MXPA00009370A - Voacamina como agente anti-malaria y agente anti-malaria que contiene voacamina - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a la Voacamina como agente activo anti- malaria contra deformaciones falciparum Plasmodium, incluyendo las deformaciones resistentes, asícomo un agentes antí-malaria que contiene la Voacamina como principio activo principal, se puede utilizar un extracto básico de Peschiera, en particular Peschiera Fuchsiaefolia, como agente anti-malaria que tiene en particular la Voacamina como principio activo.

Description

VOACAMINA COMO UN AGENTE ANTI-MALARIA Y UN AGENTE ANTI-MALAR1A QUE CONTIENE VOACAMINA Campo del Invento. La presente invención se refiere a la Voacamina y su uso como un agente antimalaria que tiene una poderosa actividad contra todas las deformaciones Plateplasmodio sean o no resistentes. Por deformaciones existentes, nos referimos a deformaciones que son resistentes a alcaloides quinolíticos, tales como quinina y cloroquina, así como a deformaciones que son resistentes a aminocridoninas.

Antecedentes del Invento. La Voacamina o metil-12-metoxi-13-[(3a)-17-metox¡-17-oxovobasan-3-il]ibogamina-18-carboxilato, C 3Hd2N4?5, cuya fórmula desarrollada se proporciona más adelante, es un dímero alcaloide bis-indólico que se encuentra en numerosas especies de plantas que pertenecen al género Voacanga (ver Patente Norteamericana 2,823,204).

Este alcaloide es conocido por su actividad citotóxica (J. Nat. Prod. , 1994, 57, 1517), y por su actividad anti-bacteriana contra la bacteria positiva Gram, así como contra la bacteria negativa Gram (Phytochemistry, 1984, 23, 1771 ).

Sumario del Invento. El objeto de la presente invención, es el uso de Voacamina como un agente anti-malaria contra todas las deformaciones Plasmodium, y más específicamente contra el falciparum plasmodium incluyendo las deformaciones resistentes.

El paludismo o malaria, es una severa enfermedad endémica que afecta a las poblaciones de regiones tropicales y subtropicales, y es transmitida por mosquitos. El parásito es un heamatozoa del género Plasmodium, por ejemplo vivax Plasmodium, ovalo Plasmodium, malaria Plasmodium y particularmente, el más peligroso, falciparum Plasmodium. Esta enfermedad es combativa mediante varios medicamentos, los cuales generalmente son alcaloides quinolíticos, similares a cloroquina o aminocrinodinas. Desafortunadamente, el Plasmodium tiene una resistencia lentamente desarrollada contra estos, particularmente contra la cloroquina, y este medicamento se ha vuelto el menos utilizado en varias regiones del mundo. Debe haber una substitución para otras drogas tales como aminocrinodinas, las cuales desafortunadamente son tóxicas.

De acuerdo con la presente invención, los inventores han subrayado la eficiencia de la Voacamina contra las deformaciones de Plasmodium, incluyendo aquellas que se han vuelto resistentes a alcaloides quinolíticos y a aminicrinodinas, y esto sin efecto colateral alguno, conocido hasta la fecha. La presente invención se refiere, en un aspecto principal al uso de la Voacamina como un agente anti-malaria.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a agentes anti-malaria que contienen Voacamina, en particular extractos de plantas que contienen alcaloides. La presente invención se refiere a los extractos de plantas básicos del género Voacanga, pero también a los extractos básicos de otras plantas que contienen Voacamina, en particular extractos de plantas básicos de género Peschiera (o Tabernaemontana), en particular Peschiera van heurckii, Peschiera campestris, Peschiera affinis, Peschiera laeta y más particularmente Peschiera Fuchsiaefolia.

La Peschiera Fuchsiaefolia, una apociancea de la subfamilia de Tabernaemotanoideae, es una planta indígena de América del Sur, en particular de la cuenca del Amazonas. Llamada en Brasil, < leitiero de vaca > es una hierba mala que infecta los pastizales, y que es tratada con pesticidas. Recientemente se ha reportado que los extractos de esta planta pueden ser utilizados para neutralizar el veneno de Cobra (J. Venemous Anima Toxins.1997,3,22).

