MXPA01007613A - Sistema de expresion inducible para uso en plantas. - Google Patents

Sistema de expresion inducible para uso en plantas.

Info

Publication number
MXPA01007613A
MXPA01007613A MXPA01007613A MXPA01007613A MXPA01007613A MX PA01007613 A MXPA01007613 A MX PA01007613A MX PA01007613 A MXPA01007613 A MX PA01007613A MX PA01007613 A MXPA01007613 A MX PA01007613A MX PA01007613 A MXPA01007613 A MX PA01007613A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
plant
alcohol
gene
expression
optionally substituted
Prior art date
Application number
MXPA01007613A
Other languages
English (en)
Inventor
Ian Jepson
Original Assignee
Syngenta Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Syngenta Ltd filed Critical Syngenta Ltd
Publication of MXPA01007613A publication Critical patent/MXPA01007613A/es

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8237—Externally regulated expression systems
    • C12N15/8238—Externally regulated expression systems chemically inducible, e.g. tetracycline
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/02—Saturated carboxylic acids or thio analogues thereof; Derivatives thereof
    • A01N37/04—Saturated carboxylic acids or thio analogues thereof; Derivatives thereof polybasic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids
    • A01N37/38—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids having at least one oxygen or sulfur atom attached to an aromatic ring system
    • A01N37/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids having at least one oxygen or sulfur atom attached to an aromatic ring system having at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and one oxygen or sulfur atom attached to the same aromatic ring system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/42—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing within the same carbon skeleton a carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a carbon atom having only two bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. keto-carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N61/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing substances of unknown or undetermined composition, e.g. substances characterised only by the mode of action

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

El uso de un ester hidrolizable agricolamente aceptable tal como un compuesto de formula (I) en el cual R1 y R2 son como se definen en la solicitud, en el control de expresion de un gen vegetal, el control se lleva a cabo por un promotor inducible el cual requiere para activacion, la presencia de una sustancia quimica exogena la cual puede comprender un alcohol, en donde la hidrolisis del ester agricolamente aceptable resulta en la produccion del alcohol. Tambien se describen y reivindican formulaciones de estos esteres.

