MXPA01001327A - Extractos de matricaria (tanacetum parthenium) contra trastornos inflamatorios. - Google Patents

Abstract

Esta invencion se refiere a un metodo para tratar y prevenir trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas utilizando un extracto de matricaria; de manera particular, la invencion incluye un metodo para tratar y prevenir trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas que comprende aplicar a un paciente una composicion topica que contiene una cantidad efectiva de un extracto de matricaria y un metodo para tratar y prevenir los trastornos inflamatorios y las condiciones relacionadas de la piel aplicando a un paciente una composicion topica que contiene una cantidad efectiva de un extracto de matricaria; ademas la invencion incluye un metodo para tratar y prevenir los trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas aplicando a un paciente una composicion topica que contiene una cantidad efectiva de un extracto de matricaria en el cual dicho extracto esta sustancialmente libre de gamma-lactona alfa-insaturada.

Description

EXTRACTOS DE MATRICARIA (TANACETUM PARTHENIUM) CONTRA TRASTORNOS INFLAMATORIOS CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere al tratamiento tópico y la prevención de trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas usando extractos de matricaria (Tanacetum parthenium). 0 ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Tanacetum parthenium, una planta comúnmente conocida como matricaria, ha sido reconocida desde la edad media como poseedora de propiedades medicinales importantes cuando es tomada oralmente - ha sido tz I J usada como febrífuga de ahí su nombre común. Muchos han aislado extractos de la planta y esos extractos han sido usados para el tratamiento oral de migraña, artritis, y dolores bronquiales, (ver Johnson et al, patente de E.U.A. 4,758,433, que discute el tratamiento de una variedad de enfermedades mediante la administración oral, por inhalación, inyección o supositorios del 0 extracto y ver WO 94 06800, que discute sobre un extracto de matricaria que contiene partenólido). Los extractos de matricaria contienen muchos componentes. Aunque no todos los componentes han sido aislados y caracterizados, los componentes conocidos de un extracto de matricaria contienen un número significativo de compuestos biológicamente activos. Hasta la fecha, los constituyentes químicos de un extracto de matricaria total son los siguientes: apigenin-7-glucósido, apigenin-7-glucurónido, 1-ß-hidroxilarbusculina, 6-hidroxikaempferol-3,7-4'-trimetiléter (Tanetina), éter 6-hidroxikaempferol-3,7-dimetílico, 8-ß-reinosina, 10-epicanina, ácido ascórbico, beta-caroteno, calcio, cromio, crisantemólido, crisantemomina, crisarten-A, crisarten-c, crisoeriol-7-gfucorónido, cobalto, cosmosina, epoxiartemorina, luteolin-7-glucósido, Ieutolin-7-glucurónido, mangnoliólido, partenólido, quercetagetin-3,7,3'-tri etiléter, quercetagetin-SV-dimetiléter, reinosina, tanapartina, tanapartina-1a,4a-epoxido, tanapartina-1 ß,4ß-epóxido, ß-costrunólido, 3-ß-hidroxi-partenólido, y 3,7,3'-trimetox¡quercetagetina. El papel especifico que cada uno de estos componentes del compuesto juegan en la actividad biológica de la matricaria se desconoce hasta la fecha. Sin embargo, se tiene alguna información acerca de las reacciones alérgicas al extracto. Se cree que muchas de estas reacciones alérgicas son causadas por las ?-lactonas a-insaturadas tales como partenólido (ver, Arch. Dermatol. Forsch, 1975, 251 (3): 235-44; Arch. Dermatol. Forsch 1976,255 (2): 111-21 ; Contact Dermatitis, 1988, 38 (4): 207-8; Am. J. Contact Dermatol. 1998-9 (1): 49-50; Br. J. Dermatol, 1995, 132 (4): 543-47). A pesar de la existencia de los métodos orales para usar los extractos de matricaria, no hay métodos definidos para el uso tópico de estos extractos para tratar o prevenir los trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas. Además, no hay enseñanzas que describan el uso de un extracto de matricaria que no contiene las ?-lactonas a-insaturadas que causan la alergia. Hay dos áreas a las cuales se aplica esta invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Esta invención se relaciona a un método para tratar o provenir los trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas usando un extracto de matricaria. Más particularmente, la invención incluye un método para tratar o prevenir los trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas mediante la aplicación de una composición tópica que contiene una cantidad efectiva de un extracto de matricaria a un paciente. El método de esta invención incluye un método para tratar o prevenir los trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas de la piel mediante la aplicación de una composición tópica que comprende una cantidad efectiva de un extracto de matricaria a un paciente. Aún más, la ¡nvención incluye un método para tratar y prevenir los trastornos inflamatorios y las condiciones relacionadas mediante la aplicación de una composición tópica que contiene una cantidad efectiva de un extracto de matricaria a un paciente en donde dicho extracto está substancialmente libre de ?-lactona a-insaturada. Además, la invención incluye un método para tratar y prevenir los trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas de la piel mediante la aplicación de una composición tópica que contiene una cantidad efectiva de un extracto de matricaria a un paciente en donde dicho extracto está substancialmente libre de ?-lactonas a-insaturadas.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Esta invención incluye un método para tratar y prevenir los trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas mediante la aplicación de una composición tópica que contiene una cantidad efectiva de un extracto de matricaria a un paciente. Los trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas que pueden ser tratadas o prevenidas mediante el uso tópico de composiciones de esta invención incluyen, pero no están limitadas a las siguientes: artritis, bronquitis, dermatitis por contacto, dermatitis atópica, psoriasis, dermatitis seborreica, eczema, dermatitis alérgica, ligeras erupciones polimórficas, dermatosas inflamatorias, foliculitis, alopecia, hiedra venenosa, picadura de insectos, acné inflamatorio, irritación inducida por factores extrínsecos que incluyen, pero no están limitados a, químicos, trauma, contaminantes (tales como el humo de cigarrillo) y la exposición al sol, condiciones secundarias resultantes de la inflamación que incluyen pero no están limitadas a xerosis, hiperqueratosis, prurito, hiperpigmentación post-inflamatoria, cicatrizado y similares. Preferiblemente, los trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas que pueden ser tratadas o prevenidas usando los métodos de la ¡nvención son artritis, dermatosis inflamatorias, dermatitis por contacto, dermatitis alérgica, dermatitis atópica, erupciones ligeras polimórficas, irritación, incluyendo el eritema inducido mediante factores extrínsecos, el acné inflamatorio, psoriasis, dermatitis seborreica, eczema, hiedra venenosa, mordedura de insectos, foliculitis, alopesia, y condiciones secundarias y similares. "Matricaria" es una planta que pertenece a la familia de Asteraceae/Composite conocida técnicamente como, Tanacetum parthenium, Altamisa, Crisanthemum, Leucanthemum, o Pyrethrum parthenium. El término "cantidad efectiva" se refiere al porcentaje en peso de un extracto de matricaria en su composición tópica que es necesario para tratar un trastorno inflamatorio o condiciones relacionadas en un paciente. Preferiblemente la cantidad efectiva está entre 0.0005 a 20% en peso de la composición. Más preferiblemente, ¡a concentración debe ser menos de alrededor del 10% en peso de la composición tópica. Aún más preferiblemente entre 0.001 % y alrededor de 10% y más preferiblemente entre 0.01 y alrededor de 2%. El termino "paciente" se refiere a un mamífero que se trata profilácticamente para una condición inflamatoria y/o para una condición inflamatoria con síntomas visibles. Preferiblemente el paciente es un humano. Además, la invención incluye un método para tratar y prevenir los trastornos inflamatorios y las condiciones relacionadas de la piel mediante la aplicación de una composición tópica que contienen una cantidad efectiva para un extracto de matricaria a un paciente.