La presente invención, también se refiere a un extracto de Peschiera básico, más precisamente Peschiera Fuchsiaefolia, y más particularmente a un extracto básico de los granos, la corteza de los tallos o las raíces de la Peschiera Fuchsiaefolia, la cual es rica es alcaloides terciarios. Hemos observado, sin explicaciones conocidas hasta la fecha, que el extracto básico que consiste en la fracción rica en alcaloides terciarios procedentes de las raíces de la corteza de la Peschiera Fuchsiaefolia y la actividad superior a la Voacamina. Probablemente por un efecto cinergístico con uno de los otros alcaloides presentes en el extracto, de manera notable perivina, 16-efi-affinise, affisina, voacamidina, 16'decarbometoxivoacamina, Nb-demetilvoacamina, tabernamina, ervahanina A, vobasina, voacalotina, heinanina, voacristina, conofaringina, coronaridina y voacangina que tienen respectivamente las fórmulas I I , l l l y IV, proporcionadas más adelante.

La tabernamina, ervahanina A, vobasina, conofarigina, heinanina, voacristina, coronadina, fueron aisladas para el primer tiempo de esta planta.

Los otros alcaloides son conocidos, y sus fórmulas se proporcionan en The Merck Index, pagina 9944.

Con la ayuda de la Voacamina o del extracto de planta básico que contiene Voacamina, es posible preparar medicamentos en los cuales uno o muchos de los alcaloides presentes, en la forma de una base libre o sales fisiológicamente aceptables, estén incorporados en un soporte o excipiente farmacológicamente aceptable.

Otro aspecto de la presente invención, se refiere al proceso de aislamiento de la Peschiera, en particular la Peschiera Fuchsiaefolia, de un extracto básico que tiene algunas actividades anti-malaria, así como a un proceso de aislamiento de Voacamina procedente de la misma.

El extracto en cuestión, puede ser preparado mediante el tratamiento con un ácido diluido de un material molido seco de Peschiera Fuchsiaefolia o una parte de la planta (corteza de raíz, corteza de tallos), para extraer únicamente los principios básicos, seguido de una alcalinización del extracto acuoso obtenido en un pH 9 y la extracción de la parte rica en alcaloides terciario con un solvente orgánico como por ejemplo, diclorometano.

El aislamiento de Voacamina de esta fracción rica en alcaloides terciarios, se logra mediante una distribución contracorriente entre una fase acuosa y una fase orgánica, variando el pH de la fase acuosa. oacaotna C21 H23N2O3 COOCH3 CHgOH Voacangina C20H26N2O3 OMe H H Conofarigina C23 H30 N204 O e OMe H Heineanina Voacristina H H OH (Voacangerina) OMe H OH Así la Voacamina, los extractos básicos que la contienen de manera notable, los extractos de Peschiera Fuchsiaefolia, pueden ser preparados como un medicamento de acuerdo con las técnicas galenicales clásicas, por ejemplo en la forma de inyecciones, jarabes, supositorios, tabletas o pastillas efervescentes, o cápsulas. Por supuesto, utilizaremos excipientes y soportes farmacológicamente aceptables, tales como azúcar, lactosa, etc.

En dichas formulaciones farmacéuticas, la Voacamina y los alcaloides que las acompañan de manera eventual, pueden ser encontrados en la forma de bases libres o sales fisiológicamente aceptables, similares a clorhidratos, etc.

La presente invención, se comprenderá mejor con referencia a los ejemplos que se encuentran a continuación, los cuales son meramente ilustrativos y no limitantes.

EJEMPLO 1 El material de partida es la corteza de la raíz de Peschiera Fuchsiaefolia cosechada en Brasil, en Porto Alegre, la cual ha sido identificada localmente en un aspecto botánico, por la industria farmacéutica Cibecol.

Tratamos 630gr del material vegetal finamente pulverizado, mediante la extracción (3 veces sucesivamente) con ácido acético acuoso al 2%, reunimos la fracción eluída, la cual alcalinizamos a un pH 9 con carbonato de sodio, posteriormente extractamos tres veces la fase alcalina acuosa con diclorometano.

Después de combinar las fases orgánicas y de eliminar el diclorometano, obtuvimos un residuo (12, 1 g) que contiene los alcaloides terciarios, el cual es el extracto básico deseado.