Description

SISTEMA DE EXPRESIÓN INDUCIBLE PARA USO EN PLANTAS DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con un sistema de expresión para uso en plantas, en particular con un sistema de expresión el cual utiliza un agente químico hexógeno como un mecanismo de control y con el uso de ciertas sustancias químicas como el agente de control . La expresión del gen es controlada por regiones hacia el extremo (51) de la región codificante de proteína denominada comúnmente como el "promotor" . Un promotor puede ser constitutivo, específico de tejido, programado por el desarrollo o inducible. La manipulación de plantas de cosecha para mejorar las características (tales como productividad o calidad) requiere la expresión de genes extraños o endógenos en tejidos vegetales. Tal manipulación genética por lo tanto se basa en la disponibilidad de un medio para controlar la expresión del gen según se requiere; por ejemplo, en la disponibilidad y uso de los promotores adecuados los cuales son efectivos en plantas. Es ventajoso tener que elegir una variedad de promotores diferentes de manera que se pueda seleccionar el promotor más adecuado para un gen, constructo, célula, tejido, planta o ambiente particular. Se sabe que una gama de promotores son operativos en plantas.
Los promotores particularmente útiles en ciertos casos son promotores los cuales son inducibles por aplicación de un inductor químico hexógeno. Esto permite que la expresión del gen particular se controle en etapas particulares del crecimiento o desarrollo de las plantas, por la presencia o ausencia de una sustancia química la cual se puede aplicar a las plantas o semillas, por ejemplo por aspersión o utilizando técnicas conocidas de recubrimiento de semillas. Esto algunas veces se conoce como "conmutación" de gen. Un gen el cual está bajo el control de un promotor inducible puede ser un gen el cual da lugar a la característica deseada o fenotipo mismo, o el promotor inducible puede controlar la expresión de una proteína represora la cual inhibe la expresión de un gen objetivo, por ejemplo al interactuar con una secuencia operadora hacia el extremo 5' del gen objetivo de manera que evita la expresión del gen (por ejemplo, como se conoce en los sistemas de operador/represor tec y lac) . En una alternativa adicional, el gen bajo el control del promotor inducible puede expresar una proteína la cual interactúa con otra proteína para inhibir la actividad de la misma, como por ejemplo en el sistema barnasa/barstar en el cual la barnasa inhibirá o destruirá células en ausencia de barstar. Las conmutaciones de genes de este tipo se conocen en una amplia variedad de aplicaciones. Estas incluyen la producción de esterilidad masculina reversible, una característica la cual es altamente deseable en producción de plantas híbridas como se describe, por ejemplo, en el documento WO 90/08830. Otras aplicaciones de tales promotores incluyen una protección de plasma germinal, en donde el contenido de las plantas particulares de una cosecha, en particular plantas transgénicas, y el control de voluntarios, es necesario y también en la prevención de dispersión o diseminación antes de la cosecha, como se describe en el documento WO 94/03619. Muchos organismos tienen mecanismos los cuales permiten que metabolicen sustancias químicas tales como alcoholes o cetonas, por ejemplo por la producción de enzimas de alcohol deshidrogenasa. Los promotores de estos sistemas pueden ser útiles en conmutaciones de genes puesto que los promotores pueden ser inducibles por la presencia del alcohol o cetona objetivo. Uno de tales ejemplos se puede encontrar en el organismo micótico A^_ nidulans, el cual expresa la enzima alcohol deshidrogenasa I (ADHl) codificada por el gen alcA únicamente cuando crece en presencia de diversos alcoholes y cetonas. La inducción es activada mediante una proteína reguladora codificada por el gen alcR y se expresa de manera constitutiva. En presencia de inductor (alcohol o cetona) , la proteína reguladora activa la expresión del gen alcA. La proteína reguladora también estimula la expresión de sí misma en presencia de inductor. Esto significa que concentraciones altas de la enzima ADHl se producen bajo condiciones inductoras (es decir, cuando está presente el alcohol o la cetona) . Inversamente, el gen para alcA y su producto, ADHl, no se expresan en ausencia de inductor. La expresión de alcA y la producción de la enzima también se expresa en presencia de glucosa. Por lo tanto, el promotor del gen para alcA es un promotor inducible, activado por la proteína reguladora alcR en presencia de inductor (es decir, por la proteína/alcohol o la combinación de proteína/cetona) . Los genes alcR y alcA (que incluyen sus promotores respectivos) se han clonado y secuenciado (Lockington RA et al, 1985, Gene, 33:137-149; Felenbok B et al, 1988, Gene, 73:385-396; Gwynne et al, 1987, Gene, 51:205-216). Se han investigado los genes para alcohol deshidrogenasa (adh) en ciertas especies de plantas . En el maíz y otros cereales se activan por condiciones anaeróbicas . La región promotora de los genes para adh del maíz contienen un elemento regulador de 300 pb necesario para la expresión bajo condiciones anaeróbicas. Sin embargo, no se ha encontrado en ninguna planta un equivalente a la proteína reguladora alcR. Por lo tanto, el tipo de sistema regulador de gen alcR/alcA no se conoce en plantas. La expresión constitutiva de alcR en células vegetales no resulta en la activación de actividad endógena de adh. El documento WO 93/21334 describe la producción de plantas transgénicas las cuales incluyen tal sistema como un conmutador de gen. Este documento describe específicamente un cassette de expresión de gen vegetal inducible químicamente que comprende un primer promotor unido operativamente a una secuencia reguladora la cual codifica para una proteína reguladora, y el promotor inducible unido operablemente a un gen objetivo, el promotor inducible es activado por la proteína reguladora en presencia de un inductor hexógeno efectivo por lo que la aplicación del inductor provoca la expresión del gen objetivo. En particular, se utiliza el sistema alcR/alcA en las construcciones (plásmidos recombinantes) . Los inductores químicos hexógenos los cuales se aplican en este caso incluyen los que se describen por Creaser et al., J. Biochem. (1984)225, 449-454) tales como butan-2-ona(etilmetilcetona) , ciciohexanona, acetona, butan-2-ol, ácido 3-oxobutírico, propan-2-ol y etanol. Para propósitos agrícolas, los alcoholes se utilizan generalmente como el inductor químico hexógeno. Sin embargo, tales sustancias químicas con frecuencia son volátiles y por lo tanto son difíciles de manejar en un contexto agrícola, pues grandes volúmenes de sustancia química se pueden perder durante la aspersión. La presente invención proporciona el uso de un éster hidrolizable agrícolamente aceptable en el control de expresión de un gen vegetal, el control se lleva a cabo por un promotor inducible el cual requiere para activación la presencia de una sustancia química hexógena la cual puede comprender un alcohol, en donde la hidrólisis de tal éster agrícolamente aceptable resulta en la producción de tal alcohol. En particular, el éster agrícolamente aceptable comprende un compuesto de fórmula (I) (I) En la cual R1 es un alquilo inferior, alquenilo inferior o un grupo alquinilo inferior, y R2 es un grupo orgánico tal como RCOOH que es un ácido agrícolamente aceptable. La hidrólisis de un compuesto de la fórmula (I) proporciona un alcohol de la fórmula (II) i HC (II) El término "agrícolamente aceptable", como se utiliza en la presente, significa que los compuestos se pueden aplicar a un suelo o una situación de cosecha particular sin provocar concentraciones inaceptables de daño al suelo o de fitotoxicidad en la cosecha.