Los términos trastorno inflamatorio y condiciones relacionadas, matricaria, cantidad efectiva y paciente, tienen los significados anteriormente mencionados. El término "piel"Jncluye todas las superficies de un paciente, ? tales como la piel expuesta o las superficies cubiertas por pelo. La invención también incluye un método para tratar y prevenir los trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas que comprenden la aplicación de una composición tópica que comprende una cantidad efectiva de un extracto de matricaria a un paciente en donde dicho extracto está privado de ? lactona a-insaturada. Los términos, trastorno inflamatorio y condiciones relacionadas, matricaria, cantidad efectiva y paciente tienen los significados anteriormente mencionados. El término "substancialmente libre de ? lactona a-insaturada", se refiere a un extracto de matricaria que tiene un contenido por peso de ? lactonas a-insaturadas que se encontraron en los extractos de matricaria natural de menos de alrededor de 0.2% en peso. Las ? lactonas a-insaturadas incluyen pero no están limitadas al partenólido (?-lactona de [ácido 1aR-(1aR*, 4E,7aS*, 10aS*, 10bR*)]2,3,4,7,7a,8,10a,10b-octahidro-1a,5-dimetil-8-4,5a-epoxi-6ß-hidroxi-germacra-1 (10),11 (13)-dien-12-oico), 3ß-hidroxi-partenólido, 3-ß-constunólido, artemorina, 8-a-hidroxi-estafiatina, crisantemólido, magnoliólido, tanapartina, tanapartina-1a, 4a-epóxido, tanapartina-1 ß, 4ß-epóxido, crisantemonina, y otros sesquiterpenos. Preferiblemente, el extracto de matricarias tiene un contenido por peso de ? lactona a-insaturada menor a 0.2. preferiblemente la ? lactona a-insaturada es un partenólido. El método para preparar este extracto carente de partenólido se describió en una solicitud de patente italiana (MI99A001244, presentada en junio, 1999) la cual se encuentra aquí incorporada como referencia. Puesto que las ? lactonas a-insaturadas causan algunas de las reacciones alérgicas de los extractos de matricaria, se espera que las composiciones tópicas hechas de extractos carentes de ? lactona a-insaturada no sean irritantes. Esta ¡nvención también incluye un método para tratar los trastornos inflamatorios y las condiciones relacionadas de la piel mediante la aplicación de una composición tópica que comprende una cantidad efectiva de un extracto de matricaria a un paciente en donde dicho extracto está substancialmente libre de ? lactona a-insaturada. Los términos trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas, matricaria, cantidad efectiva, paciente, piel y carente de ? lactona a-insaturada tienen los significados anteriormente mencionados. Además de los extractos de matricaria, otras sustancias, tales como agentes biológicamente activos, excipientes farmacéuticos, y agentes cosméticos pueden ser incluidos en la composición tópica de esta ¡nvención. Los agentes biológicamente activos pueden incluir, pero no están limitados a, compuestos flavonoide/flavona que incluyen pero no están limitados a tanetina, 3,7,3'-trimetoxiquercetagetina, apigenina y sus derivados. Cuando los compuestos flavonoide/flavona se encuentran presentes, éstos se presentan en concentraciones de entre alrededor de 0.001 % a aproximadamente 0.5% preferiblemente, entre alrededor de 0.005% y 0.2% basado en el peso de la composición tópica. Agentes biológicamente activos adicionales incluyen pero no están limitados a protectores solares, agentes anti-arrugas/anti-edad, agentes antifungales, agentes antibióticos, agentes anti-acné y agentes antipsoriáticos, agentes depigmentadores, donde dichos agentes pueden ser usados en tanto sean compatibles físicamente y químicamente con los otros compuestos de la composición tópica. Las composiciones de esta invención pueden incluir activos de la piel adicionales. Los activos pueden ser pero no están limitados a compuestos de vitaminas. Loe agentes de alivio para la piel (ácido cójico, ácido ascórbico y derivados íales como el palmitato de ascorbilo, y similares); agentes anti-oxidantes tales como el tocoferol y esteres; queladores metálicos, retinoides y derivados, agentes humectantes, hidroxiácidos tales como el ácido salicílico, protectores solares como el octilmetoxicinamato, oxibenzona, avobenzona, y similares, bloqueadores solares como el óxido de titanio y óxido de zinc, y protectores de la piel. Se pueden usar las mezclas de los activos de la piel anteriormente mencionados. Los protectores solares que pueden ser usados en la composición de esta ¡nvención pueden incluir pero no están limitados a protectores solares orgánicos o inorgánicos, tales como, octilmetoxicinamato y otros compuestos de cinamato, dióxido de titanio, óxido de zinc y similares.

