Leu Leu Ala Leu Leu Val Gln Gly Gly Ala 20 20 25 30 Ala Ala Pro lie Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln 35 40 45 Gln Pro Tyr lie Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser 50 55 60 25 Leu Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu lie Gly Glu Lys Leu Phe 65 70 75 80 His Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu 85 90 95 Asn Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln 100 105 110 Pro Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg 115 120 125 Leu Ser Thr Cys His He Glu Gly Asp Asp Leu His He Gln Arg Asn 130 135 140 10 Val Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu 145 150 155 160 He Lys Ala He Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn 165 170 175 Ala Cys He 15 20 25

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada dentro del grupo que • consiste de: 5 (a) la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1; (b) la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1, del nucleótido 65 al nucleótido 601; (c) la secuencia de nucleótidos de la secuencia codificadora de proteína de longitud completa del clon 10 hGIL-19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231; (d) una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de longitud completa codificada por el inserto de ADNc del clon hGIL-19/AE289 depositado bajo el 15 número de acceso ATCC 207231; (e) la secuencia de nucleótidos de una secuencia codificadora de proteína madura de clon hGIL-19/AE289 depositado bajo número de acceso ATCC 297231; (f) una secuencia de nucleótidos que codifica una 20 proteína madura codificada por el inserto de ADNc de clon hGIL-19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231; (g) una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de 25 SEQ ID NO : 2 ; (h) una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína que comprende un fragmento de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, el fragmento comprende 8 • aminoácidos contiguos 5 de SEQ ID NO: 2; (i) la secuencia de nucleótidos de un polinucleótido que se hibrida en condiciones por lo menos tan estrictas como 4X SSC a una temperatura de 65 grados C o bien 4X SSC a una temperatura de 42° C con formamida F 10 al 50%, con cualesquiera de los polinucleótidos especificados por (a)-(f); y (j) la secuencia de nucleótidos de un polinucleótido que se hibrida bajo condiciones por lo menos tan estrictas como 4X SSC a una temperatura de 50° C o 6X 15 SSC a una temperatura de 40° C con formamida al 50%, con cualesquiera de los polinucleótidos especificados por (a)-(f) y que tiene una longitud que es por lo menos el 25% de la longitud de SEQ ID NO: 1. 2. El polinucleótido de la reivindicación 1 en donde dicho 20 polinucleótido es enlazado de manera operativa con por lo menos una secuencia de control de expresión. 3. Una célula huésped transformada con el polinucleótido de la reivindicación 2. 4. La célula huésped de conformidad con la reivindicación 25 3, en donde dicha célula es una célula de mamífero. 5. Un procedimiento para la producción de una proteína codificada por el polinucleótido de la reivindicación 2, dicho procedimiento comprende: • (a) cultivar un cultivo de una célula huésped 5 transformada con el polinucleótido de la reivindicación 2 en un medio de cultivo adecuado; y (b) purificar dicha proteína a partir del cultivo. 6. Una proteína producida de conformidad con el 10 procedimiento de la reivindicación 5. 7. Un polinucleótido aislado que codifica la proteína de la reivindicación 6. 8. El polinucleótido de la reivindicación 7, en donde el polinucleótido comprende el inserto de ADNc de clon 15 hGIL-19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231. 9. Una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada dentro del grupo que consiste de: (a) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; 20 (b) un fragmento de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, el fragmento comprende ocho aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 2; y (c) la secuencia de aminoácidos codificada por el inserto de ADNc del clon hGIL-19/AE289 25 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231; ¡y||^^j^^^^!*^ la proteína es sustancialmente exenta de otras proteínas de mamífero. 10. La proteína de conformidad con la reivindicación 9, en donde dicha proteína comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. 11. Una composición que comprende la proteína de conformidad con la reivindicación 9 y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 12. El polinucleótido de la reivindicación 1, en donde el polinucleótido comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1. 13. El polinucleótido de la reivindicación 1, en donde el polinucleótido comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1 del nucleótido 65 al nucleótido 601. 14. El polinucleótido de la reivindicación 1, en donde el polinucleótido comprende la secuencia de nucleótidos de la secuencia codificadora de proteína de longitud completa del clon hGIL-19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231. 15. El polinucleótido de la reivindicación 1, en donde el polinucleótido codifica la proteína de longitud completa codificada por el inserto de ADNc del clon hGIL-19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231. 16. El polinucleótido de la reivindicación 1, en donde el j^&^^^y^ ..... -^*fc^ polinucleótido comprende la secuencia de nucleótidos de una secuencia codificadora de proteína madura de hGIL- 19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231 . 17. El polinucleótido de la reivindicación 1, en donde el polinucleótido codifica una proteína madura codificada por el inserto de ADNc del clon hGIL-19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231. 18. El polinucleótido de la reivindicación 1, en donde el polinucleótido codifica una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. 19. El polinucleótido de la reivindicación 1, en donde el polinucleótido codifica una proteína que comprende un fragmento de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, el fragmento comprende ocho aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 2. 0. La proteína de conformidad con la reivindicación 9, en donde la proteína comprende un fragmento de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, el fragmento comprende ocho aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 2. 1. La proteína de conformidad con la reivindicación 9, en donde la proteína comprende la secuencia de aminoácidos codificada por el inserto de ADNc del clon hGIL- 19/AE289 depositado bajo el número de acceso ATCC 207231. 22. Un anticuerpo que reacciona de manera inmunológica con una proteína de la reivindicación 9. 10 15 20 25
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