La expresión "alquilo inferior", como se utiliza en la presente, incluye grupos alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, preferiblemente de grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono los cuales pueden ser de cadena lineal o ramificada. La expresión "alquenilo inferior" y "alquinilo inferior", como se utiliza en la presente, incluye grupos alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono y alquinilo de 2 a 6 átomos de carbono, respectivamente, de manera preferible de grupos alquenilo de 2 a 4 átomos de carbono o alquinilo de 2 a 4 átomos de carbono los cuales pueden tener una cadena lineal o ramificada. Los esteres agrícolamente aceptables para uso en la invención tales como los de la fórmula (I) se transfieren adecuadamente a la planta objetivo en la cual el sistema de control de genes en su lugar o se hidroliza ya sea bajo condiciones ambientales o en presencia de una porción catalítica adecuada tal como una enzima o anticuerpo catalítico, a velocidades las cuales son apropiadas para proporcionar cantidades suficientes del alcohol activante en el momento requerido en las partes necesarias de la planta. Estas pueden variar dependiendo de la naturaleza de la especie vegetal que se trate, el gen que se exprese y el período de tiempo de la aplicación del éster. Los esteres tales como los compuestos de fórmula (I) son ventajosos en la medida en que son más fáciles de manejar que los alcoholes correspondientes. Se ha encontrado que estos compuestos pueden producir el efecto deseado en términos de activación del gen. El compuesto se debe aplicar durante un período de tiempo suficiente antes de la activación del gen requerido para permitir que se produzca la hidrólisis y esto será razonable dependiendo de los factores tales como la etapa de crecimiento de la planta y que activación se requiera. Si la velocidad de hidrólisis es relativamente lenta, el tiempo de aplicación puede ser más pronto con el fin de asegurar que se ha producido hidrólisis suficiente por el tiempo en que la planta se encuentra en la etapa de crecimiento en la cual se requiere la activación del gen. Cuando esto es difícil, se pueden seleccionar esteres que hidrolicen más rápidamente. De manera alternativa, se pueden aplicar en un solo tratamiento más de un éster, con velocidades diferentes de hidrólisis. Al seleccionar combinaciones de esteres con velocidades de hidrólisis diferentes, se puede obtener un sistema de "liberación lenta" efectiva de activación de alcohol, de manera que la expresión del gen se puede prolongar sobre el período deseado. Esto significa que se pueden evitar aplicaciones repetidas de la sustancia química y es posible un tratamiento de "una aplicación" . Los ejemplos particulares de alcoholes de la fórmula (II) incluyen metanol, etanol, propan-l-ol, propan-2 -ol o but-3-en-2-ol.
De manera adecuada, el alcohol de fórmula (II) es un alcohol alquílico inferior en donde el grupo alquilo tiene de 1 a 4 átomos de carbono y puede estar ramificado o ser lineal. Los grupos preferidos para R1 incluyen etilo, n-propilo y n-butilo. Un ejemplo particularmente preferido de un compuesto de fórmula (II) es etanol. La naturaleza precisa del grupo R2 es inmaterial con la condición de que genere un ácido agrícolamente aceptable a una velocidad apropiada en la planta objetivo particular a la cual se aplica. Se pueden determinar las velocidades de hidrólisis utilizando métodos sistemáticos o de rutina, por ejemplo como se describe por G. Mitchell et al., Pestic. Sci (1995) 44:49-58, y preferiblemente al realizar pruebas contra sistemas vegetales completos. Lo que es apropiado en cualquier caso particular dependerá de diversos factores que incluyen la naturaleza de la expresión del gen del cual se va a controlar, la planta particular en la cual se expresa el gen y otras condiciones externas. La velocidad de hidrólisis debe ser suficiente para permitir que se observe el efecto deseado, por ejemplo, esterilidad masculina reversible, en un período de tiempo apropiado después de la aplicación del inductor químico. Sin embargo, se puede seleccionar R2 de manera que el ácido resultante de fórmula (III) tenga algún efecto agroquímico útil. En particular, puede en sí mismo ser capaz de actuar como un inductor del promotor inducible. Por ejemplo, se ha encontrado que muchos ácidos que incluyen el ácido 3-hidroxibutírico, ácido 2-hidroxibutírico, ácido pirúvico y ácido 3-oxobutírico, pueden actuar como un inductor del sistema alcR/alcA (Creaser et al., supra.). Los ejemplos particulares de R2 incluyen alquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo sustituido opcionalmente, alquenilo sustituido opcionalmente, alquinilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente o heterociclo sustituido opcionalmente. Como se utiliza en la presente, el término "alquilo" incluye cadenas alquilo lineales o ramificadas que contienen adecuadamente hasta 10 átomos de carbono, de manera preferible de 1 a 6 átomos de carbono. Los términos "alquenilo" y "alquinilo" incluyen cadenas lineales o ramificadas insaturadas que contienen hasta 10 átomos de carbono, de manera preferible de 2 a 6 átomos de carbono. El término "arilo" incluye a fenilo y naftilo. El término "heterocíclico" incluye anillos que contienen hasta 10, de manera preferible hasta 7 átomos, hasta 3 de los cuales se seleccionan de oxígeno, azufre y nitrógeno. Estos anillos pueden ser anillos sencillos o pueden estar en forma de sistemas de anillos fusionados, y estos pueden ser de naturaleza aromática o no aromática. El término "halo" o "halógeno" incluye cloro, flúor, bromo y yodo. El término "alcoxi" se relaciona con un grupo alquilo como se define en lo anterior, unido a un átomo de oxígeno . De manera adecuada, R2 es un grupo alquilo de 1 a 10 átomos de carbono opcionalmente sustituido el cual puede ser lineal o ramificado. Los grupos alquilo preferidos R2 son lineales y contienen 3 a 8" átomos de carbono, en particular 5 átomos de carbono . Los sustituyentes opcionales adecuados para los grupos alquilo, alquenilo y alquinilo R2 incluyen uno o más grupos que se seleccionan de halo, nitro, ciano, oxo, arilo opcionalmente sustituido, heterocíclilo opcionalmente sustituido, ORJ C(0)pR3, S(0)mR\ OCOR3, -NR4C(0)pR\ =NOH, NRBR6, C(0)NR5R6, C (O) NR3NR5R6, -CH=NOR3 P(0)R7R8 O