Los agentes anti-arrugas/anti-envejecimiento pueden incluir pero no están limitados a retinoides (por ejemplo, ácido retinoico, retinol, retinal, acetato de retinilo, y palmitato de retinilo), alfa-hidroxiácidos, azúcares galactosa (por ejemplo, melibiosa y lactosa), antioxidantes, incluyendo pero no limitados a antioxidantes solubles en agua tales como compuestos sulfhidrilo y sus derivados (por ejemplo, metabisulfito de sodio y N-acetil-cisteína, acetil-cisteína), ácido lipoico y ácido dihidrolipoico, resveratrol, lactoferina, ácido ascórbico y derivados del ácido ascórbico (por ejemplo palmitato de ascorbilo y polipéptido de ascorbilo). Los antioxidantes solubles en aceite adecuados para uso en las composiciones de esta invención incluyen, pero no están limitados a tocoferoles (por ejemplo, acetato de tocoferilo, a-tocofercl), tocotrienoles y ubiquinona. Los extractos naturales que contienen antioxidantes adecuados para uso en las composiciones de esta invención, incluyen, pero no están limitados a extractos que contienen flavonoides, compuestos fenólicos, flavonas, flavanonas, isoflavonoides, mono, di- y tri-terpenos, esteróles y sus derivados. Los ejemplos de dichos extractos naturales incluyen simiente de uva, té verde, corteza de pino y extractos de propóleos y extractos de legumbres y similares. Los agentes antifungales incluyen pero no están limitados a la miconazol, econazol, cetoconazol, itraconazol, fluconazol, bifoconazol, terconazol, butoconazol, tioconazol, oxiconazol, sulconazol, saperconazol, clotrimazol ácido undecilénico, haloprogina, butenacina, tolnaftato, nistatina, olamina ciclopirosa, terbinafina, amorolfina, naftifina, elubiol, griseofulvina, y sus sales farmacéuticamente aceptables. Los antibióticos (o agentes antisépticos) incluye pero no están limitados a mupirocina, sulfato de neomicina, bacitracina, polimixina B, /-ofloxacina, tetraciclinas (clorhidrato de clortetraciclina, clorhidrato de oxitetraciclina y clorhidrato de tetraciclina), fosfato de clindamicina, sulfato de gentamicina, cloruro de benzalconium, cloruro de benzetonio, hexilresorcinol, cloruro de metilbenzetonio, fenol, compuestos de amonio cuaternario, triclocarbón, triclosan, aceite del árbol del té, peróxido de benzoilo y sus sales farmacéuticamente aceptables. Los ingredientes para el acné incluyen pero no están limitados a agentes que normalizan la diferenciación epidemial (es decir retinoides), agentes queratolíticos (es decir ácido salicílico y alfa-hidroxiácidos), peróxido de benzoilo, antibióticos y compuesto o extractos de plantas que regulan en sebo. Los agentes antipsoriáticos incluyen pero no están limitados a corticosteroides (es decir dipropionato de betametasona, valerato de betametasona, propionado de clobetasol, diacetato de diflorasona, propianato de halobetasol, amcinonida, desoximetasona, fluocinonida, acetónido de fluocinolona, halcinonida, acetato de triamcinolona, hidrocortisona, valerato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, dipropionato de aclometasona, flurandrenólido, furoato de mometasona, acetato de metilprednisolona), vitamina D y sus análogos (es decir calcipotrieno), retinoides (es decir, tazaroteno) y antralina. Los agentes cosméticos que pueden ser usados en la composición de esta ¡nvención pueden ¡ncluir, pero no están limitados a aquellos agentes que previenen la irritación potencial de la piel, tales como emolientes, vitaminas y antioxidantes (es decir vitamina E) y extractos herbales (es decir Aloe vera). Además, los agentes cosméticos pueden ¡ncluir humectantes, antioxidantes/conservadores, extractos de plantas, saborizantes, fragancias, agentes activos de superficie, y similares. Los ejemplos de humectantes incluyen glicerol, sorbitol, propilenglicol, etilenglicol, 1,3-butilengliol, polipropilenglicol, xilitol, maltitol, lactitol, prcteína de avena, alantoína, MEA acetamina, ácido hialurónico y similares. Pueden ser usados ya sea individualmente o en combinación. Los agentes cosméticos también pueden incluir sustancias que enmascaran los síntomas de los trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas; dichas sustancias incluyen pero no están limitadas a pigmentos, colorantes y otros aditivos (es decir sílica, talco, óxido de zinc, óxido de titanio, arcilla en" polvo). Los excipientes farmacéuticos incluyen pero no están limitados a agentes modificadores del pH tales como agentes que modifican el pH, solventes orgánicos (es decir propilenglicol, glicerol, etc.), alcohol cetílico, caolina, talco, óxido de zinc, óxido de titanio, almidón de maíz, gluconato de sodio, aceites (es decir aceite mineral), ceteareth-20, ceteth-2, surfactantes y emulsificantes, espesadores (o aglutinantes), perfumes, antioxidantes, conservadores, y agua. Los aglutinantes o espesadores pueden ser usados en la composición de esta invención para proveer estabilidad física y sustentar las composiciones. Los aglutinantes o espesadores adecuados para uso en las composiciones de esta invención incluyen derivados de celulosa tales como sales de metales alcalino de carboximetilcelulosa, metilcelulosa, hidroxietilcelulosa y carboximetilhidroxietilcelulosa sódica, alginatos de metal alcalino tales como el alginato sódico, alginato de propilenglicol, gomas tales como carragenano, goma de xantano, goma tragacanto, goma Karaya y goma arábiga, y aglutinantes sintéticos tales como ei alcohol polivinílico, el acrilato polisódico y la polivinilpirrolidona. Los espesadores tales como las