Medimos in vitro la actividad de este extracto básico contra deformaciones falciparum Plasmodium, que son resistentes a cloroquina (W2) o que son sensibles a la cloroquina (D6). La actividad es evaluada, evaluando y IC50 (concentración de inhibición). Los resultados se proporcionan en la Tabla 1 que se encuentra después del Ejemplo 3.

EJEMPLO 2 Separamos los diversos alcaloides terciarios contenidos en el extracto básico en el contenido del EJEMPLO 1 , mediante una distribución contracorriente con diclorometano como fase estacionaria y un regulador acuoso con un pH disminuido por niveles (fase móvil).

Los alcaloides son recuperados de la fase acuosa mediante extracción con diclorometano.

En el equipo utilizado es un aparato Post tipo Craig, elaborado de 200 tubos de vidrio (con volúmenes de 10 ml para la fase más baja y volúmenes de 10 ml para la fase más alta).

En un pH 7, obtuvimos una primera serie de alcaloides menores, posteriormente en un pH 5,2, son eluídos en orden, perivina (Kr x Kb = 4.10"9), 16-efi-affinina (Kr x Kb = 2,5.1 o-9), posteriormente affinisina (Kr x KD= 7.10'10). En un pH 4, se eluyen N-demetilvoacamina (Kr x K = 3-5.10"1 1 y vobasina (Kr x Kb = 4.10" 1 1 ). En un pH 3,2, se eluyen voacalotina (Kr x Kb= 2.10"1 1 ) y Voacamina (Kr x Kb= 1 ,3.10"1 1 ). En un pH 3,0 se eluyen heineamina (Kr x Kb= 5.10-12) y voacristina (Kr x Kb = 3,5.1 o-12). En un pH 2,6, se eluyen conofaringina (Kr x Kb = 2.10"12) y finalmente, en un pH 2,2 se eluyen coronaridina (Kr x Kb = 8.10"13) y vocagina (Kr x K = 6.5.10"13). Mediante una distribución contracorriente en un sistema bi-básico de clorometano, metanol y agua 7/5/2, se obtienen alcaloides cuaternarios, tales como 12-metoxi-Nb-metilvoacalotina y Nb-metilaffinisina bajo la forma de cloruro.

Kr representa el coeficiente de división (repartición de fase acuosa/fase orgánica) y K es la constante de desasociación.

Cada alcaloide es purificado mediante uno o muchos nuevos pasajes en el reciclado, en una distribución contra corriente y posteriormente y mediante cristalización.

Los alcaloides han sido identificados mediante 1 H, 3C y espectrometría de masa.

Las medidas de Voacamina in vitro IC50, se llevan a cabo tal como se escribe en el EJEMPLO 1 . Los resultados obtenidos se reportan en la Tabla 1 , presentada de manera adicional. La citotoxicidad de la Voacamina, es la que se indica a continuación: ED50 3,8 µg/ml de líneas celulares de razones P388 ED50 13,6 µg/ml para las líneas celulares KB EJEMPLO 3 Procedimos de manera similar al Ejemplo 1 , utilizando la corteza del tallo en lugar de la corteza de la raíz, para obtener un extracto básico tal como se describió anteriormente, el rendimiento es de 1 ,9%.

Con este extracto, procedimos in vitro a las medidas de IC50, tal como se describe en el Ejemplo 1 , los resultados se reportan en la Tabla 1 que se encuentra a continuación. Tabla 1 Los valores son expresados en ng/ml. Entre más débiles se presentan, es mayor el producto que está activo. Observamos que en la Voacamina se presenta una remarcada actividad anti-Plasmodium contra ambos tipos de deformaciones (siendo comparable la actividad a la de la cloroquina contra las deformaciones D6 sensibles). Es menor la actividad del extracto básico de la corteza de tallo del Ejemplo 3, pero sin embargo, este extracto permanece activo contra las deformaciones de Plasmodium W2, las cuales son resistentes a la cloroquina.

El más activo, es el extracto básico de los alcaloides terciarios del Ejemplo 1 , obtenido de la corteza de las raíces.

EJEMPLO 4 Procedimos a ensayos clínicos en un grupo de 74 personas en Mozambique, esta una región endémica para deformaciones de Plasmodium resistentes a la cloroquina, ya que estas poblaciones sufren de paludismo.