P(0)OR7OR8, NR3CONRsR6, -N=CR5R6, S(0)mNR5Rs o-NR3S(0)mR4, -N=NR3 en donde cada uno de R\ R\ R5, R6, R7 y R8 se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heterociclilo, cualquiera de los cuales puede estar opcionalmente sustituido por un grupo funcional y, en el caso de los grupos arilo y heterociclilo, también puede estar sustituido por grupos alquilo, alquenilo o alquinilo; o R5 y Rß junto con el átomo al cual están unidos, pueden formar adicionalmente, junto con el átomo al cual están unidos, un anillo el cual puede ser carbocíclico o heterocíclico; p es 1 o 2 y es 0, 1, 2 o 3. Como se utiliza en la presente, el término "grupo funcional" se refiere para incluir halo, ciano, nitro, oxo, hidroxi, =NOR11, CÍOjpR11, OR11, SÍO-.R11, NR12R13, C(0)NR12R13, OC(0)NR12R13, -CH=NOR11, NR12C (0) Jl11 , -NR^CONR^R13, -N=CR12R13, S(0)mNR12R13 o -NR12S (O^R11 en donde R11, R12 y R13 se seleccionan independientemente de hidrógeno o de hidrocarbilo opcionalmente sustituido, o R12 y R13 forman juntos un anillo opcionalmente sustituido el cual opcionalmente contiene heteroátomos adicionales tales como oxígeno y nitrógeno o S(0)R14, en donde p es un número entero de 1 o 2, m es 0 o un número entero de 1-3, y R14 es hidrógeno o alquilo. Los sustituyentes opcionales adecuados para los grupos hidrocarbilo R11, R12 o R13 incluyen halo, perhaloalquilo tal como trifluorometilo, mercapto, hidroxi, alcoxi, oxo, heteroariloxi, alqueniloxi, alquiniloxi, alcoxialcoxi, ariloxi (en donde el grupo arilo puede estar sustituido por halo, nitro o hidroxi) , ciano, nitro, amino, mono- o di-alquilamino, alquilamido o S(0)pR14 en donde m y R14 son como se definen antes. Los ejemplos de sustituyentes opcionales en los grupos R2 alquilo, alquenilo, alquinilo son uno o más grupos que se seleccionan de oxo; alcoxi carbonilo en particular alcoxi carbonilo inferior; ciano; halo tal como cloro, fluoro o bromo; fenilo opcionalmente sustituido con amino o mono-o dialquilamino o alquilo tal como metilo; OR3 en donde R3 es alquilo o heterociclilo opcionalmente sustituido por halo o alquilo; S(0)mRxl en donde m es 0 o 2, y R11 es alquilo o fenilo opcionalmente sustituido por alquilo; NR5R6 o C(0)NR5Rs en donde R5 es hidrógeno, metilo o metoxietilo y R6 es alquilo tal como metilo, fenilo o bencilo opcionalmente sustituido con halo tal como fluoro o cloro, alquilo tal como metilo o trifluorometilo o alcoxicarbonilo en donde la porción alquilo puede presentar un grupo alcoxicarbonilo adicional, o R6 es heterociclilo tal como tiazinilo opcionalmente sustituido con alquilo o acetilo; -NR4C(0)PR3 en donde p es 2, R3 es alquilo y R4 es alquilo opcionalmente sustituido con alcoxicarbonilo tal como etoxilcarbonilalquilo; NR3S(0)mR4 en donde R3 es hidrógeno, R4 es fenilo opcionalmente sustituido por halo tal como cloro y m es 2 ; C(0)NR3NR5Rs, en donde R3 y R5 son hidrógeno y R6 es fenilo opcionalmente sustituido por halo o alcoxi tal como metoxi; S(0)mNR5R6 en donde m es 2, R5 es hidrógeno y R6 es alquilo opcionalmente sustituido por uno o más grupos alcoxicarbonilo; heterociclilo tal como furilo, piridilo, piridinilo o pirazinilo, triazinilo, cualquiera de los cuales puede estar opcionalmente sustituido por alquilo, halo, trialometilo, fenilo, alofenilo, ciano u oxo. Los sustituyentes particularmente adecuados por los grupos R2 alquilo, alquenilo o alquinilo incluyen alcoxicarbonilo en particular en donde el grupo alcoxi es un grupo alquilo inferior; alcoxi y en particular 2 grupos alcoxi en forma de un dialquilacetal; ciano o heterociclilo opcionalmente sustituido. Los sustituyentes preferidos incluyen, pero no se limitan a grupos alcoxicarbonilo inferior y dialquilacetales . Los grupos alcoxicarbonilo y dialquilacetales son de interés particular cuando el grupo alquilo del sustituyente es el mismo que R1 en el compuesto de fórmula (I) puesto que la hidrólisis da lugar a un más inductor químico de fórmula (II) . Un grupo arilo particular para R2 es fenilo. Los sustituyentes opcionales adecuados para los grupos R2 cicloalquilo, arilo y heterociclilo y para sustituyentes arilo o heterociclilo en los grupos R2 alquilo, alquenilo o alquinilo mencionados antes, incluyen halo; haloalquilo; ciano; nitro; amino o mono- o di-alquilamino; hidroxi; alcoxi, tioalquilo, alquilo o alcoxicarbonilo en donde la porción alquilo de cualquiera de estas puede estar opcionalmente sustituida por ejemplo con uno o más grupos que se seleccionan de halo, alcoxi, ciano, alcoxicarbonilo, amino, mono- o di-alquilamino, arilo o carboxilato, o sales o esteres del mismo; cicloalquilo; o heterociclilo. Los sustituyentes particularmente adecuados para los grupos R2 arilo o heterociclilo incluyen alcoxi en particular alcoxi inferior tal como metoxi, alquilo, en particular alquilo inferior, alcoxicarbonilo, en particular alcoxicarbonilo inferior y halógeno.
Un subgrupo particular de compuestos de fórmula (I) son compuestos de fórmula (IA) (IA) en donde R1 es como se define en lo anterior en relación a la fórmula (I) , n es un número entero de 2 a 4 y R10 es un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo, cualquiera de los cuales puede estar opcionalmente interpuesto con un heteroátomo, un grupo cicloalquilo, heterociclilo o un grupo arilo, o R10 es un grupo cicloalquilo o arilo de valencia n. En particular R10 es un grupo alquilo o arilo de valencia n. Los compuestos particularmente preferidos de fórmula (I) incluyen: 2-n-pentil-3-oxobutanoato de etilo (Compuesto No. 49) ; 2-carboxiheptan-l, 7-dioato de trietilo (Compuesto No. 53) ; y 2, 4-dimetoxibenzoato de etilo (Compuesto No. 60) . Los ejemplos de compuestos de fórmula (I) son esteres de etilo, como se muestran en la Tabla 1.
Tabla 1 18 51 19 52 20 53 21 54 Los compuestos de fórmula (I) son compuestos conocidos o se pueden preparar a partir de compuestos conocidos utilizando métodos convencionales.
Los compuestos de fórmula (I) se pueden hidrolizar en una planta objetivo ya sea química o enzimáticamente por una enzima que se presente de manera natural en la planta objetivo o por una enzima introducida por ingeniería genética en la planta y que se exprese dentro de la planta, o por un anticuerpo catalítico apropiado o una porción catalíticamente activa de un anticuerpo catalítico introducido por ingeniería genética en la planta y que se exprese dentro de la planta. Las enzimas adecuadas incluyen, pero no se limitan a esterasas y lipasas. Los anticuerpos catalíticos adecuados se pueden generar por técnicas estándar a partir de análogos de un estado de transición de hidrólisis de éster tetrahédrico, por ejemplo, para la hidrólisis del éster del precursor de cloranfenicol, cuando se utilizan las fosfatasas apropiadas, Ole K et al., 1998, J. Mol. Biol., 281:501-511, y para la detoxificación de cocaína por hidrólisis de metiléster, Mets B et al., 1998, Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 95:10176-10181. El metabolismo del compuesto de la invención se ha investigado adicionalmente y los resultados de estas investigaciones se presentan en los ejemplos que siguen. Sin limitarse a consideraciones de proceso