gomas naturales y los polímeros sintéticos, así como los agentes colorantes y las fragancias también se incluyen comúnmente en dichas composiciones. Los ejemplos de los conservadores que pueden ser usados en las composiciones de esta invención incluyen, pero no están limitados a, ácido salicílico, clorhidrato de clorhexidina, fenoxietanol, benzoato de sodio, parahidroxibenzoato de metilo, parahidroxibenzoato de etilo, parahidroxíbenzoato de propilo, parahidroxibenzoato de butilo y similares. Los ejemplos de los saborizantes y fragancias que pueden ser usados en las composiciones de esta invención incluyen metanol, anetol, carvona, eugenol, limoneno, ocimeno, n-decilalcohol, citronelol, a-terpineol, metilsalicilato, acetato de metilo, acetato de citronenilo, cineola, linalool, etil- linalool, vanilina, timol, aceite de yerbabuena, aceite de menta, aceite de limón, aceite de naranja, aceite de salvia, aceite de romero, aceite de canela, aceite de pimiento, aceite de la hoja de canela, aceite de piróla, aceite de clavo, aceite de eucalipto y similares. Las composiciones de la presente invención pueden ser preparadas en una variedad de formas para la aplicación tópica a un paciente. Por ejemplo, la composición puede ser aplicada en gel, crema, ungüento, champú, acondicionadores para el cuero cabelludo, líquidos, líquido en aspersión, preparaciones de pintura/de cepillado, aerosol, polvo o vendaje adhesivo. Además la composición puede ser impregnada en vendas, vendajes hidrocoloides, tratamientos en parche o en productos de telas húmedas, tales como toallas para bebé o toallas faciales. Las composiciones de esta invención pueden estar en forma de emulsiones, tales como cremas, lociones y similares. Dichas composiciones pueden tener más de una fase y pueden incluir agentes activos de superficie que permitan la fabricación de emulsiones multifases. Ejemplos de los agentes activos de superficie que pueden ser usados en las composiciones de esta ¡nvención incluyen alquilsulfato de sodio, es decir, laurilsulfato de sodio y miristiisulfato de sodio, N-acilsarcosinato de sodio, es decir, N-iauroilsarcosinato de sodio y N-miristoilsarcosinato de sodio, dodecilbencensulfonato de sodio, sulfato de monoglicérido de ácido graso de coco hidrogenado sódico, laurilsulfoacetato de sodio y N-acilglutamatos, es decir, N-palmitoilglutamato, sales sódicas de N-metilaciltaurina, sales sódicas de N-metilacilalanina, sulfonato sódico de a-olefina y dioctilsulfosuccinato sódico; N-alquilaminogliceroles, es decir, N-laurildiaminoetilglicerol y N-miristildiaminoetilglicerol, N-alquil-N-carboximetilamoniobentaína y bentaína sódica 2-alquil-1-hidroxietilimidazol¡na; polioxietilenalquiléter, éter de polioxietilenalquilarilo, alcohol de polioxietilenlanolina, éster de ácido monoalífático de polioxietilenglicerilo, éster de ácido alifático de polioxietilensorbitol, éster de ácido alifático de polioxietileno, éster de glicerol de ácidos alifáticos mayores, éster de ácido alifático de sorbitán, agentes activos de superficie tipo Plurónico, y esteres de ácido alifático polioxietilensorbitán tales como el monooleato de polioxietilensorbitáno y el monolaurato de polioxietilensorbitán. Los emulsificantes tipo surfactantes conocidos por los expertos deben ser usados en las composiciones de esta invención. Otro ingrediente importante de la presente ¡nvención es un portador dermatológicamente aceptable. Dicho portador conveniente es adecuado para el uso tópico. No es sólo compatible con los ingredientes activos descritos anteriormente, si no que además no introducirá ninguna toxicidad o problemas de seguridad. Una portador efectivo y seguro varía de alrededor de 50% a 99% en peso de la composición de esta invención, más preferiblemente de 75% a 99% de la composición y más preferiblemente de 85% a 95% en peso de la composición. La elección de qué excipiente farmacéutico o agente biológico, o agente cosmético será usado frecuentemente se controla o afecta por el tipo de trastorno inflamatorio o condición relacionada que está siendo tratada. Por ejemplo, si la composición de esta invención se usa para tratar la inflamación de piel asociada con pie de atleta, comezón en la ingle o salpullido por uso de pañal, el talco podría ser un excipiente farmacéutico preferible y los agentes antifungales podrian ser los agentes biológicos preferidos. Si las composiciones de esta invención se usan para tratar eczema del cuero cabelludo, los emulsificantes y aceites podrían ser los excipientes farmacéuticos preferidos. La condición de la dermatitis por contacto puede ser tratada mediante la aplicación de una composición tópica que comprende un extracto de matricaria en donde dicho extracto tiene 1% de matricaria la cual es substancialmente libre de partenólidos, es decir, la concentración de partenólidos de dicho extracto es <0.1%. Debido a la concentración extremadamente baja de partenólidos en dicho extracto de matricaria, una composición tópica hecha de este extracto no será irritante. Los siguientes ejemplos son ilustrativos, pero no sirven para limitar el alcance de la ¡nvención descrita aquí. Son mencionados solamente para sugerir un método para poner en práctica la invención. Los expertos en el tratamiento y prevención de trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas así como otras especialidades pueden encontrar otros métodos de poner en práctica la invención. Sin embargo esos métodos serán considerados dentro del alcance de esta ¡nvención.