Inyectamos a cada persona con 4 ml de extracto básico del Ejemplo 1 , en 100 ml de una solución fisiológica en el nivel de la 7a, 8a, o 13a vértebra. Después de 3 horas, en la mayoría de los casos, las señales de paludismo clínicas (fiebre, vomito, diarrea, dolores en las coyunturas, han desaparecido y después de 4 horas los cultivos de las células correspondientes son negativos.

En el 72% de los casos, los pacientes se han recuperado en 4 horas y el 90% de los pacientes se han recuperado si el tratamiento se sigue durante 3 días consecutivos.

Algunos pacientes han sido tratados de forma oral (jarabes), y anal, para detectar los efectos colaterales eventuales no deseables. No hemos tenido noticia alguna.

Existe una gran diferencia con los efectos colaterales tóxicos observados con los medicamentos usuales, utilizados para combatir el paludismo en las regiones del mundo en donde los mosquitos se han vuelto inmunes a la cloroquina.

Claims (13)

R E I V I N D I C A C I O N E S Habiendo descrito la presente invención, se considera como novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes REIVINDICACIONES:

1.- La Voacamina como un agente activo anti-malaria contra deformaciones de falciparum Plasmodium, incluyendo las deformaciones resistentes.

2.- Un agente anti-malaria que tiene una actividad contra las deformaciones Plasmodium, incluyendo las deformaciones resistentes, caracterizada además porque, comprende como agente activo principal, Voacamina de acuerdo con la Reivindicación 1 .

3.- El agente anti-malaria tal como se describe en la Reivindicación 2, caracterizado además porque, está en la forma de un extracto de planta básico que comprende Voacamina.

4.- El agente anti-malaria tal como se describe en la Reivindicación 3, caracterizado además porque, el extracto básico es un extracto de la Peschiera Fuchsiaefolia.

5.- El agente tal como se describe en la Reivindicación 4, caracterizado además porque, el extracto es un extracto de la Peschiera Fuchsieaefolia.

6.- El agente tal como se describe en la Reivindicación 5, caracterizado además porque, el extracto básico es un extracto de la corteza, más particularmente de la corteza de raíz de la Peschiera Fuchieafolia.

7.- El agente anti-malaria tal como se describe en las Reivindicaciones 4, 5 ó 6, caracterizado además porque, el extracto básico es una fracción rica en alcaloides terciarios.

8.- El agente anti-malaria tal como se describe en la Reivindicaciones 5, 6 ó 7, caracterizado además porque, comprende junto con la Voacamina por lo menos, un alcaloide seleccionado del grupo que' consiste de perivina, 16efi-affinisa, N -demetilvoacamina, vobasina, voacalotina, heinanina, voacristina, voacangirina, conofaringina, coronaridina y voacangina.

9.- Un medicamento activo, anti-malaria contra deformaciones falciparum de Plasmodium, incluyendo las deformaciones resistentes, caracterizado además porque, comprende la Voacamina de acuerdo con la Reivindicación 1 , o una de sus sales fisiológicamente aceptables asociadas a un soporte o excipiente fisiológicamente aceptable.

10.- Un medicamento activo, anti-malaria contra deformaciones falciparum de Plasmodium, incluyendo las deformaciones resistentes, caracterizado además porque, comprende un agente anti-malaria de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones de la 2 a la 8, en una forma de bases libres o en una forma de sales fisiológicamente aceptables, asociadas a un soporte o excipiente fisiológicamente aceptable.

1 1.- Un proceso de aislamiento de un agente anti-malaria tal como se describe en cualquiera de las Reivindicaciones del 3 a la 7, caracterizado además por el hecho de que comprende los pasos de: - tratar con un ácido diluido, un material molido seco de Peschiera Fuchsiaefolia o una parte de dicha planta, para extraer únicamente los principios básicos, - alcalinizar el extracto acuoso obtenido de la misma, a un pH del orden de 9, - extractar una fracción rica en alcaloides terciarios con un solvente orgánico tal como diclorometano.

12.- El proceso de aislamiento de Voacamina del extracto básico tal como se describe en la Reivindicación 1 1 , caracterizado además por una distribución contracorriente entre una fase acuosa y una fase orgánica, variando el pH de la fase acuosa mediante niveles sucesivos, siendo recuperada la Voacamina en un pH 3,2.

13.- El proceso de aislamiento tal como se describe en la Reivindicación 12, caracterizado además porque, la planta de partida es una planta del género Peschiera Fuchsiaefolia.