mecánico, se considera por ejemplo que un compuesto representativo de la invención, el compuesto 53, es metabolizado de acuerdo con el siguiente esquema: Triéster Monoácidos Diácidos Triácido Un producto de este metabolismo es etanol el cual puede actuar como un inductor químico como se describe antes. En un aspecto adicional, la invención proporciona un método para controlar la expresión de un gen objetivo en una planta, en donde la planta se transforma con un cassette de expresión de gen vegetal inducible químicamente que comprende un primer promotor unido operativamente a una secuencia reguladora la cual codifica para una proteína reguladora, y un promotor inducible unido operativamente a un gen objetivo, el promotor inducible es activado por la proteína reguladora en presencia de un alcohol tal como un compuesto de fórmula (II) , como se define en lo anterior, tal método comprende aplicar a la planta un éster el cual hidroliza para formar el alcohol tal como un compuesto de fórmula (I) como se define antes, de manera que causa expresión del gen objetivo.
De manera adecuada, la secuencia reguladora codifica para la proteína alcR como se describe antes y el promotor inducible es la secuencia promotora alcA. Cuando sea necesario o así se desee, la planta también se puede transformar de manera que exprese o sobreexprese una enzima o anticuerpo catalítico o un fragmento catalíticamente activo del mismo, el cual hidroliza el compuesto de fórmula (I) para formar un compuesto de fórmula (II) . Las enzimas las cuales están inactivas en ausencia de las enzimas o de otras porciones las cuales deben ser sometidas a ingeniería dentro de la planta, en algunas circunstancias pueden ser preferibles puesto que serán efectivas solo en la semilla transformada objetivo. Las secuencias de ácido nucleico las cuales codifican para la enzima hidrolítica, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se pueden incluir en la construcción que contiene la proteína reguladora o el gen objetivo unido operativamente al promotor inducible o pueden estar presentes en una construcción separada la cual se utiliza para cotransformar la planta. Sin embargo, tales sistemas son novedosos. Por lo tanto, en un aspecto adicional, se proporciona un sistema de expresión de gen vegetal que comprende: (i) un primer promotor unido operativamente a una secuencia reguladora la cual codifica para una proteína reguladora, (ii) un promotor inducible unido operativamente a un gen objetivo, el promotor inducible es activado por la proteína reguladora en presencia de un inductor hexógeno efectivo de fórmula (I) como se define antes, en donde la aplicación del inductor provoca la expresión del gen objetivo; y (iii) una secuencia la cual codifica para una proteína la cual lleva a cabo la hidrólisis de un éster tal como un compuesto de fórmula (I) al alcohol correspondiente bajo el control de un promotor adicional el cual permite su expresión en tejido vegetal. El gen objetivo puede comprender cualquier gen el cual se requiere para ser introducido en una planta con el fin de modificar las características de la misma, como se indica en lo anterior. El gen objetivo puede ser un gen vegetal endógeno o un gen extraño, y puede ser un gen único o una serie de genes. La secuencia del gen objetivo codifica para por lo menos parte de una proteína funcional o una secuencia antisentido. Se puede utilizar cualquier método de transformación adecuado para la planta objetivo o células vegetales, incluyendo la infección por Agrobacterium tumefaciens que contiene los plásmidos Ti recombinantes, electroporación, microinyección de células y protoplastos, transformación de microproyectiles y transformación en tubo de polen. Las células transformadas después pueden estar en recipientes adecuados y se pueden regenerar en plantas completas en las cuales el material nuclear nuevo se incorpora de manera estable en el genoma. De esta manera se pueden obtener plantas transformadas tanto monocotiledonias como dicotiledonias . Los ejemplos de plantas modificadas genéticamente los cuales se pueden producir incluyen cosechas de campo, cereales, frutas y vegetales tales como: cañóla, girasol, tabaco, remolacha de azúcar, algodón, soya, maíz, trigo, cebada, arroz, sorgo, tomates, mangos, duraznos, manzanas, peras, fresas, plátanos, melones, papas, zanahorias, lechugas, repollo y cebolla. La invención proporciona además una célula vegetal que contiene un sistema de expresión de gen de acuerdo con la invención. El sistema de expresión de gen se puede incorporar de manera estable en el genoma de la planta por transformación. La invención también proporciona un tej ido vegetal o una planta que comprende tales células, y plantas y semillas derivadas de la misma. Los ejemplos preferidos de compuestos de la fórmula (I) utilizados en este método son aquellos descritos antes. Los esteres agrícolamente aceptables de la invención tales como los compuestos de fórmula (I) se aplican de manera adecuada en forma de una composición agrícolamente aceptable, en combinación con un diluyente o portador. Tales composiciones forman un aspecto adicional de la invención. La concentración del éster agrícolamente aceptable en la formulación preferiblemente está a una concentración de aproximadamente 5% p/p o menos. Preferiblemente está en una concentración entre aproximadamente 2% y 5%, p/p. Será evidente para aquellas personas expertas en la técnica que los portadores o diluyentes adecuados variarán dependiendo de la naturaleza particular de los compuestos de la fórmula (I) que se utilice. Por ejemplo, cuando el compuesto de fórmula (I) es un aceite, puede requerir la presencia de un emulsificante con el fin de permitir que se disperse en solución acuosa. Los emulsificantes son bien conocidos en la técnica, y un ejemplo particular es acetato de polivinilo parcialmente hidrolizado (PVA) o TweenMR. También pueden estar presentes solventes orgánicos o diluyentes tales como acetona. Por lo tanto, una composición preferida comprende un éster agrícolamente aceptable tal como un compuesto de fórmula (I) un emulsificante tal como PVA y un diluyente tal como agua.