EJEMPLO 1 Preparación de matricaria que es substancialmente libre de partenólido Dos kilogramos de Tanacetum parthenium fueron extraídos a 50-60°C con 20 L de metanol acuoso al 70%. El extracto se concentró bajo vacío hasta alrededor de 1 L y se diluyó con un volumen igual de metanol. La solución resultante se extrajo con 3 x 2 litros de n-hexano. El extracto de hexano se evaporó hasta secarlo bajo condiciones de vacío lo cual dio un rendimiento de alrededor de 30 g de residuo (extracto H). La solución metanólica de agua se extrajo con 2 x 0.5 L de cloruro de metileno. La fase orgánica se evaporó hasta secarla bajo condiciones de vacío lo cual dio un rendimiento de alrededor de 70 g de residuos (extracto DCM). La fase metanólica acuosa (extracto HM) se dejó a un lado. El extracto DCM se disolvió en 0.6 L de metanol al 90% y se trató bajo agitación con 0.6 I de una resina básica fuerte (Relite 2 A) durante 3-4 horas. La suspensión se filtró bajo vacío y la resina se lavó con alrededor de 2 I de metanol al 90%. La solución metanóíica, que contenía partenólido y sus congéneres, se removió. La resina básica se trató entonces bajo agitación durante 1 hora con 0.6 I de metanol que contenía 65 mL ácido hidroclorhídrico concentrado. La resina se filtró bajo condiciones de vació y se lavó con 2.5 I de metanol. El filtrado y los lavados se combinaron, concentraron bajo vacío hasta 200 ml y se extrajeron con 3 x 200 ml de acetato de etilo. El extracto resultante (E.A.), que contenía los componentes de flavona, la tanetina y sus congéneres, se evaporó hasta secarlo bajo vacío, para obtener alrededor de 4 g de residuos. Los residuos del extracto H y E.A. se combinaron con el extracto HM. La solución resultante se evaporó hasta secarla bajo vacío y el residuo sólido se secó bajo vacío a 50°C a un peso constante. Alrededor de 490 g del extracto de T Parthenium departenolidizada se obtuvieron los cuales mostraron, mediante análisis por CLAR, (columna Zorbax SB C18; eluyente H2O + 0.01% TFA; B:MeCN + 0.01 % TFA; gradiente A:B:90%-10%:10%-90%; flujo 1 ml/min), un contenido de partenólido debajo del 0.07%.