Las cantidades relativas de los componentes se determinarán en gran medida por la capacidad de condición miscible mutua de los diversos componentes. Sin embargo, de manera adecuada, el emulsificante estará presente en la composición en cantidades desde l-5%p/p de manera preferible a aproximadamente 2.5%p/p. Por lo tanto, los ejemplos de las formulaciones de la invención incluyen a los siguientes: Formulación 1 1.5% del compuesto de la invención (por ejemplo el compuesto 53) 2.5% de PVA El resto de agua Formulación 2 1.5% del compuesto de la invención (por ejemplo el compuesto 53) 5% de acetona 0.05% de Tween-20MR El resto de agua Formulación 3 3.0% del compuesto de la invención (por ejemplo compuesto 53) 2.5% de PVA El resto de agua Formulación 4 3.0% del compuesto de la invención (por ejemplo compuesto 53) 5% de acetona/H20 0.05% de Tween-20MR El resto de agua Las composiciones alternativas que se pueden utilizar son similares a las que se describen en nuestra solicitud de Patente Británica copendiente No. 9902236.0. En particular, las composiciones comprenderán los componentes: (a) un éster agrícolamente aceptables tal como un compuesto de la fórmula (I) ; (b) un alcohol de 10 a 20 átomos de carbono polietoxilado o un trisiloxano polietoxilado, y (c) un diluyente El diluyente (c) puede ser, por ejemplo, agua. El componente (b) de la formulación que se describe antes preferiblemente es un alcohol oleílico, laurílico, estearílico o cetílico polietoxilado. De manera preferible es un polioxietileno-alcohol oleílico que tiene un contenido molar medio de óxido de etileno en el intervalo de 0 a 35 y de manera más preferible en el intervalo de 2 a 20. De manera más preferible es un polioxietileno- (2) -alcohol oleílico, un polioxietileno- (10) -alcohol oleílico o un polioxietileno- (20) -alcohol olílico. Sin embargo, el componente (b) , preferiblemente es un polioxietileno- (20) -alcohol oleílico (el número entre paréntesis indica el contenido medio de oxido de etileno por molécula) . Tales productos están disponibles comercialmente como BRIJ 92MR, BRIJ 97MR y BRIJ 98MR. Preferiblemente, el componente (b) de la formulación está a una concentración de aproximadamente 0.5% p/p o menos.
Preferiblemente está a una concentración de entre aproximadamente 0.2% p/p y 0.5% p/p. En una modalidad alternativa, la formulación incluye como componente (b) , un trisiloxano polietoxilado rematado en el extremo con hidrógeno o metilo. En particular, el componente (b) es un trisiloxano polietoxilado rematado en el extremo con metilo. El trisiloxano polietoxilado rematado en el extremo con metilo preferiblemente tiene un contenido molar medio de oxido de etileno de entre 4 y 12 por molécula y de manera más preferible 8 por molécula. Tales productos están disponibles comercialmente como SIL ET 77R (SILWET es una marca comercial de Witco) . Preferiblemente, el trisiloxano polietoxilado rematado en el extremo con metilo está en una concentración de aproximadamente 0.5% p/p o menos. Preferiblemente está en una concentración entre aproximadamente 0.2% y 0.5% p/p. El componente (c) de la formulación preferiblemente está a una concentración entre aproximadamente 90% y 98%, p/p. Otros aditivos los cuales se pueden incluir en las formulaciones incluyen dispersantes, compuestos antibacterianos, compuestos humectantes y antievaporantes que también se pueden agregar . La invención ahora se describirá particularmente a modo de ejemplo.
Ejemplo 1 Sustancias químicas de prueba en plantas que crecen en el suelo Después de un examen preliminar de la solución hidroponiv, los compuestos se utilizan en una prueba que se lleva a cabo en una línea de 30 plantas homocigotas de tabaco de alccat de 4 semanas de edad en recipientes de 1.5" en un invernadero. Las muestras de las hojas se retiran de las plántulas como un control "no inducido". Las piezas de las hojas se trituran en 200µl de Tris pH8.0 , 250mM, se centrifugan y el sobrenadante se recupera y almacena a 4°C durante la noche. Los compuestos se disuelven en acetona 50%, dH2050% con 0.05% de tween-20 como una solución de 200mg/ml. Esto después se diluye 1/10 para una solución 2%. A menos que se establezca de otra manera, se aplican 5 ml de solución al suelo de cada una de las 2 plantas por tratamientos por duplicado como un drenado raíz. Después de 22 y 44 horas, se remueven muestras de hoja, se extraen como se describe antes y los sobrenadantes se almacenan a 4°C. Las muestras se analizan para cuantificación de proteína CAT mediante la utilización del equipo CAT ELISA de Boehringer Mannheim y se determina la concentración de proteína total por una determinación de Bradford. Los resultados se muestran en la Tabla 2 en donde un valor de CAT de 1 es igual a la detección de 0-5000ng/, 2 es igual a la detección de 5001-10,000 ng/g, 3 es igual a 10, 001-15, OOOng/g.
Tabla 2 Ejemplo 2 Tratamiento adicional de plantas que crecen en el suelo En este experimento se disuelven compuestos en acetona 50% dH20 50% con tween-20 0.05% como una solución de 200mg/ml. Esto se diluye a una solución de 1.5% y 0.1%. Las muestras de hojas se remueven de las plantas como un control "no inducido". Las piezas de las hojas se muelen en 200µl de Tris pH8.0 250mM, se centrifugan y el sobrenadante se recupera y almacena a 4°C durante la noche. Se aplican 5ml de solución al suelo de cada una 5 de las 2 plantas como tratamientos por duplicado como un drenado de raíz. Después de 22 y 65 horas se remueven las muestras de hoja de cada una de las dos plantas tratadas, se extraen como se describe en el Ejemplo 1 y los sobrenadantes se almacenan a 4°C. Las muestras se analizan para cuantificación de proteína CAT 0 mediante la utilización del equipo CAT ELISA de Boehringer Mannheim y se determina la concentración de proteína total por el • método de determinación de Bradfor. Los compuestos probados y los resultados se muestran en la Tabla 3, en donde las calificaciones de CAT representan los valores que se establecen con respecto a la Tabla 2.
Tabla 3 Ejemplo 3 Determinación del curso en el tiempo de la expresión de la conmutación después de inducción Con el fin de determinar el curso en el tiempo de la expresión del conmutador ale después de inducción a partir de los esteres, se aplican varios compuestos al suelo o las hojas de 30 plantas de homocigotas de alccat de 5 semanas de edad en recipientes de 1.5" en el invernadero. Los compuestos se disuelven a acetona 50%, dH20 50% con tween-20 0.05% ya sea como una solución de 150mg/ml o 50mg/ml. Después de diluyen 1/10 para una solución de 1.5% o 0.5%. Las muestras de hoja se remueven de las plántulas como un control "no inducido" . Las piezas de las hojas se congelan en hielo seco/etanol y se almacenan a -70 °C. Se aplican 5ml de la solución ya sea como drenado de raíz o la aspersión de la hoja hasta 8 plantas. Se remueven muestras de las hojas en diversos puntos en el tiempo y se congelan en hielo seco/etanol y se almacenan a -70 °C. Cuando todas las muestras se cosechan y almacenan se extraen en 200µl de Tris pH8.0, 250mM, se centrifuga y el sobrenadante se recupera y almacena a 4°C durante la noche. Las muestras se analizan para cuantificación de proteína cat mediante la utilización del equipo Elisa CAT Elisa de Boehringer Mannheim y se determina la concentración de proteína total por la determinación de Bradford. Los compuestos probados y los resultados se muestran en las Tablas 4, 5, 6, 8, 9 y 10. Las unidades CAT son como se establecen en lo anterior en el Ejemplo 1 con cada número sucesivo representando un incremento en el intervalo de 5,000ng/g. Los resultados que se muestran en forma sombreada se obtienen en ensayos separados pero similares . Tabla 4 Tabla 5 Tabla 6 Tabla 7 Tabla 8 Tabla 9 Tabla 10 Estos resultados muestran que el curso en el tiempo de la inducción se puede alterar mediante la utilización de esteres de acuerdo con la invención, en comparación con los alcoholes.
Por lo tanto, una selección apropiada del éster puede llevar a un perfil de inducción favorecido.

Claims (18)

REIVINDICACIONES
1. El uso de un éster hidrolizable agrícolamente aceptable diferente de ?-butirolactona, en el control de expresión de un gen vegetal, el control es efectuado por un promotor inducible el cual requiere para activación la presencia de una sustancia química hexógena la cual puede comprender un alcohol, en donde la hidrólisis del éster agrícolamente aceptable resulta en la producción de tal alcohol.
2. El uso como se describe en la reivindicación 1, en donde el éster hidrolizable agrícolamente aceptable es un compuesto de fórmula (I) ( i : En la cual R1 es un grupo alquilo inferior y R2 es un grupo orgánico el cual proporciona un ácido agrícolamente aceptable de fórmula R2C00H cuando se somete a hidrólisis; y el promotor requiere la presencia de un alcohol de fórmula (II) R HO' (II) Para activación del mismo.
3. El uso como se describe en la reivindicación 2, caracterizado porque el compuesto de fórmula (II) es un alcohol alquílico inferior en donde el grupo alquilo R1 tiene de 1 a 4 átomos de carbono y puede ser ramificado o lineal.
4. El uso como se describe en la reivindicación 2 o la reivindicación 3, caracterizado porque R2 es alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heterociclilo opcionalmente sustituido.
5. El uso como se describe en la reivindicación 4, en donde R2 es un grupo alquilo de 1 a 10 átomos de carbono opcionalmente sustituido.
6. El uso como se describe en la reivindicación 5, en donde R2 está sustituido por un grupo alcoxicarbonilo o dialquilacetal.
7. El uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el compuesto de fórmula (I) es 2-n-pentil-3-oxobutanoato de etilo, 2-carboxiheptan-l, 7-dioato de trietilo o 2 , 4-dimetoxibenzoato de etilo.
8. Un método para controlar la expresión de un gen objetivo en una planta, en donde la planta se transforma con un cassette de expresión de gen vegetal inducible químicamente que comprende un primer promotor unido operativamente a una secuencia reguladora la cual codifica para una proteína reguladora, y un promotor inducible unido operativamente a un gen objetivo, el promotor inducible es activado por la proteína reguladora en presencia de un alcohol, el método comprende aplicar a la planta un éster hidrolizable agrícolamente aceptable diferente de ?-butilrolactona, el cual proporciona el alcohol cuando se somete a hidrólisis del mismo, de manera que provoca la expresión del gen objetivo.
9. El método como se describe en la reivindicación 8, en donde la secuencia reguladora codifica para la proteína alcR como se describe antes y el promotor inducible es la secuencia promotora de alcA.
10. Un método como se describe en la reivindicación 8 y la reivindicación 9, en donde la planta se transforma de manera que expresa o sobreexpresa una enzima o anticuerpo catalítico o un fragmento catalíticamente activo de la misma, el cual hidroliza el éster para formar el alcohol.
11. Un sistema de expresión de gen vegetal, que comprende: (i) un primer promotor unido operativamente a una secuencia reguladora la cual codifica para una proteína reguladora, (ii) un promotor inducible unido operativamente a un gen objetivo, el promotor inducible es activado por la proteína reguladora en presencia de un alcohol inductor hexógeno efectivo, por lo que la aplicación del alcohol provoca la expresión del gen objetivo; y (iii) una secuencia la cual codifica para una proteína la cual lleva a cabo la hidrólisis de un éster, bajo el control de un promotor adicional el cual permite su expresión en un tejido vegetal.
12. Una célula vegetal que contiene un gen el sistema de expresión de gen, como se describe en la reivindicación 11.
13. Un tejido vegetal o una planta que comprende células como se describen en la reivindicación 12, y plantas o semillas derivadas de la misma, que contiene un sistema de expresión de gen como se describe en la reivindicación ll.
14. Una composición agrícola, que comprende un éster agrícolamente aceptable como se define en la reivindicación l, en combinación con un diluyente o portador.
15. Una composición como se describe en la reivindicación 14, en donde el éster agrícolamente aceptable es un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 2.
16. Una composición como se describe en la reivindicación 14 o la reivindicación 15, la cual comprende además un emulsificante.
17. Una composición como se describe en la reivindicación 16, en donde el emulsificante es PVA.
18. Un método para controlar la expresión de un gen objetivo en una planta, en donde la planta se transforma con un cassette de expresión de gen vegetal inducible químicamente que comprende un primer promotor unido operativamente a una secuencia reguladora la cual codifica para una proteína reguladora y un promotor inducible unido operativamente a un gen objetivo, el promotor inducible es activado por una proteína reguladora en presencia de una alcohol, y en donde la planta se transforma además de manera que expresa o sobreexpresa una enzima o anticuerpo catalítico o un fragmento catalíticamente activo del mismo, el cual hidroliza un éster para formar un alcohol, el método comprende aplicar a la planta un éster hidrolizable agrícolamente aceptable el cual proporciona al alcohol cuando se somete a hidrólisis del mismo, de manera que provoca la expresión del gen objetivo.
MXPA01007613A 1999-02-01 1999-12-22 Sistema de expresion inducible para uso en plantas. MXPA01007613A (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9902234.5A GB9902234D0 (en) 1999-02-01 1999-02-01 Expression system
PCT/GB1999/004348 WO2000044917A1 (en) 1999-02-01 1999-12-22 Inducible expression system for use in plants