EJEMPLO 2 Inmunomodulación de leucocitos sanguíneos periféricos La capacidad de la matricaria y de la matricaria libre de partenólido para afectar las respuestas inflamatorias se ¡lustró por su capacidad para reducir la producción de función linfocitaria en los siguientes ensayos. La matricaria ("FFW") usada en este experimento se obtuvo comercialmente de Indena S.p.A. La matricaria libre de partenólido ("PFFW") se obtuvo usando el método del ejemplo 1. Se colectaron leucocitos humanos de adultos sanos de sexo masculino por leucoforesis, y se ajustaron a una densidad de 1x106 células/mL en medio de cultivo para linfocitos libre de suero (LGM-2, Clonetics Corporation, San Diego, CA). Los PBLs fueron estimulados con 10 µg/mL PHA en presencia o ausencia de la muestra de prueba. Siguiendo ias 48 horas de incubación a 37°C con 5% de CO2l el sobrenadante se removió y se evaluó para su contenido de citocinas usando un equipo colorimétrico para ELISA disponible comercialmente. La proliferación se determinó usando alamarBIue™ (Alamar Biosciences, Sacramento, CA) después de 96 horas.

Ensavo de inhibición en la liberación de citocinas e IL (ICßg uq/mL) (en donde NE = no efectivo; NP = no probado; FFW matricaria; PFFW = matricaria substancialmente libre de partenólido, IL = interleucina (citocina); IFN = interferón; TNF factor de necrosis tisular; GM-CSF = factor estimulante de macrófagos y granulocitos) Basado en lo anterior, se puede ver que la matricaria substancialmente libre de partenólido fue capaz de modular la activación de linfocitos.

EJEMPLO 3 Evaluación en la línea celular de macrófagos RAW 264 Las células de macrófagos murinos RAW 264 se estimularon 24 horas mediante 1 µg/ml de LPS y 10 U/ml de IFN? en presencia o ausencia de los productos de prueba. Los nitritos, el producto terminal estable del óxido nítrico, se ensayó con la reacción de Griess y los niveles de PGE2 se evaluaron mediante ELISA. Los resultados se expresaron como el porcentaje de inhibición del mediador de producción inflamatoria en comparación con el cultivo control estimulado. La viabilidad celular se verificó con la prueba de reducción MTT.

Macrófagos murinos RAW 264 estimulados mediante LPS e IFNy (% de inhibición) FFW = matricaria, PGE2 = prostaglandina E2, NO = óxido nítrico.

Macrófagos murinos RAW 264 estimulados mediante LPS e IFNy (ICso µg/mL) FFW = matricaria que tiene 0.7% de partenólido, PFFW = matricaria libre de partenóiido que tiene menos de 0.1 % de partenólido, FLAV = matricaria que contiene 3% de partenólido y 26% de flavonoides (en donde el flavonoide individual es tanetina y 3,7,3'-trimetoxiquercetagetina que comprende 7% y 22% de la composición de flavonoide respectivamente), PGE2= prostaglandina E2, NO = óxido nítrico. Basándose en lo anterior, puede verse que el PFFW fue capaz de regular la cascada de señales de la respuesta inmune.

EJEMPLO 4 Evaluación sobre epidermis reconstituida El efecto de la matricaria substancialmente libre de partenólido se evaluó sobre la liberación de PGE2 de equivalentes de la epidermis humana. Los equivalentes epidérmicos (EPI 200 HCF) fueron adquiridos de MatTeK Corporation. Una vez recibidos, los equivalentes epidérmicos se incubaron durante 24 horas a 37°C en medio de mantenimiento sin hidrocortisona. Los equivalentes epidérmicos fueron pretratados durante 2 horas con 50 µl de producto de prueba, lavados y se le añadió PMA (1 µg/ml) al medio de cultivo. Los equivalentes se incubaron durante 24 horas a 37°C con medio de mantenimiento, se colectó el sobrenadante del cultivo y se evaluó para PGE2 y por ELISA. La viabilidad se evaluó con el ensayo MTT. Así, ser puede observar que tanto el extracto de matricaria y el PFFW regularon la cascada de señales de la producción de PGE2. (Figura 1 ) EJEMPLO 5 Inhibición de la hipersensibilidad al contacto por oxazolona Los siguientes experimentos se llevaron a cabo para probar el efecto de la matricaria y de la matricaria substancialmente libre de partenólido en ensayos de hipersensibilidad por contacto,. En este ensayo, las composiciones de la invención se evaluaron contra hidrocortisona, un esteroide que se sabe que inhibe la hipersensibilidad por contacto. Ratones CD-1 albinos machos, de 7-9 semanas de edad, fueron inducidos en el abdomen rasurado con 50 µL de 3% de oxazolona en aceite de maíz/acetona (día cero). Al día 5, un volumen de 20 µL 2% de oxazolona en acetona se aplicó a la oreja izquierda dorsal del ratón. Los compuestos de prueba se aplicaron a la oreja izquierda (20 µL) 1 hora después de la prueba con oxazolona en un vehículo de 70% etanol/30% propilenglicol. La oreja derecha no fue tratada. Los ratones se sacrificaron mediante inhalación con C02 24 horas después de la prueba con oxazolona, las orejas izquierda y derechas se removieron y se tomó una biopsia de 7 mm de cada oreja y se pesaron. Se calculó la diferencia en los pesos de las biopeias entre las orejas derecha e izquierda. Los efectos antiinflamatorios de los compuestos fueron evidentes como inhibiciones en el incremento del peso de las orejas.

Estudio de hipersensibilidad al contacto con oxazolona (% de inhibición) NP= No probado Así, se puede ver que FFW y PFFW son efectivos para inhibir la reacción a oxazolon.

EJEMPLO 6 Modelo de inhibición del edema en la oreja de ratón Los siguientes experimentos se llevaron a cabo para probar el efecto de la matricaria y de la matricaria substancialmente libre de partenólido en un ensayo de edema inducido por éster forbólico (TPA). En este ensayo, las composiciones de la invención se evaluaron contra hidrocortisona y dexametasona, esteroides que se saben que muestran eficacia en este modelo. Se usaron ratones CD-1 machos albinos, de 7-9 semanas de edad. Se hizo una solución de TPA 0.005% (p/v) con acetona. Un volumen de 20 µL de esta solución de TPA se aplicó a la oreja izquierda dorsal del ratón. Los compuestos prueba se aplicaron inmediatamente a la oreja izquierda (20 µL) después del TPA en el vehículo de 70% de etanol/propilenglicol. La oreja derecha no fue tratada. Los ratones se sacrificaron mediante inhalación con CO2 (5.5 horas después de TPA), las orejas izquierda y derecha se removieron y se tomó una biopsia de cada oreja y se pesó. Se calculó la diferencia en los pesos de la biopsia entre las orejas derecha e izquierda. Los efectos antiinflamatorios de los compuestos se demostraron mediante la inhibición en el incremento del peso de la oreja.

EJEMPLO 7 Inhibición del edema de oreja inducido por ácido araquidónico En este modelo in vivo, la capacidad de la matricaria para reducir el edema inducido por ácido araquidónico se comparó con el inhibidor de cicloxigenasa/Iipoxigenasa, tepoxalina. Se usaron ratones CD-1 machos albinos, de 7-9 semanas de edad. Se hizo una solución de ácido araquidónico (p/v) al 20% (AA) en acetona. Un volumen de 20 µl del AA se aplicó a la oreja izquierda dorsal del ratón. Los compuestos prueba (20 µl) se aplicaron inmediatamente a la oreja izquierda después de AA en un vehículo de 70% etanol/30%propilenglicol. La oreja derecha no fue tratada. Los ratones se sacrificaron mediante inhalación con CO2 una hora después de AA, las orejas izquierda y derechas se removieron y se tomó una biopsia de 7 mm de cada oreja y se pesaron. Se calculó la diferencia en el peso de las biopsias entre las orejas izquierda y derechas. Los efectos antiinflamatorios de los compuestos son evidentes como una inhibición en el incremento del peso de la oreja.

Inhibición del edema de oreja inducido por ácido ariquidónico EJEMPLO 8: Prevención de la inflamación inducida por trauma después de la aplicación tópica de matricaria libre de partenólido en sujetos humanos La matricaria substancialmente libre de partenólido (PFFW) se evaluó para su capacidad de prevenir la inflamación de la piel en un estudio controlado con humanos que involucró a 10 voluntarios. En este estudio, la matricaria libre de partenólido se probó a 0.1 y 1% en comparación con su vehículo y con hidrocortisona también al 0.1 y 1 %. Los productos prueba se aplicaron en el lado ventral del antebrazo dos veces al día durante dos días consecutivos. El eritema se indujo mediante diez cortes sucesivos en el estrato córneo. Las medidas colorimétricas se hicieron antes de hacer los cortes y a las 0.5, 1 , 1.5 y 2 horas después de los cortes. El índice colorimétrico de eritema (CEI) se calculó para cada tiempo. Para el período de 2 horas totales, y en comparación con el vehículo, se obtuvieron las siguientes reducciones en el eritema: Estos resultados demuestran que la matricaria substancialmente libre de partenólido es efectiva para prevenir la inflamación inducida por trama en los humanos y tienen una actividad comparable a las concentraciones ¡guales de hidrocortisona.