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MXPA01007613A true MXPA01007613A (es) 2003-06-24

Family

ID=10846913

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MXPA01007613A MXPA01007613A (es) 1999-02-01 1999-12-22 Sistema de expresion inducible para uso en plantas.

Country Status (14)

Country Link
EP (1) EP1151120A1 (es)
JP (1) JP2002535971A (es)
KR (1) KR20020013493A (es)
CN (1) CN1338000A (es)
AR (1) AR022196A1 (es)
AU (1) AU1875700A (es)
BR (1) BR9917010A (es)
CA (1) CA2362551A1 (es)
GB (1) GB9902234D0 (es)
HU (1) HUP0300948A2 (es)
ID (1) ID24805A (es)
IL (1) IL144535A0 (es)
MX (1) MXPA01007613A (es)
WO (1) WO2000044917A1 (es)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9918154D0 (en) * 1999-08-02 1999-10-06 Zeneca Ltd Expression system
JP2004535774A (ja) * 2001-02-13 2004-12-02 シンジェンタ リミテッド 遺伝子発現における使用に適した制御要素
WO2008013622A2 (en) * 2006-07-27 2008-01-31 E. I. Du Pont De Nemours And Company Fungicidal azocyclic amides
US9434953B2 (en) 2011-01-18 2016-09-06 Syngenta Participations Ag Methods and compositions for modified ethanol inducible promoter systems

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69331055T2 (de) * 1992-04-13 2002-06-20 Syngenta Ltd., Haselmere Dna-konstruktionen und diese enthaltende pflanzen
GB9516241D0 (en) * 1995-08-08 1995-10-11 Zeneca Ltd Dna constructs

Also Published As

Publication number Publication date
BR9917010A (pt) 2002-01-22
HUP0300948A2 (hu) 2003-08-28
CN1338000A (zh) 2002-02-27
GB9902234D0 (en) 1999-03-24
KR20020013493A (ko) 2002-02-20
CA2362551A1 (en) 2000-08-03
EP1151120A1 (en) 2001-11-07
JP2002535971A (ja) 2002-10-29
WO2000044917A1 (en) 2000-08-03
AR022196A1 (es) 2002-09-04
IL144535A0 (en) 2002-05-23
AU1875700A (en) 2000-08-18
ID24805A (id) 2000-08-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5639794A (en) Use of saponin in methods and compositions for pathogen control
JPH11510694A (ja) Ｄｎａ構築体
JPH11501295A (ja) 消耗製品における有毒代謝産物レベルの調節
EP4032976A1 (en) Mutant hydroxyphenylpyruvate dioxygenase polypeptide, encoding gene thereof and use thereof
EP0532650B1 (en) Method of inducing plant defense mechanisms
Switzenberg et al. Effect of CRC:: etr1-1 transgene expression on ethylene production, sex expression, fruit set and fruit ripening in transgenic melon (Cucumis melo L.)
CN114854702B (zh) 除草剂耐受性蛋白质、其编码基因及用途
MXPA01007613A (es) Sistema de expresion inducible para uso en plantas.
CN112553222B (zh) 一种辣椒耐热基因及其应用
JPH05503010A (ja) 植物におけるエチレン生合成の遺伝子制御
DE19754929A1 (de) Verfahren zur Herstellung transgener Pflanzen mit veränderter 5-Aminolävulinsäure-Biosynthese und Verfahren zur Identifizierung von Effektoren der 5-Aminolävulinsäure Synthese
JP2005533498A (ja) 生物的及び非生物的ストレスに耐性のトランスジェニック植物の作出に関する特殊なＭｙｂ遺伝子の使用
US6559364B1 (en) Pre- and postharvest inhibition of remobilisation of storage compounds
US20060073560A1 (en) Selective expression in filamentous fungi
MXPA01007474A (es) Uso de una formulacion para controlar la expresion de un gen objetivo.
Ano et al. BIO-DETERIORATION OF CASSAVA (Manihot esculenta) ROOTS, CAUSES AND APPLIED MANAGEMENT TECHNIQUES: A REVIEW.
Okcu et al. Changes in chemical composition and peroxidase activity of turnip (Brassica rapa) during processing and frozen storage
EP4339290A1 (en) Use of protoporphyrinogen oxidase
JP5825593B2 (ja) 植物耐熱性誘導剤
Sridhar et al. Chapter-7 Transgenic Assisted Fruit Crop Improvement
US6958311B2 (en) Flowering regulators
CN117987387A (zh) 植物als双位点突变基因、其编码蛋白及其应用
IL313168A (en) Mutated hydroxyphenylpyruvate dioxygenase polypeptide and encoding gene and its use
Switzenberg et al. Effect of carpel primordia-targeted inhibition of ethylene perception on sex expression, fruit set, and fruit ripening in melon (Cucumis melo L.).
CN118434874A (zh) 原卟啉原氧化酶的用途