EJEMPLO 9: Prevención de inflamaciones inducidas por UVB después de la aplicación tópica de matricaria libre de partenólido en sujetos humanos La matricaria libre de partenólido (PFFW) se evaluó por su capacidad para prevenir la inflamación de la piel en un estudio controlado en humanos que involucró a 10 voluntarios. En este estudio, el PFFW se probó a 0.1 y 1% y se comparó con su vehículo y con hidrocortisona también a 0.1 y 1%. El producto de prueba se aplicó en 5 sitios diferentes sobre la superficie volar del antebrazo dos veces al día durante dos días consecutivos (2mg/cm2). Los sitios fueron expuestos a 2 MED UVB. Las medidas con el cromómetro se hicieron antes de la irradiación y a las 18, 24, 42 y 48 horas post-irradiación. El índice colorimétrico de eritema (CEI) se calculó para cada tiempo. Se obtuvieron las siguientes reducciones en el eritema: Estos resultados demuestran que la matricaria libre de partenólido es efectiva para prevenir la inflamación inducida por UV en humanos.

EJEMPLO 10 Tratamiento de las inflamaciones inducidas por trauma después de la aplicación tópica de matricaria substancialmente libre de partenólido en sujetos humanos La matricaria substancialmente libre de partenólido (PFFW) se evaluó por su capacidad para prevenir la inflamación de la piel en un estudio controlado con humanos que involucró a 10 voluntarios. En este estudio, el PFFW se evaluó a 0.1 y 1% y se comparó con su vehículo y con hidrocortisona también al 0.1 y 1 %. El eritema se indujo mediante 10 cortes sucesivos al estrato córneo. El producto de prueba se aplicó en el lado ventral del antebrazo durante 2 horas, inmediatamente después de los cortes. Las medidas con el cromómetro se hicieron antes de los cortes y a las 0.5, 1 , 1.5 y 2 horas posteriormente a los cortes. El índice colorimétrico de eritema (CEI) se calculó para cada tiempo. Durante un período de dos horas totales, y en comparación con el vehículo, se obtuvieron las siguientes reducciones en el eritema: Estos resultados demuestran que dosis mayores de la matricaria substancialmente libre de partenólido son moderadamente eficaces para prevenir la inflamación inducida por trauma en el humano y tiene una actividad comparable a las concentraciones iguales de hidrocortisona.

EJEMPLO 11 Tratamiento de inflamación inducida por UVB después de la aplicación tópica de matricaria libre de partenólido en sujetos humanos La matricaria substancialmente libre de partenólido (PFFW) se evaluó por su capacidad para tratar la inflamación de la piel en un estudio controlado con humanos que involucro a 10 voluntarios. En este estudio, el PFFW se probó a 0.1 y 1% y se comparó con su vehículo y con hidrocortisona también al 0.1 y 1 %. Diez voluntarios sanos fueron irradiados con luz UV 2 MED en cinco distintos lugares del antebrazo. El producto de prueba se aplicó (2mg/cm2) en los sitios irradiados inmediatamente después de la irradiación, y a las 5 y 8 horas después. El conteo de eritema se midió antes de la Irradiación y a las 1 , 4, 7 y 24 horas después. Se obtuvieron las siguientes reducciones en el eritema: Estos resultados demuestran que la matricaria libre de partenólido es efectiva para tratar la inflamación inducida por UV en humanos. El ejemplo 12 ilustra la composición de cuidado para la piel de acuerdo a la presente invención. Las composiciones pueden procesarse de manera convencional. Son adecuadas para uso cosmético. En particular, las composiciones son adecuadas para su aplicación en la prevención y tratamiento de trastornos inflamatorios y condiciones relacionadas, tales como pero no limitadas a las condiciones de dermatitis por contacto, edema, trauma inducido por inflamación e inflamación inducida por UVB y similares así como para la aplicación en piel sana para prevenir o retardar la inflamación de la misma.

EJEMPLO 12 Este ejemplo ilustra un aceite-en-agua que incorpora la composición de esta invención.

Claims (10)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- El uso de una composición tópica que comprende un extracto de matricaria para la fabricación de un medicamento para tratar y prevenir los trastornos y condiciones relacionadas en un paciente.

2.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1, en donde dicho trastorno inflamatorio o condición relacionada es un trastorno inflamatorio o condición relacionada de la piel.

3.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1, en donde dicho extracto está substancialmente libre de ?-lactona a-insaturada.

4.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1, en donde dicho extracto esta substancialmente libre de ?-lactona a-insaturada y dicho trastorno inflamatorio o condición relacionada es un trastorno o condición relacionada de la piel.

5.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 3, en donde dicha ?-lactona a-insaturada es partenólido.

6.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 3, en donde el extracto contenido en el medicamento es de alrededor de 0.005% a 10%.

7.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 6, en donde dicho extracto tiene una concentración de partenólído de 0 a 0.2%.

8.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 4, en donde dicho extracto además comprende compuestos de flavonoide.

9.- Una composición tópica útil para el tratamiento y prevención de trastornos inflamatorios o condiciones relacionadas que comprende una cantidad efectiva de un extracto de matricaria y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

10.- La composición de la reivindicación 8, en donde dicho extracto está substancialmente libre de ?-lactona a-insaturada.